CN112662775A

CN112662775A - 胶质瘤标志物spc25及其应用

Info

Publication number: CN112662775A
Application number: CN202110063990.3A
Authority: CN
Inventors: 景治涛; 蒋炀
Original assignee: First Hospital of China Medical University
Current assignee: First Hospital of China Medical University
Priority date: 2021-01-18
Filing date: 2021-01-18
Publication date: 2021-04-16

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及到SPC25在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。一种胶质瘤的生物标志物，所述标志物是SPC25基因/蛋白。SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。SPC25基因/蛋白的抑制剂在制备治疗胶质瘤药物中的应用，所述抑制剂能够抑制SPC25基因/蛋白的功能。实验证明SPC25基因和蛋白在体内胶质瘤中的表达较正常脑组织中明显上调，使得SPC25有望成为肿瘤辅助诊断标记物。本发明为胶质瘤治疗提供了新的理论依据和全新靶标，也为胶质瘤提供了新的辅助诊断和预后诊断的方法。

Description

胶质瘤标志物SPC25及其应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及到一种胶质瘤标记物SPC25及其应用，具体涉及到SPC25在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。

背景技术

胶质瘤是中枢神经系统中最常见、恶性程度最高的原发性恶性肿瘤，具有极高的死亡率，预后极差。近年来，尽管手术、放疗和化疗等综合治疗方式陆续问世并应用于临床治疗，但胶质瘤患者的治疗效果仍然很差，尤其是恶性程度最高的胶质母细胞瘤患者，其中位生存时间不足15个月。近年来，随着分子生物学技术的发展和基因测序技术的普及，大量肿瘤发生、发展相关的致癌或抑癌基因被发现，并基于相关基因的作用提出了分子靶向治疗的观点。目前，分子靶向治疗被视为改善胶质瘤治疗效果，实现彻底治愈胶质瘤最有希望的治疗方式之一。而且，相关致癌或抑癌基因的异常表达与胶质瘤患者的早期诊断和临床治疗预后结局密切相关，故寻找相关基因可作为胶质瘤发病风险、早期诊断和治疗预后结局的评估指标。

胶质瘤干细胞(glioma stem cells，GSCs)是一类特殊的胶质瘤细胞，具有自我更新和多向分化能力，被认为是肿瘤起始细胞，参与了胶质瘤的发生和胶质瘤细胞的增殖、侵袭、抗凋亡、耐药和复发等重要生物学过程。因此，针对胶质瘤干细胞的分子靶向治疗有助于提高目前胶质瘤治疗的效果，降低术后复发率和放化疗的耐受性，并实现胶质瘤的最终治愈。故寻找和发现新的高效的胶质瘤特异表达靶标对于胶质瘤的早期诊断、预后评估和分子靶向治疗均具有重要作用。

纺锤体极成分25(Spindle pole body component 25，SPC25)又名着丝粒复合物成分(NDC80 kinetochore complex component)，被认为参与着丝粒微管的相互作用和纺锤体检查点活性的调控，在肺癌、前列腺癌等肿瘤中均具有促癌作用。但是SPC25是否在胶质瘤中存在异常的表达，并对胶质瘤干细胞的增殖和肿瘤发生具有调控作用尚无任何研究报道。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种胶质瘤标记物SPC25及其在胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。发明人首先基于生物信息学分析发现SPC25在癌症基因图谱(the Cancer Genome Atlas，TCGA)和中国胶质瘤基因图谱(Chinese GliomaGenome Atlas，CGGA)两大数据库中进行分析，均发现SPC25在胶质瘤中的表达随胶质瘤WHO分级级别的升高而增高，其在胶质母细胞瘤中的表达水平明显高于低级别胶质瘤，其在患者预后更差的IDH野生型患者中的表达水平亦高于IDH突变型患者，而且SPC25高表达患者具有更短的生存时间和不良预后结局。随后基于临床病人的胶质瘤组织和对应的正常脑组织进行比较，确认了生物信息学的分析结果。以患者来源胶质瘤干细胞为研究对象，通过慢病毒介导的基因过表达和沉默技术，发现SPC25的过表达具有促进细胞增殖和肿瘤发生作用，而SPC25的沉默可有效抑制胶质瘤细胞的增殖活性和肿瘤发生。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种胶质瘤的生物标志物，所述标志物是SPC25基因/蛋白。

SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。

一种用于诊断胶质瘤和/或预后判断胶质瘤的试剂盒，所述试剂盒以SPC25基因/蛋白作为检测靶标。

进一步地，所述试剂盒包含用于特异扩增SPC25基因的上下游引物序列，或特异识别/结合SPC25蛋白的试剂。

更进一步地，所述引物序列包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的序列。

更进一步地，所述试剂是抗体。所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。

SPC25基因/蛋白的抑制剂在制备治疗胶质瘤药物中的应用，所述抑制剂能够抑制SPC25基因/蛋白的功能。

进一步地，所述抑制剂是抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA和/或中和性抗体和/或其他抑制和/或中和性抗体的化合物。

更进一步地，抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:6所示。

本发明中所述胶质瘤为人胶质瘤。本领域技术人员通过本领域中已知的引物设计方法即可设计出适用于扩增SPC25基因的上下游引物序列。另外，本领域技术人员知晓如何获得特异识别/结合SPC25蛋白的抗体。本发明可以通过基因手段，如荧光实时定量PCR，使用所述引物进行检测，也可以通过免疫手段，如蛋白质印迹、免疫组化、免疫荧光等检测SPC25蛋白。

与现有技术比，本发明的有益效果如下。

由于目前用于胶质瘤临床辅助诊断的标记物或技术尚不完善，本发明提供了胶质瘤标记物SPC25及其应用，SPC25基因和蛋白在体内胶质瘤中的表达较正常脑组织中明显上调，使得SPC25有望成为肿瘤辅助诊断标记物。并且根据本发明研究，抑制内源性胶质瘤可显著降低胶质瘤干细胞的增殖和肿瘤发生，使得SPC25可以成为肿瘤治疗有效靶点。本发明同时发现SPC25蛋白表达越高的胶质瘤患者其生存率越低，即SPC25蛋白过表达明确指示较差的生存预后，即SPC25基因/蛋白可以成为胶质瘤患者生存预后指标。本发明为胶质瘤治疗提供了新的理论依据和全新靶标，也为胶质瘤提供了新的辅助诊断和预后诊断的方法。

附图说明

图1a-1h是SPC25在TCGA和CGGA两大数据库中的分析结果。

图2a-2f是SPC25在70例临床病人的胶质瘤组织和10例正常脑组织进行比较。

图3是通过慢病毒介导的基因过表达和沉默技术在GSC-42中沉默SPC25的表达，在GSC-21中过表达SPC25，并经qPCR和westernblot实验证实SPC25的mRNA和蛋白水平发生改变。

图4a-4h是体外实验中的各组胶质瘤干细胞生长实验结果。

图5是裸鼠颅内成瘤实验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明内容进一步阐述。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验指南》(第三版)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1SPC25基因/蛋白在在胶质瘤临床样品中表达高于正常脑组织。

1.研究对象。

研究对象选取70例胶质瘤患者临床样本，其中WHO分级II级20例，III级25例，IV级25例，同期收集的应脑外伤接受手术切除的正常脑组织10例。本研究通过医院伦理委员会审查和批准，所有患者入组前均签署书面知情通知书。

2.荧光实时定量PCR检测SPC25基因在临床胶质瘤样品中的表达水平。

荧光实时定量PCR(Real-Time PCR)检测SPC25基因在临床胶质瘤样品中的表达水平，操作步骤如下。

(1)采用Takara RNA提取试剂盒提取组织总RNA，首先将各临床胶质瘤肿瘤组织及正常脑组织，采用液氮充分匀浆组织，取适量组织加入350μl裂解Buffer RL，重悬细胞沉淀，室温静置2min。

(2)加入等体积的70％乙醇并混匀，将混合液转移至RNA Spin Column中，12000rpm，离心1分钟，弃掉过滤液。

(3)加入500μl的Buffer RWA洗涤，12000rpm，离心30s，弃掉过滤液。

(4)加入600μl的Buffer RWB洗涤，12000rpm，离心30s，弃掉过滤液。

(5)再次重复Buffer RWB洗涤一次，单纯12000rpm空转，离心2min。

(6)将RNA Spin Column放于新的1.5ml无RNase EP管上，向RNA SpinColumn中加入RNase Free dH2O 40μl，室温静置2-5min彻底溶解膜上吸附的RNA，12000rpm，离心2min。

