CN112794917B - 一种多肽成像探针及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种多肽成像探针及其制备方法和应用，所述多肽成像探针包括受体识别肽段、自组装肽段和信号分子；所述多肽成像探针通过受体识别肽段与受体识别结合、触发自组装肽段发生自组装并由信号分子发出信号。本发明的多肽成像探针经肿瘤微环境响应自组装形成纳米纤维，相较于小分子成像剂具有高富集、长滞留的优点，所述多肽成像探针随着时间的延长不易被代谢、具有长效滞留效应，在靶向部位呈现高信噪比，且所需剂量低，显著降低了对代谢器官的毒性，为成像的转化和发展提供了新思路和新方法。

Description

一种多肽成像探针及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于纳米生物医药技术领域，涉及一种多肽成像探针及其制备方法和应用，尤其涉及一种识别细胞受体的原位自组装多肽成像探针及其制备方法和在细胞成像和/或活体成像中的应用。
背景技术
恶性肿瘤(癌症)是严重威胁人类生命健康的疾病。在癌症的临床治疗中，利用成像探针对肿瘤病灶进行成像，有利于实现早期诊断、病灶定位、术中导航等目的。然而，传统的小分子成像剂如吲哚菁绿(ICG)、亚甲蓝(MB)等，存在富集效率低、滞留时间短、荧光信噪比弱、使用剂量高等缺点，可能导致假阳性结果、代谢器官毒性高、限制手术时间等问题。
CN110665016A公开了一种成像探针，包括靶向识别单元、酶水解底物单元、自组装单元和信号分子，所述酶水解底物单元为含有功能酶底物的多肽序列，所述多肽序列为PLGYLG或GPA，所述靶向识别单元、酶水解底物单元和自组装单元通过酰胺键依次相连，所述信号分子与自组装单元相连。所述成像探针具有肿瘤靶向功能和组装功能，同时所述成像探针能够通过酶水解底物单元在肿瘤病灶部位与肿瘤微环境中高表达的酶发生高效酶切反应，进而自组装形成特定纳米纤维，实现长效滞留，显著提高了肾、肝和膀胱等器官肿瘤的信噪比，为器官肿瘤的术中导航切除提供了新的方法。然而，该成像探针具有酶底物单元，使得探针分子量大、不能高效进入细胞，而且底物需要与病灶周围高浓度酶发生反应才引发探针的自组装，限制了成像探针的适用范围。
因此，有必要构建结构更加简单、适用范围更广的成像探针。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了一种多肽成像探针及其制备方法和应用，所述多肽成像探针通过与细胞受体结合引发原位自组装并发光，在细胞层面进行细胞受体定位和受体表达量检测，在活体层面增强肿瘤病灶的信号强度、延长多肽成像探针在肿瘤病灶的滞留时间，从而应用于肿瘤成像、疾病诊断等领域。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种多肽成像探针，所述多肽成像探针包括受体识别肽段、自组装肽段和信号分子；
所述多肽成像探针通过受体识别肽段与受体识别结合、触发自组装肽段发生自组装并由信号分子发出信号。
本发明中，多肽成像探针采用溶解性和生物相容性好的肽段作为主要结构，在肽段上修饰信号分子，肽链经受体识别肽段靶向富集在病灶部位后，响应肿瘤微环境、利用受体配体相互作用在病灶部位原位自组装为多肽成像探针并发出信号，具有特异性好、富集率高、长效滞留效果佳、信噪比高等特点，在细胞和/或活体成像领域具有重要的应用前景。
优选地，所述受体识别肽段识别的受体包括整合素、上皮细胞粘附分子、叶酸受体、碳酸酐酶XI、表皮生长因子受体(如Her1、Her2、Her3、Her4)或T细胞表面受体(如CD3)中的任意一种或至少两种的组合，优选为整合素和/或上皮细胞粘附分子，进一步优选为αvβ3和/或EpCAM。
优选地，所述受体识别肽段为亲水性受体识别肽段，包括SEQ ID NO:1～4之一所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:1：RGD；
SEQ ID NO:2：YEVHTYYLD；
SEQ ID NO:3：AVPIAQK；
SEQ ID NO:4：AKMGEGGWGANDY。
