CN112770752A - 晚期sv40因子(lsf)抑制剂 - Google Patents

晚期sv40因子(lsf)抑制剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于治疗癌症(例如肝细胞癌(HCC))的组合物、方法和试剂盒。在一些实施方式中，本发明公开了式(I)‑式(V)的小分子化合物抑制细胞中微管蛋白甲基化或者调节染色质或细胞骨架修饰的用途。
Figure DDA0002997103580000011

Description

晚期SV40因子(LSF)抑制剂
相关申请
本申请根据35U.S.C.§119(e)，要求2018年8月2日提交的美国临时申请No.62/713,741的权益，以引用的方式将其内容整体并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及晚期SV40因子(LSF)抑制剂及其用途，例如在治疗癌症(例如肝细胞癌(HCC))的方法中的用途。
政府支持
本发明基于美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的合同号GM078240在政府支持下完成。美国政府对本发明享有一定权利。
背景技术
微管在许多细胞过程(例如细胞运动、蛋白质和细胞器运输、以及有丝分裂)中很重要，并且是抗癌药物的有效靶标。但是，对于如何调控或募集微管蛋白以用于这些细胞过程却鲜为人知。提出了微管蛋白翻译后修饰对微管功能和动力学进行调控。尽管已经研究了许多这样的修饰，但是最近才开始对微管蛋白甲基化和负责甲基化的酶有所描述。因此，需要了解微管蛋白甲基化的过程。
SET8/PR-Set7是蛋白质-赖氨酸N-甲基转移酶，其负责高等真核生物中组蛋白和非组蛋白的蛋白的单甲基化。在功能上的特征为组蛋白H4赖氨酸20特异性单甲基转移酶；这种修饰是转录抑制的特异性标记，并且也在有丝分裂期间有富集。SET8是细胞增殖、染色体凝集和胞质分裂所必需的，因为缺失或RNAi介导的酶耗竭损害所有这些功能。特别是早先的发现表明有丝分裂进入需要SET8和H4K20me1。SET8还介导其它底物的单甲基化，包括p53，导致p53靶基因的阻抑。然而，如何调控H4K20me1及它是如何促进细胞周期进程的仍是悬而未决的问题，包括可能涉及其它非组蛋白底物的可能性。
转录因子LSF是肝细胞癌(HCC)中的癌基因(oncogene)，在HCC细胞系和患者样品中显著过表达。LSF通常也是细胞周期进程和细胞生存所必需的。最初，LSF被描述为G1/S进程的调控剂，对于在G1期晚期诱导编码胸苷酸合酶(TYMS)的基因表达至关重要。然而，除其它的作用外，本发明人已经发现LSF另外还参与了有丝分裂。特别是，用示例性的LSF小分子抑制剂抑制LSF消除了LSF的DNA结合活性和相应的转录活性、以及特定的LSF-蛋白质相互作用并在多种小鼠模型中抑制HCC肿瘤生长。在HCC细胞系中，LSF的抑制通过有丝分裂缺陷导致细胞死亡。
肝细胞癌是原发性恶性肿瘤，其在肝中发展。HCC是五种最常见的癌症之一，也是全球癌症死亡的第三大原因。尽管所有癌症的总体发病率均下降，但HCC的发病率逐渐增加。在美国，2008年估计的新的HCC病例为21,370，其中预期18,410例将死亡。其有多种病因，其子类别示出不同的基因表达谱。HCC的预后仍然很差。平均5年生存率小于10％。HCC的死亡率与其发病率相近，因为HCC是一种快速生长和早期血管浸润的肿瘤，对常规化学疗法具有抗性。
肝细胞癌(HCC)的特征是晚期诊断和治疗的不良预后，治疗通常由肿瘤的外科手术切除和化学疗法组成。目前，唯一批准的用于晚期原发性恶性肿瘤的全身治疗是索拉非尼(sorafenib)和瑞格非尼(regorafenib)。HCC的当前治疗选择不是最佳的，尤其是在转移后。到目前为止，尚未证实辐射和化学疗法能令人满意；外科手术是HCC的最有效治疗。但是，外科手术仅适用于小的可切除肿瘤的患者。只有两种靶向酪氨酸激酶受体和MEK/ERK途径的分子基药物(索拉非尼和瑞格非尼)作为单一疗法在患者中产生了反应。但是，索拉非尼仅将生存时间增加了几个月。瑞格非尼(一种密切相关的化合物)最近被批准用于治疗对索拉非尼耐药的患者，但是同样具有有限的生存益处。因此，针对这种高度侵袭性的癌症发现新的、有效的靶向疗法势在必行。特别是，在本领域中强烈需要用小分子药物治疗HCC的改进方法。
发明内容
本发明总体上涉及例如通过使用晚期SV40因子(LSF)抑制剂治疗癌症(例如肝细胞癌(HCC))的方法、组合物和试剂盒，所述晚期SV40因子(LSF)抑制剂例如由本文公开的式(I)-式(V)表示的化合物。在一些实施方式中，LSF抑制剂(例如本文公开的式(I)-式(V)的化合物)可以用于治疗其它癌症，例如宫颈癌、结肠癌、胰腺腺癌、导管腺癌、结直肠腺癌、直肠乙状结肠癌、单核细胞淋巴瘤、肾癌、口腔鳞状细胞癌等。
本发明人发现，在患有HCC的受试者(例如人受试者)中，LSF的表达上调。本发明人还发现，使用小分子化合物抑制LSF可以减少HCC的肿瘤发生和转移。因此，本发明人发现了，如本文所公开的抑制LSF的小分子家族可以用作治疗受试者(例如人受试者)的HCC的化学治疗剂。此外，LSF的表达可以用于对患有HCC的受试者进行鉴别。
因此，本发明的一个方面涉及式(I)-式(V)的化合物或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
式(I)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000031
其中：
R1为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；
R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；
R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个RA和RB独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
N为2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
需要注意是的，本发明将使用式(I)和式(II)的各种取代的所有组合考虑在内。例如，R1可为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；R2、R3和R4可以独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组；R5可以为氢或烷氧基；R6和R7可独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基所组成的组；R3A可以为氢、C1-C6烷基、环烷基或杂环基，它们各自可以任选地被取代；并且n可以为1或2。
式(II)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000041
其中：
R1、R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；
R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
式(III)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000051
其中：
Z为NR15或CR16R17；
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R18为O、S或NR19A；
R19为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；或者，R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；
R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
在式(III)的化合物的一些实施方式中，当R18为O时，则n不为1，或Z为NR15。在式(III)的化合物的一些其它实施方式中，当Z为CR16R17且R18为O时，则R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基，或R13为被OR3A取代的芳基，其中，R3A为环基。
式(IV)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000061
其中：
Z为NR15或CR16R17；
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R18为NQ1Q2，其中，Q1和Q2独立地选自于由任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基、烷基、烯基、炔基、环烷基或氢所组成的组；或者，Q1和Q2与它们所连接的氮一起可形成杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；
R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
需要注意的是，本发明考虑使用式(III)和式(IV)的各种取代的所有组合。例如，R13可为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；R14、R15、R16和R17可独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组；R19可为氢或C1-C6烷基；R20和R21可独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基所组成的组，或者R19和R19A与它们所连接的氮一起可形成任选取代的杂环基或杂芳基；R3A可为氢、C1-C6烷基、环烷基或杂环基，它们各自可被任选地取代；R20和R21可独立地为H或卤素；Q1和Q2可独立地选自于由氢、烷基和烯基所组成的组，或者Q1和Q2与它们所连接的氮一起可形成任选取代的杂环基或杂芳基；以及，n可为1或2。
式(V)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000081
其中：
R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个二(C1-C24烷基)氨基、卤素或C2-C8烯基取代的芳基，其中，所述取代的芳基可任选地进一步被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基、二(C1-C24烷基)氨基或它们的组合取代；
R25和R26为氢，或者R25和R26一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R27为氢；
R28选自于由氢和C1-C6烷基所组成的组；
R29和R30各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组；
R31和R32各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
需要注意的是，本发明考虑使用式(V)的各种取代的所有组合。例如，R24可为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个二(C1-C6烷基)氨基、卤素或C2-C8烯基取代的苯基；R25、R26和R26可为氢；R28可为氢或低级烷基；R29、R30、R31和R32可独立地为H、F或Br。
在一些实施方式中，式(I)-式(V)的化合物可为晚期SV40因子(LSF)的抑制剂。非限制性地，可以使用任何可用的方法来确定对LSF的抑制，包括但不限于体外测定。
本发明的另一方面涉及抑制受试者中的LSF的方法，例如，使用式(I)-式(V)的化合物或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
本发明的另一方面涉及用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的式(I)-式(V)的化合物。
在本发明多个方面的一些实施方式中，所述癌症为肝细胞癌(HCC)。
本发明的另一方面涉及抑制细胞中的微管蛋白甲基化的方法，所述方法包括向所述细胞给予有效量的LSF抑制剂化合物。在一些实施方式中，所述LSF的抑制剂为式(I)-式(V)的化合物。
本发明的另一方面涉及对细胞中的染色质或细胞骨架修饰进行调节的方法，所述方法包括向所述细胞给予有效量的LSF抑制剂。在一些实施方式中，所述LSF的抑制剂为式(I)-式(V)的化合物。
在本文公开的多个方面的一些实施方式中，式(I)-式(V)中任一个的化合物是口服可生物利用的。
附图说明
本专利或申请文件包含彩色绘制的至少一副附图。美国专利商标局在收到请求和缴纳必要费用后，将提供带有彩图的专利或专利申请公开的副本。
图1a-图1c示出了SET8与细胞中的微管蛋白缔合并且在体外与α-微管蛋白直接相互作用。图1a是示出在COS7细胞中SET8和α-微管蛋白共定位的图像。GFP-SET8(绿色)在异步细胞中表达，用抗α-微管蛋白抗体(红色)对微管蛋白进行检测。合并图像中的黄色表示SET8和α-微管蛋白的共定位。图1b示出了来自内源性微管蛋白的HEK293T细胞与SET8的共免疫沉淀(左)和SET8与瞬时表达的Flag标记的微管蛋白的共免疫沉淀(右)。左子图：阳性对照为99％纯的微管蛋白；*代表非特异性条带。图1c示出了使用与GST融合的SET8的全长或重叠区段进行的纯化的猪脑微管蛋白的GST下拉(GST-pull down)测定(左下)，以及使用MBP-α-微管蛋白的重叠区段进行的纯化的GST-SET8的MBP下拉分析。
图2a-图2d示出组蛋白甲基转移酶SET8在K280、K311和K352处对α-微管蛋白进行甲基化。图2a示出纯化的猪微管蛋白被SET8甲基化。甲基转移酶测定的放射自显影图(上部)示出微管蛋白(*)的甲基化和SET8的自身甲基化。考马斯染色(底部)表明组分的纯度。图2b示出重组人α-微管蛋白而非β-微管蛋白被SET8甲基化。放射自显影图(上部)和考马斯染色(底部)如图2a所示。图2c为示出由SET8在体外对含K311的α-微管蛋白肽的特异性甲基化的柱状图。图2d是α-微管蛋白的3维结构，表示被SET8靶向的赖氨酸的位置(黄色)。
图3a-图3e示出了LSF与SET8和微管蛋白相互作用。图3a示出了来自细胞提取物的内源性LSF和SET8的共免疫沉淀。右侧示出了用于免疫印迹的抗体。图3b为显示纯化的猪脑微管蛋白的免疫印迹的条带，其使用LSF单克隆抗体证实了LSF的存在。较低的条带指示与大量微管蛋白的非特异性结合。图3c示出了α-微管蛋白与细胞提取物中的内源性LSF和SET8的共免疫沉淀。图3d示出了使用LSF的重叠区段进行的纯化的猪微管蛋白的GST-下拉分析。图3e示出了使用α微管蛋白的重叠区段进行的纯化的重组His标记的LSF的GST下拉分析。
图4a-图4d示出LSF增强了体外微管蛋白的聚合，而LSF抑制在体外减弱了聚合并引起细胞纺锤体缺陷。图4a为示出在低浓度LSF存在下的微管蛋白聚合测定(Millipore试剂盒)的图表。图4b为示出了LSF与来自HEK293T细胞的内源性α-微管蛋白的共免疫沉淀的条带，所述共免疫沉淀在用2.5μM FQI1处理24小时后被破坏。图4c为示出在FQI1和FQI2存在下的微管蛋白聚合测定(细胞骨架试剂盒)的图表。诺考达唑用作抑制聚合的对照。图4d为示出用FQI1处理同步化HCC细胞导致异常的有丝分裂表型的图像，包括具有凝集的染色体(左下)和多星状体(multi-aster)形成(右下)的有丝分裂停滞。细胞在G1/S边界处同步化，并在5μM FQI1存在的情况下释放。用α-微管蛋白抗体和DAPI对固定的细胞染色。
图5a-图5e示出了，LSF和FQI1相反地影响由SET8进行的微管蛋白甲基化。图5a示出了LSF增强由SET8进行的微管蛋白甲基化。用微管蛋白进行的甲基转移酶测定的放射自显影图以(*)指示。考马斯染色表明蛋白质水平始终一致。图5b示出了FQI1降低了由SET8进行的微管蛋白甲基化。用微管蛋白进行的甲基转移酶测定的放射自显影图以(*)指示。在100μM(泳道4)处，甲基化降低～3倍。图5c示出了FQI1不影响组蛋白H4的SET8甲基化。图5d示出了在用2.5μM FQI1处理24h后，内源性α-微管蛋白与内源性SET8的共免疫沉淀减少。图5e为示出通过LSF将SET8募集至微管蛋白以及随后通过SET8进行的α-微管蛋白甲基化的示意模式。
图6a-图6c示出了在COS-7细胞中SET8和LSF的共定位。图6a为示出将表达GFP-SET8的质粒转染到COS-7细胞中的图像；通过共聚焦显微镜使GFP-SET8的表达可视化；示出图像的一个子图。绿色表示SET8，蓝色表示DNA(DAPI染色)。图6b示出了使用与GST融合的SET8的全长或部分、重叠区段进行的纯化的His-LSF的GST下拉分析。将纯化的His-LSF载入最后一个泳道中，作为阳性对照。图6c为示出将表达FLAG-LSF和GFP-SET8的质粒转染到细胞中的图像；用红色荧光二抗使抗FLAG抗体可视化。合并的图像表明共定位(黄色)，主要集中在细胞核膜附近(LSF和SET8的Manders相关系数为0.9)。尽管LSF是在细胞核中起作用的转录因子，但是本发明人观测到当以GFP-LSF或3XFlagLSF过表达时，大多数在细胞质中表达。在细胞核中仅检测到少量。
图7a为示出用于甲基化的体外肽测定的柱状图。在相同反应条件下，SET8(FL)酶对K311的活性(右)比SETD2(FL)对K40的活性(左)稳健得多。图7b为示出在SET8、LSF或两者一起存在下的体外微管蛋白聚合测定的图表。示出了蛋白质的浓度。
图8a-图8d示出FQI1引起有丝分裂缺陷。图8a示出了在同步化HeLa细胞中用于FQI1孵育的方案的图示。图8b为示出了同步化细胞的DAPI染色的图像，如子图图8a所示进行处理，并以20×放大倍率进行分析。在存在DMSO或FQI1的情况下，从G1/S阻断释放后0、3、6和19小时收集样品。插图更详细地表示单个细胞。箭头分别代表在6小时时间点处于中期或前中期的细胞。图8c为示出了通过DNA和α-微管蛋白形态分析而来的来自75-100个总细胞的量的柱状图，表明在从G1/S阻断释放后9小时时含有多星状体的细胞。数据代表2个实验。图8d为示出通过对同步化细胞的有限FQI1处理介导的有丝分裂停滞是可逆的的图表。在5μM FQI1存在的情况下，从G1/S阻断释放同步化细胞。释放后十小时，洗涤细胞，然后仅用培养基孵育，或者在5μM FQI1存在下用培养基重新孵育。释放后24小时收集样品。固定的细胞用碘化丙啶染色以分析DNA含量。示出的是从G1/S阻断释放前立即收获的同步化细胞的细胞DNA谱(0小时)，关于用媒介物或5μM FQI1释放的细胞的释放后10小时时的细胞DNA谱，或关于在整个过程中仅用媒介物处理的细胞的释放后24小时时的细胞DNA谱，首先使用5μM FQI1处理10小时然后在无FQI1的情况下孵育最终14小时的细胞DNA谱，或者在整个过程中用5μM FQI1进行孵育的细胞DNA谱。
图9a-图9b示出LSF和FQI1调节由SET8进行的微管蛋白甲基化。图9a示出了LSF增强由SET8进行的重组MBP-α-微管蛋白的甲基化。甲基化微管蛋白的甲基转移酶测定的放射自显影图(*)加上SET8的自身甲基化。图9b示出了在存在或不存在862nM LSF的情况下，在FQI1存在下用纯化的微管蛋白进行甲基转移酶测定的放射自显影图。
图10a-图27c为示出示例性化合物对各种癌细胞系的生长抑制(按照％对照)的线图。
图28a-图30b示出了通过细胞热转变测定进行的关于外消旋FQI-34(图28a和图28b)、(R)-(+)-FQI-34或(R)-FQI-34(图29a和图29b)以及(S)-(-)-FQI-34或(S)-FQI-34(图30a和图30b)的靶结合评估。
图31a-图32b示出了在HuH7细胞中通过细胞热转变测定进行的关于FQI-34(图31a和图31)和FQI-37(图32ab和图32b)的靶结合评估。
图33示出了FQI34处理引起有丝分裂缺陷，其效力比FQI1高至少10倍。比例尺为10μm。
具体实施方式
本发明人特别是发现了式(I)-式(IV)的小分子化合物。本文公开的这些小分子化合物可以在体外测定中引起癌细胞系和原发性癌细胞的细胞死亡，例如，HCC癌细胞系、胰腺癌细胞系、导管细胞系、结直肠细胞系、乳腺癌细胞系、结肠癌细胞系、卵巢癌细胞系等。因此，在一方面中，本公开内容提供了式(I)-式(IV)的小分子化合物。在本发明的另一方面中，本文公开的化合物可以用于抑制LSF和/或治疗受试者的癌症(例如HCC和其它癌症)的方法。
因此，在一些实施方式中，本发明提供了包含式(I)-式(IV)的化合物的组合物和方法，以用于治疗受试者的肝细胞癌。在一些实施方式中，本发明部分地涉及式(I)-式(IV)的小分子化合物在治疗癌症中的用途，例如肝细胞癌(HCC)、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌、胰腺癌、导管腺癌、结直肠腺癌、直肠乙状结肠癌、肾癌、单核细胞淋巴瘤、卵巢癌、甲状腺癌等。
在多个实施方式中，本公开内容提供了式(I)或式(II)的化合物：
Figure BDA0002997103560000131
在式(I)和式(II)的化合物中，R1可为芳基，所述芳基被至少一个OR3A取代，并且任选地进一步被卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代。
式(I)和式(II)的R1的示例性芳基包括但不限于苯基、1-萘基、2-萘基、联苯基、吡啶、喹啉、呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、二苯醚、二苯胺、二苯甲酮等。R1的芳基的示例性卤素取代基包括但不限于氟、氯、溴和碘。R1的芳基的示例性烷基取代基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。R1的芳基的示例性环烷基取代基包括但不限于任选取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。R1的芳基的示例性烷氧基取代基包括但不限于O-甲基、O-乙基、O-正丙基、O-异丙基、O-正丁基、O-异丁基、O-仲丁基、O-叔丁基、O-戊基、O-己基、O-环丙基、O-环丁基、O-环戊基、O-环己基等。R1的芳基的示例性单烷基氨基取代基包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、异丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基等。
式(I)和式(II)的R1的芳基的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二丁基氨基、二戊基氨基、二己基氨基等。R1的芳基的额外的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于被两个不同的烷基基团取代的氨基，例如选自于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第一烷基基团，以及选自于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第二烷基基团，其中，第一烷基基团和第二烷基基团是不同的。R1的芳基的示例性卤代烷基取代基包括但不限于其中的1、2、3、4、5、6个或全部H被独立选择的卤素替代的烷基基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基)，例如CH2F、CHF2和CF3。R1的芳基的示例性烯基取代基包括但不限于乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基、异戊烯基、己烯基等。
在式(I)或式(II)的一些化合物中，R1为被一个OR3A基团取代并且任选地被一个或多个另外的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被一个或多个取代基取代的芳基，所述一个或多个取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些其它实施方式中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。
在式(I)和式(II)的一些化合物中，R1为芳基，所述芳基被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代。例如，R1为芳基，所述芳基被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代。在一些优选的实施方式中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。
在式(I)和式(II)的化合物中，R1可为被一个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和三个卤素取代的芳基。R1也可为被两个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被两个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被三个OR3A和一个卤素取代的芳基等。类似地，R1可为被一个OR3A和一个二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基，或者被一个OR3A和两个二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基等。
在式(I)和式(II)的一些化合物中，R1为苯基，所述苯基被至少一个OR3A取代，并且任选地进一步被一个或多个取代基取代，所述一个或多个取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在另一些其它实施方式中，R1为苯基，所述苯基被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代。
在式(I)和式(II)的一些化合物中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及独立地选自于以下的至少一个取代基取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些优选的实施方式中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的苯基。
非限制性地，式(I)和式(II)的R1的芳基可以在任何位置被取代。因此，当芳基被单个取代基取代时，该取代基可以存在于邻位、间位或对位中的任何一个上。例如，当R1基团的芳基被C1-C6烷氧基取代时，该烷氧基可以在邻位。
当芳基被两个取代基取代时，它们可以存在于：邻位和邻位；邻位和间位；邻位和对位；间位和间位；或者间位和对位。例如，当R1基团的芳基被C1-C6烷氧基和第二取代基取代时，该烷氧基可以存在于邻位之一，而第二取代基可以存在于间位、邻位或对位。在一些实施方式中，C1-C6烷氧基在邻位，第二取代基在对位。
在一些实施方式中，式(I)和式(II)的R1为被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个二(C1-C24烷基)氨基取代的苯基。在一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000161
其中，R8为C1-C6烷基，且R9和R10为独立选择的C1-C24烷基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。
非限制性地，R9和R10可以相同或不同。此外，它们可以包含相同数量的碳或不同数量的碳。在一些实施方式中，R9和R10独立地选自C1-C6烷基基团。R9和R10基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R9和R10为甲基。
在一些实施方式中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个卤素取代的苯基。在一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000162
其中，R8为C1-C6烷基，且R11为卤素、C1-C6卤代烷基或C2-C6烯基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。在一些实施方式中，R11选自于由Br、F和Cl所组成的组。
在式(I)和式(II)的一些化合物中，R1可以选自于由
Figure BDA0002997103560000171
Figure BDA0002997103560000172
所组成的组。
在式(I)和式(II)的化合物的一些优选实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000173
Figure BDA0002997103560000174
在式(I)和式(II)的化合物中，R2、R3和R4各自可以独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可以任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代。在一些实施方式中，R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键。非限制性地，R2、R3和R4可以相同、全部不同、或两个相同且一个不同。例如，R2和R3可以相同并且R4可不同，或者R2和R4可以相同并且R3可不同，或者R3和R4可以相同并且R2可不同。在一些实施方式中，R2、R3和R4相同。
在式(I)和式(II)的化合物的一些实施方式中，R2、R3和R4独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。例如，R2、R3和R4可以独立地选自于由氢或卤素所组成的组，其中，所述卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些优选的实施方式中，R2、R3和R4各自为H。
需要注意的是，式(I)或式(II)的化合物中与R1和R2连接的碳可以是手性的。因此，在式(I)或式(II)的一些化合物中，与R1和R2连接的碳具有S构型。在式(I)或式(II)的一些其它化合物中，与R1和R2连接的碳具有R构型。
在式(I)和式(II)的化合物中，R5可为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素。在一些实施方式中，R5为氢或C1-C6烷基。例如，R5可为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。在一些优选的实施方式中，R5为H。
在式(I)和式(II)的各种化合物中，R6和R7可独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。非限制性地，R6和R7可以相同或不同。在一些实施方式中，R6和R7独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基所组成的组。非限制性地，烷基可为任选取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等，并且卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R6和R7为氢。
在式(I)和式(II)的化合物中，R3A和R4A可以相同或不同。例如，每个R3A和R4A可独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。
在一些实施方式中，各个R3A和R4A独立地选自于由氢、C1-C6烷基、环烷基和杂环基所组成的组，其中，所述烷基、环烷基和杂环基可以任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。在一些优选的实施方式中，每个R3A和R4A独立地为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在式(I)和式(II)的化合物中，RA和RB可以相同或不同。例如，各个RA和RB可以独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。在一些实施方式中，各个RA和RB独立地选自于由H、Br、Cl、F和I所组成的组。
本发明考虑使用各种取代的所有组合。因此，可以使用落入式(I)和式(II)的上述取代的任何组合。
在式(I)和式(II)的各种化合物中，n可为1、2、3或4。例如，n可为1或2。在一些优选的实施方式中，n为2。
式(I)的示例性化合物包括但不限于以下：
Figure BDA0002997103560000191
优选的式(I)化合物为FQI-37。在本文所述的多个方面的一些实施方式中，化合物FQI-37为S-异构体，在本文中也称为(S)-FQI-37，其具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000192
在本文描述的多个方面的一些实施方式中，化合物FQI-37是R-异构体，在本文中也称为(R)-FQI-37，其具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000193
式(II)的示例性化合物包括但不限于以下：
Figure BDA0002997103560000201
在多个实施方式中，本公开内容提供了式(III)或式(IV)的化合物：
Figure BDA0002997103560000202
在式(III)的各种化合物中，R18可为O、S或NR19A。例如，R18可为O或S。在一些实施方式中，R18为O。在一些其它实施方式中，R18为S。
在式(III)的化合物中，R19可为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素。在一些实施方式中，R19为氢或C1-C6烷基。在一些优选的实施方式中，R19为H。在式(III)的一些化合物中，R18为NR19A，并且R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的5-8元杂环基或杂芳基。
在式(IV)的各种化合物中，R18可为NQ1Q2，其中，Q1和Q2独立地选自于由任选被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基、烷基、烯基、炔基、环烷基或氢所组成的组。非限制性地，Q1和Q2可以相同或不同。
在一些实施方式中，式(IV)的R18为NQ1Q2，其中，Q1和Q2独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C3-C8环烷基和C2-C8烯基。在一些实施方式中，Q1和Q2中的至少一个是H，另一个是C1-C6烷基。例如，Q1和Q2之一是H，另一个是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基或己基。在一些实施方式中，Q1和Q2相同。例如，Q1和Q2都为H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基或己基。在一些实施方式中，Q1和Q2与它们所连接的氮一起可形成杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基可以任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代。
在式(III)和式(IV)的化合物中，Z可为NR15或CR16R17。在式(III)和式(IV)的一些化合物中，Z为CH2或NH。在式(III)的化合物的一些实施方式中，当R18为O时，则n不为1或Z为NR15。式(III)的化合物的一些实施方式中，当Z为CR16R17且R18为O时，则(i)R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；或者(ii)R13为被OR3A取代的芳基，其中，R3A为环基。
在式(III)和式(IV)的化合物中，R13、R14、R15、R16和R17各自可独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代。在一些实施方式中，R14和R16一起可在它们所连接的碳之间形成第二键。
在式(III)和式(IV)的一些化合物中，R13可为芳基，所述芳基被至少一个OR3A取代，并且任选地进一步被卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代。
式(III)和式(IV)的R13的示例性芳基基团包括但不限于苯基、1-萘基、2-萘基、联苯基、吡啶、喹啉、呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、二苯醚、二苯胺、二苯甲酮等。R13的芳基的示例性卤素取代基包括但不限于氟、氯、溴和碘。R13的芳基的示例性烷基取代基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。R13的芳基的示例性环烷基包括但不限于任选取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。R13的芳基的示例性烷氧基取代基包括但不限于O-甲基、O-乙基、O-正丙基、O-异丙基、O-正丁基、O-异丁基、O-仲丁基、O-叔丁基、O-戊基、O-己基、O-环丙基、O-环丁基、O-环戊基、O-环己基等。R13的芳基的示例性单烷基氨基取代基包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、异丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基等。
式(III)和式(IV)的R13的芳基的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二丁基氨基、二戊基氨基、二己基氨基等。R13的芳基的另外的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于被两个不同的烷基基团取代的氨基，例如，选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第一烷基基团，以及选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第二烷基基团，其中，第一烷基基团和第二烷基基团是不同的。R13的芳基的示例性卤代烷基取代基包括但不限于其中的1、2、3、4、5、6个或全部H被独立选择的卤素替代的烷基基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基)，例如CH2F、CHF2和CF3。R13的芳基的示例性烯基取代基包括但不限于乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基、异戊烯基、己烯基等。
