CN110079547B - eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用。本发明要求保护用于抑制植物中特定基因表达的物质的应用：调控植物对脱落酸的耐受性；选育对脱落酸耐受性降低的植物品种；调控植物的胎萌抗性；选育胎萌抗性增高的植物品种；特定基因为编码eIF4G蛋白的基因。本发明发现eIF4G蛋白是ABA信号传导中重要的负调节子，敲除eIF4G基因可以使植物对ABA的耐受性显著降低。本发明符合可持续农业发展需求，对于培育高效耐受ABA和逆境胁迫新品种等方面具有重要的实用价值和市场前景。

Description

eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用。

背景技术

脱落酸(Abscisic Acid，ABA)是植物体内重要的激素之一，其在植物生长发育的各阶段都发挥了重要作用，包括种子休眠、萌发，幼苗生长，气孔运动，以及营养生长向生殖生长转换等过程。同时，ABA在植物应对外界各种逆境胁迫响应中起着重要的作用，例如干旱、低温、高温、盐、机械伤害等非生物胁迫以及病虫害等生物胁迫。因此植物ABA信号转导通路分子机制的阐明对调控植物生长、提高作物品质、改良遗传特性、促进现代农业生产发展具有重要的意义。

植物体内ABA信号转导网络极其复杂。近年来，植物中ABA受体及其信号转导功能组分的筛选与鉴定、ABA生物代谢及转运以及ABA信号转导通路模型的构建及与其它植物激素间的交叉对话等研究均取得了重要进展，有力推动了植物中ABA信号转导调控机理的阐明。到目前为止，研究人员分别鉴定出了三种不同的ABA受体或候选受体：镁螯合酶H亚基CHLH/ABAR、START超家族中的PYR/PYL/RCAR受体以及G蛋白偶联受体GTG1、GTG2；除此之外一些跟ABA信号转导有关的ABA响应基因也被鉴定出来。这些ABA响应基因既包括正调节子也包括负调节子，如各类转录因子、蛋白激酶、磷酸酶以及部分第二信使(钙离子信号、环核苷酸、活性氧、磷脂类)等，这些ABA受体以及响应基因的发现加深了人们对ABA作用机制的认识，对现代农业生产发展具有重要的应用价值。

此外，在植物生长发育过程中，各种逆境胁迫严重影响种子的正常萌发和幼苗的生长，从而降低了作物的产量及品质。在农业生产中，水稻、小麦、油菜、玉米等禾本科植物在收获时如遇连续下雨，种子收获前会出现穗发芽的胎萌现象。而种子的胎萌现象取决于种子的休眠特性，ABA是种子休眠的主导因素，对ABA反应不敏感可导致种子胎萌的发生。胎萌消耗其部分营养和贮藏物质，致使种子食用品质、贮藏品质下降，给农业生产造成了较大的损失。因此，减少农作物种子在收获时的穗发芽成为了植物抗逆境胁迫机理研究和农业生产上的重要课题，从而有助于提高种子产量、品质，为抗逆性状改良提供有效的解决手段和方法。

随着ABA信号传导研究的深入及应用的拓展，如何利用发现的ABA信号通路中的正负调节子改变农作物种子萌发和萌发后幼苗生长发育对ABA耐受性成为目前研究的热点。研究植物对ABA耐受性的调控网络对于培育出更多优良的抗逆品种具有非常广阔的应用前景和十分重要的农业生产意义。

发明内容

本发明的目的是提供eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用。

本发明要求保护用于抑制植物中特定基因表达的物质的应用，为如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)或(c5)或(c6)或(c7)或(c8)：