优选地，所述自组装肽段为可溶性自组装肽段，包括SEQ ID NO:5～13之一所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:5：GNNQQNY；
SEQ ID NO:6：GSNKGAIIGLM；
SEQ ID NO:7：GKVQIINKKLDL；
SEQ ID NO:8：SYSSYGQS；
SEQ ID NO:9：KLVFFAE；
SEQ ID NO:10：FF；
SEQ ID NO:11：GNQQQNY；
SEQ ID NO:12：GNQQQQY；
SEQ ID NO:13：GNNNQNY。
优选地，所述信号分子的标记位点包括肽链的末端氨基酸和/或非末端氨基酸：当所述信号分子标记于肽链的末端时，优选为标记在肽链的氨基末端氨基酸上；当所述信号分子标记于肽链的非末端时，优选为标记在肽链非末端氨基酸赖氨酸的氨基端和/或半胱氨酸的巯基端。
优选地，所述信号分子可以是普通荧光分子，还可以是近红外荧光分子或具有聚集诱导发光效应的短波长荧光分子。
优选地，所述近红外荧光分子包括Cy7、ICG或BODIPY中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述短波长荧光分子包括TPE和/或NBD。
本发明中，利用模块化设计思想设计多肽成像探针，如图1所示，多肽成像探针在溶液中呈单分散状态、无荧光信号，通过受体识别肽段特异性靶向肿瘤病灶后，利用受体配体相互作用原位触发自组装成纳米纤维、发出荧光信号，所述多肽成像探针溶解性好、生物相容性高，不易被细胞代谢，实现了长效富集并滞留于肿瘤部位、增强肿瘤局部信噪比的效果，符合“精准医疗”的理念，有利于降低疾病诊断的假阳性、增强术中导航的精准性。
第二方面，本发明提供了一种第一方面所述的多肽成像探针的制备方法，所述制备方法包括：
固相合成包含受体识别肽段和自组装肽段的肽链，在所述肽链上修饰信号分子，得到所述多肽成像探针。
第三方面，本发明提供了第一方面所述的多肽成像探针在制备细胞成像剂和/或实体瘤成像剂中的应用。
优选地，所述实体瘤包括肾癌、乳腺癌或肝癌中的任意一种或至少两种的组合。
第四方面，本发明提供了一种细胞成像方法，所述方法包括：
将第一方面所述的多肽成像探针与细胞共培养，随后进行共聚焦成像，根据荧光强度定性表征细胞对受体蛋白的表达水平。
优选地，所述细胞表达所述多肽成像探针的受体识别肽段识别的受体。
优选地，所述多肽成像探针的浓度为10～50μM，例如可以是10μM、20μM、30μM、40μM或50μM，优选为20μM。
本发明中，多肽成像探针可以在靶向部位特异性聚集，在应用于细胞或活体成像时，所需剂量低、对细胞和/或代谢性器官的毒性低。
优选地，所述共培养的时间为0.5～4h，例如可以是0.5h、1h、2h、3h或4h，优选为1h。
第五方面，本发明提供了一种活体成像方法，所述方法包括向小鼠肿瘤模型中给药第一方面所述的多肽成像探针，随后进行小动物成像，根据荧光信号表征病灶部位。
优选地，所述给药的方式包括静脉给药、皮下给药或腹腔给药中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述给药的浓度包括100～500μM，优选为200μM。
优选地，所述给药的剂量包括50～500μL，优选为100μL。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明的多肽成像探针包括受体识别肽段、自组装肽段和聚集诱导发光荧光基团，通过受体识别肽段特异性与细胞膜表面受体结合，利用受配体相互作用触发多肽成像探针的原位自组装，达到了多肽成像探针原位富集于受体表达部位、增强成像信噪比、延长滞留时间的效果，克服了小分子成像剂容易脱靶的问题；
(2)本发明的多肽成像探针原位组装于受体过表达的细胞中并发光，有利于定性表征受体在不同细胞中的表达水平；
(3)本发明的多肽成像探针结构简单，相较于传统的活体自组装成像探针省去了响应剪切基团，不易被代谢器官代谢，在小鼠肿瘤模型中表现出良好的聚集滞留能力，提高了成像过程中的荧光强度和成像时间。
附图说明
图1为多肽成像探针结合细胞受体触发原位自组装成像的原理示意图；
图2为以αvβ3为靶向受体的多肽成像探针αvβ3-Cy的分子结构式；
