CN107312734A - 香蕉枯萎病拮抗菌以及生物有机肥及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及香蕉病害生物防控领域，特别涉及一种香蕉枯萎病拮抗菌以及生物有机肥及其制备方法和应用。一种香蕉枯萎病拮抗菌，于2017年01月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.13549，保藏名称为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis H‑6。本发明从发病蕉园健康香蕉根际土中，以香蕉枯萎病病原菌4号生理小种作为指示菌，经过平板初筛和复筛，筛选到的贝莱斯芽孢杆菌对香蕉枯萎病病原菌有很强的平板抑制效果，将其制成生物有机肥应用于香蕉枯萎病防控，进一步研究其提高生防菌的防控效果，可丰富现有的枯萎病生防菌资源库。

Description

香蕉枯萎病拮抗菌以及生物有机肥及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及香蕉病害生物防控领域，具体而言，涉及一种香蕉枯萎病拮抗菌以及生物有机肥及其制备方法和应用。
背景技术
香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)侵染而引起香蕉维管束坏死的毁灭性土传真菌病害，该病会导致香蕉植株茎叶萎蔫甚至全部枯死，一旦爆发则难以遏制，严重影响了香蕉产业的发展。
目前已报道的香蕉枯萎病防控方法主要包括抗病品种培育、农艺防控、化学防治及生物防控等，前三种措施都存在污染二次环境、成本较高和防效不稳定等问题，而生物防控具有环境友好型特点，是目前公认比较安全和有效的防控措施。
生物防控的基础在于筛选高效的生防菌株，已有很多研究论文和发明专利报道了防控枯萎病的生防菌和菌剂，包括放线菌、芽孢杆菌、假单胞菌、木霉、绿僵菌、耐寒短杆菌和非致病力尖孢镰刀菌等。由于我国在香蕉枯萎病防控研究方面起步较晚，现有的生防菌资源库有限，且有些菌株在实际应用过程中常发生变异和退化现象，需要不断补充新的高效生防菌株。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种香蕉枯萎病拮抗菌，筛选到的贝莱斯芽孢杆菌对香蕉枯萎病有很强的平板抑制效果，提高生防菌的防控效果，丰富现有的枯萎病生防菌资源库。
本发明的第二目的在于提供含有所述的香蕉枯萎病拮抗菌的菌剂，便于制备生物有机肥。
本发明的第三目的在于提供生物有机肥，是将上述拮抗菌与有机载体结合进行二次发酵得到的堆肥产品，该产品不仅为生防菌生长提供养分，也能改善土壤理化和生物性质，促进植物生长，减少病害发生。
本发明的第四目的在于提供生物有机肥的制备方法，将生防菌菌剂与有机载体结合进行二次发酵，获得生物有机肥产品，保障了其在土壤中有效定殖。
本发明的第五目的在于提供所述的生物有机肥在香蕉枯萎病防控中的应用，有利于保障香蕉苗期和移栽后根际土壤中的拮抗菌数量，抵御枯萎病病原菌的入侵，最终防控病害发生。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种香蕉枯萎病拮抗菌，于2017年01月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.13549，保藏名称为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis H-6。
本发明从发病蕉园健康香蕉根际土中，以香蕉枯萎病病原菌4号生理小种作为指示菌，经过平板初筛和复筛，获得具有平板抑制效果的拮抗菌，编号H-6，通过划线纯化获得拮抗菌单菌落，经生理生化特性和16S rRNA基因鉴定，确定所述拮抗菌的分类地位，为贝莱斯芽孢杆菌，其中，16S rRNA基因与现有的类似菌种比对的最大额重合率为98％。筛选到的贝莱斯芽孢杆菌与其它多种芽孢杆菌不同，其在土传病害生物防控上的应用效果少见报道。研究表明，该菌对多种病原真菌有抑制作用，如对杨树紫纹羽病原菌的抑菌圈达11.0mm。本发明筛选到的贝莱斯芽孢杆菌对香蕉枯萎病病原菌有很强的平板抑制效果，将其制成生物有机肥应用于香蕉枯萎病防控，进一步研究其提高拮抗菌的防控效果，可丰富现有的枯萎病拮抗菌资源库。
本发明还提供了含有所述的香蕉枯萎病拮抗菌的微生物菌剂。
进一步地，所述菌剂为液体菌剂。采用液体菌剂便于菌体保持活性。活状态。
优选地，所述液体菌剂中，所述香蕉枯萎病拮抗菌活菌的数量是1×109～1×1010cfu/mL。
进一步地，所述液体菌剂通过以下方法制备：
将所述菌种接种于LB液体培养基中培养，得到培养液，收集菌体，重悬，即得。
优选地，所述培养的条件为：
28℃～32℃，150r/min～190r/min摇床培养10h～16h后转接至新鲜LB培养基中，摇床培养60h～80h，获得所述培养液。
本发明还提供了一种生物有机肥，其中所述香蕉枯萎病拮抗菌的浓度不小于1.0×108cfu/g干样。即每克生物有机肥干样中，香蕉枯萎病拮抗菌的浓度不小于1.0×108cfu。
