CN112746033A - 一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用 - Google Patents

一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用，属于微生物技术领域，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001的保藏编号为CCTCC NO：M2019898。本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001能够发酵畜禽粪便生产有机肥；施用所述有机肥能够显著促进植物生长。

Description

一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用。
背景技术
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是环境中常见的细菌种类，是芽孢杆菌属的一个新种，由Cristina等在西班牙南部马赫拉加分离得到命名为贝莱斯芽孢杆菌；早期认为是枯草芽孢杆菌的一个亚种，直到2008年被确定为解淀粉芽孢杆菌的后期异型体。
目前对于贝莱斯芽孢杆菌的研究多集中在对植物生长、抗病虫和诱导系统抗病性等。许多贝莱斯芽孢杆菌菌株在生物防治和作为粮食产量增产剂上起着重要作用。
对于贝莱斯芽孢杆菌的其他功能尚为见报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用；本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌能够发酵畜禽粪便生产有机肥，促进植物生长。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001，所述贝莱斯芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2019898。
本发明提供了一种包括所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001的菌剂。
优选的，所述菌剂为固体菌剂。
优选的，所述固体菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体。
优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体的质量比为1∶(1～1.5)。
优选的，所述载体包括锯末。
优选的，所述固体菌剂的活菌数为1×104～1×105CFU/g。
本发明提供了所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001、所述菌剂在发酵生产有机肥中的应用。
优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵生产有机肥的发酵底物包括畜禽粪便。
优选的，所述畜禽粪便包括猪粪。
本发明的有益效果：本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001保藏编号为CCTCC NO：M2019898；所述贝莱斯芽孢杆菌XY001能够发酵畜禽粪便生产有机肥；施用所述有机肥能够显著促进植物生长。
生物保藏说明
本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019898；保藏日期为2019年11月5日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学武汉大学保藏中心。
具体实施方式
本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001，所述贝莱斯芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2019898。
在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001优选的通过LB培养基进行培养；在本发明中，所述培养的温度优选为37℃，所述培养的时间优选为24h；在本发明中，所述培养后的贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵液的菌浓度优选为1×108～1×109CFU/mL。
本发明提供了一种包括所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001的菌剂。在本发明中，所述菌剂优选为固体菌剂；所述固体菌剂优选的包括贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体。在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体的质量比优选为1∶(1～1.5)，更优选为1∶1.3；具体为1kg菌液∶1.3kg锯末，或者1mL菌液∶1.3g锯末。在本发明中，对所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液的制备方法没有特殊限定，采用本领域常规的贝莱斯芽孢杆菌培养方法即可，在本发明具体实施过程中，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液优选的采用LB培养基培养获得。在本发明中，所述载体优选的包括锯末。本发明优选的用所述锯末吸附所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液制备获得所述固体菌剂。在本发明中，所述固体菌剂的活菌数为1×104～1×105CFU/g。
本发明还提供了所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001、所述菌剂在发酵生产有机肥中的应用。在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵生产有机肥的发酵底物包括畜禽粪便；所述畜禽粪便优选的包括猪粪。
在本发明中，所述应用具体包括以下步骤：1)将所述贝莱斯芽孢杆菌XY001菌剂和猪粪料混合获得发酵料；2)调节所述发酵料的含水量至55％～65％后建发酵堆进行发酵7～10d获得有机肥。
在本发明中，将所述贝莱斯芽孢杆菌XY001菌剂和猪粪料混合获得发酵料。在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001菌剂和猪粪料的质量比优选为1∶(45～55)，更优选为1∶50。在本发明中，所述猪粪料优选的包括猪粪和辅料；所述辅料包括锯末和/或稻壳；所述猪粪和辅料的质量比优选为(2～4)∶1，更优选为3∶1。本发明对所述贝莱斯芽孢杆菌XY001菌剂和猪粪料混合的混合方式没有特殊限定，采用本领域常规的搅拌混合即可。