图3A为多肽成像探针αvβ3-Cy与MCF-7共培养后的共聚焦显微镜成像图，图3B为多肽成像探针αvβ3-Cy与HUVEC共培养后的共聚焦显微镜成像图；
图4为多肽成像探针αvβ3-Cy在小鼠皮下瘤模型中的特异性靶向效果和长效滞留效果；
图5为以EpCAM为靶向受体的多肽成像探针EpCAM-Cy的分子结构式；
图6A为多肽成像探针EpCAM-Cy与MCF-7共培养后的共聚焦显微镜成像图，图6B为多肽成像探针EpCAM-Cy与HUVEC共培养后的共聚焦显微镜成像图；
图7为多肽成像探针EpCAM-Cy在小鼠皮下瘤模型中的特异性靶向效果和长效滞留效果；
图8为以αvβ3为靶向受体的多肽成像探针αvβ3-NBD的分子结构式；
图9A为多肽成像探针αvβ3-NBD与MCF-7共培养后的共聚焦显微镜成像图，图9B为多肽成像探针αvβ3-NBD与HUVEC共培养后的共聚焦显微镜成像图；
图10为多肽成像探针αvβ3-NBD和EpCAM-NBD分别与MCF-7和HUVEC共培养后的细胞表面荧光平均值统计结果；
图11为多肽成像探针αvβ3-NBD和EpCAM-NBD分别与MCF-7和HUVEC共培养后的流式细胞仪统计平均荧光值；
图12为以EpCAM为靶向受体的多肽成像探针EpCAM-NBD的分子结构式；
图13A为多肽成像探针EpCAM-NBD与MCF-7共培养后的共聚焦显微镜成像图，图13B为多肽成像探针EpCAM-NBD与HUVEC共培养后的共聚焦显微镜成像图。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实验材料与仪器：
二甲基甲酰胺(DMF)，哌啶，树脂，二氯甲烷(DCM)，茚三酮反应试剂(茚三酮、维C、苯酚)，四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)，六氢吡啶，三异丙基硅烷(TIS)，乙二硫醇(EDT)，无水乙醚，三氟乙酸(TFA)，N-甲基吗啉(NMM)，甲醇，Fmoc保护氨基酸，Fmoc-Lys(Dde)-OH，4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑，4-氯-7-硝基苯呋咱(NBD-Cl)，多肽固相合成管等。
溶液配方：
Fmoc脱保护剂：六氢吡啶:DMF＝1:4(v/v)；
Dde脱保护剂：水合肼:DMF＝2:98(v/v)；
反应液：NMM:DMF＝1:24(v/v)；
裂解液：92.5％TFA+2.5％TIS+2.5％H2O+2.5％EDT；
茚三酮检测液：茚三酮:VC:苯酚＝1:1:1(v/v/v)；
NBD-Cl荧光偶联溶剂：三乙胺:DMF＝5:95(v/v)。
实施例1多肽成像探针αvβ3-Cy的设计、合成与功能鉴定
本实施例以αVβ3为靶向受体设计多肽成像探针αvβ3-Cy，所述多肽成像探针αvβ3-Cy由αVβ3受体识别肽段、可溶性自组装肽段和近红外荧光分子Cy组成，所述近红外荧光分子Cy通过半胱氨酸(C)连接在多肽的侧链，分子结构式如图2所示，氨基酸序列如SEQ IDNO:14所示；
SEQ ID NO:14：GNNQQNYKC(Cy7)DRGD。
合成步骤如下：
(1)称量树脂并投入到多肽固相合成管中，加入适量的DMF溶胀4h以上；抽掉DMF，用Fmoc脱保护剂进行Fmoc去保护，摇床混合15min；抽掉Fmoc脱保护剂，加入DMF、DCM交替洗涤树脂3次，从多肽固相合成管中取少量树脂(约10颗)于试管中，加入茚三酮检测液加热检测阳性(树脂变为深蓝色)，接入下一个氨基酸(按目标序列)，进行氨基酸缩合反应；
(2)按照多肽成像探针的氨基酸序列选择氨基酸、与HBTU按1:1混合并用反应液溶解后，投入到多肽固相合成管中，搅拌反应1小时；从多肽固相合成管中取少量树脂于试管中，加入茚三酮检测液，结果为阴性(未变色)证明缩合反应成功，抽掉多余液体，加入DMF、DCM交替洗涤树脂3次，得到缩合了第一个氨基酸的肽树脂；在缩合了第一个氨基酸的肽树脂上重复进行“Fmoc脱保护-氨基酸缩合”反应，直到最后一个氨基酸偶联并脱保护完毕；
(3)用甲醇洗涤树脂3次，将树脂体积浓缩至原体积的1/3，继续抽干15～20min去除甲醇；取出合成完的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解4小时，将树脂过滤后于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)沉淀多肽，离心除去无水乙醚；
