KR20170070140A - 암을 치료하기 위한 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 치료학적 유효량의 제스트 동족체 2 인핸서(EZH2) 억제제와 세포를 접촉시키거나 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 피험체에 투여함으로써, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2의 활성에 의해 특징지어지는 질환, 예를 들어 면역 회피, 암-세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 감소한 발현 또는 암의 증상의 치료 또는 완화를 필요로 하는 피험체 또는 세포에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공한다.

Description

암을 치료하기 위한 방법{METHOD FOR TREATING CANCER}
관련 출원들
본 출원은 2014년 10월 16일 출원된 미국 특허 출원 62/064,948 및 2014년 10월 17일 출원된 미국 특허 출원 62/065,590에 대한 우선권 및 이익을 주장하며, 이들 출원 각각의 내용은 전체가 본원에 참조로 포함되어 있다.
질병 연관 크로마틴 변형 효소(disease-associated chromatin-modifying enzyme)(예를 들어, EZH2)는 질병, 예를 들어 증식성 질환, 대사 질환 및 혈액 질환에 있어서 작용을 한다. 그러므로, EZH2의 활성을 조정할 수 있는 소분자의 개발에 대한 필요가 존재한다.
본 발명은 치료학적 유효량의 제스트 동족체 2 인핸서(EZH2)와 세포를 접촉시키거나 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 피험체에 투여함으로써, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2의 활성 및/또는 이의 발현에 의해 특징지어지는 질환, 예를 들어 면역 회피, 암-세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 감소한 발현 또는 암의 증상의 치료 또는 완화를 필요로 하는 피험체 또는 세포에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공한다.
특정 양태에서, 본 방법은 세포와 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포 내에서 면역 회피를 억제하는 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 세포 유도성 면역 부전의 치료 및/또는 교정을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응의 조장, 증가 또는 유도를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 암 세포와 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포 내에서 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 발현을 증가시키는 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 염증의 증가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 세포 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 (1) 피험체로부터 생체 시료를 얻는 단계; 및 (2) 대조군 시료와 비교되었을 때 생체 시료에서 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능에 대한 가능성 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보일 경우 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 대조군 시료와 비교되었을 때 피험체로부터 얻은 생체 시료에서 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능에 대한 가능성의 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 만일 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보이면 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
특정 양태에서, 본 방법은 (1) 제1 생체 시료와 제2 생체 시료를 피험체로부터 얻는 단계; (2) 제2 생체 시료와 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계; (3) 상기 제1 생체 시료 및 제2 생체 시료를 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현에 대해 검정하는 단계; 및 (4) 제1 생체 시료 중 MHC의 발현과 제2 생체 시료 중 MHC의 발현을 비교하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능의 스크리닝을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 것에 관한 것이다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 만일 제2 생체 시료에서의 MHC의 발현이 제1 생체 시료에서의 MHC의 발현과 비교되었을 때 증가하면 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
상기 양태들의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성을 포함한다.
상기 양태들의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)를 포함한다.
상기 양태들의 구현예들에서, 전좌는 SS18-SSX 융합 유전자를 유발한다.
상기 양태들의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 INI1(본원에서 BAF47, SNF5 또는 SMARCB1이라고도 지칭됨)의 감소한 기능 또는 발현을 보인다.
상기 양태들의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 INI1의 감소한 기능 또는 발현을 보인다.
상기 양태들의 구현예들에서, EZH2 억제제는 하기 화학식을 가지는 화합물 A(본원에서 E7438 또는 EPZ-6438 또는 타제메토스타트라고도 지칭됨), 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 입체이성체이다:
Figure pct00001
상기 양태들의 구현예들에서, EZH2 억제제는
Figure pct00002
및 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 입체이성체 중 1 개 이상이다.
상기 양태들의 구현예들에서, 본 방법은 화학요법 화합물, 예를 들어 PD-1 억제제, PD-L1 억제제 또는 CTLA-4 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
상기 양태들의 구현예들에서, 암 세포는 피험체, 예를 들어 인간의 암 세포이다.
상기 양태들의 구현예들에서, 면역 회피, 암 세포 유도성 면역 부전, 조장을 필요로 하는 면역 반응, 염증 또는 암은, 비 암성 세포와 비교되었을 때 암 세포에서 MHC, β2 마이크로글로불린, 종양 괴사 인자(TNF) 수용체, 저 분자 질량 폴리펩티드 2(LMP2), 저 분자 질량 폴리펩티드 7(LMP7), 항원 가공 연관 이송체(TAP), 그리고 TAP-연관 당단백(타파신) 중 1 개 이상의 감소한 발현에 의해 특징지어진다. MHC는 인간 백혈구 항원(HLA), 예를 들어 HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DM 알파, HLA-DM 베타, HLA-DO 알파, HLA-DO 베타 1, HLA-DP 알파 1, HLA-DP 베타 1, HLA-DR 알파, HLA-DR 베타 1, HLA-DR 베타 3, HLA-DR 베타 4, HLA-E, HLA-F, HLA-G, HLA-K 또는 HLA-L일 수 있다.
달리 정의되지 않으면, 본원에 사용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속한 업계의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가진다. 명세서에 있어서 문맥 중 달리 지정되지 않는 한, 단수 형태들은 또한 복수 형태들도 포함한다. 구체적으로 진술되거나 문맥으로부터 명백하지 않다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "하나", "하나의" 및 "상기"는 단수 또는 복수인 것으로 이해된다. 구체적으로 진술되거나 문맥으로부터 명백하지 않다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "또는"은 포괄적인 것으로 이해된다.
구체적으로 진술되거나 문맥으로부터 명백하지 않다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "약"은 업계의 보통의 허용 범위 내, 예를 들어 평균의 두 표준 편차들 내에 있는 것으로서 이해된다. "약"은 진술된 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 이내인 것으로 이해될 수 있다. 문맥으로부터 명백하지 않으면, 본원에 제공된 모든 수치값은 용어 "약"에 의해 수식된다.
본원에 기술된 재료 및 방법과 유사하거나 균등한 재료 및 방법은 본 발명을 실시 또는 시험하는 데에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 이하에 기술되어 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 다른 참고문헌은 참조로 포함되어 있다. 본원에 인용된 참고문헌들은 청구된 발명에 대해 선행 기술로서 자인되는 것은 아니다. 분쟁이 일어난 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다. 뿐만 아니라, 재료, 방법 및 실시예는 오로지 예시적인 것으로서 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.
상기 양태들과 구현예들 중 임의의 것은 기타 다른 임의의 양태 또는 구현예와 합하여질 수 있다.
본 발명의 기타 다른 특징들과 이점들은 이하 상세한 설명과 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은, HS-SY-II 세포주 내 SS18-SSX1 발현 및 INI1(본원에서 BAF47, SNF5 또는 SMARCB1이라고도 지칭됨) 하향 조절을 나타내는 세포 용해물의 웨스턴 블롯이다.
도 2a는 다양한 세포주 내 H3K27 트리메틸화(H3K27me3) 및 H3K27 디메틸화(H3K27me2) 수준을 나타내는, 분리된 히스톤의 웨스턴 블롯이다. 도 2b 내지 2d는 다양한 세포주 내에서 정량적 H3K27me3/총 H3 비율(도 2b), H3K27me2/총 H3 비율(도 2c) 또는 H3K27me3/H3K27me2 비율(도 2d)을 나타내는 일련의 플롯들이다. 이러한 정량적 데이터는 웨스턴 블롯 분석에 의해 구하여진 단백질 밴드의 산정으로부터 유래되었다.
도 3a 내지 3d는 SW982 세포와는 달리, HS-SY-II 세포는 EZH2 억제제에 대해 큰 감수성을 나타냄을 나타내는 일련의 플롯이다. 도 3a에 나타낸 세포주 HS-SY-II와, 도 3b에 나타낸 세포주 SW982는 화합물 E로 처리되었다. 도 3c에 나타낸 세포주 HS-SY-II와, 도 3d에 나타낸 세포주 SW982는 화합물 A(본원에서는 E7438 또는 EPZ-6438이라고도 지칭됨)로 처리되었다. 각각의 세포류는 7 일 동안 지정된 농도의 화합물(화합물 E 또는 화합물 A)로 전처리된 다음, 재도말되어 7 일 더 처리되었다. 세포 생존능은 CellTiter-Glo® 발광 세포 생존능 검정에 의해 측정되었다.
도 4a 내지 4f는 INI1 수준의 감소가 연조직 육종 세포주에서 EZH2 억제제(EZH2i)에 대한 감수성을 부여함을 나타낸다. 도 4a는 상이한 종양 세포주들 내 INI1 발현을 나타내는 세포 용해물의 웨스턴 블롯이다. 연골육종의 종양 세포주(예를 들어, 세포주 b 및 c)는 INI1의 하향 조절을 나타내었다. 도 4b 및 4c는 세포주 b(그래프 B) 및 세포주 c(그래프 C)가 EZH2 억제제에 감수성임을 나타내는 그래프이다. 도 4d는 상이한 세포주 내 INI1 및 SS18 발현을 나타내는 세포 용해물의 웨스턴 블롯이다. 도 4e는 SSX-SS18 양성 세포가 EZH2 억제제에 감수성임을 나타내는 그래프이다. 도 4f는 SSX-SS18 음성 세포가 EZH2 억제제에 감수성이 아님을 나타내는 그래프이다.
도 5a 및 5b는 HS-SY-II 세포가 화합물 A에 매우 감수성인 반면에(도 5a), SW982 세포는 그렇지 않음(도 5b)을 나타내는 일련의 플롯이다. 각각의 세포류는 지정된 농도의 화합물 A로 처리되었다. 세포는 제7 일에 재도말되었으며, 7 일 더 처리되었다. 세포 생존능은 CellTiter-Glo® 발광 세포 생존능 검정에 의해 측정되었다.
도 6a는, 화합물 A 처리 후 HS-SY-II 및 SW982 세포 내 H3K27me3/총 H3의 감소한 비율(대조군에 대한 비율)을 나타낸다. 세포들이 96 시간 동안 화합물 A로 처리된 후, 히스톤이 추출되었다. 히스톤 마크 변경은 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 분석되었다. 히스톤 마크 변경은 HS-SY-II 및 SW982 간에 거의 동일하였는데, 이는 상기 변경이 SS18-SSX 융합 단백질의 존재와는 독립적임을 암시하는 것이다. 도 6b는 H3K27me3/총 H3의 비율을 50%까지 억제하는 데에 필요한 화합물의 농도(IC50)를 나타낸다.
도 7a 및 7b는 각각, HS-SY-II 이종 이식편 모델 내 약동학(PK) 값들 및 약력학(PD) 변경들을 나타낸다. 도 7a는 화합물 A의 혈장 농도를 나타낸다. 여기서 화합물 A는 마우스에 매일 2 회씩 총 7 일 동안 경구 투여되었다. 말초 혈액 시료들은 마지막 투여 약 5 분 전과 약 3 시간 후에 화합물 A 처리 마우스로부터 수집되었다. 화합물 A의 혈장 농도 분석이 수행되었다. 농도가 플롯화되었다(n=5). 각각의 막대는 각 군의 혈장 농도 평균을 나타낸다. 도 7b는 HS-SY-II 이종이식편 내 H3K27me3에 대한 화합물 A의 마우스에서의 억제 효과를 나타낸다. 여기서 화합물 A는 마우스에 매일 2 회씩 총 7 일 동안 경구 투여되었다. 종양 내 H3K27me3가 플롯화되었다(n=5). 각각의 막대는 각 군의 트리메틸화 수준의 평균 ± SEM을 나타내는 것이다. 이하 표 2 및 3은 도 7b에 나타낸 데이터와 관련된 통계학적 분석들을 제공한다. 통계학적 분석 결과들은 용량 의존적 변화를 확증한다.
도 8은, 시험관 내 실험에 있어서 화합물 A 처리 후 HS-SY-II 및 SW982 내 추정 PD 마커들의 발현 변화를 나타낸다. 여기서 각각의 세포류는 화합물 A 또는 EPZ-011989(EZH2 억제제이기도 하고, 본원에서는 화합물 C로 지칭되기도 함)로 처리되었고; 농도와 기간(일)이 나타내어져 있다. 유전자 발현 변경은 RT-PCR에 의해 분석되었다. 유전자 발현 수준은 GAPDH 수준에 대해 정규화되었다. 막대들은 0 μM-처리 대조군에 대한 비율로서 나타내어져 있다. 이하 표 4는 도 8에 나타낸 데이터와 관련된 통계학적 분석을 제공한다. 별표는, 0 μM-처리군의 수준과 비교되었을 때의 유의적인 변화들을 의미한다.
도 9는, 생체 내 실험에 있어서 화합물 A 처리 후 HS-SY-II 내 추정 PD 마커들의 발현 변화를 나타낸다. 여기서 화합물 A는 마우스에 매일 2 회씩 총 7 일 동안 경구 투여되었다. 종양 시료들은 마지막 투여 후 약 3 시간 경과시에 수집되었다. 유전자 발현 변경은 RT-PCR에 의해 분석되었다. 유전자 발현 수준은 GAPDH 수준에 대해 정규화되었다. 막대들은 비이클 군의 데이터에 대한 비율로서 나타내어져 있다.
도 10a 내지 10c는, 비이클(경구 또는 iv), 화합물 A(경구), 독소루비신(iv), 또는 화합물 A/독소루비신 조합 중 어느 하나가 지정된 용량으로 28 일 동안 투여되었을 때, HS-SY-II 이종이식편을 가지는 무흉선 누드 마우스의 평균 종양 부피를 나타낸다. 종양의 부피는 1 주일에 2 회 측정되었다. 2 개의 독립 연구가 수행되었다. 도 10a 및 10b는 제1차 연구 결과를 나타내고, 도 10c는 제2차 연구 결과를 나타낸다. 제2차 연구의 동물들로부터 유래하는 종양은 제28 일(마지막 투여 후 3 시간 경과시)에 수득되었고, 이 종양을 대상으로 증식 마커 Ki67에 대한 ELISA(도 10d) 또는 면역조직학(IHC)(도 10e)에 의한 H3K27me3 분석이 수행되었다.
도 11a 내지 11d는, 비이클(경구), 화합물 A(경구) 또는 독소루비신(iv) 중 어느 하나가 지정된 용량으로 총 35 일 동안 투여된, 활막 육종 종양의 상이한 환자 유래 이종이식편(PDX) 2 개를 가지는 무흉선 누드 마우스에 대한 평균 종양 부피 및 생존%를 나타낸다. 도 11a 및 11b는, 고등급 방추 세포 육종을 가지는 57 세 남성으로부터 얻은 PDX(CTG-0771)를 보유하는 마우스로부터 얻어진 데이터를 나타낸다. 도 11c 및 11d는, 16 세 여성으로부터 얻은 PDX(CTG-0331)를 보유하는 마우스로부터 얻어진 데이터를 나타낸다. 종양의 부피는 1 주일에 2 회 측정되었다. 투여는 제35 일에 중단되었으며, 동물은 제60 일이 될 때까지 관찰되되, 종양 측정은 1 주일에 2 회 수행되었다. 대상 동물의 종양 부피가 2000 mm3를 초과할 때, 마우스는 안락사되었다(Kaplan-Meyer 플롯으로 분석됨).
도 12a 및 12b는, 제35 일에 수득되어 RNA-seq 분석에 의해 분석된 마우스 하위세트 유래 활막 육종 PDX 종양으로부터 구하여진 어레이 데이터를 나타낸다. 도 12a는 57 세 남성으로부터 얻은 PDX를 보유하는 마우스로부터 얻어진 데이터이고; 도 12b는 16 세 여성으로부터 얻은 PDX를 보유하는 마우스로부터 얻어진 데이터이다. 비이클 또는 400 mg/kg의 화합물 A 중 어느 하나가 BID로 처리된 마우스로부터 유래하는 종양에서 HLA 유전자의 발현이 나타내어진다. 도면에서 청색은 낮은 발현이고, 적색은 높은 발현이다.
본 발명은 EZH2 억제제 치료학적 유효량과 세포를 접촉시키거나 EZH2 억제제 치료학적 유효량을 피험체에 투여함으로써, 비정상, 탈조절 또는 증가한 제스트 동족체 2 인핸서(EZH2)의 활성 또는 발현에 의해 특징지어지는 질환, 예를 들어 면역 회피, 암-세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 감소한 발현 또는 암의 증상의 치료 또는 완화를 필요로 하는 세포 또는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공한다. EZH2는 히스톤 3 리신 27(H3K27)의 메틸화를 촉매화하는 복합체인 폴리콤 억제 복합체 2(PRC2)의 효소 서브유닛이다. 히스톤 3 리신 27(H3K27) 메틸화는 다수의 혈액암(들) 및 고형 인간 암(들)과 인과적으로 연관된 전사 억제의 후성적 마크이다. H3K27의 과트리메틸화 상태를 초래하는 몇몇 분자 기작은 인간 암들에 보고된 바 있다.
본 발명은 부분적으로 EZH2 억제제가 암 세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, 감소한 MHC 발현에 의해 유도되거나 이에 의해 특징지어지는 질환 또는 면역 회피를 효과적으로 치료할 수 있다는 발견을 기반으로 한다.
특정 구현예들에서, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성을 가지는 세포, 피험체, 종양 및 종양 세포는 본 발명의 EZH2 억제제에 감수성이다.
인간 활막 육종은 전체 연조직 악성종양의 8% 내지 10%를 차지하며, 젊은 성인들의 사지에서 가장 흔히 발생한다. 재발성 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)는 18번 염색체상 SS18 유전자를, X 염색체상 밀접하게 관련된 유전자들 3 개(SSX1, SSX2 및 드물게는 SSX4) 중 하나에 융합하고, 그 결과 SS18의 C 말단 아미노산 8 개가 SSX C 말단으로부터 유래하는 아미노산 78 개로 치환된 틀 내(in-frame) 융합 단백질이 생성된다. 이는, 추후 분해될 야생형 SS18 및 종양 억제인자 INI1 둘 다를 쫓아내면서 SWI/SNF 복합체와 결합하는 발암 유전자 SS18-SSX 융합 단백질의 발현을 초래한다. 이는, 비정상 유전자 발현을 초래하고, 궁극적으로는 암 발달을 유도한다.
본 발명은 세포를 치료학적 유효량의 EZH2 억제제와 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포에서 면역 회피를 억제하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 세포 유도성 면역 부전의 치료 또는 교정을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수 있다.
본 발명은 또한 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응의 조장, 증가 또는 유도를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수 있다.
본 발명은 또한 암 세포와 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포에서 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 발현 또는 활성을 증가시키기 위한 방법도 제공할 수 있다.
본 발명은 또한 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 염증의 증가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수도 있다.
본 발명은 또한 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 세포 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수도 있다.
본 발명은 또한 (1) 피험체로부터 생체 시료를 얻는 단계; 및 (2) 대조군 시료와 비교되었을 때 생체 시료에서 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료 효능의 가능성의 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수도 있다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보일 경우 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
본 발명은 또한 대조군 시료와 비교되었을 때 피험체로부터 얻은 생체 시료 중 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능에 대한 가능성의 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공한다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 만일 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보이면 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
본 발명은 (1) 제1 생체 시료와 제2 생체 시료를 피험체로부터 얻는 단계; (2) 제2 생체 시료와 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계; (3) 상기 제1 생체 시료 및 제2 생체 시료를 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현에 대해 검정하는 단계; 및 (4) 제1 생체 시료 중 MHC의 발현과 제2 생체 시료 중 MHC의 발현을 비교하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능의 스크리닝을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법도 제공할 수 있다. EZH2 억제제를 포함하는 치료는, 만일 제2 생체 시료 중 MHC 발현이 제1 생체 시료 중 MHC 발현과 비교되었을 때 증가하면 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것일 것이다.
본 발명의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성을 포함한다.
본 발명의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)를 포함한다.
본 발명의 구현예들에서, 전좌는 SS18-SSX 융합 유전자를 유발한다.
본 발명의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 INI1(본원에서 BAF47, SNF5 또는 SMARCB1이라고도 지칭됨)의 감소한 기능 또는 발현을 나타낸다. 본 발명의 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 INI1의 감소한 기능과 발현을 보인다. 특정 구현예들에서, 세포 또는 피험체는 INI1 음성 또는 INI1 결핍인 것으로 간주 또는 평가된다.
본 발명의 구현예들에서, EZH2 억제제는 하기 화학식을 가지는 화합물 A 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
Figure pct00003
본 발명의 구현예들에서, EZH2 억제제는
Figure pct00004
및 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염들 중 1 개 이상이다.
본 발명의 구현예들에서, 본 방법은 화학요법 화합물, 예를 들어 PD-1 억제제, PD-L1 억제제 또는 CTLA-4 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
본 발명의 구현예들에서, 암 세포는 피험체, 예를 들어 인간의 암 세포이다.
본 발명의 구현예들에서, 면역 회피, 암 세포 유도성 면역 부전, 조장을 필요로 하는 면역 반응, 염증 또는 암은, 비 암성 세포와 비교되었을 때 암 세포에서 MHC, β2 마이크로글로불린, 종양 괴사 인자(TNF) 수용체, 저 분자 질량 폴리펩티드 2(LMP2), 저 분자 질량 폴리펩티드 7(LMP7), 항원 가공 연관 이송체(TAP), 그리고 TAP-연관 당단백(타파신) 중 1 개 이상의 감소한 발현을 특징으로 한다. MHC는 인간 백혈구 항원(HLA), 예를 들어 HLA-A, HLAB, HLA-C, HLADM 알파, HLADM 베타, HLA-DO 알파, HLADO 베타 1, HLADP 알파 1, HLADP 베타 1, HLADR 알파, HLA-DR 베타 1, HLA-DR 베타 3, HLADR 베타 4, HLAE, HLAF, HLAG, HLAK 또는 HLAL일 수 있다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 치료학적 유효량을 세포와 접촉시키거나 피험체에 투여함으로써 면역 회피, 암 세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, MHC의 감소한 발현을 필요로 하는 피험체 또는 세포에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수 있다. 본 발명은 면역 회피, 암 세포 유도성 면역 부전, 감소한 면역 반응, 저하된 염증, MHC의 감소한 발현을 치료하는 데에 유용한 약품을 제조함에 있어서 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 용도를 추가로 제공할 수 있다.