在本发明获得所述发酵料后，调节所述发酵料的含水量55％～65％后建发酵堆进行发酵7～10d获得有机肥。在本发明中，所述含水量的调节的具体方法优选的为向所述发酵料中加水混合。在本发明中，所述含水量优选的为56％～60％，调节含水量后的发酵料的状态优选为手捏成团，松手散开；在本发明中，所述发酵料的含水量不宜超过65％，含水量太高，发酵过程容易缺氧气，发酵堆不起温。在本发明中，所述发酵堆优选为锥形堆体，所述发酵堆的高度优选为50～60cm；本发明在所述发酵堆上优选的覆盖透气材料，本发明对所述透气材料的具体种类没有特殊限定，可选择布料，不使用塑料布。在本发明中，在所述发酵过程中，优选的每天进行翻堆，每天翻堆的次数优选为两次，每天翻堆的时间优选为早上6：00～9：00和晚上6：00～9：00；本发明中所述翻堆为彻底翻堆，所述翻堆的作用是增加发酵堆中的气体和调节控制发酵堆的温度。本发明在所述发酵的过程中，优选的监测发酵堆内温度和水分的变化。当发酵温度降低到自然温度，发酵结束，发酵结束后的含水量在25％～35％。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019898。
菌种培养方法：
培养基：LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，加水至1L。
LB培养基制备培养好菌种，37℃、培养24h获得菌液，用锯末吸附(1mL用1.3g锯末吸收)，成为固体菌剂。
实施例2
猪粪发酵处理方法：堆肥发酵法
1、施工材料准备：准备1.05kg实施例1中制备的固体菌剂、52.3kg猪粪、17.1kg谷壳及40℃温水。
2、施工过程：将固体菌剂、猪粪和谷壳平摊于木板上堆积，然后来回搅拌均匀，搅拌均匀后加热水调节物料水分，调节至60％，混合料抓起自然松散开。湿度调节好后堆积成55cm高发酵堆，表面盖透气布料覆盖，然后观测发酵反应。
3、过程观测：
发酵堆起始表面温度22.4℃，表面湿度86.8％，氨气度为1.6PPM；
第一天发酵温度反应明显，表面往下分层10cm温度33.4℃、20cm温度42.5℃、30cm温度45.4℃，湿度84.8％，臭味明显，氨气度为6.1PPM；
第二天发酵温度反应剧烈，表面往下分层10cm温度52.8℃、20cm温度54.9℃、30cm温度55.8℃，湿度77.2％，臭味明显，氨气度为7.7PPM；
第三天温度持续，表面往下分层10cm温度41℃、20cm温度44.3℃、30cm温度48.4℃，湿度66.2％，臭味明显，氨气度为2.3PPM；
第四天到第八天温度持续，未见明显大反应，湿度正常，氨气度持续降低；
第九天温度开始明显下降至第十天无反应成常温，试验结束，获得有机肥。
发酵参数记录见表1。
表1 发酵参数记录
Figure BSA0000205367210000051
Figure BSA0000205367210000061
将获得的有机肥送检微生物数量、有机肥指标。微生物活菌数测定由浙江工业大学微生物研究所测定，养分含量由广电计量检测(湖南)有限公司检测。检测后贝莱斯芽孢杆菌活菌数达到7.8×106CFU/g，含氮量氮1.34％(以N计，以烘干基计)，含磷量(以P2O5计，以烘干基计)2.71％，钾(以K2O计，以烘干基计)2.31％。总养分(N+P2O5+K2O)的质量分数(以烘干基计)为6.36％，高于现行国家普通有机肥标准中的养分含量。
实施例3
袋装实施例2中制备的有机肥至蔬菜基地试验肥效，试验植物为小白菜。设置实验组和对照组；实验组每株小白菜增施1.5g的有机肥，浇水；对照组不施加有机肥，直接浇等量的水。
结果如下：
使用1天后，测定结果，时间2019-12-02。
表2 使用1天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000062
Figure BSA0000205367210000071
使用4天后，测定结果，时间2019-12-05。
表3 使用4天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000072
Figure BSA0000205367210000081
使用7天后，测定结果，时间2019-12-08。
表4 使用7天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000082
使用9天后，测定结果，时间2019-12-10。
表5 使用9天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000083
Figure BSA0000205367210000091
使用11天后，测定结果，时间2019-12-12。
表6 使用11天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000092
Figure BSA0000205367210000101
使用14天后，测定结果，时间2019-12-15。
表7 使用14天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000102
使用22天后，时间2019-12-23，测定结果，施肥后可见明显效果。
表8 使用22天后小白菜的指标测定结果
Figure BSA0000205367210000111
由上述实施例可知，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌XY001能够发酵畜禽粪便生产有机肥；施用所述有机肥能够显著促进植物生长。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)XY001，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001的保藏编号为CCTCC NO：M2019898。
2.一种包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001的菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为固体菌剂。
4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于，所述固体菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体。
5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵菌液和载体的质量比为1∶(1～1.5)。
6.根据权利要求4或5所述的菌剂，其特征在于，所述载体包括锯末。
7.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于，所述固体菌剂的活菌数为1×104～1×105CFU/g。
8.权利要求1中所述的贝莱斯芽孢杆菌XY001、权利要求2～7任意一项所述的菌剂在发酵生产有机肥中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌XY001发酵生产有机肥的发酵底物包括畜禽粪便。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述畜禽粪便包括猪粪。
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