CN112739214A - 用于农业的组合物和相关方法 - Google Patents

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Abstract

本发明包含用于减少椿象的肠细菌定殖的方法，该方法包括提供包含香兰素或其类似物的组合物；以及向将孵化椿象的卵递送所述组合物，由此相对于从未处理的卵孵化的椿象，减少了用从组合物处理的卵孵化的椿象的肠内细菌的定殖。在一些实施例中，该细菌定殖的减少降低了椿象的适应度，例如，降低了繁殖能力、存活、发育率、卵的数目、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、体宽、体重、或角质层厚度。在本文方法的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细菌代谢的抑制剂。在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂。

Description

用于农业的组合物和相关方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年7月25日提交的美国临时申请号62/703,304的权益，将其通过引用以其全文并入本文。
序列表
本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表并且该序列表特此通过引用以其全文并入。创建于2019年7月17日的所述ASCII副本名称为51215-012WO2_Sequence_Listing_07.17.19_ST25并且大小是60,129字节。
背景技术
植物有害生物(包括昆虫有害生物)在人类环境中普遍存在。
发明内容
在第一方面，本发明包含用于减少椿象的肠细菌定殖的方法，该方法包括(a)提供包含香兰素或其类似物的组合物；以及(b)向将孵化椿象的卵递送所述组合物，由此相对于从未处理的卵孵化的椿象，减少了从用组合物处理的卵孵化的椿象的肠内细菌的定殖。
在一些实施例中，将该组合物递送至椿象的卵块。在一些实施例中，该细菌定殖的减少降低了椿象的适应度，例如，降低了繁殖能力、存活、发育率、卵的数目、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、体宽、体重、或角质层厚度。
在一些实施例中，该定殖是在该肠的v4区中。在一些实施例中，该肠的v4区的细菌定殖减少了至少5％。在一些实施例中，该肠的v4区的尺寸减小。
在一些实施例中，该椿象是茶翅蝽属(Halyomorpha)物种(例如，茶翅蝽(Halyomorpha halys))、绿椿属(Nezara)物种、稻蝽属(Oebalus)物种、Chinavia物种、龟象属(Euthyrhynchus)物种、美洲椿属(Euschistus)物种、Alcaeorrhynchus物种、或刺益蝽属(Podisus)物种。
在一些实施例中，该细菌是内共生体，例如，泛菌(Pantoea)属的内共生体。在一些实施例中，该内共生体是暂定种卡贝克泛菌(Candidatus Pantoea carbekii)。
在一些实施例中，该组合物是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶或气体组合物。在一些实施例中，将该组合物作为喷雾递送。在一些实施例中，该组合物包含农业上可接受的载剂。在一些实施例中，该组合物包含湿化液。
本文披露了用于改变农业或商业的昆虫适应度的组合物和方法，其中该组合物包括减少昆虫肠中的细菌的定殖(例如，内共生细菌)的细菌定殖破坏剂(例如，药剂(例如，脂多糖(LPS)合成抑制剂或聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂)。
在一方面，本文提供了改变昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包括细菌定殖破坏剂的组合物。在一些实施例中，该方法包括减少递送了细菌定殖破坏剂的昆虫的适应度。可替代地，在一些实施例中，该方法包括增加递送了细菌定殖破坏剂的昆虫的适应度。
在另一方面，本文提供了减少昆虫肠中细菌的定殖的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包括细菌定殖破坏剂的组合物。
在本文方法的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细菌代谢的抑制剂。在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂。
在另一方面，本文提供了改变昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包括PHA合成抑制剂的组合物。在一些实施例中，该方法包括减少递送了PHA抑制剂的昆虫的适应度。可替代地，在一些实施例中，该方法包括增加递送了PHA抑制剂的昆虫的适应度。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是香兰素或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是表1中的一种或多种化合物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是乙酰丙酸或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是丙烯酸或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是2-溴辛酸或其类似物。
在本文方法的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细胞包膜生物发生(例如，围绕并且保护细菌细胞质的一种或多种膜或其他结构，例如，细胞壁、内膜和外膜的生物发生)的抑制剂。在本文方法的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是脂多糖(LPS)合成抑制剂。
在另一方面，本文提供了改变昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送LPS合成抑制剂。在一些实施例中，该方法包括减少递送了LPS合成抑制剂的昆虫的适应度。可替代地，在一些实施例中，该方法包括增加递送了LPS合成抑制剂的昆虫的适应度。
在一些实施例中，该LPS合成抑制剂是细菌中核心寡糖合成的抑制剂。在一些实施例中，该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的酶。在一些实施例中，该酶与具有WaaA、WaaC、WaaF、或WaaG的氨基酸序列的多肽具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。在一些实施例中，该LPS合成抑制剂(例如，涉及LPS合成的酶的抑制剂)是糖。在一些实施例中，该糖是ADP-2-氟庚糖(AFH)。在一些实施例中，该糖是2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)。在一些实施例中，该糖是AFH和DHPO。在一些实施例中，该糖是表7中的一种或多种化合物。
在一些实施例中，该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的基因的表达。在一些实施例中，该基因与具有waaA、waaC、waaF、或waaG的核苷酸序列的多核苷酸具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细菌细胞壁生物发生的抑制剂。在一些实施例中，该细菌细胞壁生物发生的抑制剂是十一碳异戊二烯基焦磷酸酯磷酸酶(undecaprenyl pyrophosphate phosphatase,UppP)的抑制剂，例如，杆菌肽。
在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是鞭毛功能的抑制剂，例如，纤维素。
在本文方法的一些实施例中，该昆虫是植物有害生物。在一些实施例中，该植物有害生物是以下目的成员：鞘翅目(Coleoptera)、双翅目(Diptera)、半翅目(Hemiptera)、鳞翅目(Lepidoptera)、直翅目(Orthoptera)、缨翅目(Thysanoptera)或蜱螨目(Acarina)。在一些实施例中，该昆虫是椿象、豆虫(bean bug)、甲虫、象鼻虫、蝇、蚜虫、粉虱、叶蝉(leafhopper)、介壳虫(scale)、蛾、蝴蝶、蚱蜢、蟋蟀、蓟马、或螨(mite)。在一些实施例中，该昆虫是蜂缘蝽属(Riptortus)的。在一些实施例中，该昆虫是茶翅蝽属(Halyomorpha)的。
在本文方法的一些实施例中，该昆虫是动物病原体和/或人病原体的媒介。在一些实施例中，该昆虫是蚊子、蠓、虱子、白蛉、蜱(tick)、锥蝽臭虫(triatomine bug)、采采蝇、或跳蚤(flea)。
在本文方法的一些实施例中，该细菌是内共生细菌。在一些实施例中，该内共生体寄宿于昆虫的肠中。在一些实施例中，该细菌寄宿于昆虫肠中的专门的细胞或专门的器官。在一些实施例中，该专门的器官是中肠隐窝或怀菌体(bacteriome)。在一些实施例中，该专门的细胞是含菌细胞。在一些实施例中，该内共生细菌是伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)属的。在一些实施例中，该内共生细菌是泛菌属的。
在本文方法的一些实施例中，相对于未处理的昆虫，该方法有效减少昆虫的适应度。在一些实施例中，相对于未处理的昆虫，昆虫适应度的减少是繁殖能力、存活、发育率、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、或重量的减少(例如，约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或超过100％)。
在一些实施例中，相对于未处理的昆虫，该方法有效减少昆虫的肠中的细菌定殖(例如，减少了约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或超过100％)。
在一些实施例中，该方法有效抑制细菌和昆虫的肠之间的物理相互作用。
在本文方法的一些实施例中，将该组合物递送至昆虫，到昆虫生长、生活、或繁殖的至少一个栖息地。
在本文方法的一些实施例中，该组合物是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶或气体组合物。
在本文方法的一些实施例中，将该组合物作为昆虫可食用组合物递送，以用于昆虫摄取。
在本文方法的一些实施例中，将该组合物通过摄取、输注、注射、或喷雾向昆虫递送。在一些实施例中，将组合物递送至昆虫的卵。
在本文方法的一些实施例中，该组合物包括农业上可接受的载剂。
在又另一方面中，本文提供了经修饰的昆虫，该经修饰的昆虫通过包括将昆虫与包含根据本文所述的方法中任一项所述的细菌定殖破坏剂组合物接触的方法产生。
在另外的方面，本文提供了筛选测定以鉴定细菌定殖破坏剂，该筛选测定包括以下步骤：(a)将目标昆虫暴露于一种或多种药剂；以及(b)鉴定药剂，该药剂(i)减少目标昆虫的适应度(例如，减少了约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或超过100％)，并且(ii)抑制目标昆虫的肠中细菌的定殖(例如，抑制了约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或超过100％)。
在本文测定的一些实施例中，该适应度的减少是目标昆虫减少的存活。在一些实施例中，适应度的减少是繁殖能力、存活、发育率、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、或体重减少。
在一些实施例中，该药剂有效抑制细菌和昆虫的肠之间的物理相互作用。
在本文测定的一些实施例中，该细菌是内共生细菌。在一些实施例中，该内共生细菌寄宿于昆虫的肠中。在一些实施例中，该细菌寄宿于昆虫肠中的专门的细胞或专门的器官。在一些实施例中，该专门的器官是中肠隐窝或怀菌体(bacteriome)。在一些实施例中，该专门的细胞是含菌细胞。在一些实施例中，该细菌是伯克霍尔德氏菌属的。在一些实施例中，该细菌是泛菌属的。
在本文测定的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是PHA合成抑制剂。
在本文测定的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是LPS合成抑制剂。
在本文测定的一些实施例中，该昆虫是植物有害生物。在一些实施例中，该植物有害生物是以下目的成员：鞘翅目、双翅目、半翅目、鳞翅目、直翅目、缨翅目或蜱螨目。
在本文测定的一些实施例中，该昆虫是动物病原体和/或人病原体的媒介。在一些实施例中，该昆虫是蚊子、蠓、虱子、白蛉、蜱(tick)、锥蝽臭虫(triatomine bug)、采采蝇、或跳蚤(flea)。
在另一方面，本文提供了经修饰的昆虫，该经修饰的昆虫通过包括将昆虫与包含细菌定殖破坏剂的组合物接触的方法产生，该细菌定殖破坏剂通过本文的筛选测定鉴定。
在又另一方面中，本文提供了减少昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包括细菌定殖破坏剂的组合物，该细菌定殖破坏剂通过本文的筛选测定鉴定。
在另外的方面，本文提供了包括细菌定殖破坏剂和载剂的组合物，其中该组合物被配制用于递送至昆虫，或其栖息地。
在本文组合物的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是香兰素或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是表1中的一种或多种化合物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是乙酰丙酸或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是丙烯酸或其类似物。在一些实施例中，该PHA合成抑制剂是2-溴辛酸或其类似物。
在本文组合物的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细菌细胞包膜生物发生的抑制剂。在一些实施例中，该细菌细胞包膜生物发生抑制剂是脂多糖(LPS)合成抑制剂。在一些实施例中，该LPS合成抑制剂是细菌中核心寡糖合成的抑制剂。在一些实施例中，该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的酶。在一些实施例中，该酶与具有WaaA、WaaC、WaaF、或WaaG的氨基酸序列的多肽具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。在一些实施例中，该LPS合成抑制剂(例如，涉及LPS合成的酶的抑制剂)是糖。在一些实施例中，该糖是ADP-2-氟庚糖(AFH)。在一些实施例中，该糖是2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)。在一些实施例中，该糖是AFH和DHPO。在一些实施例中，该糖是表7中的一种或多种化合物。
在一些实施例中，该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的基因的表达。在一些实施例中，该基因与具有waaA、waaC、waaF、或waaG的核苷酸序列的多核苷酸具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是细菌细胞壁生物发生的抑制剂。在一些实施例中，该细菌细胞壁生物发生的抑制剂是十一碳异戊二烯基焦磷酸酯磷酸酶(undecaprenyl pyrophosphate phosphatase,UppP)的抑制剂，例如，杆菌肽。
在一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是鞭毛功能的抑制剂，例如，纤维素。
在本文组合物的一些实施例中，该细菌定殖破坏剂是该组合物的至少0.1％、0.2％、0.4％、0.5％、0.8％、1％、2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％。在一些实施例中，该载剂是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶或气体组合物。在一些实施例中，该载剂是糖糖浆、玉米糖浆、或蜂蜜。在一些实施例中，该载剂是纳米颗粒或脂膜。
在本文组合物的一些实施例中，该组合物被配制用于向昆虫递送，例如通过摄取、输注、注射、喷雾、烟熏或雾化。在一些实施例中，该组合物被配制用于递送至至少一个栖息地，例如昆虫生长、生活、繁殖或进食的栖息地。在一些实施例中，该组合物被配制用于递送至被昆虫摄入的植物。在另一方面，本文提供了包括细菌定殖破坏剂的经修饰的植物或其部分，其中该植物或其部分被昆虫摄入。在一些实施例中，将该植物基因工程化以产生细菌定殖破坏剂，例如，通过从异源遗传构建体表达。
定义
如本文所用的，术语“细菌定殖破坏剂”是指阻碍或破坏昆虫肠中细菌定殖(例如，肠表面的定殖或本文的细胞(例如，含菌细胞)或器官(例如，怀菌体或隐窝)的定殖)的药剂。例如，该药剂可改变细菌或其组分(例如，细菌代谢或细菌细胞表面)、和/或昆虫肠或其组分的特性，使得细菌不能再与昆虫的肠附着、结合，或在昆虫的肠中繁殖。示例性细菌定殖破坏剂包括脂多糖(LPS)合成抑制剂、聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂、细胞壁生物发生的抑制剂、和鞭毛功能的抑制剂。
如本文所用的，术语“定殖”是指细菌在昆虫中以一定量的持久性，和足以在昆虫(例如，昆虫肠)中建立细菌种群的持续时间，该细菌在昆虫的寿命中持续存在。细菌(一旦定殖)可以通过昆虫的至少一个另外的代(例如二或更多代(例如生命周期))来进一步垂直传播。
如本文所用的，术语“有效量”是指足以影响以下列举结果的细菌定殖破坏剂，或包括所述药剂的组合物的量：例如，减少昆虫适应度；达到目标昆虫内细菌定殖破坏剂浓度的靶水平(例如，预定或阈值水平)；达到目标昆虫肠内细菌定殖破坏剂浓度的靶水平(例如，预定或阈值水平)；达到目标昆虫含菌细胞内细菌定殖破坏剂浓度的靶水平(例如，预定或阈值水平)；达到目标昆虫隐窝内细菌定殖破坏剂浓度的靶水平(例如，预定或阈值水平)；和/或减少目标昆虫的肠中一种或多种微生物(例如，内共生体)的定殖。
如本文所用的“昆虫适应度的减少”是指作为施用细菌定殖破坏剂的结果，对昆虫生理学或通过所述昆虫进行的任何活动的任何有利的改变，包括但不限于以下任何一种或多种希望的作用：(1)使昆虫群体减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(2)使昆虫繁殖速率减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(3)使昆虫移动性减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(4)使昆虫体重减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(5)使昆虫代谢速率或活动减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；或(6)使昆虫的植物侵染减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多。相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，可以确定昆虫适应度的减少。
如本文所用的，术语“适应度”是指昆虫存活、生长和/或产生存活后代的能力。生物体的适应度可以通过包括但不限于以下的一种或多种参数测量：存活、寿命、繁殖能力、繁殖速率、繁殖期、产出的卵的数目、孵化的卵的数目、发育率、成虫出现率、移动性、体型大小(例如，体长、体重、或体宽(例如，椿象的前胸(pronotal)宽度)、角质层(外骨骼)厚度、色素形成、或代谢速率。
如本文所用的，术语“肠”是指昆虫肠(包括昆虫的前肠、中肠或后肠)和本文的任何专门的器官(例如，隐窝或怀菌体)或细胞(例如，含菌细胞)的任何部分。如本文所用的，术语“v1”、“v2”、“v3”、和“v4”是指从成虫的半翅目昆虫(例如椿象或豆虫)解剖的中肠的形态学上不同的区，将这些区从前到后分别编号。如本文所用的，v1是指胃样中肠第一区；v2是指管状中肠第二区；v3是指相对宽的囊状中肠第三区；并且v4是指中肠第四区，其含有许多具有可以包括共生细胞的内腔的隐窝。细菌定殖可以发生在肠的一个、超过一个、或所有区中。在一些实例中，细菌定殖发生在中肠的v4区。v1-v4区也可以称为m1-m4(Duron和Noel,Environmental Microbiology Reports[环境微生物学报告],8(5):715-727)。
如本文所用的，术语“宿主”是指携带寄宿微生物(例如，内源微生物、内共生微生物(例如，原生或次生内共生体)、共栖生物、和/或致病微生物)的生物(例如，昆虫)。
如本文所用的，“昆虫适应度的增加”是指对昆虫生理学、昆虫表型、或昆虫的任何活动的任何有利的改变，包括但不限于以下任何一种或多种希望的作用：(1)使昆虫群体增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(2)使昆虫繁殖速率增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(3)使昆虫的移动性增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(4)使昆虫体重增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(5)使昆虫代谢速率或活动增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(6)使通过昆虫进行的授粉(例如，在给定时间内被授粉的植物数目)增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(7)使昆虫副产物(例如，蜂蜜或蚕丝)的产量增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；(8)使昆虫的营养物(例如，蛋白、脂肪酸、或氨基酸)含量增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多；或(9)使昆虫对杀有害生物剂的抗性增加约1％、2％、3％、4％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、100％或更多。在与对照的比较(例如，未处理的昆虫)中，可以确定昆虫适应度的增加。
术语“昆虫”或“节肢动物”包括在任何发育阶段(即，未成熟昆虫或成虫)的属于节肢动物门并且属于昆虫纲或蛛形纲的任何生物。如本文所用的，术语“有益的昆虫”是指其的存在有助于农业、园艺或商业应用，或者其的存在或活动是希望的昆虫。
如本文所用的，术语“微生物”是指细菌或真菌。微生物可以是指寄宿于昆虫(例如，内源性微生物、内共生微生物(例如，原生或次生内共生体))的微生物或者昆虫外源的微生物，包括产生细菌定殖破坏剂的那些。
如本文所用的，术语“肽”、“蛋白质”或“多肽”涵盖天然或非天然存在的氨基酸(D-或L-氨基酸)的任何链，无论长度(例如，至少2、3、4、5、6、7、10、12、14、16、18、20、25、30、40、50、100或更多个氨基酸)、存在或不存在翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)、或存在例如与肽共价连接的一个或多个非氨基酰基基团(例如，糖、脂质等)，并且包括例如天然蛋白、合成的或重组的多肽和肽、杂交分子、类肽或模拟肽。
如本文所用的，两个序列之间的“百分比同一性”通过BLAST 2.0算法(描述于Altschul等人(J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410,1990))确定。用于执行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公开地获得。
如本文所用的，术语“有害生物”是指以下昆虫：对植物或其他生物体造成损害，存在于不希望它们的地方，或在其他方面例如通过影响人类农业方法或产品而对人不利。
如本文所用的，术语“植物”是指整株植物、植物器官、植物组织、种子、植物细胞、种子、以及它们的子代。植物细胞包括但不限于来自种子、悬浮培养物、胚、分生组织区域、花、愈伤组织、叶、根、枝、配子体、孢子体、花粉、或小孢子的细胞。植物部分包括分化的或未分化的组织，这些组织包括但不限于以下：根、茎、枝、叶、花粉、种子、肿瘤组织、以及各种形式的细胞和培养物(例如，单细胞、原生质体、胚、或愈伤组织)。植物组织可以在植物中或在植物器官、组织或细胞培养物中。
如本文所用的，术语“共生体”或“昆虫共生体”是指细胞内或细胞外的微生物，该微生物(在昆虫定殖后)赋予昆虫适应度益处。“内共生体”是指能在昆虫细胞或器官(如含菌细胞或隐窝)内生存的微生物。
如本文所用的，术语“未处理的昆虫”或“未经修饰的昆虫”是指，未特异性地与细菌定殖破坏剂接触或未被递送细菌定殖破坏剂(例如，根据本文所述的方法)(例如，在任何时间点未与细菌定殖破坏剂接触或未被递送细菌定殖破坏剂，或在与细菌定殖破坏剂接触或被递送细菌定殖破坏剂之前的时间点评估)的昆虫或其群体。
从以下详细说明以及权利要求中，本发明的其他特征和优点将会是显而易见的。
附图说明
附图旨在说明本发明的一个或多个特征、方面或实施例，而非旨在进行限制。
图1是显示暂定种卡贝克泛菌(P.carbekii)dnaK基因与茶翅蝽60s基因的表达比例(基于来自从用乙醇或漂白剂处理的(漂白的)或者未用乙醇或漂白剂处理的(未漂白的)卵孵化的第2龄、第3龄、第4龄茶翅蝽的汇总的qPCR数据)的散点图。条表示平均和标准差。
图2A是显示在孵化后的给定天数，第2龄、第3龄、第4龄、第5龄或成虫发育阶段的若虫数目的图。从乙醇-处理的并且漂白的(bl)卵(虚线)或未用乙醇或漂白剂处理的卵(对照)(实线)孵化个体。误差条表示标准差。
图2B是显示从乙醇-处理的并且漂白的卵或未用乙醇或漂白剂处理的卵(对照)孵化的茶翅蝽的群体达到50％成虫的孵化后平均天数的箱形图。t＝t值；df＝自由度。
图3A是显示从相同年龄的茶翅蝽个体中解剖的肠的照片，这些个体从乙醇处理的并且漂白的卵(无共生体)或者从未用乙醇或漂白剂处理的卵(对照)孵化。标记肠的v1、v2、v3、和v4区。
图3B是显示相同年龄的雌性茶翅蝽个体之间尺寸和颜色差异的照片，这些个体从乙醇处理的并且漂白的卵(无共生体；右)或者从未用乙醇或漂白剂处理的卵(对照；左)孵化。
图3C是显示雌性和雄性茶翅蝽个体中前胸背板(前胸宽度；尺寸的代表)平均宽度的散点图，这些个体从乙醇处理的并且漂白的卵(漂白的)或者从未用乙醇或漂白剂处理的卵(未漂白的)孵化。
图4是通过雌性茶翅蝽个体产生的卵块中卵的平均数目的散点图，这些个体从乙醇处理的并且漂白的卵(漂白的)或者从未用乙醇或漂白剂处理的卵(对照)孵化。
图5是显示卡贝克泛菌dnaK基因与茶翅蝽60s基因的表达比例(基于来自从卵孵化的后第2龄茶翅蝽若虫的汇总的qPCR数据，这些卵是用阴性对照(水)、阳性对照(利福霉素S)、或聚羟基链烷酸酯(PHA)抑制剂(2-溴辛酸、丙烯酸、香兰素、或乙酰丙酸)处理的)的散点图。星号显示当与水对照相比时，p<0.05的统计学显著性，并且星号上的数字显示与水对照相比的平均值的倍数差异(减少)。
图6是显示卡贝克泛菌dnaK基因与茶翅蝽60s基因的表达比例(基于来自从卵孵化的后第2龄茶翅蝽若虫的汇总的qPCR数据，这些卵是用阴性对照(水)、阳性对照(利福霉素S)、或细胞壁合成抑制剂杆菌肽处理的)的散点图。星号显示当与水对照相比时，p<0.05的统计学显著性，并且星号上的数字显示与水对照相比的平均值的倍数差异(减少)。
图7是显示卡贝克泛菌dnaK基因与茶翅蝽60s基因的表达比例(基于来自从卵孵化的后第2龄茶翅蝽若虫的汇总的qPCR数据，这些卵是用阴性对照(水)、阳性对照(利福霉素S)、或鞭毛功能抑制剂纤维素处理的)的散点图。星号显示当与水对照相比时，p<0.05的统计学显著性，并且星号上的数字显示与水对照相比的平均值的倍数差异(减少)。
图8是显示棕色大理石纹蝽(brown marmorated stink bug)(茶翅蝽)发育阶段的图，包括卵、第1龄昆虫、第2龄昆虫、第3龄昆虫、第4龄昆虫、第5龄昆虫、和雄性和雌性成虫。
具体实施方式
本文提供了用于减少或防止昆虫肠中细菌定殖的方法和包括细菌定殖破坏剂的组合物。肠微生物群的完整性对昆虫适应度非常重要。许多昆虫已经进化为必须依赖细菌共生体，包括细胞内共生体(例如，内共生体)。这些细菌中的许多寄宿于昆虫的肠中，并且在某些情况下，昆虫将这些细菌藏于专门的细胞(含菌细胞)或器官(怀菌体或隐窝)中。通过阻碍细菌在昆虫肠或其中的专门的器官或细胞中定殖，本发明的方法和组合物可被用于减少各种昆虫(如在农业或商业被视为有害生物的昆虫或对人类或动物有害的昆虫(例如疾病的昆虫媒介))的适应度。
各种细菌定殖破坏剂在本发明的方法中是有用的。本文所述的方法和组合物部分基于实例，这些实例说明不同的药剂，例如，脂多糖(LPS)合成抑制剂、聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂、细胞壁生物发生抑制剂、或鞭毛功能的抑制剂如何用于减少昆虫宿主中共生微生物(例如，豆虫中的内共生伯克霍尔德氏菌或椿象中的暂定种卡贝克泛菌)的定殖，以减少这些宿主的适应度。本文还提供了用于鉴定另外的细菌定殖破坏剂的筛选方法。
I.改变昆虫适应度的方法
本文提供了通过向昆虫递送包括细菌定殖破坏剂的组合物来改变昆虫适应度(例如，减少适应度或增加适应度)的方法。以下进一步描述了可以被本发明的方法靶向的昆虫的实例、通过本发明的方法赋予的适应度益处、以及用于将细菌定殖破坏剂递送至昆虫的方法。
i.昆虫
本文的细菌定殖破坏剂可被应用至多种昆虫。例如，该昆虫可以是农业有害生物。有害生物包括对植物或其他生物造成损害，或在其他方面对人，例如人类农业方法或产品不利的昆虫。
在一些情况下，昆虫是以下目的：蜱螨目(Acari)、蜘蛛目(Araneae)、虱目(Anoplura)、鞘翅目、弹尾目(Collembola)、革翅目(Dermaptera)、网翅目(Dictyoptera)、双尾目(Diplura)、双翅目(例如，斑翅果蝇(spotted-wing Drosophila))、纺足目(Embioptera)、蜉蝣目(Ephemeroptera)、蛩蠊目(Grylloblatodea)、半翅目(例如，蚜虫、温室白粉虱)、同翅目(Homoptera)、膜翅目(Hymenoptera)、等翅目(Isoptera)、鳞翅目、食毛目(Mallophaga)、长翅目(Mecoptera)、脉翅目(Neuroptera)、蜻蜓目(Odonata)、直翅目、竹节虫目(Phasmida)、襀翅目(Plecoptera)、原尾目(Protura)、啮虫目(Psocoptera)、蚤目(Siphonaptera)、虱目(Siphunculata)、缨尾目(Thysanura)、捻翅目(Strepsiptera)、缨翅目、毛翅目(Trichoptera)、或缺翅目(Zoraptera)。
在一些情况下，该昆虫是蛛形纲(Arachnida)的，例如，粉螨属物种(Acarusspp.)、柑橘瘤瘿螨(Aceria sheldoni)、刺皮节蜱属物种(Aculops spp.)、刺瘿螨属物种(Aculus spp.)、花蜱属物种(Amblyomma spp.)、山楂叶螨(Amphitetranychusviennensis)、锐缘蜱属物种(Argas spp.)、牛蜱属物种(Boophilus spp.)、短须螨属物种(Brevipalpus spp.)、草苔藓(Bryobia graminum)、苜蓿苔螨(Bryobia praetiosa)、刺尾蝎属物种(Centruroides spp.)、足螨属物种(Chorioptes spp.)、鸡皮刺螨(Dermanyssusgallinae)、屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)、粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)、革蜱属物种(Dermacentor spp.)、始叶螨属物种(Eotetranychus spp.)、枣叶锈螨(Epitrimerus pyri)、真叶螨属物种(Eutetranychus spp.)、瘿螨属物种(Eriophyesspp.)、家食甜螨(Glycyphagus domesticus)、赤足地螨(Halotydeus destructor)、跗线螨属物种(Hemitarsonemus spp.)、璃眼蜱属物种(Hyalomma spp.)、硬蜱属物种(Ixodesspp.)、寇蛛属物种(Latrodectus spp.)、斜蛛属物种(Loxosceles spp.)、全爪螨属物种(Metatetranychus spp.)、秋收恙螨(Neutrombicula autumnalis)、奴合撒属物种(Nuphersa spp.)、小爪螨属物种(Oligonychus spp.)、钝缘蜱属物种(Ornithodorosspp.)、禽刺螨属物种(Ornithonyssus spp.)、全爪螨属物种(Panonychus spp.)、柑橘锈螨(Phyllocoptruta oleivora)、侧多食跗线螨(Polyphagotarsonemus latus)、螨属物种(Psoroptes spp.)、扇头蜱属物种(Rhipicephalus spp.)、根螨属物种(Rhizoglyphusspp.)、疥螨属物种(Sarcoptes spp.)、中东金蝎(Scorpio maurus)、狭跗线螨属物种(Steneotarsonemus spp.)、稻细螨(Steneotarsonemus spinki)、跗线属物种(Tarsonemusspp.)、四爪螨属物种(Tetranychus spp.)、阿氏真恙螨(Trombicula alfreddugesi)、Vaejovis属物种、或Vasates lycopersici。
在一些情况下，该昆虫是唇足纲(Chilopoda)的，例如地蜈蚣属物种(Geophilusspp.)或蚰蜒属物种(Scutigera spp.)。
在一些情况下，该昆虫是弹尾目(Collembola)的，例如武装棘跳虫(Onychiurusarmatus)。
在一些情况下，该昆虫是倍足纲(Diplopoda)的，例如千足虫(Blaniulusguttulatus)；
在一些情况下，该昆虫是昆虫纲(Insecta)的，例如，来自蜚蠊目(Blattodea)，例如，亚洲小蠊(Blattella asahinai)、德国小蠊(Blatella germanica)、东方蜚蠊(Blattaorientalis)、马德拉蜚蠊(Leucophaea maderae)、古巴蠊属物种(Panchlora spp.)、木蠊属物种(Parcoblatta spp.)、大蠊属物种(Periplaneta spp.)、或棕带蟑螂(Supellalongipalpa)。
在一些情况下，该昆虫是鞘翅目的，例如Acalymma vittatum、菜豆象(Acanthoscelides obtectus)、喙丽金龟属物种(Adoretus spp.)、Agelastica alni、叩甲属物种(Agriotes spp.)、小粉虫(Alphitobius diaperinus)、粉吹金龟子(Amphimallonsolstitialis)、家具窃蠹(Anobium punctatum)、星天牛属物种(Anoplophora spp.)、花象属物种(Anthonomus spp.)、圆皮蠹属物种(Anthrenus spp.)、长喙小象属物种(Apionspp.)、甘蔗金龟属物种(Apogonia spp.)、Atomaria属物种、毛皮蠹属物种(Attagenusspp.)、Bruchidius obtectus、豆象属物种(Bruchus spp.)、龟金花虫属物种(Cassidaspp.)、Cerotoma trifurcata、象甲属物种(Ceutorrhynchus spp.)、凹胫跳甲属物种(Chaetocnema spp.)、Cleonus mendicus、宽胸叩头虫属种(Conoderus spp.)、象甲属物种(Cosmopolites spp.)、褐新西兰肋翅鳃角金龟(Costelytra zealandica)、金针虫属物种(Ctenicera spp.)、象虫属物种(Curculio spp.)、锈赤扁谷盗(Cryptolestesferrugineus)、杨干隐喙象(Cryptorhynchus lapathi)、细枝象属物种(Cylindrocopturusspp.)、皮蠹属物种(Dermestes spp.)、条叶甲属物种(Diabrotica spp.)(例如，玉米根虫)、蛀野螟属物种(Dichocrocis spp.)、铁甲虫(Dicladispa armigera)、阿根廷小兜属物种(Diloboderus spp.)、食植瓢虫属物种(Epilachna spp.)、毛跳甲属物种(Epitrixspp.)、Faustinus属物种、裸蛛甲(Gibbium psylloides)、阔角谷盗(Gnathoceruscornutus)、菜心螟(Hellula undalis)、黑异爪庶金龟(Heteronychus arator)、寡节鲍金龟属物种(Heteronyx spp.)、Hylamorpha elegans、北美家天牛(Hylotrupes bajulus)、紫苜蓿叶象(Hypera postica)、蓝绿象(Hypomeces squamosus)、咪小蠢属物种(Hypothenemus spp.)、甘蔗大褐齿爪鳃金龟(Lachnosterna consanguinea)、烟草甲(Lasioderma serricorne)、长头谷盗(Latheticus oryzae)、Lathridius属物种、负泥虫属物种(Lema spp.)、马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)、银潜蛾属物种(Leucopteraspp.)、稻水象(Lissorhoptrus oryzophilus)、筒喙象属物种(Lixus spp.)、萤叶甲属物种(Luperodes spp.)、粉蠹属物种(Lyctus spp.)、美洲叶甲属物种(Megascelis spp.)、梳爪叩头虫属物种(Melanotus spp.)、油菜花露尾甲(Meligethes aeneus)、鳃金龟属物种(Melolontha spp.)、Migdolus属物种、墨天牛属物种(Monochamus spp.)、象甲(Naupactusxanthographus)、隐跗郭公虫属物种(Necrobia spp.)、褐蛛甲(Niptus hololeucus)、椰蛀犀金龟(Oryctes rhinoceros)、锯胸粉扁虫(Oryzaephilus surinamensis)、Oryzaphagusoryzae、耳喙象属物种(Otiorrhynchus spp.)、小青花金龟(Oxycetonia jucunda)、辣根猿叶虫(Phaedon cochleariae)、食叶鳃金龟属物种(Phyllophaga spp.)、Phyllophagahelleri、黄条跳甲属物种(Phyllotreta spp.)、日本弧丽金龟(Popillia japonica)、象甲属物种(Premnotrypes spp.)、大谷蠹(Prostephanus truncatus)、油菜金头跳甲属物种(Psylliodes spp.)、蛛甲属物种(Ptinus spp.)、暗色瓢虫(Rhizobius ventralis)、谷蠹(Rhizopertha dominica)、谷象属物种(Sitophilus spp.)、米象(Sitophilus oryzae)、尖隐喙象属物种(Sphenophorus spp.)、药材甲(Stegobium paniceum)、茎干象属物种(Sternechus spp.)、Symphyletes属物种、纤毛象属物种(Tanymecus spp.)、黄粉虫(Tenebrio molitor)、大谷盗(Tenebrioides mauretanicus)、拟谷盗属物种(Triboliumspp.)、斑皮蠹属物种(Trogoderma spp.)、籽象属物种(Tychius spp.)、脊虎天牛属物种(Xylotrechus spp.)、或距步甲属物种(Zabrus spp.)；
