CN112725361B - 与烤烟挂灰相关的基因及其应用 - Google Patents

与烤烟挂灰相关的基因及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112725361B
CN112725361B CN202110331141.1A CN202110331141A CN112725361B CN 112725361 B CN112725361 B CN 112725361B CN 202110331141 A CN202110331141 A CN 202110331141A CN 112725361 B CN112725361 B CN 112725361B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tobacco
nthsp70
gene
flue
ash
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110331141.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112725361A (zh
Inventor
谢良文
贾宏昉
伍德洋
李文刚
吴绍军
秦艳青
江鸿
陈汉发
余佳敏
杨雪
杨兴友
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Agricultural University
China National Tobacco Corp Sichuan Branch
Original Assignee
Henan Agricultural University
China National Tobacco Corp Sichuan Branch
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Agricultural University, China National Tobacco Corp Sichuan Branch filed Critical Henan Agricultural University
Priority to CN202110331141.1A priority Critical patent/CN112725361B/zh
Publication of CN112725361A publication Critical patent/CN112725361A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112725361B publication Critical patent/CN112725361B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，涉及NtHSP70‑8基因，特别是指与烤烟挂灰相关的基因及其应用。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了NtHSP70‑8基因突变的烟草株系，一方面通过自交去掉Cas9背景后遗传稳定性更强，能够在不同世代间稳定遗传；另一方面可以在烘烤调制过程通过水分的散失影响烟叶的烘烤特性，为培育和改良具有减少烤烟挂灰的烟草新品种提供基因资源。

Description

与烤烟挂灰相关的基因及其应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，涉及NtHSP70-8基因，特别是指与烤烟挂灰相关的基因及其应用。
背景技术
挂灰是指烤后烟叶叶面上出现大小不同的界限模糊不清的灰色或深褐色斑点。烤中、烤后烟叶的正表面产生一层黑褐色的细微小斑点，如同蒙上一层灰一样，称之为挂灰烟。这种烟叶燃烧力弱，有异味，香气质差，香气量少，刺激性增强，品质下降，严重影响烤烟的可用性。根据挂灰烟叶的危害严重程度不同，挂灰烟可分为轻度挂灰、中度挂灰和重度挂灰。
挂灰烟通常只表现在烟叶的正面上，是由于叶片正面较叶片背面气孔少，排湿不顺畅，容易受害，挂灰烟导致烟叶质量降低。
由于CRISPR/Cas9产生突变体的准确性高和效率高，同时自交去掉Cas9背景后遗传稳定性更强，能够在不同世代间稳定遗传，创制的新品系可以用于作物大田生产。烟草作为我国重要的经济作物，烤后烟质量尤为关键，而烘烤过程中叶片不易失水容易导致挂灰烟叶的形成，严重影响烟叶的可用性，因此探寻一种与烟草挂灰相关的基因，并对该基因进行深入研究是一个迫切且有重大意义的课题。
发明内容
本发明提出一种与烤烟挂灰相关的基因及其应用，通过敲除烟叶中的NtHSP70-8基因，创制叶片水分易散失的烤烟新品系，为减少烤烟挂灰提供新的思路和方法。本申请利用CRISPR/Cas9系统对NtHSP70-8区进行了靶向编辑，创制了叶片水分易散失的烤烟新品系，对减少烤烟上部叶挂灰造成的烟叶减产具有重要的应用价值。
本发明的技术方案是这样实现的：
与烤烟挂灰相关的基因，所述基因为NtHSP70-8，序列为SEQ ID No.1所示。
