CN112716850B

CN112716850B - 一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物及其应用

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Publication number: CN112716850B
Application number: CN202110053262.4A
Authority: CN
Inventors: 曾万祥
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2021-01-15
Filing date: 2021-01-15
Publication date: 2023-07-18
Anticipated expiration: 2041-01-15
Also published as: CN112716850A

Abstract

本发明公开了一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物及其应用。所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物是将滇龙胆、菊苣、粉防己通过生物发酵技术、柱层析分离技术制得。实验证明，添加了上述组合物的化妆品可以明显提升人体皮肤屏障，实现修护敏感肌的功效。可以作为一种活性添加剂应用在化妆品中，制得具有调节微生态平衡作用的化妆品。

Description

一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物及其应用。

背景技术

皮肤微生物组是一个动态可变，而且复杂的生态系统，因此也被称为皮肤微生态。根据不同的分类方式，分为暂驻微生物和常驻微生物；共生微生物与病原微生物，以及当某些特定情况下的条件致病微生物。

暂驻微生物通常是指仅在皮肤停留数小时或数天源于外界环境中的微生物。常驻微生物通常是指相对固定的微生物组群，在受外界因素影响(清洗及接触空气污染等)后具有自我恢复能力。常驻微生物一般认为就是共生微生物，不仅对宿主无害，而且还可以通过不同方式发挥对皮肤健康有利的作用。

不同微生物群落之间以及微生物群落与宿主之间，即微生物-微生物-宿主间的相互平衡作用是维持健康皮肤微生态以及皮肤健康的基础。迄今为止的研究显示，皮肤微生态通过皮肤微生物之间、微生物与角质形成细胞之间，以及它们与宿主的免疫系统相互作用影响皮肤的免疫调节、自身防御以及创伤修复，进而发挥其维持、改善和增进皮肤健康的作用。即使在皮肤屏障完整的情况下，角质形成细胞通过受体识别的方式，由模式识别受体(PRRs)，如Toll样受体(TLRs)、甘露糖受体和NOD样受体感知和调节皮肤表面微生物的定植。此类受体通过微生物的病原相关分子模式(PAMPs)(包括子模式鞭毛蛋白、核酸、脂多糖及寡聚糖等)识别皮肤微生物。当角质形成细胞的PRRs被PAMPs激活后即可启动宿主固有免疫系统，从而导致角质形成细胞分泌抗微生物肽(AMPs)、细胞因子以及趋化因子，进而阻止病原性微生物的定植。某些皮肤微生物本身也能分泌AMPs、细菌素或具有抗菌特性的分子直接阻止病原性微生物定植。例如，表皮凝固酶阴性表皮葡萄球菌可以分泌AMPs，从而抑制金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)等病原菌的定植。此外，痤疮丙酸杆菌(P.acnes，现根据新的分类方式重新命名为C.acnes，但目前二者皆被使用)能将皮脂中的三酰甘油代谢成短链脂肪酸，后者具有抗菌作用，且有助于维持皮肤酸性环境，进而防止病原性微生物在皮肤上定植。

皮肤微生物组对宿主形成和建立后天获得性免疫功能起至关重要的作用。例如，新生儿出生后皮肤微生物组通过与宿主免疫细胞间的信号传导来激活调节性T细胞(Treg)，使其聚集至皮肤，发挥诱导免疫系统接受皮肤共生微生物定植以及建立对皮肤共生微生物耐受的作用。由此提示宿主与共生微生物之间的关系很大程度上依赖于某一特定发育及生长阶段Treg细胞介导的对微生物抗原的耐受性。

虽然皮肤微生物组对创面愈合的作用机制并未完全阐明且依然存有争议，早前有研究提出皮肤微生物菌群可以通过形成生物膜导致创口处微生物组的组成和整体毒力的改变，进而阻碍创面愈合过程。但近年来有研究表明，调节创面微生物菌群有利于改善创面的愈合。例如，使用含常见益生菌约氏乳酸菌(Lactobacillus johnsonii)的乳液可以明显改善和促进特应性皮炎创面性皮损的愈合。Seité和Bieber发现局部涂抹含有线状透明颤菌(Vitreoscilla filiformis)溶解物的乳霜能提高特应性皮炎创面皮损的愈合程度^[1]。