在一些情况下，该昆虫是双翅目的，例如伊蚊属物种(Aedes spp.)、潜蝇属物种(Agromyza spp.)、按实蝇属物种(Anastrepha spp.)、按蚊属物种(Anopheles spp.)、瘿蚊属物种(Asphondylia spp.)、实蝇属物种(Bactrocera spp.)、花园毛蚊(Bibiohortulanus)、天青丽蝇(Calliphora erythrocephala)、红头丽蝇(Calliphora vicina)、地中海实蝇(Ceratitis capitata)、摇蚊属物种(Chironomus spp.)、金蝇属物种(Chrysomyia spp.)、斑虻属物种(Chrysops spp.)、高额麻虻(Chrysozona pluvialis)、锥蝇属物种(Cochliomyia spp.)、康瘿蚊属物种(Contarinia spp.)、人皮蝇(Cordylobiaanthropophaga)、稻环摇蚊(Cricotopus sylvestris)、库蚊属物种(Culex spp.)、库蠓属物种(Culicoides spp.)、脉毛蚊属物种(Culiseta spp.)、黄蝇属物种(Cuterebra spp.)、橄榄大实蝇(Dacus oleae)、叶瘿蚊属物种(Dasyneura spp.)、地种蝇属物种(Deliaspp.)、人肤蝇(Dermatobia hominis)、果蝇属物种(Drosophila spp.)、果蝇属物种(Echinocnemus spp.)、厕蝇属物种(Fannia spp.)、胃蝇属物种(Gasterophilus spp.)、舌蝇属物种(Glossina spp.)、麻虻属物种(Haematopota spp.)、毛眼水蝇属物种(Hydrelliaspp.)、大麦毛眼水蝇(Hydrellia griseola)、黑蝇属物种(Hylemya spp.)、虱蝇属物种(Hippobosca spp.)、皮蝇属物种(Hypoderma spp.)、斑潜蝇属物种(Liriomyza spp.)、绿蝇属物种(Lucilia spp.)、Lutzomyia属物种、曼蚊属物种(Mansonia spp.)、家蝇属物种(Musca spp.)(例如，Musca domestica)、狂蝇属物种(Oestrus spp.)、瑞典麦秆蝇(Oscinella frit)、Paratanytarsus属物种、Paralauterborniella subcincta、泉蝇属物种(Pegomyia spp.)、白蛉属物种(Phlebotomus spp.)、草种蝇属物种(Phorbia spp.)、草种蝇属物种(Phormia spp.)、酪蝇(Piophila casei)、Prodiplosis属物种、胡萝卜茎蝇(Psila rosae)、绕实蝇属物种(Rhagoletis spp.)、麻蝇属物种(Sarcophaga spp.)、蚋属物种(Simulium spp.)、螫蝇属物种(Stomoxys spp.)、虻属物种(Tabanus spp.)、根斑蝇属物种(Tetanops spp.)、或大蚊属物种(Tipula spp.)。
在一些情况下，该昆虫是异翅目的，例如蛛缘蝽科(Alydidae)、南瓜缘蝽(Anasatristis)、拟丽蝽属物种(Antestiopsis spp.)、Boisea属物种、土长蝽属物种(Blissusspp.)、俊盲蝽属物种(Calocoris spp.)、斑腿微剌盲蝽(Campylomma livida)、异背长蝽属物种(Cavelerius spp.)、臭虫属物种(Cimex spp.)、白辧麦寄蝇属物种(Collaria spp.)、绿盲蝽(Creontiades dilutus)、胡椒缘蝽(Dasynus piperis)、Dichelops furcatus、厚氏长棒网蝽(Diconocoris hewetti)、棉红蝽属物种(Dysdercus spp.)、美洲蝽属物种(Euschistus spp.)、扁盾蝽属物种(Eurygaster spp.)、刺盲蝽属物种(Heliopeltisspp.)、Horcias nobilellus、稻缘蝽属物种(Leptocorisa spp.)、异稻缘蝽(Leptocorisavaricornis)、叶喙缘蝽(Leptoglossus phyllopus)、草盲蝽属物种(Lygus spp.)、蔗黑长蝽(Macropes excavatus)、盲蝽科(Miridae)、金光绿盲蝽(Monalonion atratum)、绿蝽属物种(Nezara spp.)、稻蝽属物种(Oebalus spp.)、蝽科(Pentatomidae)、方背皮蝽(Piesmaquadrata)、壁蝽属物种(Piezodorus spp.)、杂盲蝽属物种(Psallus spp.)、Pseudacystapersea、红猎蝽属物种(Rhodnius spp.)、可可褐盲蝽(Sahlbergella singularis)、Scaptocoris castanea、黑蝽属物种(Scotinophora spp.)、梨冠网蝽(Stephanitisnashi)、Tibraca属物种、或锥猎蝽属物种(Triatoma spp.)。
在一些情况下，该昆虫是同翅目的，例如Acizzia acaciaebaileyanae、Acizziadodonaeae、Acizzia uncatoides、长头蝗(Acrida turrita)、无网长管蚜属物种(Acyrthosipon spp.)、Acrogonia属物种、Aeneolamia属物种、隆脉木虱属物种(Agonoscena spp.)、甘蓝粉虱(Aleyrodes proletella)、甘蔗穴粉虱(Aleurolobusbarodensis)、丝绒粉虱(Aleurothrixus floccosus)、植莲木虱(Allocaridaramalayensis)、杧果叶蝉属物种(Amrasca spp.)、飞廉短尾蚜(Anuraphis cardui)、肾圆盾蚧属物种(Aonidiella spp.)、苏联黄粉蚜(Aphanostigma pini)、蚜属物种(Aphis spp.)(例如，Apis gossypii)、葡萄叶蝉(Arboridia apicalis)、Arytainilla属物种、小圆盾蚧属物种(Aspidiella spp.)、圆盾蚧属物种(Aspidiotus spp.)、Atanus属物种、茄沟无网蚜(Aulacorthum solani)、烟草粉虱(Bemisia tabaci)、Blastopsylla occidentalis、Boreioglycaspis melaleucae、李短尾蚜(Brachycaudus helichrysi)、Brachycolus属物种、甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)、Cacopsylla属物种、小褐稻虱(Calligyponamarginata)、黄头大叶蝉(Carneocephala fulgida)、甘蔗粉角蚜(Ceratovacunalanigera)、沫蝉科(Cercopidae)、蜡蚧属物种(Ceroplastes spp.)、草莓钉蚜(Chaetosiphon fragaefolii)、蔗黄雪盾蚧(Chionaspis tegalensis)、茶绿叶蝉(Chlorita onukii)、棉蝗(Chondracris rosea)、核桃黑斑蚜(Chromaphisjuglandicola)、黑褐圆盾蚧(Chrysomphalus ficus)、玉米叶蝉(Cicadulina mbila)、Coccomytilus halli、软蚧属物种(Coccus spp.)、茶藨隐瘤蚜(Cryptomyzus ribis)、Cryptoneossa属物种、Ctenarytaina属物种、Dalbulus属物种、柑橘粉虱(Dialeurodescitri)、柑桔木虱(Diaphorina citri)、白背盾蚧属物种(Diaspis spp.)、履绵蚧属物种(Drosicha spp.)、西圆尾蚜属物种(Dysaphis spp.)、灰粉蚧属物种(Dysmicoccus spp.)、小绿叶蝉属物种(Empoasca spp.)、绵蚜属物种(Eriosoma spp.)、斑叶蝉属物种(Erythroneura spp.)、Eucalyptolyma属物种、褐木虱属物种(Euphyllura spp.)、殃叶蝉(Euscelis bilobatus)、拂粉蚧属物种(Ferrisia spp.)、咖啡地粉蚧(Geococcuscoffeae)、Glycaspis属物种、银合欢木虱(Heteropsylla cubana)、棘状异木虱(Heteropsylla spinulosa)、假桃病毒叶蝉(Homalodisca coagulata)、翅尖头叶蝉(Homalodisca vitripennis)、梅大尾蚜(Hyalopterus arundinis)、吹绵蚧属物种(Iceryaspp.)、片角叶蝉属物种(Idiocerus spp.)、扁喙叶蝉属物种(Idioscopus spp.)、灰飞虱(Laodelphax striatellus)、Lecanium属物种、蛎盾蚧属物种(Lepidosaphes spp.)、萝卜蚜(Lipaphis erysimi)、长管蚜属物种(Macrosiphum spp.)、二点叶蜂(Macrostelesfacifrons)、Mahanarva属物种、高粱蚜(Melanaphis sacchari)、Metcalfiella属物种、麦无网蚜(Metopolophium dirhodum)、黑缘平翅斑蚜(Monellia costalis)、Monelliopsispecanis、瘤蚜属物种(Myzus spp.)、莴苣衲长管蚜(Nasonovia ribisnigri)、黑尾叶蝉属物种(Nephotettix spp.)、Nettigoniclla spectra、褐飞虱(Nilaparvata lugens)、Oncometopia属物种、普来隆旌蚧(Orthezia praelonga)、中华稻蝗(Oxya chinensis)、Pachypsylla属物种、杨梅缘粉虱(Parabemisia myricae)、Paratrioza属物种、片盾蚧属物种(Parlatoria spp.)、片盾蚧属物种(Pemphigus spp.)、玉米蜡蝉(Peregrinus maidis)、绵粉蚧属物种(Phenacoccus spp.)、杨平翅绵蚜(Phloeomyzus passerinii)、忽布疣蚜(Phorodon humuli)、葡萄根瘤蚜属物种(Phylloxera spp.)、苏铁褐点并盾蚧(Pinnaspisaspidistrae)、臀纹粉蚧属物种(Planococcus spp.)、Prosopidopsylla flava、梨形原绵蚧(Protopulvinaria pyriformis)、桑白盾蚧(Pseudaulacaspis pentagona)、粉蚧属物种(Pseudococcus spp.)、Psyllopsis属物种、木虱属物种(Psylla spp.)、金小蜂属物种(Pteromalus spp.)、Pyrilla属物种、笠圆盾蚧属物种(Quadraspidiotus spp.)、Quesadagigas、平刺粉蚧属物种(Rastrococcus spp.)、缢管蚜属物种(Rhopalosiphum spp.)、黑盔蚧属物种(Saissetia spp.)、葡萄带叶蝉(Scaphoideus titanus)、麦二叉蚜(Schizaphisgraminum)、苏铁刺圆盾蚧(Selenaspidus articulatus)、长唇基飞虱属物种(Sogataspp.)、白背飞虱(Sogatella furcifera)、Sogatodes属物种、三角蝶(Stictocephalafestina)、梣粉虱(Siphoninus phillyreae)、Tenalaphara malayensis、台诺非拉属物种(Tetragonocephela spp.)、美国核桃黑蚜(Tinocallis caryaefoliae)、广胸沫蝉属物种(Tomaspis spp.)、声蚜属物种(Toxoptera spp.)、温室白粉虱(Trialeurodesvaporariorum)、木虱属物种(Trioza spp.)、小叶蝉属物种(Typhlocyba spp.)、尖盾蚧属物种(Unaspis spp.)、葡萄根瘤虱(Viteus vitifolii)、或么叶蝉属物种(Zygina spp.)。
在一些情况下，该昆虫是膜翅目的，例如顶切叶蚁属物种(Acromyrmex spp.)、菜叶蜂属物种(Athalia spp.)、切叶蚁属物种(Atta spp.)、松叶蜂属物种(Diprion spp.)、实叶蜂属物种(Hoplocampa spp.)、毛蚁属物种(Lasius spp.)、小黄家蚁(Monomoriumpharaonis)、树蜂属物种(Sirex spp.)、入侵红火蚁(Solenopsis invicta)、酸臭蚁属物种(Tapinoma spp.)、大树蜂属物种(Urocerus spp.)、胡蜂属物种(Vespa spp.)、或黑树蜂属物种(Xeris spp.)。
在一些情况下，该昆虫是等足目(Isopoda)的，例如，鼠妇(Armadillidiumvulgare)、栉水虱潮虫(Oniscus asellus)、或球鼠妇(Porcellio scaber)。
在一些情况下，该昆虫是等翅目(Isoptera)的，例如，乳白蚁属物种(Contariniaspp.)、堆角象白蚁(Cornitermes cumulans)、堆砂白蚁属物种(Cryptotermes spp.)、楹白蚁属物种(Incisitermes spp.)、稻麦小白蚁(Microtermes obesi)、土白蚁属物种(Odontotermes spp.)、或散白蚁属物种(Reticulitermes spp)。
在一些情况下，该昆虫是鳞翅目的，例如小蜡螟(Achroia grisella)、桑剑纹夜蛾(Acronicta major)、褐带卷蛾属物种(Adoxophyes spp.)、白纹伊蚊(Aedia leucomelas)、地夜蛾属物种(Agrotis spp.)、阿拉巴马属物种(Alabama spp.)、脐橙螟(Amyeloistransitella)、条麦蛾属物种(Anarsia spp.)、干煞夜蛾属物种(Anticarsia spp.)、Argyroploce属物种、甘蓝夜蛾(Barathra brassicae)、禾弄蝶(Borbo cinnara)、棉潜蛾(Bucculatrix thurberiella)、松尺蠖(Bupalus piniarius)、干夜蛾属物种(Busseolaspp.)、Cacoecia属物种、茶细蛾(Caloptilia theivora)、烟卷蛾(Capua reticulana)、苹果蠹蛾(Carpocapsa pomonella)、桃小食心虫(Carposina niponensis)、冬尺蛾(Cheimatobia brumata)、禾草螟属物种(Chilo spp.)、卷蛾属物种(Choristoneuraspp.)、葡萄果蠹蛾(Clysia ambiguella)、Cnaphalocerus属物种、稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)、云卷蛾属物种(Cnephasia spp.)、蒂蛀虫属物种(Conopomorpha spp.)、球颈象属物种(Conotrachelus spp.)、Copitarsia属物种、小卷蛾属物种(Cydia spp.)、Dalaca noctuides、绢野螟属物种(Diaphania spp.)、蔗螟(Diatraea saccharalis)、钻夜蛾属物种(Earias spp.)、Ecdytolopha aurantium、Elasmopalpus lignosellus、甘薯杆螟(Eldana saccharina)、粉斑螟属物种(Ephestiaspp.)、叶小卷蛾属物种(Epinotia spp.)、苹果褐卷蛾(Epiphyas postvittana)、荚斑螟属物种(Etiella spp.)、Eulia属物种、女贞细卷蛾(Eupoecilia ambiguella)、毒蛾属物种(Euproctis spp.)、切夜蛾属物种(Euxoa spp.)、脏切叶蛾属物种(Feltia spp.)、大蜡螟(Galleria mellonella)、细蛾属物种(Gracillaria spp.)、小食心虫属物种(Grapholithaspp.)、甘蔗螟属物种(Hedylepta spp.)、铃夜蛾属物种(Helicoverpa spp.)、实夜蛾属物种(Heliothis spp.)、褐家蛾(Hofmannophila pseudospretella)、同斑螟属物种(Homoeosoma spp.)、长卷蛾属物种(Homona spp.)、苹果巢蛾(Hyponomeuta padella)、柿举肢蛾(Kakivoria flavofasciata)、夜蛾属物种(Laphygma spp.)、梨小食心虫(Laspeyresia molesta)、茄黄斑螟(Leucinodes orbonalis)、银潜蛾属物种(Leucopteraspp.)、紫藤潜叶细蛾属物种(Lithocolletis spp.)、绿果冬夜蛾(Lithophaneantennata)、花翅小蛾属物种(Lobesia spp.)、豆白隆切根虫(Loxagrotis albicosta)、毒蛾属物种(Lymantria spp.)、潜蛾属物种(Lyonetia spp.)、天幕毛虫(Malacosomaneustria)、豆荚野螟(Maruca testulalis)、甘蓝夜蛾(Mamstra brassicae)、稻暮眼蝶(Melanitis leda)、毛胫夜蛾属物种(Mocis spp.)、Monopis obviella、粘虫(Mythimnaseparata)、橡长角蛾(Nemapogon cloacellus)、水螟属物种(Nymphula spp.)、Oiketicus属物种、Oria属物种、瘤丛螟属物种(Orthaga spp.)、秆野螟属物种(Ostrinia spp.)、负泥虫(Oulema oryzae)、小眼夜蛾(Panolis flammea)、稻弄蝶属物种(Parnara spp.)、红铃虫属物种(Pectinophora spp.)、潜叶蛾属物种(Perileucoptera spp.)、茄麦蛾属物种(Phthorimaea spp.)、柑橘潜叶蛾(Phyllocnistis citrella)、小潜细蛾属物种(Phyllonorycter spp.)、粉蝶属物种(Pieris spp.)、荷兰石竹小卷蛾(Platynotastultana)、印度谷螟(Plodia interpunctella)、金翅夜蛾属物种(Plusia spp.)、小菜蛾(Plutella xylostella)、小白巢蛾属物种(Prays spp.)、斜纹夜蛾属物种(Prodeniaspp.)、烟草天蛾属物种(Protoparce spp.)、拟粘液蛾属物种(Pseudaletia spp.)、一星黏虫(Pseudaletia unipuncta)、大豆夜蛾(Pseudoplusia includens)、玉米螟(Pyraustanubilalis)、Rachiplusia nu、禾螟属物种(Schoenobius spp.)、白禾螟属物种(Scirpophaga spp.)、稻白螟(Scirpophaga innotata)、Scotia segetum、蛀茎夜蛾属物种(Sesamia spp.)、大螟(Sesamia inferens)、长须卷蛾属物种(Sparganothis spp.)、夜蛾属物种(Spodoptera spp.)、Spodoptera praefica、展足蛾属物种(Stathmopoda spp.)、花生麦蛾(Stomopteryx subsecivella)、透翅蛾属物种(Synanthedon spp.)、安第斯马铃薯块茎蛾(Tecia solanivora)、Thermesia gemmatalis、木塞谷蛾(Tinea cloacella)、袋谷蛾(Tinea pellionella)、幕谷蛾(Tineola bisselliella)、卷叶蛾属物种(Tortrixspp.)、毛毡衣蛾(Trichophaga tapetzella)、粉夜蛾属物种(Trichoplusia spp.)、三化螟(Tryporyza incertulas)、番茄斑潜蝇(Tuta absoluta)、或灰蝶属物种(Viracholaspp.)。
在一些情况下，该昆虫是直翅目或跳跃目(Saltatoria)的，例如，家蟋蟀(Achetadomesticus)、Dichroplus属物种、蝼蛄属物种(Gryllotalpa spp.)、蔗蝗属物种(Hieroglyphus spp.)、飞蝗属物种(Locusta spp.)、黑蝗属物种(Melanoplus spp.)、或Schistocerca gregaria。
在一些情况下，该昆虫是虱目(Phthiraptera)的，例如，毛虱属物种(Damaliniaspp.)、血虱属物种(Haematopinus spp.)、毛虱属物种(Linognathus spp.)、虱属物种(Pediculus spp.)、阴虱(Ptirus pubis)、毛虱属物种(Trichodectes spp.)。
在一些情况下，该昆虫是啮虫目的，例如，Lepinatus属物种、或书虱属物种(Liposcelis spp)。
在一些情况下，该昆虫是蚤目的，例如，角叶蚤属物种(Ceratophyllus spp.)、栉首蚤属物种(Ctenocephalides spp.)、致痒蚤(Pulex irritans)、穿皮潜蚤(Tungapenetrans)、或印度客虱(Xenopsylla cheopsis)。
在一些情况下，该昆虫是缨翅目的，例如玉米黄呆蓟马(Anaphothripsobscurus)、稻蓟马(Baliothrips biformis)、鲜食葡萄镰蓟马(Drepanothrips reuteri)、Enneothrips flavens、花蓟马属物种(Frankliniella spp.)、阳蓟马属物种(Heliothripsspp.)、温室条蓟马(Hercinothrips femoralis)、腹钩蓟马(Rhipiphorothripscruentatus)、硬蓟马属物种(Scirtothrips spp.)、Taeniothrips cardamomi、或蓟马属物种(Thrips spp)。
在一些情况下，该昆虫是衣鱼目(Zygentoma)(＝缨尾目)的，例如毛衣鱼属物种(Ctenolepisma spp.)、家衣鱼(Lepisma saccharina)、盗火虫(Lepismodes inquilinus)、或小灶衣鱼(Thermobia domestica)。
在一些情况下，该昆虫是综合纲(Symphyla)的，例如小幺蚰属物种(Scutigerellaspp)。
在一些情况下，该昆虫是螨，包括但不限于跗线螨，诸如Phytonemus pallidus、侧多食跗线螨(Polyphagotarsonemus latus)、Tarsonemus bilobatus等；真足螨，诸如白菜螨(Penthaleus erythrocephalus)、叶爪螨(Penthaleus major)等；叶螨，诸如真梶小爪螨(Oligonychus shinkaji)、桔全爪螨(Panonychus citri)、桑全爪螨(Panonychus mori)、苹果全爪螨(Panonychus ulmi)、神泽氏叶螨(Tetranychus kanzawai)、二斑叶螨(Tetranychus urticae)等；瘿螨，诸如茶尖叶节蜱(Acaphylla theavagrans)、曲瘿螨(Aceria tulipae)、番茄刺皮瘿螨(Aculops lycopersici)、皮氏刺皮瘿螨(Aculopspelekassi)、苹果刺锈螨(Aculus schlechtendali)、Eriophyes chibaensis、柑橘锈螨(Phyllocoptruta oleivora)等；粉螨，诸如罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)、腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)、三叶螨(Tyrophagus similis)等；蜂窝螨，诸如大蜂螨(Varroa jacobsoni)、狄斯瓦螨(Varroa destructor)等；蜱亚目，诸如微小牛蜱(Boophilus microplus)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)、长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)、褐黄血蜱(Haemophysalis flava)、铃头血蜱(Haemophysalis campanulata)、卵形硬蜱(Ixodes ovatus)、全沟硬蜱(Ixodespersulcatus)、花蜱属物种(Amblyomma spp.)、革蜱属物种(Dermacentor spp.)等；肉食螨科(Cheyletidae)，诸如牙氏姬螯螨(Cheyletiella yasguri)、布氏姬螯螨(Cheyletiellablakei)等；蠕形螨科(Demodicidae)，诸如犬蠕形螨(Demodex canis)、猫蠕形螨(Demodexcati)等；痒螨科(Psoroptidae)，诸如羊痒螨(Psoroptes ovis)等；Scarcoptidae，诸如人疥螨(Sarcoptes scabiei)、猫耳螨(Notoedres cati)、膝螨属物种(Knemidocoptes spp.)等。
在某些情况下，该昆虫是豆虫(例如，蜂缘蝽属物种(Riptortus sp.)，例如，点蜂缘蝽(Riptortus pedestris))。在一些情况下，该昆虫是椿象，例如，椿科的成员，例如，茶翅蝽属物种(例如，茶翅蝽
Figure BDA0002958262120000231
)、绿椿属物种(例如，稻绿鋳(Nezara viridula))、稻蝽属物种(例如，美洲稻蝽(Oebalus pugnax))、Chinavia物种(例如，Chinavia hilaris)、龟象属物种(例如，Euthyrhynchus floridanus)、美洲椿属物种(例如，褐臭蝽(Euschistusservus))、Alcaeorrhynchus物种(例如，Alcaeorrhynchus grandis)、或刺益蝽属物种。在某些情况下，椿象是棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120000232
)。
本文提供的方法和组合物还可以与任何以下昆虫宿主一起使用，该昆虫宿主被认为是针对能够导致动物疾病的病原体的媒介。
例如，该昆虫宿主可以包括但不限于：具有刺吸式口器的那些昆虫，如在半翅目和一些膜翅目以及双翅目中发现的昆虫，如蚊子、蜜蜂、黄蜂、蠓、虱子、采采蝇、跳蚤以及蚁，连同蛛形纲动物(如蜱和螨)的成员；以下的目、纲或科：蜱螨目(蜱和螨)，例如隐喙蜱科(Argasidae)、皮刺螨科(Dermanyssidae)、硬蜱科(Ixodidae)、痒螨科(Psoroptidae)或疥螨科(Sarcoptidae)的代表，以及花蜱属物种(Amblyomma spp.)、Anocenton属物种(Anocenton spp.)、锐缘蜱属物种(Argas spp.)、牛蜱属物种(Boophilus spp.)、姬螯螨属物种(Cheyletiella spp.)、足螨属物种(Chorioptes spp.)、蠕形螨属物种(Demodexspp.)、革蜱属物种(Dermacentor spp.)、Denmanyssus属物种(Denmanyssus spp.)、血蜱属物种(Haemophysalis spp.)、璃眼蜱属物种(Hyalomma spp.)、硬蜱属物种(Ixodes spp.)、Lynxacarus属物种(Lynxacarus spp.)、中气门目属物种(Mesostigmata spp.)、耳螨属物种(Notoednes spp.)、钝缘蜱属物种(Ornithodoros spp.)、禽刺螨属物种(Ornithonyssusspp.)、残喙蜱属物种(Otobius spp.)、耳痒螨属物种(otodectes spp.)、肺刺螨属物种(Pneumonyssus spp.)、螨属物种(Psoroptes spp.)、扇头蜱属物种(Rhipicephalusspp.)、疥螨科疥螨属物种(Sancoptes spp.)、或恙螨属物种(Trombicula spp.)的代表；虱目(Anoplura)(吸虱(sucking lice)和咬虱(biting lice))，例如牛虱属物种(Bovicolaspp.)、血虱属物种(Haematopinus spp.)、毛虱属物种(Linognathus spp.)、禽羽虱属物种(Menopon spp.)、虱属物种(Pediculus spp.)、天疱疮属物种(Pemphigus spp.)、根瘤蚜属物种(Phylloxera spp.)、或管虱属物种(Solenopotes spp.)的代表；双翅目(Diptera)(蝇)，例如伊蚊属物种(Aedes spp.)、按蚊属物种(Anopheles spp.)、丽蝇属物种(Calliphora spp.)、金蝇属物种(Chrysomyia spp.)、斑虻属物种(Chrysops spp.)、锥蝇属物种(Cochliomyia spp.)、Cw/ex属物种(Cw/ex spp.)、库蠓属物种(Culicoides spp.)、黄蝇属物种(Cuterebra spp.)、皮蝇属物种(Dermatobia spp.)、胃蝇属物种(Gastrophilus spp.)、舌蝇属物种(Glossina spp.)、血蝇属物种(Haematobia spp.)、麻虻属物种(Haematopota spp.)、虱蝇属物种(Hippobosca spp.)、牛皮蝇属物种(Hypodermaspp.)、绿蝇属物种(Lucilia spp.)、角蝇属物种(Lyperosia spp.)、蜱蝇属物种(Melophagus spp.)、狂蝇属物种(Oestrus spp.)、绿蝇属物种(Phaenicia spp.)、白蛉属物种(Phlebotomus spp.)、伏蝇属物种(Phormia spp.)、壁虱(Acari)(犬疥螨(sarcopticmange)，例如，疥螨科属物种(Sarcoptidae spp.)、麻蝇属物种(Sarcophaga spp.)、蚋属物种(Simulium spp.)、螫蝇属物种(Stomoxys spp.)、虻属物种(Tabanus spp.)、螗蜩属物种(Tannia spp.)、或Zzpu/alpha属物种(Zzpu/alpha spp.)的代表；食毛目(Mallophaga)(咬虱(biting lice)，例如，Damalina属物种(Damalina spp.)、猫羽虱属物种(Felicolaspp.)、袋鼠虱属物种(Heterodoxus spp.)、或毛虱属物种(Trichodectes spp.)的代表；或者蚤目(Siphonaptera)(无翅昆虫)，例如，角叶蚤属物种(Ceratophyllus spp.)、客蚤属物种(Xenopsylla spp)的代表；臭虫科(Cimicidae)(椿象)，例如，臭虫属物种(Cimex spp.)、Tritominae属物种(Tritominae spp.)、Rhodinius属物种(Rhodinius spp.)、或锥蝽属物种(Triatoma spp.)的代表。
在一些情况下，该昆虫是来自双翅目(例如，长角亚目(Nematocera)，例如，Colicidae科)的吸血昆虫(blood-sucking insect)。在一些情况下，该昆虫来自蚊亚科(Culicinae)、短咀蚊亚科(Corethrinae)、蠓科(Ceratopogonidae)、或蚋科(Simuliidae)。在一些情况下，该昆虫属于库蚊属物种(Culex spp.)、赛保蚊属物种(Theobaldia spp.)、伊蚊属物种(Aedes spp.)、按蚊属物种(Anopheles spp.)、伊蚊属物种(Aedes spp.)、Forciponiyia属物种(Forciponiyia spp.)、库蠓属物种(Culicoides spp.)、或Helea属物种(Helea spp.)。在某些情况下，该昆虫是蚊子。在某些情况下，该昆虫是蜱。在某些情况下，该昆虫是螨。在某些情况下，该昆虫是咬虱(biting louse)。
可替代地，该昆虫可以是有益的昆虫，如植物授粉者、有害生物的天然竞争者、或对人类或动物有用的物质的生产者。术语“有益的昆虫”是指赋予人类、动物、生态系统、和/或环境益处(例如，经济的和/或生态的益处)的昆虫。例如，该昆虫可以是参与商业产品的生产的昆虫，包括但不限于培育以生产食物(例如，来自蜜蜂(例如，西方蜜蜂(Apismellifera))的蜂蜜)、材料(例如，来自家蚕(Bombyx mori)的蚕丝)、和/或物质(例如，来自紫胶虫(Laccifer lacca)的虫胶或来自胭脂虫和瘿蜂科(Cynipidae)的颜料)的昆虫。在一些情况下，可以收获昆虫，或者收获昆虫的一个或多个部分，并且将其进行处理以用于制造可消耗产品(包括对于人类或动物消耗(例如，摄取)来说是安全的任何产品)。另外地，该昆虫可以包括在农业应用中使用的昆虫(包括有助于作物的授粉、传播种子或有害生物控制的昆虫)。此外，在一些情况下，该昆虫可以是对废物处理和/或有机再循环有用的昆虫(例如，蚯蚓、白蚁、或双翅目幼虫)。该昆虫可以是具有其天然(即，未经改变的)微生物群的昆虫。可替代地，该昆虫可以是在递送细菌定殖破坏剂之前或期间已经接收益生菌组合物的昆虫。
在一些情况下，该昆虫能以完整的形式(例如，作为完整的、未经加工的昆虫)作为可消耗产品收获和分布。在一些情况下，该完整的收获的昆虫被加工(例如，研磨)并作为可消耗产品分布。可替代地，可以从该昆虫中提取该昆虫的一个或多个部分(例如，一个或多个身体部分或一种或多种物质)用于制造可消费产品。在一些情况下，该昆虫可以是蛾、蝴蝶、蝇、蟋蟀、蚱蜢、蝗虫、蜘蛛、或甲虫。在一些情况下，基于昆虫物种的天然营养特征或营养物含量，对其进行选择。营养物的实例包括维生素、碳水化合物类、氨基酸、多肽、或脂肪酸。
在一些情况下，该昆虫产生可用的产物(例如，蜂蜜、蚕丝、蜂蜡、或虫胶)。在一些情况下，该昆虫是蜂。示例性的蜂属包括但不限于蜜蜂属(Apis)、熊蜂属(Bombus)、无刺蜂属(Trigona)、和壁蜂属(Osmia)。在一些情况下，该蜂是蜜蜂(例如，属于蜜蜂属的昆虫)。在一些情况下，该蜂是以下物种：西方蜜蜂(Apis mellifera)(欧洲蜜蜂或西方蜜蜂)、中华蜜蜂(Apis cerana)(亚洲、东方或喜马拉雅蜜蜂)、排蜂(Apis dorsata)(“巨型”蜜蜂)、云南小蜜蜂(Apis florea)(“红矮”蜜蜂)、黑小蜜蜂(Apis andreniformis)(“黑矮”蜜蜂)、或苏拉威西蜂(Apis nigrocincta)。在一些情况下，该昆虫是蚕。该蚕可以是蚕蛾科(Bombycidae)或天蚕蛾科(Saturniidae)中的物种。在一些情况下，该蚕是家蚕(Bombyxmori)。在一些情况下，该昆虫是紫胶虫。紫胶虫是胶介壳虫科(Kerriidae)的物种。在一些情况下，紫胶虫是紫胶蚧(Kerria lacca)。
在一些情况下，该昆虫有助于植物授粉(例如，蜂、甲虫、黄蜂、蝇、蝴蝶或蛾)。在一些实例中，有助于植物授粉的昆虫是甲虫。在一些情况下，该甲虫是以下科中的物种：吉丁虫科(Buprestidae)、花萤科(Cantharidae)、天牛科(Cerambycidae)、叶甲科(Chrysomelidae)、郭公虫科(Cleridae)、瓢虫科(Coccinellidae)、叩甲科(Elateridae)、长朽木甲科(Melandryidae)、芫菁科(Meloidae)、拟花萤科(Melyridae)、花蚤科(Mordellidae)、露尾甲科(Nitidulidae)、拟天牛科(Oedemeridae)、金龟子科(Scarabaeidae)、或隐翅虫科(Staphyllinidae)。在一些情况下，有助于植物授粉的昆虫是蝴蝶或蛾(例如，鳞翅目)。在一些情况下，蝴蝶或蛾是以下科中的物种：尺蛾科(Geometridae)、蝶科(Hesperiidae)、灰蝶科(Lycaenidae)、夜蛾科(Noctuidae)、蛱蝶科(Nymphalidae)、凤蝶科(Papilionidae)、粉蝶科(Pieridae)、或天蛾科(Sphingidae)。在一些情况下，有助于植物授粉的昆虫是蝇(例如，双翅目)。在一些情况下，该蝇属于以下科：花蝇科(Anthomyiidae)、毛蚊科(Bibionidae)、蜂虻科(Bombyliidae)、丽蝇科(Calliphoridae)、瘿蚊科(Cecidomiidae)、Certopogonidae、Chrionomidae、眼蝇科(Conopidae)、蚊科(Culicidae)、长足虻科(Dolichopodidae)、舞虻科(Empididae)、水蝇科(Ephydridae)、尖翅蝇科(Lonchopteridae)、蝇科(Muscidae)、菌蚊科(Mycetophilidae)、蚤蝇科(Phoridae)、蚋科(Simuliidae)、水虻科(Stratiomyidae)、或食蚜蝇科(Syrphidae)。在一些情况下，有助于授粉的昆虫是蚂蚁(例如，蚁科(Formicidae))、叶蜂(例如，叶蜂科(Tenthredinidae))、或黄蜂(wasp)(例如，泥蜂科(Sphecidae)或胡蜂科(Vespidae))。在一些情况下，有助于植物授粉的昆虫是蜂。在一些情况下，该蜂属于以下科：地花蜂科(Andrenidae)、蜜蜂科(Apidae)、分舌花蜂科(Colletidae)、隧蜂科(Halictidae)、或切叶蜂科(Megachilidae)。