(c1)调控植物对脱落酸的耐受性；

(c2)选育对脱落酸耐受性降低(耐受性降低，即敏感性提高，或称为不耐受性提高)的植物品种；

(c3)调控植物的胎萌抗性；

(c4)选育胎萌抗性增高(胎萌抗性增高，即发生胎萌现象的种子变少)的植物品种；

(c5)调控植物种子在脱落酸环境中的萌发特性；

(c6)选育种子在脱落酸环境中萌发延迟的植物品种；

(c7)调控植物在脱落酸环境中的根生长特性；

(c8)选育在脱落酸环境中根生长受到抑制的植物品种；

所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因。

抑制植物中特定基因表达的物质可为：通过RNAi抑制特定基因表达的物质、通过敲除特定基因的部分抑制特定基因表达的物质、通过敲除特定基因的全部抑制特定基因表达的物质、通过取代特定基因中的部分区段抑制特定基因表达的物质、通过插入若干核苷酸抑制特定基因表达的物质、通过基因编辑抑制特定基因表达的物质等。

所述调控植物对脱落酸的耐受性具体体现为：植物胎萌和萌发后幼苗生长对ABA的耐受性随着eIF4G蛋白的表达量的调低而降低。

选育植物品种时，可先抑制受体植物中特定基因表达从而得到转基因植物，然后将转基因植物作为亲本进行自交或者与其它品种的植物杂交。

本发明还保护eIF4G蛋白的应用，为如下(d1)或(d2)或(d3)或(d4)或(d5)或(d6)或(d7)或(d8)：

(d1)调控植物对脱落酸的耐受性；

(d2)选育对脱落酸耐受性提高的植物品种；

(d3)调控植物的胎萌抗性；

(d4)选育胎萌抗性降低(胎萌抗性降低，即发生胎萌现象的种子变多)的植物品种；

(d5)调控植物种子在脱落酸环境中的萌发特性；

(d6)选育种子在脱落酸环境中萌发提早的植物品种；

(d7)调控植物在脱落酸环境中的根生长特性；

(d8)选育在脱落酸环境中根生长受到促进的植物品种。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：抑制受体植物中特定基因表达，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物对脱落酸的耐受性降低；所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因。抑制植物中特定基因表达的实现方式包括但不限于：通过RNAi抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的部分抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的全部抑制特定基因表达、通过取代特定基因中的部分区段抑制特定基因表达、通过插入若干核苷酸抑制特定基因表达、通过基因编辑抑制特定基因表达等。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：降低受体植物中eIF4G蛋白的含量和/或活性，从而降低植物对脱落酸的耐受性。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：抑制受体植物中特定基因表达，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物的胎萌抗性增高；所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因。抑制植物中特定基因表达的实现方式包括但不限于：通过RNAi抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的部分抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的全部抑制特定基因表达、通过取代特定基因中的部分区段抑制特定基因表达、通过插入若干核苷酸抑制特定基因表达、通过基因编辑抑制特定基因表达等。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：降低受体植物中eIF4G蛋白的含量和/或活性，从而提高植物的胎萌抗性(即发生胎萌现象的种子变少)。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：抑制受体植物中特定基因表达，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物的种子在脱落酸环境中萌发延迟和/或所述转基因植物在脱落酸环境中主根生长受到抑制；所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因。抑制植物中特定基因表达的实现方式包括但不限于：通过RNAi抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的部分抑制特定基因表达、通过敲除特定基因的全部抑制特定基因表达、通过取代特定基因中的部分区段抑制特定基因表达、通过插入若干核苷酸抑制特定基因表达、通过基因编辑抑制特定基因表达等。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物导入编码eIF4G蛋白的基因并使其表达，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物对脱落酸的耐受性增高。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物导入编码eIF4G蛋白的基因并使其表达，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物的胎萌抗性降低(即发生胎萌现象的种子变多)。

以上任一所述eIF4G蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)将序列表中序列1所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物对脱落酸的耐受性相关的由其衍生的蛋白质；

(a3)来源于拟南芥且与(a1)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；

(a4)在(a1)或(a2)或(a3)限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL
HA	9	YPYDVPDYA

以上任一所述编码eIF4G蛋白的基因为如下(1)至(5)中任一所述的DNA分子：

(1)编码区如序列表中序列2自5’末端第193-5376位核苷酸所示的DNA分子；

(2)序列表中序列2所示的DNA分子；

(3)序列表中序列3所示的DNA分子；

(4)在严格条件下与(1)至(3)中任一所述DNA分子杂交且编码所述eIF4G蛋白的DNA分子；

(5)来源于拟南芥且与(1)至(3)中任一所述DNA分子具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述eIF4G蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