本发明还提供了所述的生物有机肥的制备方法，将所述的微生物菌剂与有机载体和辅料混合，然后进行好氧堆肥处理，得到生物有机肥。
拮抗菌菌剂在应用过程中，需要为其提供合适的有机载体，以保障其在土壤中有效定殖。本发明将拮抗菌菌剂与有机载体结合进行二次发酵，获得生物有机肥产品，该产品不仅为拮抗菌生长提供养分，也能改善土壤理化和生物性质，促进植物生长，减少病害发生。
优选地，所述有机载体为畜禽粪便好氧堆肥产品。
畜禽粪便好氧堆肥产品的原料包括：牛粪、猪粪、羊粪、犬粪、鸡粪、鸭粪、鹅粪等等。
进一步地，所述有机载体与所述微生物菌剂以固液比为3-8:1混合，其中，固液比的单位为kg/L。
优选地，所述有机载体与所述微生物菌剂以固液比为5-6:1混合。
进一步地，所述有机载体先与辅料混合，得到原料混合物；所述辅料包括花生麸和菜籽粕，所述辅料的添加量为所述有机载体重量的8％-12％。
其中，如花生麸和菜籽粕的重量比例可以为0.5-2:1。
进一步地，所述原料混合物与所述微生物菌剂混合的时期包括：
好氧堆肥开始前，用纯净水调节原料混合物的水分至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理，堆体降温时期添加所述微生物菌剂；
或
好氧堆肥开始前，添加所述微生物菌剂调节原料混合物含水量至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理；
或
好氧堆肥开始前，添加所述微生物菌剂调节原料混合物含水量至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理；所述堆体降温时期再次添加所述微生物菌剂。
具体地，有机载体、微生物菌剂和辅料的添加方式有三种，具体如下：
堆肥处理前，在所述有机载体中添加10％花生麸和菜籽粕，获得原料混合物；拮抗菌菌剂按照5:1固液比接入所述原料混合物中；拮抗菌初始浓度为1.0×109cfu/mL，接种后调节原料混合物的水分至50wt％～60wt％。
或
堆肥处理前，在所述有机载体中添加10％花生麸和菜籽粕，获得原料混合物，用纯净水调节所述原料混合物的水分至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体。所述堆体温度降至35℃以下后，将所述微生物菌剂按照固液比5:1接入堆体中，拮抗菌初始浓度为1.0×109cfu/mL。
或
堆肥处理前，将所述微生物菌剂按照5:1固液比接入所述原料混合物中；所述拮抗菌初始浓度为1.0×109cfu/mL，接种后调节所述原料混合物的水分至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体。所述堆体温度降至35℃以下后，再次将微生物菌剂按照固液比5:1接入堆体中。
进一步地，所述好氧堆肥处理的条件为：每隔45-50h翻堆一次；每隔50-70min通风5-7min，通风量为30±2L/min；堆体维持高温35～45℃达5d以上，降温至35℃以下后干燥所述堆体水分含量至30wt％～40wt％。
好氧堆肥处理可置于智能堆肥反应器中进行，简便易于操作。
本发明还提供了所述的生物有机肥在香蕉枯萎病防控中的应用，在香蕉育苗和/或香蕉种植过程的基质中添加所述生物有机肥。
具体地，生物有机肥的应用方法包含以下方面：在香蕉杯苗育苗基质中，每杯苗按照2％比例添加上述生物有机肥，充分混匀；杯苗移栽时，在不破坏基质形状的前提下，将其移至盆栽土中；盆栽土在移栽前，预先施入所述生物有机肥，施入比例为1％。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明经筛选得到一株香蕉枯萎病拮抗菌，该拮抗菌为贝莱斯芽孢杆菌，对香蕉枯萎病病原菌有显著的平板抑制效果、温室盆栽防控效果和田间防控效果。
(2)本发明还提供了香蕉枯萎病拮抗菌的液体菌剂，便于使用。
(3)本发明将拮抗菌菌剂与堆肥产品载体结合进行二次固体发酵，有机载体可为拮抗菌的生长提供养分，有利于拮抗菌在土壤中的存活和定殖，保障其在防控中的应用效果，可显著提高生防效率。
(4)本发明提供的生物有机肥在香蕉育苗和移栽时期均添加，有利于在香蕉根际构建拮抗菌群落体系，提高香蕉根际拮抗菌数量，从而增强香蕉根际对病原菌的抵抗力，降低病害发生。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例1中对筛选得到的香蕉枯萎病拮抗菌H-6制得的系统发育树示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
防控香蕉枯萎病拮抗菌的筛菌来源为发病蕉园中的健康香蕉植株根际土，以香蕉枯萎病病原菌4号生理小种作为指示菌，经过平板初筛和复筛，获得一株具有明显平板抑制效果的拮抗菌，编号为H-6；通过划线纯化获得所述拮抗菌单菌落。
1、H-6的形态及生理生化鉴定