在一些情况下，该昆虫有助于有害生物控制。例如，有助于有害生物控制的昆虫可以是属于以下科的物种：小茧蜂科(Braconidae)(例如，寄生蜂)、步行虫科(Carabidae)(例如，土鳖虫)、草蛉科(Chrysopidae)(例如，草蛉)、瓢虫科(Coccinellidae)(例如，瓢虫)、褐蛉科(Hemerobiidae)(例如，褐蛉)、姬蜂科(Ichneumonidae)(例如，姬蜂)、萤科(Lampyridae)(例如，萤火虫)、螳螂科(Mantidae)(例如，螳螂)、蚁蛉科(Myrmeleontidae)(例如，蚁狮)、蜻蜓目(Odonata)(例如，蜻蜓和豆娘)、或食蚜蝇科(Syrphidae)(例如，食蚜虻)。在其他情况下，有助于有害生物控制的昆虫是与被认为是有害生物(例如，农业有害生物)的昆虫竞争的昆虫。例如，地中海实蝇(Mediterranean fruit fly，Ceratitiscapitata)是世界上的水果和蔬菜的常见有害生物。控制头状虫草(C.captitata)的一种方法是将绝育的雄性昆虫释放到环境中以与野生雄性竞争与雌性交配。在这些情况下，昆虫可以是属于通常被认为是有害生物的物种的绝育雄性。
在一些情况下，该昆虫有助于废物或有机材料降解。在一些实例中，有助于降解废物或有机材料的昆虫属于鞘翅目或双翅目。在一些情况下，属于双翅目的昆虫属于以下科：丽蝇科(Calliphoridae)、拟果蝇科(Curtonotidae)、果蝇科(Drosophilidae)、厕蝇科(Fanniidae)、日蝇科(Heleomyzidae)、叶蝇科(Milichiidae)、蝇科(Muscidae)、蚤蝇科(Phoridae)、毛蠓科(Psychodidae)、粪蚊科(Scatopsidae)、鼓翅绳科(Sepsidae)、小粪蝇科(Sphaeroceridae)、水虻科(Stratiomyidae)、食蚜蝇科(Syrphidae)、实蝇科(Tephritidae)、或小金蝇科(Ulidiidae)。在一些情况下，属于鞘翅目的昆虫属于以下科：步行虫科(Carabidae)、水龟虫科(Hydrophilidae)、姬花甲科(Phalacaridae)、缨甲科(Ptiliidae)、或隐翅虫科(Staphylinidae)。
在具体情况下，本文披露的细菌定殖破坏剂可用于提高蜜蜂的适应度。
ii.减少昆虫适应度
在细菌定殖破坏剂破坏对昆虫有益的细菌的定殖的情况下，本发明方法有效减少昆虫的适应度。例如，可以使如本文所述的细菌定殖破坏剂以一定量和一定时间与昆虫接触，该量和时间足以：(a)达到目标昆虫(例如，肠内，或其细胞(例如，含菌细胞)或器官(例如，怀菌体或隐窝)内)内的浓度的目标水平(例如，预定或阈值水平)；以及(b)减少目标昆虫的适应度。作为施用细菌定殖破坏剂的结果，昆虫适应度的减少可以显现为昆虫生理学的恶化或下降(例如，如通过存活测量的)。昆虫的适应度可通过一种或多种参数来测量，这些参数包括但不限于相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫的繁殖速率、寿命、移动性、繁殖力、体重、代谢速率或活动、或存活。
例如，本文提供的方法或组合物可以有效地降低昆虫的总体健康或降低昆虫的总体存活。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，昆虫的存活降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，这些方法和组合物有效减少昆虫繁殖(例如，繁殖速率)。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，这些方法和组合物可有效使其他的生理参数(如迁移、体重、寿命、繁殖力、或代谢速率)降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的减少可以显现为该昆虫中一种或多种营养物(例如，维生素、碳水化合物类、氨基酸、或多肽)产量的降低。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫中的营养物(例如，维生素、碳水化合物类、氨基酸、或多肽)的产量降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可通过降低由昆虫中的一种或多种微生物(例如，内共生体)产生的营养物的产量来降低昆虫中的营养物。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的减少可以显现为昆虫对杀有害生物剂的敏感性的增加和/或昆虫对杀有害生物剂的抗性的降低。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对杀有害生物剂的敏感性提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。该杀有害生物剂可以是本领域已知的任何杀有害生物剂，包括杀昆虫剂。在一些情况下，本文提供的方法和组合物可通过降低昆虫将杀有害生物剂代谢或降解为可用底物的能力来提高昆虫对杀有害生物剂的敏感性。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的减少可以显现为昆虫对化感剂的敏感性的增加和/或昆虫对化感剂的抗性的降低。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对化感剂的抗性降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，该化感剂是咖啡因、大豆半胱氨酸蛋白酶抑制剂N、单萜类、二萜酸、或酚类化合物。在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可通过降低昆虫将化感剂代谢或降解为可用底物的能力来提高昆虫对化感剂的敏感性。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可以有效降低昆虫对寄生物或病原体(例如真菌的、细菌的、或病毒的病原体或寄生物)的抗性。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对病原体或寄生物(例如，真菌病原体、细菌病原体或病毒病原体；或者寄生螨)的抗性降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的减少可以显现为其他适应度劣势，诸如对某些环境因素的耐受性(例如，高温或低温耐受性)降低、在某些生境中存活的能力降低、或维持某种饮食的能力降低。在一些情况下，本文提供的方法或组合物可以以本文描述的任何多种方式有效降低昆虫适应度。此外，该细菌定殖破坏剂可减少任何数目的昆虫纲、目、科、属、或物种(例如，1个昆虫物种、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、200、250、500、或更多个昆虫物种)中的昆虫适应度。在一些情况下，细菌定殖破坏剂作用于单一昆虫纲、目、科、属、或物种。可以使用本领域的任何标准方法来评估昆虫适应度。在一些情况下，可以通过评价单个昆虫来评估昆虫适应度。可替代地，可以通过评价昆虫群体来评估昆虫适应度。
iii.增加的昆虫适应度
在细菌定殖破坏剂破坏对昆虫有害的细菌的定殖的情况下(例如，病原体细菌)，本发明方法有效赋予昆虫多种适应度益处。例如，由于施用细菌定殖破坏剂，昆虫适应度的增加可以显现为昆虫生理学的改善(例如，改善的健康或存活，或增加的营养特征)。昆虫的适应度可通过一种或多种参数来测量，这些参数包括但不限于相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫的繁殖速率、寿命、移动性、繁殖力、体重、营养特征、代谢速率或活动、或存活。在一些情况下，细菌定殖破坏剂可以以短暂的方式增加昆虫的适应度。可替代地，细菌定殖破坏剂可以增加昆虫的适应度(针对昆虫的寿命的持续时间)。
例如，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可有效改善昆虫的整体健康或改善昆虫的整体存活。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，昆虫的存活提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，这些方法和组合物有效增加昆虫繁殖(例如，繁殖速率)。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，这些方法和组合物可有效使其他的生理参数(如迁移、体重、寿命、繁殖力、或代谢速率)增加约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，昆虫适应度的增加可以显现为相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，由所述昆虫产生的产物的产量的提高。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使由如本文所述的昆虫产生的产物(例如，蜂蜜、蜂蜡、花粉蜜、蜂胶、蚕丝、或紫胶)的产量提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
例如，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可有效改善昆虫的营养特征或改善昆虫的整体营养物含量(例如，维生素、碳水化合物、氨基酸、多肽、或脂肪酸含量)。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，昆虫的营养特征或营养物含量提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的增加可以显现为昆虫进行的所希望的活动(例如，授粉、捕食有害生物、种子传播、或废物或有机材料分解)的频率或功效的提高。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法和组合物可有效使昆虫进行所希望的活动(例如，授粉、捕食有害生物、种子传播、或废物或有机材料分解)的频率或功效提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的增加可以显现为在该昆虫中一种或多种营养物(例如，维生素、碳水化合物类、氨基酸、或多肽)产量的增加。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫中的营养物(例如，维生素、碳水化合物类、氨基酸、或多肽)的产量增加约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，本文提供的方法或组合物可通过增加昆虫中的一种或多种微生物(例如，内共生体)产生的营养物的产量来增加昆虫中的营养物。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的增加可以显现为昆虫对杀有害生物剂的敏感性的降低和/或昆虫对杀有害生物剂的抗性的增加。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对杀有害生物剂的敏感性降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，通过施用降解杀有害生物剂(例如，降解杀有害生物的细菌，例如，降解新烟碱的细菌或降解有机磷杀昆虫剂的细菌)的细菌定殖破坏剂来改变昆虫对杀有害生物剂的敏感性。该杀有害生物剂可以是本领域已知的任何杀有害生物剂，包括杀昆虫剂。在一些情况下，杀有害生物剂是新烟碱(例如，吡虫啉)或有机磷杀昆虫剂(例如，硫代磷酸酯，例如，杀螟松)。在一些情况下，本文提供的方法和组合物可通过提高昆虫将杀有害生物剂代谢或降解为可用底物的能力来降低昆虫对杀有害生物剂的敏感性。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的增加可以显现为昆虫对化感剂的敏感性的降低和/或昆虫对化感剂的抗性的增加。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对化感剂的抗性提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。在一些情况下，该化感剂是咖啡因、大豆半胱氨酸蛋白酶抑制剂N、单萜类、二萜酸、或酚类化合物。在一些情况下，本文提供的方法和组合物可通过提高昆虫将化感剂代谢或降解为可用底物的能力来降低昆虫对化感剂的敏感性。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，本文提供的方法或组合物可以有效增加昆虫对寄生物或病原体(例如真菌的、细菌的、或病毒的病原体；或寄生螨(例如，蜜蜂中的狄斯瓦螨(Varroa destructor))的抗性。在一些情况下，相对于参考水平(例如，在未接受细菌定殖破坏剂的昆虫中发现的水平)，本文提供的方法或组合物可有效使昆虫对病原体或寄生物(例如，真菌病原体、细菌病原体或病毒病原体；或寄生螨(例如，蜜蜂中的狄斯瓦螨(Varroa destructor))的抗性提高约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
在一些情况下，相比于未被施用细菌定殖破坏剂的昆虫，昆虫适应度的增加可以显现为其他适应度优点，如对某些环境因素(例如，高温或低温耐受性)的耐受性提高、在某些生境中的存活能力提高、或维持某种饲料的能力提高(例如，代谢大豆和玉米的能力提高)。在一些情况下，本文提供的方法或组合物可以以本文描述的任何多种方式有效增加昆虫适应度。此外，该细菌定殖破坏剂可增加任何数目的昆虫纲、目、科、属、或物种(例如，1个昆虫物种、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、200、250、500、或更多个昆虫物种)中的昆虫适应度。在一些情况下，细菌定殖破坏剂作用于单一昆虫纲、目、科、属、或物种。
在本文方法的一些实施例中，相对于未处理的昆虫，该方法有效增加昆虫的适应度。在一些实施例中，适应度的增加是相对于未处理的昆虫，昆虫的存活、寿命、繁殖能力、繁殖速率、繁殖期、产出的卵的数目、孵化的卵的数目、发育率、成虫出现率、移动性、体型大小(例如，体长、体重、或体宽(例如，椿象的前胸宽度)、角质层(外骨骼)厚度、色素形成、或代谢速率的增加。在一些实施例中，适应度的增加是相对于未处理的昆虫，昆虫中卵黄原蛋白的增加。在一些实施例中，适应度的增加是相对于未处理的昆虫，昆虫中卵黄原蛋白基因表达的增加。
可以使用本领域的任何标准方法来评估昆虫适应度。在一些情况下，可以通过评价单个昆虫来评估昆虫适应度。可替代地，可以通过评价昆虫群体来评估昆虫适应度。例如，昆虫适应度的增加可以显现为与其他昆虫的成功竞争的提高，从而导致昆虫群体的规模增加。
iv.农业中的昆虫
通过减少对植物有害的昆虫的适应度，如农业有害生物(例如，椿象或豆虫)，或增加有益昆虫适应度(例如，授粉昆虫，例如，蜜蜂)，本文提供的细菌定殖破坏剂有效促进植物(典型地被所述昆虫损害)的生长。可以使用本文所述的任何配制品和递送方法，以有效降低昆虫适应度并且从而有益于植物，例如，增强作物生长、提高作物产率、降低有害生物侵染、和/或减少对植物的损害的量和持续时间，将细菌定殖破坏剂递送至植物。这可能涉及或可能不涉及将细菌定殖破坏剂直接应用于植物。例如，在原生昆虫生境不同于植物生长的区域的情况下，可将细菌定殖破坏剂应用于原生昆虫生境、感兴趣的植物、或二者的组合。
在一些情况下，该植物可以是农业粮食作物，诸如谷物、谷粒、豆类、水果、或蔬菜作物；或非粮食作物，例如，草类、开花植物、棉花、干草、大麻。可以在收获谷物、谷粒、豆类、水果、蔬菜、或其他作物之前或之后的任何时间将本文描述的组合物递送至作物。作物产率是通常用于作物植物的度量，并且通常以公吨/公顷(或千克/公顷)测量。作物产率还可以指植物的实际种子产生。在一些情况下，与参考水平(例如，没有被施用细菌定殖破坏剂的作物)相比，细菌定殖破坏剂可有效使作物产率提高(例如，提高每公顷谷物、谷粒、豆类、水果、或蔬菜的公吨和/或增加种子产生)约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。
在一些情况下，该植物(例如，作物)可能处于被有害生物侵染(例如，昆虫侵染)的风险中或可能已经被有害生物侵染。通过减少侵染植物的昆虫的适应度，本文所述的方法和组合物可用于减少或预防在此类作物中的有害生物侵染。在一些情况下，与参考水平(例如，没有被施用细菌定殖破坏剂的作物)相比，该细菌定殖破坏剂可有效使作物侵染减少(例如，减少侵染的植物的数量、减小有害生物群体规模、减少对植物的损害)约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。在其他情况下，与参考水平(例如，没有被施用细菌定殖破坏剂的作物)相比，该细菌定殖破坏剂可有效预防作物侵染可能性或将该可能性降低约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。
任何合适的植物组织可受益于本文所述的组合物和方法，包括但不限于体细胞胚、花粉、叶、茎、愈伤组织、匍匐茎、微块茎(microtuber)和枝。本文所述的方法可以包括对以下被子植物和裸子植物的处理，如刺槐、苜蓿、苹果树、杏树、朝鲜蓟、白蜡树、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、豆类、甜菜、桦树、山毛榉、黑莓、蓝莓、西兰花、孢子甘蓝、卷心菜、油菜、哈密瓜、胡萝卜、木薯、菜花、雪松、谷物、芹菜、板栗、樱桃、白菜、柑橘、小柑橘、三叶草、咖啡、玉米、棉花、针叶树、豇豆、黄瓜、柏树、茄子、榆树、欧洲菊苣、桉树、蚕豆、茴香、无花果、冷杉、水果和坚果树、天竺葵、葡萄、葡萄柚、花生、鹅莓、桉木、铁杉、大麻、山胡桃木、羽衣甘蓝、奇异果、甘蓝、落叶松、生菜、韭葱、柠檬、酸橙、刺槐、松树、铁线蕨、玉蜀黍、芒果、枫树、甜瓜、小米、蘑菇、芥末、坚果、橡木、燕麦、秋葵、洋葱、橙子、观赏植物或花卉或树木、番木瓜、棕榈、香菜、欧洲防风草、豌豆、桃树、花生、梨树、腐植土(peat)、辣椒、柿子、木豆、松树、菠萝、芭蕉、李子树、石榴树、马铃薯、南瓜、菊苣、萝卜、油菜籽、覆盆子、水稻、黑麦、高粱、黄桦柳、黄豆、菠菜、云杉、瓜类蔬菜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、甜玉米、柑橘、茶、烟草、番茄、树木、黑小麦、草皮草、萝卜、藤本植物、核桃、水田芥、西瓜、小麦、山药、红豆杉、和西葫芦。
v.作为疾病媒介的昆虫
通过降低携带动物病原体的宿主昆虫的适应度，本文提供的细菌定殖破坏剂有效减少传播媒介传播的疾病。可以使用本文所述的任何配制品和递送方法，以有效减少疾病传播(例如减少媒介之间的垂直或水平传播和/或减少向动物的传播)的量和持续时间，将细菌定殖破坏剂递送至昆虫。例如，相比于没有被施用细菌定殖破坏剂的宿主生物，本文所述的细菌定殖破坏剂可使媒介传播的病原体的垂直或水平传播减少约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。作为另一个实例，相比于没有被施用细菌定殖破坏剂的宿主生物，本文所述的细菌定殖破坏剂可使昆虫媒介的媒介效能减少约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或更多。
可通过本文提供的组合物和方法控制的疾病的非限制性实例包括：由披膜病毒科(Togaviridae)病毒(例如，基孔肯雅病、罗斯河热(Ross River fever)、马亚罗病毒、奥绒绒热(Onyon-nyong fever)、辛德毕斯热(Sindbis fever)、东部脑脊髓炎、西方马脑脊髓炎(Wesetern equine encephalomyelitis)、委内瑞拉马脑脊髓炎(Venezualan equineencephalomyelitis)、或巴尔马森林病毒(Barmah forest))引起的疾病；由黄病毒科病毒(例如，登革热、黄热病、凯萨努森林病、鄂木斯克出血热、日本脑炎、墨累山谷脑炎、罗氏(Rocio)、圣路易脑炎(St.Louis encephalitis)、西尼罗河脑炎(West Nileencephalitis)、或蜱传播的脑炎)引起的疾病；由布尼亚病毒科(Bunyaviridae)病毒(例如，白蛉热(Sandly fever)、裂谷热、拉克罗斯脑炎(La Crosse encephalitis)、加州脑炎(California encephalitis)、克里米亚-刚果出血热、或奥罗普切热(Oropouche fever))引起的疾病；由弹状病毒科(Rhabdoviridae)病毒(例如，水泡性口炎)引起的疾病；由环状病毒(Orbiviridae)(例如，蓝舌病(Bluetongue))引起的疾病；由细菌(例如，鼠疫、土拉菌病、Q热(Q fever)、落基山斑疹热(Rocky Mountain spotted fever)、鼠型斑疹伤寒、南欧斑疹热(Boutonneuse fever)、昆士兰壁虱斑疹伤寒(Queensland tick typhus)、西伯利亚斑疹伤寒(Siberian tick typhus)、恙虫病、回归热(Relapsing fever)、或莱姆病)引起的疾病；或由原生动物(例如，疟疾、非洲锥虫病、那加那病、查加斯病、利什曼病、梨浆虫病、班氏丝虫病(Bancroftian filariasis)、或布鲁格丝虫病(Brugian filariasis))引起的疾病。
vi.应用方法
可将本文所述的昆虫以任何合适的方式暴露于包括本文的细菌定殖破坏剂的组合物中，该方式允许将组合物递送或施用至昆虫或卵或卵块(将从其孵化昆虫)。细菌定殖破坏剂可以单独递送或与其他活性或非活性物质组合递送，并且可以通过例如喷雾、注射(例如显微注射)、通过植物、倾倒、浸渍，以浓缩液体、凝胶、溶液、悬浮液、喷雾、粉剂、丸剂、块剂、砖剂等(配制以递送有效浓度的细菌定殖破坏剂)的形式应用。应用本文所述的组合物的量和位置通常取决于昆虫的栖息地、昆虫微生物可被细菌定殖破坏剂靶向的生命周期阶段、将应用的位置、以及细菌定殖破坏剂的物理和功能特征。
在一些情况下，通过例如背包喷雾、空中喷雾、作物喷雾/尘剂等将组合物直接喷雾到植物(例如作物)上。在将细菌定殖破坏剂递送至植物的情况下，接受细菌定殖破坏剂的植物可以处于植物生长的任何阶段。例如，配制的细菌定殖破坏剂可以在植物生长的早期阶段以种子包衣或根处理的形式应用，或者在作物周期的后期作为总植物处理应用。在一些情况下，细菌定殖破坏剂可以以局部药剂的形式应用于植物。在一些情况下，将组合物喷雾或应用到将孵化成昆虫的卵或卵块上。
此外，可以将细菌定殖破坏剂(例如，在植物生长的土壤中，或在用于浇灌植物的水中)作为通过植物的组织而吸收和分布的内吸剂(systemic agent)应用。在一些情况下，植物或食物生物体可以经遗传转化以表达细菌定殖破坏剂。例如，在一些情况下，将细菌定殖破坏剂递送进经修饰的植物中，用于由昆虫摄取。可替代地，可以将细菌定殖破坏剂递送进减毒的细菌或经修饰的细菌，用于由昆虫摄取。
延迟或持续释放也可以通过将细菌定殖破坏剂或含有一种或多种细菌定殖破坏剂的组合物包被有可溶解或生物可侵蚀涂层(例如明胶)(该包衣在使用环境中溶解或侵蚀，以使得该细菌定殖破坏剂可用)或通过将药剂分散在可溶解或可侵蚀的基质中来实现。此类持续释放和/或分配手段装置可以有利地用于始终维持本文描述的一种或多种细菌定殖破坏剂的有效浓度。
在一些情况下，建议将细菌定殖破坏剂以药剂/公顷(g/ha或kg/ha)的量或活性成分(例如，细菌定殖破坏剂)/公顷(kg a.i./ha或g a.i./ha)的量用于田地应用。本发明的细菌定殖破坏剂可以以各种量/公顷(例如以约0.0001、0.001、0.005、0.01、0.1、1、2、10、100、1,000、2,000、5,000(或在约0.0001与5,000之间的任何范围)kg/ha)来应用。例如，约0.0001至约0.01、约0.01至约10、约10至约1,000、约1,000至约5,000kg/ha。
在一些将细菌定殖破坏剂递送至昆虫或通过昆虫产生的卵或卵块的情况下，可以简单地将昆虫、卵、或卵块用包括细菌定殖破坏剂的溶液“浸湿”或“喷雾”。在其他情况下，细菌定殖破坏剂可通过经口摄取施用至昆虫，但也可通过允许穿透角质层或穿透昆虫呼吸系统的方式施用。例如，细菌定殖破坏剂可以与昆虫的食物组分(例如，可食用组分)连接以便于递送和/或为了增加昆虫对细菌定殖破坏剂的摄取。用于经口引入的方法包括，例如将细菌定殖破坏剂与昆虫的食物直接混合，将细菌定殖破坏剂喷雾在昆虫的生境或田地中，以及工程化方法，其中将用作食物的物种工程化以表达细菌定殖破坏剂，然后向有待被影响的昆虫饲喂该物种。在一些情况下，例如，细菌定殖破坏剂可以掺入昆虫的饮食中或覆盖在昆虫的饮食的顶部。例如，可以将细菌定殖破坏剂喷雾到昆虫栖息的作物田地上。
细菌定殖破坏剂也可以掺入昆虫生长、生活、繁殖、进食或侵染的培养基中。例如，细菌定殖破坏剂可以掺入食物容器、进食站、保护性包装或蜂巢中。对于一些应用，该细菌定殖破坏剂可以与固体支持物结合，用于以粉剂形式或于捕获器或进食站中施用。例如，对于其中组合物将被用于捕获器中或作为特定昆虫的诱饵的应用，也可以将这些组合物与固体支持物结合或包封在定时释放材料中。
II.细菌定殖破坏剂
根据本发明的方法，可以使用多种细菌定殖破坏剂。可以通过其化学成分或其生理功能来区分细菌定殖破坏剂。例如，该药剂可改变细菌(例如，细菌代谢或细菌细胞表面)和/或昆虫肠的特性，使得细菌不能再附着、结合昆虫的肠，或在昆虫的肠中繁殖。以下进一步描述了示例性细菌定殖破坏剂和此类药剂的筛选方法。昆虫的定殖(例如，昆虫怀菌体、昆虫肠、或昆虫肠v4区的定殖)可以减少1％与100％之间，例如，减少至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或减少100％。
由于用定殖-破坏剂处理，因此可被细菌定殖的昆虫细胞、器官、区域或组织(例如，含菌细胞或肠的v4区)的大小(例如，面积或质量)可能减少，例如，减少1％与100％之间，例如，减少至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或减少100％。在一些实例中，可以被定殖的昆虫细胞、器官、区域或组织(例如，含菌细胞或肠的v4区)的大小被用作定殖的量度；例如，细胞、器官、区域或组织的大小越小可能表明定殖的减少越大。
i.细菌定殖破坏剂的类型
在一些情况下，细菌定殖破坏剂改变(例如，抑制)细菌代谢。寄宿于昆虫肠中的细菌依赖于某些营养物质的产生以在昆虫或其中的细胞或器官中繁殖。例如，聚羟基链烷酸酯(PHA)是线性聚酯，该线性聚酯是合成的并且用作碳和能源的存储化合物。通常，当细菌面对应激性环境(如营养不足的条件)时，PHA颗粒剂的生物合成被促进。如实例1中所述的，PHA的合成是一种示例性细菌代谢途径，其可被靶向以破坏昆虫肠的细菌定殖(例如，如通过伯克霍尔德氏菌的点蜂缘蝽的肠定殖)。
因此，在一些情况下，细菌定殖破坏剂是PHA合成抑制剂。PHA颗粒剂主要由乙酰辅酶A(coenzyme A，acetyl-CoA)通过三种不同的酶合成，如phaA(酮硫解酶)，phaB(乙酰辅酶A还原酶)和phaC(PHA合酶)的产物。PHA颗粒剂的表面被各种蛋白质，如PhaP(PHA颗粒剂的表面蛋白；蛋白素(phasin))，PhaR(PhaP的负调节剂)和PhaZ(PHA解聚酶)包围。在一些情况下，细菌定殖破坏剂是参与PHA生物合成的基因(如phaA、phaB、phaC、phaP、phaR、或phaZ基因表达)的抑制剂。在其他情况下，细菌定殖破坏剂与参与PHA生物合成的蛋白质(如PhaA，PhaB，PhaC，PhaP，PhaR或PhaZ)结合。在某些情况下，PHA合成抑制剂是香兰素或其类似物(表1；表2)。在其他情况下，该PHA合成抑制剂是乙酰丙酸或其类似物，例如表4中提供的类似物；丙烯酸或其类似物，例如表5中提供的类似物；或2-溴辛酸(2BA)或其类似物，例如，表6中提供的类似物。仍然在其他情况下，该PHA合成抑制剂是糠醛、2,3-丁烷二酮、3-(3,4-二氯苯基)-1,1-二甲基尿素(DCMU)、或4-戊烯酸。
表1.香兰素的类似物
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表2.香兰素的类似物
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在一些情况下，细菌定殖破坏剂通过，例如，靶向细菌细胞包膜的生物发生(例如，一种或多种膜或围绕并保护细菌细胞质的其他结构(例如细胞壁、内膜和外膜)的生物发生)来改变细菌细胞表面的性质。细胞包膜代表细菌细胞的最外层，通常，在细胞的保护，与环境沟通，维持细胞形状、稳定性、和细胞刚度，以及允许适当的细菌新陈代谢、生长、分裂和定殖中起作用。因此，在一些情况下，细菌定殖破坏剂靶向对细胞包膜的完整性非常重要的分子的生物合成需要的基因或蛋白质，这些分子包括生物合成的含有碳水化合物的大分子，如脂多糖(LPS)、肽聚糖、脂磷壁酸、磷壁酸、胶囊多糖和脂阿拉伯甘露聚糖。
例如，LPS代表外膜外叶的主要组分，并且由三个域组成：脂质A、核心寡糖(OS)和O-特异性多糖(或O抗原)。如实例2和3中所述，LPS生物合成(例如核心寡糖合成，例如L-庚糖合成)是一种示例性细胞包膜生物发生途径，其可以靶向破坏昆虫肠的细菌定殖(例如，破坏内共生体伯克霍尔德氏菌在点蜂缘蝽的肠中的定殖(实例2)或破坏内共生体暂定种卡贝克泛菌在茶翅蝽肠中的定殖(实例3))。
因此，在一些情况下，细菌定殖破坏剂是LPS合成抑制剂。在一些情况下，LPS合成抑制剂是细菌中核心寡糖合成的抑制剂。例如，LPS合成抑制剂可以抑制细菌中参与核心寡糖合成的酶，如WaaA、WaaC、WaaF或WaaG。在一些情况下，LPS合成抑制剂抑制了与具有WaaA、WaaC、WaaF、或WaaG的氨基酸序列的多肽具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性的酶。在一些情况下，LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的基因(如waaA、waaC、waaF、或waaG)的表达。在一些情况下，LPS合成抑制剂抑制了与具有waaA、waaC、waaF、或waaG的核苷酸序列的多核苷酸具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性的基因的表达。表3提供了示例性LPS合成抑制剂。
表3.LPS合成抑制剂
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表4：乙酰丙酸的类似物
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表5.丙烯酸的类似物
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表6.2-溴辛酸的类似物。
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在某些情况下，LPS合成抑制剂(例如，核心寡糖合成抑制剂，例如，L-庚糖合成抑制剂)是糖。例如，该糖可以是ADP-2-氟庚糖(AFH)。可替代地，该糖可以是2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)。在一些情况下，该糖是AFH和DHPO。在一些情况下，该糖是ADP-β-L-甘油-D-甘露-吡喃庚糖的结构类似物。例如，该糖可以是表7中的一种或多种化合物。在一些情况下，该糖是ADP-2-脱氧-2-氟-庚糖。在一些情况下，LPS抑制剂是带有12个拷贝的外周糖的，显示细菌l,d-庚甙(heptoside)的甘露吡喃糖核心结构的富勒烯己-加合物。
表7.ADP-β-L-甘油-D-甘露-吡喃庚糖的类似物
Figure BDA0002958262120001791
在另一个实例中，十一碳异戊二烯基焦磷酸酯(UPP)是在细菌肽聚糖合成期间跨细胞膜转运肽聚糖前体所需的55-碳聚异戊二烯脂类脂质载剂。十一碳异戊二烯基焦磷酸酯磷酸酶(Upp-Pases，例如，UppP或bcrC)是UPP合成和再循环所需的。因此，在一些情况下，细菌定殖破坏剂是Upp-Pase的抑制剂，例如，UppP抑制剂。在一些情况下，UppP抑制剂是杆菌肽、三肽素C(tripropeptin C)(TPPC)、亲脂性羟基烷基膦酸或一系列苯甲酸和苯基膦酸。
在一些情况下，细菌定殖破坏剂通过，例如，靶向鞭毛的功能(例如旋转)来改变细菌细胞的运动性。因此，在一些情况下，细菌定殖破坏剂是鞭毛功能抑制剂。在一些情况下，鞭毛功能抑制剂是纤维素。
细菌定殖破坏剂可用于含有单一药剂的组合物中，或含有不同细菌定殖破坏剂的混合物的组合物中。包括细菌定殖破坏剂的组合物可以包括任何数量或类型的细菌定殖破坏剂，如至少约1种细菌定殖破坏剂、2、3、4、5、10、15、20、或更多种细菌定殖破坏剂中的任一种。
细菌定殖破坏剂可以被配制在用于本文所述的任何用途的组合物中。组合物中每种细菌定殖破坏剂的合适浓度取决于多种因素，如功效、细菌定殖破坏剂的稳定性、不同细菌定殖破坏剂的数量、配制品、以及组合物的应用方法。在标题为“配制品和组合物”的部分中描述了包括细菌定殖破坏剂的示例性配制品和组合物。
ii.鉴定细菌定殖破坏剂的筛选方法
本文包括用于鉴定细菌定殖破坏剂的筛选测定，该细菌定殖破坏剂有效抑制昆虫中细菌的定殖并且因此减少昆虫适应度。该筛选测定涉及通过以下来鉴定细菌定殖破坏剂：(a)将目标昆虫暴露于一种或多种药剂；以及(b)鉴定药剂，该药剂(i)减少了目标昆虫的适应度，并且(ii)抑制目标昆虫的肠中细菌的定殖。
宿主适应度可以通过本文所述的任何参数来测量，这些参数包括但不限于相比于未被施用候选试剂的昆虫，测量繁殖速率、寿命、移动性、繁殖力、体重、代谢速率或活动、或存活。可以将适应度的减少与预定阈值或参考水平进行比较。例如，适应度的减少(例如，整体存活)可以是相对于参考水平(例如，未处理的昆虫)减少约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
细菌定殖的抑制可以通过本领域已知的多种方法来测量，包括体外或体内测定。药剂导致的昆虫中细菌定殖的变化可以通过以下方法确定，这些方法包括但不限于聚合酶链反应(PCR)、定量PCR、实时PCR、流式细胞仪、微阵列、荧光显微镜、透射电子显微镜、荧光原位杂交技术(例如FISH)和DNA测序。可以将定殖的减少与预定阈值或参考水平进行比较。例如，定殖的减少可以是相对于参考水平(例如，未处理的细菌)减少约2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或大于100％。
III.靶细菌
通过本文所述的细菌定殖破坏剂靶向的细菌可以包括任何寄宿于宿主的肠，或其细胞或器官中的细菌，包括但不限于本文所述的任何细菌。寄宿于宿主中的细菌可以包括，例如，共生微生物(例如，为宿主提供有益的营养物或酶的内共生微生物)、病原菌微生物、或共栖微生物。内共生微生物可以是原生内共生体或次生内共生体。共生细菌可以是宿主的专性共生体或宿主的兼性共生体。
寄宿于宿主中的微生物可以通过任何传播方式获得，包括垂直传播、水平传播或多个传播源。昆虫共生体的传播模式包括环境确定、食粪性、母细胞(brood cell)或卵表面的涂抹、社交获得、胶囊传播或感染(经由胶状的分泌物)。一些共生体(如肠共生体)是从每一代的环境中水平获得的。例如，豆虫(点蜂缘蝽(半翅目：蛛缘蝽科))含有伯克霍尔德氏菌属的特殊肠共生体，其是由二龄若虫从环境中口服获得。豆虫在中肠后第四区(M4)具有专门的共生器官(隐窝)，以容纳共生体。
可根据本文提供的方法和组合物靶向的示例性细菌包括但不限于，致病杆菌属物种(Xenorhabdus spp)；发光杆菌属物种(Photorhabdus spp)；Candidatus属物种；泛菌属物种；蚜虫布赫纳氏菌；布拉特杆菌属物种(Blattabacterium spp)；鲍曼属物种(Baumaniaspp)；威格尔斯沃思氏菌属物种(Wigglesworthia spp)；沃尔巴克氏体属物种(Wolbachiaspp)；立克次体属物种(Rickettsia spp)；东方体属物种(Orientia spp.)；伴突属物种(Sodalis spp)；伯克霍尔德氏菌属物种(Burkholderia spp)；贪铜菌属物种(Cupriavidusspp)；弗兰克氏菌属物种(Frankia spp)；中华根瘤菌属物种(Snirhizobium spp)；链球菌属物种(Streptococcus spp)；沃廉菌属物种(Wolinella spp)；木杆菌属物种(Xylellaspp)(例如，叶缘焦枯病菌(Xylella fastidiosa))；欧氏杆菌属物种(Erwinia spp)；农杆菌属物种(Agrobacterium spp.)；芽孢杆菌属物种(Bacillus spp)；Commensalibacter属物种(例如，Commensalibacter intestine)；类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus spp)；链霉菌属物种(Streptomyces spp)；微球菌属物种(Micrococcus spp)；棒状杆菌属物种(Corynebacterium spp)；醋杆菌属物种(Acetobacter spp)(例如，果实醋杆菌(Acetobacter pomorum))；蓝细菌属物种(Cyanobacteria spp)；沙门氏菌属物种(Salmonella spp)；红球菌属物种(Rhodococcus spp)；假单胞菌属物种(Pseudomonasspp)；乳杆菌属物种(Lactobacillus spp)(例如，植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum))；溶杆菌属物种(Lysobacter spp.)；草螺菌属物种(Herbaspirillum spp)；肠球菌属物种(Enterococcus spp)；葡糖杆菌属物种(Gluconobacter spp)(例如，Gluconobacter morbifer)；产碱杆菌属物种(Alcaligenes spp)；Hamiltonella属物种；克雷伯氏菌属物种(Klebsiella spp)；类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus spp)；沙雷氏菌属物种(Serratia spp.)；节杆菌属物种(Arthrobacter spp)；固氮菌属物种(Azotobacterspp.)；棒状杆菌属物种(Corynebacterium spp)；短杆菌属物种(Brevibacterium spp)；Regiella属物种(例如，Regiella insecticola)；栖热菌属物种(Thermus spp)；假单胞菌属物种(Pseudomonas spp)；梭菌属物种(Clostridium spp)；被孢霉属物种(Mortierellaspp.)(例如，长被孢霉(Mortierella elongata))或埃希氏杆菌属物种(Escherichiaspp.)。
