CN112759433A - 草莓用复合菌及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种草莓用复合菌及其制备方法和应用，涉及水果病害防治的技术领域。本发明提供的草莓用复合菌，包括细菌、真菌和载体；其中细菌、真菌和载体的质量比为35～60:3～4:30～50。所述细菌包括井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌，其质量比为60～100：4～8：4～6：4～6：2～3。本发明通过微生物菌群中细菌和真菌协同作用，抢占致病菌的空间及养分，大量繁殖，使白粉病原菌菌丝畸形，从而抑制病原菌的生长。而且微生物分泌生理活性物质，促进植株生长，降低了化肥使用量，降低种植成本。

Description

草莓用复合菌及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及水果病害防治技术领域，尤其是涉及一种草莓用复合菌及其制备方法和应用。
背景技术
草莓白粉病是草莓生产上最主要的病害之一，主要为害草莓叶片和果实。果实感病后，果面覆盖一层白色粉状物，失去光泽并硬化，严重影响品质，造成减产、减收。现有的草莓白粉病防治方法主要依赖药物防治，或者喷施植物提取液、氨基酸，硫磺熏蒸等。
现有的防治方法主要存在下列缺陷：
1、土壤及果实中药物残留严重，苗根损伤严重；
2、肥料利用率低，土壤板结严重；
3、产量低、商品率低、品质差。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种草莓用复合菌，以缓解现有草莓白粉病防治技术中存在的土壤及果实中药物残留严重，苗根损伤严重；肥料利用率低，土壤板结严重；产量低、商品率低、品质差的技术问题。
本发明的目的之二在于提供上述草莓用复合菌的制备方法，该制备方法条件温和、不伤害微生物，保证了复合菌中微生物的活性。
本发明的目的之三在于提供草莓用复合菌在草莓种植中的应用，提高草莓商品率、果实品质和产量。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
本发明一方面提供了一种草莓用复合菌，包括细菌、真菌和载体；其中细菌、真菌和载体的质量比为35～60:3～4:30～50；
其中，所述细菌包括井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌。
进一步地，所述细菌中井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌的质量比为60～100：4～8：4～6：4～6：2～3。
进一步地，所述真菌包括寡雄腐霉菌。
进一步地，所述载体包括黄腐酸钾；
优选地，所述黄腐酸钾为矿源黄腐酸钾。
进一步地，所述井岗·枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1～5％井冈霉素·200-1000亿/g。
进一步地，所述侧孢芽孢杆菌的有效活菌数为200-1000亿/g；
优选地，所述甲基营养型芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g；
优选地，所述沼泽红假单孢菌的有效活菌数为80-200亿/g；
优选地，所述蜡样芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g。
进一步地，所述寡雄腐霉菌的有效活菌数为100-200亿/g。
本发明另一方面提供了第一方面所述的草莓用复合菌的制备方法，将所述的细菌、所述的真菌和所述的载体混合均匀，得到草莓用复合菌。
本发明第三方面提供了草莓用复合菌在草莓种植中的应用。
进一步地，通过沟施和喷施的方法进行施用。
本发明提供的草莓用复合菌，通过微生物中细菌和真菌协同作用，抢占致病菌的空间及养分，大量繁殖，使白粉病原菌菌丝畸形，从而抑制病原菌的生长。而且微生物分泌生长素、维生素、氨基酸等生理活性物质，促进植株生长，降低了化肥使用量，提升肥效，降低种植成本。该复合菌促使土壤中有益菌繁殖，平衡土壤酸碱，打破土壤板结，提高草莓产量。
本发明提供的草莓用复合菌的制备方法操作条件温和，保证了菌种的活性和产品的有效性，适合大规模工业化生产。
本发明提供的草莓用复合菌的应用，提高了草莓果实品质、商品率高、产量高。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
白粉病在草莓的整个生长期内都有可能发生。目前针对草莓白粉病主要通过无机化学药物为主，微生物菌剂单品辅助，借以各微量元素、肥料(叶面肥或者有机肥)等培根壮苗来防治草莓白粉病。
微生物菌剂防治白粉病，目前涉及单菌系列比较多，复合菌用于防治白粉病较少。微生物菌剂防治白粉病涉及微生物菌剂的制备、菌剂使用方法、白粉病防效田间试验这几个步骤。通过从生态环境中精心提取、筛选、驯化、选育出各优势菌种，通过液体和固体深层发酵后扩大培养进行商品化，各单菌进行不同成分配比，通过田间作物试验进行验证配方，优选出本发明的配方，以下详述该配方和对白粉病防效以及增产等作用效果。
根据本发明第一方面提供的草莓用复合菌，包括细菌、真菌和载体；其中细菌、真菌和载体的质量比为35～60:3～4:30～50；
其中，所述细菌包括井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌。
本发明以缓解现有草莓白粉病防治技术中存在的土壤及果实中药物残留严重，苗根损伤严重；肥料利用率低，土壤板结严重；产量低、商品率低、品质差的技术问题。本发明提供的草莓用复合菌，使用对环境无害的微生物，解决了土壤和果实药物残留严重的问题，缓解了农药对苗根的损伤。通过微生物中细菌和真菌协同作用，抢占致病菌的空间及养分，大量繁殖，使白粉病原菌菌丝畸形，从而抑制病原菌的生长。而且微生物分泌生长素、维生素、氨基酸等生理活性物质，促进植株生长，降低了化肥使用量，提升肥效，降低种植成本。该复合菌促使土壤中有益菌繁殖，平衡土壤酸碱，打破土壤板结，提高草莓产量。