(7)收集液即为RNA，检测RNA浓度，计算1μg RNA所需体积，采用一步法gDNA去除和cDNA合成试剂盒构建cDNA文库。

(8)采用Real-Time PCR检测70例胶质瘤组织和10例正常脑组织中的SPC25mRNA表达水平。SPC25的引物序列，包括SPC25的正向引物序列：ATGGTAGAGGACGAACTGGCA(SEQ IDNO:1)；以及反向引物序列:AGGAGGTGTCCGTACTTTTGAA(SEQ ID NO:2)。不同组间比较用独立t检验(常变量)，两组间均数的比较用t检验，分类变量的比较用χ2检验，多组间比较用单因素方差分析。数值用均数±SD表示。

结果如图1a-1h所示，发现SPC25在胶质瘤中的表达随胶质瘤WHO分级级别的升高而增高，其在胶质母细胞瘤中的表达水平明显高于低级别胶质瘤，其在患者预后更差的IDH野生型患者中的表达水平亦高于IDH突变型患者，而且，SPC25高表达患者具有更短的生存时间和不良预后结局。

3.免疫印迹实验检测基因SPC25在临床胶质瘤样品中的表达水平。

免疫印迹实验检测基因SPC25在临床胶质瘤样品中的表达水平，具体步骤如下。

(1)细胞蛋白提取：将各临床胶质瘤肿瘤组织及正常脑组织，采用液氮充分匀浆组织，加入200μl蛋白裂解液，摇床4℃冰浴30min，12000rpm离心10min，吸取上清液即为细胞蛋白。

(2)蛋白浓度BCA法测定：配制蛋白标准品梯度：0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml，配制新鲜的BCA工作液：反应液A液和B液以50:1比例配制，分别将蛋白标准品、待检测蛋白样品加入到96孔板中，每孔20μl，随后加入200μl BCA工作液，37℃孵育30min，采用酶标仪检测562nm波长下各样品吸光度值，绘制蛋白浓度标准曲线和线性相关公式，从而计算待测样品浓度。

(3)制备蛋白样品：统一各组蛋白样品上样量，计算所需蛋白体积，用蛋白上样缓冲液溶解，调整各样品至等体积等浓度，确保各蛋白样品最终上样量20～40μg，沸水浴5min使蛋白充分变性。

(4)上样和电泳：配制新鲜的MOPS电泳液，取出预制胶，撕开底部绝缘胶条，组装电泳槽，确保内槽加满，外槽达到一半高度即可，拔出梳子，吹打加样孔，缓慢加入蛋白样品和marker，140V恒压电泳，直至loading跑至距离底部1cm终止电泳，时间约1h。

(5)转膜：配制新鲜的转膜液，根据转膜夹、海绵大小裁剪滤纸、根据需要转膜的区域面积裁剪PVDF膜并以甲醇激活，取出预制胶，以负极、海绵、4层滤纸、胶、PVDF膜、4层滤纸、海绵、正极顺序组装转膜夹，注意胶与PVDF膜的吻合程度，避免存在气泡，4℃、200mA恒压转膜90min。

(6)封闭：以TBST配制5％的脱脂奶粉，取出转膜结束的PVDF膜，室温封闭1h。

(7)孵育一抗：以TBST稀释SPC25和β-actin这两种蛋白特异性结合的单克隆抗体(购自Abcam，#ab109375和#ab8227)，稀释比例1:1000，4℃孵育过夜(>12h)。

(8)孵育二抗：TBST清洗PVDF膜，摇床8min，连续清洗4次，以1:10000配制HRP标记的山羊抗兔二抗，室温孵育1h。

(9)TBST清洗PVDF膜，摇床8min，连续清洗4次，配制ECL发光液，曝光检测。

结果如图2a-2f所示，SPC25在70例临床病人的胶质瘤组织和10例正常脑组织进行比较，胶质瘤组织中SPC25的mRNA和蛋白表达水平均明显高于正常脑组织，且随着级别的升高而升高。而且，针对70例胶质瘤患者进行生存分析，发现SPC25高表达患者亦具有更短的生存时间和不良预后结局。如图2b所示，Westernblot分析显示胶质瘤病人临床组织样品中SPC25的蛋白表达水平显著高于正常脑组织样品。

