CN112778410B

CN112778410B - 一种生物活性肽saprhgslgflprk及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN112778410B
Application number: CN202110071806.XA
Authority: CN
Inventors: 张少辉; 占文静; 张伯宇
Original assignee: Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd
Current assignee: Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd
Priority date: 2021-01-19
Filing date: 2021-01-19
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2041-01-19
Also published as: CN112778410A

Abstract

本发明涉及蛋白领域，具体涉及一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK及其制备方法和应用，生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的氨基酸序列为Ser‑Ala‑Pro‑Arg‑His‑Gly‑Ser‑Leu‑Gly‑Phe‑Leu‑Pro‑Arg‑Lys。经过体外免疫调节功能验证实验，发现生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK具有很好的免疫调节功能。本发明的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK对巨噬细胞的体外增殖能力有显著促进作用，同时促进一氧化氮诱生量的能力增加，从而提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，提高生命的质量，对开发具有免疫调节功能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。

Description

一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及蛋白领域，尤其是涉及一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，生物活性肽已经成为人们耳熟能详的一个词语。因其具有很多潜在的生物功能，所以引起人们越来越多的关注，成为科学研究的热点之一。目前很多生物活性肽的有益效果也已经得到了很好的证明，如抗癌、降血压、抗菌、降胆固醇、抗糖尿病等等特性。当前最权威的生物活性肽数据库BIOPEP-UMW中已报告了3000多个不同的生物活性肽。

免疫调节肽一般是指具有免疫调节活性的分子量相对较小的小肽。现在公开的免疫调节肽一般是从蛋白质中酶解分离得到或化学方法合成得到的具有特定免疫调节活性的小肽。但是当这些小肽未从蛋白质中酶解分离时，这些蛋白质本身往往是不具备免疫调节活性的。如何从已知氨基酸序列的种类繁多的蛋白质中寻找具有特定功能的生物活性肽，并研究这些多肽的功能是蛋白领域研究的方向之一。

1981年Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，可以得到一个氨基酸序列为Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr的六肽，体外实验证明该肽能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬作用。Migliore-Samour等人发现来自酪蛋白的六肽Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp能够刺激绵羊血红细胞对小鼠腹膜巨噬细胞的吞噬作用以及增强对于肺炎克雷伯菌的抵抗，具有抗炎功能。李素萍等人用合成的小鼠骨髓巨噬细胞来与源肽(PGPIPN)饲喂大鼠发现大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用和红细胞相关的抗炎功能有显著的增强。Bowdis等人在研究来源于牛中性粒细胞的13氨基酸肽indolicidin的免疫功能时发现，多肽indolicidin在巨噬细胞样细胞系中抑制LPS诱导的TNF-α产量。

60S ribosomal protein L3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。目前，现有技术中并没有关于60S ribosomal protein L3蛋白多肽片段相关功能的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK及其制备方法和应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明第一方面，提供一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK，其氨基酸序列为Ser-Ala-Pro-Arg-His-Gly-Ser-Leu-Gly-Phe-Leu-Pro-Arg-Lys，如SEQ ID NO：1所示。

较优的，所述生物活性肽为小鼠脾脏来源淋巴细胞肽。具体均来源于60Sribosomal protein L3蛋白，并且为60S ribosomal protein L3蛋白第7～20位的氨基酸残基。60S ribosomal protein L3蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

60S ribosomal protein L3蛋白的氨基酸序列以及对应的核苷酸序列为既有技术，编码60S ribosomal protein L3蛋白第7～20位氨基酸残基的核苷酸片段能编码成熟的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK。

较优的，所述生物活性肽具有抗炎功能和免疫调节功能。

本发明还提供编码所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的多核苷酸。

本发明第二方面，提供了所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的制备方法，可以通过基因工程的方法人工合成，可以从细胞中通过分离纯化的方法直接获得，可以直接通过化学合成制备。

通过基因工程的方法人工合成所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK是本领域技术人员能够实现的技术方案，例如可以是以DNA重组技术为基础，通过合适的DNA模板来控制多肽的序列合成。