本文提供的方法和组合物可靶向的细菌的非限制性实例示出于表8中。在一些情况下，细菌定殖破坏剂靶向的细菌的16S rRNA序列与表8中列出的序列具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％、99.9％、或100％同一性。
表8：靶细菌和宿主昆虫的实例
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IV.配制品和组合物
可以将本文所述的组合物以纯的形式(例如，组合物仅含有细菌定殖破坏剂)配制或与一种或多种另外的药剂(如赋形剂、递送媒介物、载剂、稀释剂、稳定剂等)一起配制以促进组合物的施用或递送。合适的赋形剂和稀释剂的实例包括但不限于：乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、盐水溶液、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。该组合物可以包括湿化液(例如，非离子湿化液)，例如，
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为了允许易于应用、处理、转运、储存和最大活性，可以将细菌定殖破坏剂与其他物质一起配制。可以将细菌定殖破坏剂配制成例如诱饵、浓缩乳液、粉剂、可乳化浓缩物、熏剂、凝胶、颗粒剂、微胶囊、种子处理剂、悬浮液浓缩物、悬乳剂、片剂、水溶性液体、水可分散颗粒剂或干燥可流动剂、可湿性粉剂、和超低容量溶液。
细菌定殖破坏剂可以以从此类药剂的浓缩制配制品制备的水性悬浮液或乳液的形式应用。此类水溶性、水可悬浮性、或可乳化配制品是固体，通常称为可湿性粉剂或水可分散颗粒剂；或液体，通常称为可乳化浓缩物或水性悬浮液。可压实形成水可分散颗粒剂的可湿性粉剂包含细菌定殖破坏剂、载剂和表面活性剂的紧密混合物。载剂通常选自绿坡缕石(attapulgite)粘土、蒙脱石(montmorillonite)粘土、硅藻土、或纯化硅酸盐。占可湿性粉剂的约0.5％至约10％的有效表面活性剂经发现于磺化木质素、缩合萘磺酸盐、萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐、和诸如烷基苯酚的环氧乙烷加合物的非离子表面活性剂。
可乳化浓缩物可以包含合适浓度的溶解于载剂中的细菌定殖破坏剂(如从约50至约500克/升液体)，该载剂是水混溶性溶剂或水不可混溶性有机溶剂和乳化剂的混合物。可用的有机溶剂包括芳族化合物(尤其是二甲苯)和石油馏分(尤其是石油的高沸点萘和烯部分，诸如重芳族石脑油)。也可以使用其他有机溶剂，诸如包括松香衍生物的萜烯溶剂、诸如环己酮的脂族酮、和诸如2-乙氧基乙醇的复杂醇。用于可乳化浓缩物的合适乳化剂选自常规的阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂。
水性悬浮液包括水不溶性细菌定殖破坏剂以按重量计从约5％至约50％的浓度分散在水性载剂中的悬浮液。悬浮液通过以下方式制备：精细研磨活性剂并且将其剧烈混合到由水和表面活性剂构成的载剂中。还可以添加诸如无机盐和合成胶或天然胶的成分以增加水性载剂的密度和粘度。
细菌定殖破坏剂也可以以颗粒组合物的形式应用，这些颗粒组合物特别可用于应用于土壤。颗粒组合物可以含有，例如，按重量计从约0.5％至约10％的细菌定殖破坏剂，该细菌定殖破坏剂分散于包含粘土或类似物质的载剂中。通常通过将配制品溶解于合适的溶剂中并且将其应用到已预先形成为在从约0.5mm至约3mm的适当粒度的颗粒载剂中来制备此类组合物。也可以通过制造载剂和化合物的粘团或糊剂并且挤压和干燥以获得所希望的颗粒粒度来配制此类组合物。
通过将呈粉末形式的细菌定殖破坏剂与合适的粉尘状农业载剂(诸如高岭土、研磨的火山岩等)紧密混合来制备含有本发明的组合物的粉剂。粉剂可以适当地含有从约1％至约10％的小包。它们可以以拌种的形式或以用喷粉机的叶面应用的形式来应用。
同样实用的是以在适当的有机溶剂(通常为石油，诸如广泛用于农业化学的喷淋油)中的溶液的形式应用本发明的配制品。
细菌定殖破坏剂也可以以气雾剂组合物的形式应用。在此类组合物中，小包溶解或分散于作为产生压力的推进剂混合物的载剂中。将气雾剂组合物包装在通过雾化阀分配混合物的容器中。
另一个实施例是水包油乳液，其中该乳液包含各自具备层状液晶包衣并且分散在水相中的油性小珠，其中每个油性小珠包含至少一种具有农业活性的化合物并且单独地被单层状层或多层状层包覆，该单层状层或多层状层包含：(1)至少一种非离子亲脂性表面活性剂，(2)至少一种非离子亲水性表面活性剂，和(3)至少一种离子表面活性剂，其中这些小珠具有小于800纳米的平均粒径。在2007年2月1日公开的美国专利公开20070027034中披露了有关该实施例的更多信息。为了易于使用，此实施例将被称为“OIWE”。
另外，通常，当以上披露的分子用于配制品时，此类配制品还可以含有其他组分。这些组分包括但不限于(这是非详尽且非互相排他性列表)润湿剂、铺展剂、粘着剂、渗透剂、缓冲剂、螯合剂、减漂剂、相容剂、消泡剂、清洁剂、和乳化剂。接着描述数种组分。
润湿剂是当被添加到液体中时通过减小液体与它在上面铺展的表面之间的界面张力而增加液体的铺展或渗透能力的物质。润湿剂因两个主要功能而用于农业化学配制品：在加工和制造期间，增加粉末在水中润湿的速率以制造可溶性液体的浓缩物或悬浮液浓缩物；以及在将产品与水在喷洒罐中混合期间，减少可湿性粉剂的润湿时间并且改进水到水可分散颗粒剂中的渗透。用于可湿性粉剂、悬浮液浓缩物和水可分散颗粒剂配制品的润湿剂的实例是：月桂基硫酸钠；磺基琥珀酸二辛酯钠；烷基酚乙氧基化物；和脂族醇乙氧基化物。
分散剂是吸附于颗粒表面上并且有助于保持颗粒的分散状态并且防止其再聚集的物质。将分散剂添加到农业化学配制品中以促进在制造期间的分散和悬浮并且确保颗粒再分散于喷洒罐中的水中。它们广泛用于可湿性粉剂、悬浮液浓缩物、和水可分散颗粒剂。用作分散剂的表面活性剂具有强烈吸附于颗粒表面上并且对颗粒再聚集提供带电荷的壁垒或空间壁垒的能力。最常用的表面活性剂是阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、或两种类型的混合物。对于可湿性粉剂配制品，最常见的分散剂是木质素磺酸钠。对于悬浮液浓缩物，使用聚电解质(诸如萘磺酸钠甲醛缩合物)获得非常好的吸附和稳定。也使用三苯乙烯基酚乙氧基化物磷酸酯。诸如烷基芳基环氧乙烷缩合物和EO-PO嵌段共聚物的非离子表面活性剂有时与作为分散剂的阴离子表面活性剂组合用于悬浮液浓缩物。近年来，已开发出新型的非常高分子量的聚合物表面活性剂作为分散剂。它们具有非常长的疏水性“主链”和大量环氧乙烷链，这些环氧乙烷链形成“梳型”表面活性剂的“齿”。这些高分子量聚合物可以赋予悬浮液浓缩物非常好的长期稳定性，因为疏水性主链具有到颗粒表面上的许多锚点。用于农业化学配制品的分散剂的实例是：木质素磺酸钠；萘磺酸钠甲醛缩合物；三苯乙烯基酚乙氧基化物磷酸酯；脂族醇乙氧基化物；烷基乙氧基化物；EO-PO(环氧乙烷-环氧丙烷)嵌段共聚物；和接枝共聚物。
乳化剂是使一种液相的液滴在另一个液相中的悬浮液稳定的物质。在无乳化剂的情况下，可以将两种液体分成两种不可混溶性液相。最常用的乳化剂共混物含有具有十二个或更多个环氧乙烷单元的烷基酚或脂族醇和油溶性的十二烷基苯磺酸钙盐。从8至18的亲水亲油平衡(“HLB”)值将通常提供良好的稳定乳液。乳液稳定性有时可以通过添加少量EO-PO嵌段共聚物表面活性剂来改进。
增溶剂是将以高于临界胶束浓度的浓度在水中形成胶束的表面活性剂。这些胶束然后能够溶解或增溶胶束的疏水性部分内的水不溶性材料。通常用于增溶的表面活性剂的类型是非离子表面活性剂、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯乙氧基化物、和油酸甲酯。
表面活性剂有时单独使用或与作为用于喷洒罐混合料的辅助剂的其他添加剂(诸如矿物油或植物油)一起使用，以改进细菌定殖破坏剂对于标靶的生物性能。用于生物增强的表面活性剂的类型通常取决于细菌定殖破坏剂的性质和作用方式。然而，它们通常是非离子表面活性剂，诸如：烷基乙氧基化物；线性脂族醇乙氧基化物；脂族胺乙氧基化物。
农业配制品中的载剂或稀释剂是添加到细菌定殖破坏剂中以给出所希望的强度的产品的材料。载剂通常是具有高吸收能力的材料，而稀释剂通常是具有低吸收能力的材料。载剂和稀释剂用于粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、和水可分散颗粒剂的配制。
有机溶剂主要用于配制可乳化浓缩物、水包油乳液、悬乳剂、和超低容量配制品，并且在较小程度上用于配制颗粒配制品。有时使用溶剂混合物。第一主组的溶剂是脂族石蜡油，诸如煤油或精制石蜡。第二主组(并且最常用的)包括芳族溶剂，诸如二甲苯和较高分子量的C9和C10芳族溶剂馏分。氯化烃可用作助溶剂以便当配制品乳化在水中时防止细菌定殖破坏剂结晶。醇有时用作助溶剂以增加溶解能力。其他溶剂可以包括植物油、种子油、和植物油和种子油的酯。
增稠剂或胶凝剂主要用于配制悬浮液浓缩物、乳液和悬乳剂，以改变液体的流变学或流动特性以及防止分散的颗粒或液滴的分离和沉降。增稠剂、胶凝剂和防沉剂通常分成两个类别，即水不溶性微粒和水溶性聚合物。可以使用粘土和二氧化硅来生产悬浮液浓缩物配制品。这些类型的材料的实例包括但不限于蒙脱石、膨润土、硅酸镁铝、和绿坡缕石。水溶性多糖已被用作增稠胶凝剂多年。最常用的多醣类型是种子和海草的天然提取物或是纤维素的合成衍生物。这些类型的材料的实例包括但不限于瓜尔胶；刺槐豆胶；卡拉胶；藻酸酯；甲基纤维素；羧甲基纤维素钠(SCMC)；羟乙基纤维素(HEC)。其他类型的防沉剂基于改性淀粉、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇、和聚环氧乙烷。另一种良好的防沉剂是黄原胶。
微生物可以导致配制产品的腐败。因此，使用防腐剂来消除或减小其作用。此类药剂的实例包括但不限于：丙酸及其钠盐；山梨酸及其钠盐或钾盐；苯甲酸及其钠盐；对羟基苯甲酸钠盐；对羟基苯甲酸甲酯；和1,2-苯并噻唑啉-3-酮(BIT)。
表面活性剂的存在通常在生产中和在通过喷洒罐进行的应用中的混合操作期间导致基于水的配制品起泡。为了减少起泡的倾向，通常在生产阶段期间或在填充至瓶中之前添加消泡剂。通常，存在两种类型的消泡剂，即硅酮和非硅酮。硅酮通常是二甲基聚硅氧烷的水性乳液，而非硅酮消泡剂是水不溶性油(诸如辛醇和壬醇)或二氧化硅。在两种情况下，消泡剂的功能是使表面活性剂从空气-水界面移位。
“绿色”剂(例如，辅助剂、表面活性剂、溶剂)可以减少作物保护配制品的整体环境足迹。绿色剂是可生物降解的并且通常源自天然和/或可持续源，例如植物源和动物源。具体实例为：植物油、种子油、及其酯，以及烷氧基化烷基聚葡萄糖苷。
在一些情况下，该细菌定殖破坏剂可以被冷冻干燥或冻干。参见美国专利号4,311,712。细菌定殖破坏剂可以随后在与水或另一种液体接触后重构。可以将其他组分添加到冻干或重构的，例如其他农用药剂、农业上可接受的载剂、或根据本文描述的配制品的其他材料中。
组合物的其他任选特征包括保护细菌定殖破坏剂免受UV和/或酸性条件的载剂或递送媒介物。在一些情况下，该递送媒介物含有pH缓冲剂。在一些情况下，将组合物配制为具有在约4.5至约9.0的范围内的pH，包括例如范围在5.0至约8.0、约6.5至约7.5、或约6.5至约7.0中的任一者的pH。
在一些情况下，该组合物包括诱饵。诱饵可以处于任何合适的形式，如固体、膏剂、丸剂或粉剂形式。诱饵也可以被昆虫带回到所述昆虫的群体(例如，集落或蜂巢)。然后诱饵可以充当该集落的其他成员的食物来源，从而为大量昆虫和潜在的整个昆虫集落提供有效量的细菌定殖破坏剂。
诱饵可以提供于合适的“壳体”或“捕获器”中。此类壳体和捕获器是可商购的，并且现有的捕获器可以被调适成包括本文所述的组合物。壳体或捕获器可以是例如盒形的，并且可以在预成型条件下提供，或者可以例如由可折叠纸板形成。用于壳体或捕获器的合适的材料包括塑料和纸板，尤其是瓦楞纸板。这些捕获器的内表面可内衬有一种粘性物质，以便限制昆虫一旦在捕获器内时的移动。壳体或捕获器可以内部含有合适的槽，它可以将诱饵保持在适当位置。捕获器与壳体是有区别的，因为昆虫在进入之后不能轻易地离开捕获器，而壳体充当一个“摄食站”，它向昆虫提供一个优选的环境，在其中它们可以摄食并且感觉不会受到捕食者的危险。
在一些情况下，该组合物包括引诱剂(例如，化学引诱剂)。引诱剂可以将成虫或未成熟昆虫(例如，幼虫)吸引到组合物的附近。引诱剂包括信息素，一种由动物(尤其是昆虫)分泌的化学物质，其影响同一物种的其他个体的行为或发育。其他引诱剂包括糖和蛋白水解产物糖浆、酵母和腐肉。引诱剂还可以与活性成分组合并喷雾到处理区域中的叶子或其他物品上。
已知各种引诱剂影响昆虫行为，例如昆虫对食物、产卵或交配地点或配偶的搜索。可用于本文描述的方法和组合物的引诱剂包括：例如，丁香酚、丙酸苯乙酯、二甲基异丁基环丙烷甲酸乙酯、苯并二噁烷甲酸丙酯、顺式-7,8-环氧-2-甲基十八烷、反式-8,反式-0-十二碳二烯醇、顺式-9-十四烯醛(具有顺式-11-十六烯醛)、反式-11-十四烯醛、顺式-11-十六烯醛、(Z)-11,12-十六碳二烯醛、顺式-7-十二烯基乙酸酯、顺式-8-十二烯基乙酸酯、顺式-9-十二烯基乙酸酯、顺式-9-十四碳烯基乙酸酯、顺式-11-十四碳烯基乙酸酯、反式-11-十四碳烯基乙酸酯(具有顺式-11)、顺式-9,反式-11-十四碳二烯基乙酸酯(具有顺式-9,反式-12)、顺式-9,反式-12-十四碳二烯基乙酸酯、顺式-7,顺式-11-十六碳双烯乙酸酯(具有顺式-7,反式-11)、顺式-3,顺式-13-十八碳二烯基乙酸酯、反式-3,顺式-13-十八碳二烯基乙酸酯、茴香脑和水杨酸异戊酯。另外，除化学引诱剂之外的其他方法也可用于吸引昆虫，包括各种波长或颜色的光。
细菌定殖破坏剂也可以掺入昆虫生长、生活、繁殖、进食或侵染的培养基中。例如，细菌定殖破坏剂可以掺入食物容器、进食站、保护性包装或蜂巢中。对于一些应用，该细菌定殖破坏剂可以与固体支持物结合，用于以粉剂形式或于捕获器或进食站中施用。例如，对于其中组合物将被用于捕获器中或作为特定昆虫的诱饵的应用，也可以将这些组合物与固体支持物结合或包封在定时释放材料中。在一些情况下，将细菌定殖破坏剂配制成适合用于应用至昆虫栖息地的雾、烟或其他处理。
在配制品和由这些配制品制备的使用形式中，细菌定殖破坏剂可以处于含有其他农用药剂的混合物中，或与其他农用药剂(如杀有害生物剂(例如杀昆虫剂、抗蠕虫剂、杀菌剂、杀螨剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或杀真菌剂)、引诱剂、植物生长调节物质、花粉、蔗糖、肥料、植物生长调节剂、安全剂、化学信息素、或除草剂)一起应用。
关于农业配制品的进一步信息，参见D.A.Knowles编辑的“Chemistry andTechnology of Agrochemical Formulations[农业化学配制品的化学和技术]”,版权1998归属于Kluwer Academic Publishers[克鲁维尔学术出版社]。还参见A.S.Perry,I.Yamamoto,I.Ishaaya,和R.Perry的“Insecticides in Agriculture and Environment-Retrospects and Prospects[农业杀昆虫剂与环境-回顾与展望]”,版权1998归属于Springer-Verlag[施普林格出版社]。
实例
以下是本发明的方法的实例。应理解，鉴于以上提供的一般性描述，可以实践各种其他的实施例。
实例1：通过改变共生体细胞壁特性来破坏昆虫中肠共生体定殖
此实例证明了通过聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂的施用来破坏半翅目昆虫中肠共生体伯克霍尔德氏菌，豆虫(点蜂缘蝽)的定殖，以减少昆虫适应度。豆虫点蜂缘蝽(半翅目：异翅目：缘蝽科)是恶名昭著的豆科作物(如大豆和豇豆)的有害生物。
实验设计：
昆虫饲养和伯克霍尔德氏菌感染
在昆虫培养箱中，在28℃下，在16h光照和8h黑暗的长日(long-day)条件下，饲养点蜂缘蝽豆虫。简而言之，在补充有大豆种子和含有0.05％抗坏血酸的蒸馏水(DWA)的干净塑料容器中饲养若虫。每天清洗塑料容器，并且每2天更换新鲜的大豆种子和DWA。当昆虫成为成虫时，将这些昆虫转移至具有大豆种子和DWA的大塑料容器。另外，棉垫被附接至塑料容器的壁上以用于产卵。每天收集卵并且将这些卵转移至新笼子以用于孵化。当新生的若虫脱皮至第二龄若虫时，提供含有107个细胞/ml的培养的伯克霍尔德氏菌的DWA，以用于小培养皿中伯克霍尔德氏菌的定殖。使用的伯克霍尔德菌共生体是耐利福平(Rfr)的自发突变菌株RPE75。
用PHA合成抑制剂香兰素培养的伯克霍尔德氏菌的施用
PHA合成抑制剂(香兰素)购自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(目录号V1104-2G)。YG培养基中制备的香兰素的工作浓度是1g/ml。将共生菌株在30℃下，在转动摇床(150rpm)上的YG培养基(含有50ug/ml利福平)中生长至早期对数期。阳性对照伯克霍尔德氏菌仅在YG培养基中培养。通过将培养基铺板在含有足够抗生素的YG琼脂板上来估计菌落形成单元(CFU)值。将共生体细胞通过离心培养基收获，悬浮在DWA中，并且调节至DWA中104CFU/mL。
在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。然后，将含有104CFU/mL共生体细胞的DWA供应至饲养容器中持续24h，其中可立即利用第二龄若虫以获得用PHA合酶抑制剂培养的伯克霍尔德菌共生体或仅在YG培养基中培养的阳性对照伯克霍尔德菌。然后，含有共生体的DWA被不含有共生体的DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
PHA合成抑制剂香兰素直接喂养至点蜂缘蝽
香兰素工作溶液(1g/ml)是由储备溶液融入蒸馏水制成的。将香兰素工作溶液分配到饲管中并且放入塑料饲养容器中以用于喂食豆虫。在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。第二天，将香兰素溶液与104CFU/mL共生体细胞一起供应至饲养容器中持续24h，其中可立即利用第二龄若虫以获得PHA合酶抑制剂香兰素和伯克霍尔德氏菌共生体。阳性对照是仅用104CFU/mL共生体细胞喂养的若虫。然后，将含有共生体的DWA被DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
通过qPCR定量在点蜂缘蝽的中肠中定殖的伯克霍尔德氏菌
使用具有靶向伯克霍尔德氏菌共生体的dnaA基因的0.15kb区的引物BSdnaA-F和BSdnaA-R的iTaq SYBR green(伯乐公司(Biorad))和Applied Biosystems QuantStudio 7Flex QPCR系统(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher))进行定量PCR(qCPR)(如Kikuchi等人.2011；Kikuchi和Fukatsu,2014中所述的)。通过使用血液和细胞培养DNA迷你试剂盒(Blood&Cell Culture DNA Mini Kit)(凯杰公司(Qiagen)，目录号13323)来从M4和M4B部分提取总DNA，并且在200μL水中洗脱提取的DNA。每个PCR混合物含有10μL的体积。使用1.6℃/s的qPCR扩增斜率和以下条件进行qPCR：1)95℃持续10分钟，2)95℃持续15秒，3)60℃持续30秒，4)重复步骤2-3 40x，5)95℃持续15秒，6)60℃持续1分钟，7)斜率改变为0.15℃/s，8)95℃持续1秒。用引物BSdnaA-F和BSdnaA-R扩增的目标PCR片段的标准样品生成dnaA基因的标准曲线。使用分析软件(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)，QuantStudio设计和分析)分析qPCR数据。
点蜂缘蝽适应度的测量
每天通过计数死亡昆虫来估计向二龄若虫和两个阳性对照施用PHA合酶抑制剂香兰素培养的伯克霍尔德菌或直接喂食香兰素后的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。在处死之前，不向昆虫提供大豆种子24h，以排除大豆的重量。
与仅用在YG培养基中培养的伯克霍尔德氏菌喂养的和仅直接喂养伯克霍尔德氏菌的点蜂缘蝽的阳性对照相比，预期点蜂缘蝽后代的中肠中伯克霍尔德氏菌的滴度通过向点蜂缘蝽施用用香兰素培养的伯克霍尔德氏菌或直接喂养香兰素来降低。
实例2：通过施用糖类似物来破坏昆虫中的共生体定殖
此实例证明在半翅目模型(豆虫，点蜂缘蝽)中，通过施用糖类似物(ADP-2-氟庚糖(AFH)和2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO))来破坏伯克霍尔德氏菌定殖，以减少昆虫适应度。
实验设计：
昆虫饲养和伯克霍尔德氏菌感染
在昆虫培养箱中，在28℃下，在16h光照和8h黑暗的长日(long-day)条件下，饲养点蜂缘蝽豆虫。简而言之，在补充有大豆种子和含有0.05％抗坏血酸的蒸馏水(DWA)的干净塑料容器中饲养若虫。每天清洗塑料容器，并且每2天更换新鲜的大豆种子和DWA。当昆虫成为成虫时，将这些昆虫转移至具有大豆种子和DWA的大塑料容器。另外，棉垫被附接至塑料容器的壁上以用于产卵。每天收集卵并且将这些卵转移至新笼子以用于孵化。当新生的若虫脱皮至第二龄若虫时，提供含有107个细胞/ml的培养的伯克霍尔德氏菌的DWA，以用于小培养皿中伯克霍尔德氏菌的定殖。伯克霍尔德菌共生体是耐利福平(Rfr)的自发突变菌株RPE75。
用糖类似物培养的伯克霍尔德氏菌的施用
通过CRO合成抑制L-庚糖合成的两种糖类似物，ADP-2-氟庚糖(AFH)(Dohi等人,2008,Chemistry[化学]14,9530-9539)和2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)(Moreau等人,2008.Bioorg.Med.Chem.Lett[生物有机与药物化学快报].18,4022-4026)。YG培养基中制备的AHF和DHPO的工作浓度是1g/ml。将共生菌株在30℃下，在转动摇床(150rpm)的YG培养基(含有50ug/ml利福平)中生长至早期对数期。伯克霍尔德氏菌的阳性对照仅在YG培养基中培养。通过将培养基铺板在含有足够抗生素的YG琼脂板上来估计菌落形成单元(CFU)值。将共生体细胞通过离心培养基收获，悬浮在DWA中，并且调节至DWA中104CFU/mL。
在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。然后，将含有104CFU/mL共生体细胞的DWA供应至饲养容器中持续24h，其中可立即利用第二龄若虫以获得用AHF或DHPO培养的伯克霍尔德菌共生体或仅在YG培养基中培养的阳性对照伯克霍尔德菌。然后，含有共生体的DWA被不含有共生体的DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
向点蜂缘蝽直接喂养糖类似物
通过CRO合成抑制L-庚糖合成的两种糖类似物，AFH和DHPO(Moreau等人,2008.Bioorg.Med.Chem.Lett[生物有机与药物化学快报].18,4022-4026)。AFH和DHPO工作溶液(1g/ml)是由储备溶液融于蒸馏水制成的。将两种糖类似物的工作溶液分配到饲管中并且放入塑料饲养容器中以用于喂食豆虫。在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。第二天，将香兰素溶液与104CFU/mL共生体细胞一起供应至饲养容器中持续24h，其中立即利用第二龄若虫，导致获得了AFH或DHPO和伯克霍尔德氏菌共生体。阳性对照是仅用104CFU/mL共生体细胞喂养的若虫。然后，将含有共生体的DWA被DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
通过qPCR定量在点蜂缘蝽的中肠中定殖的伯克霍尔德氏菌
使用具有靶向伯克霍尔德氏菌共生体的dnaA基因的0.15kb区的引物BSdnaA-F和BSdnaA-R的iTaq SYBR green(伯乐公司(Biorad))和Applied Biosystems QuantStudio 7Flex QPCR系统(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher))进行定量PCR(qCPR)(如Kikuchi等人.2011；Kikuchi和Fukatsu,2014中所述的)。通过使用血液和细胞培养DNA迷你试剂盒(Blood&Cell Culture DNA Mini Kit)(凯杰公司(Qiagen)，目录号13323)来从M4和M4B部分提取总DNA，并且在200μL水中洗脱提取的DNA。每个PCR混合物含有10μL的体积。使用1.6℃/s的qPCR扩增斜率和以下条件进行qPCR：1)95℃持续10分钟，2)95℃持续15秒，3)60℃持续30秒，4)重复步骤2-3 40x，5)95℃持续15秒，6)60℃持续1分钟，7)斜率改变为0.15℃/s，8)95℃持续1秒。用引物BSdnaA-F和BSdnaA-R扩增的目标PCR片段的标准样品生成dnaA基因的标准曲线。使用分析(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)，QuantStudio设计和分析)软件分析qPCR数据。
点蜂缘蝽适应度的测量
每天通过计数死亡昆虫来估计向二龄若虫和两个阳性对照施用AFH或DHPO培养的伯克霍尔德菌或直接喂食AFH或DHPO后的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。最后，记录所有适应度参数。在处死之前，不向昆虫提供大豆种子24h，以排除大豆的重量。
与仅用在YG培养基中培养的伯克霍尔德氏菌喂养的和仅直接喂养伯克霍尔德氏菌的点蜂缘蝽的阳性对照相比，预期点蜂缘蝽后代的中肠中伯克霍尔德氏菌的滴度通过向点蜂缘蝽施用用两种糖类似物(AFH和DHPO)培养的伯克霍尔德氏菌或直接喂养AFH和DHPO来降低。
实例3：使用糖类似物来破坏椿象中共生体定殖
此实例描述了通过糖类似物的施用来破坏半翅目棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002261
)中肠共生体暂定种卡贝克泛菌的定殖，以减少昆虫适应度。
实验设计：
鉴定合成暂定种卡贝克泛菌的核心寡糖所需的基因
通过在Genbank中搜索暂定种卡贝克泛菌基因组(AB012554.1)，已经鉴定了用于合成核心寡糖的四种基因(表9)。这四种基因的鉴定表明卡贝克泛菌在其细胞表面合成核心寡糖。另外，这四种基因与来自豆虫(点蜂缘蝽)的肠共生体伯克霍尔德氏菌的途径中的基因具有高度相似性。
表9：棕色大理石纹蝽(茶翅蝽)中共生体暂定种卡贝克泛菌的核心寡糖相关基因。
核心寡糖合成的必需酶 基因ID 暂定种卡贝克泛菌基因组(AB012554.1)中的基因定位
WaaA KdtA 126758至128047
WaaC RfaC 130803至131774
WaaF RfaF 131780至132826
WaaG RfaG 128127至129263
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
茶翅蝽无滞育的实验室群体最初来自新泽西州农业部，Phillip Alampi有益昆虫实验室并且在实验室的饲养笼中维持(具有24乘24网格的299立方厘米，BioQuip产品，加利福尼亚州多明格斯牧场(Rancho Dominguez，CA))。它们被保持在生长室(28℃，相对湿度60％-70％，和16:8[L:D]h的光周期)中，并且提供包括基于绿豆和卵的人工饲料的饲料。分别向笼中提供绿豆植物和大叶黄杨(Euonymus japonicus)植物以用于茶翅蝽产卵和休息。
通过喷雾茶翅蝽的卵块来施用糖类似物
AHF和DHPO在水中的工作浓度是100μg/ml。在产卵高峰期，一天中从种群中去除了叶圆盘上共30个的卵块。有两个糖类似物(AHF和DHPO)处理和一个水喷雾的阴性对照，在有盖培养皿中被设置为每个含有10个卵块。在每个深的有盖培养皿(15mm x 100mm)中，将十个卵块朝上放置。使用Master Airbrush品牌压缩机型号C-16-B黑色迷你喷枪空气压缩机将AHF、DHPO或水(阴性对照)应用在卵块上(每个有盖培养皿1ML)。在处理之前、之后和之间用乙醇清洁压缩机。使用四分之一英寸的管将液体通过压缩机进料。每次处理使用新管。
茶翅蝽适应度和繁殖力的测量
将喷雾的卵块在与以上的实验室群体饲养部分中相同的条件下饲养。记录每个卵块所孵化的卵的数目，并且然后对每个重复的所有质量进行平均。饲养每个容器中新孵化的若虫以确定存活至第二龄的数量。在每个龄期，每天通过计数死亡昆虫来估计若虫的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。最后，记录所有适应度参数。在处死之前，不向昆虫提供绿豆24h，以排除饲料的重量。
通过qPCR定量暂定种卡贝克泛菌滴度
通过使用血液和细胞培养DNA迷你试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，目录号13323)来从中肠的M4和M4B部分提取总DNA，并且在200μL水中洗脱提取的DNA。使用具有引物(正向：GCATATAAAGATTTTACTCTTTAGGTGGC(SEQ ID NO:5)和反向：CTCGAAAGCACCAATCCATTTCT(SEQID NO:6))的iTaq SYBR green(伯乐公司)和Applied Biosystems QuantStudio 7 FlexQPCR system(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher))来进行定量PCR(qCPR)(Bansal等人2014)。使用椿象线粒体DNA的两个对照引物(正向：CGAATCCCATTGTTTGTGTG(SEQ ID NO:7)和反向：AGGGTCTCCTCCTCCTGATG(SEQ ID NO:8))(Bansal等人2014)。每个PCR混合物含有10μL的体积。使用1.6℃/s的qPCR扩增斜率和以下条件进行qPCR：1)95℃持续10分钟，2)95℃持续15秒，3)60℃持续30秒，4)重复步骤2-3 40x，5)95℃持续15秒，6)60℃持续1分钟，7)斜率改变为0.15℃/s，8)95℃持续1秒。使用分析软件(赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific)，QuantStudio设计和分析)分析qPCR数据。
与从仅喷洒水的卵孵化的阴性对照后代相比，预期通过用两种糖类似物(AFH和DHPO)喷雾卵块，来降低茶翅蝽后代的中肠中的滴度。
与从仅喷洒水的卵孵化的阴性对照后代相比，预期通过用两种糖类似物(AFH和DHPO)喷雾卵块，来降低茶翅蝽后代的适应度和繁殖力。
总之，预期在这些实例中描述的数据证明了使用多个递送方法用定殖破坏剂处理几种半翅目昆虫以杀死和降低半翅目昆虫发育、繁殖能力、寿命、和/或内源性细菌群体的能力(例如，适应度)。
以下提供了证明在其各自的半翅目昆虫宿主，棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002281
)和豆虫(点蜂缘蝽)中降低细菌共生体暂定种卡贝克泛菌(后面称为“P.carbekii”)和伯克霍尔德氏菌降低了每种昆虫适应度的实例。
实例4.昆虫中肠共生体的去除降低了宿主适应度
此实例证明了在半翅目昆虫宿主，棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002282
)中，细菌共生体暂定种卡贝克泛菌(后面称为“P.carbekii”)定殖的破坏降低了宿主的适应度。图8显示了茶翅蝽的发育阶段。
实验设计：
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
茶翅蝽无滞育的实验室群体获得自新泽西州农业部Phillip Alampi有益昆虫实验室(BIRL)。从BIRL收到后，将实验室群体维持在赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific)的环境培养箱中(24℃，环境湿度和16:8[L:D]的光周期)。向成虫的笼喂养新鲜的绿豆，以及花生、向日葵种子和荞麦的种子混合物；每隔一天换一次绿豆，并且每周换一次种子混合物。每天从群体笼中收集卵群，并且将其放入仅含有5mL水管(填塞有棉花)的孵化容器(所有卵群放入单个容器)中。孵化后，给若虫提供含有豌豆、杏仁、荞麦、向日葵种子、麦芽、抗坏血酸和韦森盐的饲料小球(随意)。
处理卵以除去共生体
将四到五天龄的茶翅蝽卵群浸入无水(约95％)乙醇中5分钟，然后浸入8％的次氯酸钠(超强漂白剂)中45秒，并且最后用纯净水轻轻冲洗，然后放在纸巾上干燥。对照卵是放置未处理的。为了确认处理的功效，如下所述，从第2龄、第3龄和第4龄的处理与对照若虫的亚群中提取DNA，并且针对卡贝克泛菌共生体使用qPCR来筛选该DNA。处理组中卡贝克泛菌丰度降低(图1)。
通过RT-qPCR定量卡贝克泛菌滴度
使用总的RNA分离和纯化试剂盒(均来自赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific))，从若虫提取总的RNA，并且将提取的RNA在100μL水中洗脱。使用具有靶向卡贝克泛菌DNAK基因的引物(正向引物序列：TGCAGAAATTTGTGGCGGTG(SEQ ID NO:1)；反向引物序列：CGTTGCCTCAGAAAACGGTG(SEQ ID NO:2))的RT-qPCR试剂盒(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))进行定量逆转录PCR(RT-qCPR)。椿象60S rRNA基因的引物(正向引物序列：AACAGGCAAGCTGCTATCTC(SEQ ID NO:3)和反向引物序列：CTGTCCCTTGGTGGTTCTTT(SEQ ID NO:4))被用于归一化细菌的量。每个PCR混合物均是10μL的体积。使用1.6℃/s的PCR扩增斜率和以下条件进行RT-qPCR：1)48℃持续30min；2)95℃持续10分钟；3)95℃持续15秒；4)55℃持续30秒；5)重复步骤3-4 40x，6)；95℃持续15秒；7)55℃持续1分钟；8)斜率改变至0.15℃/s；9)95℃持续1秒。使用分析软件(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))分析RT-qPCR数据。
设置重复和数据收集
卵处理后，允许卵孵化并发育到第二龄(幼虫在此期间仅需饮用水)。对每个重复，将每次处理的十个第二龄放在含有纸巾、水管和绿豆的塑料笼中；每周换一次水管，并且隔天换一次绿豆。对照处理的总重复为28，而漂白剂/乙醇处理的为23。针对每个重复，每天记录每一龄的存活数目和昆虫数目。与对照组相比，共生体去除增加了连续发育龄之间的平均时间(图2A)，并且使成虫期平均时间增加了6天(图2B)。
一旦若虫达到成虫期，则将来自每个处理组的成虫分别合并到大的群体笼中，每天计数成虫、卵块和卵/块数目(雄性和雌性)。
与对照相比，从乙醇处理的和漂白的卵饲养的雌性，每个卵块的平均卵数显著较低(图4)。表10显示了对照组和漂白组雌性的繁殖力比较。与对照相比，从漂白剂和乙醇处理的卵(漂白的)饲养的雌性产生比对照低42％的卵块，和低48.1％的总卵数。
表10.处理与对照的成虫雌性茶翅蝽个体的繁殖力比较。
Figure BDA0002958262120002301
(*)表示在每个重复中，当产下第一个卵(生殖成熟)时，存在的雌性数目的平均的测量值。
从漂白剂/乙醇处理组或对照组的相同年龄茶翅蝽个体中解剖肠。在漂白剂/乙醇处理组中，观察到肠健康较差，并且肠的含有共生体的v4区退化(图3A)。
观察到漂白剂/乙醇处理组或对照组中，相同年龄茶翅蝽个体间的昆虫大小和颜色不同(图3B)。
测量了所有雄性和雌性的前胸背板的宽度(用于椿象的标准适应度测量)以进行比较。从漂白的卵孵化的雄性或雌性个体中，前胸宽度显著降低(图3C)。
实例5：通过改变共生体中聚羟基链烷酸酯(PHA)的合成能力来破坏昆虫中的肠共生体定殖
此实例证明了通过施用聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂来破坏棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002311
)中肠共生体卡贝克泛菌的定殖。
实验设计：
使用的聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂是香兰素、乙酰丙酸、丙烯酸(AA)、和2-溴辛酸(2BA)。
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
如实例4中所述饲养茶翅蝽无滞育实验室群体。每天从群体笼中收集卵群，并且将其放入含有30mL水管(填塞有棉花)、新鲜绿豆、和花生的种子混合物的孵化容器(最多每个容器5个卵群)中。
通过卵块处理施用PHA合成抑制剂：
将水中的PHA合成抑制剂(香兰素、乙酰丙酸、丙烯酸(AA)、和2-溴辛酸(2BA))的工作浓度达到100μg/ml。在PHA抑制剂溶液中掺入非离子湿化液，以达到0.025％的最终浓度，以增加卵上药剂的润湿性和扩散。作为阴性对照，不向0.025％的非离子湿化液添加药剂，并且作为阳性对照，使用了100μg/ml的抗生素利福霉素S。在产卵高峰期，每一天中从种群中去除叶圆盘上卵块。然后将每个卵块放在底部有纸巾的容器中，并且将用棉花塞填的水管作为孵化幼体的水源提供。将100μl的药剂移液到卵上以完全湿润卵。这允许在细菌能定殖到宿主之前药剂与细菌直接相互作用。一旦孵化的第1龄幼虫脱皮至第2龄幼虫阶段，则以500mg饮食小球的形式提供饲料(参见上文“茶翅蝽实验室群体的饲养和维护”)。如实例4中所述，收集第2龄并且将其冷冻以提取DNA，来测定共生体水平。