化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。在人体皮肤表面涂抹、喷洒化妆品对皮肤微生态存在影响。如果起到负面作用，则会破坏皮肤微生态平衡，导致皮肤处于非健康状态，严重的会引起疾病；如果起到正面的促进作用，可以调节皮肤微生态平衡，则可以维护保持皮肤的健康状态，对于一些皮肤问题也有助于改善和解决。因此，研究具有调节皮肤微生态平衡的护肤品具有重要意义。

本发明的发明人在前面提到的皮肤微生态领域中所进行的大量研究工作之后，出乎意料地得到了一种具有调节皮肤微生态平衡的天然组合物，可以提升人体皮肤屏障，对敏感肌具有明显改善的效果，从而完成了本发明。

参考文献[1]：甄雅贤,张晨慧,Chopra,等.化妆品与皮肤健康-皮肤微生态[J].临床皮肤科杂志,2019。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物，以及利用该组合物制得具有调节皮肤微生态平衡功效的护肤品。

本发明所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物是将滇龙胆、菊苣、粉防己通过生物发酵技术、柱层析分离技术制得。所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物含有坚龙胆(GENTIANA RIGESCENS)提取物、菊苣(CICHORIUM INTYBUS)根提取物、粉防己(STEPHANIATETRANDRA)提取物。

本发明所涉及的滇龙胆是龙胆科植物滇龙胆(Gentiana rigescens Franch.)的地上部分，是《中国药典》收载的龙胆品种之一，药材称为“坚龙胆”或“滇龙胆”，是云南著名道地药材，主产于大理、楚雄、昆明、玉溪等地。临床用于治疗带状疱疹、类风湿性关节炎、湿疹等。从滇龙胆的地下部分曾分离得到马钱子酸、龙胆苦苷、獐牙菜甙、坚龙胆甙A-E等成分。滇龙胆地上部分的提取物的化妆品原料标准中文名称为坚龙胆(GENTIANA RIGESCENS)提取物。

本发明所涉及的菊苣是维吾尔族习用药材，为菊科植物菊苣的根，夏、秋季采收，切片晒干。味微苦；性凉。功能主治：清肝利胆，健胃消食，利尿消肿。用于湿热黄疸，胃痛食少，水肿尿少。现有研究主要在其调血脂和降尿酸的功能，对高尿酸三酰甘油血症具有很好的调节作用，并且可明显改善由高嘌呤饮食引发的高尿酸血症及腹型肥胖。其作用机制可能是通过降低肝脏乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶以及黄嘌呤氧化酶活性，从而发挥综合调节尿酸及腹部脂肪堆积的作用。也有研究显示其具有兴奋中枢神经系统、抗菌、收敛作用。菊苣根提取物的化妆品原料标准中文名称为菊苣(CICHORIUM INTYBUS)根提取物。

本发明所涉及的粉防己是防己科、千金藤属植物粉防己的根。肉质主根入药，味苦辛，性寒，功能祛风除湿、利水消肿、祛风除湿。主治用法：水肿，小便不利，风湿性关节炎，高血压病；外用治蛇毒咬伤，痈疖肿毒。含多种生物碱，其中粉防己碱治风湿关节炎和高血压症均有效。《全国中草药汇编》中记载粉防己碱对天花粉引起的被动、主动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。粉防己根的提取物的化妆品原料标准中文名称为粉防己(STEPHANIATETRANDRA)提取物。

本发明实施例还公开了所述具有调节皮肤微生态平衡的组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将滇龙胆、菊苣、粉防己风干、混合、粉碎后过筛；

(2)接种枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356，装入发酵袋中，密封，在30℃恒温条件下培养5-10天；

(3)将发酵后的物料灭菌，转入层析柱中，装柱，压实；然后用丁二醇水溶液洗脱；

(4)收集洗脱液，离心取上清液，冷冻过滤，即得。

步骤(1)中所述原材料的重量份为：滇龙胆30-50份、菊苣10-30份、粉防己20-30份。优选的，所述原材料的重量份为：滇龙胆40份、菊苣20份、粉防己25份。