关于从细胞中通过分离纯化的方法直接获得的方式可以为：基于给定的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的氨基酸序列，采用生物学技术上常规的酶解、纯化方法从小鼠脾脏来源淋巴细胞获得所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK。

本发明第三方面，提供了所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备具有抗炎功能的药物或化妆品中的应用。

具体而言，本发明的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK可以用于制备具有抗炎和/或抗氧化的药物。

进一步地，所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备抑制因氧化而引起的炎症的药物中的应用。

本发明第四方面，提供了所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备具有免疫调节功能的食物或药物中的应用。

进一步地，所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备促进体外巨噬细胞增殖的食物或药物中的应用。

进一步地，所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备促进巨噬细胞一氧化氮诱生量增加的食物或药物中的应用。

本发明第五方面，提供了一种抗炎产品，包括所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK或所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的衍生物；所述的抗炎产品包括抗炎药物或抗炎化妆品。

本发明第六方面，提供了一种具有免疫调节功能的产品，包括所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK或所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的衍生物；所述具有免疫调节功能的产品包括具有免疫调节功能的食品或具有免疫调节功能的药物。

所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的衍生物是指具有与所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK相同的活性或更优的活性。

所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的衍生物，是指在生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的多肽衍生物。

本发明生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的有益效果为：本发明的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK具有较好的抗炎活性；本发明的生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK对巨噬细胞的体外增殖能力有显著促进作用，同时促进一氧化氮诱生量的能力增加，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，提高生命的质量，对开发具有免疫调节功能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。

附图说明

图1：质荷比为381.4719的片段的一级质谱图(m/z＝381.4719)；

图2：质荷比为381.4719的片段的二级质谱图和多肽az、by断裂情况；

具体实施方式

在进一步描述本发明具体实施方案之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1活性肽SAPRHGSLGFLPRK的人工合成

一、生物活性肽的合成

1.称取RINK树脂3g(取代度0.3mmol/g)于150ml的反应器中，用50ml的二氯甲烷(DCM)浸泡。

2.2小时后，用3倍树脂体积的氮-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤树脂，然后抽干，如此重复四次，将树脂抽干后待用。

3.向反应器中加入一定量的20％哌啶(哌啶/DMF＝1:4,v:v)，放在脱色摇床上摇晃20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用3倍树脂体积的DMF洗涤四次，然后抽干。

4.取少量树脂用茚三酮(九井水合茚三酮)法检测(检A、检B各两滴，100℃反应1min)，树脂有颜色，说明脱保护成功。

5.称取氨基酸Ser适量和1-羟基-苯并三唑(HOBT)适量于50ml的离心管中，加入20ml的DMF将其溶解，然后加入3ml的N,N二异丙基碳二亚胺(DIC)振荡摇匀1min，待溶液澄清后加入到反应器中，然后将反应器置于30℃的摇床中反应。

6.2小时后，用一定量的醋酸酐封头(醋酸酐:DIEA:DCM＝1:1:2,v:v:v)半小时，然后用3倍树脂体积的DMF洗涤四次，抽干待用。

7.向反应器中加入一定量的20％哌啶(哌啶/DMF＝1:4，v:v)，放在脱色摇床上摇晃20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤四次，然后抽干。

8.取少量树脂用茚三酮(九井水合茚三酮)法检测(检A、检B各两滴，100℃反应1min)，树脂有颜色，说明脱保护成功。

9.称取后面第二个氨基酸适量和HOBT适量于50ml的离心管中，加入25ml的DMF将其溶解，然后加入2.5ml的DIC振荡摇匀1min，待溶液澄清后加入到反应器中，然后将反应器置于30℃的摇床中反应。

10.1小时后，取少量树脂检测，用茚三酮法检测(检A、检B各两滴，100℃反应1min)，若树脂为无色，说明反应完全；若树脂有颜色，说明缩合不完全，继续反应。

11.待反应完全后，用DMF洗涤树脂四次，然后抽干，向反应器中加入一定量的20％哌啶(哌啶/DMF＝1:4,v:v)，放在脱色摇床上摇晃20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤四次，然后抽干检测保护是否脱去。