结果
与阴性(水)对照相比，阳性对照(利福霉素S)中卡贝克泛菌的水平显著降低。相对于水对照，使用的所有四种PHA抑制剂(香兰素、乙酰丙酸、丙烯酸(AA)和2-溴辛酸(2BA))均导致每个宿主的共生体水平降低(图5)。
基于实例4的结果(显示具有降低的卡贝克泛菌定殖的茶翅蝽的适应度降低)，较低的共生体水平可能导致PHA抑制剂处理的昆虫的适应度降低。PHA合酶抑制剂被认为可用于本发明。
实例6.通过改变共生体中细胞壁组分的生物合成来破坏昆虫中的肠共生体定殖
此实例证明了通过施用UppP抑制剂(杆菌肽)来破坏棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002321
)中肠共生体卡贝克泛菌的定殖。
实验设计
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
如实例4中所述饲养茶翅蝽无滞育实验室群体。每天从群体笼中收集卵群，并且将其放入含有30mL水管(填塞有棉花)、新鲜绿豆、和花生的种子混合物的孵化容器(最多每个容器5个卵群)中。
通过卵块处理施用UppP抑制剂：
将杆菌肽在水中的工作浓度达到100μg/ml，并且掺入
Figure BDA0002958262120002322
L-77，以达到0.025％的最终浓度，以增加卵上药剂的润湿性和扩散。作为阴性对照，不向湿化液添加药剂，并且作为阳性对照，使用了100μg/ml的抗生素利福霉素S。在产卵高峰期，每一天中从种群中去除叶圆盘上卵块。然后将每个卵块放在底部有纸巾的容器中，并且将用棉花塞填的水管作为孵化幼体的水源提供。将100μl的药剂移液到卵上以完全湿润卵。这允许在细菌能定殖到宿主之前药剂与细菌直接相互作用。一旦孵化的第1龄幼虫脱皮至第2龄幼虫阶段，则以以上所述的500mg小球的人工饲料的形式提供食物。将相同食物提供给第2龄，直到其脱皮至第3龄阶段。如实例4中所述，收集第三龄并且将其冷冻以提取DNA，来测定共生体水平。
结果
与阴性对照相比，阳性对照(利福霉素S)和杆菌肽处理组中卡贝克泛菌的水平显著降低(图6)。基于实例4的结果(显示具有降低的卡贝克泛菌定殖的茶翅蝽的适应度降低)，较低的共生体水平可能导致UppP抑制剂处理的昆虫的适应度降低。UppP抑制剂被认为可用于本发明。
实例7.通过干扰共生体中的鞭毛机制来破坏昆虫中的肠共生体定殖
此实例证明了通过施用鞭毛功能抑制剂(纤维素)来破坏半翅目昆虫宿主，棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002331
)中的肠共生体卡贝克泛菌的定殖。
实验设计
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
如实例4中所述饲养茶翅蝽无滞育实验室群体。每天从群体笼中收集卵群，并且将其放入含有30mL水管(填塞有棉花)、新鲜绿豆、和花生的种子混合物的孵化容器(最多每个容器5个卵群)中。
通过卵块处理施用鞭毛功能抑制剂：
纤维素在水中的工作浓度达到100μg/ml。在纤维素的溶液中掺入非离子湿化液，以达到0.025％的最终浓度，以增加卵上药剂的润湿性和扩散。作为阴性对照，不向湿化液添加药剂，并且作为阳性对照，使用了100μg/ml的抗生素利福霉素S。在产卵高峰期，每一天中从种群中去除叶圆盘上卵块。然后将每个卵块放在底部有纸巾的容器中，并且将用棉花塞填的水管作为孵化幼体的水源提供。将100μl的药剂移液到卵上以完全湿润卵。这允许药剂与细菌直接相互作用，甚至在细菌能定殖到宿主之前。一旦孵化的第1龄幼虫脱皮至第2龄幼虫阶段，则以以上所述的500mg小球的人工饲料的形式提供食物。将相同食物提供给第2龄，直到其脱皮至第3龄阶段。如实例4中所述，收集第三龄并且将其冷冻以提取DNA，来测定共生体水平。
结果
与阴性对照相比，阳性对照(利福霉素S)和纤维素处理组中卡贝克泛菌的水平显著降低(图7)。使用的细菌鞭毛功能抑制剂造成了每个宿主中共生体水平的降低。基于实例4的结果(显示具有降低的卡贝克泛菌定殖的茶翅蝽的适应度降低)，较低的共生体水平可能导致鞭毛功能抑制剂处理的昆虫的适应度降低。鞭毛功能抑制剂被认为可用于本发明。
实例8.使用糖类似物来破坏椿象中共生体定殖
此实例描述了通过糖类似物的施用来破坏半翅目棕色大理石纹蝽(茶翅蝽
Figure BDA0002958262120002341
)中肠共生体卡贝克泛菌的定殖。提供此实例以评估糖类似物杀死和减少半翅目昆虫的发育、繁殖能力、寿命和内生细菌种群(例如适应度)的能力。
实验设计
鉴定合成卡贝克泛菌的核心寡糖所需的基因
通过在Genbank中搜索卡贝克泛菌基因组(AB012554.1)，已经鉴定了用于合成核心寡糖的四种基因(表11)。这四种基因的鉴定表明卡贝克泛菌能在其细胞表面合成核心寡糖。这些数据为破坏卡贝克泛菌在茶翅蝽中定殖提供了依据，通过施用糖类似物来抑制核心寡糖合成过程。
表11.来自棕色大理石纹蝽(茶翅蝽)中共生体暂定种卡贝克泛菌的核心寡糖相关的基因
Figure BDA0002958262120002342
茶翅蝽实验室群体的饲养与维持
如实例4中所述获得茶翅蝽无滞育实验室群体。从BIRL收到后，如上所述，将昆虫保持在生长室内，并且提供小球饲料。分别向笼中提供绿豆植物和大叶黄杨(Euonymusjaponicus)植物以用于茶翅蝽产卵和休息。
通过喷雾茶翅蝽的卵块来施用糖类似物
通过合同研究组织(Contract Research Organization，CRO)来合成两种糖类似物，ADP-2-氟庚糖(AFH)(Dohi等人,Chemistry[化学],14(31):9530-9539,2008)和2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)(Moreau等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机与药物化学快报],18(14):4022-4026,2008)，其抑制WaaC(庚糖基(heptosyl)转移酶)的功能。
AFH和DHPO在水中的工作浓度是100μg/ml。在产卵高峰期，一天中从种群中去除了叶圆盘上共30个的卵块。在每个深的有盖培养皿(15mm x 100mm)的壁上，将十个卵块朝上放置。使用Master Airbrush品牌压缩机型号C-16-B黑色迷你喷枪空气压缩机将AFH、DHPO或水(阴性对照)应用在卵块上(每个有盖培养皿1mL)。在处理之前、之后和之间用乙醇清洁压缩机。使用四分之一英寸的管将液体通过压缩机进料。每次处理使用新管。
茶翅蝽适应度和繁殖力的测量
在以上所述的条件下饲养喷雾的卵块。记录每个卵块所孵化的卵的数目，并且然后对每个重复的所有质量进行平均。饲养每个容器中新孵化的若虫以确定存活至第二龄的数量。在每个龄期，每天通过计数死亡昆虫来估计若虫的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。最后，记录所有适应度参数。在处死之前，不向昆虫提供绿豆24h，以排除饲料的重量。
通过RT-qPCR定量卡贝克泛菌滴度
使用RNA分离和纯化试剂盒(均来自赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific))，从若虫提取总的RNA，并且将提取的RNA在100μL水中洗脱。使用具有靶向卡贝克泛菌DNAK基因的引物(正向引物序列：TGCAGAAATTTGTGGCGGTG(SEQ ID NO:1)；反向引物序列：CGTTGCCTCAGAAAACGGTG(SEQ ID NO:2))的RT-qPCR试剂盒(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))进行定量逆转录PCR(RT-qCPR)。椿象60S rRNA基因的引物(正向引物序列：AACAGGCAAGCTGCTATCTC(SEQ ID NO:3)和反向引物序列：CTGTCCCTTGGTGGTTCTTT(SEQ ID NO:4))被用于归一化细菌的量。每个PCR混合物均是10μL的体积。使用1.6℃/s的PCR扩增斜率和以下条件进行RT-qPCR：1)48℃持续30min；2)95℃持续10分钟；3)95℃持续15秒；4)55℃持续30秒；5)重复步骤3-4 40x，6)；95℃持续15秒；7)55℃持续1分钟；8)斜率改变至0.15℃/s；9)95℃持续1秒。使用分析软件(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))分析RT-qPCR数据。
鉴于合适的对照，降低茶翅蝽后代适应度或繁殖力或两者的糖类似物在本发明中是有用的。
实例9.通过改变共生体细胞壁特性来破坏豆虫(点蜂缘蝽)中肠的共生体定殖
此实例证明了通过施用聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂香兰素或香兰素类似物来破坏半翅目昆虫，豆虫(点蜂缘蝽)中的肠共生体伯克霍尔德氏菌定殖。提供此实例以评估此破坏造成昆虫适应度减少的能力。
豆虫点蜂缘蝽(半翅目：异翅目：缘蝽科)是恶名昭著的豆科作物(如大豆和豇豆)的有害生物。点蜂缘蝽含有伯克霍尔德氏菌属的特殊肠共生体，其是由二龄若虫从环境中口服获得。豆虫在中肠后第四区(M4)具有专门的共生器官(隐窝)，以容纳共生体。
实验设计：
昆虫饲养和伯克霍尔德氏菌感染
在昆虫培养箱中，在28℃下，在16h光照和8h黑暗的长日条件下，饲养点蜂缘蝽豆虫。简而言之，在补充有大豆种子和含有0.05％抗坏血酸的蒸馏水(DWA)的干净塑料容器中饲养若虫。每天清洗塑料容器，并且每2天更换新鲜的大豆种子和DWA。当昆虫成为成虫时，将这些昆虫转移至具有大豆种子和DWA的大塑料容器。另外，棉垫被附接至塑料容器的壁上以用于产卵。每天收集卵并且将这些卵转移至新笼子以用于孵化。当新生的若虫脱皮至第二龄若虫时，小培养皿中提供含有107个细胞/ml的培养的伯克霍尔德氏菌的DWA，以用于豆虫的伯克霍尔德氏菌的定殖。使用的伯克霍尔德氏菌共生体是利福平抗性(Rfr)自发突变体菌株RPE75(由Takema Fukatsu博士，产业技术综合研究所(National Institute ofAdvanced Industrial Science and Technology(AIST)，筑波中心(Tsukuba Center)，日本筑波提供)。
用PHA合成抑制剂香兰素培养的伯克霍尔德氏菌的施用
PHA合成抑制剂(香兰素)购自西格玛-奥德里奇公司(目录号V1104-2G)。YG培养基(0.5％酵母提取物、0.4％葡萄糖和0.1％NaCl)中，以1g/ml的工作浓度被制备香兰素。将共生菌株在30℃下，在转动摇床(150rpm)的YG培养基(含有50μg/ml利福平)中生长至早期对数期。对于阳性对照，伯克霍尔德氏菌仅在YG培养基中培养。通过将培养基铺板在含有足够抗生素的YG琼脂板上来估计菌落形成单元(CFU)值。将共生体细胞通过离心培养基收获，悬浮在DWA中，并且调节至DWA中104CFU/mL。
在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。然后，将含有104CFU/mL共生体细胞的DWA供应至饲养容器中持续24h，其中可利用第二龄若虫以获得用PHA合酶抑制剂培养的伯克霍尔德菌共生体或仅在YG培养基中培养的阳性对照伯克霍尔德菌。然后，含有共生体的DWA被不含有共生体的DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
PHA合成抑制剂香兰素直接喂养至点蜂缘蝽
在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。第二天，将香兰素溶液(1mg/ml)与104CFU/mL共生体细胞一起供应至饲养容器中持续24h，其中可利用第二龄若虫以获得PHA合酶抑制剂香兰素和伯克霍尔德氏菌共生体。阳性对照是仅用104CFU/mL共生体细胞喂养的若虫。然后，将含有共生体的DWA被DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
通过qPCR定量在点蜂缘蝽的中肠中定殖的伯克霍尔德氏菌
使用具有靶向伯克霍尔德氏菌共生体的dnaA基因的0.15kb区的引物BSdnaA-F和BSdnaA-R的qPCR试剂盒(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher))进行定量PCR(qPCR)，如(Kikuchi等人,Applied and Environmental Microbiology[应用与环境微生物学],77:4075-4081,2011；Kikuchi和Fukatsu,Molecular Ecology[分子生物学],23:1445-1456,2014)中所述的。通过使用血液和细胞培养DNA迷你试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，目录号13323)来从中肠的M4和M4B部分提取总DNA，并且在200μL水中洗脱提取的DNA。每个PCR混合物含有10μL的体积。使用1.6℃/s的qPCR扩增斜率和以下条件进行qPCR：1)95℃持续10分钟；2)95℃持续15秒；3)60℃持续30秒；4)重复步骤2-3 40x；5)95℃持续15秒；6)60℃持续1分钟；7)斜率改变至0.15℃/s；8)95℃持续1秒。用引物BSdnaA-F和BSdnaA-R扩增的目标PCR片段的标准样品生成dnaA基因的标准曲线。使用分析软件(赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher Scientific))分析qPCR数据。
点蜂缘蝽适应度的测量
每天通过计数死亡昆虫来估计向二龄若虫和两个阳性对照施用PHA合酶抑制剂香兰素培养的伯克霍尔德菌或直接喂食香兰素后的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。在处死之前，不向昆虫提供大豆种子24h，以排除大豆的重量。
鉴于合适的对照，降低点蜂缘蝽后代中伯克霍尔德氏菌的滴度的香兰素或其类似物在本发明中是有用的。
实例10.通过施用糖类似物来破坏豆虫中的共生体定殖
此实例证明在半翅目模型(豆虫，点蜂缘蝽)中，通过施用糖类似物(ADP-2-氟庚糖(AFH)和2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO))来破坏伯克霍尔德氏菌定殖。提供此实例以评估此破坏造成昆虫适应度减少的能力。
实验设计
昆虫饲养和伯克霍尔德氏菌感染
如实例6中所述来饲养点蜂缘蝽。
用糖类似物培养的伯克霍尔德氏菌的施用
通过合同研究组织(Contract Research Organization，CRO)来合成两种糖类似物，ADP-2-氟庚糖(AFH)(Dohi等人,Chemistry[化学],14(31):9530-9539,2008)和2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)(Moreau等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机与药物化学快报],18(14):4022-4026,2008)，其抑制WaaC(庚糖基(heptosyl)转移酶)的功能。
YG培养基中制备的AFH和DHPO的工作浓度是1g/ml。将共生菌株在30℃下，在转动摇床(150rpm)的YG培养基(含有50μg/ml利福平)中生长至早期对数期。伯克霍尔德氏菌的阳性对照仅在YG培养基中培养。通过将培养基铺板在含有足够抗生素的YG琼脂板上来估计菌落形成单元(CFU)值。将共生体细胞通过离心培养基收获，悬浮在DWA中，并且调节至DWA中104CFU/mL。
在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。然后，将含有104CFU/mL共生体细胞的DWA供应至饲养容器中持续24h，其中可利用第二龄若虫以获得用AFH或DHPO培养的伯克霍尔德菌共生体或仅在YG培养基中培养的阳性对照伯克霍尔德菌。然后，含有共生体的DWA被不含有共生体的DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
向点蜂缘蝽直接喂养糖类似物
通过CRO合成AFH和DHPO。AFH和DHPO工作溶液(1g/ml)是由储备溶液融于蒸馏水制成的。将两种糖类似物的工作溶液分配到饲管中并且放入塑料饲养容器中以用于喂食豆虫。在第一龄若虫脱皮至第二龄后，立即将DWA从饲养容器中去除，以使若虫在无饮用水下过夜。第二天，将AFH和DHPO溶液与104CFU/mL共生体细胞一起供应至饲养容器中持续24h，其中可利用第二龄若虫，以导致获得AFH或DHPO和伯克霍尔德氏菌共生体。阳性对照是仅用104CFU/mL共生体细胞喂养的若虫。然后，将含有共生体的DWA被DWA替代，并且将若虫饲养至成虫期。
通过qPCR定量在点蜂缘蝽的中肠中定殖的伯克霍尔德氏菌
如实例6中所述进行定量PCR(qCPR)。
点蜂缘蝽适应度的测量
每天通过计数死亡昆虫来估计向二龄若虫和两个阳性对照施用AFH或DHPO培养的伯克霍尔德菌或直接喂食AFH或DHPO后的存活率，直到孵化后第25天。通过计数来自五龄后若虫的新脱皮成虫来估计成虫出现率。为了测量体长和体重，将成虫(脱皮后3天)浸没在丙酮中5min来处死，并且在70℃烘箱中完全干燥30min。最后，记录所有适应度参数。在处死之前，不向昆虫提供大豆种子24h，以排除大豆的重量。
鉴于合适的对照，降低点蜂缘蝽后代中伯克霍尔德氏菌的滴度的糖类似物在本发明中是有用的。
其他实施例
本发明的一些实施例在以下编号的段落内。
1.一种减少昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包含细菌定殖破坏剂的组合物。
2.一种抑制昆虫肠中细菌定殖的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包含细菌定殖破坏剂的组合物。
3.如段落2所述的方法，其中相对于未处理的昆虫，该方法有效增加昆虫的适应度。
4.如段落1-3中任一项所述的方法，其中该细菌定殖破坏剂是聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂。
5.一种减少昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包含PHA合成抑制剂的组合物。
6.如段落4或5所述的方法，其中该PHA合成抑制剂是香兰素。
7.如段落4或5所述的方法，其中该PHA合成抑制剂是表1中的一种或多种化合物。
8.如段落4或5所述的方法，其中该PHA合成抑制剂是乙酰丙酸。
9.如段落4或5所述的方法，其中该PHA合成抑制剂是丙烯酸。
10.如段落4或5所述的方法，其中该PHA合成抑制剂是2-溴辛酸。
11.如段落1-3中任一项所述的方法，其中该细菌定殖破坏剂是细菌细胞包膜生物发生的抑制剂。
12.如段落11所述的方法，其中该细菌细胞包膜生物发生的抑制剂是脂多糖(LPS)合成抑制剂。
13.一种减少昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包含LPS合成抑制剂的组合物。
14.如段落12或13所述的方法，其中该LPS合成抑制剂是细菌中核心寡糖合成的抑制剂。
15.如段落14所述的方法，其中该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的酶。
16.如段落15所述的方法，其中该酶与具有WaaA、WaaC、WaaF、或WaaG的氨基酸序列的多肽具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
17.如段落12-16中任一项所述的方法，其中该LPS合成抑制剂是糖。
18.如段落17所述的方法，其中该糖是ADP-2-氟庚糖(AFH)。
19.如段落17所述的方法，其中该糖是2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)。
20.如段落17所述的方法，其中该糖是AFH和DHPO。
21.如段落17所述的方法，其中该糖是表7中的一种或多种化合物。
22.如段落14所述的方法，其中该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的基因的表达。
23.如段落22所述的方法，其中该基因与具有waaA、waaC、waaF、或waaG的核苷酸序列的多核苷酸具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
24.如段落1-3中任一项所述的方法，其中该细菌定殖破坏剂是细菌细胞壁生物发生的抑制剂。
25.如段落24所述的方法，其中该细菌细胞壁生物发生抑制剂是十一碳异戊二烯基焦磷酸酯磷酸酶(UppP)的抑制剂。
26.如段落25所述的方法，其中该UppP的抑制剂是杆菌肽。
27.如段落1-3中任一项所述的方法，其中该细菌定殖破坏剂是鞭毛功能的抑制剂。
28.如段落27所述的方法，其中该鞭毛功能的抑制剂是纤维素。
29.如段落1-28中任一项所述的方法，其中该昆虫是植物有害生物。
30.如段落29所述的方法，其中该植物有害生物是以下目的成员：鞘翅目、双翅目、半翅目、鳞翅目、直翅目、缨翅目或蜱螨目。
31.如段落30所述的方法，其中该昆虫是椿象、豆虫、甲虫、象鼻虫、蝇、蚜虫、粉虱、叶蝉、介壳虫、蛾、蝴蝶、蚱蜢、蟋蟀、蓟马、或螨。
32.如段落31所述的方法，其中该昆虫是蜂缘蝽属的。
33.如段落32所述的方法，其中该昆虫是翅蝽属的。
34.如段落1-33中任一项所述的方法，其中该昆虫是动物病原体和/或人病原体的媒介。
35.如段落34所述的方法，其中该昆虫是蚊子、蠓、虱子、白蛉、蜱、锥蝽臭虫、采采蝇、或跳蚤。
36.如段落1-35中任一项所述的方法，其中该细菌是内共生细菌。
37.如段落36所述的方法，其中该内共生体寄宿于昆虫的肠中。
38.如段落37所述的方法，其中该细菌寄宿于昆虫肠中的专门的细胞或专门的器官。
39.如段落38所述的方法，其中该专门的器官是中肠隐窝或怀菌体。
40.如段落38所述的方法，其中该专门的细胞是含菌细胞。
41.如段落36-40中任一项所述的方法，其中该内共生细菌是伯克霍尔德氏菌属的。
42.如段落36-40中任一项所述的方法，其中该内共生细菌是泛菌属的。
43.如段落1、2和4-41中任一项所述的方法，其中相对于未处理的昆虫，该方法有效减少昆虫的适应度。
44.如段落43所述的方法，其中该昆虫适应度的减少是繁殖能力、存活、发育率、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、或重量的减少。
45.如段落1-44中任一项所述的方法，其中相对于未处理的昆虫，该方法有效减少昆虫肠中的细菌定殖。
46.如段落1-45中任一项所述的方法，其中将该组合物递送至昆虫，到昆虫生长、生活、或繁殖的至少一个栖息地。
47.如段落1-46中任一项所述的方法，其中该组合物是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶、或气体组合物。
48.如段落1-47中任一项所述的方法，其中将该组合物作为昆虫可食用组合物递送，以被该昆虫摄取。
49.如段落1-48中任一项所述的方法，其中将该组合物递送至昆虫的卵。
50.如段落1-49中任一项所述的方法，其中将该组合物通过摄取、输注、注射、或喷雾向昆虫递送。
51.如段落1-50中任一项所述的方法，其中该组合物包含农业上可接受的载剂。
52.一种经修饰的昆虫，该经修饰的昆虫通过包括将该昆虫与包含根据段落1-51中任一项所述的方法的细菌定殖破坏剂的组合物接触的方法产生。
53.一种鉴定细菌定殖破坏剂的筛选测定，该测定包括以下步骤：
(a)将目标昆虫暴露于一种或多种药剂；以及
(b)鉴定药剂，该药剂：
(i)减少了目标昆虫的适应度，并且
(ii)抑制目标昆虫的肠中细菌的定殖。
54.如段落53所述的测定，其中该适应度的减少是目标昆虫减少的存活。
55.如段落53所述的测定，其中该适应度的减少是繁殖能力、存活、发育率、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、或体重的减少。
56.如段落53-55中任一项所述的测定，其中该细菌是内共生细菌。
57.如段落56所述的测定，其中该内共生细菌寄宿于昆虫的肠中。
58.如段落57所述的测定，其中该细菌寄宿于昆虫肠中的专门的细胞或专门的器官。
59.如段落58所述的测定，其中该专门的器官是中肠隐窝或怀菌体。
60.如段落58所述的测定，其中该专门的细胞是含菌细胞。
61.如段落53-58中任一项所述的测定，其中该细菌是伯克霍尔德氏菌属的。
62.如段落53-60中任一项所述的测定，其中该细菌是泛菌属的。
63.如段落53-62中任一项所述的测定，其中该昆虫是植物有害生物。
64.如段落63所述的测定，其中该植物有害生物是以下目的成员：鞘翅目、双翅目、半翅目、鳞翅目、直翅目、缨翅目或蜱螨目。
65.如段落53-62中任一项所述的测定，其中该昆虫是动物病原体和/或人病原体的媒介。
66.如段落65所述的测定，其中该昆虫是蚊子、蠓、虱子、白蛉、蜱、锥蝽臭虫、采采蝇、或跳蚤。
67.一种经修饰的昆虫，该经修饰的昆虫通过包括将该昆虫与包含细菌定殖破坏剂的组合物接触的方法产生，该细菌定殖破坏剂通过如段落53-66中任一项所述的筛选测定鉴定。
68.一种减少昆虫适应度的方法，该方法包括向昆虫递送有效量的包含细菌定殖破坏剂的组合物，该细菌定殖破坏剂通过如段落53-66中任一项所述的筛选测定鉴定。
69.一种包含细菌定殖破坏剂和载剂的组合物，其中该组合物被配制以用于递送至昆虫，或其栖息地。
70.如段落69所述的组合物，其中该细菌定殖破坏剂是聚羟基链烷酸酯(PHA)合成抑制剂。
71.如段落70所述的组合物，其中该PHA合成抑制剂是香兰素。
72.如段落70所述的组合物，其中该PHA合成抑制剂是表1中的一种或多种化合物。
73.如段落70所述的组合物，其中该PHA合成抑制剂是乙酰丙酸。
74.如段落70所述的组合物，其中该PHA合成抑制剂是丙烯酸。
75.如段落70所述的组合物，其中该PHA合成抑制剂是2-溴辛酸。
76.如段落69所述的组合物，其中该细菌定殖破坏剂是细菌细胞包膜生物发生的抑制剂。
77.如段落76所述的组合物，其中该细菌细胞包膜生物发生的抑制剂是脂多糖(LPS)合成抑制剂。
78.如段落77所述的组合物，其中该LPS合成抑制剂是细菌中核心寡糖合成的抑制剂。
79.如段落77或78所述的组合物，其中该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的酶。
80.如段落79所述的组合物，其中该酶与具有WaaA、WaaC、WaaF、或WaaG的氨基酸序列的多肽具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
81.如段落78-80中任一项所述的组合物，其中该LPS合成抑制剂是糖。
82.如段落81所述的组合物，其中该糖是ADP-2-氟庚糖(AFH)。
83.如段落81所述的组合物，其中该糖是2-芳基-5-甲基-4-(5-芳基-呋喃-2-基-亚甲基)-2,4-二氢-吡唑-3-酮(DHPO)。
84.如段落81所述的组合物，其中该糖是AFH和DHPO。
85.如段落81所述的组合物，其中该糖是表7中的一种或多种化合物。
86.如段落77或78所述的组合物，其中该LPS合成抑制剂抑制了涉及细菌中核心寡糖合成的基因的表达。
87.如段落86所述的组合物，其中该基因与具有waaA、waaC、waaF、或waaG的核苷酸序列的多核苷酸具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、或100％序列同一性。
88.如段落69所述的组合物，其中该细菌定殖破坏剂是细菌细胞壁生物发生的抑制剂。
89.如段落88所述的组合物，其中该细菌细胞壁生物发生抑制剂是UppP的抑制剂。
90.如段落89所述的组合物，其中该UppP的抑制剂是杆菌肽。
91.如段落69所述的组合物，其中该细菌定殖破坏剂是鞭毛功能的抑制剂。
92.如段落91所述的组合物，其中该鞭毛功能的抑制剂是纤维素。
93.如段落69-92中任一项所述的组合物，其中该细菌定殖破坏剂是该组合物的至少0.1％、0.2％、0.4％、0.5％、0.8％、1％、2％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％。
94.如段落69-93中任一项所述的组合物，其中该载剂是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶、或气体组合物。
95.如段落69-93中任一项所述的组合物，其中该载剂是糖糖浆、玉米糖浆、或蜂蜜。
96.如段落69-93中任一项所述的组合物，其中该载剂是纳米颗粒或脂膜。
97.如段落69-96中任一项所述的组合物，其中该组合物被配制用于通过摄取、输注、注射、喷雾、烟熏或雾化向昆虫递送。
98.如段落69-97中任一项所述的组合物，其中该组合物被配制用于递送至昆虫生长、生活、繁殖或进食的至少一个栖息地。
99.如段落69-98中任一项所述的组合物，其中该组合物被配制用于递送至被昆虫摄入的植物。
100.一种减少椿象的肠细菌定殖的方法，该方法包括：
(a)提供包含香兰素或其类似物的组合物；以及
(b)向椿象卵递送所述组合物，其中相对于从未处理的卵孵化的椿象的肠，从该卵孵化的椿象的肠具有减少的细菌定殖。
101.如段落100所述的方法，其中将该组合物递送至椿象的卵块。
102.如段落100所述的方法，其中该细菌定殖的减少降低了该椿象的适应度。
103.如段落102所述的方法，其中该椿象适应度的降低是繁殖能力、存活、发育率、卵的数目、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、体宽、体重、或角质层厚度的降低。
104.如段落100所述的方法，其中该定殖是在该肠的v4区中。
105.如段落104所述的方法，其中该肠的v4区的细菌定殖减少了至少10％。
106.如段落104所述的方法，其中该肠的v4区的尺寸减小。
107.如段落100所述的方法，其中该椿象是茶翅蝽属物种。
108.如段落107所述的方法，其中该椿象是茶翅蝽。
109.如段落100所述的方法，其中该细菌是内共生体。
110.如段落109所述的方法，其中该内共生体是泛菌属的。
111.如段落110所述的方法，其中该内共生体是暂定种卡贝克泛菌。
112.如段落100所述的方法，其中该组合物是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶、或气体组合物。
113.如段落100所述的方法，其中将该组合物作为喷雾递送。
114.如段落100所述的方法，其中该组合物包含农业上可接受的载剂。
115.如段落100所述的方法，其中该组合物包含湿化液。
尽管出于清楚理解的目的，已经通过说明和实例详细地描述了前述发明，但是描述和实例不应被解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的披露都明确地通过引用以其全文并入。
序列表
<110> 旗舰创业创新五公司
<120> 用于农业的组合物和相关方法
<130> 51215-012WO2
<150> US 62/703,304
<151> 2018-07-25
<160> 38
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
tgcagaaatt tgtggcggtg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
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<220>
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<210> 3
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
gcatataaag attttactct ttaggtggc 29
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
ctcgaaagca ccaatccatt tct 23
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
cgaatcccat tgtttgtgtg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
agggtctcct cctcctgatg 20
<210> 9
<211> 1526
<212> DNA
<213> Carsonella ruddii
<400> 9
tatccagcca caggttcccc tacagctacc ttgttacgac ttcaccccag ttacaaatca 60
taccgttgta atagtaaaat tacttatgat acaatttact tccatggtgt gacgggcggt 120
gtgtacaagg ctcgagaacg tattcaccgt aacattctga tttacgatta ctagcgattc 180
caacttcatg aaatcgagtt acagatttca atccgaacta agaatatttt ttaagattag 240
cattatgttg ccatatagca tataactttt tgtaatactc attgtagcac gtgtgtagcc 300
ctacttataa gggccatgat gacttgacgt cgtcctcacc ttcctccaat ttatcattgg 360
cagtttctta ttagttctaa tatattttta gtaaaataag ataagggttg cgctcgttat 420
aggacttaac ccaacatttc acaacacgag ctgacgacag ccatgcagca cctgtctcaa 480
agctaaaaaa gctttattat ttctaataaa ttctttggat gtcaaaagta ggtaagattt 540
ttcgtgttgt atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgagcccc cgtcaattca 600
tttgagtttt aaccttgcgg tcgtaatccc caggcggtca acttaacgcg ttagcttttt 660
cactaaaaat atataacttt ttttcataaa acaaaattac aattataata tttaataaat 720
agttgacatc gtttactgca tggactacca gggtatctaa tcctgtttgc tccccatgct 780
ttcgtgtatt agtgtcagta ttaaaataga aatacgcctt cgccactagt attctttcag 840
atatctaagc atttcactgc tactcctgaa attctaattt cttcttttat actcaagttt 900
ataagtatta atttcaatat taaattactt taataaattt aaaaattaat ttttaaaaac 960
aacctgcaca ccctttacgc ccaataattc cgattaacgc ttgcacccct cgtattaccg 1020
cggctgctgg cacgaagtta gccggtgctt cttttacaaa taacgtcaaa gataatattt 1080
ttttattata aaatctcttc ttactttgtt gaaagtgttt tacaacccta aggccttctt 1140
cacacacgcg atatagctgg atcaagcttt cgctcattgt ccaatatccc ccactgctgc 1200
cttccgtaaa agtttgggcc gtgtctcagt cccaatgtgg ttgttcatcc tctaagatca 1260
actacgaatc atagtcttgt taagctttta ctttaacaac taactaattc gatataagct 1320
cttctattag cgaacgacat tctcgttctt tatccattag gatacatatt gaattactat 1380
acatttctat atacttttct aatactaata ggtagattct tatatattac tcacccgttc 1440
gctgctaatt atttttttaa taattcgcac aacttgcatg tgttaagctt atcgctagcg 1500
ttcaatctga gctatgatca aactca 1526
<210> 10
<211> 1536
<212> DNA
<213> 暂定种粉虱（Portiera aleyrodidarum）BT-B
<400> 10
aagagtttga tcatggctca gattgaacgc tagcggcaga cataacacat gcaagtcgag 60
cggcatcata caggttggca agcggcgcac gggtgagtaa tacatgtaaa tatacctaaa 120
agtggggaat aacgtacgga aacgtacgct aataccgcat aattattacg agataaagca 180
ggggcttgat aaaaaaaatc aaccttgcgc ttttagaaaa ttacatgccg gattagctag 240
ttggtagagt aaaagcctac caaggtaacg atccgtagct ggtctgagag gatgatcagc 300
cacactggga ctgagaaaag gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga 360
caatgggggg aaccctgatc cagtcatgcc gcgtgtgtga agaaggcctt tgggttgtaa 420
agcactttca gcgaagaaga aaagttagaa aataaaaagt tataactatg acggtactcg 480
cagaagaagc accggctaac tccgtgccag cagccgcggt aagacggagg gtgcaagcgt 540
taatcagaat tactgggcgt aaagggcatg taggtggttt gttaagcttt atgtgaaagc 600
cctatgctta acataggaac ggaataaaga actgacaaac tagagtgcag aagaggaagg 660