步骤(1)中所述过筛为过40目筛。

步骤(2)中菌种的接种量为原材料粉末总重量的5-10％，所述枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356的含菌量都为1-10亿CFU/mL，所述枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356的菌液添加比例为(1-5)：(1-5)。

步骤(3)中所述丁二醇水溶液的体积浓度为50-80％；所述洗脱的流速为0.1-0.5BV/H。

步骤(3)中洗脱液的收集量为1-2BV，所述冷冻过滤的条件为：1-5℃下保藏12-24H，然后用1000目滤布过滤。

本发明的“具有调节皮肤微生态平衡的组合物”的产品可以作为一种添加剂用于个人护理品中，包括驻留型产品(如膏霜、乳液、精华液、水剂、面膜等)、洗去型产品(如洗面奶、沐浴露、洗发水)，还可以用于各类湿巾中。其在配方中合适的添加量为0.1％-1％。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明实施例提供的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，可以作为一种活性添加剂应用在化妆品中，制得具有调节微生态平衡作用的化妆品。实验证明，添加了上述组合物的化妆品可以明显提升人体皮肤屏障，实现修护敏感肌的功效。

附图说明

图1经皮水分流失率测试结果；

图2志愿者敏感肌修复结果。

具体实施方式

说明书中的实施方式仅用于对本发明进行说明，其并不对本发明的保护范围起到限定作用。本发明的保护范围仅由权利要求限定，在本发明公开的实施方式的基础上所做的任何省略、替换或修改将落入本发明的保护范围。

参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。

为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物，按照如下方法制备：

(1)按照表1称取各原料，风干、混合、粉碎后过40目筛；

(2)分别制备枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356的种子液，各种子液菌液浓度都为10亿CFU/mL，按照表1的重量混合，制得混合菌液；然后接种混合菌液；装入发酵袋中，密封，在30℃恒温条件下培养10天；

(3)将发酵后的物料灭菌，转入层析柱中，装柱，压实；然后用50％体积浓度的丁二醇水溶液洗脱，洗脱流速控制在0.5BV/H；

(4)收集1BV的洗脱液，离心，取上清液，5℃下冷冻保藏24H，1000目滤布过滤，即得。

表1具有调节皮肤微生态平衡的组合物的配方投料和菌种添加量

测试组	滇龙胆/g	菊苣根/g	粉防己根/g	枯草芽孢杆菌/g	嗜酸乳杆菌/g
						1#	30	30	20	1	5
2#	40	20	25	5	1
						3#	50	10	30	4	4
4#	40	0	0	2.35	0.47
						5#	0	20	0	1.18	0.24
6#	0	0	25	1.47	0.29
						7#	40	20	25	5	0
8#	40	20	25	0	1

实施例2

通过平板涂布法(对霉菌、酵母菌)及稀释培养法(对细菌)测定实施例1表1中1#-8#组合物的最低抑菌浓度(MIC值)，结果见表2。

表2各测试组的MIC值(ppm)

测试组	乳杆菌	双歧杆菌	金黄色葡萄球菌	白色念珠菌
					1#	15000	15000	600	1000
2#	20000	15000	200	450
					3#	10000	10000	550	800
4#	60000	45000	3000	5000
					5#	50000	60000	1000	6000
6#	80000	40000	2000	7000
					7#	90000	35000	5000	5500
8#	65000	85000	6500	4500

从表2可以看出，测试组1#-3#与测试组4#-6#相比，复配了滇龙胆、菊苣、粉防己的组合物对皮肤有害菌(金黄葡萄球菌、白色念珠菌)的抑制能力比单用时显著降低，而对皮肤益生菌(乳杆菌、双岐杆菌)的抑制只稍有增强，但在同一个数量级内。也就是说，组合物在较低添加量下(1000-10000ppm)对有益菌产生的抑制作用微弱，而对有害菌有强的抑制能力，显示了良好的调节皮肤微生态的能力。还有，测试组2#与测试组7#-8#相比，联合接种枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356时，所制得的组合物对皮肤有害菌(金黄葡萄球菌、白色念珠菌)的抑制能力更强。