利用该基因减少烤烟挂灰的方法，步骤为：构建NtHSP70-8基因的负向CRISPR/Cas9基因编辑载体，然后遗传转化至野生型烟草中，培育NtHSP70-8 CRISPR突变体。
上述法在调控烟草叶片的气孔数量、气孔张开程度中的应用。
上述的方法在调控叶片水分散失速度中的应用，
上述的方法在减少烤烟挂灰中的应用。
上述的方法在培育不易挂灰烤烟新品种中的应用。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了NtHSP70-8基因表达水平下调的突变体，发现该NtHSP70-8基因与烟草叶片表皮气孔发育有关，可以调控叶片的水分散失速率，从而影响烤烟的烘烤特性，能够为培育不易挂灰的烤烟新品种提供依据。
2、本发明的NtHSP70-8基因突变后，突变烟株在生长发育上和野生型无显著差异，但是叶片表面气孔数量及气孔张开程度增加，在高温和干旱胁迫条件下，叶片水分散失较快。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了NtHSP70-8基因突变的烟草株系，一方面通过自交去掉Cas9背景后遗传稳定性更强，能够在不同世代间稳定遗传；另一方面可以在烘烤调制过程通过水分的散失影响烟叶的烘烤特性，为培育和改良具有减少烤烟挂灰的烟草新品种提供基因资源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是NtHSP70-8的序列排列和系统进化分析。
图2是NtHSP70-8在烟草表皮细胞中的亚细胞定位。
图3是本发明实施例提供的NtHSP70-8在烟草不同部位和不同胁迫下的表达模式。
图4是本发明实施例提供的野生型烟草（WT）和NtHSP70-8 CRISPR突变体表型特征和测序鉴定结果。
图5是本发明实施例提供的野生型烟草（WT）和NtHSP70-8 CRISPR突变体烟草气孔开张程度和数量的影响。
图6是本发明实施例提供的野生型烟草（WT）和NtHSP70-8 CRISPR突变体的失水速率。
图7是本发明实施例提供的野生型烟草（WT）和NtHSP70-8 CRISPR突变体的烤后挂灰烟比例。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
与烤烟挂灰相关的基因，所述基因为NtHSP70-8，序列为SEQ ID No.1所示。
利用该基因减少烤烟挂灰的方法，步骤为：构建NtHSP70-8基因的负向CRISPR/Cas9基因编辑载体，然后遗传转化至野生型烟草中，培育NtHSP70-8 CRISPR突变体。
上述法在调控烟草叶片的气孔数量、气孔张开程度中的应用。
上述的方法在调控叶片水分散失速度中的应用，
上述的方法在减少烤烟挂灰中的应用。
上述的方法在培育不易挂灰烤烟新品种中的应用。
实施例1：NtHSP70-8基因的克隆及鉴定
烟草HSP70家族成员NtHSP70-8的克隆方法具体包括：
第一步：烟草叶总RNA的提取：以K326幼叶为材料，按照天根生化科技（北京）有限公司的植物总RNA提取试剂盒提供的方法提取总RNA；
第二步：烟草叶总cDNA和基因组总DNA的获得；以K326幼叶总RNA样品1ug为模板，采用Oligo dT-Adaptor Promer进行反转录，反转录后产物即为总cDNA；烟草基因组总DNA的提取采用北京全式金生物技术有限公司的EasyPure Plant Genomic DNA Kit参照说明书进行提取；
在本发明的优选实施例中，反转录条件为：42℃ 40min，50℃ 30min，99℃ 5min，5℃ 5min。
第三步：烟草NtHSP70-8基因克隆引物设计：通过烟草HSP70基因家族的系统进化分析获得NtHSP70-8基因的编码区序列和基因组DNA序列，序列为SEQ ID NO. 1，利用DNAMAN软件对多肽序列进行比对，选择NtHSP70-8基因特异的位点进行引物设计，设计出NtHSP70-8基因全长cDNA和基因组DNA序列扩增及真核表达载体构建的引物NtHSP70-8序列如SEQIDNO.2所示；NtHSP70-8-R序列如SEQIDNO.3所示；
实施例2：CRISPR/CaS9基因编辑载体的构建和检测
基于CRISPR/Cas9技术从烟草K326基因组中定向突变了NtHSP70-8基因。利用CRISPR-P 2.0（http://crispr.hzau.edu.cn/CRISPR2/）设计编辑靶点，选择特异性和编辑效率最好的靶点序列GCAGCAACAACAGTCTGAAC。
靶向NtHSP70-8正反链为：
SG-UP：5’- TGATTGCAGCAACAACAGTCTGAAC -3’
SG-LW：5’- TCTAAAACCGTGGTGTGAGAATAGCA-3’
DNA正向链F和反向链R寡核苷酸稀释至100μM，在TE缓冲液中完成退火，形成双链。退火反应体系如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
退火程序为：95℃ 3min，之后温度下降到20℃，每1sec下降到0.2℃。
退火后，用Axygen DNA凝胶提取试剂盒纯化DNA寡合苷酸双链，具体方法如下：