挑取LB斜面上的拮抗菌H-6，接种于LB平板上划线，30℃培养36h，观察单菌落形态。采用HBI微生物生化鉴定条(海博生物公司，青岛)进行拮抗菌生理生化鉴定。菌株革兰氏染色参照《常见细菌鉴定手册》进行。
鉴定结果：
菌株在LB平板上生长，单菌落呈近圆形，边缘整齐，半透明，表面光滑，中间有突起，近白色。生理生化鉴定结果见表1。
表1 H-6菌株的生理生化鉴定结果
2、H-6的16S rRNA基因鉴定
拮抗菌DNA提取采用试剂盒提取方法，所用试剂盒由天根生化科技有限公司提供。菌株16S rRNA基因片段采用PCR扩增，所用引物由上海英潍捷基贸易有限公司合成，引物序列为：27f(见SEQ ID No.1)：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；1492r(见SEQ ID No.2)：GGTTACCTTGTTACGACTT。PCR反应体系为50μL：dNTP 4μL，10×buffer 5μL，MgCl2 5μL，模板DNA 1μL，引物各1μL，Taq酶0.5μL，双蒸水32.5μL。PCR扩增条件：(1)预变性，94℃5min；(3)变性，94℃30s，退火，52℃30s，延伸，72℃1min，30个循环；(3)终延伸，72℃10min；(4)保温，10℃。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测合格后送样测序，测序由上海英潍捷基贸易有限公司完成，所得测序结果(见SEQ ID No.3)上传NCBI与GenBank中的序列进行Blast比对分析，与现有的菌株比较，最大相似度为98％，应用软件Mega 6.0构建菌株的系统发育树。结果如图1所示。
经生理生化特性和16S rRNA基因鉴定，确定该拮抗菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis。
实施例2
菌剂制备：挑取H-6拮抗菌的单菌落，接种于新鲜的LB试管培养基中，摇床培养过夜后获得拮抗菌种子液，培养条件为30℃，170r/min；将上述种子液按照2％比例转接至装有新鲜的LB培养基的三角瓶中，摇床培养3d，检测拮抗菌的数量达1.0×109cfu/mL后将菌液离心，离心条件为：10000r/min，5min，弃上清，收集菌体，用等体积去离子水重悬，拮抗菌的初始数量为1.0×109cfu/mL。
生物有机肥：将50Kg牛粪堆肥产品与5Kg花生麸和5Kg菜籽粕混合均匀，添加12L拮抗菌菌剂调节混合后的堆体含水量至50wt％～60wt％，拮抗菌在堆体中的初始浓度约为1.0×108cfu/g干样；充分搅拌均匀，使堆体养分和水分含量保持均一，堆体置于智能堆肥反应器中开始二次发酵，每隔2d翻堆一次堆体；每隔1h通风6min，通风量为30L/min；堆体维持高温35～45℃达5d左右，降温至35℃以下后干燥堆体水分含量至30wt％～40wt％，获得生物有机肥产品。
对照组1：常规化肥处理，施用尿素5.02g/10Kg土，过磷酸钙16.79g/10Kg土，氯化钾3.63g/10Kg土。
对照组2：与上述生物有机肥不同的是，堆体添加12L纯净水替代菌剂，其他条件一致，即对照组2在有机肥发酵过程中不添加任何微生物菌剂。
应用方法：育苗阶段，对照组和生物有机肥处理组所用育苗基质中均添加所述生物有机肥产品；移栽时，保持育苗基质形状，将整株苗移栽至盆栽土中；移栽前，对照组1、2及生物有机肥处理组的盆栽土中预先分别拌入化肥、对照有机肥和所述生物有机肥。对照组与生物有机肥处理对香蕉枯萎病的防控效果见表2。
表2 生物有机肥对香蕉枯萎病的防控试验I
从表2可以看出，对照组的发病率明显高于制得的生物有机肥组，并且，对照2处理的生防率为58.3％，而生物有机肥生防率达72.2％，本发明制得的生物有机肥生防效果显著高于不加菌剂的对照组2。
实施例3
准备拮抗菌菌剂：挑取H-6拮抗菌的单菌落，接种于新鲜的LB试管培养基中，摇床培养过夜后获得拮抗菌种子液，培养条件为30℃，170r/min；将上述种子液按照2％比例转接至装有新鲜的LB培养基的三角瓶中，摇床培养3d，培养条件为30℃，170r/min；检测所述三角瓶中拮抗菌的数量，达1.0×109cfu/mL后将菌液离心，离心条件为：10000r/min，5min，弃上清，收集菌体，用原菌液等体积量的去离子水将菌体重悬，充分混匀，获得所述拮抗菌菌剂，所述菌剂中拮抗菌的初始数量为1.0×109cfu/mL。
生物有机肥：将50Kg牛粪堆肥产品与5Kg花生麸和5Kg菜籽粕混合均匀，添加12L纯净水调节混合后的堆体含水量至50wt％～60wt％，充分搅拌均匀，使堆体养分和水分含量保持均一，堆体置于智能堆肥反应器中进行二次固体发酵，每隔2d翻堆一次所述堆体；每隔1h通风6min，通风量为30L/min；堆体维持高温35～45℃达5d以上，降温至35℃以下后，添加12L拮抗菌菌液，充分混匀后干燥堆体水分含量至30wt％～40wt％，获得生物有机肥产品。
对照组1：常规化肥处理，施用尿素5.02g/10Kg土，过磷酸钙16.79g/10Kg土，氯化钾3.63g/10Kg土。