12.按照步骤9-11依次接上氨基酸Ser、Ala、Pro、Arg、His、Gly、Ser、Leu、Gly、Phe、Leu、Pro、Arg、Lys。

13.待接上最后一个氨基酸后，脱去保护，用DMF洗涤四次，然后用甲醇将树脂抽干。然后用95切割液(三氟乙酸:1,2乙二硫醇:3，异丙基硅烷:水＝95:2:2:1，v:v:v)将生物活性肽从树脂上切割下来(每克树脂加10ml切割液)，并用冰乙醚(切割液：乙醚＝1:9,v:v)离心沉降四次。

至此，人工合成了生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK。

二、生物活性肽的确认

1)UPLC分析

UPLC条件如下：

仪器：Waters ACQUITY UPLC超高效液相、电喷雾、四级杆、飞行时间质谱仪

色谱柱规格：BEH C18色谱柱

流速：0.4mL/min

温度：50℃

紫外检测波长：210nm

进样量：2μL

梯度条件：A液：含有0.1％甲酸(v/v)的水，B液：含有0.1％甲酸(v/v)的乙腈

2)质谱分析

质谱条件如下：

离子方式：ES+

质量范围(m/z)：100、1000

毛细管电压(Capillary)(kV)：3.0

采样锥(V)：35.0

离子源温度(℃)：115

去溶剂温度(℃)：350

去溶剂气流(L/hr)：700.0

碰撞能量(eV)：4.0

扫描时间(sec)：0.25

内扫描时间(sec)：0.02

根据以上分析方法，利用超高效液相、电喷雾、四级杆、飞行时间质谱，对生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK进行色谱分析和质谱分析。生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK一级质谱图如图1所示，提取峰的二级质谱图和az、by断裂情况如图2所示，可得此峰的生物活性肽质荷比为381.4719，保留时间是12.63min。

3)结果

由图2可知，根据az、by断裂的情况，经过Mascot软件分析计算，得到质荷比381.4719的片段序列为Ser、Ala、Pro、Arg、His、Gly、Ser、Leu、Gly、Phe、Leu、Pro、Arg、Lys(SAPRHGSLGFLPRK)，记为SEQ ID NO：1。该片段与60S ribosomal protein L3蛋白第7～20位的残基序列相对应，60S ribosomal protein L3蛋白氨基酸序列的GenBank编号为BAE25922.1，序列见SEQ ID NO：2。

实施例2生物活性肽的免疫活性实验

一、MTT法测定生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的体外巨噬细胞增殖能力实验

1.实验试剂及仪器

试剂：实验动物balb/c小鼠(雄性6-8周龄)上海交通大学农业与生物学院动物实验中心；实施例1获得的小鼠脾脏淋巴细胞来源生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)Amresco公司；LPS(脂多糖)Sigma公司；牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA)Genebase公司；三联溶解液，含10％SDS、5％异丁醇以及0.012mol/L HCl的水溶液。

仪器设备：LRH-250F生化培养箱上海恒科技有限公司；GL-22M高速冷冻离心机上海卢湘仪离心机仪器有限公司；Hera cell 150 CO₂培养箱Heraeus公司；Dragon WellscanMK3酶标仪Labsystems公司。

2.试验方法：

balb/c小鼠腹腔注射2ml的2％(w/w)灭菌淀粉溶液，连续注射三天，最后一次注射24小时后断颈处死。剥去腹部皮肤，用注射器吸取4℃磷酸盐缓冲液(PBS)反复冲洗腹腔，离心管收集冲洗液后，离心(1000rpm，4℃)10分钟后弃上清，用4℃RPMI1640完全培养液(含10％FBS)洗涤两次，0.2％台盼蓝溶液染色做细胞活力检测，确认采集到的有活力巨噬细胞占95％以上。细胞计数板读数后，调整细胞浓度至合适浓度。

将已吹打至完全悬浮的细胞悬液以合适体积加入96孔细胞培养板，37℃、5％CO₂环境下培养4小时后，吸弃孔中液体，用37℃RPMI1640完全培养液小心清洗细胞培养板孔底，洗去未贴壁的细胞和细胞碎片，得到纯化后的贴壁腹腔巨噬细胞。每孔加入0.2mlRPMI1640完全培养基，实验用小肽样品及LPS事先溶解于培养基后加入，开始细胞培养。