tagaattccc ggtgtagcgg tgaaatgcgt agatatctgg aggaatacca gttgcgaagg 720
cgaccttctg ggctgacact gacactgaga tgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag 780
ataccctggt agtccacgct gtaaacgata tcaactagcc gttggattct taaagaattt 840
tgtggcgtag ctaacgcgat aagttgatcg cctggggagt acggtcgcaa ggctaaaact 900
caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgatgcaacg 960
cgcaaaacct tacctactct tgacatccaa agtactttcc agagatggaa gggtgcctta 1020
gggaactttg agacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgttgtgaa atgttgggtt 1080
aagtcccgta acgagcgcaa cccttgtcct tagttgccaa cgcataaggc gggaacttta 1140
aggagactgc tggtgataaa ccggaggaag gtggggacga cgtcaagtca tcatggccct 1200
taagagtagg gcaacacacg tgctacaatg gcaaaaacaa agggtcgcaa aatggtaaca 1260
tgaagctaat cccaaaaaaa ttgtcttagt tcggattgga gtctgaaact cgactccata 1320
aagtcggaat cgctagtaat cgtgaatcag aatgtcacgg tgaatacgtt ctcgggcctt 1380
gtacacaccg cccgtcacac catggaagtg aaatgcacca gaagtggcaa gtttaaccaa 1440
aaaacaggag aacagtcact acggtgtggt tcatgactgg ggtgaagtcg taacaaggta 1500
gctgtagggg aacctgtggc tggatcacct ccttaa 1536
<210> 11
<211> 1540
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）APS（豌豆长管蚜（Acyrthosiphon pisum））
<400> 11
agagtttgat catggctcag attgaacgct ggcggcaagc ctaacacatg caagtcgagc 60
ggcagcgaga agagagcttg ctctctttgt cggcaagcgg caaacgggtg agtaatatct 120
ggggatctac ccaaaagagg gggataacta ctagaaatgg tagctaatac cgcataatgt 180
tgaaaaacca aagtggggga ccttttggcc tcatgctttt ggatgaaccc agacgagatt 240
agcttgttgg tagagtaata gcctaccaag gcaacgatct ctagctggtc tgagaggata 300
accagccaca ctggaactga gacacggtcc agactcctac gggaggcagc agtggggaat 360
attgcacaat gggcgaaagc ctgatgcagc tatgccgcgt gtatgaagaa ggccttaggg 420
ttgtaaagta ctttcagcgg ggaggaaaaa aataaaacta ataattttat ttcgtgacgt 480
tacccgcaga agaagcaccg gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata cggagggtgc 540
aagcgttaat cagaattact gggcgtaaag agcgcgtagg tggtttttta agtcaggtgt 600
gaaatcccta ggctcaacct aggaactgca tttgaaactg gaaaactaga gtttcgtaga 660
gggaggtaga attctaggtg tagcggtgaa atgcgtagat atctggagga atacccgtgg 720
cgaaagcggc ctcctaaacg aaaactgaca ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag 780
gattagatac cctggtagtc catgccgtaa acgatgtcga cttggaggtt gtttccaaga 840
gaagtgactt ccgaagctaa cgcattaagt cgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct 900
aaaactcaaa tgaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat 960
gcaacgcgaa aaaccttacc tggtcttgac atccacagaa ttctttagaa ataaagaagt 1020
gccttcggga gctgtgagac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt tgtgaaatgt 1080
tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tatcccctgt tgccagcggt tcggccggga 1140
actcagagga gactgccggt tataaaccgg aggaaggtgg ggacgacgtc aagtcatcat 1200
ggcccttacg accagggcta cacacgtgct acaatggttt atacaaagag aagcaaatct 1260
gcaaagacaa gcaaacctca taaagtaaat cgtagtccgg actggagtct gcaactcgac 1320
tccacgaagt cggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg ccacggtgaa tacgttcccg 1380
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt gcaaaagaag caggtatcct 1440
aaccctttaa aaggaaggcg cttaccactt tgtgattcat gactggggtg aagtcgtaac 1500
aaggtaaccg taggggaacc tgcggttgga tcacctcctt 1540
<210> 12
<211> 1552
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）Sg（麦二叉蚜（Schizaphisgraminum））
<400> 12
aaactgaaga gtttgatcat ggctcagatt gaacgctggc ggcaagccta acacatgcaa 60
gtcgagcggc agcgaaaaga aagcttgctt tcttgtcggc gagcggcaaa cgggtgagta 120
atatctgggg atctgcccaa aagaggggga taactactag aaatggtagc taataccgca 180
taaagttgaa aaaccaaagt gggggacctt ttttaaaggc ctcatgcttt tggatgaacc 240
cagacgagat tagcttgttg gtaaggtaaa agcttaccaa ggcaacgatc tctagctggt 300
ctgagaggat aaccagccac actggaactg agacacggtc cagactccta cgggaggcag 360
cagtggggaa tattgcacaa tgggcgaaag cctgatgcag ctatgccgcg tgtatgaaga 420
aggccttagg gttgtaaagt actttcagcg gggaggaaaa aattaaaact aataatttta 480
ttttgtgacg ttacccgcag aagaagcacc ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat 540
acggagggtg cgagcgttaa tcagaattac tgggcgtaaa gagcacgtag gtggtttttt 600
aagtcagatg tgaaatccct aggcttaacc taggaactgc atttgaaact gaaatgctag 660
agtatcgtag agggaggtag aattctaggt gtagcggtga aatgcgtaga tatctggagg 720
aatacccgtg gcgaaagcgg cctcctaaac gaatactgac actgaggtgc gaaagcgtgg 780
ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgtcg acttggaggt 840
tgtttccaag agaagtgact tccgaagcta acgcgttaag tcgaccgcct ggggagtacg 900
gccgcaaggc taaaactcaa atgaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg 960
tttaattcga tgcaacgcga aaaaccttac ctggtcttga catccacaga attttttaga 1020
aataaaaaag tgccttcggg aactgtgaga caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg 1080
ttgtgaaatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttatcccctg ttgccagcgg 1140
ttcggccggg aactcagagg agactgccgg ttataaaccg gaggaaggtg gggacgacgt 1200
caagtcatca tggcccttac gaccagggct acacacgtgc tacaatggtt tatacaaaga 1260
gaagcaaatc tgtaaagaca agcaaacctc ataaagtaaa tcgtagtccg gactggagtc 1320
tgcaactcga ctccacgaag tcggaatcgc tagtaatcgt ggatcagaat gccacggtga 1380
atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tgcaaaagaa 1440
gcagatttcc taaccacgaa agtggaaggc gtctaccact ttgtgattca tgactggggt 1500
gaagtcgtaa caaggtaacc gtaggggaac ctgcggttgg atcacctcct ta 1552
<210> 13
<211> 828
<212> DNA
<213> 蚜虫布赫纳氏菌（Buchnera aphidicola）BCc
<400> 13
atgagatcat taatatataa aaatcatgtt ccaattaaaa aattaggaca aaatttttta 60
cagaataaag aaattattaa tcagataatt aatttaataa atattaataa aaatgataat 120
attattgaaa taggatcagg attaggagcg ttaacttttc ctatttgtag aatcattaaa 180
aaaatgatag tattagaaat tgatgaagat cttgtgtttt ttttaactca aagtttattt 240
attaaaaaat tacaaattat aattgctgat attataaaat ttgatttttg ttgttttttt 300
tctttacaga aatataaaaa atataggttt attggtaatt taccatataa tattgctact 360
atattttttt taaaaacaat taaatttctt tataatataa ttgatatgca ttttatgttt 420
caaaaagaag tagcaaagag attattagct actcctggta ctaaagaata tggtagatta 480
agtattattg cacaatattt ttataagata gaaactgtta ttaatgttaa taaatttaat 540
ttttttccta ctcctaaagt agattctact tttttacgat ttactcctaa atattttaat 600
agtaaatata aaatagataa acatttttct gttttagaat taattactag attttctttt 660
caacatagaa gaaaattttt aaataataat ttaatatctt tattttctac aaaagaatta 720
atttctttag atattgatcc atattcaaga gcagaaaatg tttctttaat tcaatattgt 780
aaattaatga aatattattt gaaaagaaaa attttatgtt tagattaa 828
<210> 14
<211> 921
<212> DNA
<213> 蚜虫布赫纳氏菌（Buchnera aphidicola）（柏大蚜（Cinara tujafilina））
<400> 14
ttatcttatt tcacatatac gtaatattgc gctgcgtgca cgaggatttt tttgaatttc 60
agatatattt ggtttaatac gtttaataaa acgtattttt ttttttattt ttcttatttg 120
caattcagta ataggaagtt ttttaggtat atttggataa ttactgtaat tcttaataaa 180
gttttttaca atcctatctt caatagaatg aaaactaata atagcaattt ttgatccgga 240
atgtaatatg ttaataataa tttttaatat tttatgtaat tcatttattt cttggttaat 300
atatattcga aaagcttgaa atgttctcgt agctggatgt ttaaatttgt catattttgg 360
gattgatttt tttatgattt gaactaactc taacgtgctt gttatggttt ttttttttat 420
ttgtaatatg atggctcggg atattttttt tgcgtatttt tcttcgccaa aattttttat 480
tacctgttct attgtttttt ggtttgtttt ttttaaccat tgactaactg atattccaga 540
tttagggttc atacgcatat ctaaaggtcc atcattcata aatgaaaatc ctcggatact 600
agaatttaac tgtattgaag aaatacctaa atctaataat attccatcta ttttatctct 660
atttttttct ttttttaata ttttttcaat attagaaaat ttacctaaaa atattttaaa 720
tcgcgaatct tttatttttt ttccgatttt tatagattgt gggtcttgat caatactata 780
taactttcca ttaaccccta attcttgaag aattgctttt gaatgaccac cacctccaaa 840
tgtacaatca acatatgtac cgtctttttt tatttttaag tattgtatga tttcttttgt 900
taaaacaggt ttatgaatca t 921
<210> 15
<211> 822
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）G002（桃蚜（Myzuspersicae））
<400> 15
atgaaaagta taaaaacttt taaaaaacac tttcctgtga aaaaatatgg acaaaatttt 60
cttattaata aagagatcat aaaaaatatt gttaaaaaaa ttaatccaaa tatagaacaa 120
acattagtag aaatcggacc aggattagct gcattaactg agcccatatc tcagttatta 180
aaagagttaa tagttattga aatagactgt aatctattat attttttaaa aaaacaacca 240
ttttattcaa aattaatagt tttttgtcaa gatgctttaa actttaatta tacaaattta 300
ttttataaaa aaaataaatt aattcgtatt tttggtaatt taccatataa tatctctaca 360
tctttaatta tttttttatt tcaacacatt agagtaattc aagatatgaa ttttatgctt 420
caaaaagaag ttgctgcaag attaattgca ttacctggaa ataaatatta cggtcgtttg 480
agcattatat ctcaatatta ttgtgatatc aaaattttat taaatgttgc tcctgaagat 540
ttttggccta ttccgagagt tcattctata tttgtaaatt taacacctca tcataattct 600
ccttattttg tttatgatat taatatttta agccttatta caaataaggc tttccaaaat 660
agaagaaaaa tattacgtca tagtttaaaa aatttatttt ctgaaacaac tttattaaat 720
ttagatatta atcccagatt aagagctgaa aatatttctg tttttcagta ttgtcaatta 780
gctaattatt tgtataaaaa aaattatact aaaaaaaatt aa 822
<210> 16
<211> 822
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）Ak（苜蓿无网长管蚜（Acyrthosiphon kondoi））
<400> 16
attataaaaa attttaaaaa acattttcct ttaaaaaggt atggacaaaa ttttcttgtc 60
aatacaaaaa ctattcaaaa gataattaat ataattaatc caaacaccaa acaaacatta 120
gtggaaattg gacctggatt agctgcatta acaaaaccaa tttgtcaatt attagaagaa 180
ttaattgtta ttgaaataga tcctaattta ttgtttttat taaaaaaacg ttcattttat 240
tcaaaattaa cagtttttta tcaagacgct ttaaatttca attatacaga tttgttttat 300
aagaaaaatc aattaattcg tgtttttgga aacttgccat ataatatttc tacatcttta 360
attatttctt tattcaatca tattaaagtt attcaagata tgaattttat gttacagaaa 420
gaggttgctg aaagattaat ttctattcct ggaaataaat cttatggccg tttaagcatt 480
atttctcagt attattgtaa aattaaaata ttattaaatg ttgtacctga agattttcga 540
cctataccga aagtgcattc tgtttttatc aatttaactc ctcataccaa ttctccatat 600
tttgtttatg atacaaatat cctcagttct atcacaagaa atgcttttca aaatagaagg 660
aaaattttgc gtcatagttt aaaaaattta ttttctgaaa aagaactaat tcaattagaa 720
attaatccaa atttacgagc tgaaaatatt tctatctttc agtattgtca attagctgat 780
tatttatata aaaaattaaa taatcttgta aaaatcaatt aa 822
<210> 17
<211> 822
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）Ua（豚草指管蚜（Uroleuconambrosiae））
<400> 17
atgatactaa ataaatataa aaaatttatt cctttaaaaa gatacggaca aaattttctt 60
gtaaatagag aaataatcaa aaatattatc aaaataatta atcctaaaaa aacgcaaaca 120
ttattagaaa ttggaccggg tttaggtgcg ttaacaaaac ctatttgtga atttttaaat 180
gaacttatcg tcattgaaat agatcctaat atattatctt ttttaaagaa atgtatattt 240
tttgataaat taaaaatata ttgtcataat gctttagatt ttaattataa aaatatattc 300
tataaaaaaa gtcaattaat tcgtattttt ggaaatttac catataatat ttctacatct 360
ttaataatat atttatttcg gaatattgat attattcaag atatgaattt tatgttacaa 420
caagaagtgg ctaaaagatt agttgctatt cctggtgaaa aactttatgg tcgtttaagt 480
attatatctc aatattattg taatattaaa atattattac atattcgacc tgaaaatttt 540
caacctattc ctaaagttaa ttcaatgttt gtaaatttaa ctccgcatat tcattctcct 600
tattttgttt atgatattaa tttattaact agtattacaa aacatgcttt tcaacataga 660
agaaaaatat tgcgtcatag tttaagaaat tttttttctg agcaagattt aattcattta 720
gaaattaatc caaatttaag agctgaaaat gtttctatta ttcaatattg tcaattggct 780
aataatttat ataaaaaaca taaacagttt attaataatt aa 822
<210> 18
<211> 816
<212> DNA
<213> 蚜虫布赫纳氏菌（Buchnera aphidicola）（大豆蚜（Aphis glycines））
<400> 18
atgaaaaagc atattcctat aaaaaaattt agtcaaaatt ttcttgtaga tttgagtgtg 60
attaaaaaaa taattaaatt tattaatccg cagttaaatg aaatattggt tgaaattgga 120
ccgggattag ctgctatcac tcgacctatt tgtgatttga tagatcattt aattgtgatt 180
gaaattgata aaattttatt agatagatta aaacagttct cattttattc aaaattaaca 240
gtatatcatc aagatgcttt agcatttgat tacataaagt tatttaataa aaaaaataaa 300
ttagttcgaa tttttggtaa tttaccatat catgtttcta cgtctttaat attgcattta 360
tttaaaagaa ttaatattat taaagatatg aattttatgc tacaaaaaga agttgctgaa 420
cgtttaattg caactccagg tagtaaatta tatggtcgtt taagtattat ttctcaatat 480
tattgtaata taaaagtttt attgcatgtg tcttcaaaat gttttaaacc agttcctaaa 540
gtagaatcaa tttttcttaa tttgacacct tatactgatt atttccctta ttttacttat 600
aatgtaaacg ttcttagtta tattacaaat ttagcttttc aaaaaagaag aaaaatatta 660
cgtcatagtt taggtaaaat attttctgaa aaagttttta taaaattaaa tattaatccc 720
aaattaagac ctgagaatat ttctatatta caatattgtc agttatctaa ttatatgata 780
gaaaataata ttcatcagga acatgtttgt atttaa 816
<210> 19
<211> 1463
<212> DNA
<213> 暂定种Annandia pinicola
<400> 19
agattgaacg ctggcggcat gccttacaca tgcaagtcga acggtaacag gtcttcggac 60
gctgacgagt ggcgaacggg tgagtaatac atcggaacgt gcccagtcgt gggggataac 120
tactcgaaag agtagctaat accgcatacg atctgaggat gaaagcgggg gaccttcggg 180
cctcgcgcga ttggagcggc cgatggcaga ttaggtagtt ggtgggataa aagcttacca 240
agccgacgat ctgtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactggaact gagatacggt 300
ccagactctt acgggaggca gcagtgggga atattgcaca atgggcgcaa gcctgatgca 360
gctatgtcgc gtgtatgaag aagaccttag ggttgtaaag tactttcgat agcataagaa 420
gataatgaga ctaataattt tattgtctga cgttagctat agaagaagca ccggctaact 480
ccgtgccagc agccgcggta atacgggggg tgctagcgtt aatcggaatt actgggcgta 540
aagagcatgt aggtggttta ttaagtcaga tgtgaaatcc ctggacttaa tctaggaact 600
gcatttgaaa ctaataggct agagtttcgt agagggaggt agaattctag gtgtagcggt 660
gaaatgcata gatatctaga ggaatatcag tggcgaaggc gaccttctgg acgataactg 720
acgctaaaat gcgaaagcat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccatgctg 780
taaacgatgt cgactaagag gttggaggta taacttttaa tctctgtagc taacgcgtta 840
agtcgaccgc ctggggagta cggtcgcaag gctaaaactc aaatgaattg acgggggcct 900
gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gatgcaacgc gtaaaacctt acctggtctt 960
gacatccaca gaattttaca gaaatgtaga agtgcaattt gaactgtgag acaggtgctg 1020
catggctgtc gtcagctcgt gttgtgaaat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 1080
cttgtccttt gttaccataa gatttaagga actcaaagga gactgccggt gataaactgg 1140
aggaaggcgg ggacgacgtc aagtcatcat ggcccttatg accagggcta cacacgtgct 1200
acaatggcat atacaaagag atgcaatatt gcgaaataaa gccaatctta taaaatatgt 1260
cctagttcgg actggagtct gcaactcgac tccacgaagt cggaatcgct agtaatcgtg 1320
gatcagcatg ccacggtgaa tatgtttcca ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg 1380
gaagtggatt gcaaaagaag taagaaaatt aaccttctta acaaggaaat aacttaccac 1440
tttgtgactc ataactgggg tga 1463
<210> 20
<211> 1554
<212> DNA
<213> Moranella endobia
<400> 20
tctttttggt aaggaggtga tccaaccgca ggttccccta cggttacctt gttacgactt 60
caccccagtc atgaatcaca aagtggtaag cgccctccta aaaggttagg ctacctactt 120
cttttgcaac ccacttccat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc 180
accgtggcat tctgatccac gattactagc gattcctact tcatggagtc gagttgcaga 240
ctccaatccg gactacgacg cactttatga ggtccgctaa ctctcgcgag cttgcttctc 300
tttgtatgcg ccattgtagc acgtgtgtag ccctactcgt aagggccatg atgacttgac 360
gtcatcccca ccttcctccg gtttatcacc ggcagtctcc tttgagttcc cgaccgaatc 420
gctggcaaaa aaggataagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tttcacaaca 480
cgagctgacg acagccatgc agcacctgtc tcagagttcc cgaaggtacc aaaacatctc 540
tgctaagttc tctggatgtc aagagtaggt aaggttcttc gcgttgcatc gaattaaacc 600
acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt gagttttaac cttgcggccg 660
tactccccag gcggtcgatt taacgcgtta actacgaaag ccacagttca agaccacagc 720
tttcaaatcg acatagttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg tttgctcccc 780
acgctttcgt acctgagcgt cagtattcgt ccagggggcc gccttcgcca ctggtattcc 840
tccagatatc tacacatttc accgctacac ctggaattct acccccctct acgagactct 900
agcctatcag tttcaaatgc agttcctagg ttaagcccag ggatttcaca tctgacttaa 960
taaaccgcct acgtactctt tacgcccagt aattccgatt aacgcttgca ccctccgtat 1020
taccgcggct gctggcacgg agttagccgg tgcttcttct gtaggtaacg tcaatcaata 1080
accgtattaa ggatattgcc ttcctcccta ctgaaagtgc tttacaaccc gaaggccttc 1140
ttcacacacg cggcatggct gcatcagggt ttcccccatt gtgcaatatt ccccactgct 1200
gcctcccgta ggagtctgga ccgtgtctca gttccagtgt ggctggtcat cctctcagac 1260
cagctaggga tcgtcgccta ggtaagctat tacctcacct actagctaat cccatctggg 1320
ttcatctgaa ggtgtgaggc caaaaggtcc cccactttgg tcttacgaca ttatgcggta 1380
ttagctaccg tttccagcag ttatccccct ccatcaggca gatccccaga ctttactcac 1440
ccgttcgctg ctcgccggca aaaaagtaaa cttttttccg ttgccgctca acttgcatgt 1500
gttaggcctg ccgccagcgt tcaatctgag ccatgatcaa actcttcaat taaa 1554
<210> 21
<211> 1561
<212> DNA
<213> Baumannia cicadellinicola
<400> 21
ttcaattgaa gagtttgatc atggctcaga ttgaacgctg gcggtaagct taacacatgc 60
aagtcgagcg gcatcggaaa gtaaattaat tactttgccg gcaagcggcg aacgggtgag 120
taatatctgg ggatctacct tatggagagg gataactatt ggaaacgata gctaacaccg 180
cataatgtcg tcagaccaaa atgggggacc taatttaggc ctcatgccat aagatgaacc 240
cagatgagat tagctagtag gtgagataat agctcaccta ggcaacgatc tctagttggt 300
ctgagaggat gaccagccac actggaactg agacacggtc cagactccta cgggaggcag 360
cagtggggaa tcttgcacaa tgggggaaac cctgatgcag ctataccgcg tgtgtgaaga 420
aggccttcgg gttgtaaagc actttcagcg gggaagaaaa tgaagttact aataataatt 480
gtcaattgac gttacccgca aaagaagcac cggctaactc cgtgccagca gccgcggtaa 540
gacggagggt gcaagcgtta atcggaatta ctgggcgtaa agcgtatgta ggcggtttat 600
ttagtcaggt gtgaaagccc taggcttaac ctaggaattg catttgaaac tggtaagcta 660
gagtctcgta gaggggggga gaattccagg tgtagcggtg aaatgcgtag agatctggaa 720
gaataccagt ggcgaaggcg cccccctgga cgaaaactga cgctcaagta cgaaagcgtg 780
gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgctgt aaacgatgtc gatttgaagg 840
ttgtagcctt gagctatagc tttcgaagct aacgcattaa atcgaccgcc tggggagtac 900
gaccgcaagg ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg 960
gtttaattcg atacaacgcg aaaaacctta cctactcttg acatccagag tataaagcag 1020
aaaagcttta gtgccttcgg gaactctgag acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt 1080
gttgtgaaat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttatccttt gttgccaacg 1140
attaagtcgg gaactcaaag gagactgccg gtgataaacc ggaggaaggt gaggataacg 1200
tcaagtcatc atggccctta cgagtagggc tacacacgtg ctacaatggt gcatacaaag 1260