对照组2：与上述生物有机肥不同的是，堆体添加12L纯净水替代菌剂，其他条件一致，即对照组2在有机肥发酵过程中不添加任何微生物菌剂。
应用方法：育苗阶段，对照组和生物有机肥处理组所用育苗基质中均添加所述生物有机肥产品；移栽时，保持育苗基质形状，将整株苗移栽至盆栽土中；移栽前，对照组1、2及生物有机肥处理组的盆栽土中预先分别拌入化肥、对照有机肥和所述生物有机肥。对照组与生物有机肥处理对香蕉枯萎病的防控效果见表3。
表3 生物有机肥对香蕉枯萎病的防控试验II
从表3可以看出，对照组的发病率明显高于制得的生物有机肥组，并且，对照2处理的生防率为58.8％，而生物有机肥生防率达75.3％。本发明制得的生物有机肥生防效果显著高于不加菌剂的对照组2。
实施例4
准备拮抗菌菌剂：挑取H-6拮抗菌的单菌落，接种于新鲜的LB试管培养基中，摇床培养过夜后获得拮抗菌种子液，培养条件为30℃，170r/min；将上述种子液按照2％比例转接至装有新鲜的LB培养基的三角瓶中，摇床培养3d，培养条件为30℃，170r/min；检测所述三角瓶中拮抗菌的数量，达1.0×109cfu/mL后将菌液离心，离心条件为：10000r/min，5min，弃上清，收集菌体，用原菌液等体积量的去离子水将菌体重悬，充分混匀，获得所述拮抗菌菌剂，所述菌剂中拮抗菌的初始数量为1.0×109cfu/mL。
生物有机肥：将50Kg牛粪堆肥产品与5Kg花生麸和5Kg菜籽粕混合均匀，添加12L拮抗菌菌液调节堆体含水量至50wt％～60wt％，充分搅拌均匀，使堆体养分和水分含量保持均一，堆体置于智能堆肥反应器中开始堆肥过程，每隔2d翻堆一次所述堆体；每隔1h通风6min，通风量为30L/min；堆体维持高温35～45℃达5d以上，降温至35℃以下后，再次添加12L拮抗菌菌液，充分混匀后干燥所述堆体水分含量至30wt％～40wt％，获得生物有机肥产品。
对照组1：常规化肥处理，施用尿素5.02g/10Kg土，过磷酸钙16.79g/10Kg土，氯化钾3.63g/10Kg土。
对照组2：与上述生物有机肥不同的是，堆体添加12L纯净水替代菌剂，其他条件一致，即对照组2在有机肥发酵过程中不添加任何微生物菌剂。
应用方法：育苗阶段，对照组和生物有机肥处理组所用育苗基质中均添加所述生物有机肥产品；移栽时，保持育苗基质形状，将整株苗移栽至盆栽土中；移栽前，对照组1、2及生物有机肥处理组的盆栽土中预先分别拌入化肥、对照有机肥和所述生物有机肥。对照组与生物有机肥处理对香蕉枯萎病的防控效果见表4。
表4 生物有机肥对香蕉枯萎病的防控试验III
从表4可以看出，对照组的发病率明显高于制得的生物有机肥组，并且，对照2处理的生防率为58.3％，而生物有机肥生防率达77.8％，本发明制得的生物有机肥生防效果显著高于不加菌剂的对照组2。
实施例5
准备拮抗菌菌剂：取所筛选出的拮抗菌的单菌落H-6，接种于新鲜的LB试管培养基中，摇床培养过夜后获得拮抗菌种子液，培养条件为30℃，170r/min；将上述种子液按照2％比例转接至装有新鲜的LB培养基的三角瓶中，摇床培养3d，培养条件为30℃，170r/min；检测所述三角瓶中拮抗菌的数量，达1.0×109cfu/mL后将菌液离心，离心条件为：10000r/min，5min，弃上清，收集菌体，用原菌液等体积量的去离子水将菌体重悬，充分混匀，获得拮抗菌菌剂，菌剂中拮抗菌的初始数量为1.0×109cfu/mL。
生物有机肥：将1000Kg牛粪堆肥产品与200Kg花生麸和50Kg米糠混合均匀，添加250L拮抗菌菌液调节堆体含水量至50wt％～60wt％，充分搅拌均匀，使堆体养分和水分含量保持均一，将堆体移置于智能控制的槽式堆肥中进行二次发酵，每隔1h通风15min；每隔2d翻堆一次所述堆体。堆体维持高温40～45℃达5d以上，降温至35℃以下后出槽，再次添加250L拮抗菌菌液，充分混匀后干燥堆体水分含量至30wt％～40wt％，获得生物有机肥产品。
对照组1：农民常规施肥，作为基肥，施入与生物有机肥养分含量一致的复合肥，施用量为45Kg/亩。
对照组2：与上述生物有机肥不同的是，堆体添加250L纯净水替代菌剂，其他条件一致，即对照组2在有机肥发酵过程中不添加任何微生物菌剂。
应用方法：对照组和生物有机肥处理组所用育苗基质中均按照3.0％～5.0％添加量添加所述生物有机肥产品，移栽时保持育苗基质形状，将整株苗移栽至大田中；其中大田中已预先施用500Kg/亩比例生物有机肥产品作为基肥；对照组1和2也均在大田中预先分别施用复合肥和对照有机肥。不同处理对香蕉枯萎病的防控效果见表5。
表5 生物有机肥对香蕉枯萎病的防控试验IV
从表5可以看出，在大田试验中，对照组的发病率仍然明显高于制得的生物有机肥组，并且，本发明制得的生物有机肥生防效果显著高于不加菌剂的对照组2。
需要说明的是，本发明实施例中所用的牛粪堆肥产品购自广州稳德农业科技有限公司。实施例5中对照组1作为基肥施用的复合肥由两种复合肥按照1:1比例混合组成，两种复合肥均购自广州市新农科肥业科技有限公司，分别为新农科复混肥料通用肥(粤农肥(2007)准字073号，15-0-15)和新农科硫酸钾复合肥(粤农肥(2009)准字0054号，15-15-15)。