4.免疫组化检测基因SPC25在临床胶质瘤样品中的表达水平。

免疫组化检测基因SPC25在临床胶质瘤样品中的表达水平，操作步骤如下。

(1)将新鲜提取的各临床胶质瘤肿瘤组织及正常脑组织放入4％多聚甲醛中固定48h。

(2)50％、60％、70％、80％、90％、95％、无水乙醇梯度脱水，每次30min；二甲苯通透2次，每次10min，石蜡包埋。

(3)石蜡切片，切片厚度4μm，60℃烤片4h。

(4)免疫组化染色前提前60℃烤片1h，二甲苯脱蜡、酒精梯度复水，去离子水水化。

(5)去除内源性过氧化物酶，室温孵育10min，PBS清洗3min，重复3次。

(6)柠檬酸钠抗原液修复，高压锅煮沸，最大气压下持续孵育5min，PBS清洗3min，重复3次。

(7)山羊血清封闭液室温封闭20min。

(8)兔抗人SPC25抗体4℃孵育过夜(>12h)，稀释比例1:100，PBS清洗3min，重复3次。

(9)生物素标记的山羊抗兔二抗室温孵育15min，PBS清洗3min，重复3次。

(10)链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液孵育15min，PBS清洗3min，重复3次。

(11)DAB孵育数秒至数分钟不等，根据镜下观察显色程度及时终止孵育，流水冲洗10min。

(12)苏木素染色2min，盐酸酒精分化3s，流水冲洗10min。

(13)酒精梯度脱水，二甲苯通透，中性树胶封片，晾干后正置显微镜下观察、拍照，计算阳性表达率。

5.SPC25蛋白过表达的临床意义。

方法：所有统计学分析用SPSS23.0统计软件进行处理。采用Kaplan-Meier方法绘制生存分析曲线，并采用log-rank检验方法检测其统计学意义。检验系数P<0.05认为在统计学上有显著性差异。运用SPSS统计软件分析SPC25蛋白的表达与70例胶质瘤患者生存率(Overall Survival，OS)的关系。

实施例2构建稳定敲低SPC25的胶质瘤干细胞和稳定过表达SPC25的胶质瘤干细胞。

1.胶质瘤干细胞的培养。

配制胶质瘤干细胞培养基：DMEM/F12培养基中加入B27添加剂至2％浓度，分别加入rh-bFGF和rh-EGF至20ng/mL浓度。选取生长状态良好的患者来源胶质瘤干细胞，放于多聚赖氨酸未处理的悬浮细胞培养瓶中，加入适量胶质瘤干细胞培养基，置于37℃恒温、5％CO₂孵箱中培养，3～4d半量换液一次。

2.构建稳定敲低SPC25mRNA和蛋白的胶质瘤干细胞株。

(1)构建SPC25沉默或过表达的慢病毒质粒。

SPC25基因采用shRNA进行沉默，shRNA和过表达质粒均由上海吉凯生物科技公司进行合成，具体shRNA序列如下：SPC25-敲低1：正义链：UUAUGUAGGACAAUGCUUCGC(SEQ IDNO：3)，反义链：GAAGCAUUGUCCUACAUAAUG(SEQ ID NO：4)，SPC25-敲低1：正义链：UGCUUUUAUCGAAAAGUGCCA(SEQ ID NO：5)，反义链：GCACUUUUCGAUAAAAGCAUA(SEQ ID NO：6)。阴性对照序列：正义链：UUCUUCGAAGGUGUCACGUTT(SEQ ID NO：7)，反义链：ACGUGACACCUUCGAAGAATT(SEQ ID NO：8)。SPC25过表达质粒含有SPC25编码区域的全部cDNA序列(SEQ ID NO:9)。

(2)病毒感染人胶质瘤干细胞。

选取生长状态良好的胶质瘤干细胞，病毒感染MOI＝10，根据病毒滴度计算所需病毒体积，Enhance感染增强液、Polybrene剂量，弃去培养基，加入上述病毒感染混合液，继续培养10-12h，弃去病毒感染混合液，加入正常培养基继续培养，额外加入嘌呤霉素筛选成功感染的胶质瘤干细胞，作用浓度5-10μg/ml，根据细胞状态递增，持续筛选4周，通过qPCR和western blot检测慢病毒感染后SPC25过表达或沉默效果，如图3所示。

实施例3SPC25对胶质瘤干细胞的生物学作用。

1.MTS细胞活性实验。

(1)选取生长状态良好的胶质瘤干细胞(SPC25过表达、沉默或对照组)，接种至96孔板中，每孔1000个细胞，100μl培养基，每个细胞重复4孔，同时加入100μl不含细胞的培养基作为调零组，共铺板5块96孔板，分别记为第一天(d1)、第二天(d2)......第五天(d5)。