구현예들에서, 질환들은 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성 또는 발현을 특징으로 한다. 본원에 사용된 "비정상 EZH2 활성"이란, 세포 내 EZH2의 배치 오류(mislocation) 또는 단백질 복합체와/단백질 복합체 내에서 EZH2의 결합 오류(mis-association)를 지칭한다. 구현예들에서, 비정상 EZH2 활성은 INI1의 조절 기능 상실로부터 초래되는데, 이는 추후 다양한 유전자 변경에 의해 발생되었을 수 있고, 이들 중 몇몇의 예가 본원에 더욱 상세히 논의된다. 특정 구현예들에서, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성 또는 발현은 H3K27의 증가한 트리메틸화와 연관되거나 이를 초래한다.
구현예들에서, 질환은 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)에 의해 특징지어진다. 이와 같은 전좌는 SS18-SSX 융합 유전자를 생성한다.
구현예들에서, 치료를 필요로 하는 피험체는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성을 나타낸다.
구현예들에서, 치료를 필요로 하는 피험체는 INI1의 감소한 기능 또는 발현, 아니면 둘 다를 나타내었다. 구현예들에서, 피험체는 INI1의 검출 가능한 기능 또는 발현, 아니면 둘 다를 나타내지 않는다.
본 발명의 구현예들에서, 활막 육종은 SSX1 융합에 의해 특징지어진다. 다른 구현예에서, 활막 육종은 SSX2 융합에 의해 특징지어진다. 구현예들에서, 활막 육종은 SSX4 융합에 의해 특징지어진다. 구현예들에서, 치료를 필요로 하는 피험체, 치료 계획, 투여 용량 및 횟수는 검출되는 SSX 융합의 유형에 따라서 선택된다. 구현예들에서, 투여될 EZH2 억제제는 또한 암과 연관된 SSX 융합에 따라서 선택되기도 한다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 치료학적 유효량을 피험체에 투여함으로써, 암 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 제공할 수도 있는데, 여기서 치료를 필요로 하는 피험체는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2) 또는 SS18-SSX 융합 유전자를 가진다. 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 암 치료에 유용한 약품을 제조함에 있어서의 용도를 추가로 제공한다.
구현예들에서, 본 방법은 투여 단계 전 피험체로부터 유래한 시료 중 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2) 또는 SS18-SSX 융합 유전자의 존재를 측정하는 단계를 포함한다.
시료 중 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)의 존재를 측정하는 것은, 당업계에 공지된 임의의 방법으로 수행될 수 있다. 예를 들어 이는 SS18-SSX 전사체에 대한 RT-PCR 및 핵형 분석; 또는 FISH(형광 현장 잡종화)에 의해 측정될 수 있다. SS18-SSX 융합 유전자는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 검출될 수 있다. 예를 들어 이는 RT-PCR, 면역조직염색검정 또는 형광 현장 잡종화(FISH)에 의해 검출될 수 있다.
치료될 암은 DNA 세포분석법, 유동 세포분석법 또는 영상 세포분석법에 의해 평가될 수 있다. 치료될 암은 세포 분열의 합성 단계(예를 들어, 세포 분열의 S기)에 있는 세포들의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%를 가지는 것으로 유형분석될 수 있다. 치료될 암은 저 S기 분획(low S-phase fraction) 또는 고 S기 분획(high S-phase fraction)을 가지는 것으로 유형분석될 수 있다.
본 발명의 양태들에서, 활막 육종은 일상성(monophasic) 활막 육종이다. 본 발명의 다른 양태들에서, 활막 육종은 이상성(biphasic) 활막 육종이다.
본 발명은 또한 피험체로부터 유래하는 시료 중 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2) 또는 SS18-SSX 융합 유전자의 존재를 검출하는 단계와, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 치료학적 유효량을 투여함으로써 피험체를 치료하는 단계를 포함하는 방법도 제공한다.
본 발명은 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 후보 피험체에 투여하는 것을 포함하는, 치료 계획을 선택하는 단계를 포함하는 방법을 추가로 제공한다. 치료 계획은 또한 수술, 화학요법, 방사선 요법, 면역 요법, 또는 이것들의 임의의 조합을 포함할 수도 있다.
구현예들에서, 본 발명의 방법은 피험체에 EZH2 억제제 치료학적 유효량을 투여하는 것, 수술, 화학요법, 방사선 요법, 침요법, 면역요법, 또는 이것들의 임의의 조합을 포함한다. 화학요법(통상 독소루비신 및/또는 이포스파미드)은 활막 육종, 특히 진행된 질병 또는 전이성 질병의 치료에 추천될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 치료학적 유효량을 피험체에 투여함으로써, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 세포 증식성 질환 또는 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법을 추가로 제공한다. 예를 들어 암은 활막 육종이다. 예를 들어 암은 상피모양 육종, 골외 점액모양 연골육종, 악성 간상 종양 또는 비정형 척삭종이다.
예를 들어 본원에서 사용될 수 있는 EZH2 억제제는 화합물 A, B, C, D 또는 E를 포함한다. 화합물 A는 또한 본원에서 E7438 또는 EPZ-6438로 지칭되기도 한다.
본원에 사용된 바와 같이 "~를 필요로 하는 피험체"는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암을 앓고 있는 피험체, 또는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)에 의해 매개되는 암을 앓고 있는 피험체이다. 예를 들어 "~를 필요로 하는 피험체"는 활막 육종을 앓고있는 피험체이다.
구현예들에서, "~를 필요로 하는 피험체"는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 질환을 치료하기 위한 사전 치료법 적어도 1 개가 행하여진 피험체이다.
구현예들에서, 피험체는 대부분의 최근 치료법에 대해 난치성인 암이 발병한 피험체이다. "난치성 암"이란, 치료에 응답하지 않는, 본원에 기술된 임의의 암, 예를 들어 활막 육종을 의미한다. 암은 치료 개시시에 저항성일 수 있거나 또는 치료 중에 저항성이 될 수 있다. 난치성 암은 또한 저항성 암이라고도 칭하여진다. 구현예들에서, "~를 필요로 하는 피험체"는 대부분의 최근 치료법에 대해 관해를 보인 후 암이 재발된 피험체이다. 구현예들에서, 피험체는 이 피험체가 앓고있는 활막 육종에 효과적인 모든 공지의 치료법을 적용받았으나, 실패를 거둔 피험체이다.
구현예들에서, 피험체는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)에 의해 매개되는 암, 예를 들어 활막 육종을 치료하기 위한 다른 치료법과 동시에 치료된다.
"피험체"는 포유동물을 포함한다. 포유동물은, 예를 들어 임의의 포유동물, 예를 들어 인간, 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 낙타, 양 또는 돼지일 수 있다. 바람직하게 포유동물은 인간이다.
구현예들에서, 피험체는 히스톤 H3의 Lys27(H3-K27me3)의 증가한 트리메틸화 수준을 보였다. 구현예들에서, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성 또는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)는 H3-K27me의 증가한 트리메틸화 수준과 연관된다.
본원에 사용된 바와 같이, "피험체로부터 유래하는 시료"는 피험체로부터 얻어지거나 유래하는 세포 또는 세포의 구성성분을 함유하는 임의의 적합한 시료를 지칭한다. 예를 들어 구현예들에서, 시료는 암 세포를 포함한다. 구현예들에서, 시료는, 예를 들어 연조직(예를 들어, 관절)으로부터 얻어진 생검 시료이다. 구현예들에서, 시료는 연조직 이외의 조직 또는 연조직을 제외한 조직으로부터 얻어진 생검 시료이다. 예를 들어 구현예들에서, 시료는 암, 예를 들어 암 세포들로 이루어진 종양으로부터 유래하는 생검편이다. 시료 중 세포는 당업자들에게 익숙한 방법에 의하여 시료의 기타 다른 구성성분들로부터 분리될 수 있다. 예를 들어 구현예들에서, 시료는 조직, 장기 또는 체액, 예를 들어 전혈, 혈장, 혈청, 소변, 타액, 생식 분비물, 뇌척수액, 땀 또는 배설물이다.
본원에 사용된 바와 같은 "단일 치료법(monotherapy)"이란, 단일 활성 화합물 또는 치료 화합물을 이의 투여를 필요로 하는 피험체에 투여하는 것을 지칭한다. 바람직하게 단일 치료법은 단일 활성 화합물의 치료학적 유효량의 투여를 수반할 것이다. 예를 들어 암 단일 치료법은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물 중 1 개가 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암의 치료를 필요로 하는 피험체에 투여된다. 하나의 양태에서, 단일 활성 화합물은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체이다. 특정 구현예에서, 단일 활성 화합물은 타제메토스타트이다.
본원에 사용된 바와 같이 "치료하는 것" 또는 "치료하다"는, 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 질병, 병태 또는 질환을 방지하기 위해 환자를 관리 및 처치하는 것을 기술하고, 질병, 병태 또는 질환의 증상 또는 합병증을 완화하거나, 또는 질병, 병태 또는 질환을 완치하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 또한 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 질병, 병태 또는 질환을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 "예방하는 것" 또는 "예방하다"는, 질병, 병태 또는 질환의 증상 또는 합병증의 개시를 감소 또는 억제하는 것을 기술한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "완화하다"란, 질환의 전조 또는 증상의 심각성이 감소하는 과정을 기술하는 의미이다. 중요한 점은, 전조 또는 증상은 없어지지 않고 완화될 수 있다는 점이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물의 투여는 전조나 증상을 없애지만, 반드시 없애야 하는 것은 아니다. 유효량은 전조나 증상의 심각성을 감소시킬 것으로 예상된다. 예를 들어 다수의 부위에서 발생할 수 있는 질환, 예를 들어 암의 전조 또는 증상은, 만일 암의 심각성이 다수의 부위들 중 적어도 한군데에서 감소되면 완화된 것이다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "증상"은 질병, 병, 손상의 징후, 또는 무언가가 몸에 좋지 않다는 징후로서 정의된다. 증상은 증상을 경험하는 개체에 의해 느껴지거나 인지되지만, 다른 사람에 의해서는 용이하게 인지될 수 없다. "다른 사람"은 보건 전문가가 아닌 사람으로서 정의된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "전조"는 또한 무언가가 몸에 좋지 않다는 징후로서 정의된다. 하지만 전조는 의사, 간호사 또는 기타 다른 보건 전문가가 볼 수 있는 것으로서 정의된다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은 종양 크기 또는 부피의 감소, 또는 종양 성장 또는 재성장의 감소, 또는 이것들의 임의의 조합을 초래할 수 있다. 종양 크기 또는 부피의 감소는 또한 "종양 퇴행(tumor regression)"으로서 지칭될 수 있다. 바람직하게, 치료 후 종양 크기는 자체의 치료 전 크기에 비하여 5% 이상까지 감소하고; 더 바람직하게 종양 크기는 10% 이상까지 감소하며; 더 바람직하게 종양 크기는 20% 이상까지 감소하고; 더 바람직하게 종양 크기는 30% 이상까지 감소하며; 더 바람직하게 종양 크기는 40% 이상까지 감소하고; 훨씬 더 바람직하게 종양 크기는 50% 이상까지 감소하며; 가장 바람직하게 종양 크기는 75% 이상까지 감소한다. 종양의 크기 또는 부피는 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양의 크기 또는 부피는 종양의 지름으로서 측정될 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성 또는 발현과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은, 종양 수의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게 치료 후 종양 수는 치료 전 종양 수에 비하여 5% 이상까지 감소하고; 더 바람직하게 종양 수는 10% 이상까지 감소하며; 더 바람직하게 종양 수는 20% 이상까지 감소하고; 더 바람직하게 종양 수는 30% 이상까지 감소하며; 더 바람직하게 종양 수는 40% 이상까지 감소하고; 훨씬 더 바람직하게 종양 수는 50% 이상까지 감소하며; 가장 바람직하게 종양 수는 75% 이상까지 감소한다. 종양 수는 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 수는 나안으로 확인 가능하거나 지정된 배율로 확인 가능한 종양을 계수함으로써 측정될 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은, 미처리 피험체들 또는 담체만이 단독 투여된 피험체들의 군집에 비하여, 치료된 피험체들의 군집에 있어서 평균 생존 시간의 증가, 또는 사망률의 감소, 또는 이 둘 다를 초래할 수 있다. 특정 구현예에서, 치료된 피험체의 군집은 본 발명의 화합물이 아닌 약물 또는 약물들의 조합이 사용되는 치료법이 수행되고 있는 피험체의 군집이다. 바람직하게 평균 생존 시간은 10 일, 20 일 또는 30 일 초과; 더 바람직하게는 60 일 초과; 더 바람직하게는 90 일 초과; 그리고 가장 바람직하게 120 일 초과까지 증가한다. 군집의 평균 생존 시간 증가는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 군집의 평균 생존 시간 증가는, 예를 들어 해당 군집에 대해 활성 화합물 치료 개시 후 평균 생존 길이를 산정함으로써 측정될 수 있다. 군집의 평균 생존 시간 증가는 또한, 예를 들어 해당 군집에 대해 활성 화합물 치료의 제1 라운드 종료 후 평균 생존 길이를 산정함으로써 측정될 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은, 담체만이 단독 투여된 군집에 비하여, 치료된 피험체들의 군집에 있어서 사망률의 감소를 초래할 수 있다. 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은, 미처리 군집에 비하여, 치료된 피험체들의 군집에 있어서 사망률의 감소를 초래할 수 있다. 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은, 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이 아닌 약물이 사용되는 단일 치료법이 수행되고 있는 군집에 비하여, 치료된 피험체들의 군집에 있어서 사망률의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게, 사망률은 2% 초과; 더 바람직하게 5% 초과; 더 바람직하게 10% 초과; 그리고 가장 바람직하게 25% 초과하여 감소한다. 치료된 피험체들의 군집의 사망률 감소는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 군집의 사망률 감소는, 예를 들어 해당 군집에 대해 활성 화합물 치료 개시 후 단위 시간당 질병 관련 사망자 평균 수를 산정함으로써 측정될 수 있다. 군집의 사망률 감소도 또한, 예를 들어 해당 군집에 대해 활성 화합물 치료의 제1 라운드 종료 후 단위 시간당 질병 관련 사망자 평균 수를 산정함으로써 측정될 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은 종양 성장률의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게 치료 후 종양 성장률은 치료 전 종양 성장률 수치에 비하여 적어도 5%까지 감소하고; 더 바람직하게 종양 성장률은 적어도 10%까지 감소하며; 더 바람직하게 적어도 20%까지 감소하고; 더 바람직하게 적어도 30%까지 감소하며; 더 바람직하게 적어도 40%까지 감소하고; 더 바람직하게 적어도 50%까지 감소하며; 훨씬 더 바람직하게 적어도 50%까지 감소하고; 가장 바람직하게 적어도 75%까지 감소한다. 종양 성장률은 재현 가능한 임의의 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 성장률은 단위 시간 당 종양 지름의 변화에 따라서 측정될 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은 종양 재성장의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게 치료 후, 종양 재성장률은 5% 미만이고; 더 바람직하게 종양 재성장률은 10% 미만이며; 더 바람직하게 20% 미만이고; 더 바람직하게 30% 미만이며; 더 바람직하게 40% 미만이고; 더 바람직하게 50% 미만이며; 훨씬 더 바람직하게 50% 미만이고; 가장 바람직하게 75% 미만이다. 종양 재성장은 재현 가능한 임의의 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 재성장은, 예를 들어 치료 전 사전 종양 수축 후 종양 지름의 증가를 측정함으로써 측정된다. 종양 재성장의 감소는 치료가 중단된 후 종양의 재발 실패에 의해 나타난다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료 또는 예방하는 것은 비정상 외관 또는 형태를 가지는 세포의 수 또는 비의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게 치료 후 비정상 형태를 가지는 세포의 수는 치료 전 비정상 형태를 가지는 세포의 크기에 비하여 적어도 5%까지 감소하고; 더 바람직하게는 적어도 10%까지 감소하며; 더 바람직하게는 적어도 20%까지 감소하고; 더 바람직하게는 적어도 30%까지 감소하며; 더 바람직하게는 적어도 40%까지 감소하고; 더 바람직하게는 적어도 50%까지 감소하며; 훨씬 더 바람직하게는 적어도 50%까지 감소하고; 가장 바람직하게는 적어도 75%까지 감소한다. 비정상 세포 외관 또는 형태는 재현 가능한 임의의 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 비정상 세포 형태는, 예를 들어 역전 조직 배양 현미경이 사용되는 현미경법에 의해 측정될 수 있다. 비정상 세포 형태는 핵 다형성의 형태를 취할 수 있다.
비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성과 연관된 암(들) 또는 세포 증식성 질환(들)을 본원에 기술된 화합물로 치료하는 것은 세포 사멸을 초래할 수 있으며, 바람직하게 세포 사멸은 군집 내 세포 수의 적어도 10%의 감소를 초래한다. 더 바람직하게 세포 사멸은, 적어도 20%의 감소; 더 바람직하게 적어도 30%의 감소; 더 바람직하게 적어도 40%의 감소; 더 바람직하게 적어도 50%의 감소; 가장 바람직하게 적어도 75%의 감소를 의미한다. 군집 내 세포 수는 재현 가능한 임의의 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 군집 내 세포의 수는 형광 활성화 세포 분류법(FACS), 면역형광현미경 및 광학현미경에 의해 측정될 수 있다. 세포 사멸을 측정하는 방법은 문헌[Li et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(5): 2674-8, 2003]에 나타내어져 있다. 특정 양태에서, 세포 사멸은 세포자살에 의해 발생한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "선택적으로"는, 다른 군집에서보다 어느 한 군집에서 더 큰 빈도로 발생하는 경향을 의미한다. 비교된 군집들은 세포 군집들일 수 있다. 바람직하게 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 암 또는 전암 세포에 선택적으로 작용하지만, 정상 세포에는 그러하지 않다. 바람직하게 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 하나의 분자 표적(예를 들어, 표적 단백질 메틸전이효소)을 선택적으로 조정하지만, 다른 분자 표적(예를 들어, 비 표적 단백질 메틸전이효소)은 거의 조정하지 않는다. 본 발명은 또한 효소, 예를 들어 EZH2의 활성을 선택적으로 억제하기 위한 방법을 제공한다. 바람직하게 만일 어떤 이벤트가 군집 B에 비하여 군집 A에서 2 배 초과로 더 자주 발생하면, 해당 이벤트는 군집 B에 비하여 군집 A에서 선택적으로 발생하는 것이다. 만일 어떤 이벤트가 군집 A에서 5 배 초과로 더 자주 발생하면, 해당 이벤트는 선택적으로 발생하는 것이다. 만일 어떤 이벤트가 군집 B에서보다 군집 A에서 10 배 초과; 더 바람직하게는 50 배 초과; 훨씬 더 바람직하게는 100 배 초과; 그리고 가장 바람직하게는 1000 배 초과로 더 자주 발생하면, 해당 이벤트는 선택적으로 발생하는 것이다. 예를 들어 세포 사멸은, 만일 세포 사멸이 정상 세포에 비하여 암 세포에서 2 배 초과로 자주 발생하면 암 세포에서 선택적으로 발생한다고 칭하여질 것이다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 이의 투여를 필요로 하는 세포 또는 피험체에 투여하는 것은, EZH2 활성의 조정(즉, 억제)을 초래할 수 있다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 이의 투여를 필요로 하는 세포 또는 피험체에 투여하는 것은, EZH2의 조정(즉, 억제)을 초래한다.
"활성화"란, 물질(예를 들어, 단백질 또는 핵산)의 조성물을, 요망되는 생체 기능을 수행하기에 적합한 상태로 만드는 것을 지칭한다. 활성화될 수 있는 물질의 조성물은 비활성화 상태이기도 하다. 물질의 활성화된 조성물은 억제 또는 자극 생체 기능, 아니면 이 둘 다를 가질 수 있다.
"상승"이란, 물질(예를 들어, 단백질 또는 핵산)의 조성물의 요망되는 생체 활성 증가를 지칭한다. 상승은 물질의 조성물 농도 증가를 통해 일어날 수 있다.
본원에 기술된 임의의 방법에 사용될 수 있는 화합물(즉, EZH2 억제제), 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 하기 화학식 I을 가지며,
[화학식 I]
Figure pct00005
상기 식 중,
R701은 H, F, OR707, NHR707, -(CºC)-(CH2)n7-R708, 페닐, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬, 또는 이종원자 1 개 내지 3 개를 함유하는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬이되, 다만 상기 페닐, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴, C3-8 사이클로알킬 또는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 독립적으로 할로, C1-3 알킬, OH, O-C1-6 알킬, NH-C1-6 알킬, 그리고 이종원자 1 개 내지 3 개를 함유하는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬 또는 C3-8 사이클로알킬로 치환된 C1-3 알킬로부터 선택되는 기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되고, O-C1-6 알킬 및 NH-C1-6 알킬 각각은 하이드록실, O-C1-3 알킬 또는 NH-C1-3 알킬로 선택적으로 치환되며, O-C1-3 알킬 및 NH-C1-3 알킬 각각은 O-C1-3 알킬 또는 NH-C1-3 알킬로 선택적으로 추가 치환되고;
R702 및 R703 각각은 독립적으로, 각각 1 개 이상의 할로로 선택적으로 치환되는 H, 할로, C1-4 알킬, C1-6 알콕실 또는 C6-C10 아릴옥시이며;
R704 및 R705 각각은 독립적으로 C1-4 알킬이고;
R706은 N(C1-4 알킬)2로 치환된 사이클로헥실이되, 이 C1-4 알킬들 중 하나 또는 둘 다는 C1-6 알콕시로 치환되거나; 또는 R706은 테트라하이드로피라닐이며;
R707은 하이드록실, C1-4 알콕시, 아미노, 모노- 또는 디-C1-4 알킬아미노, C3-8 사이클로알킬, 그리고 이종원자 1 개 내지 3 개를 함유하는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되는 기 1 개 이상으로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬이되, 상기 C3-8 사이클로알킬 또는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬은 각각 독립적으로 C1-3 알킬로 선택적으로 추가 치환되고;
R708은 OH, 할로, C1-4 알콕시, 이종원자 1 개 내지 3 개를 함유하는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 또는 O-C1-6 알킬로부터 선택되는 기 1 개 이상으로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬이되, 상기 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬은 OH 또는 C1-6 알킬로 선택적으로 추가 치환될 수 있으며;
n7은 0, 1 또는 2이다.