实施例3

参照《化妆品安全技术规范》(2015版)人体皮肤斑贴试验中记载的受试者选择标准挑选志愿者，分为8组，每组30人次。选用标准斑试器，以封闭式斑贴试验方法，分别将实施例1测试组1-8所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物约0.020-0.025g放入斑试器小室中，贴敷于受试者手臂内测，24小时后除去斑试器，于0.5小时、24小时、48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015版)中《表1皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准》记录其结果。当30例受试者中出现1级皮肤不良反应的人数多于3例，或2级皮肤不良反应的人数多于1例，或出现任何1例3级或3级以上皮肤不良反应时，判定受试物对人体有皮肤不良反应。具体的指标见表3。

表3人体皮肤斑贴试验记录

测试组	0级人数	1级人数	2级人数	3级人数	4级人数	结论
							1#	29	1	0	0	0	对皮肤无不良反应
2#	28	2	0	0	0	对皮肤无不良反应
							3#	30	0	0	0	0	对皮肤无不良反应
4#	30	0	0	0	0	对皮肤无不良反应
							5#	29	1	0	0	0	对皮肤无不良反应
6#	28	2	0	0	0	对皮肤无不良反应
							7#	30	0	0	0	0	对皮肤无不良反应
8#	29	1	0	0	0	对皮肤无不良反应

由表3可见，本发明实施例所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物对人体皮肤无不良反应，可以作为一种添加剂应用在化妆品中。

实施例4

一种平衡修复乳，包括如下质量百分含量的组分：矿油4％、辛酸/癸酸甘油三酯5％、矿脂1％、聚二甲基硅氧烷3％、鲸蜡硬脂醇1％、鲸蜡硬脂基葡糖苷1％、羟苯丙酯0.1％、羟苯甲酯0.2％、PEG-100甘油硬脂酸酯0.2％、甘油硬脂酸酯0.5％、甘油5％、丁二醇5％、黄原胶0.1％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.2％、EDTA二钠0.05％、己二醇0.5％、辛酰羟肟酸0.05％、上述实施例1测试组2#所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物0.5％、水余量。

对比例1

一种平衡修复乳，包括如下质量百分含量的组分：矿油4％、辛酸/癸酸甘油三酯5％、矿脂1％、聚二甲基硅氧烷3％、鲸蜡硬脂醇1％、鲸蜡硬脂基葡糖苷1％、羟苯丙酯0.1％、羟苯甲酯0.2％、PEG-100甘油硬脂酸酯0.2％、甘油硬脂酸酯0.5％、甘油5％、丁二醇5％、黄原胶0.1％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.2％、EDTA二钠0.05％、己二醇0.5％、辛酰羟肟酸0.05％、上述实施例1测试组4#所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物0.5％、水余量。

对比例2

一种平衡修复乳，包括如下质量百分含量的组分：矿油4％、辛酸/癸酸甘油三酯5％、矿脂1％、聚二甲基硅氧烷3％、鲸蜡硬脂醇1％、鲸蜡硬脂基葡糖苷1％、羟苯丙酯0.1％、羟苯甲酯0.2％、PEG-100甘油硬脂酸酯0.2％、甘油硬脂酸酯0.5％、甘油5％、丁二醇5％、黄原胶0.1％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.2％、EDTA二钠0.05％、己二醇0.5％、辛酰羟肟酸0.05％、上述实施例1测试组5#所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物0.5％、水余量。

对比例3

一种平衡修复乳，包括如下质量百分含量的组分：矿油4％、辛酸/癸酸甘油三酯5％、矿脂1％、聚二甲基硅氧烷3％、鲸蜡硬脂醇1％、鲸蜡硬脂基葡糖苷1％、羟苯丙酯0.1％、羟苯甲酯0.2％、PEG-100甘油硬脂酸酯0.2％、甘油硬脂酸酯0.5％、甘油5％、丁二醇5％、黄原胶0.1％、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物0.2％、EDTA二钠0.05％、己二醇0.5％、辛酰羟肟酸0.05％、上述实施例1测试组6#所制得的具有调节皮肤微生态平衡的组合物0.5％、水余量。