此外，实施例2-5中，对照组2的生防率＝(对照组1的发病率-对照组2的发病率)/对照组1的发病率*100％，生物有机肥的生防率＝(对照组1的发病率-生物有机肥的发病率)/对照组1的发病率*100％。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
<110> 广东省农业科学院农业资源与环境研究所
<120> 香蕉枯萎病拮抗菌以及生物有机肥及其制备方法和应用
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1420
<212> DNA
<213> Bacillus velezensis
<400> 3
acatgcaagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga tgttagcggc ggacgggtga 60
gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc cgggaaaccg gggctaatac 120
cggatggttg tttgaaccgc atggttcaga cataaaaggt ggcttcggct accacttaca 180
gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg cgacgatgcg 240
tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg 300
ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc tgacggagca acgccgcgtg 360
agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg gaagaacaag tgccgttcaa 420
atagggcggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg gctaactacg tgccagcagc 480
cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag ggctcgcagg 540
cggtttctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg gggagggtca ttggaaactg 600
gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg tagcggtgaa atgcgtagag 660
atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct gtaactgacg ctgaggagcg 720
aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg 780
ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta acgcattaag cactccgcct 840
ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900
gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga catcctctga 960
caatcctaga gataggacgt ccccttcggg ggcagagtga caggtggtgc atggttgtcg 1020
tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgatcttag 1080
ttgccagcat tcagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg 1140
ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggaca 1200
gaacaaaggg cagcgaaacc gcgaggttaa gccaatccca caaatctgtt ctcagttcgg 1260
atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagc tggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg 1320
ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta 1380
acacccgaag tcggtgaggt aaccttttag gagccagccg 1420