(a)加300μL缓冲液A到100μL退火产品并轻轻混匀；
(b)加入150μL缓冲B轻轻混匀；
(c)将溶液转移到试剂盒提供的DNA制备管，置于另一个2ml离心管中，12,000rpm离心1min；
(d)DNA制备管转移到一个新的2ml离心管，并加入500μL W1缓冲液，离心12,000rpm 30sec，弃上清；
(e)加入700μL W2缓冲液，离心12,000rpm 30sec，弃上清；
(f)重复步骤5；
(g)再次以12,000rpm离心1min；
(h)将DNA制备管转移至新的1.5ml离心管中，置于室温；
(i)加10μL-20μL洗脱液离心12,000rpm 30s，检测核酸浓度。
BGK012-DSG载体用限制性内切酶切形成线性双链，反应体系如下：
Figure 124157DEST_PATH_IMAGE002
在37℃下孵育6-8h后，用Axygen DNA凝胶提取试剂盒回收载体片段（回收步骤同上）。
将纯化后的DNA寡合苷酸双链与线性化的BGK012-DSG载体用T4连接酶（Takara,上海）连接。连接反应体系如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
在4℃下孵育约10h完成连接后，反应液直接转化DH5α大肠杆菌感受态。在含有卡那霉素的LB平板上获得单克隆，挑取单克隆在LB液体培养基上培养，测序验证、获得目标载体pBGK012-DSG-NtHSP70。
上述载体利用热激法将BGK012-DSG分别导入农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens strain）菌株EHA105，菌落PCR鉴定出阳性克隆。将鉴定正确的农杆菌单菌落接种于2-3ml含有100μg卡那霉素的液体培养基中，28℃振荡培养过夜，次日转接至含有抗生素的液体培养基中震荡培养，转接几次后收集菌体，重悬至OD600在0.8-1.0之间。侵染无菌条件下扒出的烟草幼胚后，诱导愈伤成苗。转基因植株经自交繁种后获得T1代进行后续实验。测序发现，本实施例中的突变导致烟草NtHSP70-8基因缺失，突变体繁种获得T2代植株，可用于烘烤试验，观察表型。为防止再次发生突变，测序后挑出的突变体可经过自交，去掉Cas9，获得稳定的突变体后再进行处理。
实施例3：CRISPR/CaS9基因编辑烟草的表型鉴定
1、HSP70-8突变体在正常处理的表型
将烟草种子放入日夜温度为28℃/23℃，光照时间为14h/10h黑暗的光照培养箱中。光强度为300μmol·m-2·s-1，相对湿度为60%，持续10天。在最初的3天中，使用四分之一强度的Hoagland营养液培养幼苗，在随后的3天中，使用半强度的营养液。然后提供全强度Hoagland溶液，将幼苗培养14天。30天大的转基因植株的表型与野生型烟草（WT）植株没有明显差异。
2、HSP70-8突变体在高温处理下的失水速率
将30天大的HSP70-8突变体和野生型烟草转移到装有无土培养基的盆中，培养10天，随后在45℃的高温下培养5h，每隔1h测量1次失水速率。高温处理下，水分散失均是突变体高于野生型。
3、HSP70-8突变体在高温处理下气孔数量和张开度
从高温处理中的HSP70-8突变体和野生型烟草中收集叶子，固定样品后，在光学显微镜下观察气孔的数量，并且在扫描电子显微镜下检查气孔的张开度。表明在高温条件下，HSP70-8突变体的气孔数量显著高于WT植株，提高20%，气孔张开度对高温不敏感，高温条件下张开度大，水分散失快。
K326野生型和NtHSP70-8突变体上部烟叶的烘烤试验
K326上部烟叶的烘烤特性表现为容易挂灰，影响该品种的进一步推广，现通过对比野生型与转基因型上部烟叶的试验，验证本发明对减少烤烟挂灰的有效性。
烘烤工艺对比设置如下：
常规三段式烟叶烘烤工艺，预热阶段35℃/35℃4h，38℃/36℃烘烤24h，40℃/36℃烘烤14h，42℃/35℃烘烤10h，45℃/37℃烘烤15h，48℃/38℃烘烤20h，54℃/39℃烘烤10h之后进入干筋期。
分别对常温（30℃）鲜烟叶和烘烤过程各关键温度点（35、38、42、45、48、54）稳温结束时刻取野生型和NtHSP70-8突变体各15片，采用烘箱法测量烟叶含水量。（图6）
从烟叶烘烤质量来看，与野生型K326的上部叶相比，采用NtHSP70-8突变体进行烘烤烤后烟叶挂灰烟的比例明显降低。（图7）
结果显示NtHSP70-8缺陷烟株降低了烟叶的保水性，从而导致烘烤过程中更易失水，减少了硬变黄的发生，为降低烤烟挂灰提供依据。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
<110> 河南农业大学，中国烟草总公司四川省公司
<120>与烤烟挂灰相关的基因及其应用
<141> 2021-03-29
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1722
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum L.