以上任一所述植物可为双子叶植物或单子叶植物。

所述双子叶植物进一步可为十字花科植物。

所述十字花科植物更具体可为拟南芥，例如哥伦比亚生态型拟南芥。

本发明的发明人通过研究发现eIF4G蛋白是ABA信号传导中重要的负调节子。敲除eIF4G基因可以使植物的种子萌发率和萌发后幼苗生长对ABA的耐受性显著降低。本发明可通过基因工程手段敲除eIF4G基因，或者抑制eIF4G基因的表达，获得eIF4G基因低表达或不表达的抗胎萌转基因作物，从而能够很好的抑制种子过早萌发，减少胎萌所消耗的营养和贮藏物质，使种子食用品质、贮藏品质和种子质量提高，给作物生产提高更大的经济利益。另外，还可将其作为一种研究其它具有调控重要农业性状的功能基因调控农作物对ABA耐受性研究的生长模型，从而有助于深入阐明ABA信号通路中正负调节子调控植物对ABA耐受性的分子机制，从而为实际农业生产提供理论支持。本发明符合可持续农业发展需求，对于研究植物耐受ABA的分子机制、改良农作物遗传特性，培育高效耐受ABA和逆境胁迫新品种等方面具有重要的实用价值和市场前景。

附图说明

图1为突变体e4g-2中T-DNA插入位置的示意图。

图2为哥伦比亚生态型拟南芥植株和突变体e4g-2的后代植株中eIF4G基因的mRNA相对表达水平。

图3为种子萌发实验的结果。

图4为幼苗生长实验中各组植株群体的照片。

图5为幼苗生长实验中各组代表性植株的单株照片。

图6为幼苗生长实验中各组的主根根长平均值。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

拟南芥生物研究中心，即Arabidopsis Biological Resource Center(ABRC)。

哥伦比亚生态型拟南芥，又称野生型拟南芥，用Col-0或WT表示：拟南芥生物研究中心。哥伦比亚生态型拟南芥中，eIF4G蛋白如序列表的序列1所示(由1727个氨基酸残基组成)。哥伦比亚生态型拟南芥的cDNA中，编码eIF4G蛋白的基因如序列表的序列2所示(由5526个核苷酸组成，其中第193-5376位核苷酸为开放阅读框)。哥伦比亚生态型拟南芥的基因组DNA中，编码eIF4G蛋白的基因如序列表的序列3所示(由6796个核苷酸组成)。

实施例1、突变体的获得和鉴定

一、突变体e4g-2的获得

从拟南芥生物研究中心商购编号为SALK_136398的拟南芥种子(背景为哥伦比亚生态型拟南芥，为T-DNA插入突变体)，培育为植株。提取幼苗期植株的基因组DNA，分别用e4g-2LP和e4g-2RP组成的引物对以及LBb1.3和e4g-2RP组成的引物对进行PCR鉴定。如果采用e4g-2LP和e4g-2RP组成的引物对未检测到扩增产物，并且，采用LBb1.3和e4g-2RP组成的引物对可以检测到扩增产物，证明该植株为两条染色体一致的纯合突变体。将纯合突变体进行测序验证。

e4g-2LP：5'-AACCTTCTTCGTTCTCTTCGC-3'；

e4g-2RP：5'-CTGACAACGCCTTAAACGAAG-3'；

LBb1.3：5’-TTGCCGATTTCGGAAC-3’。

经过上述步骤，筛选到的的一株纯合突变体植株，命名为突变体e4g-2。与哥伦比亚生态型拟南芥的基因组DNA相比，突变体e4g-2的差异仅在于在eIF4G基因的第9外显子区域插入了T-DNA。示意图见图1。