Claims (10)

1.一种香蕉枯萎病拮抗菌，其特征在于，于2017年01月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.13549，保藏名称为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis H-6。
2.含有权利要求1所述的香蕉枯萎病拮抗菌的微生物菌剂；
优选地，所述菌剂为液体菌剂；
优选地，所述液体菌剂中，所述香蕉枯萎病拮抗菌活菌的数量是1×109～1×1010cfu/mL。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述液体菌剂通过以下方法制备：
将菌种接种于LB液体培养基中培养，得到培养液，收集菌体，重悬，即得；
优选地，所述培养的条件为：
28℃～32℃，150r/min～190r/min摇床培养10h～16h后转接至新鲜LB培养基中，摇床培养60h～80h，获得所述培养液。
4.一种生物有机肥，其特征在于，所述香蕉枯萎病拮抗菌的浓度不小于1.0×108cfu/g干样。
5.权利要求4所述的生物有机肥的制备方法，其特征在于，将权利要求2-3任一项所述的微生物菌剂与有机载体和辅料混合，然后进行好氧堆肥处理，得到生物有机肥；
优选地，所述有机载体为畜禽粪便好氧堆肥产品。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述有机载体先与辅料混合，获得原料混合物；所述辅料包括花生麸和菜籽粕，所述辅料的添加量为所述有机载体重量的8％-12％。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述原料混合物与所述微生物菌剂以固液比为3-8:1混合，其中，固液比的单位为kg/L；
优选地，所述原料混合物与所述微生物菌剂以固液比为5-6:1混合。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述原料混合物与所述微生物菌剂混合的时期包括：
好氧堆肥开始前，用纯净水调节原料混合物的水分至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理，堆体降温时期添加所述微生物菌剂；
或
好氧堆肥开始前，添加所述微生物菌剂调节原料混合物含水量至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理；
或
好氧堆肥开始前，添加所述微生物菌剂调节原料混合物含水量至50wt％～60wt％，获得堆肥堆体，进行好氧堆肥处理；堆体降温时期再次添加所述微生物菌剂。
9.根据权利要求5-8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述好氧堆肥处理的条件为：每隔45-50h翻堆一次；每隔50-70min通风5-7min，通风量为30±2L/min；堆体维持高温35～45℃达5d以上，降温至35℃以下后干燥堆体水分含量至30wt％～40wt％。
10.权利要求4所述的生物有机肥在香蕉枯萎病防控中的应用，其特征在于，在香蕉育苗和/或香蕉种植过程的基质中添加所述生物有机肥。
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Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107937313A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN108029703A (zh) * 2017-12-21 2018-05-15 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治辣椒疫病中的应用
CN108070540A (zh) * 2017-11-28 2018-05-25 广东省生态环境技术研究所 一株产表面活性剂微生物及其在堆肥中的应用
CN108753664A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 广东省农业科学院农业资源与环境研究所 一种生物防治剂、生物有机肥及其应用
CN109097295A (zh) * 2018-07-02 2018-12-28 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 贝莱斯芽孢杆菌菌株hn03及其应用
CN109652336A (zh) * 2019-01-22 2019-04-19 广西金穗生态科技股份有限公司 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110982724A (zh) * 2018-09-29 2020-04-10 福建省农业科学院农业生物资源研究所 一种拮抗植物病原菌和促生根的芽孢杆菌及其应用