(4)用乙醚多次洗涤多肽后，置于真空干燥箱中烘干，得到粗肽产物，使用制备型反相HPLC纯化，HPLC纯度>90％即为纯肽，纯肽进行质谱表征鉴定正确后，冻干保存于-20℃待用；
(5)取部分多肽粉末与Cy7-Cl用pH＝8.4PBS混合溶解后，常温避光反应6h，冰浴条件下透析6h后冻干，HPLC分离纯化，得到多肽成像探针αvβ3-Cy，-20℃保存待用。
分别向约105个整合素αvβ3高表达的乳腺癌细胞系MCF-7和105个整合素αvβ3低表达的人脐静脉内皮细胞系HUVEC中加入1mL 20μM多肽成像探针αvβ3-Cy，于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育1h，利用共聚焦显微镜观察细胞。
如图3A和图3B所示，MCF-7细胞表面的红色荧光数量和强度明显高于HUVEC细胞，说明即使在不使用具有组装诱导发光功能的分子、如Cy7的条件下，多肽成像探针仍然可以提高病灶部位的信噪比，原因在于多肽成像探针长效滞留、高效富集于病灶处，解决了小分子成像剂代谢速度快的问题，使病灶部位随着时间的延长表现出增强的信噪比。
随后，取1×106个MCF-7细胞注射至小鼠右腿皮下，构建小鼠皮下瘤模型，2周后肿瘤体积约50cm3；进一步向小鼠尾静脉注射多肽成像探针αvβ3-Cy，采用IVIS小动物成像仪进行成像。
如图4所示，多肽成像探针αvβ3-Cy经过血液循环到达靶向部位后，经肿瘤微环境响应触发原位自组装，形成纳米纤维，提高了在靶向部位的滞留时间和富集效率，在病灶部位呈现良好的荧光信号，随着时间的延长，靶向部位的荧光信噪比也增加。
以上结果说明，多肽成像探针αvβ3-Cy能够特异性靶向表达αvβ3受体的肿瘤细胞并在肿瘤细胞上长效滞留。
实施例2多肽成像探针EpCAM-Cy的设计、合成与功能鉴定
本实施例以EpCAM为靶向受体设计多肽成像探针EpCAM-Cy，所述多肽成像探针EpCAM-Cy由EpCAM受体识别肽段、可溶性自组装肽段和近红外荧光分子Cy组成，所述近红外荧光分子Cy通过半胱氨酸(C)连接在多肽的侧链，分子结构式如图5所示，氨基酸序列如SEQID NO:15所示；
SEQ ID NO:15：GNNQQNYKC(Cy7)DYEVHTYYLD。
合成方法见实施例1。
分别向约105个上皮细胞粘附分子EpCAM高表达的乳腺癌细胞系MCF-7和105个上皮细胞粘附分子EpCAM低表达的人脐静脉内皮细胞系HUVEC中加入1mL 20μM多肽成像探针EpCAM-Cy，于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育1h，利用共聚焦显微镜观察细胞。
如图6A和图6B所示，MCF-7细胞表面的红色荧光数量和强度明显高于HUVEC细胞。
随后，向小鼠皮下瘤模型尾静脉注射多肽成像探针EpCAM-Cy，采用IVIS小动物成像仪进行成像。
如图7所示，6天后，多肽成像探针EpCAM-Cy在病灶部位呈现良好的荧光信号。
以上结果说明，多肽成像探针EpCAM-Cy能够特异性靶向表达EpCAM受体的肿瘤细胞并在肿瘤细胞上长效滞留。
实施例3多肽成像探针αvβ3-NBD的设计、合成与功能鉴定
相较于近红外荧光分子，短波长荧光分子的活体成像效果略有不足，但是细胞成像效果较稳定、不易淬灭。本实施例采用NBD这种具有聚集诱导发光效应的分子代替近红外荧光分子Cy7进行细胞层面的荧光成像，具有免洗、信噪比高等优点，并且可以定性表征细胞表面受体的表达量。
本实施例的多肽成像探针αvβ3-NBD的分子结构式如图8所示，氨基酸序列如SEQID NO:16所示，其中X为Fmoc氨基戊酸；
SEQ ID NO:16：NBD-X-GNNQQNYRGD。
合成方法见实施例1，不同之处在于NBD的偶联方式：对合成多肽的最后一个氨基酸进行Fmoc脱保护后，加入荧光偶联溶剂溶解的NBD-Cl，50℃水浴条件下固相偶联NBD 2h；反应完毕后用DMF、DCM洗涤树脂多次，直至把多余的NBD原料洗涤干净；之后参照实施例1，对树脂进行甲醇收缩、裂解液裂解、HPLC纯化至90％以上，-20℃保存待用。