在式(III)或式(IV)的一些化合物中，R13为被一个OR3A基团取代并且任选地被一个或多个另外的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被独立地选自于以下的一个或多个取代基取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些其它实施方式中，R13为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下中的一个或多个取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。
在式(III)和式(IV)的一些化合物中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。例如，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。在一些优选的实施方式中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。
在式(III)和式(IV)的化合物中，R13可为被一个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和三个卤素取代的芳基。R1也可为被两个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被两个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被三个OR3A和一个卤素取代的芳基等。类似地，R13可为被一个OR3A和一个二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基，或者被一个OR3A和两个二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基等。
在式(III)和式(IV)的一些化合物中，R13为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被独立地选自以下中的一个或多个的取代基取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在另一些实施方式中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的苯基。
在式(III)和式(IV)的一些化合物中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及独立地选自于如下的至少一种取代基取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些优选的实施方式中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的苯基。
非限制性地，式(III)和式(IV)的R13的芳基可以在任何位置被取代。因此，当芳基被单个取代基取代时，该取代基可以存在于邻位、间位或对位中的任何一个上。例如，当R13基团的芳基被C1-C6烷氧基取代时，该烷氧基基团可以在邻位。
当芳基被两个取代基取代时，它们可以存在于：邻位和邻位；邻位和间位；邻位和对位；间位和间位；或者间位和对位。例如，当R13基团的芳基被C1-C6烷氧基和第二取代基取代时，该烷氧基可以存在于邻位之一，而第二取代基可以存在于间位、邻位或对位。在一些实施方式中，C1-C6烷氧基在邻位，第二取代基在对位。
在一些实施方式中，式(III)和式(IV)的R13为被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个二(C1-C24烷基)氨基取代的苯基。在一些实施方式中，R13为
Figure BDA0002997103560000241
其中，R8为C1-C6烷基，且R9和R10为独立选择的C1-C24烷基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。
非限制性地，R9和R10可以相同或不同。此外，它们可以包含相同数量的碳或不同数量的碳。在一些实施方式中，R9和R10独立地选自C1-C6烷基基团。R9和R10基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R9和R10为甲基。
在一些实施方式中，R13为被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个卤素取代的苯基。在一些实施方式中，R13为
Figure BDA0002997103560000242
其中，R8为C1-C6烷基，且R11为卤素、C1-C6卤代烷基或C2-C6烯基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。在一些实施方式中，R11选自于由Br、F和Cl所组成的组。
在式(III)和式(IV)的一些化合物中，R13可选自于由
Figure BDA0002997103560000243
Figure BDA0002997103560000244
所组成的组。在式(III)和式(IV)的化合物的一些优选实施方式中，R13为
Figure BDA0002997103560000251
Figure BDA0002997103560000252
在式(III)和式(IV)的化合物中，R14、R15、R16和R17各自可以独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可以任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代。在一些实施方式中，R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键。非限制性地，R14、R15、R16和R17可以相同、全部不同、或一些相同且一些不同。例如，R14和R15可以相同或它们可以不同。在一些实施方式中，R14和R15相同。当存在时，R16和R17可以与R14不同；与R14相同；或者一个与R14相同而一个与R14不同。例如，R14、R16和R17可以不同；或者R14和R16可以相同并且R17可以不同；或者R14和R17可以相同并且R16可以不同；或者R16和R17可以相同并且R14可以不同。在一些实施方式中，R14、R16和R17相同。
在式(III)和式(IV)的化合物的一些实施方式中，R14、R15、R16和R17独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。例如，R14、R15、R16和R17可以独立地选自于由氢或卤素所组成的组，其中，所述卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些优选的实施方式中，R14、R15、R16和R17各自为H。
在式(III)和式(IV)的化合物的一些实施方式中，R14为H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基或C1-C6烷氧基；R15为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。R14和R15的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。R14的示例性环烷基包括但不限于任选取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。R14的示例性烷氧基包括但不限于O-甲基、O-乙基、O-正丙基、O-异丙基、O-正丁基、O-异丁基、O-仲丁基、O-叔丁基、O-戊基、O-己基、O-环丙基、O-环丁基、O-环戊基、O-环己基等。在一些实施方式中，R14为H，且R15选自于由甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基所组成的组。
需要注意的是，式(III)或式(IV)的化合物中与R13和R14连接的碳可以是手性的。因此，在式(III)或式(IV)的一些化合物中，与R13和R14连接的碳具有S构型。在式(III)或式(IV)的一些其它化合物中，与R1和R2连接的碳具有R构型。
在式(III)和式(IV)的各种化合物中，R20和R21可独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。非限制性地，R6和R7可以相同或不同。在一些实施方式中，R20和R21独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基所组成的组。非限制性地，烷基可为任选取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等，并且卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R20和R21为氢。
在式(III)和式(IV)的化合物中，R3A和R4A可以相同或不同。例如，每个R3A和R4A可独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。
在一些实施方式中，每个R3A和R4A独立地选自于由氢、C1-C6烷基、环烷基和杂环基所组成的组，其中，所述烷基、环烷基和杂环基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。在一些优选的实施方式中，每个R3A和R4A独立地为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在式(III)和式(IV)的化合物中，R22和R23可以相同或不同。例如，每个R22和R23可以独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。在一些实施方式中，每个R22和R23独立地选自于由H、Br、Cl、F和I所组成的组。
本发明考虑使用各种取代的所有组合。因此，可以使用落入式(III)和式(IV)的上述取代的任何组合。
在式(III)和式(IV)的各种化合物中，n可为1、2、3或4。例如，n可为1或2。在一些优选的实施方式中，n为1。
式(III)的示例性化合物包括但不限于以下：
Figure BDA0002997103560000271
式(IV)的示例性化合物包括但不限于以下：
Figure BDA0002997103560000272
为了清楚起见，从式(I)-式(IV)的化合物中排除美国专利号9,597,325、9,802,948和9,815,845以及美国专利申请公开US2017/0107227中公开的化合物。
在一些实施方式中，本文公开的式(I)-式(IV)中任一个的化合物可用于治疗各种癌症，例如肝癌(肝细胞癌)、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌、胰腺癌、导管腺癌、结直肠腺癌、直肠乙状结肠癌、肾癌、单核细胞淋巴瘤、卵巢癌和甲状腺癌；HIV；与炎症相关的疾病，例如乙型肝炎病毒(HBV)，丙型肝炎(HCV)，肝硬化，和阿尔茨海默氏病。在一些实施方式中，肝疾病可为选自以下的任一种：HBV、HCV、肝硬化、肝腺瘤、肝血管肉瘤和肝血管肉瘤；气肿；和遗传性血色素沉着症，但不限于此。
在一些实施方式中，本文所公开的式(I)至式(IV)中任一个的化合物可用于治疗其它癌症，例如宫颈癌、结肠癌、黑素瘤等。可以治疗的其它癌症包括肿瘤中LSF过表达的任何癌症，例如但不限于少突胶质细胞瘤、脑/脊膜瘤(meningioma)、GBM、乳腺癌、结肠癌、非霍奇金小细胞癌(HNSCC)、肺癌(腺癌)、肺癌(小细胞癌)、胰腺癌、卵巢癌、甲状腺癌和未分化癌。
在一些实施方式中，本文公开的式(I)-式(IV)中的任一个的化合物可用于治疗任何癌细胞类型。癌症包括但不限于：膀胱癌；乳腺癌；脑癌，包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤(medulloblastomas)；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠癌，包括结直肠癌；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；头颈部癌；血液肿瘤，包括急性淋巴细胞性和骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、AIDS相关的白血病和成人T细胞白血病淋巴瘤；上皮内肿瘤，包括鲍温病(Bowen's disease)和佩吉特氏病(Paget's disease)、肝癌；肺癌，包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏病和淋巴细胞性淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌，包括鳞状细胞癌；骨肉瘤；卵巢癌，包括源自上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞的卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、滑膜肉瘤和骨肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤、卡波济肉瘤、基底细胞癌(basocellular cancer)和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生发肿瘤(germinal tumors)，例如精原细胞瘤、非精原细胞瘤(畸胎瘤、绒毛膜癌)、间质瘤和生殖细胞瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌；移行癌(transitional cancer)和肾癌，包括腺癌和Wilm瘤(Wilm’s tumor)。
在一个优选的实施方式中，本文所公开的式(I)-式(IV)的任一个的化合物用于治疗患有肝细胞癌(HCC)的受试者。
在另一实施方式中，处于发展为HCC的高风险中的受试者适合于用至少包含本文所公开的LSF抑制剂的本发明的组合物进行治疗。
肝细胞癌(HCC)是全球五种最常见的癌症之一。尽管所有癌症的总体发病率均下降，但HCC的发病率仍逐渐增加。在美国，2008年估计的新的HCC病例为21,370，其中预期有18,410例将死亡。平均5年生存率小于10％。HCC的死亡率与其发病率相近，因为HCC是快速生长和早期血管浸润的肿瘤，其对常规化学疗法具有抗性，对于晚期疾病，仅次优的全身治疗可用。
迄今为止，除治病性切除术外，HCC的治疗对生存具有最小的影响。不幸的是，大约90％的HCC患者患有不可切除的HCC。此外，即使在具有可切除的HCC的患者中进行可能的治病性肝切除术后，这些患者的70％中的肝硬化残余物中会出现新的HCC，并且在原位肝移植后的移植肝中也经常出现新的HCC。其它治疗HCC的方法(例如病灶内乙醇注射、化学栓塞、射频消融、冷冻手术(cryosurgery)和放射疗法)已在选定的患者人群中显示出一定的成功；但是，这些方法的效力尚未最后确定。经皮病灶内乙醇注射和经动脉化学栓塞均显示有限的成功，但并非没有严重副作用的风险。通常不选择放疗，因为肝对放射线非常敏感。
迄今为止，所有用于HCC的全身疗法均具有较差的结果，并且仅两种化学治疗剂(索拉非尼和瑞格非尼)单独或与其它疗法联用，与生存率提高有关(Fuchs等,94Cancer3186(2002)以及Bruix等，Lancet(2017),389(10064),56-66)。此外，大多数HCC患者都有潜在的肝疾病，因此他们耐受进行手术的能力受到损害。因此，本领域强烈需要提供用于治疗HCC的改进方法。
因此，本发明的一个方面提供了通过向受试者给予药物组合物来治疗性和预防性治疗癌症(例如HCC)的方法，所述药物组合物包含有效量的式(I)-式(IV)的化合物及其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
如本文所述，式(I)-式(IV)的化合物可抑制晚期SV40因子或晚期猿猴病毒40因子(LSF)。LSF的别名也称为LBP-1c(前导结合蛋白-1c)、LBP-1d、SEF(SAA3增强因子)、TFCP2(转录因子CP2)和CP2。
LSF是多种细胞类型中细胞周期进程所需的DNA结合转录因子，并调控多种细胞和病毒启动子。它与α-珠蛋白启动子结合并激活α-珠蛋白基因的转录。据报道，LSF促进进入细胞周期的G1/S期，促进DNA合成，并起抗凋亡因子的作用。LSF还调控红系基因表达，在珠蛋白基因启动子的转录转换中起作用，并且其激活许多其它细胞和病毒基因启动子。该基因产物与某些炎性反应因子相互作用，该基因的多态性可能与阿尔茨海默氏病的发病机理有关。
LSF的主要细胞靶标是胸苷酸合酶(TS)基因(TYMS)，其编码DNA合成所需的dTTP的生产中的限速酶。TS一直是癌症治疗的长期化学治疗靶标，最近讨论了肝细胞癌细胞系中LSF水平升高可导致对一种常用的胸苷酸合成酶抑制剂5-氟尿嘧啶的化学耐药性。LSF的抑制消除了TS诱导，诱导了进入S期后凋亡或在G1/S过渡期的停滞。因此，LSF在DNA合成和细胞存活中起重要作用。在肝中，LSF被炎性细胞因子激活，并对急性期蛋白的表达进行调控。
本发明部分涉及抑制LSF的方法和组合物，更具体地，涉及用小分子LSF抑制剂来抑制LSF的方法和组合物。在一些实施方式中，本文公开的LSF抑制剂可用于抑制细胞LSF活性。在一些实施方式中，本文公开的LSF抑制剂可以降低LSF的表达(水平)。在一些实施方式中，LSF的抑制剂选自于由式(I)-式(IV)的化合物所组成的组。
本发明人特别发现有丝分裂的三个调节剂，SET8、LSF和微管蛋白在体外和在细胞内都与彼此相互作用。另外，SET8是微管相关的甲基转移酶，其使α-微管蛋白上的赖氨酸甲基化。SET8不会使LSF甲基化，而是与蛋白质如何募集染色质写作者(writer)以靶向组蛋白相并行，LSF刺激由SET8进行的微管蛋白甲基化。LSF在体外增强微管蛋白聚合，表明该蛋白也可能影响微管动力学。本发明人还发现用示例性小分子LSF抑制LSF消除了细胞中的LSF-微管蛋白相互作用，并通过非转录机制破坏了有丝分裂纺锤体的形成。
因此，本发明的另一方面涉及抑制细胞中微管蛋白甲基化或者调节染色质/细胞骨架修饰的方法，所述方法包括向细胞给予有效量的LSF抑制剂化合物。
在本文公开的多个方面的一些实施方式中，LSF的抑制剂为式(I)-式(IV)的化合物。
在本文公开的多个方面的一些实施方式中，LSF的抑制剂为在美国专利No.9,597,325、No.9,802,948和No.9,815,845以及美国专利申请公开US2017/0107227中描述的LSF抑制剂，以引用的方式将各自的内容整体并入本文。例如，LSF抑制剂可为式(V)的化合物：
Figure BDA0002997103560000311
在式(V)的化合物中，R1可为未取代的芳基，或者被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下基团取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。
式(V)的R24的示例性芳基基团包括但不限于苯基、1-萘基、2-萘基、联苯基、吡啶、喹啉、呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、二苯醚、二苯胺、二苯甲酮等。R24的芳基的示例性卤素取代基包括但不限于氟、氯、溴和碘。R24的芳基的示例性烷基取代基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。R24的芳基的示例性环烷基包括但不限于任选取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。R24的芳基的示例性烷氧基取代基包括但不限于O-甲基、O-乙基、O-正丙基、O-异丙基、O-正丁基、O-异丁基、O-仲丁基、O-叔丁基、O-戊基、O-己基、O-环丙基、O-环丁基、O-环戊基、O-环己基等。R24的芳基的示例性单烷基氨基取代基包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、异丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基等。
式(V)的R24的芳基的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二丁基氨基、二戊基氨基、二己基氨基等。R24的芳基的额外的示例性二烷基氨基取代基包括但不限于被两个不同的烷基基团取代的氨基，例如选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第一烷基基团，以及选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基的第二烷基基团，其中，第一烷基基团和第二烷基基团是不同的。R24的芳基的示例性卤代烷基取代基包括但不限于其中的1、2、3、4、5、6个或全部H被独立选择的卤素替代的烷基基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基)，例如CH2F、CHF2和CF3。R24的芳基的示例性烯基取代基包括但不限于乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基、异戊烯基、己烯基等。
在式(V)的一些化合物中，R24为被一个OR3A基团取代并且任选地被一个或多个另外的取代基取代的芳基。在一些实施方式中，R24为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被独立地选自如下的一个或多个取代基取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些进一步的实施方式中，R24为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被如下基团取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。
在式(V)的一些化合物中，R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。例如，R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。在一些优选的实施方式中，R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基。
在式(V)的化合物中，R24可为被一个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被一个OR3A和三个卤素取代的芳基。R1也可为被两个OR3A和一个卤素取代的芳基，或者被两个OR3A和两个卤素取代的芳基，或者被三个OR3A和一个卤素取代的芳基等。类似地，R24可为被一个OR3A和一个二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基，或者被一个OR3A和两个二(C1-C6烷基)氨基基团取代的芳基等。
在式(V)的一些化合物中，R24为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被独立地选自以下的一个或多个取代基取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在又一些其它实施方式中，R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团取代的苯基。
在式(V)的一些化合物中，R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及独立地选自于以下的至少一个取代基取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基基团。在一些优选的实施方式中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的苯基。
非限制性地，式(V)的R1的芳基可以在任何位置被取代。因此，当芳基被单个取代基取代时，该取代基可以存在于邻位、间位或对位中的任何一个上。例如，当R24基团的芳基被C1-C6烷氧基取代时，该烷氧基可以在邻位。当芳基被两个取代基取代时，它们可以存在于：邻位和邻位；邻位和间位；邻位和对位；间位和间位；或者间位和对位。例如，当R24基团的芳基被C1-C6烷氧基和第二取代基取代时，该烷氧基可以存在于邻位之一，而第二取代基可以存在于间位、邻位或对位。在一些实施方式中，C1-C6烷氧基在邻位，第二取代基在对位。
在一些实施方式中，式(V)的R24为被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个二(C1-C24烷基)氨基取代的苯基。在一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000331
其中，R8为C1-C6烷基，且R9和R10为独立选择的C1-C24烷基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。
非限制性地，R9和R10可以相同或不同。此外，它们可以包含相同数量的碳或不同数量的碳。在一些实施方式中，R9和R10独立地选自C1-C6烷基基团。R9和R10基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R9和R10为甲基。
在一些实施方式中，R24是被至少一个C1-C6烷氧基和至少一个卤素取代的苯基。在一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000341
其中，R8为C1-C6烷基，且R11为卤素、C1-C6卤代烷基或C2-C6烯基。R8基团的示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基丙基、戊基、叔丁基和己基。在一些实施方式中，R8为甲基或乙基。在一些实施方式中，R11选自于由Br、F和Cl所组成的组。
在式(V)的一些化合物中，R24可以选自于由
Figure BDA0002997103560000342
Figure BDA0002997103560000343
所组成的组。
在式(V)的化合物的一些优选实施方式中，R1为
Figure BDA0002997103560000344
Figure BDA0002997103560000345
在式(V)的化合物中，R25、R26和R27各自可独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代。在一些实施方式中，R25和R26一起在它们所连接的碳之间形成第二键。非限制性地，R25、R26和R27可以相同、全部不同、或两个相同但一个不同。例如，R25和R26可以相同并且R27可不同，或者R25和R27可以相同并且R26可不同，或者R26和R27可以相同并且R25可不同。在一些实施方式中，R25、R26和R27相同。
在式(V)的化合物的一些实施方式中，R25、R26和R27独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。例如，R25、R26和R27可以独立地选自于由氢或卤素所组成的组，其中，所述卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些优选的实施方式中，R25、R26和R27各自为H。
需要注意的是，式(V)化合物中与R24和R25连接的碳可以是手性的。因此，在式(V)的一些化合物中，与R24和R25连接的碳具有S构型。在式(V)的一些其它化合物中，与R24和R25连接的碳具有R构型。
在式(V)的化合物中，R28可为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素。在一些实施方式中，R28为氢或C1-C6烷基。例如，R28可为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。在一些优选的实施方式中，R28为H。
在式(V)的各种化合物中，R29和R30可独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。非限制性地，R29和R30可以相同或不同。在一些实施方式中，R29和R30独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基所组成的组。非限制性地，烷基可为任选取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等，并且卤素可为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R29和R30为氢。
在式(V)的化合物中，R3A和R4A可以相同或不同。例如，每个R3A和R4A可独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。在一些实施方式中，每个R3A和R4A独立地选自于由氢、C1-C6烷基、环烷基和杂环基所组成的组，其中，所述烷基、环烷基和杂环基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。在一些优选的实施方式中，每个R3A和R4A独立地为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在式(V)的化合物中，R31和R32可以相同或不同。例如，每个R31和R32可独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组。在一些实施方式中，每个R31和R32独立地选自于由H、Br、Cl、F和I所组成的组。在一些优选的实施方式中，R31和R32为H。
如所指出，本发明考虑使用各种取代的所有组合。因此，可以使用落入式(V)的上述取代的任何组合。
式(V)的示例性化合物包括但不限于以下：
Figure BDA0002997103560000361
Figure BDA0002997103560000371
在本文描述的多个方面的一些实施方式中，化合物FQI-34是S-异构体，在本文中也称为(S)-FQI-34，其具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000372
在本文描述的多个方面的一些实施方式中，化合物FQI-34是R-异构体，在本文中也称为(R)-FQI-34，其具有以下结构：
Figure BDA0002997103560000373
在一个实施方式中，LSF抑制剂为式(I)-式(V)的化合物或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。在一些实施方式中，LSF抑制剂为化合物FQI-37或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。在一些实施方式中，LSF抑制剂为选自于由FQI-36、FQI-38、FQI-35、FQI-30、FQI-31、FQI-尿素、FQI-39、FQI-41、FQI-42、硫代-FQI-1、Tri-FQI-1所组成的组中的化合物，或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。在一些实施方式中，LSF抑制剂为选自于由FQI-1、FQI-34、FQI-Br、FQI-Cl、FQI-F、FQI-32所组成的组中的化合物，或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
式(I)-式(V)的化合物可被配制在本文所述的药物组合物中。此外，式(I)-式(V)的化合物可用于如本文公开的抑制LSF或治疗癌症的方法的所述方法中。
LSF的主要靶标之一是胸苷酸合酶(TS)基因(TYMS)，其编码DNA合成所需的dTTP的生产中的限速酶。LSF下游基因的其它实例公开于Yoo等，PNAS，2010，107；8357-8362中，包括但不限于SPP1(编码骨桥蛋白(osteopontin))、补体因子H(CFH)、TSPAN8、S100A10、CDH17、EFNB2、ZEB1、REG1A、REG3A、SAA4、TAGLN、FGFR2、EGFR、CYP2B7P1、CYP2B6、GPX2、DPYD、PKLR、LEF1、ICAM2和IGFBP7。
在一些实施方式中，LSF的下游基因是肿瘤相关基因，例如与侵袭和转移、血管生成、上皮-间质转化(EMT)、细胞生长、药物代谢、衰老、细胞粘附、糖酵解、Wnt信号传导、Hippo信号传导、生长和再生、炎性反应相关，例如急性期蛋白和基质降解酶的调节剂，例如MMP9。LSF是由TFCP2编码的转录因子。因此，抑制LSF可以破坏或抑制LSF与DNA的结合和/或LSF与其它蛋白质的相互作用以形成复合物。
因此，在一些实施方式中，可以通过测量由转录因子LSF调控的下游基因的水平来确定对细胞LSF活性的抑制。LSF对LSF靶向基因或LSF下游基因表达(水平)的影响可为刺激性的或抑制性的。例如，由LSF诱导的一个基因是编码OPN的SPP1。因此，抑制LSF的生物学活性导致SPP1 mRNA水平的降低和/或相应的编码蛋白OPN的量的降低。在另一实施方式中，被LSF抑制的一个基因是TAGLN。因此，抑制LSF的生物学活性导致TAGLN mRNA水平的增加。在一些实施方式中，可以通过TS水平的减少来测量LSF的细胞活性。
在进一步的实施方式中，抑制LSF可以降低LSF的表达，例如，蛋白水平减少和/或LSF的基因转录水平(例如mRNA)降低。
如本文所公开的，与不存在LSF抑制剂的情况下的表达相比，LSF的抑制剂可使LSF的表达或功能性转录活性(例如，LSF的蛋白水平和/或LSF的基因转录水平)降低至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。LSF的表达可以通过本领域技术人员已知的标准方法进行测量，例如蛋白质印迹、ELISA和定量PCR以及实施例部分中提供的方法。
在一些实施方式中，相对于不存在LSF抑制剂的情况下的活性水平，本文所述的LSF抑制剂可以抑制或降低细胞LSF活性至少约10％，例如至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。在某些实施方式中，与不存在LSF抑制剂的情况下的表达相比，本文所公开的LSF抑制剂可降低由LSF上调的下游基因(例如，编码OPN的SPP1)的表达至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。在替代的实施方式中，与不存在LSF抑制剂的情况下的表达相比，LSF的抑制剂可增加被LSF下调的下游基因(例如TAGLN)的表达至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。
先前已经讨论过LSF的抑制作为潜伏性HIV感染或癌症通常的潜在治疗，或作为免疫功能的治疗性调节剂，特别是在需要降低炎性反应的情况下(美国专利申请号：US2009/0081183和国际专利申请号：WO1998/36641，以引用的方式将其全部并入本文)。然而，这些专利申请没有教导或描述如本文公开的本发明的任何小分子LSF抑制剂，或其在治疗肝细胞癌(HCC)中的用途。
在某些情况下，可通过测量与不存在LSF抑制剂的情况下的LSF水平相比LSF表达的降低，来评估化合物抑制LSF的能力。在一些实施方式中，可通过测量生物学活性(例如与不存在LSF抑制剂的情况下的LSF的转录活性水平相比的LSF的转录活性)的降低来评估化合物抑制LSF的能力。LSF的表达包括由基因(例如编码LSF的TFCP2)转录的RNA的量，和/或通过由基因(例如TFCP2)转录的RNA的翻译所获得的LSF蛋白的量。例如，与不存在LSF抑制剂的参比水平相比，本文公开的LSF抑制剂可抑制LSF的表达至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。
另外，还可通过测量相较于阴性对照(例如不存在LSF抑制剂的实验条件下)，LSF的生物学活性降低或抑制来评估化合物抑制LSF的能力。LSF的生物学活性可指LSF调节LSF靶向基因(如胸苷酸合酶(TYMS))和/或LSF下游基因(如分泌性磷蛋白1(SPP1)、补体因子H(CFH)和其它肿瘤相关基因)的表达的能力(参见Yoo等，PNAS，2010，107；8357-8362，以引用的方式将其整体并入本文)。因此，与不存在LSF抑制剂的情况下的参比水平相比，本文所公开的LSF抑制剂可抑制LSF的生物学活性(例如降低编码OPN(也称为分泌性磷蛋白1，SPP1)的SPP1的表达)至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。在一些实施方式中，通过与未用LSF抑制剂治疗的参比条件相比，在体外或者在体内动物模型中抑制LSF诱导的肿瘤发生和癌细胞(例如肝细胞癌细胞)的转移来评估化合物抑制LSF的能力，如WO2012/050985、美国专利号9,802,948、美国专利号9,815,845和美国专利号9,597,325中所述，以引用的方式将其内容整体并入本文。在此类实施方式中，与未用LSF抑制剂治疗相比，LSF抑制剂可使肿瘤重量和体积减少至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％。
先前在Yoo等(PNAS，2010；107；8357-8362)中报道，LSF表达水平对鉴别患有HCC的受试者有用。因此，可通过测量获得自受试者的生物样品中的LSF水平来确定适合使用本文公开的方法和组合物进行治疗的受试者，如果来自受试者的生物样品中的LSF水平以统计学上显著量高于LSF参比水平，则该受试者可能有患HCC的风险，因此可以向其给予包含选自于本文所公开的式(I)-式(IV)的至少一种LSF小分子抑制剂的组合物。
当获得自受试者的生物样品中的LSF的表达水平相对于LSF的参比水平高至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、约99％或约100％时，则该受试者被鉴定为患有HCC或患有以LSF表达增加为特征的紊乱。LSF表达增加的程度可以表明HCC的等级和阶段(参见Yoo等，PNAS，2010；107；8357-8362)。因此，可以用有效剂量的本文公开的药物组合物治疗患有HCC或患有以LSF表达增加为特征的紊乱的受试者以抑制或延迟HCC的进展，所述药物组合物包含选自本文公开的式(I)-式(IV)中任一个的LSF抑制剂。
在一些实施方式中，生物样品是组织样品，例如肝样品。
在一些实施方式中，将生物样品中的LSF水平与参比水平或参比生物样品进行比较，例如来自邻近肝组织的生物样品(非病理性异常，或诸如从年龄匹配的正常对照(例如，无HCC的年龄匹配的受试者或年龄匹配的正常健康受试者)获得的生物样品)。
在其它实施方式中，为了确定治疗(例如，HCC的治疗)的治疗效力，参比水平可为来自治疗方案中的同一受试者的在早前时间点处测量的LSF表达水平或LSF靶基因的表达水平。
本发明的方法还可用于监测被给予的受试者的治疗过程。所述方法可用于监测对有症状的受试者的治疗性治疗和对无症状的受试者的预防性治疗。
如果获得自受试者的生物样品中的LSF或LSF靶基因的表达水平相对于LSF的参比水平降低了至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、约99％或约100％，则认为对受试者给予的治疗有效。在此类实施方式中，参比水平是被给予治疗方案的同一受试者在早前时间点处的LSF或LSF靶基因的测量结果。基于治疗结果，本领域技术人员可以相应地调整使用本文公开的方法和组合物的给药剂量和频率。
在一个实施方式中，用于分析的生物样品为肝样品，其中，所述样品包含至少一个细胞。可以使用任何免疫测定来确定生物样品中LSF的水平或LSF靶基因的水平，例如ELISA或本领域公知的、在本发明的使用中包括的检测LSF或LSF靶基因的免疫组化方法。
在一些实施方式中，确定来自受试者的生物样品中LSF的存在和/或水平的方法包括进行结合测定。可以使用任何恰当的特定结合伴侣。例如，所述结合伴侣是被标记的。例如，该测定为免疫测定，特别是LSF和识别LSF的抗体(尤其是标记的抗体)之间的免疫测定。可以是针对其部分或全部的抗体，例如对LSF具有高度特异性的单克隆抗体或多克隆抗血清。在一些实施方式中，所述抗体对哺乳动物LSF(例如人LSF)具有特异性。
因此，在所述方法中可以使用任何抗LSF抗体来确定生物样品中LSF的存在和/或水平，所述抗LSF抗体可以用于检测诊断样品中LSF水平的升高或降低。可以通过免疫诊断领域中众所周知的任何方法来生产此类抗体。
在一些实施方式中，通过测量LSF/抗体相互作用的蛋白质/抗体相互作用的程度来进行免疫测定。可以使用任何已知的免疫测定方法。夹心测定法或ELISA是优选的。在该方法中，使针对标志物蛋白的第一抗体结合至固相(例如塑料微量滴定板的孔)，并与样品以及对待测蛋白具有特异性的标记的第二抗体一起孵育。或者，可以使用抗体捕获测定法。在一些实施方式中，使生物测试样品结合至固相，然后添加抗LSF蛋白抗体并使其结合。洗去未结合的物质后，使用标记的抗第一抗体的第二抗体来确定结合至固相的抗体的量。
在一些实施方式中，标记优选为酶。酶的底物可以是例如成色的(color-forming)、荧光的或化学发光的。
在一些实施方式中，在结合测定中的结合伴侣(例如与LSF结合的抗体或配体)优选为标记的特异性结合伴侣，但不一定为抗体。结合伴侣通常将自身标记的，但是可替代地，它可以通过其中产生信号(例如来自另一种标记物质的信号)的次级反应来进行检测。
在一些实施方式中，可以使用扩增形式的测定，由此从相对低水平的待检测蛋白产生增强的“信号”。扩增免疫测定法的一种具体形式为增强化学发光测定法。方便地，抗体用辣根过氧化物酶进行标记，其参与与鲁米诺、过氧化物底物和增强发射光的强度和持续时间的化合物(通常为4-碘酚或4-羟基肉桂酸)的化学发光反应。
在另一实施方式中，可以使用扩增免疫测定法，其为免疫PCR。在该技术中，抗体与包含PCR引物的任意DNA分子共价连接，由此通过聚合酶链式反应扩增附着有抗体的DNA。参见E.R.Hendrickson等，Nucleic Acids Research 23:522-529(1995)。如以前所述读出信号。
可替代地，在一些实施方式中，一种确定生物样品中LSF水平的方法是使用二维凝胶电泳来产生染色的凝胶，通过与相应的对照或比较凝胶相比，染色的凝胶上含蛋白的斑点的强度的增加或降低来检测蛋白水平的增加或降低。
在一些实施方式中，确定生物样品中LSF的量的方法不一定需要将LSF水平与对照样品(例如来自正常健康受试者的对照样品)比较的步骤，但是可以参考对照或比较样品来进行。因此，关于HCC，测量生物样品中LSF的量可以用于确定进展阶段，必要时参考从同一受试者中较早获得的结果或参考被认为是典型的疾病阶段的标准值。以这种方式，本发明可以用于确定例如在用LSF抑制剂治疗受试者后疾病是否有进展。结果可以指导疾病的预后结果。
在一些实施方式中，一种检测生物样品中LSF的存在和/或水平的方法是对活检样品(例如肝样品)进行免疫组织化学测定。用于检测活检样品上蛋白质的存在和/或水平的方法完全在本领域技术水平内。在可选的实施方式中，通过使用根据LSF的核苷酸序列设计的引物的定量PCR确定生物样品中LSF的mRNA水平。本领域技术人员可以容易地进行LSF引物的设计。
在多种实施方式中，可以测量LSF的水平，并将其与HCC的其它生物标志物(例如AFP)结合使用，以诊断受试者的HCC。用于HCC的其它生物标志物包括但不限于例如在US2013/0107227中描述的生物标志物，以引用的方式将其内容整体并入本文。
出于说明性的目的，本文中提供了式(I)-式(V)中任一个的所有结构，并且公开了具体的异构体。然而，本领域普通技术人员将认出识式(I)-式(V)中任一个的结构的所有可能的异构体。因此，认为式(I)-式(V)中任一个的其它异构体(例如对映异构体)均落入本发明的范围内。本文所用的术语“异构体”是指具有相同分子式但结构不同的化合物。仅在构型和/或构象上不同的异构体被称为“立体异构体”。术语“异构体”也用于指对映异构体。
术语“对映异构体”用于描述彼此成镜像且不可重叠的一对分子异构体中的一个。符号“R”和“S”用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。所述符号可以作为前缀或作为后缀出现；它们可以被或未被连字符与异构体分开；它们可以用或不用连字符连接；并且它们可被或未被括号包围。符号“(+)”和“(-)”用于表示化合物使平面偏振光旋转的符号，其中，(-)表示化合物是左旋的(向左旋转)。前缀有(+)的化合物是右旋的(向右旋转)。用于指定或指代对映异构体的其它术语包括“立体异构体”(因为手性中心周围的不同排列或立体化学；尽管所有的对映异构体都是立体异构体，但并非所有的立体异构体都是对映异构体)或“光学异构体”(因为纯的对映异构体的光学活性，所述光学活性是不同的纯对映异构体使平面偏振光在不同方向旋转的能力)。对映异构体一般具有相同的物理性质，如熔点和沸点，并且还具有相同的光谱性质。对映异构体可以在它们与平面偏振光的相互作用以及生物学活性方面彼此不同。
在多个实施方式中，式(I)-式(V)的化合物包括其对映异构体、衍生物、前药及药学上可接受的盐。
本文所用的术语“衍生物”是指在结构上与另一种物质(即“原始”物质，其可以被称作“母体”化合物)有关的化学物质。可以在一个或多个步骤中从结构上相关的母体化合物制备“衍生物”。衍生物的一般物理和化学性质也类似于母体化合物。
在一些实施方式中，选自式(I)-式(V)中任一个的化合物的前药也落入了本发明的范围。本文所用的“前药”是指以下化合物：所述化合物可以经过一些化学或生理过程(例如，酶促过程和代谢水解)转化为选自于由式(I)-式(V)的化合物所组成的组中的化合物。
因此，术语“前药”也指药学上可接受的生物活性化合物的前体。前药在给予受试者时可以是非活性的，即酯，但在体内转化为活性化合物，例如通过水解为游离羧酸或游离羟基。所述前药化合物经常提供有机体内的延迟释放、组织相容性或可溶性的优点。术语“前药”也意味着包括任何共价结合的载体，当将这种前药给予受试者时，其在体内释放活性化合物。活性化合物的前药可以通过以如下方式修饰活性化合物中存在的官能团来制备：通过常规操作或体内方式将所述修饰物裂解成母体活性化合物。前药包括其中羟基、氨基或巯基与任意基团结合的化合物，以使得当将所述活性化合物的前药给予受试者时，其裂解并各自形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括但不限于：活性化合物中醇的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物，或活性化合物中胺官能团的乙酰胺、甲酰胺和苯甲酰胺衍生物等。参见Jucker编著，Harper,“Drug Latentiation”，Progress in DrugResearch 4:221-294(1962)；Morozowich等，“Application of Physical OrganicPrinciples to Prodrug Design”，E.B.Roche编著，Design of BiopharmaceuticalProperties through Prodrugs and Analogs,APHA Acad.Pharm.Sci.40(1977)；Bioreversible Carriers in Drug in Drug Design,Theory and Application,E.B.Roche编著,APHA Acad.Pharm.Sci.(1987)；Design of Prodrugs，H.Bundgaard,Elsevier(1985)；Wang等，“Prodrug approaches to the improved delivery of peptidedrug”in Curr.Pharm.Design.5(4):265-287(1999)；Pauletti等，(1997)Improvement inpeptide bioavailability:Peptidomimetics and Prodrug Strategies,Adv.Drug.Delivery Rev.27:235-256；Mizen等，(1998)“The Use of Esters as Prodrugsfor Oral Delivery of(3-Lactam antibiotics,”Pharm.Biotech.ll,:345-365；Gaignault等，(1996)“Designing Prodrugs and Bioprecursors I.Carrier Prodrugs,”Pract.Med.Chem.671-696；Asgharnejad,“Improving Oral Drug Transport”,inTransport Processes in Pharmaceutical Systems,G.L.Amidon,P.I.Lee和E.M.Topp编著,Marcell Dekker,p.185-218(2000)；Balant等，“Prodrugs for the improvement ofdrug absorption via different routes of administration”,Eur.J.DrugMetab.Pharmacokinet.,15(2):143-53(1990)；Balimane和Sinko,“Involvement ofmultiple transporters in the oral absorption of nucleoside analogues”,Adv.Drug Delivery Rev.,39(1-3):183-209(1999)；Browne,“Fosphenytoin(Cerebyx)”,Clin.Neuropharmacol.20(1):1-12(1997)；Bundgaard,“Bioreversible derivatizationof drugs-principle and applicability to improve the therapeutic effects ofdrugs”,Arch.Pharm.Chemi 86(1):1-39(1979)；Bundgaard H.“Improved drug deliveryby the prodrug approach”,Controlled Drug Delivery 17:179-96(1987)；BundgaardH.“Prodrugs as a means to improve the delivery of peptide drugs”,Arfv.DrugDelivery Rev.8(1):1-38(1992)；Fleisher等，“Improved oral drug delivery:solubility limitations overcome by the use of prodrugs”,Arfv.Drug DeliveryRev.19(2):115-130(1996)；Fleisher等，“Design of prodrugs for improvedgastrointestinal absorption by intestinal enzyme targeting”,MethodsEnzymol.112(Drug Enzyme Targeting,Pt.A):360-81,(1985)；Farquhar D等，“Biologically Reversible Phosphate-Protective Groups”,Pharm.Sci.,72(3):324-325(1983)；Freeman S等，“Bioreversible Protection for the Phospho Group:Chemical Stability and Bioactivation of Di(4-acetoxy-benzyl)Methylphosphonatewith Carboxyesterase,”Chem.Soc.,Chem.Commun.,875-877(1991)；Friis和Bundgaard，“Prodrugs of phosphates and phosphonates:Novel lipophilic alphaacyloxyalkylester derivatives of phosphate-or phosphonate containing drugs masking thenegative charges of these groups”,Eur.J.Pharm.Sci.4:49-59(1996)；Gangwar等，“Pro-drug,molecular structure and percutaneous delivery”,Des.Biopharm.Prop.Prodrugs Analogs,[Symp.]Meeting Date 1976,409-21.(1977)；Nathwani和Wood,“Penicillins:a current review of their clinical pharmacologyand therapeutic use”,Drugs 45(6):866-94(1993)；Sinhababu和Thakker,“Prodrugs ofanticancer agents”,Adv.Drug Delivery Rev.19(2):241-273(1996)；Stella等，“Prodrugs.Do they have advantages in clinical practice？”,Drugs 29(5):455-73(1985)；Tan等，“Development and optimization of anti-HIV nucleoside analogs andprodrugs:A review of their cellular pharmacology,structure-activityrelationships and pharmacokinetics”,Adv.Drug Delivery Rev.39(1-3):117-151(1999)；Taylor,“Improved passive oral drug delivery via prodrugs”,Adv.DrugDelivery Rev.,19(2):131-148(1996)；Valentino和Borchardt,“Prodrug strategies toenhance the intestinal absorption of peptides”,Drug Discovery Today 2(4):148-155(1997)；Wiebe和Knaus,“Concepts for the design of anti-HIV nucleosideprodrugs for treating cephalic HIV infection”,Adv.Drug Delivery Rev.:39(l-3):63-80(1999)；Waller等，“Prodrugs”,Br.J.Clin.Pharmac.28:497-507(1989)，以饮用的方式其全部的内容整体并入本文。
式(I)-式(V)的化合物还包括其药学上可接受的盐。本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指本文所公开的LSF抑制剂的传统无毒盐类或季铵盐类(例如来自无毒有机酸或无机酸)。这些盐类可以在给药辅料或剂型制造过程中原位制备、或通过单独将处于其游离碱或酸形式的LSF抑制剂与合适的有机酸/无机酸或有机碱/无机碱反应并在后续纯化时分离所形成的盐来制备。传统的无毒盐类包括由例如以下无机酸衍生的盐：硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由例如以下有机酸制备而来的盐：醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、异硫羰酸(isothionic)等。参见例如，Berge等，“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1-19(1977)，以引用的方式将其内容整体并入本文。
在本文所述方面的一些实施方式中，代表性的药学上可接受的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、琥珀酸盐、戊酸酯、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐(lactobionate)和十二烷基基磺酸盐等。
在一些实施方式中，本文所公开的式(I)-式(IV)的化合物或其药物组合物可以与HCC的其它治疗性治疗结合使用，例如肝病灶内乙醇注射、化学栓塞、射频消融、冷冻手术、放射疗法、经皮病灶内乙醇注射、经动脉化学栓塞和放疗。
在本文公开的多个方面的一些实施方式中，所述组合物或方法可以进一步包括向受试者给予另外的抗癌疗法。例如，对受试者给予标准护理化学疗法。标准护理化学疗法或其它抗癌疗法的非限制性示例可以包括放射疗法、外科手术、吉西他滨、顺铂、紫杉醇、卡铂、硼替佐米、AMG479、伏立诺他(vorinostat)、利妥昔单抗、替莫唑胺、雷帕霉素、ABT-737、PI-103；烷化剂，例如噻替帕(thiotepa)和
Figure BDA0002997103560000481
环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、英内舒凡和嗪消安(piposulfan)；氮丙啶，例如benzodopa、卡波醌(carboquone)、meturedopa和uredopa；乙烯亚胺(ethylenimines)和methylamelamines，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙烯磷酰胺(trietylenephosphoramide)、硫代三乙烯磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和trimethylolomelamine；多聚乙酰(acetogenins)(特别是布拉他辛(bullatacin)和bullatacinone)；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(cryptophycins)(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；duocarmycin(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；eleutherobin；pancratistatin；sarcodictyin；软海绵素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustards)，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌氮芥、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，例如卡莫司汀、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和ranimnustine；抗生素，例如烯二炔(enediyne)抗生素(例如卡奇霉素(calicheamicin)，特别是卡其霉素γ1I和卡奇霉素ΩI1(参见例如，Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))；dynemicin，包括dynemicin A；二膦酸盐(bisphosphonates)，例如氯磷酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)，aclacinomysins，放线菌素，authramycin，重氮丝氨酸，博莱霉素，cactinomycin，carabicin，caminomycin，嗜癌菌素(carzinophilin)，chromomycinis，更生霉素，柔红霉素，detorubicin，6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸，
Figure BDA0002997103560000492
阿霉素(包括吗啉代阿霉素、菁基吗啉代阿霉素、2-吡咯啉-阿霉素和脱氧阿霉素)，表阿霉素，依索比星(esorubicin)，伊达比星，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素(例如丝裂霉素C)，麦考酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycins)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin，嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素，链脲菌素，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二叶甲酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、thiamiprine、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，例如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯；抗肾上腺，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸(frolinicacid)；乙葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶；bestrabucil；比生群(bisantrene)；edatraxate；defofamine；地美可辛(demecolcine)；亚丝醌(diaziquone)；elformithine；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；lonidainine；美登木素生物碱(maytansinoids)，例如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；mopidanmol；nitraerine；喷司他丁；苯来美特(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；podophyllinic acid；2-ethylhydrazide；丙卡巴肼；
Figure BDA0002997103560000491
多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；丙亚胺(razoxane)；根瘤菌素；sizofuran；螺环锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-trichlorotriethylamine；单端孢霉烯类(trichothecenes)(特别是T-2毒素、verracurin A、漆斑菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；氨基甲酸乙酯(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如
Figure BDA0002997103560000501
紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、
Figure BDA0002997103560000502
Cremophor-free、紫杉醇白蛋白工程化纳米颗粒制剂(AmericanPharmaceutical Partners，Schaumberg，Ill.)和
Figure BDA0002997103560000503
doxetaxel(Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；
Figure BDA0002997103560000504
吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；NAVELBINE.RTM.长春瑞滨；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；柔红霉素；氨基喋呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康与5-FU和甲酰四氢叶酸的治疗方案)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸；卡培他滨；康普瑞汀(combretastatin)；甲酰四氢叶酸(LV)；奥沙利铂，包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX)；拉帕替尼(Tykerb.RTM)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如，厄洛替尼
Figure BDA0002997103560000505
)和VEGF-A的抑制剂(减少细胞增殖)，以及以上任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。此外，抗癌治疗可进一步包括使用放射或放射疗法。此外，额外的抗癌治疗可进一步包括使用外科手术治疗。
在本文公开的多个方面的一些实施方式中，将所述治疗给予当前接受标准护理化学疗法或其它替代抗癌治疗的受试者。通常，癌症治疗可涉及治疗选择中的一种或多种，但不限于外科手术、放射、化学疗法、免疫疗法、靶向疗法和激素疗法。用于治疗癌症的单药疗法或当前的联合疗法引起副作用，例如恶心、皮疹、肿胀、流感样症状、疲乏、消化道问题、变应性反应和免疫抑制。在一些实施方式中，本文所述的发明通过与其它癌症治疗组合给予一种或多种由式(I)-式(IV)表示的化合物来提供更有效的癌症治疗。在一些实施方式中，联用疗法诱导加和或协同治疗作用。在一些实施方式中，本文所述的方法可以减少或预防与化学治疗剂或放射疗法的给予相关的一种或多种不良影响或毒性。在一些实施方式中，本文所述的方法可增加化学治疗剂或放射疗法的抗肿瘤活性或者增加化学治疗剂的选择性细胞毒性。
本文所述的短语“联用疗法”是指将一种或多种由式(I)-式(IV)表示的化合物和治疗剂作为特定治疗方案的一部分进行给药，旨在由这些治疗剂的共同作用提供有益效果。联用的有益效果包括但不限于由治疗剂组合产生的药代动力学或药效学共同作用。这些治疗剂的组合给药通常在限定的时间段内进行。根据所选的组合，时间段可以是数分钟、数小时、数天或数周。
联用疗法包括以顺序方式给予这些治疗剂(即，其中每种治疗剂在不同的时间给药)，以及以基本上同时的方式给予这些治疗剂或治疗剂中的至少两种。基本上同时给药可以例如通过给予受试者其中每种治疗剂具有固定比例的单个药丸或以多个关于各治疗剂的单个药丸来进行。每种治疗剂的顺序或基本上同时给药可以通过任何合适的途径进行，包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径和通过粘膜组织的直接吸收。可以通过相同途径或通过不同途径对治疗剂进行给药。例如，所选组合的第一治疗剂可通过静脉内注射给药，而该组合的其它治疗剂可以口服给药。可选地，例如，所有治疗剂可口服给药或所有治疗剂可通过静脉内注射给药。治疗剂给药的顺序可能重要，也可能不重要。
联用疗法还可指一种或多种由式(I)-式(IV)表示的化合物的给药与其它化合物和非药物疗法(例如但不限于外科手术或放射治疗)进一步组合。在联用疗法进一步包括放射治疗的情况下，放射治疗可以在任何合适的时间进行，只要获得了由治疗剂和放射治疗组合的共同作用而来的有益效果即可。
在一些实施方式中，如本文公开的由式(I)-式(IV)表示的化合物或其药物组合物可用于治疗对任何先前的HCC治疗无反应或任何先前的HCC治疗很少/没有显示出改善(例如HCC持续发展或恶化)的HCC受试者。在此类实施方式中，可以用先前的治疗方法结合LSF抑制剂再次对所述HCC受试者进行治疗。在可选的实施方式中，它们可以单独地与LSF抑制剂或其药物组合物一起给药，或者与可选的治疗性方法同时给予。
先前已报道LSF是星形胶质细胞升高基因1(AEG-1)的下游基因，其在>90％的人HCC患者中过表达，并诱导HCC对化学治疗剂(例如5-氟尿嘧啶(5-FU))的化学耐药性。因此，在一些实施方式中，本文所述的LSF抑制剂可在至少一种化学治疗剂(例如5-FU)之前给药或者与至少一种化学治疗剂(例如5-FU)同时给药。其它示例性化学治疗剂包括阿霉素、5-FU、紫杉醇、伊立替康、Patupilone、依维莫司、多激酶抑制剂(索拉非尼和舒尼替尼)和EGFR抑制剂(西妥昔单抗、厄洛替尼、吉非替尼、布里尼布(Brivanib)、拉帕替尼)。在一个实施方式中，本文公开的LSF抑制剂或其药物组合物可以与索拉非尼联合用于治疗HCC。
作为针对HCC复发或转移的预防性措施，如本文所公开的由式(I)-式(IV)表示的化合物或其药物组合物可以在外科手术之后给药或者在用于其中实体瘤已经被移除或消除的HCC的上述治疗之后进行给药。在一些实施方式中，在肝切除或肝移植后，可以用由式(I)-式(IV)表示的化合物中的任一种或其药物组合物治疗患有可切除的HCC的受试者，以预防HCC的复发。
多数HCC病例是由乙型肝炎或丙型肝炎病毒(分别为HBV或HCV)的慢性感染，或酒精中毒引起的肝硬化发展而来。慢性肝炎可进展为肝硬化(与纤维化和异常结节相关的非癌性肝病)，增加了发展为HCC的风险。因此，患有慢性肝炎和/或肝硬化的受试者形成高风险人群。因此，在一些实施方式中，由式(I)-式(IV)表示的化合物中的任一种可以与针对肝病(例如HBV、HCV的感染或肝硬化)的其它治疗性治疗联合使用，作为针对HCC发病的预防性措施。
在一些实施方式中，可以将本文公开的式(I)-式(IV)的化合物中的任一种给予处于发展为肝细胞癌的高风险中的受试者。例如，适合于通过本文公开的方法和组合物(例如使用LSF抑制剂)进行治疗的受试者是具有HCC风险因素的受试者。HCC风险因素的实例包括但不限于HBV、HCV、长期饮酒、暴露于食物中的黄曲霉毒素B1(这是在将食物暴露于湿热环境后由被称为黄曲霉(Aspergillus flavus)的霉菌产生的肝致癌化学物质)、由于使用雌性激素(雌激素)和蛋白质合成(合成代谢)类固醇导致的肝腺瘤、暴露于钍造影剂(thorotrast)(一种以前使用的用于成像的造影剂，导致被称为肝血管肉瘤的肝中的血管癌症)、肝血管肉瘤(由于长期暴露于氯乙烯所导致，氯乙烯是在塑料工业中使用的一种化合物)、遗传性血色素沉着(导致身体积聚过量铁的紊乱)、肺气肿和肝硬化(由α1抗-胰蛋白酶缺乏所导致)和遗传性酪氨酸血症。在一些实施方式中，LSF抑制剂可以单独使用或与上述疾病或紊乱的其它治疗性治疗联合使用。在进一步的实施方式中，对于先前已经经历过发展为HCC的高风险的受试者，即使在已经中止肝病(如HBV，HCV或肝硬化)的治疗后，可以用LSF抑制剂或其药物组合物继续治疗。
可以预期使用本文公开的本发明的LSF抑制剂的其它适应症包括其中LSF的表达和/或生物学活性被上调(例如，通过炎性细胞因子)，或希望降低或抑制LSF的疾病或紊乱。这类疾病或紊乱的非限制性实例包括HIV和与炎症相关的疾病(包括阿尔茨海默氏病)。
先前已经报道，LSF激活细胞生存调控途径，例如MEK/ERK和NF-κB途径，并且在多种癌症中被上调(参见Yoo等，PNAS,2010,107；8357-8362；以及Kotarba等，Cancer Lett.(2018),28(420),72-79)。因此，在一些实施方式中，本文公开的LSF抑制剂可以单独使用或与用于治疗其它多种癌症的化学治疗剂联合使用，其它多种癌症例如脑癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌和甲状腺癌。示例性化学治疗剂包括阿霉素、5-FU、紫杉醇、伊立替康、Patupilone、依维莫司、多激酶抑制剂(索拉非尼和舒尼替尼)和EGFR抑制剂(西妥昔单抗、厄洛替尼、吉非替尼、布里尼布、拉帕替尼)。在一些实施方式中，与LSF诱导的MEK/ERK活化有关的疾病或紊乱可以考虑单独用本文公开的LSF抑制剂进行治疗，或与MEK/ERK途径的抑制剂(如PD98059和U0126)联合来治疗。
在一些实施方式中，可以基于与对照参比LSF表达水平(例如在正常的非癌性样品中)相比，生物样品或者肿瘤或癌症样品中LSF表达水平的升高，来对适于或适合于用包含本文所公开的式(I)-式(V)的化合物的组合物进行治疗的受试者进行选择。在一些实施方式中，如果来自受试者的生物样品中的LSF表达水平高于预定的参比LSF表达阈值水平，则该受试者处于患癌症的风险中。在一些实施方式中，参比LSF表达阈值水平基于非癌症细胞或非肿瘤组织、或对照细胞系、或来自正常组织样品(其中，所述组织样品来自受试者的邻近的、非病理组织，或来自组织匹配、物种匹配且年龄匹配的生物样品的生物组织样品)的细胞中的LSF表达水平。在一些实施方式中，参比水平基于来自非癌症匹配组织样品的参比样品。
在一些实施方式中，在包含肿瘤样品的生物样品中对LSF表达水平进行测量。在一些实施方式中，获得自受试者的生物样品包含癌细胞，并且可以是血清、血浆、血液或组织样品的生物样品。在一些实施方式中，生物样品选自于由以下所组成的组：组织样品；肿瘤样品；肿瘤细胞；活检样品；离体培养样品；离体培养的肿瘤样品；外科手术切除的组织样品、血液样品、血浆样品、癌症样品、淋巴液样品或原始腹水样品(primary ascite sampl)。在可选的实施方式中，生物样品包括：例如血液；血浆；血清；尿液；脊髓液；胸膜液；乳头抽吸物；淋巴液；皮肤、呼吸道、内泌尿道和泌尿生殖道(internal and genitoururinarytracts)的外部分泌物；胆汁；眼泪；汗液；唾液；器官；乳细胞和原代腹水细胞；活检组织样品；癌症活检组织样品；体外或离体培养的活检组织样品。
关于HCC的筛查：在一些实施方式中，对适于根据本文公开的方法治疗的受试者进行HCC筛查。HCC的常规生物标志物是甲胎蛋白(AFP)。Yang等，123J.Cancer Res ClinOncol.357(1997)。血清AFP水平升高的个体可能指示肝细胞癌。用于HCC的其它生物标记包括但不限于在以下中公开的生物标志物：美国专利申请号：US2009/0317844、US2010/0015605、US2010/0120631；以及国际专利申请号：WO2010/048304、WO2005/0233392和WO2008/056854，以引用的方式将其整体并入本文。本领域的技术人员之一可以容易地使用本领域的标准方法对生物样品(例如来自诸如人的受试者的血液)中的这些生物标志物的mRNA或蛋白质水平进行测量。在一些实施方式中，根据本文所公开的方法，向被鉴别患有HCC的受试者给予LSF抑制剂。
如本文所公开的，还可以通过以下方式来选择患有HCC的受试者：检测与参比水平相比，来自受试者的生物样品(如肝样品)中具有高水平的LSF表达。在一个实施方式中，参比水平是正常健康受试者中LSF的水平。
此外，活检可用于诊断HCC。(Walter等，24Curr Opin Gastroenterol.312(2008))。本领域技术人员之一已知的用于HCC的其它诊断方法包括成像方法，如超声、计算机断层摄影(CT)扫描和MRI(Scholmerich等，52Gut.1224(2004))。在多种实施方式中，可以将包含本文公开的式(I)-式(IV)的化合物的药物组合物给予至诊断为患有HCC或具有HCC易感性的受试者。
在一些实施方式中，正在接受HCC治疗(例如化学疗法)的受试者可以单独用本文公开的本发明的方法和组合物进行治疗，或者与本文公开的本发明的方法和组合物联用进行治疗。例如，本发明人先前已与其它科学家合作报道，抑制LSF可以增加HCC细胞对化学治疗剂(例如但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU))的敏感性(参见Yoo等，PNAS，2010；107；8357-8362)。因此，在一些实施方式中，可在化学疗法之前或与化学疗法一起，使用本发明的方法和组合物将本文所述的LSF小分子抑制剂给予至对当前的HCC治疗性治疗无反应的受试者(例如，已对如5-FU的化学治疗剂表现出化学耐药性的HCC受试者)。
肝细胞癌的检测可能是困难的，因为除了患有长期存在的肝病的患者外，大多数发战为这种肿瘤的患者无其它症状。腹部疼痛、体重减轻、早饱(early satiety)、黄疸和上腹部可触摸的肿块的发作通常预示着晚期癌症。因此，在一些实施方式中，可以向具有HCC高风险的受试者给予用于预防HCC发展(例如预防性治疗)的方法和组合物中的如本文所公开的LSF抑制剂。例如，高度易患HCC的受试者具有以下因素：HBV、HCV、长期饮酒、暴露于食物中的黄曲霉毒素B1(这是在将食物储存于湿热环境后由被称为黄曲霉的霉菌产生的肝致癌化学物质)、由于使用雌性激素(雌激素)和蛋白质合成(合成代谢)类固醇导致的肝腺瘤、暴露于钍造影剂(一种以前使用的用于成像的造影剂，导致被称为肝血管肉瘤的肝中的血管癌症)、肝血管肉瘤(由长期暴露于氯乙烯所导致，氯乙烯是在塑料工业中使用的一种化合物)、遗传性血色素沉着(导致身体积聚过量铁的紊乱)、肺气肿和肝硬化(由α1抗-胰蛋白酶缺乏所导致)和遗传性酪氨酸血症。
在另外的实施方式中，对于预防性治疗(例如，预防HCC再次发生)，可以选择在此之前被诊断出患有HCC并且HCC处于缓解的受试者来使用本发明的方法和组合物用本文公开的LSF抑制剂进行治疗。例如，通过肝切除和/或肝移植去除了HCC肿瘤的受试者或者通过其它治疗性方法使HCC肿瘤减轻或稳定的受试者适合于给予本文公开的LSF抑制剂或其药物组合物。
在其它实施方式中，适于用本发明的方法和组合物(例如使用本文公开的LSF抑制剂)进行治疗性治疗的受试者包括需要抑制LSF的受试者。例如，据报道，可以通过抑制LSF来治疗HIV患者或需要减少炎性反应或免疫功能的个体(Bovolenta等，163J.Immuno.6892，(1999)，美国专利申请号：US2009/0081183和国际申请号：WO1998/36641，以引用的方式将其整体并入本文)。因此，本文所公开的本发明的LSF抑制剂可以单独给予或与其它LSF抑制剂(如IL2，或针对LSF的肽、抗体或反义RNA)同时给予于期望抑制LSF的受试者(如HIV的受试者)。
在又一个实施方式中，可以选择患有其它癌症(例如乳腺癌)但与参比水平相比LSF表达上调的受试者，来使用本文公开的LSF抑制剂用本发明的方法和组合物进行治疗性治疗。在一些实施方式中，参比水平为在正常健康受试者中LSF的表达。在其它实施方式中，参比水平为在治疗方案的早前时间点所测量的同一受试者中LSF的表达。可以用于本发明目的的其它癌症适应症包括脑癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌和甲状腺癌。
本文所用的术语“药物组合物”是指与药学上可接受的载体(例如制药工业中常用的载体)组合的活性剂。短语“药学上可接受的”在本文中用于指如下化合物、材料、组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内，这些物质适合用于接触人和动物组织而无过度的毒性、刺激、过敏反应、或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
所述药物组合物中式(I)-式(V)的化合物的量可以基于重量、摩尔或体积。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少0.0001％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少0.1％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少0.5％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少1％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少2％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少3％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少4％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少5％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含至少10％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含0.01％-99％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含0.05％-90％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含0.1％-85％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含0.5％-80％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含1％-75％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含2％-70％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含3％-65％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含4％-60％的式(I)-式(V)的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含5％-50％的式(I)-式(V)的化合物。
还应当理解的是，用于治疗时，式(I)-式(V)的某些化合物可以以游离形式存在，或在适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。根据本发明，药学上可接受的衍生物包括但不限于，式(I)-式(V)的化合物的药学上可接受的盐、酯、此类酯的盐、或者前药、或者其它加合物或衍生物(当向有需要的患者给予时，其能够直接或间接地提供如本文其它部分所述的化合物、或者它们的代谢产物或残基)。
如上所述，本发明的药物组合物任选地包含药学上可接受的赋形剂，如本文所用，其包括适合于所需的特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂、或其它液体辅料、分散助剂或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、抗氧化剂、固体粘合剂、润滑剂等。
本文所用的术语“药学上可接受的载体”是指参与将主题化合物从身体的一个器官或部分携带或运输至身体的另一器官或部分的药学上可接受的材料、组合物或辅料，例如液态或固态填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(如润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌、或硬脂酸)、或溶剂包封材料。从与制剂的其它成分相容以及对患者无害的意义上来说，各载体必须是“可接受的”。一些可以作为药学上可接受的载体的材料的实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶(tragacanth)粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)润滑剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原(pyrogen-free)水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯，聚碳酸酯和/或聚酸酐；(22)填充剂，如多肽和氨基酸；(23)血清组分，如血清白蛋白、HDL和LDL；(24)C2-C12醇，如乙醇；以及(25)其它用于药学制剂中的无毒相容物质。润湿剂、着色剂、隔离剂(release agent)、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于制剂中。术语如“赋形剂”、“载体”、“药学上可接受的载体”等在本文中可互换使用。
用于制备本文的组合物的有用的药物载体可以是固体、液体或气体。合适的药物载体及其制剂在E.W.Martin的Remington’s Pharmaceutical Sciences中有所描述。在任何情况下，此类组合物均应包含有效量的式(I)-式(V)的化合物以及合适的载体，以制备适当给予至接受者的恰当剂型。
用于口服给药的液体剂型包括但不限于，药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂(elixirs)。除式(I)-式(V)的化合物外，液体剂型还可包含本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂；增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇脂肪酸酯，以及上述物质的混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂(adjuvants)，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和加香剂。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，将式(I)-式(V)的化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合，所述赋形剂或载体例如为柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质：a)填充剂或增量剂(extenders)，例如淀粉类、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，如例如羧甲基纤维素、海藻酸盐/酯、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂(humectant)，例如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐/酯和碳酸钠；e)溶液阻滞剂(solution retarding agents)，如石蜡；f)吸收加速剂，如季铵化合物；g)润湿剂，如例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，如高岭土和膨润土；以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，及以上物质的混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。
相似类型的固态组合物也可以在软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊(使用此类赋形剂，如乳糖或奶糖，以及高分子量聚乙二醇等)中用作填充剂。片剂、糖衣剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备为具有包衣和壳(如肠溶包衣和在药物制剂领域中公知的其它包衣)。所述固体剂型可任选地包含乳浊剂(opacifying agents)，并且也可以是仅在或优先在肠道的某一部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋(embedding)组分的实例包括聚合性物质和蜡。相似类型的固态组分也可以在软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊(使用此类赋形剂，如乳糖或奶糖，以及高分子量聚乙二醇等)中用作填充剂。
式(I)-式(V)的化合物也可与一种或多种的上述赋形剂处于微囊化(micro-encapsulated)形式。片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备为具有包衣和壳(如肠溶包衣、控释包衣和在药物制剂领域中公知的其它包衣)。在此类固体剂型中，式(I)-式(V)的化合物可与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖和淀粉)混合。在标准实践中，此类剂型还可包含除惰性稀释剂以外的其它物质，例如片剂制备润滑剂和其它片剂制备助剂(如硬脂酸镁和微晶纤维素)。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可包含缓冲剂。所述剂型可任选地含有乳浊剂，并且也可以是仅在或优先在肠道的某一部分任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组分的实例包括聚合性物质和蜡。
适于胃肠外给药的制剂方便地包括优选与接受者血液等渗的无菌水性制剂。合适的赋形剂溶液包括磷酸盐缓冲盐水、盐水、水、乳酸林格氏液或右旋葡萄糖(5％，处于水中)。可通过将试剂与水混合从而产生溶液或悬浮液，将其装入无菌容器中并密封防止细菌污染，从而方便地制备此类溶剂。优选地，在无菌制造条件下使用无菌材料，以避免需要最后无菌化。此类制剂可以任选地包含一种或多种其它成分，所述成分可包括防腐剂，如羟苯甲酯、氯甲酚、间甲酚、苯酚和苯扎氯铵。当制剂存在于多剂量容器中时，此类材料特别有用。
还可以含有缓冲剂，从而为制剂提供合适的pH值。合适的缓冲物质包括磷酸钠和醋酸盐。氯化钠或甘油可用于使制剂与血液等渗。
如果期望的话，可在非活性气氛(如氮气)下将制剂装入容器中，该制剂可方便地以单位剂量形式或多剂量形式存在，例如，在密封的安瓿中。
本领域技术人员将意识到，根据本发明的方法向受试者给予的本发明的组合物的各种成分的量将取决于上文所述的那些因素。
可根据已知的技术，使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制可注射的制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮剂。无菌可注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂、悬浮液或乳剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液剂。可接受的辅料和溶剂可采用水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，惯例采用无菌的不挥发性油(fixed oil)作为溶剂或悬浮介质。为这一目的，可采用任何无刺激性的(bland)不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸(如油酸)也可用于制备可注射制剂。
可注射制剂可以是无菌的，例如通过经由细菌滞留过滤器过滤，或通过在临用前加入处于无菌固体组合物形式的无菌剂(所述灭菌剂可溶于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中)。
为了延长药物的作用，通常期望能够减缓来自皮下注射或肌内注射的药物吸收。上述情况可以通过使用水溶性差的液态悬浮液、或结晶材料或无定形材料来实现。药物的吸收速率由此取决于其溶解速率，而其溶解速率又可取决于晶体大小和晶型。或者，通过将药物溶解或悬浮在油性辅料中来实现胃肠外给予的药物形式的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成药物的微囊基质来制备可注射的储库(depot)形式。根据药物与聚合物的比例以及所使用的特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也可以通过将药物封装(entrapping)在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备储库型可注射制剂。
用于直肠或阴道给药的组合物优选栓剂，栓剂可通过将式(I)-式(V)的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，并且所说栓剂在环境温度下为固体、而在体温下为液体，因此所述栓剂会在直肠或阴道腔中融化，并释放出活性化合物。
典型的栓剂制剂包含在以这一方式给药时有活性的化合物或其药学上可接受的盐，以及粘合剂和/或润滑剂，例如聚乙二醇、明胶、可可脂或其它低熔点植物蜡或脂肪。典型的透皮制剂包括常规的水性或非水性辅料，例如霜剂、软膏剂、洗剂或糊剂，或者处于含药的塑料、贴剂或膜的形式。
典型的吸入式组合物为溶液剂、悬浮剂或乳剂的形式，其可使用常规的推进剂(例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)以气雾剂(aerosol)的形式给药。
本发明的另一方面涉及用于治疗疾病或紊乱的药物组合物，其中，所述药物组合物对抑制LSF(例如肝细胞癌)有治疗上的益处。在一些实施方式中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的至少一种LSF抑制剂，所述LSF抑制剂选自本文公开的由式(I)-式(V)表示的任何化合物。在一个实施方式中，LSF抑制剂为式(I)的化合物。在一些实施方式中，LSF抑制剂为选自于由式(II)-式(IV)的化合物所组成的组中的化合物。在一些实施方式中，LSF抑制剂为化合物FQI-37。在一些实施方式中，LSF抑制剂为FQI-36、FQI-38、FQI-35、FQI-30、FQI-31、FQI-尿素、FQI-39、FQI-41、FQI-42、硫代-FQI-1、Tri-FQI-1。在多种实施方式中，LSF抑制剂为式(I)-式(V)中任一项的化合物的对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
如本文所公开的选自于式(I)-式(V)中任一项的LSF抑制剂可以以约0.001-10mg/kg体重、或约0.005-8mg/kg体重、或约0.01-6mg/kg体重、或约0.1-0.2mg/kg体重、或约1-2mg/kg体重的量使用。在一些实施方式中，LSF的抑制剂可以以约0.1-1000μg/kg体重，或约1-100μg/kg体重，或约10-50μg/kg体重的量使用。在一些实施方式中，如本文所公开的选自于式(I)-式(V)中任一项的LSF抑制剂可以以约0.001mg/ml或0.1mg/ml的浓度或0.1mg/ml的较高浓度使用。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为以约0.01μM至300μM，或约0.1μM至150μM，或约1μM至50μM，或约1μM至25μM的至少一种LSF抑制剂。根据所采用的剂型和所利用的给药途径，剂量可以在此范围内变化。在一些实施方式中，药物组合物不包含式(V)的LSF抑制剂。在一些实施方式中，药物组合物不包含以下文献中所述的LSF抑制剂：美国申请号15/713,956、美国专利号9,802,948、美国专利号9,815,845、美国专利号9,597,325和WO2012/050985，以引用的方式将其整体并入本文。
根据给药途径，本领域技术人员可以通过在动物模型(如小鼠)中确定LSF抑制剂的药代动力学和生物利用度，以及分析对LSF抑制剂具有特异性的剂量反应关系，来因此确定和调节对于受试者(例如人)而言的本文所公开的LSF抑制剂的有效剂量。
可在细胞培养或实验动物中通过标准药学程序测定毒性和疗效，例如，测定LD50(使50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体在治疗上有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比为治疗指数(therapeutic index)，可以用LD50/ED50的比值来表示。优选显示出高治疗指数的组合物。
从细胞培养测定和动物研究中获得的数据可用于制定用于人中的剂量范围。治疗有效剂量可以由本领域普通技术人员之一(例如使用细胞培养测定)来确定。LSF抑制剂的有效剂量可以通过以下方式在动物模型中来确定：通过测量与未治疗的相比，用LSF抑制剂进行的治疗过程中的肿瘤重量和肿瘤体积。在一些实施方式中，如果与对照(例如，在无LSF抑制剂的情况下)相比，包含LSF抑制剂的剂量将肿瘤重量和/或肿瘤体积的生长抑制或降低至少约15％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％、95％、99％或甚至100％，则认为该剂量是有效的。在一些实施方式中，给予受试者的LSF抑制剂的治疗有效量取决于普通技术人员已知的因素，包括：LSF抑制剂的生物活性和生物利用度(例如，LSF抑制剂在体内的半衰期和稳定性)，LSF抑制剂的化学性质(例如分子量、疏水性和溶解性)；给药途径和频率，给药时间(例如饭前或饭后)等。此外，将理解的是，用于提供治疗性或预防性益处的如本文所公开的包含LSF抑制剂的药物组合物的具体剂量可以取决于多种因素，包括：受试者的身体状况(例如年龄、性别、体重)、受试者的病史(例如正在服用的药物、其它疾病或紊乱)和受试者的临床状况(例如健康状况、疾病阶段)。包含LSF抑制剂的药物组合物的精确剂量可以通过熟练的技术人员(例如药理学家和医师)已知的方法来确定。
根据本发明，可在其它治疗方案或药剂(例如多种药物方案)之前、同时或相继地向受试者预防性或治疗性地以治疗有效量给予选自式(I)-式(V)中任一项的本文公开的LSF抑制剂。在一些实施方式中，与其它治疗剂同时给予的LSF抑制剂可以以相同或不同的组合物给予。
短语“外消旋混合物”是指一种化合物的两种对映异构体的混合物。理想的外消旋混合物是其中化合物的两种对映异构体为50:50的混合物，从而使得(+)对映异构体的旋光性抵消(-)对映异构体的旋光性。在一些实施方式中，如本文公开的用于治疗癌症(例如HCC)的药物组合物包含化合物FQI-37。在一些实施方式中，如本文公开的用于治疗癌症(例如HCC)的药物组合物包含化合物FQI-36、FQI-38、FQI-35、FQI-30、FQI-31、FQI-尿素、FQI-39、FQI-41、FQI-42、硫代-FQI-1、Tri-FQI-1，或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，包含至少一种LSF抑制剂的药物组合物还包含第二治疗剂。在一个实施方式中，第二治疗剂为化学治疗剂，例如索拉非尼或5-FU。在一些实施方式中，第二治疗剂为第二LSF抑制剂，例如选自式(I)-式(V)中任一项的化合物。在一些实施方式中，第二LSF抑制剂为本文公开的第一LSF抑制剂的对映异构体。在其它实施方式中，第二治疗剂为用于肝疾病(如HBV、HCV和肝硬化)的治疗剂。
在预防性应用中，包含LSF抑制剂的药物组合物(或药物)可以以足以消除或减少疾病风险或延迟疾病发作的量给予至对LSF水平升高介导的疾病或紊乱易感的受试者或者对处于有LSF水平升高介导的疾病或紊乱的风险中的受试者。在一个实施方式中，要预防的疾病或紊乱为肝细胞癌(HCC)。由于大多数HCC由乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)的背景产生，可以使具有HBV或HCV的受试者接受有效量或剂量的包含本文所述的LSF抑制剂的药物组合物。在一个实施方式中，本文公开的本发明的药物组合物包含式(I)-式(IV)的化合物或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。在一些实施方式中，可以将有效量或剂量的包含本文公开的LSF抑制剂的药物组合物给予处于HCC高风险的受试者。在另外的实施方式中，所述药物组合物还包含第二治疗剂，例如治疗高风险因素(如肝病，如HBV)的治疗剂。HCC的代表性高风险因素包括：肝硬化、长期饮酒、(长期)暴露于肝致癌化学物质(例如食物中的黄曲霉毒素B1、诊断造影剂中的钍造影剂和氯乙烯)、肝腺瘤、肝血管肉瘤、肝血管肉瘤、遗传性血色素沉着、由α1抗胰蛋白酶缺乏引起的气肿和肝硬化，以及遗传性酪氨酸血症。在多种实施方式中，已经中止针对HCC的高风险因素治疗的个体仍然可以接受包含有效剂量的选自如本文所公开的式(I)-式(IV)中任一项的化合物的药物组合物，以预防HCC的发展。对于此类实施方式，LSF抑制剂的有效剂量可以高于或低于先前剂量。
在治疗性应用中，根据本文提供的本发明，当将有效量或有效剂量的包含选自本发明的式(I)-式(IV)中任一项的LSF抑制剂的药物组合物给予患有癌症(例如肝细胞癌)的受试者时，癌症(例如HCC)进展可以被延迟或抑制。在一些实施方式中，向患有肝细胞癌的受试者给予有效量或有效剂量的包含选自式(I)-式(V)中任一项的LSF抑制剂的药物组合物可以抑制或延迟HCC的进展。在进一步的实施方式中，用有效剂量的包含LSF抑制剂的药物组合物治疗受试者可以预防或延迟受试者中HCC的转移。在一些实施方式中，用于使用本文公开的方法和组合物来治疗性治疗多种疾病(例如HCC)的LSF抑制剂为化合物FQI-37。在一些实施方式中，用于使用本文公开的方法和组合物来治疗性治疗多种疾病(例如HCC)的LSF抑制剂为化合物FQI-36、FQI-38、FQI-35、FQI-30、FQI-31、FQI-尿素、FQI-39、FQI-41、FQI-42、硫代-FQI-1、Tri-FQI-1，或其对映异构体、前药、衍生物或药学上可接受的盐。
在治疗性应用中，有时需要在相对短的间隔内使用相对高的剂量，直到疾病的进展减少或终止，或者直到受试者显示出疾病症状的部分或完全改善。此后，可以给受试者给予预防性方案。例如，患有HCC的受试者可以在治疗性方案中以有效剂量用本文公开的LSF抑制剂进行治疗，从而预防或延迟HCC的进展或转移。在其它实施方式中，可以使用本文公开的方法和组合物向化学疗法受试者给予LSF抑制剂，以增加对化学疗法的敏感性。在一些实施方式中，如本文所公开的LSF抑制剂可以在用化学治疗药物(例如索拉非尼)治疗之前、同时或相继给予至受试者。在进一步的实施方式中，可以对选择进行其它治疗性程序或外科手术(例如肝切除术、病灶内乙醇注射或化学栓塞)的HCC受试者进行本文所述的LSF抑制剂的治疗。例如，本发明的药物组合物可以在治疗性程序之前、期间或之后给药。给药途径可以随治疗性程序或外科手术而变化，并且可以由技术人员确定。在另一实施方式中，本发明的组合物和方法可以用作辅助疗法。
在一些实施方式中，所述受试者是人，在可选的实施方式中，所述受试者为非人哺乳动物。需要对治疗剂量进行调整以优化安全性和功效。LSF抑制剂的量取决于疾病(例如HCC)的阶段，以及是否还使用第二治疗剂。第二治疗剂可以是治疗不同疾病或紊乱的药剂。在一些实施方式中，第二治疗剂可以是化学治疗剂，例如阿霉素、5-FU、紫杉醇、伊立替康、Patupilone、依维莫司、多激酶抑制剂(索拉非尼和舒尼替尼)、和EGFR抑制剂(西妥昔单抗、厄洛替尼、吉非替尼、布里尼布、拉帕替尼)。在可选的实施方式中，第二治疗剂可以是第二LSF抑制剂。在一些实施方式中，第二LSF抑制剂可选自于由式(I)-式(IV)的化合物及其对映异构体、前药和药学上可接受的盐所组成的组。在一个实施方式中，第二LSF抑制剂可以是第一LSF抑制剂的对映异构体。在进一步的实施方式中，第二治疗剂是靶向另一疾病、另一紊乱或不同症状的另一治疗剂。与单独给予时LSF抑制剂的标准剂量相比，与其它治疗剂联用可以减少LSF抑制剂的剂量。
在一些实施方式中，根据癌症疾病(例如，癌症的阶段，HCC阶段)和/或给药模式，给药频率可以显著变化，从每天一次、隔天一次、每三天一次、每周一次，每月一次至每年一次。
通常，可以基于例如治疗结果(例如，HCC的进展速度是否减缓或终止，或者与HCC有关的症状中的至少一种是否减少)来调整有效剂量和给药方案。根据本文提供的教导，治疗的有效性可以通过以下方式来监测：从受试者获得生物样品(例如血清样品)，并使用本领域熟知的方法和诊断方法测定该血清样品中HCC的生物标志物(例如AFP)的水平。还可以通过本领域技术人员已知的成像方式(例如CT扫描、MRI、超声等)来监测治疗的效果。
在一些实施方式中，可以以有效获得期望结果的单剂量、分剂量或缓释形式考虑将给予受试者的包含LSF抑制剂的大剂量组合物形式的日剂量。可以以等于、小于或大于给予个体的初始剂量或先前剂量的剂量进行第二给药或后续给药。可以在疾病发作期间或之前进行第二给药或后续给药。以低于达到期望治疗效果所需的水平开始服药并逐渐增加剂量直至获得所需效果也在本领域技术范围内。
在多种实施方式中，选自式(I)-式(IV)中任一个的LSF抑制剂可以为被第二药剂激活的前药。因此，在此类实施方式中，这样的将前药活化成其活性形式的第二药剂的给药可以在包含如本文公开的LSF抑制剂的药物组合物给药的同时、一起、或之前、或之后进行给药。
在一些实施方式中，如本文公开的选自式(I)-式(IV)中的任一个的LSF抑制剂通常作为含活性治疗剂(即LSF抑制剂)和多种其它药学上可接受的组分的药物组合物给药。参见Remington的Pharmaceutical Science(15th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1980)。组合物的配制取决于预期的给药模式和治疗性应用。根据所期望的制剂，所述组合物还可包含一种或多种药学上可接受的、无毒的载体或稀释剂，所述载体或稀释剂被定义为通常用于配制用于动物或人给药的药物组合物的辅料。对稀释剂进行选择，以便不影响组合的生物活性。这样的稀释剂的实例是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液、右旋葡萄糖溶液和Hank氏溶液。此外，所述药物组合物或制剂还可包含其它载体、佐剂或非治疗性且非免疫原性的无毒稳定剂等。然而，一些适于给予动物的试剂可能不一定用于人用的组合物。
本文公开的各个方面的示例性实施方式如下：
实施方式1：式(I)的化合物：
Figure BDA0002997103560000671
其中：R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；每个RA和RB独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；n为2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
实施方式2：式(II)的化合物：
Figure BDA0002997103560000681
其中：R1、R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；每个RA和RB独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
实施方式3：如实施方式2所述的化合物，其中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式4：如实施方式1-3中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式5：如实施方式1-4中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式6：如实施方式1-5中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的芳基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式7：如实施方式1-6中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基。
实施方式8：如实施方式1-3中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的苯基卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式9：如实施方式1-4中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式10：如实施方式1-5中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式11：如实施方式1-6中任一项所述的化合物，其中，R1为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的苯基。
实施方式12：如实施方式1-3中任一项所述的化合物，其中，R1为被OR3A取代的芳基。
实施方式13：如实施方式11所述的化合物，其中，R1为被OR3A取代的苯基。
实施方式14：如实施方式12所述的化合物，其中，R1为被C1-C6烷氧基取代的苯基。
实施方式15：如实施方式1所述的化合物，其中，R1选自于由
Figure BDA0002997103560000701
所组成的组，其中，R8为C1-C6烷基或C1-C8环烷基；R9和R10独立地为H或C1-C6烷基；R11为卤素或C1-C6卤代烷基。
实施方式16：根据实施方式14所述的化合物，其中，R1为
Figure BDA0002997103560000702
Figure BDA0002997103560000703
实施方式17：如实施方式16所述的化合物，其中，R1为
Figure BDA0002997103560000711
Figure BDA0002997103560000712
实施方式18：如实施方式1-17中任一项所述的化合物，其中，R2、R3和R4独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。
实施方式19：如实施方式1-18中任一项所述的化合物，其中，R2、R3和R4独立地选自于由H或卤素所组成的组。
实施方式20：如实施方式1-19中任一项所述的化合物，其中，R2、R3和R4为H。
实施方式21：如实施方式1-20中任一项所述的化合物，其中，R5为氢或C1-C6烷基。
实施方式22：如实施方式1-21中任一项所述的化合物，其中，R5为H。
实施方式23：如实施方式1-22中任一项所述的化合物，其中，R6和R7独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基所组成的组。
实施方式24：如实施方式1-23中任一项所述的化合物，其中，R6和R7为H。
实施方式25：如实施方式1-24中任一项所述的化合物，其中，R3A为氢、C1-C6烷基、环烷基或杂环基，其中，所述烷基、环烷基和杂环基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。
实施方式26：如实施方式1-25中任一项所述的化合物，其中，R3A为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
实施方式27：如实施方式1-26中任一项所述的化合物，其中，每个RA和RB独立地为H、Br、Cl、F或I。
实施方式28：如实施方式1-27中任一项所述的化合物，其中，n为2。
实施方式29：如实施方式2所述的化合物，其中，所述化合物为(FQI-36)或(FQI-38)。
实施方式30：如实施方式1所述的化合物，其中，所述化合物为(FQI-35)或(FQI-37)。
实施方式31：式(III)的化合物：
Figure BDA0002997103560000721
其中：Z为NR15或CR16R17；R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；R18为O、S或NR19A；R19为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；或者，R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；每个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；n为1、2、3或4，或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐，条件是：(i)当R18为O时，则n不为1或Z为NR15；或(ii)当Z为CR16R17且R18为O时，则R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基，或R13为被OR3A取代的芳基，其中，R3A为环基。
实施方式32：式(IV)的化合物：
Figure BDA0002997103560000731
其中：Z为NR15或CR16R17；R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者，R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；R18为NQ1Q2，其中，Q1和Q2独立地选自于由任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基、烷基、烯基、炔基、环烷基或氢所组成的组，或者Q1和Q2与它们所连接的氮一起可形成杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；每个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
实施方式33：如实施方式31或32所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式34：如实施方式31-33中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
实施方式35：如实施方式31-34中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个如下基团取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式36：如实施方式31-35中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个以下基团取代的芳基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式37：如实施方式31-36中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式38：如实施方式31-34中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A取代并且任选地进一步被以下取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式39：如实施方式31-35中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个以下基团取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式40：如实施方式31-36中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个如下基团取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式41：如实施方式31-37中任一项所述的化合物，其中，R13为被至少一个OR3A以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的苯基，其中，R3A为C1-C6烷基或C1-C9环烷基。
实施方式42：如实施方式31-34中任一项所述的化合物，其中，R13为被OR3A取代的芳基。
实施方式43：如实施方式41所述的化合物，其中，R13为被OR3A取代的苯基。
实施方式44：如实施方式42所述的化合物，其中，R13为被C1-C6烷氧基或C1-C9环烷基取代的苯基。
实施方式45：如实施方式31所述的化合物，其中，R13选自于由
Figure BDA0002997103560000751
所组成的组，其中，R8为C1-C6烷基或C1-C9环烷基；R9和R10独立地为H或C1-C6烷基；R11为卤素或C1-C6卤代烷基。
实施方式46：如实施方式44所述的化合物，其中，R13为
Figure BDA0002997103560000752
Figure BDA0002997103560000753
实施方式47：如实施方式31-46中任一项所述的化合物，其中，R14、R15、R16和R17独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。
实施方式48：如实施方式31-47中任一项所述的化合物，其中，R14、R15、R16和R17独立地选自于由H或卤素所组成的组。
实施方式49：如实施方式31-46中任一项所述的化合物，其中，R14为H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基或C1-C6烷氧基；R15为C1-C6烷基。
实施方式50：如实施方式31-49中任一项所述的化合物，其中，R19为氢或C1-C6烷基。
实施方式51：如实施方式31-50中任一项所述的化合物，其中，R19为H。
实施方式52：如实施方式31-51中任一项所述的化合物，其中，R20和R21独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基所组成的组。
实施方式53：如实施方式31-52中任一项所述的化合物，其中，R20和R21独立地为H或卤素。
实施方式54：如实施方式31-53中任一项所述的化合物，其中，R20和R21为H。
实施方式55：如实施方式31-54中任一项所述的化合物，其中，R3A为氢、C1-C6烷基、环烷基或杂环基，其中，所述烷基、环烷基和杂环基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代。
实施方式56：如实施方式31-55中任一项所述的化合物，其中，R3A为C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
实施方式57：如实施方式31-56中任一项所述的化合物，其中，每个R22和R23独立地为H、Br、Cl、F或I。
实施方式58：如实施方式31-57中任一项所述的化合物，其中，n为1或2。
实施方式59：如实施方式32所述的化合物，其中，所述化合物为(FQI-30)或(FQI-31)。
实施方式60：如实施方式31所述的化合物，其中，所述化合物为(FQI-尿素)、(FQI-39)、(FQI-41)、(FQI-42)、(硫代-FQI-1)或(Tri-FQI-1)。
实施方式61：一种用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的如实施方式1-60中任一项所述的化合物。
实施方式62：如实施方式61所述的方法，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、造血系统的癌、子宫内膜的癌、宫颈癌、上消化道的癌、胃癌、肝癌和小肠的癌所组成的组。
实施方式63：如实施方式62所述的方法，其中，所述癌症是肝细胞癌(HCC)。
实施方式64：一种抑制细胞中的微管蛋白甲基化的方法，所述方法包括向所述细胞给予有效量的晚期SV40因子(LSF)抑制剂。
实施方式65：一种调节细胞中的染色质或细胞骨架修饰的方法，所述方法包括向所述细胞给予有效量的晚期SV40因子抑制剂。
实施方式66：如实施方式61-65中任一项所述的方法，其中，所述晚期SV40因子抑制剂为如实施方式1-60中任一项所述的化合物。
实施方式67：如实施方式64或65所述的方法，其中，LSF的抑制剂为式(V)的化合物：
Figure BDA0002997103560000771
其中：R24为被至少一个C1-C6烷氧基和任选的二(C1-C24烷基)氨基、卤素或C2-C8烯基取代的芳基，其中，所述取代的芳基可进一步任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基、二(C1-C24烷基)氨基或其组合取代；R25和R26为氢，或者R25和R26一起在它们所连接的碳之间形成第二键；R27为氢；R28选自于由氢和C1-C6烷基所组成的组；R29和R30各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组；R31和R32各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组；或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
实施方式68：如实施方式67所述的方法，其中，式(V)的化合物选自于由(FQI-1)、(FQI-34)、(FQI-Br)、(FQI-Cl)和(FQI-F)所组成的组。
为了方便起见，此处收集了在申请文件、实施例和所附权利要求中的本文所用的若干术语。除非另有说明或在上下文中有所暗示，下述术语和短语包括下文提供的含义。除非另有明确说明或从上下文中明显看出，下述术语和短语不排除该术语或短语在其所属领域中已具有的含义。提供这些定义以辅助描述具体实施方式，而由于本发明的范围仅受权利要求所限，因此并不意味着限制所请求保护的发明。除非另有定义，本文所用的所有技术术语和科学术语具有与该发明所属技术领域中的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。
定义
为了命名的目的，下述提供诸如“烷基”的结构定义。它们不排除本发明所属技术领域中获得的含义。本文所用的术语“烷基”是指直链、支链或环状的饱和烃基基团，含有1至约24个碳原子，优选1至约12个碳原子，更优选1至约6个碳原子，或低级烷基(尽管不一定如此)，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等，以及环烷基基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。术语“环烷基”是指环状烷基基团，通常具有3至10个、优选3至8个碳原子。术语“取代的烷基”是指被一个或多个取代基取代的烷基，术语“杂烷基”和“含杂原子的烷基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替代的烷基。本文所用的术语“卤代烷基”是指具有氟、氯、溴或碘中的至少一个取代基或其组合的烷基结构。如果没有另外说明，术语“烷基”分别包括直链、支链、环状、未取代的、取代的和/或含杂原子的烷基。
本文所用的术语“烯基”是指具有至少一个双键的2至约16个碳原子的直链、支链或环状烃基基团，例如乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、正戊烯基、异戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、癸烯基、十四碳烯基、十六碳烯基、二十碳烯基、二十四烯基(tetracosenyl)等。本文中优选的烯基含有2至约8个碳原子。术语“取代的烯基”是指被一个或多个取代基取代的烯基，术语“含杂原子的烯基”和“杂烯基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替代的烯基。如果没有另外说明，术语“烯基”分别包括直链、支链、环状、未取代的、取代的和/或含杂原子的烯基。
本文所用的术语“炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键并且具有2至约8个碳原子的直链或支链烃基基团。炔基基团的实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等。
本文所用的术语“烷氧基”是指通过单个末端醚键键合的烷基；也就是说，“烷氧基”可表示为-O-烷基，其中，烷基如本文所定义。示例性的烷氧基包括但不限于O-甲基、O-乙基、O-正丙基、O-异丙基、O-正丁基、O-异丁基、O-仲丁基、O-叔丁基、O-戊基、O-己基、O-环丙基、O-环丁基、O-环戊基、O-环己基等。
除非另有指明，本文所用的术语“芳基”是指包含单个芳环或稠合在一起、直接连接或间接连接(使得不同的芳环键合到共同的基团上，例如亚甲基或亚乙基部分)的多个芳环的芳族取代基。优选的芳基基团含有5至24个碳原子，特别优选的芳基基团含有5至14个碳原子。示例性芳基基团包含一个芳环或者两个稠合或连接的芳环，例如苯基、1-萘基、2-萘基、联苯基、吡啶、喹啉、呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、二苯醚、二苯胺、二苯甲酮等。“取代的芳基”是指被一个或多个(例如，一个、两个、三个、四个或更多个)取代基取代的芳基部分，术语“含杂原子的芳基”和“杂芳基”是指其中至少一个碳原子被杂原子(如氧、氮和硫)替代的芳基取代基。术语“杂芳基”包括环系统，例如吡啶、喹啉、呋喃、噻吩、吡咯、咪唑和吡唑等。
本文所用的术语“杂环基”是指其中的至少一个碳原子被杂原子(如氧、氮和硫)替代的单个环或者稠合在一起、直接连接或间接连接(使得不同的环键合到共同基团上，如亚甲基或亚乙基部分)的多个环。优选的杂环基基团含有3至24个碳原子，特别优选的杂环基基团含有3至14个碳原子。例如，杂环基可为至少一个碳被氧或氮替代的五元环。
术语“环状”和“环”是指可为取代或可为不被取代的和/或可含有杂原子或可不含杂原子，并且可以是单环、双环或多环的脂环族或芳族基团。在常规意义上，术语“脂环族”是指与芳族环状部分相对而言的脂族环状部分，并且可以是单环、双环或多环的。在一个实施方式中，双环或多环可以是稠环。环的稠合可以是跨越两个原子之间的键，即两个环共享一个键或两个原子，例如十氢化萘；环的稠合可以是跨越一系列的原子，即两个环共享三个或更多个原子，例如降冰片烷。
如本文所述的一些定义中所提及的，如“取代的烷基”、“取代的芳基”等中的“取代的”是指在烷基、芳基或其它部分中，与碳(或其它)原子键合的至少一个氢原子被一个或多个非氢取代基替代。此类取代基的实例不受限地包括：卤素、C1-C24烷氧基、C2-C24烯氧基、C2-C24炔氧基、C5-C24芳氧基、C6-C24芳基烷氧基、C6-C24烷基芳氧基、酰基(包括C2-C24烷基羰基(-CO-烷基)和C6-C24芳基羰基(-CO-芳基))、酰氧基(-O-酰基，包括C2-C24烷基羰基氧基(-O-CO-烷基)和C6-C24芳基羰基氧基(-O-CO-芳基))、C2-C24烷氧羰基(-(CO)-O-烷基)、C6-C24芳氧羰基(-(CO)-O-芳基)、卤代羰基((-CO)-X，其中X为卤素)、C2-C24烷基碳酸基(C2-C24alkylcarbonato，-O-(CO)-O-烷基)、C6-C24芳基碳酸基(-O-(CO)-O-芳基)、羧基(-COOH)、羧酸基(-COO-)、氨基甲酰基(-(CO)-NH2)、单-(C1-C24烷基)取代的氨基甲酰基(-(CO)-NH(C1-C24烷基))、二-(C1-C24烷基)取代的氨基甲酰基(-(CO)-N(C1-C24烷基)2)、单-(C5-C24芳基)取代的氨基甲酰基(-(CO)-NH-芳基)、二-(C5-C24芳基)取代的氨基甲酰基(-(CO)-N(C5-C24芳基)2)、二-N-(C1-C24烷基)、N-(C5-C24芳基)取代的氨基甲酰基、硫代氨基甲酰基(-(CS)-NH2)、单-(C1-C24烷基)取代的硫代氨基甲酰基(-(CO)-NH(C1-C24烷基))、二-(C1-C24烷基)取代的硫代氨基甲酰基(-(CO)-N(C1-C24烷基)2)、单-(C5-C24芳基)取代的硫代氨基甲酰基(-(CO)-NH-芳基)、二-(C5-C24芳基)取代的硫代氨基甲酰基(-(CO)-N(C5-C24芳基)2)、二-N-(C1-C24烷基)、N-(C5-C24芳基)取代的硫代氨基甲酰基、脲基(carbamido，-NH-(CO)-NH2)、氰基(-C≡N)、氰氧基(cyanato，-O-C≡N)、氰硫基(-S-C≡N)、甲酰基(-(CO)-H)、硫代甲酰基(-(CS)-H)、氨基(-NH2)、单-(C1-C24烷基)取代的氨基、二-(C1-C24烷基)取代的氨基、单-(C5-C24芳基)取代的氨基、二-(C5-C24芳基)取代的氨基、C2-C24烷基酰胺基(-NH-(CO)-烷基)、C6-C24芳基酰胺基(-NH-(CO)-芳基)、亚氨基(-CR＝NH，其中R＝氢、C1-C24烷基、C5-C24芳基、C6-C24烷芳基、C6-C24芳烷基等)、C2-C20烷基亚氨基(-CR＝N(烷基)，其中R＝氢、C1-C24烷基、C5-C24芳基、C6-C24烷芳基、C6-C24芳烷基等)、芳基氨基(-CR＝N(芳基)，其中R＝氢、C1-C20烷基、C5-C24芳基、C6-C24烷芳基、C6-C24芳烷基等)、硝基(-NO2)、亚硝基(-NO)、磺酸基(-SO2-OH)、磺酸根基团(sulfonato，-SO2-O-)、C1-C24烷基硫烷基(-S-烷基；也称为“烷硫基(alkylthio)”)、C5-C24芳基硫烷基(C5-C24arylsulfanyl，-S-芳基；也称为“芳硫基(arylthio)”)、C1-C24烷基亚磺酰基(-(SO)-烷基)、C5-C24芳基亚磺酰基(-(SO)-芳基)、C1-C24烷基磺酰基(-SO2-烷基)、C5-C24芳基磺酰基(-SO2-芳基)、硼基(-BH2)、硼酸基(-B(OH)2)、硼酸酯基团(boronato，-B(OR)2，其中R是烷基或其它烃基)、膦酸基(phosphono，-P(O)(OH)2)、膦酸根基(phosphonato，-P(O)(O-)2)、次膦酸根基团(phosphinato，-P(O)(O-))、二氧化膦基(phospho，-PO2)、膦基(phosphino，-PH2)；以及烃基部分C1-C24烷基(优选C1-C12烷基，更优选C1-C6烷基)、C2-C24烯基(优选C2-C12烯基，更优选C2-C6烯基)、C2-C24炔基(优选C2-C12炔基，更优选C2-C6炔基)，和C5-C24芳基(优选C5-C14芳基)。在优选的实施方式中，本文所用的取代基是卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6烷氧基、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
另外，如果具体基团允许，本文所述的官能团可以进一步被一个或多个另外的官能团或者被一个或多个烃基部分(例如本文具体列举的那些)取代。类似地，本文所述的烃基部分可以进一步被一个或多个官能团或另外的烃基部分(如具体列举的那些)取代。
本文中可互换使用的术语“紊乱”或“疾病”是指中断或干扰功能执行和/或引起折磨人或与人有关联的症状(例如不适(discomfort)、功能紊乱、痛苦(distress)、或甚至死亡)的身体状态或一些器官的状态的任何改变。疾病或紊乱也可涉及精神不佳(distemper)、小病(ailing)、微恙(ailment)、疾患(malady)、紊乱、患病(sickness)、病态(illness)、身体不适(complaint)、轻病(indisposition)、感染(affection)。在一个实施方式中，所述病症或紊乱是癌症。在一个实施方式中，该疾病或紊乱是肝癌，例如肝细胞癌。在一个实施方式中，所述疾病或紊乱是选自于由以下所组成的组的癌症：结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、子宫内膜癌、胰腺癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、白血病、大肠癌、肺癌、小细胞肺癌(SSLC)、胃癌和其它癌症。
术语“癌症”和“恶性肿瘤(malignancy)”在本文中可互换使用，是指特征为细胞不受控制地异常生长的疾病。癌细胞可局部扩散，也可通过血流和淋巴系统扩散到身体的其它部位。该术语还旨在包括哺乳动物器官或组织的任何如下疾病：该疾病特征为该组织中的正常或异常细胞扩增控制不良或不受控制及其对整个身体的影响。该定义范围内的癌症疾病包括良性肿瘤、发育异常(dysplasias)、增生以及显示出转移生长或任何其它转化的肿瘤(例如，就像往往出现在癌症爆发前的粘膜白斑(leukoplakias))。术语癌症还包括转移瘤，所述转移瘤是已经迁移至受试者的其它部位，在该位置建立新的肿瘤的癌细胞(如原发性肿瘤或转移性肿瘤)。如本文所公开的、“抑制”癌症转移的小分子LSF抑制剂可使得继发性肿瘤的延迟出现、减缓原发性或继发性肿瘤的发展、减少继发性肿瘤的发生、减缓或降低疾病的继发效应的严重性、肿瘤生长停滞和肿瘤消退等。在极端情况下，在本文中将完全抑制称为预防(例如，几乎完全抑制、如果没有发生则没有转移、如果癌症已经转移则没有进一步转移、或者由转移细胞通过肿瘤的再种而引起的原发性肿瘤的生长几乎完全抑制)。
“癌细胞”是指体内、离体和在组织培养物中的癌性细胞、癌前细胞(pre-cancerous cell)或转化细胞，其具有不一定涉及摄取新遗传物质的自发或诱导的表型变化。尽管转化可以源自转化病毒的感染和新的基因组核酸的整合、或外源核酸的摄取，但是其也可以自发地发生或在暴露至致癌物质(carcinogen)后发生，从而使内源基因突变。转化/癌症在体内、体外和离体情况与以下有关：例如形态学改变、细胞永生化、异常生长控制、病灶形成、贴壁依赖性、增殖、恶性肿瘤、丧失接触抑制和生长密度限制、缺乏生长因子或血清依赖性、肿瘤特异性标志物水平、侵袭性、在合适的动物宿主(例如裸鼠)中的肿瘤生长等(另请参阅Freshney，Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique(3rded.1994))。
如本文所用，“致瘤性细胞(tumorigenic cell)”是当被引入受试者的合适部位时可形成肿瘤的细胞。所述细胞可以是非转移性的或转移性的。多种类型的致瘤性和/或转移性细胞可用于本发明的方法，包括来自以下的细胞：转移性上皮癌、癌(carcinomas)、黑素瘤、白血病等。肿瘤细胞可例如来自乳腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌、肝癌、胃肠道、子宫内膜癌、气管支气管癌、胰腺癌、子宫癌、卵巢癌、鼻咽癌、前列腺癌、骨癌或骨髓癌、脑癌、皮肤癌或其它合适的组织或器官的癌症。在优选的实施方式中，癌细胞是人类来源的。
术语“肿瘤”或“肿瘤细胞”在本文中可互换使用，是指细胞正在经历异常增殖的组织块或组织类型。
如本文所用，“转移性”细胞是指具有转移潜能的细胞，并且在用于本发明的方法中时，能够播种感兴趣的肿瘤或细胞集落。如本文所用，“高度转移性”细胞是指具有高的转移潜能的细胞；例如来自以下细胞系的细胞可被认为是高转移性细胞：例如但不限于，LM2、MDA-MB-231、PC-3、DU-145、Lewis肺癌。转移性细胞可以以多种方式产生，将在下面进行进一步讨论。
“肉瘤(sarcoma)”是指衍生自结缔组织的癌细胞类型，例如，骨(骨肉瘤)、软骨(软骨肉瘤)、肌肉(横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma或rhabdosarcoma))、脂肪细胞(脂肪肉瘤)、淋巴组织(淋巴肉瘤)、产生胶原的成纤维细胞(纤维肉瘤)。肉瘤可由某些病毒感染而诱发，例如卡波西氏肉瘤病毒、Rous肉瘤病毒等。
术语“组织”旨在包括完整细胞、血液、血液制品(例如血浆和血清)、骨、关节、肌肉、平滑肌以及器官。
术语“受试者”包括接受预防性处理或治疗性处理的人和其它哺乳动物受试者。因此，术语“受试者”是指可以给予本发明的化合物和/或药物组合物的任何有机物。该术语包括但不限于：人；非人灵长类动物，例如黑猩猩和其它猿类和猴类；农场动物(farmanimal)，如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养动物，如狗和猫；实验动物，包括啮齿类动物，如小鼠、大鼠和豚鼠等。所述术语并不表示特定的年龄或性别。因此，旨在涵盖无论是雌性还是雄性的成年受试者和初生受试者。术语“受试者”还旨在包括如通常在本说明书中所公开的易受条件或疾病状态影响的活生物体，但不限于此。受试者的实例包括人、狗、猫、牛、山羊和小鼠。术语受试者进一步旨在包括转基因种类。术语“受试者”和“个体”在本文中可互换使用，并且是指使用本发明所述的化合物和组合物向其提供治疗(包括预防性治疗)的动物，例如人或非人哺乳动物/动物。术语“非人动物”和“非人哺乳动物”在本文中可互换使用，并且包括所有脊椎动物，例如哺乳动物，如非人灵长类动物(特别是高等灵长类动物)、绵羊、狗、啮齿类动物(如小鼠或大鼠)、豚鼠、山羊、猪、猫、兔、牛；以及非哺乳动物，如鸡、两栖类、爬行动物等。在一个实施方式中，所述受试者为人。在另一实施方式中，所述受试者为作为疾病模型的动物替代品或实验动物。
如本文中可互换使用的术语“参比样品”或“参比水平”是指条件的阴性对照。例如，在治疗的情况下，参比水平是未经治疗的受试者的水平。在一些实施方式中，在诊断的情况下的参比水平是正常健康受试者中存在的水平。术语“正常健康受试者”是指没有疾病或紊乱的任何症状的受试者，或者未被鉴别为患有任何疾病或紊乱的受试者，或者未进行任何药物治疗的受试者，或者根据医学检查由医师鉴别为健康的受试者。在一些实施方式中，本文使用的参比水平或参比样品是指接受治疗的受试者在早前的时间点所测量的水平。
术语“组织”旨在包括完整的细胞、血液、血液制品(如血浆和血清)、骨、关节、肌肉、平滑肌和器官。在一个实施方式中，所述组织为肝组织。
就疾病或紊乱的治疗而言，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”可互换使用，是指预防疾病的发展，或改变疾病的进程(例如，但不限于减缓疾病的进展)，或逆转疾病的症状，或降低受试者的一种或多种症状和/或一种或多种生化标志物，防止一种或多种症状恶化或进展，促进恢复或改善有疾病风险的受试者的预后，以及减缓或减少现有疾病的进展。术语治疗涵盖减少或缓解与不适当的增殖有关的病症、疾病或紊乱(例如癌症)的至少一种不良影响或症状。如本文针对癌症所使用的，术语治疗用于指减少不适当增殖的症状和/或生化标志物，例如使癌症的至少一种生化标志物减少至少10％。例如但不限于，癌症的生物化学标志物减少或癌细胞增殖速率降低10％使得认为通过本文公开的方法得到有效治疗，例如，仅作为说明性示例，使以下生物标志物中的至少一种减少10％：CD44、端粒酶、TGF-、TGF-、erbB-2、erbB-3、MUC1、MUC2、CK20、PSA、CA125、FOBT、骨桥蛋白(OPN)、甲胎蛋白(AFP)。作为替代实例，癌症症状减少也使得认为通过本文公开的方法得到有效治疗，例如，癌症的生长速度减缓10％或肿瘤大小的增大得以停止，或肿瘤大小减少10％，或肿瘤扩散(即肿瘤转移)减少10％。在其它实施方式中，就消除或减少病症或疾病的至少一种症状而言，治疗可以是治疗性的。例如，在HCC的情况下，治疗性治疗指的是在已经患有HCC的受试者中抑制或延迟HCC的进展。可测量的减轻包括可测量的标志物或症状(例如测量肿瘤大小或生物标志物水平)的任何统计学显著下降。
本文所用的术语“治疗”包括预防与不适当的增殖有关的病症、疾病或紊乱(例如癌症)的进展，和/或减少或逆转与不适当的增殖有关的病症、疾病或紊乱(例如癌症)的至少一种不良影响或症状。因此，在一些实施方式中，就完全或部分预防疾病或者癌症的体征或症状而言，治疗可以是预防性的。例如，可以对癌症(如HCC)高风险的受试者(如HBV或HCV)进行预防性治疗，以防止HCC的发病。在一些实施方式中，预防性治疗可以给予接受过疾病的早前治疗以及疾病缓解的受试者。例如，对于经由早前疗法已经将其HCC肿瘤移除或稳定的受试者，可以进行预防性治疗(例如，使用本文所述的LSF抑制剂)，以防止HCC的复发和转移。
本文所使用的术语“预防(prevent、preventing、prevention)”是指避免或延迟疾病或紊乱中的一种或多种症状或可测量标志物的表现。在症状或标志物的表现中的延迟是相对于在具有疾病或紊乱发展的相似可能性或易感性的未接受治疗的受试者或对照中，此类症状或标志物出现时间的延迟。术语“预防(prevent、preventing、prevention)”不仅包括完全避免或预防症状或标志物，还包括相对于在具有疾病或疾患发展的相似可能性或易感性的未接受治疗的受试者或对照或中产生的症状或标志物，或相对于基于受疾病或紊乱影响的人群中的历史或统计测量而可能产生的症状或标志物，降低所述症状或标志物的任一种的严重性或程度。“降低严重性”是指相对于对照或参比，症状或可测量的疾病标志物的严重性或程度降低至少10％，例如至少15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或甚至100％(即，没有任何症状或可测量的标志物)。
术语“上调”、“增加”或“激活”在本文中通常用来指统计学上显著量的增加；为避免任何疑问，术语“上调”、“增加”或“升高”是指相对于参比水平增加至少10％，例如增加至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或100％的增加或更多，或者相比参比水平以10-100％之间任意水平增加，或者增加大于100％，例如，增加至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍或至少约10倍的增加，或者相比参比水平，以2倍至10倍之间或更多的任何水平增加。当“增加”用于基因或蛋白的表达或活性的上下文中时，它是指在细胞、细胞提取物或细胞上清液中的蛋白或核酸水平或活性的正向变化。例如，这种增加可能是由于增加的RNA稳定性、转录或翻译，或者降低的蛋白降解。优选地，这种增加是超过对照条件下表达或活性水平的至少5％、至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约80％、至少约100％、至少约200％、或甚至约500％或更多。
术语“降低(lower)”、“减少(reduced)”、“减少(reduction)”或“下降(decrease)”、“下调(down-regulate)”或“抑制”在本文中通常指统计学显著量的下降。然而，为避免疑问，“降低(lower)”、“减少(reduced)”、“减少(reduction)”或“下降(decrease)”或“抑制”是指与参比水平相比下降至少10％，例如下降至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或直至并包含100％下降(即，与参比样品相比不存在的水平)，或者与参比水平相比以10-100％之间任意水平下降。当“下降”或“抑制”用于基因或蛋白(例如LSF或LSF靶基因)的表达或活性水平的上下文中时，它是指在细胞、细胞提取物或细胞上清液中蛋白或核酸水平或活性的减少。例如，此类降低可能是由于减少的RNA稳定性、转录或翻译，增加的蛋白降解或RNA干扰。在一些实施方式中，本文所公开的小分子LSF抑制剂降低了LSF的活性或表达。在对照条件下，表达或活性的水平优选降低至少约5％、至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约80％、或甚至至少约90％。本文所使用的关于LSF的术语“水平”是指LSF的表达或活性。
术语“显著不同于”、“统计学上显著”和类似短语是指数据或其它度量之间的比较，其中两个比较的个体或组之间的差异对受过训练的观察者而言明显或相当地不同，或者在统计学上显著(如果该短语包括术语“统计学上”；或者如果存在一些统计检验的指示，例如p值；或者如果数据在分析时通过本领域已知的标准统计检验出现统计学差异)。
“药物组合物”是指适合给予哺乳动物受试者的化学或生物组合物。可以将这样的组合物特别地配制为用于经由多种途径中的一种或多种进行给药，所述途径包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、动脉内、皮下、鼻内、舌下、脊柱内、脑室内等。
本文所使用的术语“有效量”是指至少一种药剂或药物组合物以减少或终止异常增殖的至少一种症状(例如，癌症或恶性肿瘤的症状)的量。例如，使用如本文所公开的方法的有效量可以认为是足以将异常增殖的症状(例如癌症或恶性肿瘤的至少一种症状)减少至少10％的量。本文所使用的有效量还可以包括足以预防或延迟疾病症状的发展、改变疾病症状的过程(例如但不限于，减缓疾病症状的进展)或逆转疾病症状的量。因此，本文所使用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指药物组合物的治疗剂(例如，本文中所公开的式(I)至式(V)的小分子LSF抑制剂中的至少一种)减轻癌症(如HCC)的至少一些症状的量。在一些实施方式中，可使用式(I)至式(IV)的小分子抑制剂。换句话说，本文所公开的小分子LSF抑制剂的“治疗有效量”是对例如癌症(如HCC)发挥有益效果的LSF抑制剂的量。有益效果包括抑制或延迟癌症(如HCC)的进展。作为单剂量或多剂量，对个体给药的剂量将根据多种因素而变化，所述因素包括LSF抑制剂的药动学性质、给药途径、受试者的身体状况和特征(性别、年龄、体重、健康、体形)、症状的程度、并行治疗、治疗的频率和所期望的效果。
“药剂”是合成的或生物来源的化学分子。在本发明的上下文中，药剂通常是可用于药物组合物中的分子。在一些实施方式中，所述药剂是化学治疗剂。在一些实施方式中，所述药剂是本文所公开的小分子LSF抑制剂。在一些实施方式中，所述药剂可以提供治疗价值。在一些实施方式中，本文公开的小分子LSF抑制剂可以作为预防物或预防性治疗用于癌症的预防，例如，在受试者处于发展为癌症的风险中或很可能发展为癌症的情况下。在其它实施方式中，所述药剂单独使用以实现本发明，例如，本文公开的药学上可接受的载体。
在本文中短语“药学上可接受的”是指下述化合物、材料、组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内，所述化合物、材料、组合物和/或剂型适合于与人和动物的组织接触而无过多毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，且与合理的获益/风险比相称。
本文所用的短语“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组合物或辅料，例如液态或固态填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或或包封材料，所述载体涉及将主题药剂从身体的一个器官或部分携带或运输到身体的另一器官或部分。每种载体在与制剂中其它成分相容的意义上而言必须是“可接受的”，例如载体不会降低药剂对治疗的影响。换句话说，载体是药学上惰性的。术语“生理上可耐受的载体”和“生物相容的递送辅料”可互换使用。
在疾病或紊乱的治疗的上下文中，术语“给药”和“给予”可互换使用。两个术语均指使用有效剂量的药物组合物、通过例如胃肠外或全身给药的给药方法对受试者进行治疗，所述药物组合物包含本发明的LSF抑制剂。
本文所用的短语“胃肠外给药”和“经胃肠外给药”是指除了肠内和局部给药以外的给药模式，通常通过注射给药，包括但不限于：静脉内、肌内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、脑脊髓内、以及胸骨内注射、输注和其它注射或输注技术(不作限制)。本文所用的短语“全身给药(systemic administration、administered systemically)”和“外周给药(peripheraladministration、administered peripherally)”是指将包含至少本文公开的LSF抑制剂的药物组合物进行给药，以使其进入动物系统，从而进行代谢和其它类似的过程，例如皮下给药。在一些实施方式中，所述给药为口服给药。非限制性地，口服给药可以是溶液剂、悬浮剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂、口腔冲洗剂、散剂等形式。
术语“由...组成”是指本文所述的组合物、方法及其各自的组成部分，其排除在实施方式的描述中未列出的任何要素。
除非上下文另外明确指出，如本申请文件和所附权利要求中所使用的，单数形式的“一种/一个”和“所述/该”包括复数指示物。因此，例如，提及“该方法/所述方法”时包括本文描述的类型的一种或多种方法和/或步骤，和/或本领域技术人员在阅读本公开后将变得显而易见的一种或多种方法和/或步骤等。
除了在操作实施例中或另有提及的情况下，本文中表达成分的量或反应条件的所述数字应理解为在任何情况下均由术语“约”加以修饰。当与百分比一起使用时，术语“约”可以表示±1％。通过包括实施例的以下内容进一步对本发明进行详细解释，但是不应将本发明的范围限于此。
本文所用的术语“抑制LSF”是指抑制LSF的表达(水平)和/或LSF的生物学活性。在一些实施方式中，术语“抑制LSF”是指LSF的蛋白水平和/或LSF的基因转录水平降低。例如，LSF的抑制可导致编码LSF的TFCP2的基因表达减少。术语“抑制LSF”还指下调或抑制LSF的生物学活性，例如下调或抑制LSF对LSF调控的下游基因的表达进行调节的功能，所述下游基因如胸苷酸合酶(TYMS)、分泌性磷蛋白1(SPP1)、补体因子H(CFH)和纤连蛋白1(FN1)(参见Porta-de-la-RivaM等，(2011)J.Biochem.435：563-8，以引用的方式将其整体并入本文)。
术语“细胞LSF活性”和“LSF的生物学活性”在本文中可互换使用。这两个术语均指LSF调控LSF下游细胞过程的能力，例如，调节LSF下游基因的表达的能力。在一些实施方式中，LSF的生物学活性可以引起对LSF下游基因表达的刺激作用。在其它实施方式中，LSF的生物学活性可以诱导对LSF下游基因表达的抑制作用。在另外的实施方式中，LSF的生物学活性可归因于与其它细胞蛋白的相互作用。
如本文所用的短语“LSF的水平”涵盖LSF的表达和/或生物学活性。如本文所述，术语“表达”是指通过翻译从基因转录来的RNA所获得的一定量的蛋白，和/或由基因转录的一定量的RNA。
本文提及基因表达所用的术语“调控”是指对例如基因表达产生作用。在一些实施方式中，所述作用可以是刺激，例如增加基因的表达。在一些实施方式中，所述作用可以是抑制，例如降低基因的表达。术语“调控”和“调节”在本文中可互换使用。
本文中可互换使用的术语“LSF的抑制剂”和“LSF抑制剂”通常是指抑制LSF的药剂。它们可以是合成的或生物来源的。它们可以是抑制LSF的有机或无机分子、或肽、抗体或反义RNA。本发明的LSF的抑制剂是能抑制LSF表达和/或LSF生物学活性的化学实体或分子，如本文所公开，例如，式(I)-式(V)中任一项的化合物以及其对映异构体、前药、衍生物及药学上可接受的盐。
除非本文另有定义，与本申请结合使用的科学术语和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。
细胞生物学和分子生物学中的常用术语的定义可在下述文献中找到：“The MerckManual of Diagnosis and Therapy”，第19版，Merck Research Laboratories出版，2006(ISBN 0-911910-19-0)；Robert S.Porter等(编)，The Encyclopedia of MolecularBiology，Blackwell Science Ltd.出版，1994(ISBN 0-632-02182-9)；Benjamin Lewin，Genes X，Jones&Bartlett Publishing出版，2009(ISBN-10:0763766321)；Kendrew等(编)，Molecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference，VCHPublishers,Inc.出版，1995(ISBN 1-56081-569-8)；以及Current Protocols in ProteinSciences 2009，Wiley Intersciences，Coligan等编。
除非另有说明，本发明采用例如以下文献中所述的标准程序进行：例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual第3版)，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor,N.Y.,USA(2001)；Davis等，Basic Methods in MolecularBiology，Elsevier Science Publishing,Inc.，New York,USA(1995)；Current Protocolsin Cell Biology(CPCB)(Juan S.Bonifacino等编，John Wiley and Sons,Inc.)；以及Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique by R.Ian Freshney,Publisher:Wiley-Liss，第5版(2005)；Animal Cell Culture Methods(Methods in CellBiology,Vol.57,Jennie P.Mather和David Barnes编，Academic Press，第1版，1998，以引用的方式将其全部并入本文。
应当理解，前面的详细描述和下面的实施例仅是说明性的，而不应被视为对本发明范围的限制。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所公开的实施方式进行各种改变和修改，这对于本领域技术人员而言将是显而易见的。此外，出于描述和公开的目的，以引用的方式将标明的所有专利和出版物明确地并入本文，例如在此类出版物中描述的可与本发明关联使用的方法学。这些出版物仅由于它们的公开早于本申请的申请日而提供。在这一方面不应当视作承认本发明人没有任何权利借助于先前的发明或因为其它任何其它原因而将所述公开内容提前。所有关于这些文件的日期的声明或这些文件的内容的表述是基于申请人可得的信息，并且不构成关于这些文件的日期或这些文件的内于申请人可得的信息，并且不构成关于这些文件的日期或这些文件的内容的正确性的任何承认。
实施例
实施例1：示例性化合物的合成
示例性的化合物如下合成：
(E)-N-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-3-(2-乙氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002997103560000921
将(E)-3-(2-乙氧基苯基)丙-2-烯酸(577mg，3.00mmol)称量到火焰干燥的250mL圆底烧瓶中，并置于氮气氛下。加入无水DCM(7.50mL)，并将烧瓶冷却至0℃。一次性加入3,4-(亚乙二氧基)苯胺(453mg，3.00mmol，369uL)，然后加入EDC·HCl(575mg，3.00mmol)。将反应温热至环境温度并搅拌1h。完成后，将反应混合物用300mL的乙酸乙酯和100mL的1MHCl稀释。将两相溶液过滤以除去不溶物，并分离各层。将有机层用另外的1M HCl(100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(1×100mL)和卤水(1×100mL)洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到(E)-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-3-(2-乙氧基苯基)丙-2-烯酰胺(0.918g，2.82mmol，产率94.0％)，黄色固体，无需进一步纯化即可使用。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ8.01(d,J＝15.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.0Hz,1H),7.37-7.27(重叠,3H),7.02(d,J＝7.2Hz,1H),6.93(d,J＝7.5Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),6.81(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(d,J＝15.5Hz,1H),4.29-4.20(重叠,4H),4.10(q,J＝6.5Hz,2H),1.47(t,J＝6.5Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+ C19H19NO4计算值326.131；测量值326.459.UV:λ(max)254.2nm.
9-(2-乙氧基苯基)-2,3,8,9-四氢-[1,4]二噁英并[2,3-g]喹啉-7(6H)-酮(FQI-35)和10-(2-乙氧基苯基)-2,3,9,10-四氢-[1,4]二噁英并[2,3-f]喹啉-8(7H)-酮(FQI-36)
Figure BDA0002997103560000931
将N-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-3-(2-乙氧基苯基)丙烯酰胺(325mg，1.00mmol)溶于在装备有搅拌棒的火焰干燥的50mL烧瓶中的TFA(20.0mL)中。将混合物在RT搅拌24h，然后真空浓缩。将残留物用～20mL饱和碳酸氢钠水溶液中和，然后用50mL DCM萃取3x。用水漂洗合并的有机相，然后用卤水漂洗，并用无水硫酸钠干燥，得到具有～75：25的FQI-35：FQI-36的粗混合物，其不能通过二氧化硅或氧化铝色谱法分离。用制备型反相HPLC进行纯化，得到9-(2-乙氧基苯基)-3,6,8,9-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-g]喹啉-7-酮(20.6mg，.0635mmol，产率6.35％)和10-(2-乙氧基苯基)-3,7,9,10-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-f]喹啉-8-酮(7.53mg，.0231mmol，产率2.31％)。
FQI-35:1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ7.33(s,1H),7.19(ddd,J＝7.5,7.5,2.1Hz,1H),6.87(d,J＝7.5Hz,1H),6.84(d,J＝7.5Hz,1H),6.50(s,1H),6.33(s,1H),4.61(dd,J＝7.2,6.7Hz,1H),4.27-4.21(m,2H),4.21-4.15(m,2H),4.11-4.02(m,2H),2.92(dd,J＝16.2,7.2Hz,1H),2.81(dd,J＝16.2,6.7Hz,1H),1.40(t,J＝6.9Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+C19H19NO4的计算值326.131；测量值326.283.UV:λ(max)321.2nm
FQI-36:1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ7.14(t,J＝7.6Hz,1H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),6.71(t,J＝7.9Hz,1H),6.55(d,J＝7.9Hz,1H),6.34(d,J＝8.6Hz,1H),4.90(d,J＝7.9Hz,1H),4.21-4.14(重叠,4H),4.10(d,J＝6.9Hz,2H),2.93(d,J＝15.9Hz,1H),2.84(m,1H),1.48(t,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+ C19H19NO4的计算值326.131；测量值326.283.UV:λ(max)227.2
2-溴-N-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)乙酰胺
Figure BDA0002997103560000932
在装备有搅拌棒的火焰干燥的100mL烧瓶中，将2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-胺(2.27g，15.0mmol，1.84mL)和碳酸钾(2.49g，18.0mmol)悬浮于DCM(50.0mL)中。缓慢加入溴乙酰氯(2.60g，16.5mmol，1.37mL)，将烧瓶用Ar冲洗，并与回流冷凝器和Ar气球安装在一起。将反应混合物加热，并在回流下搅拌24h。冷却至RT后，将混合物缓慢倒入100mL冰水中。用DCM(2×100mL)对该水溶液进行萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂，得到2-溴-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)乙酰胺(2.00g，7.33mmol，产率48.9％)，固体。粗固体通过NMR具有足够的纯度，无需进一步纯化即可用于后续步骤。
1H NMR:(500MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),7.21(d,J＝2.5Hz,1H),6.95(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),4.27-4.13(重叠,4H),3.98(s,2H).13C NMR:(125MHz,DMSO-d6)δ164.28,142.96,139.72,132.24,116.91,112.43,108.31,64.18,63.93,30.43.ESI-MS:[M+H]+ C10H10BrNO3的计算值273.982；测量值274.058.UV:λ(max)262.2nm
N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-2-二甲氧基磷酰基-乙酰胺
Figure BDA0002997103560000941
将2-溴-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)乙酰胺(1.84g，6.76mmol)转移到装备有搅拌棒的、火焰干燥的、50mL梨形烧瓶中，接着是亚磷酸三甲酯(4.20g，33.8mmol，4.00mL)。用Ar吹扫混合物，并与回流冷凝器和Ar气球安装在一起。然后将反应加热至100℃持续1h。冷却至RT后，将反应用～100mL DCM冲洗至500mL分液漏斗中，并用150mL H2O洗涤3x。有机层用卤水(～20mL)漂洗，经无水Na2SO4干燥，并在高真空(～0.1mmHg)下浓缩，得到N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-2-二甲氧基磷酰基-乙酰胺(1.90g，6.32mmol，产率93.4％)，浓缩后使用，无需进一步纯化。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ8.72(s,1H),7.15(d,J＝2.4Hz,1H),6.88(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝8.7Hz,1H),4.27-4.18(重叠,4H),3.82(d,J＝11.2Hz,6H),3.01(d,J＝20.9Hz,2H).13C NMR:(100MHz,氯仿-d)δ161.74,161.70,143.35,140.46,131.71,117.08,113.50,109.68,64.48,64.36,53.51,53.44,35.96,34.67.ESI-MS:[M+H]+C12H16NO6P的计算值302.072；测量值302.155.UV:λ(max)254.2nm
4-(二甲基氨基)-2-乙氧基苯甲醛
Figure BDA0002997103560000951
在火焰干燥的500mL圆底烧瓶中，制备处于丙酮(181.6mL)中的4-(二甲基氨基)-2-羟基-苯甲醛(3.00g，18.2mmol)的溶液，然后加入溴乙烷(9.89g，90.8mmol，6.78mL)、无水碳酸钾(3.76g，27.2mmol)和18-冠-6(96.0mg，0.363mmol)。将反应混合物与回流冷凝器安装在一起，并在40℃加热16h，然后冷却至室温。将反应过滤，并将过滤的固体用丙酮洗涤。将滤液蒸干，以定量产率得到4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯甲醛(3.51g，18.2mmol)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ10.20(s,1H),7.73(d,J＝9.0Hz,1H),6.29(d,J＝9.0Hz,1H),6.02(s,2H),4.12(q,J＝7.0Hz,2H),3.07(s,3H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR:(125MHz,氯仿-d)δ187.60,163.45,155.99,129.92,114.65,104.53,93.76,70.10,63.79,40.21,14.72.IR(KBr):υ(max)2979,2905,2763,1659,1587,1553,1526,1440,1372,1360,1287,1241,1108,806cm-1.熔点：59℃.UV:λ(max)351.8nm.ESI-MS:[M+H]+ C11H15NO2的计算值194.11；测量值193.80.
N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-3-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]丙-2-烯酰胺
Figure BDA0002997103560000952
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的25mL烧瓶中，将N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-2-二甲氧基磷酰基-乙酰胺(640mg，2.12mmol)溶于THF(5.66mL)中。将烧瓶用Ar冲洗并与Ar气球装在一起，然后冷却至0℃。通过注射器滴加正丁基锂(处于己烷中，1.6M，2.29mmol，1.35eq，1.43mL)。使混合物温热至RT并搅拌30min。平衡后，一次性快速加入固体4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯甲醛(328mg，1.70mmol，1.00eq)。该烧瓶与回流冷凝器和Ar气球装在一起，并将混合物加热回流22h。冷却至RT后，通过加入～5mL饱和氯化铵水溶液将反应混合物淬灭，然后转移到500mL分液漏斗中，用DCM和水冲洗。将有机物用另外的～150mL DCM和50mL水稀释。移除DCM层，并用另外的3×50mL水洗涤，然后经硫酸钠干燥并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2；梯度为从0至50％的处于己烷中的EtOAc)纯化粗残留物，得到N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-3-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]丙-2-烯酰胺(591mg，1.60mmol，产率94.4％)，为E:Z异构体为～3:1的混合物。
1H NMR(E-异构体):(400MHz,氯仿-d)δ7.91(d,J＝15.5Hz,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,1H),7.09(s,1H),7.00(s,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),6.46(d,J＝18.1Hz,1H),6.29(d,J＝8.7Hz,1H),6.15(s,1H),4.30-4.20(重叠,4H)4.10(q,J＝6.8Hz,2H),3.32(s,1H),3.01(s,7H),1.48(t,J＝6.6Hz,3H).
1H NMR(Z-异构体):(400MHz,氯仿-d)7.75(d,J＝15.5Hz,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,1H),6.86(d,J＝8.5Hz,1H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),6.71(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),6.22(d,J＝8.1Hz,1H),6.07(s,1H),4.30-4.20(重叠,4H)3.95(q,J＝6.8Hz,2H),2.96(s,6H),1.20(t,J＝6.9Hz,3H).
ESI-MS:[M+H]+ C21H24N2O4的计算值369.174；测量值369.200.UV:λ(max)338.2nm
9-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]-3,6,8,9-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-g]喹啉-7-酮(FQI-37)
Figure BDA0002997103560000971
将HFIP(91.2mL)添加至装备有大橄榄球形搅拌棒的、烘干的250mL烧瓶中，并迅速用Ar冲洗。向搅拌的溶剂中加入粉末状的N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-3-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]丙-2-烯酰胺(840mg，2.28mmol)。再次将混合物用Ar快速地冲洗并用Ar气球塞住，在RT搅拌22h。将混合物真空浓缩，并将残留物通过快速色谱(SiO2；梯度为从20至60％的处于己烷中的EtOAc)纯化，得到9-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]-3,6,8,9-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-g]喹啉-7-酮(434mg，1.15mmol，产率50.6％，纯度98％)，基于NMR积分，具有<2％的不希望的FQI-38异构体。
1H NMR:(500MHz,氯仿-d)δ7.42(s,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H),6.50(s,1H),6.30(s,1H),6.26(d,J＝2.4Hz,1H),6.23(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),4.51(m,1H),4.25-4.20(m,2H),4.19-4.14(m,2H),4.10-3.99(m,2H),2.92(s,6H),2.90(dd,J＝16.0,8.1Hz,1H),2.75(dd,J＝16.2,6.3Hz,1H),1.38(t,J＝7.0Hz,3H).13C NMR:(125MHz,氯仿-d)δ171.07,157.28,151.20,142.61,139.39,131.23,128.75,120.97,118.00,117.16,104.97,103.98,97.30,64.72,64.37,63.59,40.90,37.40,34.78,15.09.ESI-MS:[M+H]+ C21H24N2O4的计算值369.174；测量值370.302.UV:λ(max)266.2nm
10-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]-3,7,9,10-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-f]喹啉-8-酮(FQI-38)
Figure BDA0002997103560000972
在装备有搅拌棒的20mL闪烁瓶(scintillation vial)中，将N-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)-3-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]丙-2-烯酰胺(100mg，0.271mmol)溶于TFA(5.43mL)。将混合物在RT搅拌24h，然后真空浓缩。残留物用～10mL饱和碳酸氢钠水溶液中和，然后用20mL DCM萃取3x。用水、然后卤水漂洗合并的有机物，并经无水硫酸钠干燥，得到具有～86:14的FQI-37:FQI-38的粗混合物，其不能通过二氧化硅或氧化铝色谱分离。用制备型反相HPLC纯化，得到10-[4-(二甲基氨基)-2-乙氧基-苯基]-3,7,9,10-四氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-f]喹啉-8-酮(6.20mg，0.0168mmol，产率6.20％)。
1H NMR:H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.54(s,1H),6.76(d,J＝8.6Hz,1H),6.38(d,J＝8.4Hz,1H),6.33(d,J＝8.5Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),6.06(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),4.80(d,J＝6.1Hz,1H),4.16(s,4H),4.11(t,7.0Hz,2H),2.95-2.84(重叠,7H),2.77(dd,J＝16.3,7.2Hz,1H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+ C21H24N2O4的计算值369.174；测量值369.288.UV:λ(max)229.2nm.
(2-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基氨基)-2-氧乙基)三苯基溴化膦
Figure BDA0002997103560000981
在500mL RBF中制备溶于甲苯(251mL)中的三苯基膦(20.7g，78.9mmol，1.05eq)溶液。向溶液中一次性加入N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-2-溴-乙酰胺(19.4g，75.2mmol，1.00eq)。将得到的浆液加热至回流并搅拌16h。过滤所得到的灰色沉淀物，用甲苯冲洗，真空干燥，得到(2-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基氨基)-2-氧乙基)三苯基溴化膦(29.8g，57.3mmol，产率76.2％)，为灰色粉末。粗产物无需进一步纯化即可用于后续步骤。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),7.89-7.78(重叠,9H),7.77-7.70(重叠,6H),7.06(d,J＝2.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),5.95(s,2H),5.30(d,J＝14.9Hz,2H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ161.16,147.03,143.68,134.93,133.88,133.79,132.16,130.08,129.98,119.01,118.31,112.52,108.08,101.45,101.18.IR(KBr):υ(max)3155,2907,1665,1486,1502,1436,1245,1114,1035,929,737,690cm-1.熔点：225℃.UV:λ(max)219.9.ESI-MS(UPLC):[M-Br]+ C27H23NO3P的计算值440.141；测量值440.12.
2-环丙氧基-4-(二甲基氨基)苯甲醛
Figure BDA0002997103560000991
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的反应管中，加入4-(二甲基氨基)-2-羟基苯甲醛(165mg，1.00mmol)、环丙基溴(157mg，1.30mmol，104uL)、碳酸钾(207mg，1.50mmol)、碘化钾(8.30mg，0.0500mmol)和NMP(1.00mL)。将瓶用Ar冲洗，用特氟隆隔垫压接盖密封，并在200℃下搅拌3h。将反应冷却至RT，并真空过滤以移除未溶解的固体，用DCM冲洗。将有机物真空浓缩，并将残留物通过快速色谱在12g SiO2柱体上纯化(梯度为从0至20％的处于己烷中的EtOAc)，得到2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯甲醛(87.0mg，0.420mmol，产率42％)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ10.09(s,1H),7.72(d,J＝8.8Hz,1H),6.46(d,J＝2.3Hz,1H),6.32(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),3.81(tt,J＝6.0,3.3Hz,1H),3.09(s,6H),0.90-0.79(重叠,4H).ESI-MS:[M+H]+C12H15NO2的计算值206.110；测量值207.187.UV:λ(max)353.2nm.
N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]丙-2-烯酰胺
Figure BDA0002997103560000992
在火焰干燥的5mL烧瓶中，制备处于THF(1.61mL)中的2-(1,3-苯并二氧戊环-5-基氨基)-2-氧-乙基]-三苯基-溴化膦(276mg，0.530mmol，1.25eq)的溶液，用Ar冲洗。将混合物冷却至0℃，然后逐滴添加正丁基锂(处于己烷中1.6M，357uL，0.571mmol，1.35eq)。使烧瓶升温至RT，并搅拌30分钟。平衡后，将溶于最低限度的THF中的2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯甲醛(87.0mg，0.424mmol，1.00eq)溶液添加至反应瓶中。将该烧瓶与回流冷凝器和Ar气球装在一起，并加热回流16h。加入3mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用20mL DCM萃取3x。有机物经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。残留物通过快速色谱(SiO2；处于己烷中的50％EtOAc)纯化，得到N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]丙-2-烯酰胺(154mg，0.419mmol，产率98.9％)，为E:Z异构体～5：1的混合物。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)(E异构体)δ7.83(d,J＝15.5Hz,1H),7.36(d,J＝8.8Hz,1H),7.07(s,1H),6.85(d,J＝8.2Hz,1H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),6.58(d,J＝2.1Hz,1H),6.39(d,J＝15.5Hz,1H),6.31(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),5.95(s,2H),3.78(m,1H),3.04(s,6H),0.92-0.73(重叠,4H).ESI-MS:[M+H]+ C21H22N2O4的计算值367.158；测量值367.259.UV:λ(max)340.2nm.
8-[2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(FQI-39)
Figure BDA0002997103560001001
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的10mL烧瓶中，将N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]丙-2-烯酰胺(100mg，0.273mmol)溶于TFA(5.46mL)中，并用Ar吹扫烧瓶。将混合物在RT搅拌22h，直到通过TLC观察到起始物质消耗。通过旋转蒸发浓缩反应，并将残留物用～10mL饱和碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用20mL DCM萃取3x，并将合并的有机物用水、然后用卤水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。粗物质通过快速色谱(SiO2；梯度为从25％至50％的处于己烷中的EtOAc)纯化，得到8-[2-(环丙氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(83.3mg，0.227mmol，产率83.3％)，为浅橙色固体。
1H NMR:(500MHz,氯仿-d)δ8.51(s,1H),6.73(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.4Hz,1H),6.41(s,1H),6.39(s,1H),6.25(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),5.87(s,2H),4.40(dd,J＝7.5,6.5Hz,1H),3.75(tt,J＝5.9,3.2Hz,1H),2.94(s,6H),2.83(dd,J＝16.2,7.5Hz,1H),2.74(dd,J＝16.2,6.5Hz,1H),0.80-0.69(重叠,4H).13C NMR:(125MHz,氯仿-d)δ171.65,157.22,151.08,146.84,143.59,131.56,128.77,119.94,117.53,108.51,105.23,101.22,98.22,97.60,50.57,40.81,37.18,35.15,6.46,6.45.ESI-MS:[M+H]+ C21H22N2O4的计算值367.158；测量值368.317.UV:λ(max)264.2nm.
2-环丙氧基苯甲醛
Figure BDA0002997103560001011
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的反应管中，加入水杨醛(24mg，2.00mmol，212uL)、环丙基溴(157mg，1.30mmol，104uL)、碳酸钾(207mg，1.50mmol)、碘化钾(8.30mg，50.00μmol)和NMP(1.00mL)。将瓶用Ar冲洗，用特氟隆隔垫压接盖密封，并在200℃下搅拌3h。将反应冷却至RT，并真空过滤以移除未溶解的固体，用DCM冲洗。将有机物真空浓缩，并将残留物通过快速色谱在12g SiO2柱体上纯化(梯度为从0至20％的处于己烷中的EtOAc)，得到2-(环丙氧基)苯甲醛(48.0mg，0.296mmol，产率14.8％)。
1H NMR:NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.39(s,1H),7.81(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.56(ddd,J＝7.7,7.6,1.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.04(dd,J＝7.6,7.5Hz,1H),3.84(m,1H),0.93-0.74(重叠,4H).ESI-MS:[M+H]+ C10H10O2的计算值163.068；测量值163.120.UV:λ(max)306.2nm.
N-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-3-(2-环丙氧基苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002997103560001021
在火焰干燥的5mL烧瓶中，制备处于THF(0.350mL)中的[2-(1,3-苯并二氧戊环-5-基氨基)-2-氧-乙基]-三苯基-溴化膦(45.7mg，0.0878mmol)的溶液，并用Ar冲洗。将混合物冷却至0℃，然后逐滴加入正丁基锂(处于己烷中1.6M，60.0uL，0.950mmol，1.35eq)。使烧瓶温热至RT，并搅拌30分钟。平衡后，将溶于最低限度的THF中的2-(环丙氧基)苯甲醛(11.0mg，0.0700mmol)溶液加入至反应瓶中。将烧瓶与回流冷凝器和Ar气球装在一起，并加热回流16h。加入3mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用10mL DCM萃取3x。有机物经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。残留物通过快速色谱(SiO2；处于己烷中的50％EtOAc)纯化，得到N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环丙氧基)苯基]丙-2-烯酰胺(21.1mg，0.0653mmol，产率92.8％)，E:Z异构体为～2:1的混合物。
ESI-MS:[M+H]+ C19H17NO4的计算值324.116；测量值324.209.UV:λ(max)328.2nm
8-[2-(环丙氧基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(FQI-40)
Figure BDA0002997103560001022
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的5mL烧瓶中，将N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环丙氧基)苯基]丙-2-烯酰胺(21.1mg，0.0653mmol)溶于TFA(1.31mL)中，并用Ar吹扫烧瓶。将混合物在RT搅拌24h，通过TLC发现转化较差，这时将另外的1.31mL HFIP加入反应中。将混合物搅拌另外的24h，经TLC发现转化改善。通过旋转蒸发将反应浓缩，并将残留物用～5mL饱和碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用10mL DCM萃取3x，并将合并的有机物用水、然后用卤水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。粗物质通过快速色谱(SiO2；梯度为从25至50％的处于己烷中的EtOAc)纯化，得到8-[2-(环丙氧基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(10.2mg，0.0315μmol，产率48.3％)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ8.28(s,1H),7.32-7.19(重叠,2H),6.86(d,J＝6.3Hz,2H),6.41(s,2H),6.39(s,2H),5.90(s,2H),4.51(t,J＝6.7Hz,1H),3.76(m,1H),2.90-2.73(重叠,2H),0.86-0.66(重叠,4H).ESI-MS:[M+H]+ C19H17NO4的计算值324.116；测量值324.209.UV:λ(max)254.2nm.
2-(环戊氧基)苯甲醛
Figure BDA0002997103560001031
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的25mL梨形烧瓶中，加入水杨醛(244.2mg，2.00mmol，212uL)，然后加入无水丙酮(6.67mL)。将烧瓶用氮冲洗，并向混合物中添加固体无水碳酸钾(553mg，4.00mmol)和18-冠-6(26.4mg，0.100mmol)，然后一次性加入环戊基溴(1.49g，10.0mmol，1.07mL)。将烧瓶与回流冷凝器和氮气球装一起，并在回流下搅拌24h。通过真空过滤对混合物进行过滤，将溶液真空浓缩，并将残留物通过快速色谱(SiO2，处于甲苯中的10％EtOAc)纯化，以定量产率得到2-(环戊氧基)苯甲醛(0.381g，2.00mmol)。
1H NMR(400MHz,CHCl3):(水合物旋转异构体的1:1混合物)δ8.00(d,J＝16.0Hz,1H)(旋转异构体A),7.85(d,J＝16.5Hz,1H)(旋转异构体B),7.56(ddd,J＝20.1,7.7,1.3Hz,1H),7.33(dd,J＝8.0Hz,8.0Hz,1H),7.18(d,J＝16.1Hz,1H)(旋转异构体A),6.94(重叠,2H),6.75(d,J＝16.5Hz,1H)(旋转异构体B),4.86(m,1H),2.38(s,2H)(OH),1.94(m,4H),1.83(m,2H),1.67(m,2H).ESI-MS:[M-H]+ C12H14O2的计算值191.099；测量值191.175.UV:λ(max)308.2nm.
N-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-3-(2-(环戊氧基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002997103560001041
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的10mL烧瓶中，在Ar下将[2-(1,3-苯并二氧戊环-5-基氨基)-2-氧-乙基]-三苯基-溴化膦(650mg，1.25mmol，1.25eq)溶于THF(4.17mL)中。将混合物冷却至0℃，并通过注射器滴加正丁基锂(处于己烷中1.6M，1.35mmol，843uL)。使混合物温热至RT并搅拌30min。平衡后，一次性快速地添加固体2-(环戊氧基)苯甲醛(190mg，1.00mmol)。将烧瓶与回流冷凝管和Ar气球装在一起，将混合物加热至回流过夜。通过加入20mL饱和氯化铵水溶液将混合物淬灭，并用20mL DCM萃取3x。合并的有机物经无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物通过快速色谱(SiO2，处于己烷中的25％EtOAc)纯化，得到(E)-N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环戊氧基)苯基]丙-2-烯酰胺(0.299g，851μmol，产率85.1％)，E:Z异构体为～10:1的混合物。
ESI-MS:[M+H]+ C21H21NO4的计算值352.147；测量值352.306.UV:λ(max)330.2nm.
8-(2-(环戊氧基)苯基)-7,8-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6(5H)-酮(FQI-41)
Figure BDA0002997103560001042
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的25mL烧瓶中，将N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环戊氧基)苯基]丙-2-烯酰胺(175.7mg，0.500mmol)溶于TFA(5.00mL)和HFIP(5.00mL)的混合物中。将烧瓶与Ar气球装在一起，并在RT搅拌16h。通过旋转蒸发浓缩反应，将残留物用～20mL饱和碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用20mL DCM萃取3x，并将合并的有机物用水、然后用卤水漂洗，并经无水硫酸钠干燥。粗固体通过柱色谱(SiO2，梯度为从25至50％的处于己烷中的EtOAc)纯化，得到8-[2-(环戊氧基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(0.118g，0.336mmol，产率67.1％)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ7.43(s,1H),7.19(t,J＝6.6Hz,1H),6.90-6.84(重叠,2H),6.81(t,J＝7.0Hz,1H),6.43(s,1H),6.34(s,1H),5.90(d,J＝1.9Hz,2H),4.81(m,1H),2.94(dd,J＝16.2,7.3Hz,1H),2.79(dd,J＝16.2,6.7Hz,1H),1.95-1.77(重叠,4H),1.76-1.67(m,2H),1.67-1.58(m,2H).13C NMR:(125MHz,氯仿-d)δ171.53,155.31,147.02,143.68,131.70,130.03,128.75,128.20,120.29,119.04,112.60,108.46,101.27,97.75,79.22,36.74,36.33,33.22,32.91,24.20,24.16.ESI-MS:[M+H]+ C21H21NO4的计算值352.147；测量值352.306.UV:λ(max)229.2nm.
2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯甲醛
Figure BDA0002997103560001051
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的25mL心形烧瓶中，加入4-(二甲基氨基)-2-羟基-苯甲醛(330mg，2.00mmol)，然后加入无水丙酮(6.67mL)。用氮冲洗烧瓶，并向混合物中加入固体无水碳酸钾(553mg，4.00mmol)和18-冠-6(26.4mg，0.100mmol)，然后一次性加入环戊基溴(1.49g，10.0mmol，1.07mL)。将烧瓶与回流冷凝管和氮气球装在一起，并在回流下搅拌24h。通过真空过滤将混合物过滤，将溶液真空浓缩，并将残留物通过快速色谱(SiO2，处于甲苯中的10％EtOAc)纯化，得到2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯甲醛(0.416g，1.78mmol，产率89.2％)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ10.16(s,1H),7.73(d,J＝8.9Hz,1H),6.29(dd,J＝8.9,2.0Hz,1H),6.04(d,J＝2.1Hz,1H),4.87(ddd,J＝8.5,5.2,3.5Hz,1H),3.07(s,6H),2.01-1.89(重叠,4H),1.88-1.75(m,2H),1.71-1.60(m,2H).ESI-MS:[M+H]+ C14H19NO2的计算值234.142；测量值235.241.UV:λ(max)317.2nm.