得到纯化后的贴壁腹腔巨噬细胞后，实验组每孔加溶解有生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK(1mg/ml)的RPMI1640完全培养液(10％FBS)200μl/孔，连续培养48h；阴性对照组每孔加溶解有BSA(500μg/mL)的RPMI1640完全培养液(10％FBS)200μl/孔；空白组添加RPMI1640完全培养液(10％FBS)200μl/孔，连续培养48h。并且，实验组、阴性对照组和空白组又分别设正常组和炎症组；炎症组在培养到24h时加入LPS至终浓度为100ng/ml；正常组不加LPS；并且正常组和炎症组在44h时加入5％MTT 20μl/孔；细胞培养达到48h后加入100μl/孔的三联溶解液以终止培养，隔夜溶解后，在波长570nm下用酶标仪测各孔的吸光度值(OD570)，生长指数(Growth Indices)的计算公式如下：

生长指数GI＝(小肽组OD值-空白培养液OD值)/(空白组OD值-空白培养液OD值)

其中，空白培养液为含10％FBS的RPMI1640完全培养液。

3.实验结果及分析

表1生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK对体外巨噬细胞增殖的影响

实验分组	正常组GI	炎症组GI
			阴性对照组	1	1
生物活性肽(1mg/ml)	1.1038±0.0284*	1.2047±0.0334**

注：*表示与阴性对照比较，有显著性差异(P＜0.05)；**表示与阴性对照组比较，有高度显著性差异(P＜0.01)

实验结果见表1，由表1可知，在添加1mg/ml生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的条件下，正常组和炎症组的巨噬细胞均有增殖。而且与阴性对照组比较，炎症组有极显著性差异(P＜0.01)。说明生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK对体外巨噬细胞具有显著的增殖作用。

二、生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的促巨噬细胞一氧化氮诱生量的测定(Griess法)

1.实验试剂及仪器：

试剂：实验动物balb/c小鼠(雄性6-8周龄)脾脏淋巴细胞来源生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK；LPS，购自Sigma公司；中性红染色液，碧云天生物技术研究所生产。

仪器设备：LRH-250F生化培养箱上海恒科技有限公司；GL-22M高速冷冻离心机上海卢湘仪离心机仪器有限公司；Hera cell 150 CO2培养箱Heraeus公司；Dragon WellscanMK3酶标仪Labsystems公司。

2.试验方法：

加入细胞个数为2×10⁶/ml的细胞悬液100μl/孔，贴壁纯化后加入含肽的RPMI1640完全培养液(10％FBS)200μl/孔，炎症组在24h时加入LPS至终浓度10μg/ml，连续培养48h后，收集培养液上清50μl/孔，在培养液上清中依次添加Griess试剂1和Griess试剂2各50μl/孔，室温反应10分钟后，在540nm波长下测定吸光度值(OD540)。

3.实验结果及分析：

表2生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK促巨噬细胞一氧化氮诱生量的测定

注：*，与阴性对照比较，有显著性差异(P＜0.05)；

**，与阴性对照组比较，有极显著性差异(P＜0.01)

实验结果见表2，由表2可知，在实验组中添加生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK，浓度分别为1mg/mL和0.5mg/mL，对于正常情况下生长和LPS造炎症情况下生长的促进巨噬细胞的一氧化氮诱生量均有促进作用。与细胞空白组相比，具有极显著性差异(P<0.01)。当生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的添加浓度为0.2mg/mL，在LPS造炎症情况下，也能促进巨噬细胞一氧化氮诱生量的增加，并具有显著性差异(P<0.05)。但是与正常情况下生长的细胞空白组相比，没有显著性差异。说明生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在一定浓度条件下具有促进巨噬细胞一氧化氮诱生量增加的能力。

上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 浙江辉肽生命健康科技有限公司

<120> 一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK及其制备方法和应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ser Ala Pro Arg His Gly Ser Leu Gly Phe Leu Pro Arg Lys