井冈霉素是一种微生物分泌的抗生素，具有较强的内吸性，易被草莓白粉病致病菌菌体细胞吸收并在其内迅速传导，干扰和抑制致病菌细胞生长和发育，从而起到治疗作用。
枯草芽孢杆菌属于芽孢杆菌，该菌体在土壤中分泌伊枯草菌素、杆菌素、丰原素、表面活性素等抗菌物质，抑制白粉病致病菌生长，并使菌丝发生断裂、解体并溶解致病菌细胞壁，使其发生穿孔，畸形等现象，使致病菌失去扩展、侵入的能力。
侧孢芽孢杆菌定植在草莓根部，抑制白粉病致病菌繁殖，促进植物根系生长，增强根系吸收能力，并能活化土壤养分(固氮、解磷、解钾)，提高作物产量，改善品质。
甲基营养型芽孢杆菌利用草莓叶面上的营养和水分进行繁殖，其代谢产生的抗真菌活性脂肽化合物对草莓真菌类病害具有较强的抗菌活性；其代谢产生氨肽酶类物质，同时作为植物根际促生菌促进植物生长。
沼泽红假单孢菌分泌物中含有多种杀菌活性物质，通过竞争性抑制有效控制病原微生物的生长和繁殖，且其分泌物能诱导草莓植株的抗病能力。
蜡样芽孢杆菌能通过体内的SOD酶，提高作物对病菌和逆境危害引发体内产生氧的清除能力，调节作物细胞微生物环境，维护细胞正常的生理正常代谢和生化环境，提高作物抗逆性，促进生长，提高产量和品质。
在本发明的一种优选实施方式中，细菌、真菌和载体的质量比典型但非限制性的为35：3：50、35：3：30、45：4：30、45：4：50、45：4：40、20：1：10、30：2：25或15：1：10。
进一步地，所述细菌中井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌的质量比为60～100：4～8：4～6：4～6：2～3。
在本发明的一种优选实施方式中，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌的质量比典型但非限制性的为30：2：2：2：1、40：2：2：2：1、50：2：2：2：1、100：8：6：6：3、40：4：3：3：1或80：8：6：6：3。
进一步地，所述真菌包括寡雄腐霉菌。
寡雄腐霉菌能够在草莓根围定殖，除了对白粉病致病菌具有直接或间接的抑制或杀灭作用外，还能促进草莓对磷的吸收，并能增加植株中吲哚乙酸(IAA)的含量，促进植株生长，诱导植株产生防卫反应获得抗性。
进一步地，所述载体包括黄腐酸钾。
优选地，所述黄腐酸钾为矿源黄腐酸钾。
矿源黄腐酸钾可促进土壤团粒结构的形成，改善土壤结构，提高土壤的保水、透气能力。提高养分有效性，可刺激草莓的生理代谢，提高出苗率，刺激根系极端分生组织细胞的分裂，促进作物对水分和养分的吸收力。
进一步地，所述井岗·枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1～5％井冈霉素·200-1000亿/g，在本发明的一种优选实施方式中，井岗·枯草芽孢杆菌的有效活菌数典型但非限制性的为1％井冈霉素·200-1000亿/g、2％井冈霉素·200-1000亿/g、2.5％井冈霉素·200-1000亿/g、3％井冈霉素·200-1000亿/g、4％井冈霉素·200-1000亿/g或5％井冈霉素·200-1000亿/g。
进一步地，所述侧孢芽孢杆菌的有效活菌数为200-1000亿/g。
优选地，所述甲基营养型芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g。
优选地，所述沼泽红假单孢菌的有效活菌数为80-200亿/g。
优选地，所述蜡样芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g。
进一步地，所述寡雄腐霉菌的有效活菌数为100-200亿/g。
根据本发明另一方面提供的第一方面所述的草莓用复合菌的制备方法，将所述的细菌、所述的真菌和所述的载体混合均匀，得到草莓用复合菌。
根据本发明第二方面提供的草莓用复合菌的制备方法，该制备方法制备条件温和、不伤害微生物，保证了复合菌中微生物的活性。本发明提供的草莓用复合菌的制备方法，操作条件温和，保证了菌种的活性和产品的有效性，适合大规模工业化生产。
根据本发明第三方面提供的草莓用复合菌在草莓种植中的应用。
本发明提供的草莓用复合菌在草莓种植中的应用，培根壮苗，提高草莓植株的抗病能力，提高草莓产量和品质。
进一步地，通过沟施和喷施的方法进行施用。
草莓用复合菌含有活性微生物，施用时必须埋于土壤中，不能撒施于地表，在地下5-10cm进行沟施。草莓用复合菌对草莓植株的根系和果实不会造成任何伤害，所以沟施时应最大限度的靠近草莓根系，让其与草莓根系最大限度地接触，才能充分发挥肥效。在喷施时，在早上或傍晚时候进行，喷施于叶面背部，防治紫外线杀死微生物。
下面结合实施例，对本发明的一些实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。其中，实施例和对比例中使用的单菌剂有效活菌数如下表1所示。
表1菌剂原料有效活菌数表
菌剂 有效活菌数
井岗·枯草芽孢杆菌 2.5％井冈霉素·200-1000亿/g
侧孢芽孢杆菌 200-1000亿/g
甲基营养型芽孢杆菌 80-200亿/g
沼泽红假单孢菌 80-200亿/g
蜡样芽孢杆菌 80-200亿/g
寡雄腐霉菌 100-200亿/g
实施例1
本实施例提供一种草莓用复合菌中细菌由井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照40：4：3：3：1的质量比组成。草莓用复合菌中细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照45：4：40的质量组成。
实施例2
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照40：2：2：2：1的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例3
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照50：2：2：2：1的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例4
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照30：2：2：2：1的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例5
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照100：8：6：6：3的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例6
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照80：8：6：6：3的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例7
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌按照100：50：50：50：1的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例8
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照35：3：30的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例9
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照45：4：30的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例10
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照35：3：50的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例11
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照20：1：10的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例12
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照30：2：25的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例13
本实施例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照15：1：10的质量比组成，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例1
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，该复合菌只含有细菌和寡雄腐霉菌，细菌和寡雄腐霉菌的质量比为45：4，其他原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例2
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，该复合菌只含有细菌和矿源黄腐酸钾，细菌和矿源黄腐酸钾的质量比为9：8，其他原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例3
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，该复合菌只含有寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾，寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾的质量比为1：10，其他原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例4
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，细菌、寡雄腐霉菌和矿源黄腐酸钾按照5：1：5的质量比混合，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例5
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌和沼泽红假单孢菌按照15：1：1：1的质量比混合，其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
对比例6
本对比例提供一种草莓用复合菌，与实施例1不同的是，井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌按照30：2：2：1的质量比混合均匀。其余原料和步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
试验例1
将实施例1-13和对比例1-6提供的草莓用复合菌经液体活化后，取少量的菌悬液接种在PDA培养基上对称三点，每个点重复处理4次。在培养皿中央接种打孔器打取的直径5mm的病原菌块，其中病原菌包括禾谷镰刀菌、布氏白粉菌、葡萄座腔菌、黄萎病菌、茄腐镰刀菌、苹果腐烂病菌，将处理好的培养皿在28℃培养箱中培养。空白组的PDA培养基上只接种病原菌，待对照菌落长满平板时，测定实验组菌落直径。抑菌率计算方式如下式(1)所示。
抑菌率(％)＝(空白组菌落直径－处理组菌落直径)/空白组菌落直径×100％ 式(1)
抑菌率的统计结果如表2所示。
表2复合菌悬液对病原菌的抑菌效果
Figure BDA0002979274450000111
Figure BDA0002979274450000121
试验例2
草莓供试品种：红颜
地点：云南省会泽县
选取生长一致的草莓匍匐茎幼苗，移栽于田里定植，成活后覆膜。将实施例1-13、对比例1-6提供的草莓用复合菌和空白组的清水分别均匀滴灌，连用3次，定植成活后使用第一次，每次间隔15d，其他管理与常规生产相同。
在果实成熟期，对草莓叶片、株高、冠径和茎粗进行测量；在采摘期统计单株产量和亩产。上述测量结果统计如表3所示。
表3复合菌对草莓植株生长的作用
Figure BDA0002979274450000122
Figure BDA0002979274450000131
表4复合菌对草莓果实品质的影响
Figure BDA0002979274450000132
Figure BDA0002979274450000141
试验例3
本试验例测试实施例1-13和对比例1-6提供的草莓用复合菌对草莓白粉病的抑制效果。
供试草莓品种为“章姬”，选取生长一致的草莓匍匐茎幼苗，移栽于田里定植，成活后覆膜。实施例1-13和对比例1-6提供的草莓用复合菌、百菌清和清水为空白组做常规喷雾，兑水稀释后均匀喷施叶片正反面，连用3次，前两次间隔时间7d，第2次与第3次间隔10d。试验期间不使用其他药剂防治病害，其他管理与常规生产相同。
第1次喷施前进行病情调查，第1次喷施后6d、第2次喷施后6d、第3次喷施后10d分别调查病害情况。对角线5点取样，每点取5株，每株调查所有果实、叶片，以每个果实上病斑面积占整个果实的百分比进行分级。病害分级如下。
0级：果实无病；
1级：病斑面积占整个果面的5％以下；
3级：病斑面积占整个果面积6％-15％；
5级：病斑面积占整个果面积16％-25％；
7级：病斑面积占整个果面积26％-50％；
9级：病斑面积占整个果面积50％以上
病情指数和防治效果由下式(2)和式(3)计算。
病情指数(％)＝∑(各级病果数×相对病级数值)/(调查总果数×最高病级数)×100 式(2)
防治效果(％)＝(1－CK0×PT1/PT0×CK1)×100 式(3)
CK0为空白组喷施前病情指数；CK 1为空白对照组喷施后病情指数；PT0为处理组喷施前病情指数；PT1为处理区喷施后病情指数。
表5复合菌对白粉病的防治效果
Figure BDA0002979274450000151
Figure BDA0002979274450000161
由表3、表4可知，本发明提供的草莓用复合菌对作物生长均有不同程度的促进作用，Vc、可溶性固形物、可溶性糖、硬度、商品果率，这五个指标含量均高于空白组。
由表5可知，在不同时间叶面喷施本发明提供的草莓用复合菌，经过一段时间采样分析，实施例1-13提供的草莓用复合菌及农药百菌清，均可以很好的防治白粉病，草莓用复合菌防效能达80.7％，实施例1效果最好，但防效始终低于百菌清，差距在可接受的范围内。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种草莓用复合菌，其特征在于，包括细菌、真菌和载体；其中细菌、真菌和载体的质量比为35～60:3～4:30～50；
其中，所述细菌包括井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述细菌中井岗·枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、沼泽红假单孢菌和蜡样芽孢杆菌的质量比为60～100：4～8：4～6：4～6：2～3。
3.根据权利要求1所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述真菌包括寡雄腐霉菌。
4.根据权利要求1所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述载体包括黄腐酸钾；
优选地，所述黄腐酸钾为矿源黄腐酸钾。
5.根据权利要求1所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述井岗·枯草芽孢杆菌的有效活菌数为1～5％井冈霉素·200-1000亿/g。
6.根据权利要求1所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述侧孢芽孢杆菌的有效活菌数为200-1000亿/g；
优选地，所述甲基营养型芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g；
优选地，所述沼泽红假单孢菌的有效活菌数为80-200亿/g；
优选地，所述蜡样芽孢杆菌的有效活菌数为80-200亿/g。
7.根据权利要求3所述的草莓用复合菌，其特征在于，所述寡雄腐霉菌的有效活菌数为100-200亿/g。
8.根据权利要求1-7任一项所述的草莓用复合菌的制备方法，其特征在于，将所述的细菌、所述的真菌和所述的载体混合均匀，得到草莓用复合菌。
9.根据权利要求1-7任一项所述的草莓用复合菌或权利要求8所述的制备方法制备得到的草莓用复合菌在草莓种植中的应用。
10.根据权利要求9所述的草莓用复合菌的应用，其特征在于，通过沟施和喷施的方法进行施用。
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