分别向约105个整合素αvβ3高表达的乳腺癌细胞系MCF-7和105个整合素αvβ3低表达的人脐静脉内皮细胞系HUVEC中加入1mL 20μM多肽成像探针αvβ3-NBD，于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育1h，利用共聚焦显微镜观察细胞。
如图9A和图9B所示，MCF-7细胞表面的绿色荧光数量和强度明显高于HUVEC细胞。对细胞表面的荧光强度进行统计，结果见图10，表明MCF-7细胞表面αvβ3受体表达量高于HUVEC细胞。流式检测结果见图11，MCF-7细胞的平均荧光值高于HUVEC细胞的平均荧光值，逆向验证了整合素αvβ3在MCF-7细胞表面的表达量高于HUVEC。
实施例4多肽成像探针EpCAM-NBD的功能鉴定
为了验证多肽成像探针的普适性，本实施例将实施例2的多肽成像探针的EpCAM受体识别肽段替换为YEVHTYYLD，并将荧光分子替换为NBD，得到的多肽成像探针EpCAM-NBD的分子结构式如图12，氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；
SEQ ID NO:17：GNNQQNYK(NBD)CDYEVHTYYLD。
对多肽成像探针进行功能验证，结果见图13A、图13B、图10和图11，MCF-7细胞表面的绿色荧光数量和强度明显高于HUVEC细胞，进一步证明了EpCAM在MCF-7细胞系的表达量高于HUVEC细胞系。
综上所述，本发明的多肽成像探针具有高富集、长滞留、高信噪比、低剂量、低毒性的优点，符合“精准医疗”的理念，有利于降低疾病诊断的假阳性并增加术中导航的精准性，可以很好的替代小分子成像探针。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 国家纳米科学中心
<120> 一种多肽成像探针及其制备方法和应用
<130> 20210127
<160> 17
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Arg Gly Asp
1
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Tyr Glu Val His Thr Tyr Tyr Leu Asp
1 5
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Ala Val Pro Ile Ala Gln Lys
1 5
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Ala Lys Met Gly Glu Gly Gly Trp Gly Ala Asn Asp Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Gly Asn Asn Gln Gln Asn Tyr
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met
1 5 10
<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu
1 5 10
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Ser Tyr Ser Ser Tyr Gly Gln Ser
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu
1 5
<210> 10
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Phe Phe
1
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
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Gly Asn Gln Gln Gln Asn Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