예를 들어 R706은 N(C1-4 알킬)2로 치환된 사이클로헥실이되, 이 C1-4 알킬들 중 하나는 비치환되고, 다른 하나는 메톡시로 치환된다.
예를 들어 R706은
Figure pct00006
이다.
예를 들어 화합물은 하기 화학식 II의 것이다.
[화학식 II]
Figure pct00007
예를 들어 R702는 메틸 또는 이소프로필이고, R703은 메틸 또는 메톡실이다.
예를 들어 R704는 메틸이다.
예를 들어 R701은 OR707이고, R707은 OCH3 또는 모폴린으로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬이다.
예를 들어 R701은 H 또는 F이다.
예를 들어 R701은 테트라하이드로피라닐, 페닐, 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 이미다졸릴 또는 피라졸릴로서, 이것들 각각은 메틸, 메톡시, 모폴린으로 치환된 에틸, 또는 -OCH2CH2OCH3으로 선택적으로 치환된다.
예를 들어 R708은 모폴린, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 디아제판 또는 아제티딘으로서, 이것들 각각은 OH 또는 C1-6 알킬로 선택적으로 치환된다.
예를 들어 R708은 모폴린이다.
예를 들어 R708은 C1-6 알킬로 치환된 피페라진이다.
예를 들어 R708은 메틸, t-부틸 또는 C(CH3)2OH이다.
본원에 기술된 임의의 방법들에 사용될 수 있는 화합물(즉, EZH2 억제제) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 화학식 III을 가질 수 있다.
[화학식 III]
Figure pct00008
상기 화학식에서,
R801은 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-8 사이클로알킬, 이종원자 1 개 내지 3 개 함유하는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 페닐, 또는 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로서, 이것들 각각은 O-C1-6 알킬-Rx 또는 NH-C1-6 알킬-Rx로 치환되되, 여기서 Rx는 하이드록실, O-C1-3 알킬 또는 NH-C1-3 알킬이고, Rx가 하이드록실일 때를 제외하고 Rx는 O-C1-3 알킬 또는 NH-C1-3 알킬로 선택적으로 추가 치환되거나; 또는 R801은 -Q2-T2로 치환된 페닐이되, 여기서 Q2는 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환된 결합 또는 C1-C3 알킬 링커이고, T2는 선택적으로 치환된 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이며; R801은 선택적으로 추가 치환되며;
R802 및 R803은 각각 독립적으로 H, 할로, C1-4 알킬, C1-6 알콕실 또는 C6-C10 아릴옥시로서, 이것들 각각은 1 개 이상의 할로로 선택적으로 치환되고;
R804 및 R805는 각각 독립적으로 C1-4 알킬이며;
R806은 -Qx-Tx로서, 여기서 Qx는 결합 또는 C1-4 알킬 링커이고, Tx는 H, 선택적으로 치환된 C1-4 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C8 사이클로알킬 또는 선택적으로 치환된 4 원 내지 14 원 헤테로사이클로알킬이다.
예를 들어 Qx 및 Q2는 각각 독립적으로 결합 또는 메틸 링커이고, Tx 및 T2는 각각 독립적으로 테트라하이드로피라닐, 1 개, 2 개 또는 3 개의 C1-4 알킬기로 치환된 피페리디닐, 또는 N(C1-4 알킬)2로 치환된 사이클로헥실이되, 여기서 C1-4 알킬들 중 하나 또는 둘 다는 C1-6 알콕시로 선택적으로 치환된다.
예를 들어 R806은 N(C1-4 알킬)2에 의해 치환된 사이클로헥실이거나, 또는 R806은 테트라하이드로피라닐이다.
예를 들어 R806은
Figure pct00009
이다.
예를 들어 R801은 O-C1-6 알킬-Rx로 치환된 5 원 또는 6 원 헤테로아릴 또는 페닐이거나, 또는 R801은 CH2-테트라하이드로피라닐로 치환된 페닐이다.
예를 들어 본 발명의 화합물은 하기 화학식 IVa 또는 IVb의 것으로서
[화학식 IVa]
Figure pct00010
[화학식 IVb]
Figure pct00011
식 중, Z '는 CH 또는 N이고, R807은 C2-3 알킬-Rx이다.
예를 들어 R807은 -CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3, 또는 -CH2CH2OCH2CH2OCH3이다.
예를 들어 R802는 메틸 또는 이소프로필이고, R803은 메틸 또는 메톡실이다.
예를 들어 R804는 메틸이다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 에스테르는 하기 화학식 V를 가질 수 있다:
[화학식 V]
Figure pct00012
상기 화학식에서,
R2, R4 및 R12는 각각 독립적으로 C1-6 알킬이고;
R6은 C6-C10 아릴이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로서, 이것들 각각은 1 개 이상의 -Q2-T2로 선택적으로 치환되되, 여기서 Q2는 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬 또는 결합이고, T2는 H, 할로, 시아노, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A,-C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb 또는 RS2이되, 여기서 Ra, Rb 및 Rc는 각각 독립적으로 H 또는 RS3이고, A-는 약학적으로 허용 가능한 음이온이며, RS2 및 RS3은 각각 독립적으로 C1-C6 알킬, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이거나, 또는 Ra 및 Rb 는 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께, 0 개 또는 1 개의 추가 이종원자를 가지는 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하며, Ra 및 Rb에 의해 형성된 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬 고리, RS2 그리고 RS3은 각각 1 개 이상의 -Q3-T3으로 선택적으로 치환되되, 여기서 Q3은 각각 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환되는 결합 또는 C1-C3 알킬 링커이고, T3은 할로, 시아노, C1-C6 알킬, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe 및 -C(O)NRdRe로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 Rd 및 Re는 각각 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 -Q3-T3은 옥소이거나; 또는 이웃하는 임의의 -Q2-T2 2 개는 이것들이 부착되어 있는 원자들과 함께, N, O 및 S로부터 선택되는 이종원자 1 개 내지 4 개를 선택적으로 함유하고, 할로, 하이드록실, COOH, C(O)O-C1-C6 알킬, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 및 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되는 5 원 또는 6 원 고리를 형성하며;
R7은 -Q4-T4로서, 여기서 Q4는 결합, C1-C4 알킬 링커 또는 C2-C4 알케닐 링커이고, 각각의 링커는 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환되며, T4는 H, 할로, 시아노, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf 또는 RS4이되, 여기서 Rf 및 Rg는 각각 독립적으로 H 또는 RS5이고, RS4 및 RS5는 각각 독립적으로 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이고, RS4 및 RS5는 각각 1 개 이상의 -Q5-T5로 선택적으로 치환되며, 여기서 Q5는 결합, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 또는 C1-C3 알킬 링커이되, Rk는 H 또는 C1-C6 알킬이고, T5는 H, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴 또는 S(O)qRq이되, 여기서 q는 0, 1 또는 2이고, Rq는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이며, T5는, 이 T5 가 H, 할로, 하이드록실 또는 시아노일 때를 제외하고, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 그리고 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 -Q5-T5는 옥소이며;
R8은 H, 할로, 하이드록실, COOH, 시아노, RS6, ORS6 또는 COORS6이되, 여기서 RS6은 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노 또는 디-C1-C6 알킬아미노이고, RS6은 할로, 하이드록실, COOH, C(O)O-C1-C6 알킬, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노 및 디-C1-C6 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 R7 및 R8은 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께, 0 개 내지 2 개의 추가 이종원자를 가지는 4 원 내지 11 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하고, R7 및 R8에 의해 형성된 4 원 내지 11 원 헤테로사이클로알킬 고리는 1 개 이상의 -Q6-T6으로 선택적으로 치환되되, 여기서 Q6은 결합, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 또는 C1-C3 알킬 링커이되, Rm은 H 또는 C1-C6 알킬이고, T6은 H, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴 또는 S(O)pRp이고, 여기서 p는 0, 1 또는 2이고, Rp는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이며, T6은, 이 T6이 H, 할로, 하이드록실 또는 시아노일 때를 제외하고, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 및 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 -Q6-T6은 옥소이다.
예를 들어 R6은 C6-C10 아릴이거나 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이되, 이것들 각각은 선택적으로 1 개 이상의 -Q2-T2로 독립적으로 치환되되, 여기서, Q2는 결합 또는 C1-C3 알킬 링커이고, T2는 H, 할로, 시아노, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)2Ra 또는 RS2이되, 여기서 Ra 및 Rb 각각은 독립적으로 H 또는 RS3이고, RS2 및 RS3 각각은 독립적으로 C1-C6 알킬이거나, 또는 Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께, 0 개 또는 1 개의 추가 이종원자를 가지는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하며, RS2 및 RS3, 그리고 Ra 및 Rb에 의해 형성된 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬 고리 각각은 선택적으로 1 개 이상의 -Q3-T3으로 독립적으로 치환되되, 여기서 Q3은 결합 또는 C1-C3 알킬 링커이고, T3은 할로, C1-C6 알킬, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, ORd, -S(O)2Rd 및 -NRdRe로 이루어진 군으로부터 선택되며, Rd 및 Re 각각은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 -Q3-T3은 옥소이거나; 또는 이웃하는 임의의 -Q2-T2 2 개는 이것들이 부착되어 있는 원자들과 함께 N, O 및 S로부터 선택되는 이종원자 1 개 내지 4 개를 선택적으로 함유하는 5 원 또는 6 원 고리를 형성한다.
예를 들어 본 발명의 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로서,
[화학식 VI]
Figure pct00013
식 중, Q2는 결합 또는 메틸 링커이고, T2는 H, 할로, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- 또는 -S(O)2NRaRb이며, R7은 각각이 1 개의 -Q5-T5로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피란, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이고, R8은 에틸이다.
본 발명의 화합물은 하기 화학식 VIa를 가질 수 있으며,
[화학식 VIa]
Figure pct00014
식 중,
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H 또는 RS3이되, RS3은 C1-C6 알킬, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이거나, 또는 Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께, 0 개 또는 1 개의 추가 이종원자를 가지는 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하고, Ra 및 Rb에 의해 형성된 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬 고리와 RS3 각각은 1 개 이상의 -Q3-T3으로 선택적으로 치환되되, 여기서 Q3은 각각 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환되는 결합 또는 C1-C3 알킬이며, T3은 할로, 시아노, C1-C6 알킬, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 12 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe 및 -C(O)NRdRe로 이루어진 군으로부터 선택되되, Rd 및 Re는 각각 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 -Q3-T3은 옥소이고;
R7은 -Q4-T4이되, 여기서 Q4는 결합, C1-C4 알킬 링커 또는 C2-C4 알케닐 링커이고, 각각의 링커는 할로, 시아노, 하이드록실 또는 C1-C6 알콕시로 선택적으로 치환되며, T4는 H, 할로, 시아노, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf 또는 RS4이고, 여기서 Rf 및 Rg 각각은 독립적으로 H 또는 RS5이고, RS4 및 RS5 각각은 독립적으로 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이되, RS4 및 RS5 각각은 1 개 이상의 -Q5-T5로 선택적으로 치환되며, Q5는 결합, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 또는 C1-C3 알킬 링커이되, Rk는 H 또는 C1-C6 알킬이고, T5는 H, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴 또는 S(O)qRq이되, 여기서 q는 0, 1 또는 2이고, Rq는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이며, T5는, 이 T5가 H, 할로, 하이드록실 또는 시아노일 때를 제외하고, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 그리고 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 -Q5-T5는 옥소이며; 다만, R7은 H가 아니고;
R8은 H, 할로, 하이드록실, COOH, 시아노, RS6, ORS6 또는 COORS6이되, RS6은 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노 또는 디-C1-C6 알킬아미노이며, RS6은 할로, 하이드록실, COOH, C(O)O-C1-C6 알킬, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노 및 디-C1-C6 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 R7 및 R8은 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께, 0 개 내지 2 개의 추가 이종원자를 가지고, 1 개 이상의 -Q6-T6으로 선택적으로 치환되는 4 원 내지 11 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하되, 여기서 Q6은 결합, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 또는 C1-C3 알킬 링커이되, Rm은 H 또는 C1-C6 알킬이며, T6은 H, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이거나, S(O)pRp이며, 여기서 p는 0, 1 또는 2이고, Rp는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬이거나, 5 원 또는 6 원 헤테로아릴이며, T6은, 이 T6이 H, 할로, 하이드록실 또는 시아노일 때를 제외하고, 할로, C1-C6 알킬, 하이드록실, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노, 디-C1-C6 알킬아미노, C3-C8 사이클로알킬, C6-C10 아릴, 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬, 그리고 5 원 또는 6 원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되거나; 또는 -Q6-T6은 옥소이다.
예를 들어 Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 N 원자와 함께 N 원자에 대하여 추가의 이종원자 0 개 또는 1 개를 가지는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하고, 이 고리는 1 개 이상의 -Q3-T3으로 선택적으로 치환되되, 여기서 헤테로사이클로알킬은 아제티디닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 트리아졸리디닐, 피페리디닐, 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 피페라지닐 또는 모폴리닐이다.
예를 들어 R7은 각각 1 개 이상의 -Q5-T5로 선택적으로 치환된 C3-C8 사이클로알킬 또는 4 원 내지 7 원 헤테로사이클로알킬이다.
예를 들어 R7은 각각 1 개 이상의 -Q5-T5로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피란, 테트라하이드로-2H-티오피라닐, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 피롤리디닐 또는 사이클로헵틸이다.
예를 들어 R8은 할로, 하이드록실, COOH, C(O)O-C1-C6 알킬, 시아노, C1-C6 알콕실, 아미노, 모노-C1-C6 알킬아미노 및 디-C1-C6 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기 1 개 이상으로 선택적으로 치환되는 H 또는 C1-C6 알킬이다.
구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에서 사용될 수 있는 화합물은
Figure pct00015
(화합물 A, 본원에서 E7438 또는 EPZ-6438로서 지칭되기도 함) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에서 사용될 수 있는 화합물은
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
및 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
대안적으로 EZH2 억제제는 화합물 B 및 C, 이것들의 입체이성체들 및 약학적으로 허용 가능한 염들로 이루어진 군으로부터 선택된다.
구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에서 사용될 수 있는 화합물은 화합물 F
Figure pct00019
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
구현예들에서, 본 발명의 방법에 사용되기에 적합한 화합물은 하기 화학식 VII의 화합물 또는 이의 염을 포함하며,
[화합물 VII]
Figure pct00020
상기 식 중,
V1은 N 또는 CR7이고;
V2는 N 또는 CR2이되, 다만 V1이 N일 때, V2는 N이며;
X 및 Z는 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, (C6-C10)비사이클로알킬, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 아릴, 비치환 또는 치환 아릴-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 헤테로아릴, 비치환 또는 치환 헤테로아릴-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 할로, 시아노, -CORa, - CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb, -NRaNRaC(O)ORa, -ORa, -OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y는 H 또는 할로이며;
R1은 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 (C6-C10)비사이클로알킬, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬-(C1-C8)알킬, 비치환 또는 치환 아릴, 비치환 또는 치환 아릴-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, 비치환 또는 치환 헤테로아릴, 비치환 또는 치환 헤테로아릴-(C1-C8)알킬 또는 -(C2-C8)알케닐, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb이고;
R2는 수소, (C1-C8)알킬, 트리플루오로메틸, 알콕시 또는 할로이되, 상기 (C1-C8)알킬은 아미노 및 (C1-C3)알킬아미노로부터 선택되는 기 1 개 내지 2 개로 선택적으로 치환되며;
R7은 수소, (C1-C3)알킬 또는 알콕시이고;
R3은 수소, (C1-C8)알킬, 시아노, 트리플루오로메틸, -NRaRb 또는 할로이며;
R6은 수소, 할로, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬, 비치환 또는 치환 (C3-C8)사이클로알킬-(C1-C8)알킬, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐, 비치환 또는 치환 (C5-C8)사이클로알케닐-(C1-C8)알킬, (C6-C10)비사이클로알킬, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬, 비치환 또는 치환 헤테로사이클로알킬-(C1-C8)알킬, 비치환 또는 치환 아릴, 비치환 또는 치환 아릴-(C1-C8)알킬, 비치환 또는 치환 헤테로아릴, 비치환 또는 치환 헤테로아릴-(C1-C8)알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb, -NRaNRaC(O)ORa, -ORa, -OC(O)Ra, -OC(O)NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서, 임의의 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 기는 -O(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -S(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -(C1-C8)알킬-헤테로사이클로알킬, (C3-C8)사이클로알킬-헤테로사이클로알킬, 할로, (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, - CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra, OC(O)NRaRb, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴(C1-C4)알킬 및 헤테로아릴(C1-C4)알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되며;
여기서, 상기 아릴, 헤테로아릴, 아릴(C1-C4)알킬 또는 헤테로아릴(C1-C4)알킬의 임의의 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 할로, (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb,-SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb,-NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C6-C10)비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 상기 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록실, (C1-C4)알콕시, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, -CO2H, -CO2(C1-C4)알킬, -CONH2,-CONH(C1-C4)알킬, -CON((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬), -SO2(C1-C4)알킬, -SO2NH2,-SO2NH(C1-C4)알킬 및 SO2N((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져, 산소, 질소 및 황으로부터 선택되는 추가의 이종원자를 선택적으로 함유하는 5 원 내지 8 원 포화 또는 불포화 고리를 나타내되, 상기 고리는 (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, 하이드록실, 옥소, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)알콕시(C1-C4)알킬로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되되, 상기 고리는 (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합된 6 원 내지 10 원 가교 비사이클릭 고리 계를 나타내며;
각각의 Rc는 독립적으로 (C1-C4)알킬아미노, -NRaSO2Rb, -SORa, -SO2Ra, -NRaC(O)ORa, -NRaRb 또는 -CO2Ra이다.
화학식 I의 일반 구조식에 의해 포함되는 화합물들의 하위 군들은 이하에 표시된다:
화학식 VII의 하위 군 A
X 및 Z는 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, -NRaRb 및 -ORa로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y는 H 또는 F이며;
R1은 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 수소, (C1-C8)알킬, 트리플루오로메틸, 알콕시 또는 할로이되, 여기서 상기 (C1-C8)알킬은 아미노 및 (C1-C3)알킬아미노로부터 선택되는 기 1 개 내지 2 개로 선택적으로 치환되며;
R7은 수소, (C1-C3)알킬 또는 알콕시이고;
R3은 수소, (C1-C8)알킬, 시아노, 트리플루오로메틸, -NRaRb 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R6은 수소, 할로, 시아노, 트리플루오로메틸, 아미노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아실아미노, (C2-C8)알키닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알키닐, -SO2Ra, -SO2NRaRb 및 -NRaSO2Rb로 이루어진 군으로부터 선택되되;
여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C2-C8)알키닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알키닐 기는 -O(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -S(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -(C1-C6)알킬(Rc)1-2, -(C1-C8)알킬-헤테로사이클로알킬, (C3-C8)사이클로알킬-헤테로사이클로알킬, 할로, (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa,
-NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra, -OC(O)NRaRb, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴(C1-C4)알킬 및 헤테로아릴(C1-C4)알킬로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C6-C10)비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 상기 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록실, (C1-C4)알콕시, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, -CO2H, -CO2(C1-C4)알킬, -CONH2, -CONH(C1-C4)알킬, -CON((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬), -SO2(C1-C4)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C4)알킬 및 -SO2N((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져 산소, 질소 및 황으로부터 선택되는 추가 이종원자를 선택적으로 함유하는 5 원 내지 8 원 포화 또는 불포화 고리를 나타내되, 상기 고리는 (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, 하이드록실, 옥소, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)알콕시(C1-C4)알킬로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되되, 상기 고리는 (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합된 6 원 내지 10 원 가교 비사이클릭 고리 계를 나타낸다. 이러한 특정 하위 군 A에 있어서 아릴 또는 헤테로아릴 기는 푸란, 티오펜, 피롤, 옥사졸, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 옥사디아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 테트라졸, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤조티아졸, 페닐, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 트리아진, 테트라진, 퀴놀린, 신놀린, 퀴나졸린, 퀴녹살린 및 나프티리딘 또는 이하와 같은 또 다른 아릴 또는 헤테로아릴 기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00021
(상기 (1)에서, A는 O, NH 또는 S이고; B는 CH 또는 N이며; C는 수소 또는 C1-C8 알킬임); 또는
Figure pct00022
(상기 (2)에서, D는 수소 또는 C1-C8 알킬로 선택적으로 치환된 N 또는 C임); 또는
Figure pct00023
(상기 (3)에서, E는 NH 또는 CH2이고; F는 O 또는 CO이며; G는 NH 또는 CH2임); 또는
Figure pct00024
(상기 (4)에서, J는 O, S 또는 CO임); 또는
Figure pct00025
(상기 (5)에서,
Q는 CH 또는 N이고;
M은 CH 또는 N이며;
L/(5)는 수소, 할로, 아미노, 시아노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb 또는 -ORa이되,
여기서 임의의 (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되되, 여기서 Ra 및 Rb는 상기 정의된 바와 같음); 또는
Figure pct00026
(상기 (6)에서, L/(6)은 NH 또는 CH2임); 또는
Figure pct00027
(상기 (7)에서,
M/(7)은 수소, 할로, 아미노, 시아노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb,-NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb 또는 -ORa이되,
여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra, 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 상기 정의된 바와 같음); 또는
Figure pct00028
(상기 (8)에서, P는 CH2, NH, O 또는 S이고; Q/(8)는 CH 또는 N이며; n은 0 내지 2임); 또는
Figure pct00029
(상기 (9)에서,
S/(9) 및 T/(9)는 C이거나, 또는 S/(9)는 C이고 T/(9)는 N이거나, 또는 S/(9)는 N이고 T/(9)는 C이고;
R은 수소, 아미노, 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로이며;
U는 수소, 할로, 아미노, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -ORa 또는 4-(1H-피라졸-4-일)이되,
임의의 (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, - OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 상기 정의된 바와 같음).