二、突变体e4g-2的后代植株的获得

突变体e4g-2，自交并收获种子，即为突变体e4g-2的种子。

突变体e4g-2，自交并收获种子，将种子培育为植株，即为突变体e4g-2的后代植株。

三、eIF4G基因的表达水平

供试植株分别为：哥伦比亚生态型拟南芥植株，突变体e4g-2的后代植株。

每种供试植株均设置3个生物学重复。

提取供试植株(在培养基中生长14天的幼苗)的总RNA，反转录得到cDNA，利用实时荧光定量PCR检测eIF4G基因的表达水平(以Actin2/8作为内参基因；采用Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪)。

用于检测eIF4G基因的引物如下：

eIF4G-RT-F1：5'-AAGTACTACAAGGGCCATCA-3'；

eIF4G-RT-R1：5'-CGAATCAGTTACCCAGAGAG-3'。

用于检测内参基因的引物如下：

Actin-F：5’-GGTAACATTGTGCTCAGTGGTGG-3’；

Actin-R：5’-AACGACCTTAATCTTCATGCTGC-3’。

荧光定量PCR的反应体系见表2。

表2

试剂	用量
		2×SYBR Premix Ex Taq(TAKARA)	5μL
正向引物(20μM)	0.25μL
		反向引物(20μM)	0.25μL
cDNA模板	0.5μL
		ddH<sub>2</sub>O	补至10μL

荧光定量PCR的反应程序见表3。

表3

以2^-ΔCt作为衡量基因转录水平的相对差值，对各个基因的表达进行分析比较。Ct值为PCR反应荧光信号达到设定阈值时的循环数，ΔCt值为特异引物Ct值与Actin引物Ct值之差。

以哥伦比亚生态型拟南芥植株中eIF4G基因的mRNA相对表达水平为1.0。哥伦比亚生态型拟南芥植株和突变体e4g-2的后代植株中eIF4G基因的mRNA相对表达水平见图2。图2中，突变体e4g-2的后代植株用e4g-2表示。突变体e4g-2的后代植株中未检测到eIF4G基因的mRNA。

实施例2、植株对ABA的耐受性

一、种子萌发实验

ABA在促进种子休眠、抑制种子萌发中发挥重要调节作用。遗传学研究表明，种子萌发过程中发生的染色质重建及组蛋白甲基化、去乙酰化等过程均受ABA调节。随着外源ABA浓度的增加，野生型拟南芥种子的萌发率会逐渐降低。统计种子萌发实验是研究ABA信号转导的重要方法之一。

供试种子为：哥伦比亚生态型拟南芥的种子，突变体e4g-2的种子。

第一组：将供试种子播种在MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养，分别于光照培养箱中培养36小时或48小时或72小时后统计种子萌发率。

第二组：将供试种子播种在含0.6μM ABA的MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养，分别于光照培养箱中培养36小时或48小时或72小时后统计种子萌发率。

第三组：将供试种子播种在含0.8μM ABA的MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养，分别于光照培养箱中培养36小时或48小时或72小时后统计种子萌发率。

进行三次重复试验，每次重复试验中每种供试种子设置80-100粒生物学重复。

结果见图3。在不含ABA的培养基上，在光照培养箱中培养36小时或48小时后，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子相比，突变体e4g-2的种子的种子萌发率均无显著差异。在含0.6μM ABA的培养基上，在光照培养箱中培养36小时或48小时后，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子相比，突变体e4g-2的种子的种子萌发率均显著降低，表现出对ABA显著的超敏表型(对ABA的耐受性降低)。在含0.8μM ABA的培养基上，在光照培养箱中培养36小时或48小时后，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子相比，突变体e4g-2的种子的种子萌发率均显著降低，表现出对ABA显著的超敏表型(对ABA的耐受性降低)。各组在光照培养箱中培养72小时后，哥伦比亚生态型拟南芥的种子和突变体e4g-2的种子的种子萌发率均无显著差异。结果表明，敲除eIF4G基因可以增加种子对ABA的不耐受性，延迟种子萌发。

二、幼苗生长实验

ABA能够抑制幼苗生长。随着外源ABA浓度的升高，野生型拟南芥受到的抑制得到增强，其幼苗主根以及叶片的生长都会受到不同程度的抑制。

供试种子为：哥伦比亚生态型拟南芥的种子，突变体e4g-2的种子。

第一组：将供试种子播种在MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养14天，然后观察幼苗生长的情况并测定主根长度。

第二组：将供试种子播种在含0.6μM ABA的MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养14天，然后观察幼苗生长的情况并测定主根长度。

第三组：将供试种子播种在含0.8μM ABA的MS培养基平板上，4℃低温层积3天，然后转移到光照培养箱中培养14天，然后观察幼苗生长的情况并测定主根长度。

进行三次重复试验，每次重复试验中每种供试种子设置80-100粒生物学重复。

各组植株群体的照片见图4。各组代表性植株的单株照片见图5。各组的主根根长平均值见图6。

在不含ABA的培养基上，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子长成的幼苗相比，突变体e4g-2的种子长成的幼苗的表型无显著差异，主根根长无显著差异。在含0.6μM ABA的培养基上，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子长成的幼苗相比，突变体e4g-2的种子长成的幼苗的生长受到显著抑制，主根根长显著降低，表现出对ABA显著的超敏表型(对ABA的耐受性降低)。在含0.8μM ABA的培养基上，与哥伦比亚生态型拟南芥的种子长成的幼苗相比，突变体e4g-2的种子长成的幼苗的生长受到显著抑制，主根根长显著降低，表现出对ABA显著的超敏表型(对ABA的耐受性降低)。结果表明，敲除eIF4G基因可以增加幼苗对ABA的不耐受性。

本发明可通过基因工程手段敲除eIF4G基因，或者抑制eIF4G基因的表达，从而得到抗胎萌的转基因作物，从而能够抑制种子过早萌发，减少胎萌所消耗的营养和贮藏物质，使种子食用品质、贮藏品质和种子质量显著提高，给作物生产带来更大的经济利益。此外还可将其作为一种研究其它具有调控重要农业性状的功能基因调控作物种子萌发和萌发后幼苗生长发育的生长模型，从而有助于深入阐明ABA信号通路中正负调节因子调控植物对ABA的耐受性的分子机制，从而为实际农业生产提供理论支持。本发明符合可持续农业发展需求，对于研究植物ABA耐受性的分子机制、农作物遗传特性改良等方面具有重要的实用价值和市场前景。

SEQUENCE LISTING

<110> 清华大学

<120> eIF4G蛋白在调控植物对ABA耐受性中的应用

<130> CGGNQAYX196037

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1727

<212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1

Met Ser Tyr Asn Gln Ser Arg Pro Asp Arg Ser Glu Thr Gln Tyr Arg

1 5 10 15

Arg Thr Gly Arg Ser Thr Gly Asn Gln Gln Gln Gln Gln Gln His Arg

20 25 30

Ser Ser Ser Ala Ala Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Gly Ala Pro Gly Ser

35 40 45

Ala Pro Ala Pro Ser Thr Tyr Pro Asp Asn Ser Ser Leu Ser Ser Asn

50 55 60

Arg Ser Phe Lys Lys Pro Gly Asn Ala Gln Gly Gly Gly Gln Pro Arg

65 70 75 80

Val Asn Leu Pro Pro Val Asn His Pro Asn Asn His Asn Asn Gly Pro

85 90 95

Asn Ala His Ser Arg Ser Gln Val Thr Gly Glu Pro Gly Val Gly Gly

100 105 110

Pro Thr Asn Pro Thr Glu Ser Phe Asn Arg Asn Thr Gly Pro Ile Pro

115 120 125

Lys Ala Pro Thr Ser Gln Ser Thr Val Met Ser Ser Lys Ile Asn Glu

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Ala Lys Val Ala Ala Ser Gly Asp Ala Ser Gln Ala

145 150 155 160

Phe Pro Leu Gln Phe Gly Ser Leu Gly Pro Asp Leu Met Val Pro Ala

165 170 175

Arg Thr Thr Ser Ala Pro Pro Asn Met Asp Asp Gln Lys Arg Ala Gln

180 185 190

Met Gln Gln Ser Ser Leu Arg Thr Ala Ser Asn Val Pro Ala Ser Val

195 200 205

Pro Lys Lys Asp Ser Ser Asn Lys Gly Ala Asp Asn Gln Leu Met Arg

210 215 220

Lys Glu Gly His Asn Pro Ser Ser Glu Lys Ala Asp Ile Gln Val Pro

225 230 235 240

His Ile Ala Pro Pro Ser Gln Thr Gln Lys Ser Pro Ile Thr Asn Ile

245 250 255

Arg Met Pro Ser Val Gln Thr Pro Tyr Gln His Thr Gln Val Pro His

260 265 270

Pro Val His Phe Gly Gly Pro Asn Met His Met Gln Thr Pro Val Thr

275 280 285

Ala Thr Ser Phe Gln Met Pro Met Pro Met Ala Leu Ser Met Gly Asn

290 295 300

Thr Pro Gln Ile Pro Pro Gln Val Phe Tyr Gln Gly His Pro Pro His

305 310 315 320

Pro Met His His Gln Gly Met Met His Gln Ala Gln Gly His Gly Phe

325 330 335

Ala Thr Pro Met Gly Ala Gln Ile His Pro Gln Leu Gly His Val Gly

340 345 350

Val Gly Leu Ser Pro Gln Tyr Pro Gln Gln Gln Gly Gly Lys Tyr Gly

355 360 365

Gly Ala Arg Lys Thr Thr Pro Val Lys Ile Thr His Pro Asp Thr His

370 375 380

Glu Glu Leu Arg Leu Asp Arg Arg Gly Asp Pro Tyr Ser Glu Gly Asp

385 390 395 400

Ser Thr Ala Leu Lys Pro His Ser Asn Pro Pro Pro Arg Ser Gln Pro

405 410 415

Val Ser Ser Phe Ala Pro Arg Pro Val Asn Leu Val Gln Pro Ser Tyr

420 425 430

Asn Ser Asn Thr Met Ile Tyr Pro Pro Val Ser Val Pro Leu Asn Asn

435 440 445

Gly Pro Met Ser Ser Ala Gln Ala Pro Arg Tyr His Tyr Pro Val Ile

450 455 460

Asp Gly Ser Gln Arg Val Gln Leu Ile Asn Gln Pro Ala His Thr Ala

465 470 475 480

Pro Gln Leu Ile Arg Pro Ala Ala Pro Ala His Leu Ser Ser Asp Ser

485 490 495

Thr Ser Ser Val Lys Ala Arg Asn Ala Gln Asn Val Met Ser Ser Ala

500 505 510

Leu Pro Val Asn Ala Lys Val Ser Val Lys Pro Ala Gly Val Ser Glu

515 520 525

Lys Leu Gly Ser Pro Lys Asp Arg Ser His Gly Glu Val Asn Ile Ser

530 535 540

Leu Ser Gln Lys Asn Val Glu Ala Cys Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln

545 550 555 560

Pro Lys Pro Ser Phe Val Ser Gly Val Pro Asn Ser Ser Ala Pro Pro

565 570 575

Ala Lys Ser Pro Val Glu Thr Val Pro Leu Ala Lys Ser Ser Val Glu

580 585 590

Thr Val Pro Pro Val Lys Ser Ser Val Glu Thr Ala Pro Val Thr Thr

595 600 605

Thr Glu Ile Arg Arg Ala Glu Met Val Ser Glu Ser Ile Ser Val Glu

610 615 620

Asp Gln Thr Cys Lys Val Glu Pro Pro His Asn Leu Thr Glu Asn Arg

625 630 635 640

Gly Gln Thr Met Pro Asp Ser Leu Val Ser Asp Pro Glu Thr Ala Thr

645 650 655

Val Ala Ala Lys Glu Asn Leu Ser Leu Pro Ala Thr Asn Gly Phe Arg

660 665 670

Lys Gln Leu Leu Lys Val Ser Thr Thr Ser Asp Ala Pro Thr Ser Asp

675 680 685

Ser Val Asp Thr Ser Ile Asp Lys Ser Thr Glu Gly Ser Ser His Ala

690 695 700

Ser Ser Glu Ile Ser Gly Ser Ser Pro Gln Glu Lys Asp Leu Lys Cys

705 710 715 720

Asp Asn Arg Thr Ala Ser Asp Lys Leu Asp Glu Arg Ser Val Ile Ser

725 730 735

Asp Ala Lys His Glu Thr Leu Ser Gly Val Leu Glu Lys Ala Gln Asn

740 745 750

Glu Val Asp Gly Ala Thr Asp Val Cys Pro Val Ser Glu Lys Leu Ala

755 760 765

Val Thr Asp Asp Thr Ser Ser Asp Leu Pro His Ser Thr His Val Leu

770 775 780

Ser Ser Thr Val Pro Leu Gly His Ser Glu Thr His Lys Ser Ala Val

785 790 795 800

Glu Thr Asn Thr Arg Arg Asn Thr Ser Thr Lys Gly Lys Lys Lys Ile

805 810 815

Lys Glu Ile Leu Gln Lys Ala Asp Ala Ala Gly Thr Thr Ser Asp Leu

820 825 830

Tyr Met Ala Tyr Lys Gly Pro Glu Glu Lys Lys Glu Ser Ser Asn Val

835 840 845

Val His Asp Val Ser Asn Gln Asn Leu Leu Pro Ala Ile Pro Gln Ala

850 855 860

Val Glu Ala Ile Val Asp Thr Glu Pro Val Lys Asn Glu Pro Glu Asp

865 870 875 880

Trp Glu Asp Ala Ala Asp Val Ser Thr Pro Lys Leu Glu Thr Ala Asp

885 890 895

Asn Ser Val Asn Ala Lys Arg Gly Ser Ser Asp Glu Val Ser Asp Asn

900 905 910

Cys Ile Asn Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Arg Asp Phe Leu Leu Lys Phe

915 920 925

Ala Asp Leu Cys Thr Ala Leu Pro Glu Gly Phe Asp Val Ser Pro Asp

930 935 940

Ile Ala Asn Ala Leu Ile Val Ala Tyr Met Gly Ala Ser His His Glu

945 950 955 960

His Asp Ser Tyr Pro Thr Pro Gly Lys Val Met Asp Arg Gln Ala Ser

965 970 975

Gly Ala Arg Leu Asp Arg Arg Pro Ser Asn Val Ala Gly Asp Asp Arg

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Trp Thr Lys Asn Gln Gly Ser Leu Pro Ala Gly Tyr Gly Gly Asn Val

995 1000 1005

Gly Phe Arg Pro Gly Gln Gly Gly Asn Ser Gly Val Leu Arg Asn

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Pro Arg Met Gln Gly Pro Ile Ile Ser Arg Pro Met Gln Pro Val

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Gly Pro Met Gly Gly Met Gly Arg Asn Thr Pro Asp Leu Glu Arg

1040 1045 1050

Trp Gln Arg Gly Ser Asn Phe Gln Gln Lys Gly Leu Phe Pro Ser

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Pro His Thr Pro Met Gln Val Met His Lys Ala Glu Arg Lys Tyr

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Gln Val Gly Thr Ile Ala Asp Glu Glu Gln Ala Lys Gln Arg Gln

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Leu Lys Ser Ile Leu Asn Lys Leu Thr Pro Gln Asn Phe Glu Lys

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Leu Phe Glu Gln Val Lys Ser Val Asn Ile Asp Asn Ala Val Thr

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Leu Ser Gly Val Ile Ser Gln Ile Phe Asp Lys Ala Leu Met Glu

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Pro Thr Phe Cys Glu Met Tyr Ala Asp Phe Cys Phe His Leu Ser

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Gly Ala Leu Pro Asp Phe Asn Glu Asn Gly Glu Lys Ile Thr Phe

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Lys Arg Leu Leu Leu Asn Lys Cys Gln Glu Glu Phe Glu Arg Gly

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Met Lys Val Glu Gly Pro Lys Lys Ile Glu Glu Val His Arg Asp

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Ser Arg Ala Ser Asp Leu Ser Pro Glu Val Ser Ser Ala Arg Gln

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atatctctcc tttcttgctg gtcatttgtt tcattcttcg caaagtcatc agatactgcc 5700

acatttagga aattattctg tgggaacctg tgtaggtata attggatcaa attacagttc 5760

attcgtttac agttagagcg tttgtttaca acgacagatc atctgataaa gtgtatattt 5820

cttgaagtat gtaaattaga atttgctcca aacaaaacgg cttaaaaata catatgagag 5880

actttgttct ttgactttaa tagaatctct aatacagggg taaactctgt tttttttact 5940

gactgtgcgt tttatgtatg atgttagttt ctattcgttt accctcttta ttattgataa 6000

gcactctggt gcgttccaat gtgttcttgt gcagtgcccg agatgagaat gagattggta 6060

tgtgcatgaa agatatgaat tcaccagctt accacccaac aatgatttct ctctgggtaa 6120

ctgattcgtt tgagagaaaa gacaaagaaa gggatctctt agcaaagctc cttgtgaacc 6180

tcgtgaaatc tgctgacaac gccttaaacg aagtccagct agtgaaaggg taagtaaaca 6240

aagcccataa atcttgaagc cctagtctaa tcaaacgtct gttgcttaaa tcttttactg 6300

cttttttttt cacaggtttg aatcggtttt gaaaaccctg gaggatgcag taaatgatgc 6360

tccaaaagca gcagagtttc ttggtagaat atttgggaaa agtgtgacag agaaagtagt 6420

gacattgaca gagattggtc ggttaatcca ggaaggagga gaagaaccag gaagtctgat 6480

agagtttgga ttaggcggcg atgttcttgg gagtgttttg gagatgataa aaacagaagc 6540

tggagaagaa acgttggttg agattcgccg gagctcaggt ctgaggattg aaaatttcaa 6600

acctcatgca cctaaccggt ctaagatatt agagaaattt acttaggaaa aaaaaatgga 6660

accatctttt gggttccttt cttcttctct ttttttgttt ctctcttaaa agtcttttct 6720

cttttcaagt gcttcaaaca aaactaattt gttataaagg gagtttctct attttattat 6780

atagcaaaaa acttcc 6796

Claims (5)

1.用于抑制植物中特定基因表达的物质的应用，为如下（c2）或（c6）或（c8）：

（c2）选育对脱落酸耐受性降低的植物品种；

（c6）选育种子在脱落酸环境中萌发延迟的植物品种；

（c8）选育在脱落酸环境中根生长受到抑制的植物品种；

所述植物为拟南芥；

所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因；

所述eIF4G蛋白为如下（a1）或（a4）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a4）在（a1）限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述编码eIF4G蛋白的基因为如下（1）至（3）中任一所述的DNA分子：

（1）编码区如序列表中序列2自5’末端第193-5376位核苷酸所示的DNA分子；

（2）序列表中序列2所示的DNA分子；

（3）序列表中序列3所示的DNA分子。

3.一种使植物在脱落酸环境中耐受性降低和/或萌发延迟和/或主根生长受到抑制的方法，包括如下步骤：抑制受体植物中特定基因表达，得到转基因植物；

所述植物为拟南芥；

所述特定基因为编码eIF4G蛋白的基因；

所述eIF4G蛋白为如下（a1）或（a4）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a4）在（a1）限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述编码eIF4G蛋白的基因为如下（1）至（3）中任一所述的DNA分子：

（1）编码区如序列表中序列2自5’末端第193-5376位核苷酸所示的DNA分子；

（2）序列表中序列2所示的DNA分子；

（3）序列表中序列3所示的DNA分子。

5.一种降低植物对脱落酸的耐受性的育种方法，包括如下步骤：降低受体植物中eIF4G蛋白的含量和/或活性，从而降低植物对脱落酸的耐受性；

所述植物为拟南芥；

所述eIF4G蛋白为如下（a1）或（a4）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a4）在（a1）限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

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