CN111876351A (zh) * 2020-07-23 2020-11-03 山东农业大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在减轻苹果连作障碍中的应用
CN112136836A (zh) * 2020-09-17 2020-12-29 云南省农业科学院农业环境资源研究所 有机碳肥在防治作物土传病害中的应用及防治作物土传病害的方法
CN112425609A (zh) * 2020-12-18 2021-03-02 重庆谷百奥生物研究院有限公司 一种促进香蕉植株生长和防治香蕉枯萎病的绿僵菌制剂
CN112746033A (zh) * 2020-03-26 2021-05-04 湖南鑫业农牧科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用
CN112779183A (zh) * 2020-12-31 2021-05-11 浙江省农业科学院 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用
CN113061554A (zh) * 2021-04-16 2021-07-02 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一株防治香蕉枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及应用
CN113402335A (zh) * 2021-05-11 2021-09-17 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种含有有益菌的牛羊粪生物有机肥料配方及其应用
CN113801804A (zh) * 2021-03-24 2021-12-17 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一株香蕉枯萎病生防拮抗菌株及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101760438A (zh) * 2009-12-23 2010-06-30 珠海市农业科学研究中心 一株广谱抗真菌植物内生枯草芽胞杆菌及其应用
CN102321551A (zh) * 2011-08-05 2012-01-18 华南农业大学 苏云金芽孢杆菌gl-1及在土壤解磷防病方面的应用
CN102747020A (zh) * 2012-07-18 2012-10-24 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN105087423A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 Cj第一制糖株式会社 新型芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物
CN105801259A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 南宁汉和生物科技有限公司 用于防治香蕉枯萎病的液体肥的制备方法
CN106244491A (zh) * 2016-08-29 2016-12-21 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种抑制枯萎病的香蕉茎叶残体腐熟菌剂及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101760438A (zh) * 2009-12-23 2010-06-30 珠海市农业科学研究中心 一株广谱抗真菌植物内生枯草芽胞杆菌及其应用
CN102321551A (zh) * 2011-08-05 2012-01-18 华南农业大学 苏云金芽孢杆菌gl-1及在土壤解磷防病方面的应用
CN102747020A (zh) * 2012-07-18 2012-10-24 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN105087423A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 Cj第一制糖株式会社 新型芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物
CN105801259A (zh) * 2016-03-15 2016-07-27 南宁汉和生物科技有限公司 用于防治香蕉枯萎病的液体肥的制备方法
CN106244491A (zh) * 2016-08-29 2016-12-21 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种抑制枯萎病的香蕉茎叶残体腐熟菌剂及其制备方法