(2)接种24h后向d1孔板中加入20μlMTS溶液，37℃孵育3h，震荡混匀，495nm波长下酶标仪检测各胶质瘤细胞和调零组吸光光度值，胶质瘤细胞吸光光度值减去调零组光度值即为该胶质瘤细胞增殖状态反映的实际吸光光度值。

(3)重复检测第二天、第三天、第四天、第五天各组胶质瘤细胞吸光光度值，绘制折线图，比较细胞活性差异。

2.EDU实验。

(1)选取生长状态良好的胶质瘤干细胞(SPC25过表达、沉默或对照组)，接种至24孔板中，每孔1×10⁵个细胞，培养24h。

(2)向24孔板中的胶质瘤干细胞加入10μM EDU试剂，37℃继续培养2h。

(3)加入4％多聚甲醛，室温固定15min，4℃、800rpm离心5min，弃上清液，PBS重悬细胞沉淀，重复清洗2次。

(4)加入0.5％Trinton X-100，室温通透20min，4℃、800rpm离心5min，PBS重复清洗2次。

(5)加入含有DAPI的防荧光淬灭封片剂封片，避免产生气泡，置于荧光显微镜下观察，计算EDU细胞的阳性率。

3.神经球形成实验。

(1)选取生长状态良好的胶质瘤干细胞(SPC25过表达、沉默或对照组)，接种至24孔板中，每孔200个细胞，培养7天。

(2)于倒置显微镜下观察每孔中神经球形成的数目，拍照并用Image J软件计算神经球的大小。

4.神经球有限稀释实验。

(1)选取生长状态良好的胶质瘤干细胞(SPC25过表达、沉默或对照组)，接种至96孔板中，各孔依次接种1、10、20、30、40和50个细胞，每孔重复10次，持续培养7天。

(2)于倒置显微镜下观察每孔中神经球形成的数目，采用ELDA法进行分析(http://bioinf.wehi.edu.au/software/elda)。

结果如图4a-4h所示，在GSC-42中沉默SPC25的表达，胶质瘤干细胞的增殖活性和神经球形成能力明显减弱，而在GSC-21中过表达SPC25，胶质瘤干细胞的增殖活性和神经球形成能力则明显增强。

5.颅内成瘤实验。

(1)选取生长状态良好的胶质瘤干细胞(SPC25过表达、沉默或对照组)，消化后调整细胞浓度至1×10⁸个/ml。

(2)采用0.75％的戊巴比妥钠麻醉裸鼠，剂量50mg/kg，腹腔注射，待裸鼠麻醉起效后，将裸鼠固定于立体定位仪上，切开头皮，于矢状缝右侧2mm、前囟后2mm穿刺，微量注射器缓慢插入颅脑3mm，注射3μl上述细胞悬液，泵控注射，注射速度0.5μl/min，持续注射6min。

(3)注射完毕后停留针2min，逐渐退针，拔出微量注射器，骨蜡封堵颅骨穿刺口，缝合头部皮肤，放于保温毯内，待裸鼠苏醒后继续饲养，每组胶质瘤细胞注射5只裸鼠。

(4)每日观察裸鼠状态，记录裸鼠存活时间，计算各组生存率。针对当日死亡裸鼠，立即取出脑组织，固定、切片，分别行HE、免疫组化染色，计算颅内成瘤体积，肿瘤体积V＝(D×d²)/2(mm³)，D为长径、d为短径。

结果如图5所示，结果显示敲低SPC25基因/蛋白显著抑制了胶质瘤干细胞的体内成瘤能力，而外源过表达SPC25基因/蛋白则显著增强了胶质瘤干细胞的体内成瘤能力。

序列表

<110> 中国医科大学附属第一医院

<120> 胶质瘤标志物SPC25及其应用

<160> 9

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 1

ATGGTAGAGG ACGAACTGGC A 21

<210> 2

<211> 21

<212>RNA

<213> 人工序列

<400> 2

UUAUGUAGGA CAAUGCUUCG C 21

<210> 3

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 3

GAAGCAUUGU CCUACAUAAU G 21

<210> 4

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 4

CUAUAAUUCA UUAAUACAUC A 21

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 5

UGCUUUUAUC GAAAAGUGCC A 21

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 6

GCACUUUUCG AUAAAAGCAU A 21

<210> 7

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 7

UUCUUCGAAG GUGUCACGUT T 21

<210> 8

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 8

ACGUGACACC UUCGAAGAAT T 21

<210> 9

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 9

GAAATCGGAA AGTTGGCGGG GCTGCGGGAG CTGAGCCTAG AGTCCGGCTG TTGGCTAGAG 60

TGGGCGCGGA TCTGGTGTGG GGAAGGCGGC GGGACTCAGG CCTGCCTGCG AAGCATTGTC 120

CTACATAATG GTAGAGGACG AACTGGCACT TTTCGATAAA AGCATAAATG AATTTTGGAA 180

TAAATTCAAA AGTACGGACA CCTCCTGTCA GATGGCGGGA CTAAGAGATA CCTACAAGGA 240

TTCCATCAAA GCATTTGCAG AAAAGCTGTC TGTGAAATTA AAGGAAGAAG AACGAATGGT 300

TGAGATGTTT CTGGAATATC AAAATCAGAT CAGCAGGCAA AATAAGCTCA TTCAAGAAAA 360

AAAGGATAAC TTGTTAAAAT TGATTGCTGA AGTAAAAGGC AAAAAGCAGG AATTGGAAGT 420

ACTGACTGCA AATATCCAGG ATCTTAAGGA AGAATATTCT AGGAAGAAGG AAACTATTTC 480

TACTGCTAAT AAAGCGAATG CAGAGAGGTT GAAAAGGCTG CAGAAATCTG CAGACTTGTA 540

TAAAGATCGA CTTGGACTAG AAATTCGAAA AATTTATGGT GAGAAATTGC AGTTTATTTT 600

CACTAATATT GACCCTAAGA ATCCTGAGAG CCCATTTATG TTTTCCTTAC ATCTCAATGA 660

AGCAAGGGAC TATGAAGTGT CAGATAGTGC CCCTCATCTT GAGGGCCTAG CAGAATTTCA 720

AGAGAATGTA AGGAAGACCA ACAATTTTTC AGCTTTTCTT GCCAATGTTC GGAAAGCTTT 780

TACTGCCACG GTTTATAATT AACATACAAA TAGTGTATAT AAAAACGGTT TATTTTTCTT 840

CTCTATTACA TATCTCTTTT TTTCTTGTTT TTATTATTAT TATACTTTAA GTTTTAGGGT 900

ACATGTGCAC AATGTGCAGG TTTGTTACAT ATGTATACAT GTGCCATATT GGTGTGCTGC 960

ACCCATTAAC TCGTCATTTC ATTAGGTATA TCTCCTAATG CTATCCCTCC CCCCTCCCCC 1020

AACCCACAAC AGTCCCCGTT GTGTGATGTT CCCCTTCCTG TGTCCATGTG TTCTCATTGT 1080

TCAATTCCCA CCTAGGAGTG AGAATATGTG GTGTTTGGTT TTTTGTCCTT TCGATAGTTT 1140

GCTGAGAATG ATGGTTTCCA GCTTCATCCA TGTTCCTACA AAGGACATGA ACTCATCCTT 1200

TTTTATGGCT GCATAGTATT CCATGGTGTA TATGTGCCAC ATTTTCTTAA TCCAGTCTAT 1260

CATTGTTGGA CATTTGGGTT GGTTCCAAGT CTTTGCTATT GTGAATAGTG CCGAAATAAA 1320

CATACGTGTG CATGTGTCTT TA 1342

Claims

1.一种胶质瘤的生物标志物，其特征在于，所述标志物是SPC25基因/蛋白。

2.SPC25基因/蛋白在制备诊断和/或预后判断胶质瘤的试剂盒中的用途。

3.一种用于诊断胶质瘤和/或预后判断胶质瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒以SPC25基因/蛋白作为检测靶标。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于特异扩增SPC25基因的上下游引物序列，或特异识别/结合SPC25蛋白的试剂。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:2所示。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂是抗体。

7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

8.SPC25基因/蛋白的抑制剂在制备治疗胶质瘤药物中的应用，其特征在于，所述抑制剂能够抑制SPC25基因/蛋白的功能。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抑制剂是抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA和/或中和性抗体和/或其他抑制和/或中和性抗体的化合物。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抑制SPC25基因/蛋白表达的siRNA序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:6所示。