화학식 VII의 하위 군 B
X 및 Z는 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, -NRaRb 및 -ORa로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 H이며;
R1은 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이고;
R2는 수소, (C1-C3)알킬 또는 할로이되, 여기서 상기 (C1-C3)알킬은 아미노 및 (C1-C3)알킬아미노로부터 선택되는 기 1 개 내지 2 개로 선택적으로 치환되며;
R7은 수소, (C1-C3)알킬 또는 알콕시이고;
R3은 수소, (C1-C8)알킬 또는 할로이며;
R6은 수소, 할로, 시아노, 트리플루오로메틸, 아미노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아실아미노, (C2-C8)알키닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알키닐, -SO2Ra, -SO2NRaRb 또는 -NRaSO2Rb이되;
여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C2-C8)알키닐, 아릴알키닐 또는 헤테로아릴알키닐 기는 할로, (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa,
-NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra, -OC(O)NRaRb, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴(C1-C4)알킬 및 헤테로아릴(C1-C4)알킬로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C6-C10)비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 상기 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 비사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록실, (C1-C4)알콕시, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, -CO2H, -CO2(C1-C4)알킬, -CONH2, -CONH(C1-C4)알킬, -CON((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬), -SO2(C1-C4)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C4)알킬 및 -SO2N((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져 산소, 질소 및 황으로부터 선택되는 추가 이종원자를 선택적으로 함유하는 5 원 내지 8 원 포화 또는 불포화 고리를 나타내되, 상기 고리는 (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, 아미노, (C1-C4)알킬아미노, ((C1-C4)알킬)((C1-C4)알킬)아미노, 하이드록실, 옥소, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)알콕시(C1-C4)알킬로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되되, 상기 고리는 (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합되거나; 또는
Ra 및 Rb는 이것들이 부착되어 있는 질소와 함께 취하여져, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 선택적으로 융합된 6 원 내지 10 원 가교 비사이클릭 고리 계를 나타낸다. 이러한 정의에 있어서 아릴 및 헤테로아릴은 푸란, 티오펜, 피롤, 옥사졸, 티아졸, 이미다졸, 피라졸, 옥사디아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 테트라졸, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤조티아졸, 페닐, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 트리아진, 테트라진, 퀴놀린, 신놀린, 퀴나졸린, 퀴녹살린 및 나프티리딘 또는 이하와 같은 또 다른 아릴 또는 헤테로아릴 기의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00030
(상기 (1)에서, A는 O, NH 또는 S이고; B는 CH 또는 N이며; C는 수소 또는 C1-C8 알킬임); 또는
Figure pct00031
(상기 (2)에서, D는 수소 또는 C1-C8 알킬로 선택적으로 치환된 N 또는 C임); 또는
Figure pct00032
(상기 (3)에서, E는 NH 또는 CH2이고; F는 O 또는 CO이며; G는 NH 또는 CH2임); 또는
Figure pct00033
(상기 (4)에서, J는 O, S 또는 CO임); 또는
Figure pct00034
(상기 (5)에서,
Q는 CH 또는 N이고;
M은 CH 또는 N이며;
L/(5)는 수소, 할로, 아미노, 시아노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb,-NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb 또는 -ORa이되,
여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되되, 여기서 Ra 및 Rb는 상기 정의된 바와 같음); 또는
Figure pct00035
(상기 (6)에서, L/(6)은 NH 또는 CH2임); 또는
Figure pct00036
(상기 (7)에서,
M/(7)은 수소, 할로, 아미노, 시아노, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -CONRaNRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb,-NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -NRaNRaC(O)NRaRb 또는 -ORa이되,
여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SRa, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra, 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb 는 상기 정의된 바와 같음); 또는
Figure pct00037
(상기 (8)에서, P는 CH2, NH, O 또는 S이고; Q/(8)는 CH 또는 N이며; n은 0 내지 2임); 또는
Figure pct00038
(상기 (9)에서,
S/(9) 및 T/(9)는 C이거나, 또는 S/(9)는 C이고 T/(9)는 N이거나, 또는 S/(9)는 N이고 T/(9)는 C이고;
R은 수소, 아미노, 메틸, 트리플루오로메틸, 할로이며;
U는 수소, 할로, 아미노, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, (C1-C8)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -NRaNRaRb, -NRaNRaC(O)Rb, -ORa 또는 4-(1H-피라졸-4-일)이되,
임의의 (C1-C8)알킬 또는 (C3-C8)사이클로알킬 기는 (C1-C6)알킬, (C3-C8)사이클로알킬, (C5-C8)사이클로알케닐, (C1-C6)할로알킬, 시아노, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, SORa, -SO2Ra, -SO2NRaRb, 니트로, -NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)NRaRb, -NRaC(O)ORa, -NRaSO2Rb, -NRaSO2NRaRb, -ORa, -OC(O)Ra 및 -OC(O)NRaRb로부터 독립적으로 선택되는 기 1 개, 2 개 또는 3 개로 선택적으로 치환되고;
Ra 및 Rb는 상기 정의된 바와 같음).
구현예들에서, EZH2 억제제는 화합물 G
Figure pct00039
또는 GSK-126, 또는 이의 입체이성체, 또는 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
특정 구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에 사용될 수 있는 EZH2 억제제는 화합물 H
Figure pct00040
, 또는 이의 입체이성체, 또는 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물이다.
특정 구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에 사용될 수 있는 EZH2 억제제는 화합물 Ga 내지 Gc 중 임의의 것,
Figure pct00041
,
Figure pct00042
, 또는 이의 입체이성체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
특정 구현예들에서, 본원에 제시된 임의의 방법들에 사용될 수 있는 EZH2 억제제는 CPI-1205 또는 GSK343이다.
하나의 구현예에서, 본원에 개시된 화합물(예를 들어, EZH2 억제제)은 화합물 자체, 즉 유리 염기 또는 "나출(naked)" 분자이다. 다른 구현예에서, 화합물은 이의 염, 예를 들어 나출 분자의 모노-HCl 또는 트리-HCl 염, 모노-HBr 또는 트리-HBr 염이다.
본원에 기술된 화합물들은 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라서 합성될 수 있다. 예를 들어 화학식 VII을 가지는 화합물은 WO 2011/140325; WO 2011/140324; 및 WO 2012/005805에 기술된 방법에 따라서 합성될 수 있으며, 이들 각각은 전체가 참조로 포함되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이 "알킬", "C1, C2, C3, C4, C5 또는 C6 알킬" 또는 "C1-C6 알킬"은 C1, C2, C3, C4, C5 또는 C6 직쇄(선형) 포화 지방족 탄화수소기 및 C3, C4, C5 또는 C6 분지형 포화 지방족 탄화수소기를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어 C1-C6 알킬은 C1, C2, C3, C4, C5 또는 C6 알킬기를 포함하는 것으로 의도된다. 알킬의 예들은 탄소 원자를 1 개 내지 6 개 가지는 모이어티, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, s-펜틸 또는 n-헥실(이에 한정되는 것은 아님)을 포함한다.
구현예들에서, 직쇄 또는 분지형 알킬은 탄소 원자를 6 개 이하 가지고(예를 들어, 직쇄에 대하여는 C1-C6, 분지쇄에 대하여는 C3-C6), 다른 구현예에서, 직쇄 또는 분지형 알킬은 탄소 원자를 4 개 이하 가진다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사이클로알킬"이란, 3 개 내지 30 개의 탄소 원자를 가지는(예를 들어, C3-C10) 포화 또는 불포화 비방향족 탄화수소 모노사이클릭 또는 멀티사이클릭 고리(예를 들어, 융합, 가교 또는 스피로 고리) 계를 지칭한다. 사이클로알킬의 예들은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 사이클로헵테닐 및 아다만틸을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 용어 "헤테로사이클로알킬"이란, 달리 지정되지 않는 한, 이종원자(예를 들어, O, N, S 또는 Se) 1 개 이상을 가지는 포화 또는 불포화 비방향족 3 원 내지 8 원 모노사이클릭, 7 원 내지 12 원 비사이클릭(융합, 가교 또는 스피로 고리) 또는 11 원 내지 14 원 트리사이클릭 고리(융합, 가교 또는 스피로 고리) 계를 지칭한다. 헤테로사이클로알킬기의 예들은 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 디옥사닐, 테트라하이드로푸라닐, 이소인돌리닐, 인돌리닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 트리아졸리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 옥시라닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 피라닐, 모폴리닐, 1,4-디아제파닐, 1,4-옥사제파닐, 2-옥사-5-아자비시클로[2.2.1]헵타닐, 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵타닐, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵타닐, 2,6-디아자스피로[3.3]헵타닐 및 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데카닐 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 “선택적으로 치환된 알킬”이란, 비치환 알킬, 또는 지정된 치환기들이 탄화수소 주쇄의 탄소 원자 1 개 이상에 있던 수소 원자 1 개 이상을 대체하는 알킬을 지칭한다. 이러한 치환기들은, 예를 들어 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕시, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모닐 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다.
"아릴알킬" 또는 "아랄킬" 모이어티는 아릴로 치환된 알킬(예를 들어, 페닐메틸(벤질))이다. "알킬아릴" 모이어티는 알킬로 치환된 아릴(예를 들어, 메틸페닐)이다.
본원에 사용된 바와 같이, "알킬 링커"는 C1, C2, C3, C4, C5 또는 C6 직쇄(선형) 포화 2가 지방족 탄화수소기와, C3, C4, C5 또는 C6 분지형 포화 지방족 탄화수소기를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어 C1-C6 알킬 링커는 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6 알킬 링커기를 포함하는 것으로 의도된다. 알킬 링커의 예들은 1 개 내지 6 개의 탄소 원자를 가지는 모이어티들, 예를 들어 메틸(-CH2-), 에틸(-CH2CH2-), n프로필(-CH2CH2CH2-), i프로필(-CHCH3CH2-), n부틸(-CH2CH2CH2CH2-), s부틸(-CHCH3CH2CH2-), i부틸(-C(CH3) 2CH2-), n펜틸(-CH2CH2CH2CH2CH2-), s펜틸(-CHCH3CH2CH2CH2-) 또는 n-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)(이에 한정되는 것은 아님)을 포함한다.
"알케닐"은 길이와 일어날 수 있는 치환이 상기 기술된 알킬과 유사하나, 이중 결합 적어도 1 개를 함유하는 불포화 지방족 기들을 포함한다. 예를 들어 용어 "알케닐"은 직쇄 알케닐기(예를 들어, 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐, 헵테닐, 옥테닐, 노네닐, 데세닐) 및 분지형 알케닐기를 포함한다. 구현예들에서, 직쇄 또는 분지형 알케닐기는 자체의 주쇄 내에 탄소 원자를 6 개 이하 가진다(예를 들어, 직쇄에 대해 C2-C6, 분지쇄에 대해 C3-C6). 용어 "C2-C6"은 탄소 원자 2 개 내지 6 개를 함유하는 알케닐기를 포함한다. 용어 "C3-C6"은 탄소 원자 3 개 내지 6 개를 함유하는 알케닐기를 포함한다.
용어 "선택적으로 치환된 알케닐"이란, 비치환 알케닐, 또는 지정된 치환기들이 탄화수소 주쇄의 탄소 원자 1 개 이상에 있던 수소 원자 1 개 이상을 대체하는 알케닐을 지칭한다. 이러한 치환기들은, 예를 들어 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕실, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다.
"알키닐"은 길이와 일어날 수 있는 치환이 상기 기술된 알킬과 유사하나, 삼중 결합 적어도 1 개를 함유하는 불포화 지방족 기들을 포함한다. 예를 들어 "알키닐"은 직쇄 알키닐기(예를 들어, 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 헵티닐, 옥티닐, 노니닐, 데시닐), 그리고 분지형 알키닐기를 포함한다. 구현예들에서, 직쇄 또는 분지형 알키닐기는 자체의 주쇄에 탄소 원자를 6 개 이하 가진다(예를 들어, 직쇄에 대해 C2-C6, 분지쇄에 대해 C3-C6). 용어 "C2-C6"은 탄소 원자 2 개 내지 6 개를 함유하는 알키닐기를 포함한다. 용어 "C3-C6"은 탄소 원자 3 개 내지 6 개를 함유하는 알키닐기를 포함한다.
용어 "선택적으로 치환된 알키닐"이란, 비치환 알키닐, 또는 지정된 치환기들이 탄화수소 주쇄의 탄소 원자 1 개 이상에 있던 수소 원자 1 개 이상을 대체하는 알키닐을 지칭한다. 이러한 치환기들은, 예를 들어 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕실, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이거나, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다.
기타 다른 선택적으로 치환된 모이어티들(예를 들어, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴)은 비치환 모이어티들 및 지정된 치환기들 중 1 개 이상을 가지는 모이어티들 둘 다를 포함한다. 예를 들어 치환된 헤테로사이클로알킬은 알킬기 1 개 이상으로 치환된 것들, 예를 들어 2,2,6,6-테트라메틸-피페리디닐 및 2,2,6,6-테트라메틸-1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐을 포함한다.
"아릴"은 적어도 1 개의 방향족 고리를 가지되 고리 구조 내 임의의 이종원자를 함유하지 않는, "공액의" 또는 멀티사이클릭 계들을 포함하여, 방향성을 가지는 기들을 포함한다. 예들은 페닐, 벤질, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈레닐 등을 포함한다.
"헤테로아릴" 기는, 고리 구조 내에 이종원자를 1 개 내지 4 개 가진다는 점을 제외하고는 상기 정의된 바와 같은 아릴기로서, "아릴 헤테로사이클" 또는 "헤테로방향족"으로 지칭될 수도 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로아릴"은 탄소 원자들과, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 이종원자 1 개 이상, 예를 들어 이종원자 1 개 또는 1 개 내지 2 개 또는 1 개 내지 3 개 또는 1 개 내지 4 개 또는 1 개 내지 5 개 또는 1 개 내지 6 개, 또는 예를 들어 이종원자 1 개, 2 개, 3 개, 4 개, 5 개 또는 6 개로 이루어진, 안정적인 5 원, 6 원 또는 7 원 모노사이클릭 또는 7 원, 8 원, 9 원, 10 원, 11 원 또는 12 원 비사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리를 포함하는 것으로 의도된다. 질소 원자는 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있다(즉, N 또는 NR(식 중, R은 H 또는 정의된 바와 같은 기타 다른 치환기임)). 질소 및 황 이종원자는 선택적으로 산화될 수 있다(즉, N→O 및 S(O)p (여기서, p는 1 또는 2임)). 방향족 헤테로사이클 내 S 및 O 원자의 총수는 1 이하임이 주목되어야 한다.
헤테로아릴기의 예들은 피롤, 푸란, 티오펜, 티아졸, 이소티아졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라졸, 옥사졸, 이속사졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등을 포함한다.
더욱이, 용어 "아릴" 및 "헤테로아릴"은 멀티사이클릭 아릴 및 헤테로아릴 기, 예를 들어 트리사이클릭, 비사이클릭, 예를 들어 나프탈렌, 벤족사졸, 벤조디옥사졸, 벤조티아졸, 벤조이미다졸, 벤조티오펜, 메틸렌디옥시페닐, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 나프트리딘, 인돌, 벤조푸란, 퓨린, 벤조푸란, 데아자퓨린, 인돌리진을 포함한다.
멀티사이클릭 방향족 고리의 경우, 고리들 중 오로지 하나만은 방향족일 필요가 있지만(예를 들어, 2,3-디하이드로인돌), 고리들 모두가 방향족일 수 있다(예를 들어, 퀴놀린). 제2의 고리는 또한 융합될 수 있거나 가교될 수 있다.
사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리는 1 개 이상의 고리 위치(예를 들어, 고리 형성 탄소 또는 이종원자, 예를 들어 N)에서 상기 기술된 바와 같은 치환기, 예를 들어 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알콕시, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 아랄킬아미노카르보닐, 알케닐아미노카르보닐, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아랄킬카르보닐, 알케닐카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티로 치환될 수 있다. 아릴 및 헤테로아릴 기들은 또한 방향족이 아닌 지환족 또는 헤테로사이클릭 고리들과 융합 또는 가교되어, 멀티사이클릭 계(예를 들어, 테트랄린, 메틸렌디옥시페닐)를 형성할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "카르보사이클" 또는 "카르보사이클릭 고리"는 임의의 것이 포화, 불포화 또는 방향족일 수 있는, 지정된 수의 탄소를 가지는 임의의 안정적인 모노사이클릭, 비사이클릭 또는 트리사이클릭 고리를 포함하는 것으로 의도된다. 카르보사이클은 사이클로알킬 및 아릴을 포함한다. 예를 들어 C3-C14 카르보사이클은 탄소 원자를 3 개, 4 개, 5 개, 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개, 11 개, 12 개, 13 개 또는 14 개 가지는 모노사이클릭, 비사이클릭 또는 트리사이클릭 고리를 포함하는 것으로 의도된다. 카르보사이클의 예들은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로부테닐, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헵테닐, 사이클로헵틸, 사이클로헵테닐, 아다만틸, 사이클로옥틸, 사이클로옥테닐, 사이클로옥타디에닐, 플루오레닐, 페닐, 나프틸, 인다닐, 아다만틸 및 테트라하이드로나프틸을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 가교 고리들은 또한 카르보사이클, 예를 들어 [3.3.0]비사이클로옥탄, [4.3.0]비사이클로노난, [4.4.0]비사이클로데칸 및 [2.2.2]비사이클로옥탄의 정의에 포함된다. 가교된 고리는 1 개 이상의 탄소 원자가 인접하지 않는 탄소 원자 2 개와 결합할 때 발생한다. 하나의 구현예에서, 가교 고리들은 1 개 또는 2 개의 탄소 원자이다. 가교는 항상 모노사이클릭 고리를 트리사이클릭 고리로 전환함이 주목되어야 한다. 고리가 가교될 때, 해당 고리에 대해 예시된 치환기들은 또한 가교 상에 존재할 수도 있다. 융합된 고리(예를 들어, 나프틸, 테트라하이드로나프틸) 및 스피로 고리도 또한 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭 기"는 적어도 1 개의 고리 이종원자(예를 들어, N, O 또는 S)를 함유하는 임의의 (포화, 불포화 또는 방향족) 고리 구조를 포함한다. 헤테로사이클은 헤테로사이클로알킬과 헤테로아릴을 포함한다. 헤테로사이클의 예들은 모폴린, 피롤리딘, 테트라하이드로티오펜, 피페리딘, 피페라진, 옥세탄, 피란, 테트라하이드로피란, 아제티딘 및 테트라하이드로푸란을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
헤테로사이클릭기의 예들은 아크리디닐, 아조시닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티오푸라닐, 벤조티오페닐, 벤족사졸릴, 벤족사졸리닐, 벤즈티아졸릴, 벤즈트리아졸릴, 벤즈테트라졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤즈이미다졸리닐, 카르바졸릴, 4aH-카르바졸릴, 카르볼리닐, 크로마닐, 크로메닐, 신놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 디하이드로푸로[2,3-b]테트라하이드로푸란, 푸라닐, 푸라자닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 인돌레닐, 인돌리닐, 인돌리지닐, 인돌릴, 3H-인돌릴, 이사티노일, 이소벤조푸라닐, 이소크로마닐, 이소인다졸릴, 이소인돌리닐, 이소인돌릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 메틸렌디옥시페닐, 모폴리닐, 나프티리디닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸5(4H)-온, 옥사졸리디닐, 옥사졸릴, 옥신돌릴, 피리미디닐, 페난트리디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사티닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리도닐, 4-피페리도닐, 피페로닐, 프테리디닐, 퓨리닐, 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도옥사졸, 피리도이미다졸, 피리도티아졸, 피리디닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리디닐, 피롤리닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 4H-퀴놀리지닐, 퀴녹살리닐, 퀴누클리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라졸릴, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 티안트레닐, 티아졸릴, 티에닐, 티에노티아졸릴, 티에노옥사졸릴, 티에노이미다졸릴, 티오페닐, 트리아지닐, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴 및 잔테닐을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치환된"이란, 지정된 원자 상 임의의 수소 원자 1 개 이상이 지정된 기들로부터 선택되는 것으로 치환되되, 다만 지정된 원자의 정상 원자가가 초과되지 않고, 치환의 결과 안정적인 화합물이 생성되는 경우를 의미한다. 치환기가 옥소 또는 케토(즉, =O)일 때, 원자 상 수소 원자 2 개가 치환된다. 케토 치환기들은 방향족 모이어티들 상에 존재하지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이 고리 이중 결합들은 인접한 고리 원자 2 개 사이에 형성된 이중 결합이다(예를 들어, C=C, C=N 또는 N=N). "안정적인 화합물" 및 "안정적인 구조"는 충분히 강하여 반응 혼합물로부터 유용한 순도로 분리될 때, 그리고 유효한 치료제로 제형화될 때 영향받지 않는 화합물을 나타내는 것을 의미한다.
치환기에 대한 결합이 고리 내 원자 2 개를 연결하는 결합을 가로지르는 것으로 나타내어져 있을 때, 이와 같은 치환기는 고리 내 임의의 원자와 결합할 수 있다. 주어진 화학식의 화합물 나머지에 치환기를 결합시키는 원자가 표시되지 않으면서 치환기가 나열될 때, 이와 같은 치환기는 해당 화학식의 임의의 원자를 통해 결합될 수 있다. 치환기들 또는 변인들(또는 둘 다)의 조합들은, 그러한 조합들이 안정적인 화합물을 형성할 때에만 허용 가능하다.
임의의 변인(예를 들어, R1)이 어느 화합물에 대한 화학식 또는 임의의 구성성분에 1 회 이상 발생할 때, 각각의 발생에서 해당 변인의 정의는 기타 다른 모든 발생에서 자체의 정의와는 독립적이다. 그러므로 예를 들어 만일 어느 기가 0 개 내지 2 개의 R1 모이어티로 치환되는 것으로 나타내어지면, 해당 기는 2 개 이하의 R1 모이어티로 선택적으로 치환될 수 있으며, 각각의 발생에서 R1은 R1의 정의로부터 독립적으로 선택된다. 또한, 치환기들 또는 변인들(또는 둘 다)의 조합들은, 그러한 조합들이 안정적인 화합물을 형성할 때에만 허용 가능하다.
용어 "하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH 또는 -O-를 가지는 기를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "할로" 또는 "할로겐"은, 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 지칭한다. 용어 “과할로겐화된”은 일반적으로, 모든 수소 원자가 할로겐 원자로 치환된 모이어티를 지칭한다. 용어 “할로알킬” 또는 "할로알콕시"는, 1 개 이상의 할로겐 원자로 치환된 알킬 또는 알콕실을 지칭한다.
용어 "카르보닐"은, 산소 원자에 대한 이중 결합과 연결된 탄소를 함유하는 화합물 및 모이어티를 포함한다. 카르보닐을 함유하는 모이어티들의 예들은 알데히드, 케톤, 카르복실산, 아미드, 에스테르, 무수물 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 "카르복실"은, -COOH 또는 이의 C1-C6 알킬 에스테르를 지칭한다.
"아실"은 아실 라디칼(R-C(O)-) 또는 카르보닐기를 함유하는 모이어티를 포함한다. "치환된 아실"은 수소 원자들 중 1 개 이상이, 예를 들어 알킬기, 알키닐기, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕시, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티에 의해 치환된 아실기를 포함한다.
"아로일"은 아릴 또는 헤테로방향족 모이어티가 카르보닐기에 결합되어 있는 모이어티를 포함한다. 아로일기의 예들은 페닐카르복시, 나프틸 카르복시 등을 포함한다.
"알콕시알킬", "알킬아미노알킬" 및 "티오알콕시알킬"은 상기 기술된 바와 같이, 산소, 질소 또는 황 원자가 탄화수소 주쇄 탄소 원자 1 개 이상을 대체하는 알킬기를 포함한다.
용어 "알콕시" 또는 "알콕실"은 산소 원자에 공유 결합된 치환 및 비치환 알킬, 알케닐 및 알키닐 기들을 포함한다. 알콕시기 또는 알콕실 라디칼의 예들은 메톡시, 에톡시, 이소프로필옥시, 프로폭시, 부톡시 및 펜톡시 기들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 치환된 알콕시기의 예들은 할로겐화된 알콕시기를 포함한다. 알콕시기는 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕실, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티와 같은 기들로 치환될 수 있다. 할로겐 치환 알콕시기들의 예들은 플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시, 클로로메톡시, 디클로로메톡시 및 트리클로로메톡시를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 "에테르" 또는 "알콕시"는, 2 개의 탄소 원자 또는 이종원자와 결합한 산소를 함유하는 화합물 또는 모이어티를 포함한다. 예를 들어 상기 용어는 "알콕시알킬"을 포함하는데, 이는 알킬기에 공유 결합하고 있는 산소 원자와 공유 결합하는 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기를 지칭한다.
용어 "에스테르"는 카르보닐기의 탄소에 결합하고 있는 산소 원자에 결합한 이종원자 또는 탄소를 함유하는 화합물 또는 모이어티를 포함한다. 용어 "에스테르"는 알콕시카르복시기, 예를 들어 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, 프로폭시카르보닐, 부톡시카르보닐, 펜톡시카르보닐 등을 포함한다.
용어 "티오알킬"은, 황 원자와 연결된 알킬기를 함유하는 화합물 또는 모이어티를 포함한다. 티오알킬기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 카르복시산, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 알콕실, 아미노(알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노(알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 설페이트, 알킬설피닐, 설포네이토, 설파모일, 설폰아미도, 니트로, 트리플루오로메틸, 시아노, 아지도, 헤테로사이클릴, 알킬아릴이나, 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티와 같은 기들로 치환될 수 있다.
용어 "티오카르보닐" 또는 "티오카르복시"는 황 원자에 대한 이중 결합과 연결된 탄소를 함유하는 화합물 및 모이어티를 포함한다.
용어 "티오에테르"는 2 개의 탄소 원자 또는 이종원자에 결합한 황 원자를 함유하는 모이어티들을 포함한다. 티오에테르의 예들은 알크티오알킬, 알크티오알케닐 및 알크티오알키닐을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 용어 "알크티오알킬"은, 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기가, 알킬기에 결합한 황 원자에 결합된 모이어티를 포함한다. 이와 유사하게, 용어 "알크티오알케닐"은, 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기가, 알케닐기에 공유 결합한 황 원자에 결합된 모이어티를 지칭하고; "알크티오알키닐"은, 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기가, 알키닐기에 공유 결합한 황 원자에 결합된 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 "아민" 또는 "아미노"는, 비치환 또는 치환 -NH2를 지칭한다. "알킬아미노"는 -NH2의 질소가 적어도 1 개의 알킬기에 결합하고 있는 화합물들의 기들을 포함한다. 알킬아미노기의 예들은 벤질아미노, 메틸아미노, 에틸아미노, 페네틸아미노 등을 포함한다. "디알킬아미노"는 -NH2의 질소가 적어도 2 개의 추가 알킬기에 결합하고 있는 기들을 포함한다. 디알킬아미노기의 예들은 디메틸아미노 및 디에틸아미노를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. "아릴아미노" 및 "디아릴아미노"는 질소가 적어도 1 개 또는 2 개의 아릴기에 각각 결합하고 있는 기들을 포함한다. "아미노아릴" 및 "아미노아릴옥시"는, 아미노로 치환된 아릴 및 아릴옥시를 지칭한다. "알킬아릴아미노", "알킬아미노아릴" 또는 "아릴아미노알킬"은, 적어도 1 개의 알킬기 및 적어도 1 개의 아릴기에 결합하고 있는 아미노기를 지칭한다. "알카미노알킬"은, 알킬기에도 또한 결합하고 있는 질소 원자에 결합하고 있는 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기를 지칭한다. "아실아미노"는 질소가 아실기에 결합하고 있는 기들을 포함한다. 아실아미노의 예들은 알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 기들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 "아미드" 또는 "아미노카르복시"는 카르보닐 또는 티오카르보닐 기의 탄소에 결합하고 있는 질소 원자를 함유하는 화합물들 또는 모이어티들을 포함한다. 상기 용어는 카르보닐 또는 티오카르보닐 기의 탄소에 결합하고 있는 아미노기에 결합하고 있는 알킬, 알케닐 또는 알키닐 기들을 포함하는 "알카미노카르복시" 기들을 포함한다. 이는 또한 카르보닐 또는 티오카르보닐 기의 탄소에 결합하고 있는 아미노기에 결합된 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티들을 포함하는 "아릴아미노카르복시" 기를 포함한다. 상기 용어들 "알킬아미노카르복시", "알케닐아미노카르복시", "알키닐아미노카르복시" 및 "아릴아미노카르복시"는, 카르보닐기의 탄소에 차례로 결합하고 있는 질소 원자에 알킬, 알케닐, 알키닐 및 아릴 모이어티들 각각이 결합하고 있는 모이어티들을 포함한다. 아미드는 치환기, 예를 들어 직쇄 알킬, 분지형 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클과 치환될 수 있다. 아미드기상 치환기들은 추가로 치환될 수 있다.
본 발명의 명세서에서, 화합물의 구조식은 편의상 몇몇 경우에 특정 이성체를 나타내지만, 본 발명은 모든 이성체, 예를 들어 기하학적 이성체, 비대칭 탄소를 기반으로 한 광학 이성체, 입체이성체 및 호변이성체 등을 포함하나, 모든 이성체가 동일한 수준의 활성을 가질 수 있는 것은 아님이 이해된다. 뿐만 아니라, 결정 다형성이 화학식에 의해 표시되는 화합물들에 대해 존재할 수 있다. 임의의 결정형, 결정형의 혼합물, 이의 무수물 또는 수화물은 본 발명의 범주 내에 포함됨이 주목된다.
"이성질성"은, 화합물이 동일한 분자식을 가지지만, 자체의 원자 결합 순서 또는 자체의 원자들의 공간 배열에 차이가 있는 경우를 의미한다. 자체의 원자의 공간 배열이 상이한 이성체들은 "입체이성체"라고 칭하여진다. 서로간에 거울상이 아닌 입체이성체들은 "부분입체이성체"로서 칭하여지고, 서로간에 겹쳐지지 않는 거울상인 입체이성체는 "거울상이성체"로 칭하여지며, 종종 "광학 이성체"라고도 칭하여진다. 반대 키랄성을 가지는 개별 거울상이성체 형태들을 동량 함유하는 혼합물은 "라세미 혼합물"이라고 칭하여진다.
동일하지 않은 치환기 4 개와 결합하는 탄소 원자는 "키랄 중심"이라고 칭하여진다.
"키랄 이성체"는, 적어도 1 개의 키랄 중심을 가지는 화합물을 의미한다. 1 개 초과의 키랄 중심을 가지는 화합물들은 개별 부분입체이성체로서, 또는 부분입체이성체들의 혼합물("부분입체이성체 혼합물"이라 칭하여짐)로서 존재할 수 있다. 1 개의 키랄 중심이 존재할 때, 입체이성체는 해당 키랄 중심의 절대 입체배치(R 또는 S)에 의해 특징지어질 수 있다. 절대 입체배치는, 키랄 중심에 부착된 치환기의 공간 배열을 지칭한다. 고려되는 키랄 중심에 부착된 치환기는 칸, 인골드 및 프레로그의 순위 결정 규칙에 따라서 순위가 매겨진다(Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).
"기하학적 이성체"는, 자체의 존재가 이중 결합 또는 사이클로알킬 링커(예를 들어, 1,3-사이클로부틸) 주위 속박 회전에 기인하는 부분입체이성체들을 의미한다. 이러한 입체배치는 칸-인골드-프레로그 규칙에 따라 분자 내 이중 결합의 동일한 쪽 또는 반대 쪽에 기들이 존재함을 나타내는 접두사 시스 및 트랜스, 또는 Z 및 E에 의하여 자체의 명칭에서 구분된다.
본 발명의 화합물은 상이한 키랄 이성체 또는 기하학적 이성체로서 도시될 수 있음이 이해되어야 한다. 또한 화합물이 키랄 이성체 또는 기하학적 이성체 형태들을 가질 때, 모든 이성체 형태들은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도되며, 화합물의 명명은 임의의 이성체 형태를 배제하지는 않음도 이해되어야 할 것임과 아울러, 모든 이성체가 활성 수준이 동일할 수 있는 것은 아님도 이해되어야 한다.
더욱이. 본 발명에서 논의된 구조들과 기타 다른 화합물들은 그것들의 모든 위축성(atropic) 이성체들을 포함함과 아울러, 모든 위축성 이성체가 활성 수준이 동일할 수 있는 것은 아님도 이해되어야 한다. "위축성 이성체"는 2 개의 이성체의 원자들이 상이하게 공간 배열된 입체이성체의 하나의 유형이다. 위축성 이성체들은 자체의 존재가 대형 기의 중심 결합 주위로의 회전 속박에 의해 유발되는 제한 회전에 기인한다. 이러한 위축성 이성체는 통상 혼합물로서 존재하지만, 최근 크로마토그래피 기법의 발달로 말미암아, 선택적 경우에서 2 개의 위축성 이성체들의 혼합물을 분리하는 것이 가능하게 되었다.
"호변이성체"는 평형을 이루며 존재하는 2 개 이상의 구조 이성체 중 하나로서, 하나의 이성체 형태로부터 다른 이성체 형태로 용이하게 전환된다. 이 전환은 인접 공액 이중 결합의 스위치에 의해 동반되는 수소 원자의 형식적 이동을 초래한다. 호변이성체들은 용액 중 호변이성체 세트의 혼합물로서 존재한다. 호변이성질현상이 일어날 수 있는 용액에서, 호변이성체들의 화학 평형이 달성될 것이다. 호변이성체들의 정확한 비율은 몇 가지 인자들, 예를 들어 온도, 용매 및 pH에 따라 달라진다. 호변이성질화에 의해 상호전환가능한 호변이성체의 개념은 호변이성질현상이라고 칭하여진다.
발생 가능한 호변이성질현상의 다양한 유형들 중 2 개가 일반적으로 관찰된다. 케토-에놀 호변이성질현상에 있어서, 전자 및 수소 원자의 자발적 이동이 일어난다. 고리 연쇄 호변이성질현상은, 동일 분자 내 하이드록시기(-OH)들 중 1 개와 반응하여, 당 사슬이, 글루코스에 의해 나타내는 바와 같이 사이클릭(고리형) 형태를 형성하도록 만드는, 당 사슬 분자 내 알데히드기(-CHO)로 말미암아 발생한다.
보통의 호변이성체 쌍들로서는, 케토-에놀, 아미드-니트릴, 락탐-락팀, 헤테로사이클릭 고리(예를 들어, 뉴클레오염기, 예를 들어 구아닌, 티민 및 시토신) 내 아미드-이미드산 호변이성질현상, 이민-에나민 및 에나민-에나민이 있다. 케토-에놀 평형의 일례는, 이하에 나타낸 바와 같이, 피리딘-2(1H)-온과 상응하는 피리딘-2-올 사이이다.
Figure pct00043
본원에 기술된 화합물들에 있어서,
Figure pct00044
의 각각의 발생은
Figure pct00045
로서 해석되어야 한다.
본 발명의 화합물들은 상이한 호변이성체들로서 도시될 수 있음이 이해되어야 한다. 또한 화합물이 호변이성체 형태들을 가질 때, 모든 호변이성체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도되고, 화합물의 명명은 임의의 호변이성체 형태를 배제하지 않음도 이해되어야 할 것이다. 특정 호변이성체들은 다른 것보다 활성 수준이 더 높을 수 있음이 이해될 것이다.
용어 "결정 다형체", "다형체" 또는 "결정형"은, 화합물(또는 이의 염이나 용매화물)이, 모두가 동일한 원소 조성을 가지는 상이한 결정 팩킹 배열들로 결정화될 수 있는 결정의 구조를 의미한다. 상이한 결정형은 보통 상이한 X-선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 용융점, 밀도 강도, 결정 형태, 광학 특성 및 전기적 특성, 안정성 및 가용성을 가진다. 재결정화 용매, 결정화 속도, 보관 온도 및 기타 다른 인자들도 우점하는 하나의 결정 형태를 유도할 수 있다. 화합물의 결정 다형체는 상이한 조건 하에서의 결정화에 의해 제조될 수 있다.
본원에 개시된 화학식들 중 임의의 것의 화합물은 화합물 자체뿐만 아니라, 적용 가능하다면 이의 염 또는 용매화물도 포함한다. 예를 들어 염은 아릴- 또는 헤테로아릴-치환 벤젠 화합물 상 양 하전 기(예를 들어, 아미노)와 음이온 사이에 형성될 수 있다. 적합한 음이온은 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 황산염, 중황산염, 설파민산염, 질산염, 인산염, 시트르산염, 메탄설폰산염, 트리플루오로아세트산염, 글루탐산염, 글루쿠론산염, 글루타르산염, 말산염, 말레산염, 숙신산염, 푸마르산염, 주석산염, 토실산염, 살리실산염, 젖산염, 나프탈렌설폰산염 및 아세트산염(예를 들어, 트리플루오로아세트산염)을 포함한다. 용어 "약학적으로 허용 가능한 음이온"은, 약학적으로 허용 가능한 염을 형성하기에 적합한 음이온을 지칭한다. 이와 유사하게, 염은 아릴- 또는 헤테로아릴-치환 벤젠 화합물 상 음 하전 기(예를 들어, 카르복실산염)와 양이온 사이에 형성될 수 있다. 적합한 양이온은 나트륨 이온, 칼륨 이온, 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 그리고 암모늄 양이온, 예를 들어 테트라메틸암모늄 이온을 포함한다. 아릴- 또는 헤테로아릴-치환 벤젠 화합물은 또한 4차 질소 원자를 함유하는 염들을 포함한다.
추가로, 본 발명의 화합물, 예를 들어 화합물의 염은 수화된 형태 또는 수화되지 않은 형태(무수물) 또는 기타 다른 용매 분자와의 용매화물 형태 중 어느 하나의 형태로 존재할 수 있다. 수화물의 비제한적 예들은 일수화물, 이수화물 등을 포함한다. 용매화물의 비제한적 예들은 에탄올 용매화물, 아세톤 용매화물 등을 포함한다.
"용매화물"은, 화학양론적 양 또는 비 화학양론적 양 중 어느 하나의 양의 용매를 함유하는 용매 부가 형태를 의미한다. 몇몇 화합물은 고정된 물비의 용매 분자를 결정 고체 상태에 포착하여, 용매화물을 형성하는 경향을 가진다. 만일 용매가 물이면, 형성된 용매화물은 수화물이고; 만일 용매가 알코올이면, 형성된 용매화물은 알코올레이트이다. 수화물은 물 분자 1 개 이상과, 물이 H2O와 같이 자체의 분자 상태로서 머무르는 물질의 분자 1 개의 조합에 의해 형성된다.
용어 "생체등배전자체(bioisostere)"는, 원자 또는 원자들의 기와 또 다른 광범위하게 유사한 원자 또는 원자들의 기의 교환으로부터 생성된 화합물을 지칭한다. 생체등배전자체 치환의 목적은 모 화합물의 생체 특성과 유사한 생체 특성을 가지는 신규 화합물을 생성하는 것이다. 생체등배전자체 치환은 물리화학 또는 위상기하학에 기반을 둘 수 있다. 카르복실산 생체등배전자체의 예들은 아실 설폰이미드, 테트라졸, 설폰산염 및 포스폰산염을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어 문헌[Patani and LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176, 1996]을 참조한다.
본 발명은 본 발명의 화합물 중에 존재하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 원자 번호는 동일하나, 질량수가 상이한 원자들을 포함한다. 일반적이되, 비제한적인 예를 들면, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함하고, 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.
본 발명은 본원에 개시된 임의의 화학식의 화합물의 합성을 위한 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 실시예에 나타낸 바와 같은 반응식에 따라서 본 발명에 개시된 다양한 화합물을 합성하기 위한 상세한 방법도 제공한다.
발명의 설명 전반에 걸쳐, 조성물이 특정 성분들을 가지거나, 포함하거나(including) 또는 포함하는 것(comprising)으로 기술될 경우, 해당 조성물은 또한 언급된 성분들로 본질적으로 이루어지거나 이루어진 것으로 간주된다. 이와 유사하게, 방법 또는 공정이 특정의 공정 단계를 가지거나, 포함하거나(including) 또는 포함하는 것(comprising)으로 기술될 경우, 해당 공정은 또한 언급된 공정 단계들로 본질적으로 이루어지거나 이루어진 것으로 간주된다. 또한 단계들의 순서 또는 특정 작동을 수행하는 순서는, 본 발명이 작동 가능하게 남아있는 한, 중요하지 않다는 것이 이해되어야 한다. 더욱이, 2 개 이상의 단계 또는 작동은 동시에 수행될 수 있다.
본 발명의 합성 공정들은 매우 다양한 작용기들을 관용할 수 있으므로, 다양한 치환 출발 물질들이 사용될 수 있다. 공정들은 일반적으로 전체 공정의 막바지 또는 막바지가 거의 다 되어서 요망되는 최종 화합물을 제공하지만, 특정 경우에 화합물을 자체의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체로 추가 전환하는 것이 요망될 수 있다.
본 발명의 화합물들은 당업자들에게 공지되었거나, 또는 본원에 교시된 바에 비추어 보았을 때 당업자들에게 명백할 표준 합성 방법 및 과정을 적용함으로써, 시판중인 출발 물질들, 문헌에 공지된 화합물들, 또는 용이하게 제조된 중간체들로부터 유래하는 화합물들이 사용되어 다양한 방식으로 제조될 수 있다. 유기 분자를 제조하기 위한 표준 합성 방법 및 과정과, 작용기 변환 및 조작에 관하여는 관련 과학 문헌 또는 당분야의 표준 교과서가 참조될 수 있다. 임의의 소스 하나 또는 수 개에 제한되지는 않지만, 전통의 교과서, 예를 들어 본원에 참조로서 포함된 문헌[Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001]; [Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999]; [R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989)]; [L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)]; 및 [L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)]이 유용하며, 당업자들에게 공지된 유기 합성법의 참조 교과서로서 인식되고 있다. 이하 합성 방법의 설명들은 본 발명의 화합물의 제조를 위한 일반적인 절차들을 예시하기 위해 설계된 것이지 제한하고자 설계된 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 당업자들에게 익숙한 다양한 방법들에 의해 편리하게 제조될 수 있다. 본원에 개시된 임의의 화학식을 가지는 본 발명의 화합물은 이하 반응식 1 내지 10에 예시된 절차들에 따라서, 시판중인 출발 물질 또는 문헌의 절차들이 사용되어 제조될 수 있는 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 반응식 1 내지 10의 Z 및 R 기들(예를 들어, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R12)은 달리 지정되지 않는 한, 본원에 개시된 화학식들 중 임의의 것에 정의된 바와 같다.
당업자는, 본원에 기술된 반응 순서와 합성 반응식이 진행되는 동안, 특정 단계들(예를 들어, 보호기의 도입 및 제거)의 순서는 바뀔 수 있음을 주목할 것이다.
당업자는, 특정 기들이 보호기의 사용을 통해 반응 조건들로부터 보호될 필요가 있을 수 있음을 인지할 것이다. 보호기들은 또한 분자 내 유사한 작용기들을 구별하기 위해 사용될 수 있다. 보호기의 목록과 이러한 보호기들을 어떻게 도입하고 제거하는 지는 문헌[Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999]에서 발견될 수 있다.
바람직한 보호기들은 다음의 것들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다:
하이드록실 모이어티의 경우, TBS, 벤질, THP, Ac이고,
카르복실산의 경우, 벤질 에스테르, 메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 알릴 에스테르이며,
아민의 경우, Cbz, BOC, DMB이고,
디올의 경우, Ac(x2) TBS(x2)이거나 또는 함께 취하여질 때 아세토니드이며,
티올의 경우, Ac이고,
벤즈이미다졸의 경우, SEM, 벤질, PMB, DMB이며,
알데히드의 경우, 디-알킬 아세탈, 예를 들어 디메톡시 아세탈 또는 디에틸 아세틸이다.
본원에 기술된 반응식에서, 다수의 입체이성체가 생성될 수 있다. 특정 입체이성체가 지정되지 않을 때, 해당 입체이성체는 반응으로부터 생성될 수 있었던 모든 가능한 입체이성체를 의미하는 것임이 이해된다. 당업자는, 하나의 이성체를 우선적으로 생성하도록 반응들이 최적화될 수 있거나, 아니면 단일 이성체를 생성하도록 새로운 반응식들이 고안될 수 있음을 인지할 것이다. 만일 혼합물이 제조되면, 기법, 예를 들어 예비 박층 크로마토그래피, 예비 HPLC, 예비 키랄 HPLC 또는 예비 SFC가 이성체들을 분리하는데에 사용될 수 있다.
이하 축약어들은 명세서 전체에서 사용된 것으로서, 이하에 정의되어 있다:
Ac 아세틸
AcOH 아세트산
aq. 수성
BID 또는 b.i.d. 하루 두 번(1 일 2 회)
BOC tert-부톡시 카르보닐
Cbz 벤질옥시 카르보닐
CDCl3 중수소화 클로로포름
CH2Cl2 디클로로메탄
DCM 디클로로메탄
DMB 2,4 디메톡시 벤질
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 설폭시화 디메틸
EA 또는 EtOAc 아세트산에틸
EDC 또는 EDCI N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드
ESI- 전자분무 음성 모드
ESI+ 전자분무 양성 모드
EtOH 에탄올
h 시간
H2O 물
HOBt 1-하이드록시벤조트리아졸
HCl 염화수소 또는 염화수소산
HPLC 고 성능 액체 크로마토그래피
K2CO3 탄산칼륨
LC/MS 또는 LC-MS 액체 크로마토그래피 질량 스펙트럼
M 몰
MeCN 아세토니트릴
min 분
Na2CO3 탄산나트륨
Na2SO4 황산나트륨
NaHCO3 중탄산나트륨
NaHMDs 나트륨 헥사메틸디실라지드
NaOH 수산화나트륨
NaHCO3 중탄산나트륨
Na2SO4 황산나트륨
NMR 핵 자기 공명
Pd(OH)2 이수산화팔라듐
PMB 파라-메톡시벤질
p.o. 경구적 투여(경구 투여)
ppm 백만당 부
prep HPLC 예비 고성능 액체 크로마토그래피
PYBOP (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트
Rt 또는 RT 실온
TBME tert-부틸 메틸 에테르
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라하이드로푸란
THP 테트라하이드로피란
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 유효량은, 정상 세포에 대해서는 거의 세포 독성을 나타내지 않는다. 만일 치료학적 유효량의 화합물의 투여가 정상 세포 중 10% 초과의 세포 사멸을 유도하지 않으면, 화합물의 치료학적 유효량은 정상 세포에 거의 세포 독성을 나타내지 않는 것이다. 만일 치료학적 유효량만큼의 화합물의 투여가 정상 세포 중 10% 초과의 세포 사멸을 유도하지 않으면, 화합물의 치료학적 유효량은 정상 세포의 생존 능에 거의 영향을 미치지 않는 것이다. 특정 양태에서, 세포 사멸은 세포자살에 의해 일어난다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체와 세포의 접촉은, 암 세포에서 세포 사멸을 선택적으로 유도 또는 활성화할 수 있다. 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 투여를 필요로 하는 피험체에 이를 투여하는 것은 암 세포에서 세포 사멸을 선택적으로 유도 또는 활성화할 수 있다. 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체와 세포의 접촉은, 세포 증식성 질환이 발병한 1 개 이상의 세포 내에서 세포 사멸을 선택적으로 유도할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 투여를 필요로 하는 피험체에 이를 투여하는 것은 세포 증식성 질환이 발병한 1 개 이상의 세포 내에서 세포 사멸을 선택적으로 유도한다.
당업자는 본원에 논의된 공지의 기법 또는 균등한 기법의 상세한 설명에 관한 일반적 참고 문헌을 참조할 수 있다. 이러한 문헌들은 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005)]; [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000)]; [Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.]; [Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.]; [Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990)]을 포함한다. 상기 문헌들은 물론 또한 본 발명의 일 양태를 제조하거나 이용함에 있어서도 참조될 수 있다.
본 발명은 또한 적어도 1 개의 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체와 함께, 본 발명의 화합물, 예를 들어 화합물 A, B, C 또는 D를 포함하는 약학 조성물을 제공할 수 있다.
"약학 조성물"은 피험체에의 투여에 적합한 형태를 가지는, 본 발명의 화합물을 함유하는 제형이다. 하나의 구현예에서, 약학 조성물은 벌크형 또는 단위 투여형이다. 단위 투여형은 다양한 형태, 예를 들어 캡슐, IV 백, 정제, 에어로졸 흡입기 또는 바이알 상 단일 펌프 중 임의의 것이다. 조성물의 단위 용량 중 활성 성분의 양은 유효량으로서, 수반되는 특정 치료에 따라서 달라진다. 당업자는, 종종 환자의 연령과 상태에 따라서 용량에 일상적인 수정을 가할 필요가 있음을 이해할 것이다. 용량은 또한 투여 경로에 따라서도 달라질 것이다. 경구, 폐, 직장, 장관 외, 경피, 피하, 정맥 내, 근육 내, 복막 내, 흡입, 협측, 설하, 흉막 내, 초 내 및 비 내 등을 포함하여 다양한 경로가 고려된다. 본 발명의 화합물의 국소 투여 또는 경피 투여를 위한 투여형은 분말, 분사물, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 하나의 구현예에서, 활성 화합물은 멸균 조건 하에서 약학적으로 허용 가능한 담체, 그리고 요구되는 임의의 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합된다.
본원에 사용된 바와 같이 어구 "약학적으로 허용 가능한"이란, 화합물, 물질, 조성물, 담체, 또는 투여형이 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하는데 적합하며, 합리적 이득/위험 비에 상응하는 경우를 의미한다.
"약학적으로 허용 가능한 부형제"란, 일반적으로 안전하고, 무독성이며, 생물학적인 면 또는 다른 면에서 바람직하지 않은 것이 아닌 약학 조성물을 제조하는 데에 유용한 부형제를 의미하고, 수의학적 용도뿐만 아니라 인간에 있어서 약학적 용도로 허용되는 부형제를 포함한다. 본 명세서와 청구범위에서 사용되는 바와 같은 "약학적으로 허용 가능한 부형제"는 1 개의 부형제 및 1 개 초과의 부형제 두 가지 경우를 다 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 의도되는 자체의 투여 경로와 혼화되도록 제형화된다. 투여 경로의 예들은 장관 외, 예를 들어 정맥 내, 피내, 피하, 경구(예를 들어, 흡입), 경피(국소) 및 경점막 투여를 포함한다. 장관 외, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분들, 즉 멸균 희석제, 예를 들어 주사용 수, 염수 용액, 불휘발성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 다른 합성 용매; 항 박테리아 제제, 예를 들어 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 칼레이트제, 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예를 들어 아세트산염, 시트르산염 또는 인산염, 그리고 등장성을 조정하기 위한 제제, 예를 들어 염화나트륨 또는 덱스트로스를 포함할 수 있다. pH는 산이나 염기, 예를 들어 염화수소산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 장관 외 투여용 제제는 유리나 플라스틱으로 제조된 앰플, 1 회용 시린지 또는 다용량 바이알 내에 담길 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 약학 조성물은, 현재 화학요법 치료에 사용되는, 널리 공지된 다수의 방법에서 피험체에 투여될 수 있다. 예를 들어 암(들) 치료를 위해 본 발명의 화합물은 종양에 직접 주사될 수 있거나, 혈류 또는 체강 내에 주사될 수 있거나, 또는 경구 섭취될 수 있거나, 아니면 패치가 사용되어 피부를 통해 적용될 수 있다. 선택되는 용량은 효과적인 치료를 이루기에 충분하여야 하되, 허용되지 않는 부작용을 유발할만큼 많아서는 안된다. 질병 병태의 상태(예를 들어, 암 및 전암 등)와 환자의 건강은, 바람직하게 치료 중, 그리고 치료후 합리적 기간 동안 면밀히 모니터링되어야 한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료학적 유효량"은, 확인된 질병이나 병태를 치료, 완화 또는 예방하거나, 또는 검출 가능한 치료 효과나 억제 효과를 나타내기 위한 약학 제제의 양을 지칭한다. 효과는 당업계에 공지된 임의의 검정 방법에 의해 검출될 수 있다. 피험체에 대한 정확한 유효량은 피험체의 체중, 크기 및 건강; 병태의 성질과 정도; 그리고 투여를 위해 선택되는 치료제에 따라서 달라질 것이다. 소정의 상황에 대한 치료학적 유효량은 임상의의 기술과 판단 내에 있는 통상의 실험에 의해 결정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 치료될 질병 또는 병태는 암이다. 다른 양태에서, 치료될 질병 또는 병태는 세포 증식성 질환이다.
임의의 화합물에 있어서, 치료학적 유효량은 처음에, 예를 들어 신생물 세포의 세포 배양 검정, 또는 동물 모델(보통은 래트, 마우스, 토끼, 개 또는 돼지) 중 어느 하나에서 산정될 수 있다. 동물 모델은 또한 적절한 농도 범위와 투여 경로를 결정하는 데에 사용될 수 있다. 그 다음, 이러한 정보는 인간에 있어서 유용한 용량과 투여 경로를 결정하는 데에 사용될 수 있다.
본 발명의 구현예들에서, EZH2 억제제는 100 ㎎/kg 내지 1600 ㎎/kg의 용량으로 투여된다. 구현예들에서, 용량은 100 mg/kg, 또는 200 mg/kg, 또는 400 mg/kg, 또는 800 mg/kg, 또는 1600 mg/kg이다. 특정 구현예들에서, 용량은 1 일 1 회, 또는 1 일 2 회 투여된다. 구현예들에서, EZH2 억제제는 화합물 A이고, 용량은 1 일 2 회 100 mg/kg, 또는 200 mg/kg, 또는 400 mg/kg, 또는 800 mg/kg, 또는 1600 mg/kg이다. 바람직한 구현예에서, EZH2 억제제는 화합물 A이고, 용량은 1 일 2 회 800 mg/kg이다.
용량과 투여는 활성 제제(들)의 충분한 수준을 제공하거나, 또는 요망되는 효과를 유지하도록 조정된다. 고려될 수 있는 인자들은 질병 상태의 심각성, 피험체의 전반적 건강, 피험체의 연령, 체중 및 성별, 식습관, 투여 시간 및 투여 횟수, 약물 상호작용(들), 반응 감수성 및 치료법에 대한 관용성/반응을 포함한다. 장기 작용 약학 조성물은 특정 제형의 반감기와 청소율(clearance)에 따라서 3 일 내지 4 일마다, 매주 또는 2 주에 1 회 투여될 수 있다.
본 발명의 활성 화합물을 함유하는 약학 조성물은, 일반적으로 공지된 방식, 예를 들어 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드라제 제조, 분쇄(levigating), 유화, 캡슐화, 포괄법 또는 동결 방법에 의한 방식으로 제조될 수 있다. 약학 조성물은 종래의 방식으로, 활성 화합물이 약학적으로 사용될 수 있는 제조물로 가공되는 것을 촉진하는 부형제 또는 조제(아니면 둘 다)를 포함하는, 약학적으로 허용 가능한 담체 1 개 이상을 사용하여 제형화될 수 있다. 물론 적절한 제형화는 선택되는 투여 경로에 따라서 달라진다.
주사용으로 적합한 약학 조성물은 멸균 수용액(수용성일 경우) 또는 분산액, 그리고 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥 내 투여에 적합한 담체는 생리학적 염수, 정균수, Cremophor ELΟ(BASF, Parsippany, N.J.) 또는 인산염 완충 염수(PBS)를 포함한다. 모든 경우에서, 조성물은 멸균된 것이어야 하고, 주사가 용이하게 수행될 수 있을 정도로 유동성이어야 한다. 조성물은 제조 및 보관 조건 하에서 안정적이어야 하고, 미생물, 예를 들어 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해서 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이것들의 적합한 혼합물을 함유하는 분산 매질 또는 용매일 수 있다. 적당한 유동성은, 예를 들어 코팅, 예를 들어 레시틴을 사용하고, 분산액의 경우 요구되는 입도를 유지하며, 계면활성제를 사용함으로써 유지될 수 있다. 미생물 작용의 보존은 다양한 항박테리아 제제 및 항진균 제제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산 및 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 다수의 경우, 조성물 중에 등장제, 예를 들어 설탕, 폴리알코올, 예를 들어 만니톨 및 솔비톨, 그리고 염화나트륨이 포함되는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 연장된 흡수는 조성물 중에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 모노스테아르산알루미늄 및 젤라틴을 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
멸균 주사 용액은, 필요에 따라서 상기 나열된 성분들 중 하나 또는 이 성분들의 조합과 함께 요구량만큼의 활성 화합물을 적절한 용매에 혼입한 다음, 멸균 여과함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로 분산액은 활성 화합물을, 염기성 분산 매질과 상기 나열된 것들로부터 선택되는 기타 다른 필요 성분들을 함유하는 멸균 비이클에 혼입하여 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은, 이미 멸균 여과한 용액으로부터 활성 성분과 추가로 요망되는 임의의 성분의 분말을 만들어내는 진공 건조 및 동결 건조이다.
경구 투여용 조성물은 일반적으로 비활성 희석제 또는 약학적으로 허용 가능한 식용 담체를 포함한다. 경구 투여용 조성물은 젤라틴 캡슐내에 담아질 수 있거나 또는 정제로 압축될 수 있다. 치료용 경구 투여를 위해 활성 화합물은 부형제와 함께 혼입되어, 정제, 트로키 또는 캡슐의 형태로서 사용될 수 있다. 경구 투여용 조성물은 또한 가글액으로서 사용되기 위해 유동 담체를 사용하여 제조될 수도 있는데, 이 경우 유동 담체 중 화합물은 경구 적용되어 휙 소리를 내며 움직여진 다음 뱉어지거나 삼켜질 수 있다. 약학적으로 혼화 가능한 결합제 또는 보조제 재료, 아니면 둘 다는 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐 및 트로키 등은 다음과 같은 성분들, 즉 결합제, 예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 검 트래거칸트 또는 젤라틴; 부형제, 예를 들어 전분 또는 락토스, 붕해제, 예를 들어 알긴산, Primogel 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예를 들어 스테아르산 마그네슘 또는 Sterotes; 활강제, 예를 들어 콜로이드 이산화실리콘; 감미제, 예를 들어 수크로스 또는 사카린; 또는 풍미제, 예를 들어 페퍼민트, 살리실산메틸 또는 오렌지향 중 임의의 것, 또는 유사한 성질을 가지는 화합물들을 함유할 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해서 화합물은 적합한 추진제, 예를 들어 가스, 예를 들어 이산화탄소를 함유하는 가압 용기 또는 분배기, 아니면 분무기로부터 나오는 에어로졸 분사물의 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 수단 또는 경피 수단에 의해 이루어질 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 침투될 장벽에 적절한 경피흡수촉진제가 제형에 사용된다. 이와 같은 경피흡수촉진제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 경점막 투여의 경우에는 세제, 담즙산염 및 후시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 분사물 또는 좌제를 사용함으로써 달성될 수 있다. 경피 투여를 위해서 활성 화합물은 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이 연고, 고약, 겔 또는 크림으로 제형된다.
활성 화합물은, 이 화합물이 몸속에서 빨리 소모되는 것을 막아줄 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 예를 들어 임플란트 및 미세캡슐화된 전달 계와 같은 조절 방출 제형으로 제조될 수 있다. 생체 분해성, 생체 혼화성 폴리머, 예를 들어 에틸렌아세트산비닐, 다가무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리젖산이 사용될 수 있다. 이러한 제형을 제조하기 위한 방법은 당업자들에게 분명할 것이다. 재료들은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 입수될 수 있다. 리포좀 현탁액(바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체와 함께, 감염된 세포로 표적화된 리포좀 포함)도 또한 약학적으로 허용 가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이러한 리포좀 현탁액은, 예를 들어 미국 특허 4,522,811에 기술된 바와 같이 당업자들에게 공지된 방법들에 따라서 제조될 수 있다.
경구 또는 장관 외 조성물을 투여의 용이성과 용량의 균일성을 도모하도록 용량 단위형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 바와 같은 용량 단위형은, 치료될 피험체에 대하여 단위 용량으로서 적합한, 물리적 불연속 단위들을 지칭하는데; 각각의 단위는 요구되는 약학 담체와 연관하여 요망되는 치료 효과를 내도록 산정된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 용량 단위형에 대한 설명은 달성될 특정 치료 효과와 활성 화합물의 독특한 특징들에 의해 지시되며 직접적으로 이것들에 의존한다.
치료적 적용에 있어서, 본 발명에 따라서 사용되는 약학 조성물의 용량은, 선택되는 용량에 영향을 미치는 기타 다른 요인들 가운데, 제제, 수용 환자의 연령, 체중 및 임상 상태, 그리고 치료법을 수행하는 임상의나 실무자의 경험과 판단에 따라서 달라진다. 일반적으로 용량은 종양의 성장을 늦추고, 바람직하게는 퇴행시키며, 또한 바람직하게는 암의 완전한 퇴행을 초래하기에 충분하여야 한다. 용량은 1 일에 약 0.01 mg/kg 내지 약 5000 mg/kg의 범위일 수 있다. 바람직한 양태들에서, 용량은 1 일에 약 1 mg/kg 내지 약 1000 mg/kg의 범위일 수 있다. 특정 양태에서, 용량은 단일, 분할 또는 연속 용량으로서 약 0.1 mg/일 내지 약 50 g/일; 약 0.1 mg/일 내지 약 25 g/일; 약 0.1 mg/일 내지 약 10 g/일; 약 0.1 mg/일 내지 약 3 g/일; 또는 약 0.1 mg/일 내지 약 1 g/일의 범위일 것이다(용량은 환자의 체중(kg), 체 표면적(㎡) 및 연령(세)에 대해 조정될 수 있음). 약학 제제의 유효량은 임상의 또는 기타 다른 자격을 갖춘 관찰자에 의해 주목되는 바와 같이 객관적으로 식별 가능한 개선을 제공하는 양이다. 예를 들어 환자에 있어서 종양의 퇴행은 종양의 지름을 참고로 하여 측정될 수 있다, 종양 지름의 감소는 퇴행을 나타낸다. 퇴행은 또한 치료가 중단된 후에 종양이 재발되지 않는 것에 의해서도 나타내어진다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "용량 유효 방식"이란, 활성 화합물의 양이 피험체 또는 세포 내에서 요망되는 생체 효과를 발휘하는 경우를 지칭한다.
약학 조성물은 투여 지시사항들과 함께 용기, 팩 또는 분배기 내에 담길 수 있다.
본 발명의 화합물은 염을 추가로 형성할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한 염"은, 본 발명의 화합물의 염을 지칭하는데, 여기서 모 화합물은 자체의 산 염 또는 염기 염을 만듦으로써 변형된다. 약학적으로 허용 가능한 염의 예들은 염기성 잔기, 예를 들어 아민의 무기산 염 또는 유기산 염, 산성 잔기, 예를 들어 카르복실산의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 약학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어 무독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된, 모 화합물의 종래 무독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어 이러한 종래의 무독성 염은, 2-아세톡시벤조산, 2-하이드록시에탄설폰산, 아세트산, 아스코르브산, 벤젠설폰산, 벤조산, 중탄산, 탄산, 시트르산, 에데트산, 에탄 디설폰산, 1,2-에탄 설폰산, 푸마르산, 글루코헵토산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 글리콜리아르사닐산, 헥실레소르신산, 하이드라밤산, 브롬화수소산, 염화수소산, 요오드화수소산, 하이드록시말레산, 하이드록시나프토산, 이세티온산, 젖산, 락토비온산, 라우릴 설폰산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄설폰산, 납실산, 질산, 옥살산, 팜산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 폴리갈락투론산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 2차 초산, 숙신산, 설팜산, 설파닐산, 황산, 탄닌산, 주석산, 톨루엔 설폰산 및 통상으로 발생하는 아미노산, 예를 들어 글리신, 알라닌, 페닐알라닌, 아르기닌 등으로부터 선택되는 무기산 및 유기산으로부터 유래하는 염들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
약학적으로 허용 가능한 염의 기타 다른 예들은 헥산산, 사이클로펜탄프로피온산, 피루브산, 말론산, 3-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 신남산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄포설폰산, 4-메틸비사이클로-[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 3차 부틸아세트산 및 뮤콘산 등을 포함한다. 본 발명은 또한, 모 화합물 내에 존재하는 산 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온, 알칼리토 이온 또는 알루미늄 이온에 의해 치환되거나; 아니면 유기 염기, 예를 들어 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민 및 N-메틸글루카민 등과 배위결합할 때 형성되는 염들도 포함한다.
화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 경구, 비내, 경피, 폐, 흡입, 협측, 설하, 복막 내, 피하, 근육 내, 정맥 내, 직장, 흉막 내, 초 내 및 장관 외 투여된다. 하나의 구현예에서, 화합물은 경구 투여된다. 당업자는 특정 투여 경로의 이점들을 인식할 것이다.
화합물이 사용되는 투여 계획은, 환자의 유형, 종, 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태; 치료될 병태의 심각성; 투여 경로; 환자의 신장 기능 및 간 기능; 그리고 사용된 특정 화합물 또는 이의 염을 포함하는 다양한 인자들에 따라서 선택된다. 통상의 숙련된 전문의 또는 수의사는 해당 병태의 진행을 예방, 대응 또는 방지하기 위해 필요한 약물의 유효량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명에 개시된 화합물의 제형화 및 투여를 위한 기법들은 문헌[Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995)]에서 발견될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원에 기술된 화합물과 이의 약학적으로 허용 가능한 염은, 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 약학 제제에 사용된다. 약학적으로 허용 가능한 적합 담체는 비활성 고체 충전제 또는 희석제, 그리고 멸균 수용액 또는 유기 용액을 포함한다. 화합물은 본원에 기술된 범위의 요망 투여량을 제공하기에 충분한 양만큼, 이와 같은 약학 조성물 중에 존재할 것이다.
본원에 사용된 모든 백분율과 비율은 달리 특정되지 않는 한 중량부이다. 본 발명의 기타 다른 특징들과 이점들은 상이한 실시예들로부터 명확하다. 제공된 실시예들은 본 발명을 수행함에 있어서 유용한, 상이한 성분들과 방법을 예시한다. 실시예들은 청구된 발명을 제한하지는 않는다. 본 개시내용을 바탕으로 하였을 때, 당업자는 본 발명을 수행하는데 유용한, 기타 다른 성분들과 방법을 동정 및 사용할 수 있다.
본원에 기술된 합성 반응식들에 있어서, 화합물은 간편하게 하나의 특정 입체배치로 도시될 수 있다. 이러한 특정 입체배치는, 본 발명을 1 개 또는 다른 이성체, 호변이성체, 레지오아이소머(regioisomer) 또는 입체이성체로 제한하는 것으로 해석되어서도 안 될뿐더러, 이성체, 호변이성체, 레지오아이소머 또는 입체이성체의 혼합물을 배제하는 것으로 해석되어서도 안된다.
본 발명의 방법에 적합한 추가의 화합물뿐만 아니라, 이의 약학 조성물 및 용도는 WO12/142504 및 WO12/142513에 기술되어 있으며, 이들 각각의 내용은 본원에 전체가 참조로 포함되어 있다.
히스톤 단백질의 번역후 변형 및 ATP-의존 크로마틴 리모델링은 정상 유전자 발현의 신뢰도를 조절하는 데에 중요한 과정이다. 이러한 과정에 수반되는 단백질들, 예를 들어 PRC2 및 SWI/SNF 복합체는 종종 암에 있어서 유전적으로 변경된다. 중요한 점은, 상기 복합체 2 개는 크로마틴과의 결합 및 크로마틴에 영향을 미침에 있어 보통 서로간에 경쟁을 하는데; 유전자 변경은 이러한 길항작용에서 균형을 깨뜨릴 수 있다는 점이다. 예를 들어 INI1은 거의 모든 간상 종양에서 소실되는 SWI/SNF 복합체의 서브유닛으로서, PRC2-EZH2 메틸전이효소에 대한 발암 유전자 의존성을 가지도록 만들고, 간상 종양 모델은 EZH2 소분자 억제제에 감수성이다. 또 다른 INI1-결핍 종양 유형인 활막 육종에서, 재발 염색체 전좌는 18번 염색체상 SS18 유전자(SWI/SNF 크로마틴 리모델링 복합체의 서브유닛)를 X 염색체상 관련 유전자 3 개(SSX1, SSX2 및 드물게는 SSX4) 중 하나에 융합한다. 이는, 추후 분해될 야생형 SS18 및 종양 억제인자 INI1 둘 다를 쫓아내면서 SWI/SNF 복합체와 결합하는 발암 유전자 SS18-SSX 융합 단백질의 발현을 초래한다. 이는, 비정상 유전자 발현과, 궁극적으로는 암 발달을 초래한다.
화합물 A(본원에 있어서는 E7438 또는 EPZ-6438이라고도 칭하여짐), 즉 초기 임상 단계에 있고, 선택적이면서 경구 생체 이용가능한, EZH2 효소 활성의 소분자 억제제가 활막 육종의 전임상 모델에서 단일 제제로서, 그리고 화학요법과 함께 항 증식 활성을 유도하는 것을 나타내는 데이터가 본원에 기술되어 있다. 본 화합물은 시험관 내 (SS18-SSX1 융합 양성인) 활막 육종 세포주 내에서 특이적으로 용량 의존적 세포 성장 억제와 세포 사멸을 유도한다. 세포주 이종이식편 1 개 또는 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델 2 개 중 어느 하나를 보유하는 마우스의 치료는, 히스톤 H3 상 리신 27, 즉 EZH2 특이 기질의 트리메틸화 수준의 상관적 억제와 함께, 용량 의존적 종양 성장 억제를 유도한다. 이러한 데이터는, 이종이식편 모델 내 SS18-SSX1 양성 활막 육종의 EZH2 효소 활성에 대한 의존성을 나타내고, 적절한 바이오마커가 사용되어 유전적으로 정의된 암(들)에 있어서의 EZH2-표적화 약물의 잠재적 유용성을 암시한다.
본원에 인용된 모든 간행물과 특허 문헌들은, 이러한 간행물 또는 문헌들 각각 본원에 참조로서 포함되어 있다고 구체적이고 개별적으로 지정된 바와 같이, 참조로 본원에 포함되어 있다. 간행물 및 특허 문헌들의 인용은, 임의의 인용이 선행 기술과 관련되어 있다고 자인하는 것으로 의도된다거나, 아니면 그것이 해당 선행 기술의 내용이나 날짜에 대한 임의의 자인을 이루는 것으로 의도되는 것은 아니다. 지금까지 본 발명은 서면으로 작성된 본 발명의 설명에 의해 기술되었는데, 당업자들은 본 발명이 다양한 구현예에서 실시될 수 있고, 전술된 발명의 설명과 이하의 실시예들이 첨부된 특허청구의 범위를 예시하고자 하는 것일 뿐 이를 제한하고자 하는 것은 아님을 인식할 것이다.
실시예
실시예 1: 다양한 세포 주 내 EZH2, INI1, SS18-SSX1 및 로딩 대조군 β-액틴의 단백질 수준
HS-SY-II 및 SW982 인간 활막 육종 세포, RD 인간 횡문근육종 세포, G401 인간 간상 종양 세포 및 HEK293 인간 배 신장 세포를, 1 × 프로테아제 억제제 칵테일(Thermo Scientific, Rockford, IL)을 함유하는 1 × 세포 용해 완충제(#9803, Cell Signaling Technology, Danvers, MA)로 용해하였다. 시료들을 초음파처리한 다음, 4℃에서 10 분 동안 10,000 × g으로 원심분리하여 투명하게 만들었다. 용해물의 단백질 함량은 BCA 단백질 검정 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 측정하였다. 2 × 로딩 완충제(Tris SDS에 대한 β-ME 시료 처리, Cosmo bio, Tokyo, Japan)와 물을 세포 용해물과 혼합하여 시료 용액을 제조한 다음, 이를 95℃에서 5 분 동안 항온처리하였다. 웨스턴 블럿 분석을 다음과 같이 수행하였다. 환원 조건 하에 2% 내지 15% 구배 폴리아크릴아미드 겔(SS18 및 EZH2용) 또는 4% 내지 20% 구배 폴리아크릴아미드 겔(INI1 및 β-액틴용) 상에서 시료 용액을 분리한 다음, 니크로셀룰로스 막(GE Healthcare, Waukesha, WI)으로 옮겼다. 실온에서 1 시간 동안 다음과 같은 차단 용액으로 블롯들을 차단하였다: 1 × Block Ace 용액(Yukijirushi, Sapporo, Japan)(EZH2, INI1 및 SS18용), 및 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS(β-액틴용). 블롯들을 다음과 같은 희석 조건 하에 4℃에서 밤새 1차 항체와 함께 항온처리하였다: 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 1:1000 희석율로 희석된 EZH2 항체(07-689, Millipore, Billerica, MA), 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 1:1000 희석율로 희석된 INI1 항체(#8745, Cell Signaling Technology), 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 1:500 희석율로 희석된 SS18 항체(sc-365170, Santa Cruz, Santa Cruz, CA), 그리고 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS 중 1:2000 희석율로 희석된 β-액틴 항체(A5441, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). 0.5% Tween 20 함유 TBS로 블롯을 세정한 다음, 이 블롯을, 실온에서 60 분 동안 다음과 같은 희석 조건 하에서 항 마우스 IgG(Cell Signaling Technology) 및 항 토끼 IgG(Cell Signaling Technology)와 접합된 호오스래디쉬 퍼옥시다아제와 함께 추가로 항온처리하였다: 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 항 토끼 IgG 1:1000 희석(EZH2, INI1 및 SS18용), 그리고 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS 중 항 마우스 IgG 1:2000 희석(β-액틴용). 0.5% Tween 20 함유 TBS로 광범위 세정을 수행한 다음, 블롯들을 Immobilon Western 화학발광 HRP 기질(Millipore)과 함께 전개하였다. Luminescent Image Analyzer LAS-3000(Fuji Film, Tokyo, Japan)을 사용하여 화학발광에 의해 면역반응성 밴드를 가시화하였다. 웨스턴 블럿의 대표적인 이미지들을 도 1에 나타내었다. SS18-SSX1 발현이 HS-SY-II 세포 내에서 확인되었다. 세포주에서 INI1 하향 조절도 또한 발견되었다. 다른 한편, 또 다른 활막 육종 주 SW982는 융합 단백질을 발현하지 않았고, RD 및 HEK293 세포의 INI1 발현과 균등한 발현을 나타내었다.
실시예 2: 다양한 세포주 내 H3K27의 트리메틸화 및 디메틸화 수준
HS-SY-II 및 SW982 인간 활막 육종 세포, RD 인간 횡문근 육종 세포, G401 인간 간상 종양 세포, WSU-DLCL2 및 OCI-LY19 인간 광범위 큰 B-세포 림프종 세포 및 HEK293 인간 배 신장 세포를 용해 완충제(10 mmol/L MgCl2, 10 mmol/L Tris-HCl, 25 mmol/L KCl, 1% Triton X-100, 8.6% 수크로스, 및 1 × 프로테아제 억제제 칵테일) 500 μL 중에 현탁하였다. 5 분 동안 얼음 상에서 항온처리한 다음, 4℃에서 5 분 동안 600 × g로 원심분리하여 핵을 수집하고 나서, 얼음 냉각 PBS로 1 회 세정하였다. 4℃에서 5 분 동안 600 × g로 원심분리한 다음, 펠릿을 1 시간 동안 0.2 mol/L 얼음 냉각 황산 100 μL 중에 재현탁하여, 항온처리 동안 수 회 와류시켰다. 상청액을 4℃에서 10 분 동안 10,000 × g로 원심분리하여 투명하게 만든 다음, 수집된 상청액에 얼음 냉각 아세톤 1 mL를 첨가하였다. 히스톤을 -20℃에서 1 시간 동안 침전시킨 다음, 4℃에서 10 분 동안 10,000 × g로 원심분리하여 펠릿화한 후, 물 100 μL 중에 재현탁하였다. 추출된 히스톤을 BCA 단백질 검정 키트(Pierce)를 사용하여 정량하였다. 2 × 로딩 완충제(Tris SDS에 대한 β-ME 시료 처리, Cosmo bio) 및 물을 세포 용해물과 혼합하여 시료 용액을 제조한 다음, 이를 95℃에서 5 분 동안 항온처리하였다. 다음과 같이 웨스톤 블롯 분석을 수행하였다. 시료 용액을 환원 조건 하에 15% 내지 25% 구배 폴리아크릴아미드 겔 상에서 분리하고 나서, 니트로셀룰로스 막(GE Healthcare, Waukesha, WI)에 옮겼다. 다음과 같은 차단 용액으로 블롯들을 실온에서 1 시간 동안 차단하였다: 1 × Block Ace 용액(H3K27me3 및 H3K27me2용), 및 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS(총 히스톤 H3용). 블롯을 다음과 같은 희석 조건 하에서 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 항온처리하였다: 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 1:1000 희석율로 희석된 H3K27me3 항체(#9733, Cell Signaling Technology) 및 H3K27me2 항체(#9728, Cell Signaling Technology)와, 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS 중 1:2000 희석율로 희석된 총 히스톤 H3 항체(ab1791, Abcam, Cambridge, MA). 블롯을 0.5% Tween 20 함유 TBS로 세정한 다음, 이 블롯을, 0.5% Tween 20 및 0.1 × Block Ace 용액 함유 TBS 중 1:1000 희석(H3K27me3 및 H3K27me2용), 또는 0.5% Tween 20 및 5% 탈지유 함유 TBS 중 1:2000 희석(총 히스톤 H3용)에 의해, 실온에서 60 분 동안 항 토끼 IgG(Cell Signaling Technology)와 접합된 호오스래디쉬 퍼옥시다아제와 함께 추가로 항온처리하였다. 0.5% Tween 20 함유 TBS로 광범위 세정을 수행한 다음, 블롯들을 Immobilon Western 화학발광 HRP 기질(Millipore)과 함께 전개하였다. 발광 이미지 분석기 LAS-3000(Fuji Film, Tokyo, Japan)을 사용하여 화학발광에 의해 면역반응성 밴드를 가시화하였다. 웨스턴 블럿의 대표적인 이미지들을 도 2a에 나타내었다. Multi Gauge 버전 3.0 소프트웨어(Fuji Film)를 사용하여 단백질 밴드의 신호를 정량하였다. 다양한 세포주 내에서 정량적 H3K27me3/총 H3(도 2b), H3K27me2/총 H3(도 2c) 또는 H3K27me3/H3K27me2(도 2d) 비율을 나타내는 일련의 플롯들을 나타내었다. Y646 EZH2 돌연변이를 보유하는 WSU-DLCL2 내에서의 고 H3K27me3/H3K27me2 상태와는 대조적으로, HS-SY-II는 고 H3K27me3/H3K27me2 상태를 나타내지 않았다.
실시예 3: 부착성 세포주 장기 증식 검정
프로토콜:
7 일 검정용 96-웰 평판 도말: 96-웰 평판 내에서, 각각의 부착성 세포주에 대하여 저녁(다음 날 화합물 처리용) 또는 아침(저녁 화합물 처리용)에 3 회 처리될 도말 세포(부피 100 μL)를 대상으로, 이 세포에 화합물 처리를 수행하기 전에 평판에 부착되도록 만들었다.
7 일 내지 14 일 검정용으로 나누어질 6-웰 평판: 6-웰 평판의 각 웰에 정확한 밀도의 세포 2 mL를 도말하였다. 96-웰 밀도를 30으로 곱하여 96-웰 평판 성장 곡선으로부터 정확한 밀도를 산정하였다. 팩터 30(9.5cm2/0.32cm2 = 29.7, 반올림해서 30)은 96-웰 평판의 성장 면적에 의해 나누어진 6-웰 평판의 성장 면적으로부터 구하였는데, 이는 96-웰 평판에 비하여 6-웰 평판에서 30 배 더 큰 표면적에 상응하였다.
제0 일: 배지를 제거하고, 정확한 희석율의 화합물/DMSO와 함께 다시 배지 100 μL(96-웰 평판용) 또는 배지 2 mL(6-웰 평판용)를 첨가함으로써, 화합물 또는 DMSO로 처리하였다. 표 1은 96-웰 평판 맵의 일례를 포함한다. 평판들을 96 시간 동안 항온처리하였다.
Figure pct00046
제0 일 판독을 위해 CellTiter-Glo®로 96-웰 평판 하나를 판독하였다(이 평판에 대해 배지 교체는 불필요함).
제4 일: 제4 일 판독을 위해 CellTiter-Glo®로 96-웰 평판 하나를 판독하였다(판독 전 이 평판에 대해 배지 교체는 불필요함). 96-웰 평판 및 6-웰 평판 내 제4 일에 배지를 화합물을 함유하는 신선한 배지로 교체하였다.
제7 일: CellTiter-Glo®로 최종 96-웰 평판을 판독하였다.
상기 기술된 바와 같이, 6-웰 평판의 각 웰을 계수하였으며, 96-웰 평판 내 초기 도말 밀도로 세포를 다시 도말하였다.
증식 검정의 제7 일 내지 제14 일을 위해 제0 일 내지 제7 일의 단계들을 반복하였다.
특히 화합물 처리 약 12 시간 전에 HS-SY-II 또는 SW982 세포를 각각 밀도 24,000 세포/웰 및 7,500 세포/웰로 도말하였다(6-웰 내). 제0 일에, 세포를 DMSO 또는 화합물 중 어느 하나로 처리하였는데, 이때 농도는 10 μmol/L를 시작으로, 줄여나가 이의 4분의 1로 만들었다. 제7 일에, 6-웰 평판 내 세포를 트립신으로 처리한 다음, TC10 자동화 세포 계수기(Bio-Rad, Richmond, CA)로 계수한 다음, 96-웰 평판에서 3 회씩 밀도 800 세포/웰 및 250 세포/웰(HS-SY-II 및 SW982)로 각각 다시 도말하였다. 밤새 세포들이 평판에 부착되도록 만들고 나서, 제0 일때처럼 DMSO 또는 화합물 중 어느 하나로 처리하였다. 제0 일, 7 일, 11 일 및 14 일에, EnVision 2103 멀티라벨 판독기(Perkin-Elmer, Wellesley, MA)를 사용하여 CellTiter-Glo® 발광 세포 생존 능 검정(Promega)에 의해 세포의 생존 능을 측정하였다. 제4 일 및 제11 일에 화합물/배지를 새것으로 바꾸었다. 제7 일, 제11 일 및 제14 일에 측정된 값들 대 제7 일에 측정된 값의 비율을 사용하여 제7 일부터 제14 일까지의 증식을 플롯으로 나타내었으며, 제14 일에는 IC50 값을 산정하였다. 화합물 E 및 화합물 A(본원에서는 E7438 및 EPZ-6438이라고 칭하여지기도 함)가 사용된 실험들의 대표적 그래프들을 각각 도 3a, 3b, 3c 및 3d에 나타내었다. HS-SY-II 세포는 14-일 장기 증식 검정에 있어서 화합물 E 및 화합물 A에 큰 감수성을 나타내었으나, SW982 세포는 그렇지 않았다.
실시예 4: 시험관 내 및 생체 내 화합물 A 처리
시험관 내 HS-SY-II 세포는 화합물 A에 대한 감수성이 컸고, 용량 의존적 방식으로 세포 증식의 억제를 나타내었다. 다른 한편, SW982 세포는 화합물 A에 감수성이지 않았다(도 5a 및 5b).
EZH2 억제제 처리된 세포주들 둘 다에서 H3K27me3 감소가 관찰되었으며(도 6a), IC50 값들은 서로간에 거의 동일하였다(도 6b). 이는, EZH2 억제제 처리에 의한 히스톤 마크 변경이 SS18-SSX 융합 단백질의 존재에 독립적이었음을 암시한다.
HS-SY-II 이종이식편 마우스 모델 내에서 PK 값 및 PD 변경을 분석하였다. 마지막 투여 5 분 전 및 3 시간 후 화합물 A의 혈장 농도를 측정하였다. 용량 의존적 노출이 관찰되었다(도 7a). 이와 동시에 종양 조직 내 H3K27me3 수준의 용량 의존적 감소도 관찰되었다(도 7b). 표 2 및 3은, 도 7b에 나타낸 데이터와 관련된 통계학적 분석들을 제공한다.
Figure pct00047
Figure pct00048
시험관 내 배양액 중 HS-SY-II 및 SW982에서 화합물 A 또는 EPZ-011989(즉, 화합물 C) 처리에 의한 유전자 발현 변화를 분석하였다. PRC2 복합체는 TLE1에 의해 SS18-SSX 융합 단백질에 다시 보충되어, ATF2 표적 유전자(EGR1, ATF3, MEIS2 및 CDKN2A)를 억제함이 보고되었다(Cancer Cell 21, 333-347, 2012). 이때 EGR1, ATF3 및 CDKN2A의 발현 수준을 관찰하였다. HS-SY-II에서 용량-의존적 및 시간-의존적 CDKN2A 상향조절이 관찰되었던 반면, CDKN2A 자리는 SW982에서 동형접합 결실된 것으로 알려졌다(도 8). ATF3 및 EGR1은 화합물 A 및 EPZ-011989 처리에 의해 HS-SY-II에서는 상향조절되었고, SW982에서는 그렇지 않았다. 그러므로 화합물 A는 활막 육종 발병에 연루된 유전자 발현의 변화를 유도한다.
표 4는 도 8에 나타낸 데이터에 관한 통계학적 분석을 제공한다.
Figure pct00049
(“*”는 0 μM 처리 군의 수준에 비하여 유의적 변화가 있음을 의미함)
HS-SY-II 이종이식편 모델에서 화합물 A처리에 의한 유전자 발현 변화도 또한 분석하였다. CDKN2A는 500 mg/kg 화합물 A가 투여된 마우스에서 유의적으로 상향조절되었다(도 9). 또한 화합물 A는 활막 육종 발병에 연루된 유전자의 발현에 변화를 유도한다.
도 10a 내지 10c는, HS-SY-II 이종이식편을 보유하는 무흉선 누드 마우스에 대한 평균 생체 내 종양 부피를 나타낸다. 제1차 연구에서, 마우스에 비이클(경구 투여, 28 일 동안, 또는 제1 일과 제22 일에 iv 투여), 화합물 A(경구: 125 mg/kg, 250 mg/kg, 또는 500 mg/kg, 28 일 동안), 또는 독소루비신(iv: 10 mg/kg, 제1 일 및 제22 일) 중 어느 하나를 투여한 다음; 종양 부피를 1 주일에 2 회 측정하였다(도 10a 및 10b). 제2차 연구에서, 마우스에 비이클(경구 투여, 28 일 동안), 화합물 A(경구 투여: 250 mg/kg 또는 500 mg/kg, 28 일 동안), 독소루비신(iv: 10 mg/kg, 제1 일 및 제22 일), 또는 독소루비신(iv: 10 mg/kg, 제1 일 및 제22 일)과 화합물 A(경구 투여: 250 mg/kg, 28 일 동안)의 조합 중 어느 하나를 투여하였다(도 10c). 제28 일(마지막 투여 3 시간 후)에 제2차 연구의 동물로부터 종양을 수집하여, 이를 대상으로 ELISA에 의해 H3K27me3 분석을 실시하였거나(도 10d), 또는 증식 마커 Ki67에 대해 IHC를 수행하였다(도 10e).
HS-SY-II 세포주 이종이식편은 2D 세포 배양에서 화합물 A에 감수성이었지만, 마우스 이종이식편 모델에서 용량 관련 종양 부피 증가를 나타내었으며; 이러한 관찰 결과를 뒷받침해주는 기작은 연구 중에 있다.
도 11a 및 11c는, 활막 육종 종양의 상이한 PDX 2 개 중 하나를 가지는 무흉선 누드 마우스에 대한 생체 내 평균 종양 부피를 나타낸다. 도 11b 및 11d는, PDX를 보유하는 마우스에 대한 생존%를 나타낸다. 마우스에 비이클(경구 투여, 35 일 동안), 화합물 A(경구 투여: 125 mg/kg, 250 mg/kg, 또는 500/400 mg/kg, 35 일 동안) 또는 독소루비신(iv: 3 mg/kg, 1 주일에 1 회, 3 주 동안) 중 어느 하나를 투여하였다. 도 11a 및 11b는, 57 세 남성 고등급 방추체 세포 육종 환자로부터 유래하는 PDX를 보유하는 마우스로부터 구하여진 데이터를 나타낸다. 도 11c 및 11d는, 16 세 여성 환자로부터 유래하는 PDX를 보유하는 마우스로부터 구하여진 데이터를 나타낸다. HS-SY-II 세포주 이종이식편들과는 대조적으로, PDX 마우스는 생체 내 용량 관련 종양 부피 감소를 나타내었다.
도 12a 및 12b는, 제35 일에 수득하여 RNA-seq 분석에 의해 분석된 마우스 하위 세트로부터 유래하는 활막 육종 PDX 종양으로부터 구하여진 어레이 데이터를 나타낸다. 도 12a는 57세 남성으로부터 유래하는 PDX를 보유하는 마우스로부터 구하여진 데이터이고; 도 12b는 16 세 여성으로부터 유래하는 PDX를 보유하는 마우스로부터 구하여진 데이터이다. 400 mg/kg 화합물 A로 처리된 마우스에서 HLA 유전자, Fas 및 KLRD1의 발현은, 비이클로 처리된 마우스의 경우에 비하여 증가하였다. 도면에 있어서, 청색은 낮은 발현을, 그리고 적색은 높은 발현을 나타낸다.
재료 및 방법
세포 배양액
37℃, 5% CO2 조건 하에, 10% FBS를 함유하는 RPMI1640 중에서 HS-SY-II(RCB2231, RIKEN BioResource Center) 및 SW982(HTB-93, ATCC)를 성장시켰다. HS-SY-II 세포를 특성규명하여 SS18-SSX1의 융합이 이루어졌음을 규명하였고, SW982 세포는 야생형 SS18을 가짐을 규명하였다.
화합물 A에 의해 유도된 H3K27 메틸화 변경
HS-SY-II 및 SW982 세포를 DMSO 또는 화합물 A로 처리하였는데, 이때 농도는 40 nmol/L를 시작으로, 96 시간 동안 줄여나가 이의 4분의 1로 만들었다. 세포를 얼음 냉각 PBS로 세정한 다음, 세포 스크랩퍼(cell scraper)로 수득한 후, 핵 추출 완충제(10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 25 mM KCl, 1% Triton X-100, 8.6% 수크로스, 그리고 1x Halt 프로테아제 억제제 칵테일(1861281, Thermo Scientific)) 100 μl로 용해하였다. 4℃에서 5 분 동안 600 g로 원심분리하여 핵을 수집한 다음, 이를 얼음 냉각 PBS로 1 회 세정하였다. 상청액을 제거한 다음, 1 시간 동안 0.4 N 냉각 황산 100 μL로 히스톤을 추출하였다. 4℃에서 10 분 동안 10,000 g로 원심분리하여 추출물을 투명하게 만들고 나서, 이를 얼음 냉각 아세톤 1 mL가 담긴 새 미량원심분리 튜브에 옮겨담았다. 히스톤을 -20℃에서 밤새 침전시킨 다음, 10 분 동안 10,000 g로 원심분리하여 펠릿으로 만든 후, 물 100 μl 중에 다시 현탁하였다. BCA 단백질 검정(23225, Pierce)을 이용하여 히스톤을 정량하였다. 희석된 히스톤을 밤새 Immulon 4HBX 평판(3855, Thermo Scientific) 상에 코팅하고 나서, ELISA를 수행하였다. 요약하면, 평판을 0.05% Tween 20 및 2% 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 PBS로 차단한 다음, H3K27me3 항체(#9733, Cell Signaling Technology) 또는 총 히스톤 H3 항체(AB1791, Abcam)와 함께 항온처리하였다. 평판들을 항 토끼 IgG 접합 호오스래디쉬 퍼옥시다아제(#7074, Cell Signaling Technology)와 함께 추가로 항온처리한 다음, TMB 기질(TMBS-0100-01, BioFx Laboratories)과 함께 항온처리하였다. 추후 450 nm(기준 파장 650 nm)에서 평판 분광분석계(SpectraMax 250, Molecular Devices)를 사용하여 웰에 발색된 색을 측정하였다. H3K27me3 수준을 총 히스톤 H3에 대해 조정하였으며, 이를 DMSO 대조군에 대한 배수 변화(fold change)로서 표현하였다.
도 6a는 대표적인 플롯을 나타낸다. GraphPad Prism(GraphPad Software)에 의해 도 6b에 나타낸 IC50 값(2 회의 독립된 실험)의 범위를 결정하였다. 히스톤 마크 변경은 HS-SY-II 및 SW982 간에 거의 동일하였으며, 변경은 SS18-SSX 융합 단백질과는 독립적이었다.
HS-SY-II 이종이식편 모델에 있어서 PK 값 및 PD 변경
중간 지수기 성장 중 HS-SY-II 세포를 수득하여, 이를 50% Matrigel(BD Biosciences)을 포함하는 Hank 균형 염 용액 중에 재현탁하였다. Balb/C-nu 마우스(Charles River Laboratories Japan) 오른쪽 옆구리에 1x107 개 세포(0.1 mL 세포 현탁액)를 피하 접종하였다. 약 200 mm3(주사 후 31 일 경과시)의 종양을 보유하는 마우스를 평균 종양 부피가 유사한 처리군으로 분류하였다. 화합물 A 또는 비이클(0.5% MC + 0.1% Tween-80, 물 중)을 1 일 2 회씩 총 7 일 동안 지정된 용량으로 경구 위관영양 투여하였다. 각 용량을 0.2 mL/20 g 마우스(10 mL/kg)의 부피로 전달한 다음, 각각의 동물의 마지막으로 기록된 체중에 대해 조정하였다. 마지막 투여 약 5 분 전 및 마지막 투여 3 시간 후, 화합물 A 처리 마우스로부터 말초 혈액 시료를 수집하였다. 원심분리로 혈장 시료를 얻은 다음, 액체 크로마토그래피-이원 질량 분광분석(LC/MS/MS) 방법에 의해 화합물 A의 혈장 농도에 대한 분석을 수행하였다. 질량 분광분석계(Quattro premier, MICROMASS)가 장착된 UPLC 계(Acquity, Waters)를 사용하여 화합물 A를 정량하였다. 농도를 도 7a에 플롯으로 작성하였다(n=5). 각각의 막대는 각 군의 혈장 농도의 평균을 나타낸다.
마지막 투여 약 3 시간 후 PK 값 및 PD 변경에 대한 분석에 사용된 마우스로부터 종양 시료를 수집하였다. RNAlater(AM7020, Life technologies)를 사용하여 종양 시료를 보관하여 두었다. 제조자의 지침에 따라서 RNeasy 미니 키트(74104, Qiagen) 및 고 용량 cDNA 역전사 키트(4368814, Life technologies)에 의해 총 RNA 분리 및 역전사를 수행하였다. 전술된 바와 같이 cDNA 시료를 사용하여 실시간-PCR을 수행하였다. GAPDH에 대해 발현 수준을 조정하고, 비이클 대조군에 대한 배수 변화로서 표현하였다(도 9).
도 10d에 있어서, 종양을 액체 질소 중에서 급속 동결하였다. 동결된 종양 시료를 20 mg 조각들로 자른 다음, 이를 얼음 냉각 핵 추출 완충제(10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 25 mM KCl, 1% Triton X-100, 8.6% 수크로스, 그리고 1x Halt 프로테아제 억제제 칵테일(1861281, Thermo Scientific)) 500 μL 중에 넣고 나서, 휴대용 미량 균질화기로 균질화하였다. 4℃에서 5 분 동안 600 g로 원심분리하여 핵을 수집하고 나서, 얼음 냉각 PBS로 1 회 세정하였다. 상청액을 제거하고 나서, 1 시간 동안 0.4 N 냉각 황산 100 μL로 히스톤을 추출하였다. 추출물을 4℃에서 10 분 동안 10,000 g로 원심분리하여 투명하게 만들고 나서, 이를 얼음 냉각 아세톤 1 mL가 담긴 신선한 미량원심분리 튜브로 옮겨담았다. 히스톤을 -20℃에서 밤새 침전시킨 다음, 10 분 동안 10,000 g로 원심분리하여 펠릿화한 후, 물 100 μl 중에 재현탁하였다. BCA 단백질 검정(23225, Pierce)을 사용하여 히스톤을 정량하였다. 희석된 히스톤을 Immulon 4HBX 평판(3855, Thermo Scientific)상에 밤새 코팅하고 나서, ELISA를 수행하였다. 요약하면, 평판을 0.05% Tween 20 및 2% 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 PBS로 차단한 다음, H3K27me3 항체(#9733, Cell Signaling Technology) 또는 총 히스톤 H3 항체(AB1791, Abcam)와 함께 항온처리하였다. 평판들을 항 토끼 IgG 접합 호오스래디쉬 퍼옥시다아제(#7074, Cell Signaling Technology)와 함께 추가로 항온처리한 다음, TMB 기질(TMBS-0100-01, BioFx Laboratories)과 함께 항온처리하였다. 추후 450 nm(기준 파장 650 nm)에서 평판 분광분석계(SpectraMax 250, Molecular Devices)를 사용하여 웰에 발색된 색을 측정하였다. H3K27me3 수준을 총 히스톤 H3에 대해 조정하였으며, 이를 비이클 대조군에 대한 배수 변화로서 표현하였다. 값들을 플롯으로 나타내었다(n=6)(도 10d). 각각의 막대는 각 군의 값들의 평균을 나타낸다. 화합물 A 투여된 마우스로부터 유래한 종양에서는 유의적으로 감소한 H3K27me3 수준이 관찰되었다. 히스톤을 추출하고 나서 정량하였으며, H3K27me3 수준을 전술된 바와 같이 분석하였다. 종양 내 H3K27의 트리메틸화 수준을 플롯으로 나타내었다(n=5)(도 7b). 각각의 막대는 각 군에서 트리메틸화 수준의 평균 ± SEM을 나타낸다.
화합물 A 처리 후 시험관 내 유전자 발현 변화
HS-SY-II 및 SW982 세포를 EZH2 억제제(화합물 A 또는 EPZ-011989)로 처리하고 나서, 지정된 시점에서 수집하였다. 제조자의 프로토콜에 따라서 TaqMan 유전자 발현 세포-대-CT 키트(4399002, Life technologies)를 사용하여 총 RNA 분리 및 cDNA 합성을 수행하였다. TaqMan 유전자 발현 검정(Life technologies, 4331182) 및 TaqMan 프로브(각각 Hs00231069_m1, Hs00152928_m1, Hs00233365_m1, 및 Hs99999905_m1)를 사용하여 ATF3, EGR1, CDKN2A 및 GAPDH 발현을 분석하였다. 발현 수준을 GAPDH에 대해 조정하고, DMSO 대조군에 대한 배수 변화로 표현하였다(도 8).
화합물 A 처리 후 생체 내 유전자 발현 변화
마지막 투여 약 3 시간 후 PK 값 및 PD 변경에 대한 분석에 사용된 마우스로부터 종양 시료를 수집하였다. RNAlater(AM7020, Life technologies)를 사용하여 종양 시료를 보관하여 두었다. 제조자의 지침에 따라서 RNeasy 미니 키트(74104, Qiagen) 및 고 용량 cDNA 역전사 키트(4368814, Life technologies)를 사용하여 총 RNA 분리 및 역전사를 수행하였다. 전술된 바와 같이 cDNA 시료를 사용하여 실시간-PCR을 수행하였다. GAPDH에 대해 발현 수준을 조정하고, 비이클 대조군에 대한 배수 변화로서 표현하였다(도 9). 부가적으로나 대안적으로, 총 RNA를 동결 종양 시료로부터 분리하였다. TruSeqTM RNA Sample Prep Kit(Illumina)를 사용하여 쌍-말단 서열결정(paired-end sequencing)용 cDNA 라이브러리를 Illumina HiSeq(“Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Guide”에 상세히 기술) 상에 구성하였다. Standard Cluster Generation Kit v5는 유동 세포 표면에 대한 cDNA 라이브러리와 결합한다. Illumina HiSeq 상 TruSeq SBS 키트를 사용하여 쌍 말단 판독결과를 시료 당 약 50M의 클러스터로부터 구하였다.
RNAseq 데이터 처리
FASTQ 포맷 내 미가공 서열결정 판독결과들을 인간 게놈 hg19 및 마우스 게놈 mm10에 대해 정렬하였다. USCS KnownGene 전사체를 기준으로 사용하는 RSEM v1.1.13 프로그램으로 전사체 정량을 수행하였다. Illumina 50 × 50 쌍 말단 서열결정에 대해 최적화된 매개변수를 적용하여 RSEM 발현 산정을 진행하였다.
생물학적 해석을 위한 RNAseq 전사체 데이터의 분석
PDX 모델 둘 다에 대한 화합물 A 처리 시료 대 DMSO 처리 시료 2 개의 비교를 위해 유전자 세트 농축 분석(GSEA) Java-가용 데스크탑 소프트웨어(Version 2.0.13, at the World Wide Web (www) broadinstitute.org/gsea/index.jsp)를 사용하여 GSEA를 수행하였는데, 각각의 모델 처리는 5 회 실시하였다. RSEM은 GSEA 입력에 대해 정규화가 적용된 후 유전자 수준 계수를 생성하였다. 표현형보다는 유전자 세트에 대해 순열을 실행하여, 작은 시료 크기를 수용하였다. 모든 GSEA 분석을 위해, 큐레이팅된(Curated) KEGG 경로뿐만 아니라 전사 인자 결합 모티프 유전자 세트(MSigDB 버전 4.0, 월드 와이드 웹(www) broadinstitute.org/gsea/msigdb/index.jsp)를 사용하였다.
도 10e에 있어서, 수집된 종양들을 대상으로 포르말린 고정을 수행한 다음, 파라핀에 매립하였다. 파라핀 절편들을 준비한 다음, 파라핀을 녹이고 나서 폴리머 기반 방법(EnVision, DAKO, Japan)에 따른 일반 공정에 의해 IHC용으로 가공하였다. 파라핀이 녹은 절편들을, 표적 검색용 용액(DAKO, 최종 농도 10 %가 되도록 희석) 중에서 2 대기압 하에 121℃에서 20 분 동안 고압처리하여 항원 검색을 위한 가공을 수행한 다음, 3% 과산화수소 용액으로 5 분 동안 처리하여, 내인성 퍼옥시다아제 활성을 차단하였다. 시판중인 1차 항체(항 인간 Ki-67 마우스 모노클로날 항체, DAKO, Japan, 1:50 희석)를 실온에서 약 1 시간 동안 Ki-67과 반응시켰다. 제조자의 지침에 따라서, 실온에서 30 분 동안 2차 항체로 처리하는 것을 포함하여, EnVision 계를 사용하는 후속 단계를 실시하였으며; 3,3'-디아미노벤지딘을 색원체로, 그리고 헤마톡실린은 대비 염색으로 사용하였다. 도 10e에 있어서, Aperio XT™ 스캐너를 사용하여 슬라이드를 디지털화하였다. 양성 세포들의 %를 정량하기 위해 Aperio Image Scope™ 소프트웨어를 사용하여 디지털화된 슬라이드들을 분석하였다. Ki67에 대한 IHC 염색의 정량화는 처리군에서 세포 증식에 변화를 나타내지 않았다. 각각의 막대는 각 군에서 얻어진 값들의 평균을 나타낸다. (투여군 모두에 있어서 Ki67 양성 세포의 유의적 변화%는 관찰되지 않았다.)
활막 육종 RNA-seq 방법
환자 유래 이종이식편(PDX) 모델 CTG-0331 및 CTG-0771은 인간 활막 육종을 보이는 저 계대배양 Champions TumorGraft™ 모델이다. 면역약화된 암컷 마우스(Taconic; NCr 누드)의 한쪽 옆구리 부위에 공여 동물로부터 수집한 종양 단편(5 mm × 5 mm × 5 mm)을 이식하였는데, 이때 각각의 동물에는 특이적인 계대배양 몫(CTG-0331 및 CTG-0771, P4)이 이식되었다. 종양이 약 100 mm3 내지 300 mm3에 이르렀을 때, 동물을 종양 부피와 매칭시켜 처리군과 대조군으로 나눈 후, 투여를 개시하였다. 비이클(0.5% NaCMC + 0.1% Tween 80, 물 중) 또는 화합물 A(CTG-0331의 경우 500 mg/kg, 그리고 CTG-0771의 경우에는 제17 일에 500 mg/kg에서 400 mg/kg으로 감소시킴)를, 용량 부피 10 μL/g으로 35 일 동안 경구 BID 투여하였다. 종양 크기를 1 주일에 2 회 측정하였다. 제35 일되는 날, 최종 투여 3 시간 후 종양 부하가 가장 큰 마우스 5마리 이하를 안락사시켜 종양을 수집한 다음, 급속 동결시켰다. 비이클 투여군 및 최다 화합물 A 투여군으로부터 얻은 동결 종양 시료(30 mg)를 RNA 가공을 위한 발현 분석(Expression Analysis for RNA processing) 및 RNA-seq 분석으로 넘겼다.
본원에 인용된 특허 문헌들과 과학 논문들 각각의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참조로서 포함되어 있다.
본 발명은, 본 발명의 사상이나 본질적인 특징들로부터 벗어나지 않고 다른 특정 형태로 구현될 수 있다. 그러므로 전술된 구현예들은 모든 점에서 본원에 기술된 발명을 제한하는 것으로 보다는 예시적인 것으로 간주될 것이다. 그러므로 본 발명의 범주는 전술된 발명의 설명에 의하기보다는 첨부된 청구범위에 의해 지정되며, 청구항들의 균등물 범위와 의미에 가하여진 모든 변화는 이에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims (22)

  1. 세포를 치료학적 유효량의 EZH2 억제제와 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포 내에서 면역 회피를 억제하기 위한 방법.
  2. 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 면역 부전의 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법.
  3. 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응의 조장을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법.
  4. 암 세포와 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포 내에서 주 조직 적합성 복합체(MHC)의 발현을 증가시키기 위한 방법.
  5. 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 염증의 증가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법.
  6. 피험체에 치료학적 유효량의 EZH2 억제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 세포 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법.
  7. (1) 피험체로부터 생체 시료를 얻는 단계; 및
    (2) 대조군 시료와 비교되었을 때 생체 시료에서 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계
    를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능에 대한 가능성 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법으로서,
    만일 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보이면, EZH2 억제제를 포함하는 치료는 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것인 방법.
  8. 대조군 시료와 비교되었을 때 피험체로부터 얻은 생체 시료에서 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현이 감소되었는지에 대해 해당 생체 시료를 검정하는 단계를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능에 대한 가능성의 평가를 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법으로서,
    만일 생체 시료가 대조군 시료와 비교되었을 때 MHC의 감소한 발현을 보이면, EZH2 억제제를 포함하는 치료는 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것인 방법.
  9. (1) 제1 생체 시료와 제2 생체 시료를 피험체로부터 얻는 단계;
    (2) 제2 생체 시료와 EZH2 억제제를 접촉시키는 단계;
    (3) 상기 제1 생체 시료 및 제2 생체 시료를 주 조직 적합성 복합체(MHC) 발현에 대해 검정하는 단계; 및
    (4) 제1 생체 시료 중 MHC의 발현과 제2 생체 시료 중 MHC의 발현을 비교하는 단계
    를 포함하는, EZH2 억제제를 포함하는 치료의 효능의 스크리닝을 필요로 하는 피험체에서 이러한 필요를 달성하기 위한 방법으로서, 만일 제2 생체 시료에서의 MHC의 발현이 제1 생체 시료에서의 MHC의 발현과 비교되었을 때 증가하면, EZH2 억제제를 포함하는 치료는 피험체에서 효과적일 가능성이 더 큰 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 또는 피험체는 비정상, 탈조절 또는 증가한 EZH2 활성을 포함하는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 또는 피험체는 염색체 전좌 t(x;18)(p11.2;q11.2)를 포함하는 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 전좌는 SS18-SSX 융합 유전자를 유발하는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 또는 피험체는 INI1의 감소된 기능 또는 발현을 보이는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 세포 또는 피험체는 INI1의 감소된 기능 또는 발현을 보이는 것인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 EZH2 억제제는 하기 화학식을 가지는 화합물 A
    Figure pct00050
    및 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 EZH2 억제제는
    Figure pct00051
    및 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 화학요법 화합물을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학요법 화합물은 PD-1 억제제, PD-L1 억제제 및 CTLA-4 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  19. 제1항, 제4항, 제7항 및 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 세포는 피험체에 있는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피험체는 인간인 방법.
  21. 제1항 내지 제3항, 제5항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 회피, 암 세포 유도성 면역 부전, 조장을 필요로 하는 면역 반응, 염증 또는 암은, 비 암성 세포와 비교되었을 때 암 세포에서 MHC, β2 마이크로글로불린, 종양 괴사 인자(TNF) 수용체, 저 분자 질량 폴리펩티드 2(LMP2), 저 분자 질량 폴리펩티드 7(LMP7), 항원 가공 연관 이송체(TAP), 그리고 TAP-연관 당단백(타파신) 중 1 개 이상의 감소한 발현에 의해 특징지어지는 것인 방법.
  22. 제4항 또는 제21항에 있어서, 상기 MHC는 인간 백혈구 항원(HLA)이고, 이 HLA는 HLA-A, HLAB, HLA-C, HLADM 알파, HLADM 베타, HLA-DO 알파, HLADO 베타 1, HLADP 알파 1, HLADP 베타 1, HLADR 알파, HLA-DR 베타 1, HLA-DR 베타 3, HLADR 베타 4, HLAE, HLAF, HLAG, HLAK 및 HLAL로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
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