<400> 1
atggctgaac aagcatacac tgtggcatca gacagtgaaa caaccgggga ggaaaagact 60
tcacctgctt tccctgagat agcgattgga attgacattg gtacatctca atgcagtgtg 120
gcagtctgga atggatctca ggttgagctc cttagaaaca cgagaaatcg gaaattgatg 180
agatcatatg ttaccttcaa agatgaggtc ccagctggtg gtgttagcga tgaattggct 240
cacgaacatg atatgttgtc tggagctgca atcttcaaca tgaagcgtct cattggcaga 300
gttgatacag atcctgtggt tcacgccagc aagaacctcc cctttttggt tcaaacttta 360
gatatcgggg ttaggccatt tattgctgcc ctagtgaaca atatgtggag gtccactact 420
cctgaagaag ttcttgctat ctttctagtt gaactaagag ccatggcaga agttaaactg 480
agacgtcctg taaggaatgt ggttttaaca attccggttt catttagccg attccagttg 540
acccgaattg aacgagcatg cgccatggca gggcttcatg ttctaagatt gatgcctgaa 600
ccaactgcag ttgctctgtt atatgctcag cagcaacaac agtctgaaca ggaaaatatg 660
ggtagcggga gtgagaagat agcccttata ttcaatatgg gcgcagggta ttgtgacgta 720
gctataacag ctacagcagg aggtgtttcg cagatcaagg cgttggcggg cagcacagtt 780
ggaggtgagg acctacttca aaatctgatg cgtcacctct taccaaacat gaaagatcta 840
ttctcacacc acggaatcga agaaataaag aaaatgggaa tgcttcgagt tgccacccag 900
gatgccatcc acaaactctc atctgaaatg actgtcccag tcgatgttga cttgggaaat 960
ggaacaaaaa tatctaagtt tctcgagagg gcagagtttg aagaggtgaa caaagaggtg 1020
ttccagaaat gtgagacctt gataaaacgc tgcttgtgtg acgctaaact agaagcggaa 1080
gatgtacatg atgtcataat tgttggtggc tgttcctaca ttccaaaggt tcggaatatt 1140
gtaatgagta tatgcaaaag agaagagctt tattcaggaa tgaacccgct ggaggcagct 1200
gtacgtggtg cagctctgga aggagcagta gcttcgggaa ttagcgatcc atttgggagt 1260
ttggaccttt taaccattca agcaactcct ttaagcattg gcattcaagc tgatggaagc 1320
aactttgtac caattattca tcagaacacc acaaccccgg taaggaaaga acagaatttc 1380
actaccgtcc acgacaatca agccgaagca ttgatcttcg tttatgaagg tgacgagaaa 1440
actgtggaag ataaccatct cttagggtat tttaagatca cgggaatacc tccagtacca 1500
aaaggtgtac cggagattaa cgtgtgcatg gacattgatg cttctaatgt gctgagagtc 1560
tttgctggtg taatcattcc gggggcgaaa tgtcctcctc ctttcatgga agttaggatg 1620
cctacagttg atgatggaca tgcctggtct gctcaaactc tgcataaaac atatggctct 1680
actttagatt tggtcacagt gaagaagaaa gggaagcatt ga 1722

Claims (5)

1.利用NtHSP70-8基因减少烤烟挂灰的方法，其特征在于，步骤为：构建NtHSP70-8基因的负向CRISPR/Cas9基因编辑载体，然后遗传转化至野生型烟草中，培育NtHSP70-8 CRISPR突变体；所述NtHSP70-8基因的序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述的方法在提高烟草叶片的气孔数量、气孔张开程度中的应用。
3.权利要求1所述的方法在提高叶片水分散失速度中的应用。
4.权利要求1所述的方法在减少烤烟挂灰中的应用。
5.权利要求1所述的方法在培育不易挂灰烤烟新品种中的应用。
CN202110331141.1A 2021-03-29 2021-03-29 与烤烟挂灰相关的基因及其应用 Active CN112725361B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110331141.1A CN112725361B (zh) 2021-03-29 2021-03-29 与烤烟挂灰相关的基因及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110331141.1A CN112725361B (zh) 2021-03-29 2021-03-29 与烤烟挂灰相关的基因及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112725361A CN112725361A (zh) 2021-04-30
CN112725361B true CN112725361B (zh) 2023-07-07

Family

ID=75595910