N-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-3-(2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0002997103560001061
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的10mL烧瓶中，在Ar下将[2-(1,3-苯并二氧戊环-5-基氨基)-2-氧-乙基]-三苯基-溴化膦(650mg，1.25mmol，1.25eq)溶于THF(4.17mL)中。将混合物冷却至0℃，并通过注射器逐滴加入正丁基锂(处于己烷中1.6M，1.35mmol，843μL)。使混合物温热至RT并搅拌30min。平衡后，一次性快速加入固体2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯甲醛(233mg，1.00mmol，1.00eq)。将烧瓶与回流冷凝器和Ar气球装在一起，将混合物加热回流过夜。通过加入20mL饱和氯化铵水溶液淬灭混合物，并用20mL DCM萃取3x。合并的有机物经无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物通过快速色谱(SiO2，处于己烷中的25％EtOAc)纯化，得到N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]丙-2-烯酰胺(332mg，0.841mmol，产率84.1％)，E:Z异构体为～10:1的混合物。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)(E异构体)δ7.89(d,J＝15.6Hz,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),7.04(s,1H),6.85(d,J＝7.4Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),6.41(d,J＝15.6Hz,1H),6.28(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.16(s,1H),5.95(s,2H),4.84(m,1H),3.01(s,7H),2.00-1.87(重叠,4H),1.86-1.75(m,2H),1.72-1.59(m,2H).ESI-MS:[M+H]+ C23H26N2O4的计算值395.189；测量值395.311.UV:λ(max)374.2nm.
8-[2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(FQI-42)
Figure BDA0002997103560001062
在装备有搅拌棒的、火焰干燥的25mL烧瓶中，将N-(1,3-苯并二氧戊环-5-基)-3-[2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]丙-2-烯酰胺(197mg，0.500mmol)溶于TFA(10.0mL)的混合物中。将烧瓶与Ar气球装一起，并在RT搅拌16h。通过旋转蒸发浓缩反应，并将残留物用～20mL的饱和碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用20mL DCM萃取3x，并将合并的有机物用水、然后用卤水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将粗固体通过柱色谱(SiO2，梯度为从25至50％的处于己烷中的EtOAc)纯化，得到8-[2-(环戊氧基)-4-(二甲基氨基)苯基]-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-酮(171mg，0.432mmol，产率86.5％)。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ7.49(s,1H),6.74(d,J＝8.5Hz,1H),6.43(s,1H),6.32(s,1H),6.27(d,J＝2.2Hz,1H),6.21(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.91-5.85(m,2H),4.80(s,1H),4.40(m,1H),2.96-2.90(重叠,7H),2.73(dd,J＝16.2,6.3Hz,1H),1.91-1.77(重叠,4H),1.75-1.64(m,2H),1.64-1.57(m,2H).13C NMR:(125MHz,氯仿-d)δ172.02,156.17,151.07,146.73,143.54,131.52,129.14,120.17,118.25,108.45,104.57,101.15,98.31,97.64,79.00,40.86,37.09,35.80,33.30,32.99,24.20,24.17.ESI-MS:[M+H]+ C23H26N2O4的计算值395.189；测量值395.355.UV:λ(max)224.2nm.
8-(2-乙氧基苯基)-7,8-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6(5H)-硫酮(硫代-FQI1)
Figure BDA0002997103560001071
在氮气氛下将FQI1(200mg，0.643mmol，1.0eq)称量至干燥的反应瓶中。加入干甲苯(4.3mL)，然后加入Lawesson试剂(416mg，1.02mmol，1.6当量)。将瓶紧密密封，并将反应加热回流过夜。冷却后，真空除去溶剂，残留物通过快速柱色谱(梯度为处于己烷中的20％至70％乙酸乙酯)纯化。将含有产物的级分混合起来，得到120mg不纯的红色油，将其从二氯甲烷/己烷中重结晶，得到硫代-FQI1，为白色针状物(40mg，19％)。Mp：；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.69(br.s.,1H),7.20(ddd,J＝2.9,6.0,8.3Hz,1H),6.89-6.82(m,3H),6.46(d,J＝3.1Hz,2H),5.93(d,J＝1.2Hz,2H),4.54(dd,J＝6.4,7.8Hz,1H),4.10-4.02(m,2H),3.42(dd,J＝7.8,17.0Hz,1H),3.23(dd,J＝6.4,17.0Hz,1H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H).
8-(4-氯-2-乙氧基苯基)-7,8-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6(5H)-硫酮(硫代-FQI1-Cl)
Figure BDA0002997103560001081
在氮气氛下，将FQI1-Cl(300mg，0.870mmol，1.00当量)称量到干燥的反应瓶中。加入干甲苯(8.70mL)，然后加入Lawesson试剂(176mg，0.435mmol，0.500eq)。将瓶紧密密封，并将反应加热回流过夜。24h后，由TLC显示反应不完全，此时将瓶冷却，打开，加入额外的Lawesson试剂(87.9mg，0.217mmol，0.250当量)，用氮重新吹扫，密封，并回流另外的24h。观察到TLC中无明显变化，于总时间48h时停止反应。冷却后，真空除去溶剂，残留物通过快速柱色谱(梯度为处于己烷中的20％至70％乙酸乙酯)纯化，得到8-(4-氯-2-乙氧基-苯基)-7,8-二氢-5H-[1,3]二氧代并[4,5-g]喹啉-6-硫酮(硫代-FQI1-Cl)(62.0mg，0.171mmol，产率19.7％)，为灰白色粉末状固体。
1H NMR:(400MHz,氯仿-d)δ9.62(s,1H),6.86(s,1H),6.81(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),6.72(d,J＝8.3Hz,1H),6.46(d,J＝1.7Hz,2H),5.95(s,2H),4.47(dd J＝7.0,6.7Hz,1H),4.05(q,J＝6.8Hz,2H),3.38(dd,J＝16.8,7.0Hz,1H),3.19(dd,J＝16.8,6.7Hz,1H),1.42(t,J＝6.8Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+ C18H16ClNO3S的计算值362.054；测量值362.197.UV:λ(max)332.2nm
通用程序C：通过亚胺甲酯中间体合成三唑并-二氢喹啉(FQI1三唑，FQI1-三唑和Tri-FQI-Cl)(第二通用路线)
Figure BDA0002997103560001091
在氮下将合适的FQI1类似物(1.0当量)悬浮在瓶中的无水二氯甲烷(0.2M浓度)中。一次性加入四氟硼酸三甲基氧鎓(1.5当量)，然后加入碳酸钾(4.0当量)。将反应在室温搅拌过夜，直到UPLC-MS表明＞80％转化为亚胺甲酯SI-3。用50mL DCM将反应混合物稀释，并用25mL水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，浓缩，并直接用于下一步骤，无需进一步纯化。
在氮下，将粗的SI-4溶于瓶中的1-丁醇(0.15M)中。一次性加入甲酸酰肼(1.2当量)，并将瓶整体加热回流过夜。真空移除丁醇，并将残留物干法装载到二氧化硅上。快速柱色谱(处于乙醚中的1％乙醇洗脱未反应的喹啉酮起始物质，然后用处于乙醚中的10％乙醇洗脱三唑)，得到所需的三唑。
5-(2-乙氧基苯基)-4,5-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g][1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮(FQI1-三唑)
Figure BDA0002997103560001092
根据通用程序A，经FQI1的反应得到5-(2-乙氧基苯基)-4,5-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g][1,2,4]三唑并[4,3-a]喹啉(FQI1-三唑)，为灰白色固体(两步产率62％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),7.15(dt,J＝1.6,7.8Hz,1H),6.97(s,1H),6.85(d,J＝8.2Hz,1H),6.77-6.69(m,1H),6.62(dd,J＝1.6,7.4Hz,1H),6.54(s,1H),5.95(d,J＝1.2Hz,2H),4.67(t,J＝6.6Hz,1H),4.11-3.96(m,2H),3.50(dd,J＝7.0,16.0Hz,1H),3.30(dd,J＝6.3,16.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ155.9,149.8,147.3,146.4,137.2,128.5,128.4,127.9,125.9,123.4,120.4,111.4,109.2,111.4,109.2,101.7,97.8,63.4,36.2,26.5,14.6.ESI-MS:[M+H]+ C19H17N3O3的计算值336.127；测量值336.373.UV:λ(max)223.89.
5-(4-氯-2-乙氧基苯基)-4,5-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g][1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮(Tri-FQI1-Cl)
Figure BDA0002997103560001101
根据通用程序C，经FQI1-Cl的反应得到5-(4-氯-2-乙氧基苯基)-4,5-二氢-[1,3]二氧代并[4,5-g][1,2,4]三唑并[4,3-a]喹啉(Tri-FQI1-Cl)，为灰白色固体(两步产率33.9％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.54(s,1H),6.97(s,1H),6.86(d,J＝1.8Hz,1H),6.74(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),6.57(s,1H),6.53(d,J＝8.2Hz,1H),4.64(dd,J＝6.5,6.5Hz,1H),4.13-3.98(m,2H),3.50(dd,J＝16.1,6.5Hz,1H),3.31(dd,J＝16.1,6.5Hz,1H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS:[M+H]+ C19H16ClN3O3的计算值370.088；测量值370.318.UV:λ(max)231.89.
实施例2：细胞生长抑制测定
细胞系和培养条件：人结肠癌细胞Caco-2、HT29和HCT15，人胰腺癌细胞BxPC3、CFPAC-1和CAPAN-2，肝癌细胞SNU423和肾细胞HEK293均获自美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection，Rockville USA)。在分别添加10％胎牛血清(FBS；Invitrogen)和10％小牛血清(FCS；Atlanta Biologicals)的DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基；Corning)中培养QGY-7703细胞和NIH-3T3细胞。U937、BxPC3、HCT15和THP-1细胞在补充有10％胎牛血清(FBS；Invitrogen)的RPMI-1640(Roswell Park Memorial Institute；Corning)中生长。CFPAC-1细胞在补充有10％FBS的Iscove改良Dulbecco培养基(ATCC)中培养。CAPAN-2和HT29细胞在补充有10％FBS的McCoy's 5a培养基中培养。Caco2细胞在Eagle最低必需培养基(ATCC)中生长，所述培养基具有最终浓度为20％的FBS。将所有细胞在恒定湿度中在37℃下于5％CO2中维持。
MTS细胞增殖测定：使用血细胞计数器对细胞计数，并以每孔3000-1500个细胞铺板在96孔的格式中。对于SAR研究，96孔板的每个孔中播种1,500个QGY-7703或NIH-3T3细胞约20小时，然后用适当浓度的化合物或DMSO(媒介物对照)(最终浓度为1％的DMSO)进行处理。关于其它细胞增殖测定，在处理前约20小时，在每个孔中播种3000个BxPC3、CFPAC-1、CAPAN-2、HEK293、HCT15、HT29或SNU423细胞。对于U937和THP-1悬浮细胞，在处理当天将2500个细胞添加到96孔板的孔中。与化合物或媒介物孵育72小时(或者对于BxPC3、CAPAN-2、SNU423，为120hr)后，通过Promega
Figure BDA0002997103560001114
AQueous One Solution细胞增殖测定(用于确定活细胞数的比色法)对细胞生长进行评估。将20μL的
Figure BDA0002997103560001113
AQueous OneSolution试剂直接添加到培养孔中并孵育约1小时，然后使用96孔板阅读器(Opys MRMicroplate Reader)读取490nm处的吸光度。GI50值是根据化合物处理的细胞生长相对于媒介物细胞生长的百分比与化合物浓度的图确定的(GraphPad Prism；非线性回归，对数抑制剂与归一化的响应，斜率可变)。结果示于图10a-图27c中。
表1：在该实施例中使用的示例性代表性癌细胞系。
Figure BDA0002997103560001111
Figure BDA0002997103560001121
细胞热转变测定：如MTS测定中一样培养QGY-7703细胞。将细胞播种到10cm平板中，并使其达到60-80％汇合。胰蛋白酶消化后(0.05％胰蛋白酶-EDTA，Invitrogen)后，将细胞沉淀用冰冷的1×PBS(137mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4、2mM KH2PO4，pH7.2)洗涤两次。通过加入200μL补充有1mM Pefabloc(Sigma-Aldrich)的新鲜制备的冰冷改性RIPA缓冲液(50mM Tris-Cl pH7.4、1％NP-40、0.1％脱氧胆酸钠、0.1％SDS、150mM NaCl、10mMEDTA)将细胞沉淀裂解，并在液氮中快速冷冻，然后在室温下解冻，共三个循环。第三次冷冻/解冻后，将细胞裂解液以20,000×g离心20分钟以澄清。立即处理上清液，或将其保存在-80℃以便将来使用。用二氢喹啉酮(添加2μL 50mM储液；在1％DMSO中最终为500μM)或媒介物(2μL DMSO)对200μL裂解液进行处理，轻轻弹动以混合，并在室温下孵育30分钟。处理后，将裂解物分成20μL的等份试样以进行热变性。将裂解物在给定温度下加热5分钟，然后置于冰上5分钟，然后以20,000×g离心10分钟，以从聚集物中分离出可溶性蛋白质。将10μL含可溶性蛋白的上清液保存在-20℃，以用于免疫印迹分析。将等量的上清液加载到10％聚丙烯酰胺凝胶上。将分离的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。在5％牛奶/TBST(50mMTris-Cl，pH7.5，150mM NaCl，0.1％Tween-20)中将膜封闭，然后在4℃下用一抗(抗LSF(Millipore；在TBST中用5％的牛血清白蛋白1:500稀释)探测。将山羊抗兔HRP-IgG二抗(封闭缓冲液中1:3000)在室温下与膜孵育1小时。用Immobilon Western ChemiluminescentHRP-底物(Millipore)检测蛋白条带，并在Kodak RP X-OMAT Developer上显影。使用ImageJ对免疫印迹进行量化，并使用GraphPad PRISM进行绘图。使用GraphPad PRISM计算量化的蛋白质印迹的曲线下面积(AUC)。计算非参数t-test以测定曲线之间的统计学显著性。使用非线性回归(抑制剂-vs-响应，可变斜率)计算Tm50值。结果示于图28a-图30b。
实施例3：LSF促进了微管相关SET8对α-微管蛋白的赖氨酸甲基化
微管(MT)是主要的细胞骨架组分，在关键的细胞过程中发挥重要作用，例如结构支持、细胞器定位和染色体分离[1，2]。已经报道了许多微管的翻译后修饰(PTM)，所述翻译后修饰有助于微管的功能多样性并影响MT的动力学和组织[3]。这引出了微管蛋白密码的假设，其中，微管蛋白修饰通过募集效应物蛋白并与效应物蛋白相互作用而改变高阶微管结构，从而指定生物学结果。值得注意的是，尽管在平行组蛋白密码假说中，甲基化是最常见且广为人知的修饰，但与其它类型的微管蛋白修饰(例如去酪氨酸化、谷氨酰化、糖基化、乙酰化和磷酸化)相比，对微管蛋白甲基化的研究较少。
SET8/PR-Set7是蛋白质-赖氨酸N-甲基转移酶，其负责高级真核生物中组蛋白和非组蛋白的单甲基化[4]。它的功能特征在于组蛋白H4赖氨酸20特异性单甲基转移酶[5]；这种修饰是转录抑制的特定标记，在有丝分裂期间也富集[6，7]。SET8是细胞增殖、染色体凝集和胞质分裂所必需的，因为缺失或RNAi介导的酶耗竭会损害所有这些功能。特别是以前的发现表明，SET8和H4K20me1是有丝分裂进入所必需的[8]。SET8还介导包括p53在内的其它底物的单甲基化，从而导致p53靶基因的阻遏[9]。然而，如何调控H4K20me1及其如何发挥促进细胞周期进程的功能仍是一个悬而未决的问题，包括可能涉及其它非组蛋白底物的可能性。
转录因子LSF是肝细胞癌(HCC)中的癌基因，在HCC细胞系和患者样品中显著过表达[10]。LSF通常也是细胞周期进程和细胞生存所必需的[11]。最初，LSF被描述为G1/S进程的调节剂[12]，并且对于在G1期晚期诱导编码胸苷酸合酶(TYMS)的基因的表达至关重要。然而，在表征因子喹啉酮抑制剂1(Factor Quinolinone Inhibitor 1，FQI1)(LSF的特异性小分子抑制剂)的作用中，提示LSF进一步参与有丝分裂[13]。FQI1消除LSF的DNA结合和相应的转录活性[15]，以及特定的LSF-蛋白质相互作用[14]，并在多种小鼠模型中抑制HCC肿瘤的生长。在肿瘤细胞系中，FQI1通过有丝分裂缺陷导致细胞死亡。
结果
SET8与微管蛋白直接相互作用
通过质谱分析商品化微管蛋白制剂(纯度为99％)鉴别出预期的相关蛋白(例如MAP1、MAP2)，但令人惊讶的是所述肽还包含SET8(如表2所示)。这引发了SET8是否可以靶向MT相关底物这一问题。实际上，在COS7细胞中过表达GFP-SET8时，大多数GFP-SET8位于细胞质中(图6a)，并且似乎与MT紧密排列。因此，本发明人通过用相关的荧光染料染色与GFP-SET8表达一起来筛选细胞质组分。与ER、高尔基体和肌动蛋白不同，在整个细胞周期的各个阶段，微管蛋白均与SET8明显共定位(图1a)。最明显的是，在G1期，当微管蛋白呈丝状并分布在整个细胞质中时，SET8表现出相同的模式，在合并图像中以黄色来强调。如由先前研究所预期的那样，在S期中，一些SET8也是细胞核的(图1a)。为了确定内源性细胞SET8是否与微管蛋白缔合，本发明人从HEK293T细胞提取物中免疫沉淀了蛋白质复合物。使用针对SET8的抗体，明确地检测到α-微管蛋白，反之，在细胞中表达Flag标记的α-微管蛋白时，SET8与Flag-α-微管蛋白共免疫沉淀(图1b)。另外，尽管在用SET8抗体免疫沉淀时内源性β-微管蛋白并非稳健存在，内源性SET8也确实与Flag标记的β-微管蛋白共免疫沉淀(图1b)。为了确定这些相互作用是否是直接的并确定(map)哪些蛋白质区域相互作用，测试了谷胱甘肽S-转移酶(GST)与人SET8融合的一系列蛋白质与纯化的微管蛋白制剂的体外相互作用，反之，测试了麦芽糖结合蛋白(MBP)与α-微管蛋白融合的一系列蛋白质与从大肠杆菌(E.coli)纯化的SET8的相互作用。GST和MBP下拉测定(pull down assays)表明，纯化的微管蛋白仅与SET8的N端部分相互作用，并且SET8主要直接与α-微管蛋白的C端片段相互作用(图1c)。MBP与β-微管蛋白的融合蛋白未直接与SET8相互作用。总而言之，这些数据证明α-微管蛋白和SET8彼此直接相互作用。
表2.纯化的猪微管蛋白*:得分最高的蛋白质的质谱分析。
Figure BDA0002997103560001141
Figure BDA0002997103560001151
*从脑中纯化的微管蛋白；99％纯。
Figure BDA0002997103560001152
独特肽：共761。
Figure BDA0002997103560001153
总肽：7519；总蛋白质：143；蛋白质FDR：0.00％；One hit wonders：79。
SET8使α-微管蛋白甲基化
SET8历史上被表征为核小体H4K20特异性甲基转移酶，随后被表征为非组蛋白p53的调节剂。然而，由于SET8与α-微管蛋白强烈结合，因此测试了微管蛋白是否为酶的新底物。将纯化的猪微管蛋白与辅助因子S-腺苷-L-[甲基-3H]甲硫氨酸(AdoMet)和纯化的重组GST-SET8孵育。在同时存在SET8和S-腺苷-L-[甲基-3H]蛋氨酸(图2a，泳道3)，对微管蛋白进行放射性标记，单在单独添加微管蛋白或SET8(图2a，泳道2和泳道4)的情况下，并未如此。有趣的是，当反应中还包喊组蛋白H4时，微管蛋白修饰的量减少(图2a，泳道1)，表明组蛋白H4与微管蛋白激烈竞争SET8的甲基化活性。通过添加组蛋白H4，SET8的自甲基化也显著降低。
由于纯化的猪微管蛋白由α-和β-微管蛋白异二聚体组成，因此寻求确定被SET8甲基化的种类。对α-微管蛋白或β-微管蛋白与MBP的重组融合蛋白进行纯化，并将其与SET8以及放射性甲基供体一起孵育。与α/β微管蛋白(猪)和MBP-α-微管蛋白一起孵育时SET8和微管蛋白均被标记(图2b，泳道1和2)，但在添加MBP-β-微管蛋白的情况中仅SET8被修饰(图2b，泳道3)。这些数据表明α-微管蛋白是SET8的靶标。
为了剖析α-微管蛋白的哪些赖氨酸残基被甲基化，在纯化的微管蛋白样品中以及通过体外SET8的情况中，通过质谱对纯化的猪微管蛋白进行分析。作为阴性对照，微管蛋白仅与AdoMet孵育。仅纯化的猪微管蛋白的光谱分析检测到α-微管蛋白上仅有K304单甲基化。在SET8和AdoMet的存在下，α-微管蛋白的另外三个赖氨酸残基K280、K311和K352被单甲基化。与使用重组MBP融合蛋白进行的实验一致，这些数据表明SET8与α-微管蛋白的结合导致至少氨基酸残基K280、K311和K352的甲基化。K311特别受关注，因为其周围序列RHGK与H4(RHRK)和p53(RHKK)中的SET8靶标相似。如所预期的那样，如先前报道的，还观测到来自相同样品的α-微管蛋白上的乙酰化赖氨酸(特别是K40和K124的乙酰化赖氨酸)。
为了测试SET8对α-微管蛋白K311的固有靶向，将跨越K311的肽以及跨越K40的肽(据报道被SETD2甲基化[15])和跨越K304(在纯化的猪微管蛋白中被修饰)的肽在体外与纯化的野生型SET8或无催化活性的SET8(D338A)一起孵育。仅含K311的肽被甲基化，并且如果K311残基被突变(K311A、K311S)或已被修饰(K311me、K311ac)，该活性消失(图2c)。SET8对含α-微管蛋白K311的肽的体外靶向是稳健的(图7a)。尽管在体外组蛋白H3得到甲基化，但在这些实验中仍未有可监测的SETD2对含α-微管蛋白K40的肽的甲基化(图7a)。
综上所述，这些观测结果表明内源性哺乳动物α-微管蛋白含有赖氨酸甲基化，但仍由未知酶介导。另外，SET8甲基转移酶具有使α-微管蛋白(特别是K311处)甲基化的能力。
转录因子LSF与SET8和微管蛋白均相关
DNA结合蛋白募集染色质写作者来修饰组蛋白[16]，表明其它蛋白可将SET8募集至微管以引起微管蛋白修饰的可能性。由于在前中期似乎较少的SET8与微管结合，并且由于用LSF抑制剂处理细胞导致有丝分裂在相似点发生有丝分裂停滞[13]，本发明人认为转录因子LSF是将SET8带至微管蛋白的候选者，也许以建立通过前中期的进程。在体外，重组、纯化的LSF直接与SET8相互作用，如GST下拉测定中所示(图6b)。此外，当GFP-SET8和3XFlag-LSF都在细胞中表达时，它们显著共定位(图6c)。最后，通过共免疫沉淀实验确定了在细胞中LSF是否以内源性水平与SET8驻留在同一复合物中。使用抗-LSF或抗-SET8抗体从提取物中沉淀蛋白质，LSF和SET8确实一起处于复合物中(图3a)。
为了进一步测试LSF是否可以将SET8募集到微管中，研究了LSF-微管蛋白相互作用是否在细胞中发生。进行了几种类型的实验。首先，使生物素标记的LSF在哺乳动物细胞中表达，并通过链霉亲和素珠的下拉对蛋白质复合物进行蛋白质组学分析。如所预期的，在光谱中的肽突出显示为几种LSF结合伴侣(包括旁系同源物LBP1A和LBP9)，但在来自对照链霉亲和素沉淀物的光谱中则并非如此。尽管对于转录因子而言是出乎意料的，通过质谱法也发现了微管蛋白肽，再次占比很高，但在对照中缺乏所述微管蛋白肽。与LSF特异性相关的蛋白质的完全集(～150)的基因本体分析，分别将细胞周期:有丝分裂和细胞骨架:微管确定为最明显过度表现的生物学和组分分类(Benjamini＝1-2×10-3)。第二，通过分析来自猪脑的商品化的、高度纯化的微管蛋白制剂中是否存在LSF，来研究相关的LSF-微管蛋白相互作用的可能性。众所周知，这些制剂含有微管相关蛋白(MAP)。引人注目的是，使用LSF单克隆抗体的免疫印迹确实检测到与LSF共迁移(comigrating)的条带(图3b)。实际上，以这种方式在所有可商购得到的纯化的微管蛋白制剂(>99％至>97％纯的微管蛋白)中都检测到了LSF。最后，通过共免疫沉淀测试了LSF是否与细胞提取物中的微管蛋白相互作用。用抗-LSF抗体沉淀的细胞提取物表明α-微管蛋白稳健共沉淀。作为阳性对照，基于先前的实验，SET8还与细胞提取物中的α-微管蛋白以及与LSF稳健地相互作用(图3c)。
为了确定LSF和α-微管蛋白之间的相互作用是否是直接的并且确定参与它们相互作用的蛋白质上的区域，进行了GST下拉测定。将LSF和α-微管蛋白的各种重叠的GST融合片段分别与纯化的猪微管蛋白或纯化的重组His-LSF一起孵育。纯化的微管蛋白(由α-微管蛋白和β-微管蛋白组成)主要通过其DNA结合结构域(DBD)与LSF直接相互作用(图3d)。使用交互方法，α-微管蛋白通过N端片段和C端片段与LSF直接相互作用(图3e)。综上所述，这些结果表明LSF在体内和体外都与α-微管蛋白直接相互作用，此外虽然LSF是一种转录因子，但它似乎是一种之前未被鉴别出的MAP。
LSF在体外促进微管蛋白的聚合
微管动力学和功能通过其与其它蛋白质(包括微管运动蛋白和非运动微管相关蛋白(MAP))的相互作用来调节[17]。使用标准体外微管蛋白聚合测定测试了LSF是否像其它MAP一样能够调节微管动力学，所述方法通过随时间的光密度来监测聚合的微管的程度。将商品化的纯化的微管蛋白制剂与限制量的LSF或不限量的LSF以140-430:1的微管蛋白:LSF的摩尔比孵育。可重复地，LSF显著提高了微管蛋白聚合的起始速率(图4a)。
LSF小分子抑制剂FQI1抑制LSF与DNA的结合[18]，以及LSF与某些蛋白伴侣的结合[14]。因此，可以预期，FQI1在体内也中断LSF-微管蛋白的相互作用(图4b)。因此，FQI1用于探寻LSF-微管蛋白相互作用的功能。实际上，FQI1在体外抑制微管蛋白聚合(图4c)，这与纯化的微管蛋白制剂中LSF的存在相一致(图3b)。
由于在体外增强微管蛋白聚合的因素并不总是生物学相关的，我们测试了FQI1是否会扰乱细胞中的微管。为了限制FQI1抑制LSF蛋白与蛋白的相互作用的效果但不影响其转录程序，我们在细胞周期中对细胞进行同步化，然后在进入有丝分裂之前的较短时间间隔内添加FQI1。在这些条件下，如本发明人先前报道的[12]，细胞停滞在有丝分裂中，具有凝集的染色体(图4d、图8a-图8b)。这伴随着在FQI1处理的细胞中多星状体形成的浓度依赖性增加，而在媒介物处理的细胞中未有可检测的多星状体(图4d、图8c)。为了测试这些有丝分裂缺陷是否确实是由于FQI1的非转录结果引起的，进行了一项冲洗实验，其中，使经FQI1处理的细胞停在有丝分裂中，然后将化合物移除。在有丝分裂期间，编码基因的RNA聚合酶II依赖性转录在很大程度上受到抑制[19-21]，尽管最近的数据表明，对G1期至关重要的基因的有限转录仍然存在[22]。如果有丝分裂停滞是由于对有丝分裂进程至关重要的LSF靶基因的调节异常引起的，那么这些基因的转录将不能在有丝分裂中重新启动，并且这种缺陷将是不可逆的。与这种情况相反，从停滞在有丝分裂的FQI1处理的细胞中冲洗掉化合物导致细胞通过有丝分裂和细胞分裂而继续发展(图8d)。因此，FQI1介导的有丝分裂缺陷(包括纺锤体缺陷)似乎是由于非转录机制所致。考虑到FQI1破坏了LSF和伴侣蛋白之间的相互作用，特别是与微管蛋白的相互作用(图4b)，这些结果与LSF-微管蛋白的相互作用促进对于通过有丝分裂的进程至关重要的微管动力学相一致。
LSF促进了由SET8进行的微管蛋白甲基化
微管蛋白、SET8和LSF之间的物理相互作用使本发明人推测LSF可调节SET8对微管蛋白甲基化的能力。为了检验该假设，在增加浓度的纯化的His-LSF存在下，将重组SET8和甲基供体与微管蛋白一起孵育(图5a)。实际上，微管蛋白甲基化随着LSF从LSF:SET8的摩尔比从1:4到2:1的增加而增加，这表明LSF可以介导通过SET8进行的微管蛋白甲基化。使用重组MBP-α-微管蛋白作为底物的类似实验提供了相同的结果(图9a)。将FQI1添加到包含SET8、甲基供体和微管蛋白但不包含LSF的反应中时，微管蛋白甲基化降低(图5b，比较泳道1和2)，这与微管蛋白制剂中LSF的存在及其增强SET8依赖性微管蛋白甲基化的能力一致。FQI1还抑制了外源添加的LSF增强由SET8进行的微管蛋白甲基化的能力(图9b，比较泳道5、6与泳道1)。为了排除在FQI1存在下直接抑制SET8催化活性的可能性，使用组蛋白H4作为底物代替微管蛋白进行了平行实验；在这种情况下，FQI1不抑制底物的甲基化(图5c)。合起来看，数据表明LSF是微管蛋白甲基化的正调节剂，FQI1消除了微管蛋白-LSF相互作用(图4c)，并阻断了通过SET8进行的微管蛋白甲基化。这些数据支持LSF将SET8募集至微管蛋白的模型(图5e)。
讨论
已经很好地确定了微管的许多翻译后修饰，包括负责这些修饰的酶。然而，到目前为止，关于它们的生物学作用仅获得了有限的见解，并且微管蛋白PTM通常仍然不适合直接的体外功能研究。此外，只有一项研究鉴别了微管的赖氨酸甲基化[15]。在这种情况下，Walker的小组报道了，SETD2(称为染色质激活标记H3K36me3的组蛋白甲基转移酶)还在K40处使α-微管蛋白甲基化。此外，SETD2介导的微管蛋白甲基化的丧失导致有丝分裂微管缺陷和基因组不稳定。在此，本发明人描述了α-微管蛋白的独特的、新型的赖氨酸甲基化，并鉴别出负责该修饰的酶为SET8。重要的是，他们还证明了令人惊讶的发现：转录因子LSF兼任(moonlight)微管相关蛋白，并且它可以将SET8募集到微管蛋白中以促进其修饰。这种募集机制反映了组蛋白写作者针对染色质的靶向机制，在微管蛋白编码和组蛋白的产生之间提供了进一步的并行性。
通常认为，微管蛋白PTM调控微管细胞骨架内的蛋白-蛋白相互作用，从而调控细胞中的信号传导事件。迄今为止，已经表征了各种各样的微管相关蛋白(MAP)，许多微管相关蛋白使微管稳定和不稳定，与分子马达和微管的偶联有关，并在纺锤体形成中起关键作用[23]。在此，表明LSF在体外促进微管蛋白聚合，并且LSF抑制导致有丝分裂中有缺陷的纺锤体形成，暗示这是LSF与微管蛋白直接结合的结果。表明抑制LSF-微管蛋白相互作用明显影响纺锤体形成的数据表明，LSF本身或由SET8进行的赖氨酸甲基化调节MT动力学。
适当的细胞周期进程需要对SET8水平进行精确调节，这表明SET8和H4K20me1可以作为细胞周期进程的新型调节剂，尽管以前的重点在于调控S期[24]。通过证明SET8也可以使α-微管蛋白甲基化，必须将非组蛋白底物的作用视为SET8介导的细胞周期调控(尤其是SET8最丰富时的有丝分裂的调控)的原因。
有丝分裂被认为是抑制癌症的易受攻击目标[25]。有鉴于此，值得注意的是，LSF促进了肝细胞癌(HCC)的致癌作用，HCC是全球第六大最常见的癌症，也是全球第二大与癌症相关的死亡原因[26]。LSF在人HCC细胞系和90％以上的人HCC患者样品中过表达，显示出与疾病的阶段和等级显著相关[10]。最初的LSF先导抑制剂(initial lead LSFinhibitor)FQI1在体外诱导侵袭性HCC细胞系中的凋亡，并在多种小鼠HCC模型中显著抑制肿瘤生长，而对正常组织无可观测的毒性[12、15]。LSF与微管蛋白和SET8相互作用以及FQI1破坏LSF-微管蛋白相互作用的这些新发现可能与LSF抑制剂对HCC细胞和肿瘤的影响有关。与正常肝相比，HCC肿瘤样品中特定微管蛋白(例如TUBA1B)和SET8的表达均上调[27、28]。此外，需要SET8来维持各种癌症类型的恶性表型[29]。鉴于当前缺乏有效的治疗方法，进一步研究LSF-微管蛋白-SET8途径与肝癌的相关性可能有助于靶向且有效的治疗。
方法
细胞培养、免疫沉淀和免疫荧光
HEK293T、HeLa和COS7细胞在补充有10％FBS的DMEM培养基中培养。在37℃下用2.5μM FQI1对HEK293T细胞进行FQI1处理24小时。如前所述[30、31]进行免疫沉淀(IP)和免疫荧光实验。为了免疫沉淀，将1mg的总HEK293T细胞提取物与5μg的抗SET8抗体(ActiveMotif)或抗LSF抗体(Millipore)一起孵育。按照制造商的稀释建议，用抗-α微管蛋白、抗-β微管蛋白(SigmaT9026、T8328)、抗SET8或抗LSF(BD)抗体对免疫沉淀进行印迹。细胞提取物也用正常IgG(Cell Signaling Technology)免疫沉淀，作为所有IP实验的阴性对照。
为了检测α-微管蛋白和SET8的共定位，使COS7细胞在盖玻片上生长并用GFP-SET8表达质粒转染。用多聚甲醛固定细胞后，将细胞与抗-α微管蛋白一起孵育，并使用共聚焦显微镜(Zeiss LSM510)和与Alexa Fluor 488偶联的抗小鼠IgG(Morlecular Probes)一起进行可视化。为了检测SET8和LSF的共定位，取而代之的是用GFP-SET8和3XFlag-LSF表达质粒共转染COS7细胞；通过小鼠抗FLAG抗体(F3165，Sigma-Aldrich)检测标记LSF的表位，并用Alexa Fluor 488偶联的抗小鼠IgG(Morlecular Probes)进行可视化。DAPI用于将核DNA染色。
GST和MBP下拉测定
将LSF、SET8和α-微管蛋白cDNA克隆到pGEX-5X-1载体(GE Healthcare)或pMalC4X(NEB)中，并使用谷胱甘肽Sepharose珠(GE Healthcare)或直链淀粉树脂(amylose resin，NEB)捕获GST标记的蛋白或MBP标记的蛋白。将含有10μg融合蛋白的Sepharose珠与纯化的微管蛋白(MP-biomedical)，以及从大肠杆菌中纯化的重组His标记的LSF或SET8一起在4℃下孵育2小时。通过10-20％SDS-PAGE将与珠结合的蛋白质解离。LSF、SET8和微管蛋白分别通过使用抗LSF(BD)、抗SET8(Active motif)和抗-α微管蛋白(Sigma)的蛋白质印迹进行可视化。
微管蛋白聚合测定
根据制造商的条件，使用来自Millipore(17-10194)或Cytoskeleton(仅FQI1测定)的体外聚合测定试剂盒进行体外微管蛋白聚合的定量测定。对于Millipoure试剂盒，在最终体积为70μL的1X PB-GTP溶液中将解冻的微管蛋白与纯化的His-LSF、His-SET8蛋白或FQI1混合，然后将96孔板转移至预热(37℃)的SpectraMax M5酶标仪，用于读取UV-可见吸光度。微管蛋白聚合之后，在350nm下每1分钟测量浊度变化(光散射)，持续1h。
体外甲基化测定
将1μg重组GST-SET8(在50％甘油中)和2μg纯化的微管蛋白(MP-Bioscience)在室温下与放射性标记的[3H]AdoMet一起孵育过夜。如所示，将重组His-LSF蛋白或FQI1抑制剂加入反应中。通过10％Tricine Gel(Invitrogen)电泳分离样品，并用考马斯亮蓝对凝胶进行染色，并与EN3HANCE(PerkinElmer)溶液进行孵育。将凝胶干燥并暴露于放射自显影胶片1周。对于肽分析，从AnaSpec Inc.合成了α-微管蛋白的特定肽。序列列于表3。2μg每种肽和2μg纯化的SET8或全长SETD2(Active Motif)与放射性标记的[3H]AdoMet在室温下孵育过夜。将样品点到P81过滤器(Whatman 3698325)上，并用0.3M碳酸氢铵将过滤器洗涤3次。使用液体闪烁计数确定掺入的[3H]CH3的比例。
表3.α-微管蛋白肽列表
Figure BDA0002997103560001221
Figure BDA0002997103560001231
质谱分析
将重组的GST-SET8和纯化的微管蛋白(MP-Bioscience)与非放射性AdoMet在室温下孵育过夜，并通过10％Tricine Ge1用电泳分离样品。切离的凝胶带用枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶消化。通过nanoLC-MS(Easyn1000-Qexactive)对各个消化物进行分析，并使用ProteomeDiscoverer2.0和SwissProt数据库(2015年6月)进行数据分析。
参考文献
1.Janke，C.，The tubulin cide：molecular components，readout mechanisms，and functions.J Cell Biol，2014.206(4)：p.461-72.