实施例5

对实施例4和对比例1-3所制得的平衡修复乳为测试组进行敏感肌修复测试。面向社会招募敏感肌志愿者，志愿者耐入条件为：皮肤干燥、容易紧绷和发红；受到轻微刺激，即可产生瘙痒、脱屑甚至烧灼和刺痛等感觉，并采用敏感性皮肤诊断标准(乳酸刺激试验评分)在3分及以上(参考：[1]王学民.敏感性皮肤的认识与评判[J].临床皮肤科杂志,2003(11):685-686.第3.2节半主观评判)。其中乳酸刺激试验方法：将5％乳酸50μL滴在直径为0.5cm的两层滤纸上，置于受试者鼻唇沟部位，分别在0、2.5、5及8min时询问受试者刺痛感并观察受试者皮肤反应情况，按4分法进行评分：0分为无刺痛，1分为轻度刺痛，2分为中度刺痛，3分为重度刺痛。

共招募得150名志愿者，年龄29-54岁，平均35.5岁，平均分为5组。经测试对象知情，同意，分别使用实施例4和对比例1-3所制得的平衡修复乳，另设一组使用吡美莫司乳膏作为阳性对照组4。

具体使用方法为：洁面后取适量平衡修复乳，轻轻在脸上打圈至完全吸收。早晚各1次，连续使用28天。

使用德国CK公司的经皮肤水份流失(TEWL)测试探头Probe Tewameter TM HX测试志愿者第0天、第14天、第28天的TEWL值。第28天后回访，问询志愿者，记录志愿者敏感肌修复的自我感觉，对于敏感肌自我感觉已治愈的志愿者安排做乳酸刺激试验予以确认(2分及以下)。具体见图1、图2。其中经皮水分流失修复率(％)＝(修复前TEWL值-修复后TEWL值)/修复前TEWL值*100％。

由图1可知，志愿者使用本发明实施例4所制得的平衡修复乳后，经皮水分流失修复率逐步提升，由图2可以得知，使用本发明实施例4所制得的平衡修复乳28天后志愿者敏感肌人数减少，且效果优于阳性对照组4和对比例1-3。说明本发明实施例提供的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，可以作为一种活性添加剂应用在化妆品中，制得具有调节微生态平衡作用的化妆品。实验证明，添加了上述组合物的化妆品可以明显提升人体皮肤屏障，实现修护敏感肌的功效。

以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种具有调节皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，含有滇龙胆提取物、菊苣根提取物、粉防己提取物；

所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物制备方法包括如下步骤：

（1）将滇龙胆、菊苣、粉防己风干、混合、粉碎后过筛；其中所述原材料的重量份为：滇龙胆30-50份、菊苣10-30份、粉防己20-30份；

（2）接种枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356，装入发酵袋中，密封，在30℃恒温条件下培养5-10天；其中所述菌种的接种量为原材料粉末总重量的5-10%；所述枯草芽孢杆菌ATCC6633和嗜酸乳杆菌ATCC4356的含菌量都为1-10亿CFU/mL，添加比例为（1-5）：（1-5）；

（3）将发酵后的物料灭菌，转入层析柱中，装柱，压实；然后用丁二醇水溶液洗脱；

（4）收集洗脱液，离心取上清液，冷冻过滤，即得。

2.根据权利要求1所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，所述原材料的重量份为：滇龙胆40份、菊苣20份、粉防己25份。

3.根据权利要求1所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，

步骤（1）中所述过筛为过40目筛。

4.根据权利要求1所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，

步骤（3）中所述丁二醇水溶液的体积浓度为50-80%；所述洗脱的流速为0.1-0.5BV/H。

5.根据权利要求1所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，

步骤（3）中洗脱液的收集量为1-2BV，所述冷冻过滤的条件为：1-5℃下保藏12-24H，然后用1000目滤布过滤。

6.权利要求1所述的具有调节皮肤微生态平衡的组合物作为化妆品添加剂的应用。