agaagcaatc tcgtaagagt tagcaaacct cataaagtgc atcgtagtcc ggattagagt 1320
ctgcaactcg actctatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg tggatcagaa tgccacggtg 1380
aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgggagtgta ttgcaaaaga 1440
agttagtagc ttaactcata atacgagagg gcgcttacca ctttgtgatt cataactggg 1500
gtgaagtcgt aacaaggtaa ccgtagggga acctgcggtt ggatcacctc cttacactaa 1560
a 1561
<210> 22
<211> 1464
<212> DNA
<213> 伴突属样细菌（Sodalis-like bacterium）
<400> 22
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggcagcggga agaagcttgc 60
ttctttgccg gcgagcggcg gacgggtgag taatgtctgg ggatctgccc gatggagggg 120
gataactact ggaaacggta gctaataccg cataacgtcg caagaccaaa gtgggggacc 180
ttcgggcctc acaccatcgg atgaacccag gtgggattag ctagtaggtg gggtaatggc 240
tcacctaggc gacgatccct agctggtctg agaggatgac cagtcacact ggaactgaga 300
cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gggaaaccct 360
gatgcagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg ccttcgggtt gtaaagcact ttcagcgggg 420
aggaaggcga tggcgttaat agcgctatcg attgacgtta cccgcagaag aagcaccggc 480
taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggtgcga gcgttaatcg gaattactgg 540
gcgtaaagcg tacgcaggcg gtctgttaag tcagatgtga aatccccggg ctcaacctgg 600
gaactgcatt tgaaactggc aggctagagt ctcgtagagg ggggtagaat tccaggtgta 660
gcggtgaaat gcgtagagat ctggaggaat accggtggcg aaggcggccc cctggacgaa 720
gactgacgct caggtacgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca 780
cgctgtaaac gatgtcgatt tgaaggttgt ggccttgagc cgtggctttc ggagctaacg 840
tgttaaatcg accgcctggg gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg aattgacggg 900
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgatgc aacgcgaaga accttaccta 960
ctcttgacat ccagagaact tggcagagat gctttggtgc cttcgggaac tctgagacag 1020
gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgttg tgaaatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080
gcaaccctta tcctttattg ccagcgattc ggtcgggaac tcaaaggaga ctgccggtga 1140
taaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacgag tagggctaca 1200
cacgtgctac aatggcgcat acaaagagaa gcgatctcgc gagagtcagc ggacctcata 1260
aagtgcgtcg tagtccggat tggagtctgc aactcgactc catgaagtcg gaatcgctag 1320
taatcgtgga tcagaatgcc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1380
acaccatggg agtgggttgc aaaagaagta ggtagcttaa ccttcgggag ggcgcttacc 1440
actttgtgat tcatgactgg ggtg 1464
<210> 23
<211> 1465
<212> DNA
<213> 暂定种Hartigia pinicola
<400> 23
agatttaacg ctggcggcag gcctaacaca tgcaagtcga gcggtaccag aagaagcttg 60
cttcttgctg acgagcggcg gacgggtgag taatgtatgg ggatctgccc gacagagggg 120
gataactatt ggaaacggta gctaataccg cataatctct gaggagcaaa gcaggggaac 180
ttcggtcctt gcgctatcgg atgaacccat atgggattag ctagtaggtg aggtaatggc 240
tcccctaggc aacgatccct agctggtctg agaggatgat cagccacact gggactgaga 300
cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gcgaaagcct 360
gatgcagcca tgccgcgtgt atgaagaagg ctttagggtt gtaaagtact ttcagtcgag 420
aggaaaacat tgatgctaat atcatcaatt attgacgttt ccgacagaag aagcaccggc 480
taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggtgcaa gcgttaatcg gaattactgg 540
gcgtaaagcg cacgcaggcg gttaattaag ttagatgtga aagccccggg cttaacccag 600
gaatagcata taaaactggt caactagagt attgtagagg ggggtagaat tccatgtgta 660
gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaat accagtggcg aaggcggccc cctggacaaa 720
aactgacgct caaatgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca 780
tgctgtaaac gatgtcgatt tggaggttgt tcccttgagg agtagcttcc gtagctaacg 840
cgttaaatcg accgcctggg ggagtacgac tgcaaggtta aaactcaaat gaattgacgg 900
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct 960
actcttgaca tccagataat ttagcagaaa tgctttagta ccttcgggaa atctgagaca 1020
ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtt gtgaaatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1080
cgcaaccctt atcctttgtt gccagcgatt aggtcgggaa ctcaaaggag actgccggtg 1140
ataaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcatcatg gcccttacga gtagggctac 1200
acacgtgcta caatggcata tacaaaggga agcaacctcg cgagagcaag cgaaactcat 1260
aaattatgtc gtagttcaga ttggagtctg caactcgact ccatgaagtc ggaatcgcta 1320
gtaatcgtag atcagaatgc tacggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt 1380
cacaccatgg gagtgggttg caaaagaagt aggtaactta accttatgga aagcgcttac 1440
cactttgtga ttcataactg gggtg 1465
<210> 24
<211> 1571
<212> DNA
<213> Tremblaya phenacola
<400> 24
aggtaatcca gccacacctt ccagtacggc taccttgtta cgacttcacc ccagtcacaa 60
cccttacctt cggaactgcc ctcctcacaa ctcaaaccac caaacacttt taaatcaggt 120
tgagagaggt taggcctgtt acttctggca agaattattt ccatggtgtg acgggcggtg 180
tgtacaagac ccgagaacat attcaccgtg gcatgctgat ccacgattac tagcaattcc 240
aacttcatgc actcgagttt cagagtacaa tccgaactga ggccggcttt gtgagattag 300
ctcccttttg caagttggca actctttggt ccggccattg tatgatgtgt gaagccccac 360
ccataaaggc catgaggact tgacgtcatc cccaccttcc tccaacttat cgctggcagt 420
ctctttaagg taactgacta atccagtagc aattaaagac aggggttgcg ctcgttacag 480
gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacagcc atgcagcacc tgtgcactaa 540
ttctctttca agcactcccg cttctcaaca ggatcttagc catatcaaag gtaggtaagg 600
tttttcgcgt tgcatcgaat taatccacat catccactgc ttgtgcgggt ccccgtcaat 660
tcctttgagt tttaaccttg cggccgtact ccccaggcgg tcgacttgtg cgttagctgc 720
accactgaaa aggaaaactg cccaatggtt agtcaacatc gtttagggca tggactacca 780
gggtatctaa tcctgtttgc tccccatgct ttagtgtctg agcgtcagta acgaaccagg 840
aggctgccta cgctttcggt attcctccac atctctacac atttcactgc tacatgcgga 900
attctacctc cccctctcgt actccagcct gccagtaact gccgcattct gaggttaagc 960
ctcagccttt cacagcaatc ttaacaggca gcctgcacac cctttacgcc caataaatct 1020
gattaacgct cgcaccctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagtttg ccggtgctta 1080
ttctttcggt acagtcacac caccaaattg ttagttgggt ggctttcttt ccgaacaaaa 1140
gtgctttaca acccaaaggc cttcttcaca cacgcggcat tgctggatca ggcttccgcc 1200
cattgtccaa gattcctcac tgctgccttc ctcagaagtc tgggccgtgt ctcagtccca 1260
gtgtggctgg ccgtcctctc agaccagcta ccgatcattg ccttgggaag ccattacctt 1320
tccaacaagc taatcagaca tcagccaatc tcagagcgca aggcaattgg tcccctgctt 1380
tcattctgct tggtagagaa ctttatgcgg tattaattag gctttcacct agctgtcccc 1440
cactctgagg catgttctga tgcattactc acccgtttgc cacttgccac caagcctaag 1500
cccgtgttgc cgttcgactt gcatgtgtaa ggcatgccgc tagcgttcaa tctgagccag 1560
gatcaaactc t 1571
<210> 25
<211> 1535
<212> DNA
<213> 暂定种Tremblaya princeps
<400> 25
agagtttgat cctggctcag attgaacgct agcggcatgc attacacatg caagtcgtac 60
ggcagcacgg gcttaggcct ggtggcgagt ggcgaacggg tgagtaacgc ctcggaacgt 120
gccttgtagt gggggatagc ctggcgaaag ccagattaat accgcatgaa gccgcacagc 180
atgcgcggtg aaagtggggg attctagcct cacgctactg gatcggccgg ggtctgatta 240
gctagttggc ggggtaatgg cccaccaagg cttagatcag tagctggtct gagaggacga 300
tcagccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaatc 360
ttggacaatg ggcgcaagcc tgatccagca atgccgcgtg tgtgaagaag gccttcgggt 420
cgtaaagcac ttttgttcgg gatgaagggg ggcgtgcaaa caccatgccc tcttgacgat 480
accgaaagaa taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgcg 540
agcgttaatc ggaatcactg ggcgtaaagg gtgcgcgggt ggtttgccaa gacccctgta 600
aaatcctacg gcccaaccgt agtgctgcgg aggttactgg taagcttgag tatggcagag 660
gggggtagaa ttccaggtgt agcggtgaaa tgcgtagata tctggaggaa taccgaaggc 720
gaaggcaacc ccctgggcca tcactgacac tgaggcacga aagcgtgggg agcaaacagg 780
attagatacc ctggtagtcc acgccctaaa ccatgtcgac tagttgtcgg ggggagccct 840
ttttcctcgg tgacgaagct aacgcatgaa gtcgaccgcc tggggagtac gaccgcaagg 900
ttaaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcggt ggatgatgtg gattaattcg 960
atgcaacgcg aaaaacctta cctacccttg acatggcgga gattctgccg agaggcggaa 1020
gtgctcgaaa gagaatccgt gcacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1080
atgttgggtt aagtcccata acgagcgcaa cccccgtctt tagttgctac cactggggca 1140
ctctatagag actgccggtg ataaaccgga ggaaggtggg gacgacgtca agtcatcatg 1200
gcctttatgg gtagggcttc acacgtcata caatggctgg agcaaagggt cgccaactcg 1260
agagagggag ctaatcccac aaacccagcc ccagttcgga ttgcactctg caactcgagt 1320
gcatgaagtc ggaatcgcta gtaatcgtgg atcagcatgc cacggtgaat acgttctcgg 1380
gtcttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagtaagccg catcagaagc agcctcccta 1440
accctatgct gggaaggagg ctgcgaaggt ggggtctatg actggggtga agtcgtaaca 1500
aggtagccgt accggaaggt gcggctggat tacct 1535
<210> 26
<211> 1450
<212> DNA
<213> Nasuia deltocephalinicola
<400> 26
agtttaatcc tggctcagat ttaacgcttg cgacatgcct aacacatgca agttgaacgt 60
tgaaaatatt tcaaagtagc gtataggtga gtataacatt taaacatacc ttaaagttcg 120
gaataccccg atgaaaatcg gtataatacc gtataaaagt atttaagaat taaagcgggg 180
aaaacctcgt gctataagat tgttaaatgc ctgattagtt tgttggtttt taaggtaaaa 240
gcttaccaag actttgatca gtagctattc tgtgaggatg tatagccaca ttgggattga 300
aataatgccc aaacctctac ggagggcagc agtggggaat attggacaat gagcgaaagc 360
ttgatccagc aatgtcgcgt gtgcgattaa gggaaactgt aaagcacttt tttttaagaa 420
taagaaattt taattaataa ttaaaatttt tgaatgtatt aaaagaataa gtaccgacta 480
atcacgtgcc agcagtcgcg gtaatacgtg gggtgcgagc gttaatcgga tttattgggc 540
gtaaagtgta ttcaggctgc ttaaaaagat ttatattaaa tatttaaatt aaatttaaaa 600
aatgtataaa ttactattaa gctagagttt agtataagaa aaaagaattt tatgtgtagc 660
agtgaaatgc gttgatatat aaaggaacgc cgaaagcgaa agcatttttc tgtaatagaa 720
ctgacgctta tatacgaaag cgtgggtagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780
ccctaaacta tgtcaattaa ctattagaat tttttttagt ggtgtagcta acgcgttaaa 840
ttgaccgcct gggtattacg atcgcaagat taaaactcaa aggaattgac ggggaccagc 900
acaagcggtg gatgatgtgg attaattcga tgatacgcga aaaaccttac ctgcccttga 960
catggttaga attttattga aaaataaaag tgcttggaaa agagctaaca cacaggtgct 1020
gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac 1080
ccctactctt agttgctaat taaagaactt taagagaaca gctaacaata agtttagagg 1140
aaggagggga tgacttcaag tcctcatggc ccttatgggc agggcttcac acgtcataca 1200
atggttaata caaaaagttg caatatcgta agattgagct aatctttaaa attaatctta 1260
gttcggattg tactctgcaa ctcgagtaca tgaagttgga atcgctagta atcgcggatc 1320
agcatgccgc ggtgaatagt ttaactggtc ttgtacacac cgcccgtcac accatggaaa 1380
taaatcttgt tttaaatgaa gtaatatatt ttatcaaaac aggttttgta accggggtga 1440
agtcgtaaca 1450
<210> 27
<211> 1536
<212> DNA
<213> 暂定种Zinderia insecticola CARI
<400> 27
atataaataa gagtttgatc ctggctcaga ttgaacgcta gcggtatgct ttacacatgc 60
aagtcgaacg acaatattaa agcttgcttt aatataaagt ggcgaacggg tgagtaatat 120
atcaaaacgt accttaaagt gggggataac taattgaaaa attagataat accgcatatt 180
aatcttagga tgaaaatagg aataatatct tatgctttta gatcggttga tatctgatta 240
gctagttggt agggtaaatg cttaccaagg caatgatcag tagctggttt tagcgaatga 300
tcagccacac tggaactgag acacggtcca gacttctacg gaaggcagca gtggggaata 360
ttggacaatg ggagaaatcc tgatccagca ataccgcgtg agtgatgaag gccttagggt 420
cgtaaaactc ttttgttagg aaagaaataa ttttaaataa tatttaaaat tgatgacggt 480
acctaaagaa taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgca 540
agcgttaatc ggaattattg ggcgtaaaga gtgcgtaggc tgttatataa gatagatgtg 600
aaatacttaa gcttaactta agaactgcat ttattactgt ttaactagag tttattagag 660
agaagtggaa ttttatgtgt agcagtgaaa tgcgtagata tataaaggaa tatcgatggc 720
gaaggcagct tcttggaata atactgacgc tgaggcacga aagcgtgggg agcaaacagg 780
attagatacc ctggtagtcc acgccctaaa ctatgtctac tagttattaa attaaaaata 840
aaatttagta acgtagctaa cgcattaagt agaccgcctg gggagtacga tcgcaagatt 900
aaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat 960
gcaacacgaa aaaccttacc tactcttgac atgtttggaa ttttaaagaa atttaaaagt 1020
gcttgaaaaa gaaccaaaac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1080
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgttatta tttgctaata aaaagaactt 1140
taataagact gccaatgaca aattggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc 1200
cttatgagta gggcttcaca cgtcatacaa tgatatatac aatgggtagc aaatttgtga 1260
aaatgagcca atccttaaag tatatcttag ttcggattgt agtctgcaac tcgactacat 1320
gaagttggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tctcgggtct 1380
tgtacacacc gcccgtcaca ccatggaagt gatttttacc agaaattatt tgtttaacct 1440
ttattggaaa aaaataatta aggtagaatt catgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag 1500
cagtatcgga aggtgcggct ggattacatt ttaaat 1536
<210> 28
<211> 1423
<212> DNA
<213> Hodgkinia
<400> 28
aatgctggcg gcaggcctaa cacatgcaag tcgagcggac aacgttcaaa cgttgttagc 60
ggcgaacggg tgagtaatac gtgagaatct acccatccca acgtgataac atagtcaaca 120
ccatgtcaat aacgtatgat tcctgcaaca ggtaaagatt ttatcgggga tggatgagct 180
cacgctagat tagctagttg gtgagataaa agcccaccaa ggccaagatc tatagctggt 240
ctggaaggat ggacagccac attgggactg agacaaggcc caaccctcta aggagggcag 300
cagtgaggaa tattggacaa tgggcgtaag cctgatccag ccatgccgca tgagtgattg 360
aaggtccaac ggactgtaaa actcttttct ccagagatca taaatgatag tatctggtga 420
tataagctcc ggccaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaggggag cgagtattgt 480
tcggttttat tgggcgtaaa gggtgtccag gttgctaagt aagttaacaa caaaatcttg 540
agattcaacc tcataacgtt cggttaatac tactaagctc gagcttggat agagacaaac 600
ggaattccga gtgtagaggt gaaattcgtt gatacttgga ggaacaccag aggcgaaggc 660
ggtttgtcat accaagctga cactgaagac acgaaagcat ggggagcaaa caggattaga 720
taccctggta gtccatgccc taaacgttga gtgctaacag ttcgatcaag ccacatgcta 780
tgatccagga ttgtacagct aacgcgttaa gcactccgcc tgggtattac gaccgcaagg 840
ttaaaactca aaggaattga cggagacccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg 900
aagctacacg aagaacctta ccagcccttg acataccatg gccaaccatc ctggaaacag 960
gatgttgttc aagttaaacc cttgaaatgc caggaacagg tgctgcatgg ctgttgtcag 1020
ttcgtgtcgt gagatgtatg gttaagtccc aaaacgaaca caaccctcac ccatagttgc 1080
cataaacaca attgggttct ctatgggtac tgctaacgta agttagagga aggtgaggac 1140
cacaacaagt catcatggcc cttatgggct gggccacaca catgctacaa tggtggttac 1200
aaagagccgc aacgttgtga gaccgagcaa atctccaaag accatctcag tccggattgt 1260
actctgcaac ccgagtacat gaagtaggaa tcgctagtaa tcgtggatca gcatgccacg 1320
gtgaatacgt tctcgggtct tgtacacgcc gcccgtcaca ccatgggagc ttcgctccga 1380
tcgaagtcaa gttacccttg accacatctt ggcaagtgac cga 1423
<210> 29
<211> 1504
<212> DNA
<213> 沃尔巴克氏菌（Wolbachia）菌株wPip
<400> 29
aaatttgaga gtttgatcct ggctcagaat gaacgctggc ggcaggccta acacatgcaa 60
gtcgaacgga gttatattgt agcttgctat ggtataactt agtggcagac gggtgagtaa 120
tgtataggaa tctacctagt agtacggaat aattgttgga aacgacaact aataccgtat 180
acgccctacg ggggaaaaat ttattgctat tagatgagcc tatattagat tagctagttg 240
gtggggtaat agcctaccaa ggtaatgatc tatagctgat ctgagaggat gatcagccac 300
actggaactg agatacggtc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa 360
tgggcgaaag cctgatccag ccatgccgca tgagtgaaga aggcctttgg gttgtaaagc 420
tcttttagtg aggaagataa tgacggtact cacagaagaa gtcctggcta actccgtgcc 480
agcagccgcg gtaatacgga gagggctagc gttattcgga attattgggc gtaaagggcg 540
cgtaggctgg ttaataagtt aaaagtgaaa tcccgaggct taaccttgga attgctttta 600
aaactattaa tctagagatt gaaagaggat agaggaattc ctgatgtaga ggtaaaattc 660
gtaaatatta ggaggaacac cagtggcgaa ggcgtctatc tggttcaaat ctgacgctga 720
agcgcgaagg cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ctgtaaacga 780
tgaatgttaa atatggggag tttactttct gtattacagc taacgcgtta aacattccgc 840
ctggggacta cggtcgcaag attaaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg 900
tggagcatgt ggtttaattc gatgcaacgc gaaaaacctt accacttctt gacatgaaaa 960
tcatacctat tcgaagggat agggtcggtt cggccggatt ttacacaagt gttgcatggc 1020
tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aaccctcatc 1080
cttagttgcc atcaggtaat gctgagtact ttaaggaaac tgccagtgat aagctggagg 1140
aaggtgggga tgatgtcaag tcatcatggc ctttatggag tgggctacac acgtgctaca 1200
atggtgtcta caatgggctg caaggtgcgc aagcctaagc taatccctaa aagacatctc 1260
agttcggatt gtactctgca actcgagtac atgaagttgg aatcgctagt aatcgtggat 1320
cagcatgcca cggtgaatac gttctcgggt cttgtacaca ctgcccgtca cgccatggga 1380
attggtttca ctcgaagcta atggcctaac cgcaaggaag gagttattta aagtgggatc 1440
agtgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag cagtagggga atctgcagct ggattacctc 1500
ctta 1504
<210> 30
<211> 1532
<212> DNA
<213> 暂定种Uzinura diaspidicola
<400> 30
aaaggagata ttccaaccac accttccggt acggttacct tgttacgact tagccctagt 60
catcaagttt accttaggca gaccactgaa ggattactga cttcaggtac ccccgactcc 120
catggcttga cgggcggtgt gtacaaggtt cgagaacata ttcaccgcgc cattgctgat 180
gcgcgattac tagcgattcc tgcttcatag agtcgaattg cagactccaa tccgaactga 240
gactggtttt agagattagc tcctgatcac ccagtggctg ccctttgtaa ccagccattg 300
tagcacgtgt gtagcccaag gcatagaggc catgatgatt tgacatcatc cccaccttcc 360
tcacagttta caccggcagt tttgttagag tccccggctt tacccgatgg caactaacaa 420
taggggttgc gctcgttata ggacttaacc aaacacttca cagcacgaac tgaagacaac 480
catgcagcac cttgtaatac gtcgtataga ctaagctgtt tccagcttat tcgtaataca 540
tttaagcctt ggtaaggttc ctcgcgtatc atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg 600
tgcgaacccc cgtcaattcc tttgagtttc aatcttgcga ctgtacttcc caggtggatc 660
acttatcgct ttcgctaagc cactgaatat cgtttttcca atagctagtg atcatcgttt 720
agggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg tgcactgagc 780
gtcagtaaag atttagcaac ctgccttcgc tatcggtgtt ctgtatgata tctatgcatt 840
tcaccgctac accatacatt ccagatgctc caatcttact caagtttacc agtatcaata 900
gcaattttac agttaagctg taagctttca ctactgactt aataaacagc ctacacaccc 960
tttaaaccca ataaatccga ataacgcttg tgtcatccgt attgccgcgg ctgctggcac 1020
ggaattagcc gacacttatt cgtatagtac cttcaatctc ctatcacgta agatatttta 1080
tttctataca aaagcagttt acaacctaaa agaccttcat cctgcacgcg acgtagctgg 1140
ttcagagttt cctccattga ccaatattcc tcactgctgc ctcccgtagg agtctggtcc 1200
gtgtctcagt accagtgtgg aggtacaccc tcttaggccc cctactgatc atagtcttgg 1260