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108070540A (zh) * 2017-11-28 2018-05-25 广东省生态环境技术研究所 一株产表面活性剂微生物及其在堆肥中的应用
CN108029703A (zh) * 2017-12-21 2018-05-15 福建省农业科学院植物保护研究所 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治辣椒疫病中的应用
CN107937313B (zh) * 2017-12-21 2019-10-01 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN107937313A (zh) * 2017-12-21 2018-04-20 福建省农业科学院植物保护研究所 一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN108753664A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 广东省农业科学院农业资源与环境研究所 一种生物防治剂、生物有机肥及其应用
CN109097295A (zh) * 2018-07-02 2018-12-28 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 贝莱斯芽孢杆菌菌株hn03及其应用
CN109097295B (zh) * 2018-07-02 2020-08-04 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 贝莱斯芽孢杆菌菌株hn03及其应用
CN110982724A (zh) * 2018-09-29 2020-04-10 福建省农业科学院农业生物资源研究所 一种拮抗植物病原菌和促生根的芽孢杆菌及其应用
CN109652336A (zh) * 2019-01-22 2019-04-19 广西金穗生态科技股份有限公司 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112746033A (zh) * 2020-03-26 2021-05-04 湖南鑫业农牧科技有限公司 一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂及其在发酵生产有机肥中的应用
CN111876351A (zh) * 2020-07-23 2020-11-03 山东农业大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在减轻苹果连作障碍中的应用
CN111876351B (zh) * 2020-07-23 2021-11-19 山东农业大学 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在减轻苹果连作障碍中的应用
CN112136836A (zh) * 2020-09-17 2020-12-29 云南省农业科学院农业环境资源研究所 有机碳肥在防治作物土传病害中的应用及防治作物土传病害的方法
CN112136836B (zh) * 2020-09-17 2021-11-23 云南省农业科学院农业环境资源研究所 有机碳肥在防治作物土传病害中的应用及防治作物土传病害的方法
CN112425609A (zh) * 2020-12-18 2021-03-02 重庆谷百奥生物研究院有限公司 一种促进香蕉植株生长和防治香蕉枯萎病的绿僵菌制剂
CN112779183A (zh) * 2020-12-31 2021-05-11 浙江省农业科学院 番茄半边风病害防控生物有机肥、制备方法及其应用
CN113801804A (zh) * 2021-03-24 2021-12-17 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一株香蕉枯萎病生防拮抗菌株及其应用
CN113801804B (zh) * 2021-03-24 2022-11-15 云南省农业科学院农业环境资源研究所 一株香蕉枯萎病生防拮抗菌株及其应用
CN113061554A (zh) * 2021-04-16 2021-07-02 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一株防治香蕉枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及应用
CN113402335A (zh) * 2021-05-11 2021-09-17 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种含有有益菌的牛羊粪生物有机肥料配方及其应用

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