2.Verhey，K.J.and J.Gaertig，The tubulin code.Cell Cycle，2007.6(17)：p.2152-60.
3.Song，Y.and S.T.Brady，Post-translational modifications of tubulin：pathways to functional diversity of microtubules.Trends Cell Biol，2015.25(3)：p.125-36.
4.Dillon，S.C.，et al.，The SET-domain protein superfamily：proteinlysine methyltransferases.Genome Biol，2005.6(8)：p.227.
5.Fang，J.，et al.，Purification and functional characterization ofSET8，a nucleosomal histone H4-lysine 20-specific methyltransferase.Curr Biol，2002.12(13)：p.1086-99.
6.Nishioka，K.，et al.，PR-Set7 is a nucleosome-specificmethyltransferase that modifies lysine 20 of histone H4 and is associatedwith silent chromatin.Mol Cell，2002.9(6)：p.1201-13.
7.Rice，J.C.，et al.，Mitotic-specific methylation of histone H4 Lys 20follows increased PR-Set7 expression and its localization to mitoticchromosomes.Genes Dev，2002.16(17)：p.2225-30.
8.Wu，S.and J.C.Rice，A new regulator of the cell cycle：the PR-Set7histone methyltransferase.Cell Cycle，2011.10(1)：p.68-72.
9.Shi，X.，et al.，Modulation of p53 function by SET8-mediatedmethylation at lysine 382.Mol Cell，2007.27(4)：p.636-46.
10.Yoo，B.K.，et al.，Transcription factor Late SV40 Factor(LSF)functions as an oncogene in hepatocellular carcinoma.Proc Natl Acad Sci U SA，2010.107(18)：p.8357-62.
11.Arand，J.，et al.，In vivo control of CpG and non-CpG DNA methylationby DNA methyltransferases.PLoS Genet，2012.8(6)：p.e1002750.
12.Powell，C.M.，et al.，Inhibition of the mammalian transcriptionfactor LSF induces S-phase dependent apoptosis by downregulating thymidylatesynthase expression.EMBO J，2000.19(17)：p.4665-75.
13.Rajasekaran，D.，et al.，Small molecule inhibitors of Late SV40Factor(LSF)abrogate hepatocellular carcinoma(HCC)：Evaluation using anendogenous HCC model.Oncotarget，2015.6(28)：p.26266-77.
14.Chin，H.G.，et al.，Transcription factor LSF-DNMT1complexdissociation by FQI1 leads to aberrant DNA methylation and geneexpression.Oncotarget，2016.7(50)：p.83627-83640.
15.Park，I.Y.，et al.，Dual Chromatin and Cytoskeletal Remodeling bySTD2.Cell，2016.166(4)：p.950-962.
16.Zhang，T.，S.Cooper，and N.Brockdorff，The interplay of histonemodifications-writers that read.EMBO Rep，2015.16(11)：p.1467-81.
17.Janke，C.and J.C.Bulinski，Post-translational regulation of themicrotubule cytoskeleton：mechanisms and functions.Nat Rev MolCell Biol，2011.12(12)：p.773-86.
18.Grant，T.J.，et al.，Antiproliferative small-molecule inhibitors oftranscription factor LSF reveal oncogene addiction to LSF in hepatocellularcarcinoma.Proc Natl Acad Sci U S A，2012.109(12)：p.4503-8.
19.Delcuve，G.P.，S.He，and J.R.Davie，Mitotic partitioning oftranscription factors.J Cell Biochem，2008.105(1)：p.1-8.
20.Gottesfeld，J.M.and D.J.Forbes，Mitotic repression of thetranscriptional machinery.Trends Biochem Sci，1997.22(6)：p.197-202.
21.Long，J.J.，et al.，Repression of TFIIH transcriptional activity andTFIIH-associated cdk7 kinase activity at mitosis.Mol Cell Biol，1998.18(3)：p.1467-76.
22.Palozola，K.C.，et al.，Mitotic transcription and waves of genereactivation during mitotic exit.Science，2017.358(6359)：p.119-122.
23.Stanton，R.A.，et al.，Drugs that target dynamic microtubules：a newmolecular perspective.Med Res Rev，2011.31(3)：p.443-81.
24.Milite，C.，et al，The emerging role of lysine methyltransferaseSETD8 in human diseases.Clin Epigenetics，2016.8：p.102.
25.Komlodi-Pasztor，E.，D.L.Sackett，and A.T.Fojo，Inhibitors targetingmitosis：tales of how great drugs against a promising target were brought downby a flawed rationale.Clin Cancer Res，2012.18(1)：p.51-63.
26.Laursen，L.，A preventable cancer.Nature，2014.516(7529)：p.S2-3.
27.Lu，C.，et al.，Increased alpha-tubulin1b expression indicates poorprognosis and resistance to chemotherapy in hepatocellular carcinoma.Dig DisSci，2013.58(9)：p.2713-20.
28.Guo，Z.，et al.，A polymorphism at the miR-502 binding site in the3′-untranslated region of the histone methyltransferase SET8 is associatedwith hepatocellular carcinoma outcome.Int J Cancer，2012.131(6)：p.1318-22.
29.Hou，L.，et al.，SET8 induces epithelialmesenchymal transition andenhances prostate cancer cell metastasis by cooperating with ZEB1.Mol MedRep，2016.13(2)：p.1681-8.
30.Andrews，N.C.and D.V.Faller，A rapid micropreparation technique forextraction of DNA-binding proteins from limiting numbers of mammaliancells.Nucleic Acids Res，1991.19(9)：p.2499.
31.Estève，P.O.，et al.，Direct interaction between DNMT1 and G9acoordinates DNA and histone methylation during replication.Genes Dev，2006.20(22)：p.3089-103.
实施例4：LSF促进了微管相关SET8对α-微管蛋白的赖氨酸甲基化
微管(MT)是主要的细胞骨架组分，在关键的细胞过程中发挥重要作用，例如结构支持、细胞器定位和染色体分离[1，2]。已经报道了许多微管的翻译后修饰(PTM)，所述翻译后修饰有助于微管的功能多样性并影响MT的动力学和组织[3]。这引出了微管蛋白密码的假设，其中，微管蛋白修饰通过募集效应物蛋白并与效应物蛋白相互作用而改变高阶微管结构，从而指定生物学结果。值得注意的是，尽管在平行组蛋白密码假说中，甲基化是最常见且广为人知的修饰，但与其它类型的微管蛋白修饰(例如去酪氨酸化、谷氨酰化、糖基化、乙酰化和磷酸化)相比，对微管蛋白甲基化的研究较少。
实施例5：示例性化合物FQI-34和FQI-37的细胞生长抑制和细胞热转变测定
细胞系和培养条件：人结肠癌细胞Caco-2、HT29和HCT15，人胰腺癌细胞BxPC3、CFPAC-1和CAPAN-2，肝癌细胞SNU423和肾细胞HEK293均获自美国模式培养物保藏所(Rockville USA)。HeLa、DLD1、U937、THP-1和NIH3T3细胞获得自ATCC。Huh7细胞获得自日本癌症资源库(Japanese Cancer Resources Bank)。在分别补充有10％胎牛血清(FBS；Invitrogen)和10％小牛血清(FCS；Atlanta Biologicals)的DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基；Corning)中培养Hela细胞、Huh7、DLD1和NIH-3T3细胞。U937、BxPC3、HCT15、SNU423和THP-1细胞在补充有10％胎牛血清(FBS；Invitrogen)的RPMI-1640(Roswell ParkMemorial Institute；Corning)中生长。CFPAC-1细胞在补充有10％FBS的Iscove改良Dulbecco培养基(ATCC)中培养。CAPAN-2和HT29细胞在补充有10％FBS的McCoy′s 5a培养基中培养。Caco2细胞在Eagle最低必需培养基(ATCC)中生长，所述培养基具有最终浓度为20％的FBS。将所有细胞在恒定70％湿度中在37℃下于5％CO2中维持。
MTS细胞增殖测定：使用胰蛋白酶(0.25％，3分钟，ATCC)将细胞从平板上脱离，使用血细胞计数器进行计数，并以每孔3000-1500个细胞铺板于以96孔模式中。将细胞接种在96孔板的内孔中，并将培养基添加至外孔(空白)。对于NIH-3T3，将1500个细胞接种到96孔板的内孔中，并在20小时后用适当浓度的化合物或DMSO(媒介物对照)(终浓度为1％的DMSO)对细胞进行处理。对于其它贴壁细胞，在处理前约20h，将3000个HeLa、BxPC3、CFPAC-1、CAPAN-2、HEK293、HCT15、HT29、CaCo2、DLD1、Huh7或SNU423细胞接种到每个孔中。对于U937和THP-1悬浮细胞，在处理当天将2500个细胞添加到96孔板的孔中。与化合物或媒介物孵育72小时(或者对于BxPC3、CAPAN-2、SNU423，为120hr)后，通过Promega
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AQueous One Solution细胞增殖测定(用于确定活细胞数的比色法)评估细胞的生长。将20μL
Figure BDA0002997103560001263
AQueous One Solution试剂直接添加到培养孔中并孵育约1小时，然后使用96孔板阅读器(Opys MR Microplate Reader)读取490nm处的吸光度。GI50值根据化合物处理的细胞生长相对于媒介物细胞生长的百分比与化合物浓度的图来确定(GraphPadPrism；非线性回归，对数抑制剂对归一化响应，斜率可变)。化合物的结构如下所示，GI50值汇总在表4中。
Figure BDA0002997103560001261
Figure BDA0002997103560001271
Figure BDA0002997103560001281
从表4中总结的数据可以看出，在除HT-29一个以外的所有细胞系中，外消旋的FQI-37比FQI-34更有效(GI50较低)，其中，FQI-37和FQI-34均进行了测试。另外，FQI-37的S异构体相对于FQI-37的R异构体更有效。而且，FQI-37的R异构体相对于FQI-35的R异构体更有效。
细胞热转变测定1,2：将Huh7细胞在补充有10％PBS的DMEM培养基中培养。将细胞接种到T75烧瓶中，并使其达到60-80％汇合。胰蛋白酶消化(0.25％胰蛋白酶-EDTA，ATCC)后，将细胞沉淀重悬于培养基中。使用血细胞计数器计数细胞，将约一百万个细胞接种在两个10cm的平板中(为方便细胞脱离技术)。使细胞粘附于板过夜。20小时后，抽吸出旧培养基，并用补充有50uM药物的新培养基替换或添加0.1％最终DMSO。处理细胞三小时，抽吸出培养基并用补充有50uM药物或0.1％DMSO的PBS洗涤。使用细胞刮板，通过添加5mL新鲜制备的PBS使细胞脱离，该PBS补充有1mM Pefabloc(Sigma-Aldrich)和50uM FQI或0.1％DMSO。将细胞以1200rpm沉淀，然后重悬于500ul PBS缓冲液中，该缓冲液含1mM Pefabloc和药物或DMSO。为每个FQI处理细胞和对照细胞准备9个等分试样的50uL细胞悬液。将样品热处理3分钟(T100 Biorad热循环仪)，然后在室温下冷却3分钟。孵育3分钟后，将样品在液氮中速冻。将以下过程重复3次：在23℃的加热区块中解冻管，然后以速度4短暂涡旋8秒(VWR，迷你涡旋)。最终冷冻后，将解冻的裂解物以20,000xg离心10分钟，以从聚集物中分离出可溶性蛋白。将45μL含可溶性蛋白的上清液在-80℃保存用于免疫印迹分析。将等量的上清液(18uL)加载到10％聚丙烯酰胺凝胶上。将分离的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。将膜在5％牛奶/TBST(50mM Tris-Cl，pH7.5，150mM NaCl，0.1％Tween-20)中封闭，然后在4℃下用一抗(anti-LSF(BD bioscience；在TBST中的5％牛奶中以1:1000稀释)进行探测。将山羊抗小鼠HRP-IgG二抗(在5％牛奶中1:7000)在室温下与膜孵育1小时。用Immobilon Western化学发光HRP-底物(Millipore)检测蛋白条带，并在KodakRPX-OMAT显影剂或Sapphire成像仪上显影。使用Image J对免疫印迹进行量化，并使用GraphPad PRISM进行绘图。使用GraphPad PRISM计算量化的蛋白质印迹的曲线下面积(AUC)。计算非参数t检验以确定曲线之间的统计学显著性。使用非线性回归(抑制剂-vs-响应，可变斜率)计算Tm50值。结果示于图31a-图32b。
实施例6：FQI34/FQI1比较
将RPE-hTERT Flp-In细胞在无血清DMEM:F12培养基中孵育24小时以使细胞在G0/G1中同步化。用含有10％胎牛血清的DMEM:F12培养基刺激细胞以重新进入细胞周期。24小时后，将细胞用DMSO(媒介物)、FQI1(2.5μM或5μM)或FQI34(250nM或500nM)处理1小时。将细胞用1×磷酸盐缓冲盐水洗涤两次，并在室温下用PHEM(3.7％甲醛，在100mM PIPES中，pH6.8，10m MEGTA，1mM氯化镁和0.2％TritonX-100)固定10分钟。使用小鼠抗α-微管蛋白抗体(Fisher#62204)对固定的细胞进行α-微管蛋白染色。二抗是：DMSO/FQI1样品-与Alexa546(ThermoFisher#A11003)缀合的山羊抗小鼠IgG；FQI34样品-与德克萨斯红(Fisher#T-862)缀合的山羊抗小鼠IgG。DNA用Hoechst 33342染色。使用Nikon NiE，用40X物镜对细胞进行成像，并使用DS-Qi1Mc 12位相机捕获图像。使用Fiji软件生成比例尺和合并图像。
如所说明，与指示浓度的FQI1或FQI34相比，在用DMSO(媒介物)处理的RPE-hTERTFlp-In细胞中，DNA和α-微管蛋白的免疫荧光图像示于图33中。可见，与FQI1一样，FQI34会导致凝集，但染色体未对齐且纺锤体被破坏。

Claims (20)

1.一种化合物，所述化合物选自于以下化合物：
(i)式(I)：
Figure FDA0002997103550000011
其中：
R1为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；
R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；
R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个RA和RB独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组，以及
n为2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐；
(ii)式(II)：
Figure FDA0002997103550000021
其中：
R1、R2、R3和R4各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者R2和R3一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R5为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；
R6和R7各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个RA和RB独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐；
(iii)式(III)：
Figure FDA0002997103550000031
其中：
Z为NR15或CR16R17；
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R18为O、S或NR19A；
R19为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基、杂芳基或卤素；或者R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基；
R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐，
条件是：
(i)当R18为O时，则n不为1或Z为NR15；或者
(ii)当Z为CR16R17且R18为O时，则R19和R19A与它们所连接的氮一起形成任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基，或R13为被OR3A取代的芳基，其中，R3A为环基；以及
(iv)式(IV)：
Figure FDA0002997103550000041
其中：
Z为NR15或CR16R17；
R13、R14、R15、R16和R17各自独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、OR3A、SR3A、SO2R3A、NR3AR4A、卤素、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；或者R14和R16一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R18为NQ1Q2，其中，Q1和Q2独立地选自于由任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代芳基、烷基、烯基、炔基、环烷基或氢所组成的组，或者Q1和Q2与它们所连接的氮一起可形成杂环或杂芳基，所述杂环基或杂芳基可任选地被卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代；
R20和R21各自独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；
R3A和R4A各自独立地选自于由氢、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、环烷基、杂环基、C1-C8卤代烷基、C1-C8杂烷基、杂芳基和芳基所组成的组，其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、卤代烷基、杂烷基、杂芳基和芳基可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基或C1-C6烷氧基取代；
各个R22和R23独立地选自于由氢、卤素、OR3A、NR3AR4A、SR3A、SO2R3A、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、芳基和杂芳基所组成的组；以及
n为1、2、3或4，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的芳基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、C2-C8烯基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基取代的芳基。
4.如权利要求1所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个OR3A取代并任选地进一步被以下取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
5.如权利要求4所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的苯基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6烷氧基、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
6.如权利要求5所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个如下基团取代的苯基：卤素、氨基(NH2)、单(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基。
7.如权利要求6所述的化合物，其中，R1和R13独立地为被至少一个C1-C6烷氧基以及至少一个卤素或二(C1-C6烷基)氨基取代的苯基。
8.如权利要求1所述的化合物，其中，R1和R13独立地选自于由
Figure FDA0002997103550000061
所组成的组，其中，R8为C1-C6烷基或C1-C8环烷基；R9和R10独立地为H或C1-C6烷基；并且R11为卤素或C1-C6卤代烷基。
9.如权利要求1所述的化合物，其中，R2、R3、R4、R14、R15、R16和R17独立地选自于由H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷氧基所组成的组。
10.如权利要求9所述的化合物，其中，R2、R3和R4为H；或R14为H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基或C1-C6烷氧基，R15为C1-C6烷基且R16和R17为H。
11.如权利要求1所述的化合物，其中，R5和R19独立地为氢或C1-C6烷基。
12.如权利要求1所述的化合物，其中，R6、R7、R20和R21独立地选自于由氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基所组成的组。
13.如权利要求1所述的化合物，其中，各个RA、RB、R22和R23独立地为H、Br、Cl、F或I。
14.如权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物选自于由以下所组成的组：
Figure FDA0002997103550000071
Figure FDA0002997103550000072
15.一种用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的如权利要求1所述的化合物。
16.如权利要求15所述的方法，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、造血系统的癌症、子宫内膜的癌症、宫颈癌、上消化道的癌症、胃癌、肝癌和小肠的癌症所组成的组。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述癌症为肝细胞癌(HCC)、结肠癌、胰腺癌、造血癌或宫颈癌。
18.一种抑制细胞中微管蛋白甲基化或调节染色质/细胞骨架修饰的方法，所述方法包括向所述细胞给予有效量的晚期SV40因子抑制剂。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述晚期SV40因子抑制剂为如权利要求1所述的化合物。
20.如权利要求18所述的方法，其中，所述LSF抑制剂为式(V)的化合物：
Figure FDA0002997103550000081
其中：
R24为被至少一个C1-C6烷氧基以及任选的二(C1-C24烷基)氨基、卤素或C2-C8烯基取代的芳基，其中，所述取代的芳基可任选地进一步被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4杂烷基、二(C1-C24烷基)氨基或它们的组合取代；
R25和R26为氢，或者R25和R26一起在它们所连接的碳之间形成第二键；
R27为氢；
R28选自于由氢和C1-C6烷基所组成的组；
R29和R30各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组；
R31和R32各自独立地选自于由氢、F、Br、Cl和I所组成的组，
或其对映异构体、前药、衍生物和药学上可接受的盐。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021150835A1 (en) * 2020-01-24 2021-07-29 Trustees Of Boston University Heterocyclic lsf inhibitors and their uses
WO2022051388A2 (en) * 2020-09-01 2022-03-10 Trustees Of Boston University Quinolin-2(1h)-one inhibitors of late sv40 factor

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012027392A2 (en) * 2010-08-24 2012-03-01 Brigham Young University Antimetastatic compounds
US20170044175A1 (en) * 2010-10-13 2017-02-16 Trustees Of Boston University Inhibitors of late sv40 factor (lsf) as cancer chemotherapeutics

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998033067A1 (en) 1997-01-23 1998-07-30 University Of Maryland Biotechnology Institute Transcription factors that repress hiv transcription and methods based thereon
WO1998036641A1 (en) 1997-02-20 1998-08-27 The Schepens Eye Research Institute, Inc. Control of il4 production as a therapeutic regulator of immune function
US6566372B1 (en) 1999-08-27 2003-05-20 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Bicyclic androgen and progesterone receptor modulator compounds and methods
KR100908418B1 (ko) 2001-06-20 2009-07-21 액티버스 파마 컴퍼니 리미티드 퀴놀리논 유도체 의약 조성물 및 그의 제조 방법
WO2003000266A1 (en) 2001-06-21 2003-01-03 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Novel quinolines and uses thereof
US6822097B1 (en) 2002-02-07 2004-11-23 Amgen, Inc. Compounds and methods of uses
WO2006034003A2 (en) 2004-09-17 2006-03-30 Whitehead Institute For Biomedical Research Compounds, compositions and methods of inhibiting a-synuclein toxicity
US20100004277A1 (en) 2006-01-26 2010-01-07 Foldrx Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating protein trafficking
CN101410384A (zh) 2006-01-26 2009-04-15 弗尔德里克斯制药股份有限公司 调节蛋白质运输的化合物和方法
CA2652634A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-29 Amphora Discovery Corporation Certain substituted quinolones, compositions, and uses thereof
PE20110574A1 (es) 2008-10-29 2011-08-11 Hoffmann La Roche Derivados de fenilamida y de piridilamida como agonistas de gpbar1
WO2011123427A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Virginia Commonwealth University Treatment of cancer by inhibiting activity or expression of late sv-40 factor
CN103347520A (zh) 2010-10-13 2013-10-09 波士顿大学管理委员会 用作癌症化学治疗的晚期sv40因子（lsf）的抑制剂
US9802948B2 (en) * 2010-10-13 2017-10-31 Trustees Of Boston Univeristy Inhibitors of late SV40 factor (LSF) as cancer chemotherapeutics
CN103906751A (zh) * 2011-10-02 2014-07-02 波士顿大学董事会 作为晚期SV40因子（LSF）抑制剂用于治疗癌症的[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]喹啉-6(5H)-硫酮和[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g][1,2,4]三唑并[1,5-a]喹啉衍生物
CN115028617A (zh) 2016-05-24 2022-09-09 基因泰克公司 Cbp/ep300的杂环抑制剂及其在治疗癌症中的用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012027392A2 (en) * 2010-08-24 2012-03-01 Brigham Young University Antimetastatic compounds
US20170044175A1 (en) * 2010-10-13 2017-02-16 Trustees Of Boston University Inhibitors of late sv40 factor (lsf) as cancer chemotherapeutics

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