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<400> 12
Gly Asn Gln Gln Gln Gln Tyr
1 5
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<211> 7
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1 5
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Gly Asn Asn Gln Gln Asn Tyr Lys Cys Asp Tyr Glu Val His Thr Tyr
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1 5 10
<210> 17
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 17
Gly Asn Asn Gln Gln Asn Tyr Lys Cys Asp Tyr Glu Val His Thr Tyr
1 5 10 15
Tyr Leu Asp

Claims (16)

1.一种多肽成像探针，其特征在于，所述多肽成像探针由受体识别肽段、自组装肽段和信号分子组成；
所述多肽成像探针通过受体识别肽段与受体识别结合、触发自组装肽段发生自组装并由信号分子发出信号；
所述受体识别肽段为亲水性受体识别肽段，为SEQ ID NO:1～4之一所示的氨基酸序列；
所述自组装肽段为可溶性自组装肽段，为SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；
所述多肽成像探针不包括响应剪切基团。
2.根据权利要求1所述的多肽成像探针，其特征在于，所述信号分子的标记位点包括肽链的末端氨基酸。
3.根据权利要求2所述的多肽成像探针，其特征在于，所述信号分子的标记位点为肽链的氨基末端氨基酸。
4.根据权利要求1所述的多肽成像探针，其特征在于，所述信号分子的标记位点包括肽链的非末端氨基酸。
5.根据权利要求4所述的多肽成像探针，其特征在于，所述信号分子的标记位点为赖氨酸氨基端和/或半胱氨酸巯基端。
6.根据权利要求1所述的多肽成像探针，其特征在于，所述信号分子包括荧光分子。
7.根据权利要求6所述的多肽成像探针，其特征在于，所述荧光分子为近红外荧光分子和/或短波长荧光分子。
8.根据权利要求7所述的多肽成像探针，其特征在于，所述近红外荧光分子包括Cy7、ICG或BODIPY中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求7所述的多肽成像探针，其特征在于，所述短波长荧光分子包括TPE和/或NBD。
10.一种权利要求1-9任一项所述的多肽成像探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
固相合成包含受体识别肽段和自组装肽段的肽链，在所述肽链上修饰信号分子，得到所述多肽成像探针。
11.权利要求1-9任一项所述的多肽成像探针在制备细胞成像剂和/或实体瘤成像剂中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述实体瘤包括肾癌、乳腺癌或肝癌中的任意一种或至少两种的组合。
13.一种以非疾病诊断和/或治疗为目的的细胞成像方法，其特征在于，所述方法包括：
将权利要求1-9任一项所述的多肽成像探针与细胞共培养，随后进行共聚焦成像。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述细胞表达所述多肽成像探针的受体识别肽段识别的受体。
15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述多肽成像探针的浓度为10～50μM。
16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述共培养的时间为0.5～4h。
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