tagagccatt acctcaccaa ctaactaatc aaacgcaggc tcatcttttg ccacctaagt 1320
tttaataaag gctccatgca gaaactttat attatggggg attaatcaga atttcttctg 1380
gctatacccc agcaaaaggt agattgcata cgtgttactc acccattcgc cggtcgccga 1440
caaattaaaa atttttcgat gcccctcgac ttgcatgtgt taagctcgcc gctagcgtta 1500
attctgagcc aggatcaaac tcttcgttgt ag 1532
<210> 31
<211> 1470
<212> DNA
<213> Sulcia muelleri
<400> 31
ctcaggataa acgctagcgg agggcttaac acatgcaagt cgaggggcag caaaaataat 60
tatttttggc gaccggcaaa cgggtgagta atacatacgt aactttcctt atgctgagga 120
atagcctgag gaaacttgga ttaatacctc ataatacaat tttttagaaa gaaaaattgt 180
taaagtttta ttatggcata agataggcgt atgtccaatt agttagttgg taaggtaatg 240
gcttaccaag acgatgattg gtagggggcc tgagaggggc gttcccccac attggtactg 300
agacacggac caaacttcta cggaaggctg cagtgaggaa tattggtcaa tggaggaaac 360
tctgaaccag ccactccgcg tgcaggatga aagaaagcct tattggttgt aaactgcttt 420
tgtatatgaa taaaaaattc taattataga aataattgaa ggtaatatac gaataagtat 480
cgactaactc tgtgccagca gtcgcggtaa gacagaggat acaagcgtta tccggattta 540
ttgggtttaa agggtgcgta ggcggttttt aaagtcagta gtgaaatctt aaagcttaac 600
tttaaaagtg ctattgatac tgaaaaacta gagtaaggtt ggagtaactg gaatgtgtgg 660
tgtagcggtg aaatgcatag atatcacaca gaacaccgat agcgaaagca agttactaac 720
cctatactga cgctgagtca cgaaagcatg gggagcaaac aggattagat accctggtag 780
tccatgccgt aaacgatgat cactaactat tgggttttat acgttgtaat tcagtggtga 840
agcgaaagtg ttaagtgatc cacctgagga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa 900
ttgacggggg cccgcacaat cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgata cacgaggaac 960
cttaccaaga cttaaatgta ctacgaataa attggaaaca atttagtcaa gcgacggagt 1020
acaaggtgct gcatggttgt cgtcagctcg tgccgtgagg tgtaaggtta agtcctttaa 1080
acgagcgcaa cccttattat tagttgccat cgagtaatgt caggggactc taataagact 1140
gccggcgcaa gccgagagga aggtggggat gacgtcaaat catcacggcc cttacgtctt 1200
gggccacaca cgtgctacaa tgatcggtac aaaagggagc gactgggtga ccaggagcaa 1260
atccagaaag ccgatctaag ttcggattgg agtctgaaac tcgactccat gaagctggaa 1320
tcgctagtaa tcgtgcatca gccatggcac ggtgaatatg ttcccgggcc ttgtacacac 1380
cgcccgtcaa gccatggaag ttggaagtac ctaaagttgg ttcgctacct aaggtaagtc 1440
taataactgg ggctaagtcg taacaaggta 1470
<210> 32
<211> 1761
<212> DNA
<213> Symbiotaphrina buchneri凭证标本（voucher）JCM9740
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(30)
<223> n是a、c、g、或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是a、c、g、或t
<400> 32
agattaagcc atgcaagtct aagtataagn aatctatacn gtgaaactgc gaatggctca 60
ttaaatcagt tatcgtttat ttgatagtac cttactacat ggataaccgt ggtaattcta 120
gagctaatac atgctaaaaa ccccgacttc ggaaggggtg tatttattag ataaaaaacc 180
aatgcccttc ggggctcctt ggtgattcat gataacttaa cgaatcgcat ggccttgcgc 240
cggcgatggt tcattcaaat ttctgcccta tcaactttcg atggtaggat agtggcctac 300
catggtttta acgggtaacg gggaattagg gttcgattcc ggagagggag cctgagaaac 360
ggctaccaca tccaaggaag gcagcaggcg cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg 420
tagtgacaat aaatactgat acagggctct tttgggtctt gtaattggaa tgagtacaat 480
ttaaatccct taacgaggaa caattggagg gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt 540
ccagctccaa tagcgtatat taaagttgtt gcagttaaaa agctcgtagt tgaaccttgg 600
gcctggctgg ccggtccgcc taaccgcgtg tactggtccg gccgggcctt tccttctggg 660
gagccgcatg cccttcactg ggtgtgtcgg ggaaccagga cttttacttt gaaaaaatta 720
gagtgttcaa agcaggccta tgctcgaata cattagcatg gaataataga ataggacgtg 780
cggttctatt ttgttggttt ctaggaccgc cgtaatgatt aatagggata gtcgggggca 840
tcagtattca attgtcagag gtgaaattct tggatttatt gaagactaac tactgcgaaa 900
gcatttgcca aggatgtttt cattaatcag tgaacgaaag ttaggggatc gaagacgatc 960
agataccgtc gtagtcttaa ccataaacta tgccgactag ggatcgggcg atgttattat 1020
tttgactcgc tcggcacctt acgagaaatc aaagtctttg ggttctgggg ggagtatggt 1080
cgcaaggctg aaacttaaag aaattgacgg aagggcacca ccaggagtgg agcctgcggc 1140
ttaatttgac tcaacacggg gaaactcacc aggtccagac acattaagga ttgacagatt 1200
gagagctctt tcttgattat gtgggtggtg gtgcatggcc gttcttagtt ggtggagtga 1260
tttgtctgct taattgcgat aacgaacgag accttaacct gctaaatagc ccggtccgct 1320
ttggcgggcc gctggcttct tagagggact atcggctcaa gccgatggaa gtttgaggca 1380
ataacaggtc tgtgatgccc ttagatgttc tgggccgcac gcgcgctaca ctgacagagc 1440
caacgagtaa atcaccttgg ccggaaggtc tgggtaatct tgttaaactc tgtcgtgctg 1500
gggatagagc attgcaatta ttgctcttca acgaggaatt cctagtaagc gcaagtcatc 1560
agcttgcgct gattacgtcc ctgccctttg tacacaccgc ccgtcgctac taccgattga 1620
atggctcagt gaggccttcg gactggcaca gggacgttgg caacgacgac ccagtgccgg 1680
aaagttggtc aaacttggtc atttagagga agtaaaagtc gtaacaaggt ttccgtaggt 1740
gaacctgcgg aaggatcatt a 1761
<210> 33
<211> 1801
<212> DNA
<213> Symbiotaphrina kochii凭证标本（voucher）CBS 589.63
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1753)..(1755)
<223> n是a、c、g、或t
<400> 33
tacctggttg attctgccag tagtcatatg cttgtctcaa agattaagcc atgcaagtct 60
aagtataagc aatctatacg gtgaaactgc gaatggctca ttaaatcagt tatcgtttat 120
ttgatagtac cttactacat ggataaccgt ggtaattcta gagctaatac atgctaaaaa 180
cctcgacttc ggaaggggtg tatttattag ataaaaaacc aatgcccttc ggggctcctt 240
ggtgattcat gataacttaa cgaatcgcat ggccttgcgc cggcgatggt tcattcaaat 300
ttctgcccta tcaactttcg atggtaggat agtggcctac catggtttca acgggtaacg 360
gggaattagg gttcgattcc ggagagggag cctgagaaac ggctaccaca tccaaggaag 420
gcagcaggcg cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg tagtgacaat aaatactgat 480
acagggctct tttgggtctt gtaattggaa tgagtacaat ttaaatccct taacgaggaa 540
caattggagg gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt ccagctccaa tagcgtatat 600
taaagttgtt gcagttaaaa agctcgtagt tgaaccttgg gcctggctgg ccggtccgcc 660
taaccgcgtg tactggtccg gccgggcctt tccttctggg gagccgcatg cccttcactg 720
ggtgtgtcgg ggaaccagga cttttacttt gaaaaaatta gagtgttcaa agcaggccta 780
tgctcgaata cattagcatg gaataataga ataggacgtg tggttctatt ttgttggttt 840
ctaggaccgc cgtaatgatt aatagggata gtcgggggca tcagtattca attgtcagag 900
gtgaaattct tggatttatt gaagactaac tactgcgaaa gcatttgcca aggatgtttt 960
cattaatcag tgaacgaaag ttaggggatc gaagacgatc agataccgtc gtagtcttaa 1020
ccataaacta tgccgactag ggatcgggcg atgttattat tttgactcgc tcggcacctt 1080
acgagaaatc aaagtctttg ggttctgggg ggagtatggt cgcaaggctg aaacttaaag 1140
aaattgacgg aagggcacca ccaggagtgg agcctgcggc ttaatttgac tcaacacggg 1200
gaaactcacc aggtccagac acattaagga ttgacagatt gagagctctt tcttgattat 1260
gtgggtggtg gtgcatggcc gttcttagtt ggtggagtga tttgtctgct taattgcgat 1320
aacgaacgag accttaacct gctaaatagc ccggtccgct ttggcgggcc gctggcttct 1380
tagagggact atcggctcaa gccgatggaa gtttgaggca ataacaggtc tgtgatgccc 1440
ttagatgttc tgggccgcac gcgcgctaca ctgacagagc caacgagtac atcaccttgg 1500
ccggaaggtc tgggtaatct tgttaaactc tgtcgtgctg gggatagagc attgcaatta 1560
ttgctcttca acgaggaatt cctagtaagc gcaagtcatc agcttgcgct gattacgtcc 1620
ctgccctttg tacacaccgc ccgtcgctac taccgattga atggctcagt gaggccttcg 1680
gactggcaca gggacgttgg caacgacgac ccagtgccgg aaagttcgtc aaacttggtc 1740
atttagagga agnnnaagtc gtaacaaggt ttccgtaggt gaacctgcgg aaggatcatt 1800
a 1801
<210> 34
<211> 1490
<212> DNA
<213> 伯克霍尔德氏菌菌株SFA1
<400> 34
agtttgatcc tggctcagat tgaacgctgg cggcatgcct tacacatgca agtcgaacgg 60
cagcacgggg gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt 120
cctgtagtgg gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgac ctaagggaga 180
aagcggggga tcttcggacc tcgcgctata ggggcggccg atggcagatt agctagttgg 240
tggggtaaag gcctaccaag gcgacgatct gtagctggtc tgagaggacg accagccaca 300
ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat tttggacaat 360
gggggcaacc ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggcttcgggt tgtaaagcac 420
ttttgtccgg aaagaaaact tcgtccctaa tatggatgga ggatgacggt accggaagaa 480
taagcaccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggtgcg agcgttaatc 540
ggaattactg ggcgtaaagc gtgcgcaggc ggtctgttaa gaccgatgtg aaatccccgg 600
gcttaacctg ggaactgcat tggtgactgg caggctttga gtgtggcaga ggggggtaga 660
attccacgtg tagcagtgaa atgcgtagag atgtggagga ataccgatgg cgaaggcagc 720
cccctgggcc aactactgac gctcatgcac gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata 780
ccctggtagt ccacgcccta aacgatgtca actagttgtt ggggattcat ttccttagta 840
acgtagctaa cgcgtgaagt tgaccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa 900
ggaattgacg gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa 960
aaaccttacc tacccttgac atggtcggaa ccctgctgaa aggtgggggt gctcgaaaga 1020
gaaccggcgc acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080
gtcccgcaac gagcgcaacc cttgtcctta gttgctacgc aagagcactc taaggagact 1140
gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta 1200
gggcttcaca cgtcatacaa tggtcggaac agagggttgc caagccgcga ggtggagcca 1260
atcccagaaa accgatcgta gtccggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga 1320
atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac 1380
cgcccgtcac accatgggag tgggtttcac cagaagtagg tagcctaacc gcaaggaggg 1440
cgcttaccac ggtgggattc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtagc 1490
<210> 35
<211> 1408
<212> DNA
<213> 伯克霍尔德氏菌菌株KM-A
<400> 35
gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt cctgtagtgg 60
gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgat ctacggaaga aagcggggga 120
tccttcggga cctcgcgcta taggggcggc cgatggcaga ttagctagtt ggtggggtaa 180
aggcctacca aggcgacgat ctgtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactgggact 240
gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca atgggggcaa 300
ccctgatcca gcaatgccgc gtgtgtgaag aaggccttcg ggttgtaaag cacttttgtc 360
cggaaagaaa acgtcttggt taatacctga ggcggatgac ggtaccggaa gaataagcac 420
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggt gcgagcgtta atcggaatta 480
ctgggcgtaa agcgtgcgca ggcggtctgt taagaccgat gtgaaatccc cgggcttaac 540
ctgggaactg cattggtgac tggcaggctt tgagtgtggc agaggggggt agaattccac 600
gtgtagcagt gaaatgcgta gagatgtgga ggaataccga tggcgaaggc agccccctgg 660
gccaacactg acgctcatgc acgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta 720
gtccacgccc taaacgatgt caactagttg ttggggattc atttccttag taacgtagct 780
aacgcgtgaa gttgaccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ttaaaactca aaggaattga 840
cggggacccg cacaagcggt ggatgatgtg gattaattcg atgcaacgcg aaaaacctta 900
cctacccttg acatggtcgg aagtctgctg agaggtggac gtgctcgaaa gagaaccggc 960
gcacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 1020
acgagcgcaa cccttgtcct tagttgctac gcaagagcac tctaaggaga ctgccggtga 1080
caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcctcatgg cccttatggg tagggcttca 1140
cacgtcatac aatggtcgga acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc caatcccaga 1200
aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagctg gaatcgctag 1260
taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtc 1320
acaccatggg agtgggtttc accagaagta ggtagcctaa ccgcaaggag ggcgcttacc 1380
acggtgggat tcatgactgg ggtgaagt 1408
<210> 36
<211> 1383
<212> DNA
<213> 伯克霍尔德氏菌菌株KM-G
<400> 36
gcaaccctgg tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgt cctgtagtgg 60
gggatagccc ggcgaaagcc ggattaatac cgcatacgac ctaagggaga aagcggggga 120
tcttcggacc tcgcgctata ggggcggccg atggcagatt agctagttgg tggggtaaag 180
gcctaccaag gcgacgatct gtagctggtc tgagaggacg accagccaca ctgggactga 240
gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat tttggacaat gggggcaacc 300
ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggccttcggg ttgtaaagca cttttgtccg 360
gaaagaaaac ttcgaggtta atacccttgg aggatgacgg taccggaaga ataagcaccg 420
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggtgc gagcgttaat cggaattact 480
gggcgtaaag cgtgcgcagg cggtctgtta agaccgatgt gaaatccccg ggcttaacct 540
gggaactgca ttggtgactg gcaggctttg agtgtggcag aggggggtag aattccacgt 600
gtagcagtga aatgcgtaga gatgtggagg aataccgatg gcgaaggcag ccccctgggc 660
caacactgac gctcatgcac gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 720
ccacgcccta aacgatgtca actagttgtt ggggattcat ttccttagta acgtagctaa 780
cgcgtgaagt tgaccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg 840
gggacccgca caagcggtgg atgatgtgga ttaattcgat gcaacgcgaa aaaccttacc 900
tacccttgac atggtcggaa gtctgctgag aggtggacgt gctcgaaaga gaaccggcgc 960
acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1020
gagcgcaacc cttgtcctta gttgctacgc aagagcactc taaggagact gccggtgaca 1080
aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta gggcttcaca 1140
cgtcatacaa tggtcggaac agagggttgc caagccgcga ggtggagcca atcccagaaa 1200
accgatcgta gtccggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta 1260
atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac 1320
accatgggag tgggtttcac cagaagtagg tagcctaacc tgcaaaggag ggcgcttacc 1380
acg 1383
<210> 37
<211> 1566
<212> DNA
<213>蚜虫布赫纳氏菌菌株（Buchnera aphidicola str.）Bp（黄莲木瘿蚜（Baizongiapistaciae））
<400> 37
acttaaaatt gaagagtttg atcatggctc agattgaacg ctggcggcaa gcttaacaca 60
tgcaagtcga gcggcatcga agaaaagttt acttttctgg cggcgagcgg caaacgggtg 120
agtaacatct ggggatctac ctaaaagagg gggacaacca ttggaaacga tggctaatac 180
cgcataatgt ttttaaataa accaaagtag gggactaaaa tttttagcct tatgctttta 240
gatgaaccca gacgagatta gcttgatggt aaggtaatgg cttaccaagg cgacgatctc 300
tagctggtct gagaggataa ccagccacac tggaactgag atacggtcca gactcctacg 360
ggaggcagca gtggggaata ttgcacaatg ggctaaagcc tgatgcagct atgccgcgtg 420
tatgaagaag gccttagggt tgtaaagtac tttcagcggg gaggaaagaa ttatgtctaa 480
tatacatatt ttgtgacgtt acccgaagaa gaagcaccgg ctaactccgt gccagcagcc 540
gcggtaatac ggagggtgcg agcgttaatc agaattactg ggcgtaaaga gcacgtaggc 600
ggtttattaa gtcagatgtg aaatccctag gcttaactta ggaactgcat ttgaaactaa 660
tagactagag tctcatagag ggaggtagaa ttctaggtgt agcggtgaaa tgcgtagata 720
tctagaggaa tacccgtggc gaaagcgacc tcctaaatga aaactgacgc tgaggtgcga 780
aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc atgctgtaaa cgatgtcgac 840
ttggaggttg tttcctagag aagtggcttc cgaagctaac gcattaagtc gaccgcctgg 900
ggagtacggt cgcaaggcta aaactcaaat gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 960
gcatgtggtt taattcgatg caacgcgaag aaccttacct ggtcttgaca tccatagaat 1020
tttttagaga taaaagagtg ccttagggaa ctatgagaca ggtgctgcat ggctgtcgtc 1080
agctcgtgtt gtgaaatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaacccct atcctttgtt 1140
gccatcaggt tatgctggga actcagagga gactgccggt tataaaccgg aggaaggtgg 1200
ggatgacgtc aagtcatcat ggcccttacg accagggcta cacacgtgct acaatggcat 1260
atacaaagag atgcaactct gcgaagataa gcaaacctca taaagtatgt cgtagtccgg 1320
actggagtct gcaactcgac tccacgaagt aggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg 1380
ccacggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtgggtt 1440
gcaaaagaag caggtagctt aaccagatta ttttattgga gggcgcttac cactttgtga 1500
ttcatgactg gggtgaagtc gtaacaaggt aaccgtaggg gaacctgcgg ttggatcacc 1560
tcctta 1566
<210> 38
<211> 1539
<212> DNA
<213> Ishikawaella capsulata Mpkobe
<400> 38
aaattgaaga gtttgatcat ggctcagatt gaacgctagc ggcaagctta acacatgcaa 60
gtcgaacggt aacagaaaaa agcttgcttt tttgctgacg agtggcggac gggtgagtaa 120
tgtctgggga tctacctaat ggcgggggat aactactgga aacggtagct aataccgcat 180
aatgttgtaa aaccaaagtg ggggacctta tggcctcaca ccattagatg aacctagatg 240
ggattagctt gtaggtgggg taaaggctca cctaggcaac gatccctagc tggtctgaga 300
ggatgaccag ccacactgga actgagatac ggtccagact cctacgggag gcagcagtgg 360
ggaatcttgc acaatgggcg caagcctgat gcagctatgt cgcgtgtatg aagaaggcct 420
tagggttgta aagtactttc atcggggaag aaggatatga gcctaatatt ctcatatatt 480
gacgttacct gcagaagaag caccggctaa ctccgtgcca gcagccgcgg taacacggag 540
ggtgcgagcg ttaatcggaa ttactgggcg taaagagcac gtaggtggtt tattaagtca 600
tatgtgaaat ccctgggctt aacctaggaa ctgcatgtga aactgataaa ctagagtttc 660
gtagagggag gtggaattcc aggtgtagcg gtgaaatgcg tagatatctg gaggaatatc 720
agaggcgaag gcgaccttct ggacgaaaac tgacactcag gtgcgaaagc gtggggagca 780
aacaggatta gataccctgg tagtccacgc tgtaaacaat gtcgactaaa aaactgtgag 840
cttgacttgt ggtttttgta gctaacgcat taagtcgacc gcctggggag tacggccgca 900
aggttaaaac tcaaatgaat tgacgggggt ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat 960
tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctggtc ttgacatcca gcgaattata tagaaatata 1020
taagtgcctt tcggggaact ctgagacgct gcatggctgt cgtcagctcg tgttgtgaaa 1080
tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgccct tatcctctgt tgccagcggc atggccggga 1140
actcagagga gactgccagt attaaactgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat 1200
ggcccttatg accagggcta cacacgtgct acaatggtgt atacaaagag aagcaatctc 1260
gcaagagtaa gcaaaactca aaaagtacat cgtagttcgg attagagtct gcaactcgac 1320
tctatgaagt aggaatcgct agtaatcgtg gatcagaatg ccacggtgaa tacgttctct 1380
ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagtaagtt gcaaaagaag taggtagctt 1440
aacctttata ggagggcgct taccactttg tgatttatga ctggggtgaa gtcgtaacaa 1500
ggtaactgta ggggaacctg tggttggatt acctcctta 1539

Claims (16)

1.一种减少椿象的肠细菌定殖的方法，该方法包括：
(a)提供包含香兰素或其类似物的组合物；并且
(b)向椿象卵递送所述组合物，其中相对于从未处理的卵孵化的椿象的肠，从该卵孵化的椿象的肠具有减少的细菌定殖。
2.如权利要求1所述的方法，其中将该组合物递送至椿象的卵块。
3.如权利要求1所述的方法，其中该细菌定殖的减少降低了该椿象的适应度。
4.如权利要求3所述的方法，其中该椿象适应度的降低是繁殖能力、存活、发育率、卵的数目、孵化的卵的数目、成虫出现率、体长、体宽、体重、或角质层厚度的降低。
5.如权利要求1所述的方法，其中该定殖是在该肠的v4区中。
6.如权利要求5所述的方法，其中该肠的v4区的细菌定殖减少了至少10％。
7.如权利要求5所述的方法，其中该肠的v4区的尺寸减小。
8.如权利要求1所述的方法，其中该椿象是茶翅蝽属物种。
9.如权利要求8所述的方法，其中该椿象是茶翅蝽。
10.如权利要求1所述的方法，其中该细菌是内共生体。
11.如权利要求10所述的方法，其中该内共生体是泛菌属的。
12.如权利要求11所述的方法，其中该内共生体是暂定种卡贝克泛菌。
13.如权利要求1所述的方法，其中该组合物是液体、固体、气雾剂、糊剂、凝胶、或气体组合物。
14.如权利要求1所述的方法，其中将该组合物作为喷雾递送。
15.如权利要求1所述的方法，其中该组合物包含农业上可接受的载剂。
16.如权利要求1所述的方法，其中该组合物包含湿化液。
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