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110331141.1A Active CN112725361B (zh) 2021-03-29 2021-03-29 与烤烟挂灰相关的基因及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112725361B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001017332A1 (fr) * 1999-09-07 2001-03-15 Kureha Chemical Industry Co., Ltd. Plantes transgeniques contenant le gene dnak ou le gene hsp70
CN102174566A (zh) * 2011-03-01 2011-09-07 南京农业大学 一种通过转CgHSP70基因提高菊花抗逆性的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001017332A1 (fr) * 1999-09-07 2001-03-15 Kureha Chemical Industry Co., Ltd. Plantes transgeniques contenant le gene dnak ou le gene hsp70
CN102174566A (zh) * 2011-03-01 2011-09-07 南京农业大学 一种通过转CgHSP70基因提高菊花抗逆性的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
An endoplasmic reticulum-localized NtHSP70-8 confers drought tolerance in tobacco by regulating water loss and antioxidant capacity;Zhaopeng Song et al.;《Environmental and Experimental Botany》;第188卷;第1-12页 *
Heat shock protein 70 (HmHsp70) from Hypsizygus marmoreus confers thermotolerance to tobacco;Lili Xu et al.;《AMB Expr》;第10卷;第1-10页 *
PREDICTED: Nicotiana tabacum heat shock 70 kDa protein 8-like (LOC107814250), transcript variant X2, mRNA NCBI Reference Sequence: XM_016639627.1;genbank;《genbank》;第1-2页 *
烟草Hsp70 基因家族的鉴定及叶肉内CpHsp70 基因的表达分析;陈二龙等;《吉林农业大学学报》;第41卷(第5期);第553-562页 *
热激蛋白基因NtHSP70-8在烟草温度胁迫中的功能分析;王帅;《中国知网硕士电子期刊》(第2期);第1-47页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112725361A (zh) 2021-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108949774B (zh) 一种利用MsPALM1 人工定点突变体获得多叶型紫花苜蓿材料的方法
US11692200B2 (en) Method for improving rice yield and/or rice blast resistance and protein used thereof
CN107298702B (zh) 一种水稻粒型相关蛋白及其编码基因
CN109234288B (zh) 油菜BnA9-2基因在提高油菜角果抗裂性中的应用
CN111303259A (zh) 水稻转录因子基因OsBEAR1在培育胚芽鞘增长或适于田间直播的水稻品种中的应用
CN114752579A (zh) ZmMAPK蛋白及其编码基因在调控植物低温胁迫耐性中的应用
CN109182357B (zh) 玉米促分裂原活化蛋白激酶基因ZmMPK20在调控气孔运动及植物耐热中的应用
CN107779456B (zh) 蒺藜苜蓿MtWOX11基因及其在提高种子脂肪酸含量中的应用
CN112725361B (zh) 与烤烟挂灰相关的基因及其应用
CN109456396A (zh) 一种水稻叶片衰老和穗型调控基因hk73及其编码的蛋白质、分子标记与应用
CN113481176B (zh) GA3ox1蛋白在调控苜蓿株型中的应用
CN112226458B (zh) 一种利用水稻osa-miR5511基因提高水稻产量的方法
CN112175990B (zh) 阻断或减弱水稻circRNA编码位点的表达以提高水稻苗期生长性状的方法
CN114349835A (zh) GhREM蛋白及其编码基因在调控棉花抗蚜性能中的应用
CN113461794A (zh) 一种调控种子萌发的试剂盒、方法及其应用
CN116003556B (zh) 一种燕子花bHLH3蛋白及其编码基因和应用
CN115960849B (zh) 一种水稻抽穗期相关基因OsJMJ718及其编码蛋白的应用
CN110229801B (zh) 一种控制水稻叶片衰老的基因及其编码的蛋白质
CN117431256B (zh) 一个小麦黄花叶病抗病基因TaRx-2D及其编码的蛋白和应用
CN117126879B (zh) 番茄SlSUVH1基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法
CN111647578B (zh) Usb1蛋白在调控植物抗旱性中的应用
CN117247967B (zh) 雄性不育基因ZmPKSA及其在创制玉米雄性不育系中的应用
CN115287290B (zh) 组蛋白去甲基化酶基因OsJMJ718及其编码蛋白在调控水稻种子活力中的应用
CN116003556A (zh) 一种燕子花bHLH3蛋白及其编码基因和应用
CN117757818A (zh) 烟草多酚氧化酶NtPPO6及其编码基因、基因编辑载体和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant