CN112725354A - 一种膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用 - Google Patents

一种膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用 Download PDF

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CN112725354A CN202110145663.2A CN202110145663A CN112725354A CN 112725354 A CN112725354 A CN 112725354A CN 202110145663 A CN202110145663 A CN 202110145663A CN 112725354 A CN112725354 A CN 112725354A
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刘婷
蒋红军
崔月
于健
孟新廷
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Institute Of Geography Hebei Academy Of Sciences
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Abstract

本发明公开了一种膜联蛋白基因在植物抗盐胁迫中的应用，属于植物基因工程技术领域。探究了AtAnn1基因在植物抗盐胁迫中的作用，为进一步研究AtAnn1基因的作用提供了基础。

Description

一种膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用
技术领域
本发明涉及植物基因工程技术领域，更具体的说是涉及膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用。
背景技术
盐胁迫是影响农作物产量的非生物胁迫因子之一，主要因为在农作物种植过程中，而随着耕地面积不断地减少以及人口不断地增长，为了农作物具有更高的产量和性状，盐碱地是盐类集积的一个土地种类，其土壤中所含的盐分影响到农作物的正常生长。大面积的盐碱地和盐渍化土壤会使部分农作物品种受到不同程度的盐害影响，进而难以发挥出农作物自身的产量潜力，因此研究植物的抗盐性、研究农作物的耐盐机理、培育耐盐农作物品种对开发和有效利用盐碱地或盐渍化土壤具有重要的现实意义。
植物为适应外界环境的变化和自身的需求可通过复杂的信号转导网络来调控生理反应。细胞膜作为细胞与外界环境进行物质、能量交换的界面，在信号传递方面起着非常重要的作用。膜联蛋白Annexins是一类多基因多功能的钙依赖型磷脂结合蛋白，广泛存在于原核和真核生物中。膜联蛋白在动物中的功能研究较多，在植物中的研究还处于起步阶段。
为了适应环境变化带来的逆境胁迫，植物会通过钙信号等信号转导途径进行调控，某些膜联蛋白Annexin参与了植物响应逆境胁迫的生理学反应，可以参与形成活性氧相关的钙通道，但植物在逆境条件下是否利用Annexin介导钙信号产生并对盐胁迫产生响应还有待更深入的研究。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供了膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
膜联蛋白基因在植物盐胁迫调控中的应用。所述膜联蛋白基因为AtAnn1，CDS序列如SEQ ID NO.1所示；
AtAnn1基因编号为AT1G35720。
所述植物为拟南芥。
作为本发明优选的技术方案，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高幼苗的转绿率。
作为本发明优选的技术方案，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高绿色子叶面积。
作为本发明优选的技术方案，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高侧根的生长。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：本发明通过实验确认了膜联蛋白AtAnn1基因可以对钙信号产生正向响应，并确认了AtAnn1基因可以提高拟南芥在盐胁迫下的耐受性，表现为影响幼苗转绿、子叶生长、侧根生长的表型。鉴于AtAnn1基因在盐胁迫中的应用，可以认为该基因对提高植物盐胁迫耐受性具有潜在的应用价值，同时本发明也为利用Annexin基因家族成员培育耐盐、高产的农作物品种奠定良好的理论和应用基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为AtAnn1基因模式图，其中三角形表示T-DNA插入位点，黑色方框表示外显子，灰线表示内含子，黑线表示3’和5’端非编码区。
图2附图为AtAnn1基因纯合突变体Atann1在DNA水平的鉴定电泳图，图中M为DNAMarker，1为野生型Col-0，2为突变体Atann1，3为恢复株系AtANN1/Atann1，4为H2O。
图3附图为AtAnn1基因纯合突变体Atann1在RNA水平的鉴定电泳图，图中M为RNAMarker。
图4附图为盐胁迫下拟南芥野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1种子萌发和幼苗生长状况，图片为盐胁迫第4天拍照。
图5附图为盐胁迫下拟南芥野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1根系生长状况，图片为盐胁迫第5天拍照。
图6附图为盐胁迫对拟南芥种子萌发率的影响，其中图6A～6D分别为0(A)、100(B)、150(C)、200(D)mM/L NaCl处理下拟南芥种子萌发率随时间变化的过程，图6E为不同浓度NaCl处理第4天种子萌发率的统计结果，图6F为150mM NaCl处理第4天处理组与对照组萌发率的比值统计结果；图中
Figure BDA0002930145920000031
代表野生型Col-0，
Figure BDA0002930145920000032
代表突变体Atann1，
Figure BDA0002930145920000033
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图7附图为盐胁迫对拟南芥幼苗转绿率的影响，其中图7A～7D分别为0(A)、100(B)、150(C)、200(D)mM/L NaCl处理下拟南芥幼苗转绿率随时间变化的过程，图7E为不同浓度NaCl处理第4天幼苗转绿率的统计结果，图7F为150mM NaCl处理第4天处理组与对照组转绿率的比值统计结果；图中
Figure BDA0002930145920000034
代表野生型Col-0，
Figure BDA0002930145920000035
代表突变体Atann1，
Figure BDA0002930145920000036
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图8附图为盐胁迫对拟南芥绿色子叶面积的影响，图8A为不同浓度NaCl处理第5天，拟南芥绿色子叶面积变化的统计结果，图8B为150mM/L NaCl处理第5天处理组与对照组绿色子叶面积的比值统计结果；图中
Figure BDA0002930145920000041
代表野生型Col-0，
Figure BDA0002930145920000042
代表突变体Atann1，
Figure BDA0002930145920000043
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图9附图为盐胁迫对拟南芥主根生长的影响，其中图9A～9D分别为0(A)、100(B)、150(C)、200(D)mM/L NaCl处理下拟南芥主根长度随时间变化的过程，图9E为不同浓度NaCl处理第5天幼苗主根长度的统计结果，图9F为150mM NaCl处理第5天处理组与对照组主根长的比值统计结果；图中
Figure BDA0002930145920000044
代表野生型Col-0，
Figure BDA0002930145920000045
代表突变体Atann1，
Figure BDA0002930145920000046
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图10附图为盐胁迫对拟南芥侧根生长的影响，其中图10A～10D分别为0(A)、100(B)、150(C)、200(D)mM/L NaCl处理下拟南芥侧根平均长度随时间变化的过程，图10E为不同浓度NaCl处理第5天幼苗侧根平均长度的统计结果，图10F为150mM NaCl处理第5天处理组与对照组侧根平均长度的比值统计结果；图中
Figure BDA0002930145920000047
代表野生型Col-0，
Figure BDA0002930145920000048
代表突变体Atann1，
Figure BDA0002930145920000049
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图11附图为盐胁迫对拟南芥侧根发生的影响，其中图11A～11D分别为0(A)、100(B)、150(C)、200(D)mM/L NaCl处理下拟南芥侧根数目随时间变化的过程，图11E为不同浓度NaCl处理第5天幼苗侧根数目的统计结果，图11F为150mM NaCl处理第5天处理组与对照组侧根数目的比值统计结果；图中
Figure BDA00029301459200000410
代表野生型Col-0，
Figure BDA00029301459200000411
代表突变体Atann1，
Figure BDA00029301459200000412
代表恢复株系AtANN1/Atann1。
图12附图为拟南芥野生型和突变体根细胞原生质体质膜Ca/K电流对盐胁迫的响应。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例所用材料和试剂如无特别说明，均为市售可得，不做具体限定。
实施例1
对Annexin基因突变株Atann1(salk_015426)突变体进行鉴定
1、基因模式图
AtAnn1基因由3个外显子2个内含子组成，Atann1(salk_015426)突变体T-DNA插入在第3个外显子上，插入位点是第1192个碱基处(参见附图1)。Atann1基因CDS序列如SEQ IDNO.1所示。
2、鉴定AtAnn1纯合突变体
Atann1 DNA水平的鉴定：
我们从拟南芥突变体库Arabidopsis Biological Resource Center(ABRC)购买了拟南芥野生型Col-0和Atann1缺失突变体材料(SALK_015426)，基因编号为AT1G35720，并成功克隆了AtAnn1基因，转化Atann1缺失突变体，构建恢复株系AtANN1/Atann1；提取拟南芥(野生型Col-0、突变体Atann1、恢复株系AtANN1/Atann1)播种第10天幼苗全株总DNA作为模板，进行PCR扩增。
上游引物LP：TGAGCGTGATGCTTTATTGG，SEQ ID NO.2；
下游引物RP：TGCTCCTTCATCAGTTCCAG，SEQ ID NO.3；
上游引物LBb1.3：ATTTTGCCGATTTCGGAAC，SEQ ID NO.4；
下游引物RP：TGCTCCTTCATCAGTTCCAG，SEQ ID NO.3。
PCR反应体系：
Figure BDA0002930145920000051
PCR反应程序：94℃预变性5min，94℃变性30s，退火温度56℃30s，72℃延伸1min30s，30个循环，循环结束后72℃再延伸10min，4℃保存。PCR电泳结果显示：以LP+RP为引物，野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1可扩增出1.2Kb的条带，突变体Atann1无此条带(参见附图2A)。以LBb1.3+RP为引物，突变体Atann1可扩增出0.8Kb的条带，野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1则无此条带(参见附图2B)。
Atann1 RNA水平的鉴定：
提取拟南芥(野生型Col-0、突变体Atann1、恢复株系AtANN1/Atann1)播种第10天幼苗全株总RNA作为模板，ACTIN作为参照，进行PCR扩增。
ACTIN：上游引物LP：AGGCACCTCTTAACCCTAAAGC，SEQ ID NO.5；
下游引物RP：GGACAACGGAATCTCTCAGC，SEQ ID NO.6。
PCR反应体系：
Figure BDA0002930145920000061
PCR反应程序：94℃预变性5min，94℃变性30s，53.5℃复性20s，72℃延伸(时间根据欲扩增长度而定，一般1kb/min)，ACTIN做为参照扩增25个循环，突变体扩增30个循环。循环结束后72℃再延伸10min，4℃保存。
PCR电泳结果显示：野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1的ACTIN条带清晰一致，但野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1中存在AtAnn1基因转录本，突变体Atann1中没有AtAnn1基因的转录本(参见附图3)，说明突变体Atann1中的AtAnn1基因由于T-DNA的插入而被敲除，突变体Atann1在RNA水平为纯合突变体。
实施例2
盐胁迫对拟南芥野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1表型的影响
分别以100mM/L、150mM/L和200mM/L NaCl溶液对拟南芥野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1进行盐胁迫，以0mM/L NaCl溶液作为对照。观察三种材料地上部表型和地下部表型受盐胁迫的影响(参见附图4和附图5)，其中对于地上部表型的影响是将三种材料播种在含有不同浓度NaCl的1/2MS培养基中，22℃光照培养；对于地下部表型的影响是将三种材料播种在1/2MS培养基中，生长第5天转移至含不同浓度NaCl的1/2MS培养基中，继续22℃光照培养。
对培养中的拟南芥野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1每天定时拍照，照片用Image J软件分析，以根长大于0.5mm作为种子萌发的标准。每组统计90颗以上种子，每个处理重复三次求平均值。数据利用Sigmastat3.5软件进行方差分析。
1、盐胁迫对种子萌发的影响
盐胁迫对拟南芥种子萌发率的影响(参见附图6)。结果显示盐胁迫下，三种材料种子的萌发率显著降低，而且达到最大萌发率的时间也明显延长，且随NaCl浓度的升高，受抑制趋势也逐步加重。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1种子播种第2天，0mM/LNaCl(对照组)萌发率分别是100％、98.88±0.48％和99.44±0.48％，三种材料之间无明显差异(参见附图6A)；100mM/L NaCl处理第2天，三种材料的平均萌发率分别是92.77±1.73％、93.33±2.88％和92.22±2.67％，到第3天几乎全部萌发(参见附图6B)；150mM/L NaCl处理后，三种材料的萌发率第2天不到10％，第3天达到90％以上(参见附图6C)，三种材料对NaCl的响应无明显差异；200mM/LNaCl处理，第3天三种材料的种子才萌发，第4天三种材料的萌发率分别是65.00±10.60％、71.66±12.96％和61.22±17.67％，第5天都到达80％以上(参见附图6D)。不同浓度的NaCl处理第4天，100、150mM/LNaCl处理对三种材料的萌发率未产生明显影响，200mM/LNaCl则显著抑制了三种材料的萌发率，但三种材料对NaCl处理的反应无明显差异(参见附图6E)。为了消除样品本身的差异，我们用处理组(150mM/LNaCl处理4天)的数据除以对照组数据，求取每一个材料在盐胁迫处理后萌发率的变化率，结果显示三个基因型不同的材料变化率无明显差异(P>0.05)(参见附图6F)。
AtAnn1基因不参与盐胁迫下拟南芥种子的萌发。
2、盐胁迫对幼苗转绿的影响
盐胁迫对拟南芥幼苗转绿率的影响(参见附图7)。结果显示盐胁迫下，三种材料幼苗转绿率降低，且随着盐浓度的升高三种材料的转绿率逐渐降低，开始转绿的时间也延迟。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1，0mM/LNaCl(对照组)处理组，2天转绿率几乎达到100％，三种材料之间无明显差异(参见附图7A)；100mM/LNaCl处理组，3天三种材料的转绿率分别93.88±4.58％、36.11±1.73％和91.66±4.63％，突变体Atann1的转绿率明显低于野生型和恢复株系，且差异显著(P<0.05)，第4、5天，三种材料的转绿率几乎达到100％(参见附图7B)；150mM/LNaCl处理组，幼苗在第4天开始转绿，三种材料的转绿率分别是66.11±12.97％、34.44±6.93％和76.11±2.09％，突变体Atann1的转绿率显著低于野生型和恢复系，且差异显著(P<0.05)，第5天三种材料的转绿率达到90％以上(参见附图7C)；200mM/LNaCl处理组，幼苗第4天开始转绿，三种材料转绿率约为5％，与对照组相比三种材料的转绿率受抑制程度更大，第5天，三种材料的转绿率约为10％，但三种材料对200mM/LNaCl处理的响应无明显差异(参见附图7D)。不同浓度的NaCl处理4天时，随着NaCl浓度的升高转绿率在逐渐降低，当NaCl浓度升高到150mM/L时，突变体Atann1的转绿率显著低于野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1(参见附图7E)。为了消除样品的本身差异，我们用处理(150mM NaCl处理4天)的数据除以对照组数据，求取每个材料在盐胁迫处理后转绿率的变化率，结果显示野生型Col-0的转绿率是突变体Atann1的1.9倍，恢复株系AtANN1/Atann1的转绿率是突变体Atann1的2.2倍，差异显著(P<0.05)(参见附图7F)。
AtAnn1基因参与盐胁迫下拟南芥幼苗转绿过程。
3、盐胁迫对幼苗绿色子叶面积的影响
盐胁迫对拟南芥幼苗绿色子叶面积的影响(参见附图8)。结果显示盐胁迫下，三种材料的绿色子叶面积降低。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1盐胁迫处理第5天，0mM/LNaCl(对照组)处理组，三种材料的绿色子叶面积分别为2.72±0.16mm2、2.63±0.15mm2和2.76±0.07mm2；100mM/LNaCl处理组，三种材料的绿色子叶面积分为2.57±0.032mm2、2.50±0.09mm2和2.55±0.13mm2，绿色子叶面积低于对照组，三种材料之间差异不显著；150mM/LNaCl处理组，三种材料的绿色子叶面积分别为1.19±0.03mm2、0.87±0.05mm2和1.33±0.13mm2，与对照组相比明显降低，差异显著(P<0.05)；200mM/LNaCl处理组，三种材料的绿色子叶面几乎为零(参见附图7,8A)。为了消除样品的本身差异，我们用处理组(150mM/LNaCl处理5天)的数据除除以对照组数据，求取每个材料在盐胁迫处理后绿色子叶面积的变化率，结果显示野生型Col-0的绿色子叶面积是突变体Atann1的1.3倍，恢复株系AtANN1/Atann1的绿色子叶面积是突变体Atann1的1.48倍，差异显著(P<0.05)(参见附图8B)。
AtAnn1基因参与盐胁迫下拟南芥幼苗子叶生长调控。
4、盐胁迫对主根生长的影响
盐胁迫对拟南芥主根生长的影响(参见附图9)。结果显示，盐胁迫对三种材料幼苗的主根生长产生了显著抑制作用，且随着NaCl浓度的升高，三种材料主根长度受抑制程度逐步加重，150mM/L处理组和200mM/L处理组主根几乎停止生长。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1盐胁迫，0mM/LNaCl(对照组)处理组，移苗后的1～5天三种材料主根长度生长趋势比较一致，第3天三种材料主根长度达到20mm，第4天，三种材料的主根长度分别为27.50±0.38mm、26.24±2.84mm和27.39±1.46mm，第5天，三种材料的主根长度分别为30.99±0.29mm、32.5±0.73mm和30.97±1.29mm(参见附图9A)；100mM/L NaCl处理组，三种材料在第2、3天生长比较缓慢主根长度在10mm左右，第4天三种材料的主根长度分别为14.30±0.43mm、13.79±0.20mm和14.54±0.87mm，第5天三种材料的主根长度分别为6.84±0.70mm、16.17±0.51mm和16.73±0.92mm(参见附图9B)；150、200mM/L NaCl处理5天，三种材料的主根生长受到明显抑制，主根长度约13mm(参见附图9C、D)。移苗后5天随NaCl浓度的升高三种材料的主根生长长度逐渐降低，但三种材料受抑制程度无显著差异(P>0.05)(参见附图9E)。为了消除样品的本身差异，我们用处理组(150mM/L NaCl处理5天)的数据比对照组数据，求取每一个材料在盐胁迫处理后主根长度的变化率，结果显示野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1三种材料主根生长变化率无显著差异(P>0.05)(参见附图9E)。
AtAnn1基因未参与盐胁迫下拟南芥主根生长过程。
5、盐胁迫对侧根生长的影响
盐胁迫对拟南芥侧根生长的影响(参见附图10)。结果显示，不同浓度NaCl处理后，三种材料幼苗的侧根长度呈现先上升后下降的趋势，即低浓度NaCl处理促进侧根生长而高浓度NaCl抑制侧根生长。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1盐胁迫下，0mM/LNaCl(对照组)处理组，移苗第3天三种材料的侧根平均长度分别是2.05±0.91mm、0.98±0.56mm和0.69±0.54mm，第4天三种材料的侧根平均长度分别是2.14±0.62mm、0.95±0.54mm和0.67±0.50mm，第5天三种材料的侧根平均长度4.01±0.66mm、3.66±0.52mm和3.28±0.55mm(参见附图10A)；100mM/L NaCl处理组，移苗第3天三种材料的侧根平均长度只有1mm，第4天三种材料的侧根平均长度分别是2.13±0.05mm、3.22±0.08mm和2.43±0.21mm，第5天三种材料的侧根平均长度分别是3.59±0.16mm、6.05±0.20mm和4.9±0.15mm(参见附图10B)；150mM/L NaCl处理组，第4天三种材料的侧根平均长度分别是0.77±0.36mm、1.31±0.23mm和0.90±0.15mm，第5天三种材料的侧根平均长度分别是1.39±0.06mm、1.45±0.12mm和1.45±0.12mm(参见附图10C)；200mM/L NaCl处理组，移苗后第3、4天恢复株系AtANN1/Atann1的侧根平均长度为0mm，野生型Col-0和突变体Atann1的侧根平均长度约为1mm，第5天，三种材料的侧根平均长度分别为0.8±0.11mm、1.61±0.46mm和0.90±0.08mm(参见附图10D)。移苗后第5天，对不同处理组三种材料侧根平均长度进行统计，其中100mM/L NaCl处理组中，突变体Atann1的侧根平均长度高于野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1的侧根平均长度，突变体Atann1与野生型Col-0侧根平均长度相比差异显著(P<0.05)，150、200mM/L NaCl处理后三种材料的侧根平均长度都大幅度降低(参见附图10E)。为了消除样品的本身差异，我们用处理组(100mM/L NaCl处理5天)的数据比对照组数据，求取每一个材料在盐胁迫处理后侧根平均长度的变化率，结果显示突变体Atann1的侧根平均长度是野生型Col-0的1.9倍，差异显著(P<0.05)，突变体Atann1的单株平均长度是恢复株系AtANN1/Atann1的1.1倍，差异不显著(P>0.05)(参见附图10F)。
AtAnn1基因参与盐胁迫下拟南芥侧根生长过程。
6、盐胁迫对侧根发生的影响
盐胁迫对拟南芥侧根发生的影响(参见附图11)。结果显示，不同浓度NaCl处理后，三种材料幼苗的侧根数目呈现先上升后下降的趋势即低浓度NaCl处理促进侧根生长而高浓度NaCl抑制侧根生长。野生型Col-0、突变体Atann1和恢复株系AtANN1/Atann1盐胁迫下，0mM/LNaCl(对照组)处理组，移苗后第3天三种材料的侧根数目小于0.2，第4天三种材料的侧根数目分别为0.5±0.05、0.41±0.03和0.45±0.095，第5天三种材料的侧根数目分别为0.62±0.10、0.66±0.07和0.58±0.15(参见图11A)；100mM/L NaCl处理3天，三种材料的侧根数目约为0.2，第4天三种材料的侧根数目分别为0.66±0.11、0.83±0.09和0.58±0.09，第5天三种材料的侧根数目分别为0.75±0.01、0.95±0.15和0.58±0.09(参见附图11B)；150mM/LNaCl组，处理3天三种材料的侧根数目为0，第4天低于0.2,第5天三种材料的侧根数目分别为0.54±0.29、0.37±0.06和0.41±0.03(参见附图11C)；200mM/L NaCl处理组，三种材料侧根数目的发生受到严重影响，到第5天仍旧低于0.3(参见附图11D)。移苗第5天，对不同处理组三种材料侧根数目进行统计，其中100mM/L NaCl处理组5天突变体Atann1侧根数目高于野生型Col-0和恢复株系AtANN1/Atann1的侧根数目；150、200mM/L NaCl处理组，三种材料侧根数目与对照组相比明显下降但无明显差异(参见附图11E)。为了消除样品的本身差异，我们用处理组(100mM/L NaCl处理5天)的数据除以对照组数据，求取每一个材料在盐胁迫处理后侧根数目的变化率，结果显示突变体Atann1的侧根数目是野生型Col-0的1.2倍，差异不显著(P>0.05)，突变体Atann1的侧根数目是恢复株系AtANN1/Atann1的1.4倍，差异不显著(P>0.05)(参见附图11F)。
AtAnn1基因未参与盐胁迫下拟南芥侧根发生过程。
实施例3
盐胁迫对拟南芥野生型Col-0和突变体Atann1钙信号的影响
以拟南芥野生型Col-0和突变体Atann1幼苗根细胞原生质体为材料，采用全细胞电压钳制方式对NaCl处理前后跨膜钙离子和钾离子流动进行了检测。结果显示，在野生型Col-0细胞中，盐胁迫处理使Ca-in和K-out都显著增强，而突变体Atann1对于盐胁迫的响应方式与野生型Col-0明显不同，突变体Atann1对于离子通道的激活作用显著减弱(参见附图12)，可见Atann1基因在盐胁迫下促进Ca2+内流过程中发挥出介导作用。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 河北师范大学
河北省科学院地理科学研究所
<120> 一种膜联蛋白基因在植物盐胁迫中的应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 954
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcgactc ttaaggtttc tgattctgtt cctgctcctt ctgatgatgc tgagcaattg 60
agaaccgctt ttgaaggatg gggtacgaac gaggacttga tcatatcaat cttggctcac 120
agaagtgctg aacagaggaa agtcatcagg caagcatacc acgaaaccta cggcgaagac 180
cttctcaaga ctcttgacaa ggagctctct aacgatttcg agagagctat cttgttgtgg 240
actcttgaac ccggtgagcg tgatgcttta ttggctaatg aagctacaaa aagatggact 300
tcaagcaacc aagttcttat ggaagttgct tgcacaagga catcaacgca gctgcttcac 360
gctaggcaag cttaccatgc tcgctacaag aagtctcttg aagaggacgt tgctcaccac 420
actaccggtg acttcagaaa gcttttggtt tctcttgtta cctcatacag gtacgaagga 480
gatgaagtga acatgacatt ggctaagcaa gaagctaagc tggtccatga gaaaatcaag 540
gacaagcact acaatgatga ggatgttatt agaatcttgt ccacaagaag caaagctcag 600
atcaatgcta cttttaaccg ttaccaagat gatcatggcg aggaaattct caagagtctt 660
gaggaaggag atgatgatga caagttcctt gcacttttga ggtcaaccat tcagtgcttg 720
acaagaccag agctttactt tgtcgatgtt cttcgttcag caatcaacaa aactggaact 780
gatgaaggag cactcactag aattgtgacc acaagagctg agattgactt gaaggtcatt 840
ggagaggagt accagcgcag gaacagcatt cctttggaga aagctattac caaagacact 900
cgtggagatt acgagaagat gctcgtcgca cttctcggtg aagatgatgc ttaa 954
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tgagcgtgat gctttattgg 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgctccttca tcagttccag 20
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
attttgccga tttcggaac 19
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aggcacctct taaccctaaa gc 22
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ggacaacgga atctctcagc 20

Claims (4)

1.一种膜联蛋白基因在植物盐胁迫调控中的应用，其特征在于，所述膜联蛋白基因为AtAnn1，CDS序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高幼苗的转绿率。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高绿色子叶面积。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在盐胁迫下，所述AtAnn1基因能提高侧根的生长。
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