1 5 10

<210> 2

<211> 403

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Ser His Arg Lys Phe Ser Ala Pro Arg His Gly Ser Leu Gly Phe

1 5 10 15

Leu Pro Arg Lys Arg Ser Ser Arg His Arg Gly Lys Val Lys Ser Phe

20 25 30

Pro Lys Asp Asp Ala Ser Lys Pro Val His Leu Thr Ala Phe Leu Gly

35 40 45

Tyr Lys Ala Gly Met Thr His Ile Val Arg Glu Val Asp Arg Pro Gly

50 55 60

Ser Lys Val Asn Lys Lys Glu Val Val Glu Ala Val Thr Ile Val Glu

65 70 75 80

Thr Pro Pro Met Val Val Val Gly Ile Val Gly Tyr Val Glu Thr Pro

85 90 95

Arg Gly Leu Arg Thr Phe Lys Thr Val Phe Ala Glu His Ile Ser Asp

100 105 110

Glu Cys Lys Arg Arg Phe Tyr Lys Asn Trp His Lys Ser Lys Lys Lys

115 120 125

Ala Phe Thr Lys Tyr Cys Lys Lys Trp Gln Asp Asp Thr Gly Lys Lys

130 135 140

Gln Leu Glu Lys Asp Phe Asn Ser Met Lys Lys Tyr Cys Gln Val Ile

145 150 155 160

Arg Ile Ile Ala His Thr Gln Met Arg Leu Leu Pro Leu Arg Gln Lys

165 170 175

Lys Ala His Leu Met Glu Ile Gln Val Asn Gly Gly Thr Val Ala Glu

180 185 190

Lys Leu Asp Trp Ala Arg Glu Arg Leu Glu Gln Gln Val Pro Val Asn

195 200 205

Gln Val Phe Gly Gln Asp Glu Met Ile Asp Val Ile Gly Val Thr Lys

210 215 220

Gly Lys Gly Tyr Lys Gly Val Thr Ser Arg Trp His Thr Lys Lys Leu

225 230 235 240

Pro Arg Lys Thr His Arg Gly Leu Arg Lys Val Ala Cys Ile Gly Ala

245 250 255

Trp His Pro Ala Arg Val Ala Phe Ser Val Ala Arg Ala Gly Gln Lys

260 265 270

Gly Tyr His His Arg Thr Glu Ile Asn Lys Lys Ile Tyr Lys Ile Gly

275 280 285

Gln Gly Tyr Leu Ile Lys Asp Gly Lys Leu Ile Lys Asn Asn Ala Ser

290 295 300

Thr Asp Tyr Asp Leu Ser Asp Lys Ser Ile Asn Pro Leu Gly Gly Phe

305 310 315 320

Val His Tyr Gly Glu Val Thr Asn Asp Phe Ile Met Leu Lys Gly Cys

325 330 335

Val Val Gly Thr Lys Lys Arg Val Leu Thr Leu Arg Lys Ser Leu Leu

340 345 350

Val Gln Thr Lys Arg Arg Ala Leu Glu Lys Ile Asp Leu Lys Phe Ile

355 360 365

Asp Thr Thr Ser Lys Phe Gly His Gly Arg Phe Gln Thr Met Glu Glu

370 375 380

Lys Lys Ala Phe Met Gly Pro Leu Lys Lys Asp Arg Ile Ala Lys Glu

385 390 395 400

Glu Gly Ala

Claims

1.一种生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK，其特征在于，其氨基酸序列为Ser-Ala-Pro-Arg-His-Gly-Ser-Leu-Gly-Phe-Leu-Pro-Arg-Lys。

2.编码权利要求1所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的多核苷酸。

3.如权利要求1所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的制备方法，其特征在于，直接通过化学合成制备。

4.权利要求1所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的应用，其特征在于，所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备促进巨噬细胞增殖的药物中的应用。

5.权利要求1所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK的应用，其特征在于，所述生物活性肽SAPRHGSLGFLPRK在制备促巨噬细胞一氧化氮诱生量的药物中的应用。