CN112646922A - 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 - Google Patents
一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112646922A CN112646922A CN202011640671.6A CN202011640671A CN112646922A CN 112646922 A CN112646922 A CN 112646922A CN 202011640671 A CN202011640671 A CN 202011640671A CN 112646922 A CN112646922 A CN 112646922A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- dna
- real
- steps
- transgenic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 3
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 claims description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
Description
技术领域
本发明涉及转基因成分的测定技术领域，具体为一种植物加工产品中转基因成分的检验方法。
背景技术
食品，指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是中药材的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。对食品的定义为：可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，不包括烟草或只作药品用的物质。
现在越来越多转基因产品在我们的日常生活中，对食品安全也有着较大的影响，所以针对转基因成分和分量的检测格外的重要，目前的转基因检测方法不是很准确，因此，我们设计了一种植物加工产品中转基因成分的检验方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
本发明的有益效果为：进行空白对照时，内源基因检测Ct值大于或等于40，外源基因或品系特异性检测Ct值大于或等于40；阴性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值大于或等于40；阳性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值小于或等于35；指标有一项不符合，说明PCR反应体系不正常，应重新进行实时PCR扩增，检测准确，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
附图说明
图1为本发明的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
参看图1：一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
优选的，步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
优选的，步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
优选的，步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
优选的，步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
优选的，步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
优选的，步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
优选的，Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
综上，本发明在使用时，进行空白对照时，内源基因检测Ct值大于或等于40，外源基因或品系特异性检测Ct值大于或等于40；阴性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值大于或等于40；阳性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值小于或等于35；指标有一项不符合，说明PCR反应体系不正常，应重新进行实时PCR扩增，检测准确，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
2.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
3.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
4.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
5.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
6.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
7.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
8.根据权利要求5所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011640671.6A CN112646922A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011640671.6A CN112646922A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112646922A true CN112646922A (zh) | 2021-04-13 |
Family
ID=75367923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011640671.6A Pending CN112646922A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112646922A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103725777A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-04-16 | 南京佳邦食品有限公司 | 一种快速检测转基因大豆mon89788的实时荧光pcr方法 |
-
2020
- 2020-12-31 CN CN202011640671.6A patent/CN112646922A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103725777A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-04-16 | 南京佳邦食品有限公司 | 一种快速检测转基因大豆mon89788的实时荧光pcr方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zinshteyn et al. | Loss of a conserved tRNA anticodon modification perturbs cellular signaling | |
| Zampieri et al. | Maternal risk for Down syndrome is modulated by genes involved in folate metabolism | |
| CN110760620A (zh) | 一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光pcr检测试剂、试剂盒和检测方法 | |
| CN105018621A (zh) | 一种利用实时荧光定量pcr技术检测花生及制品中黄曲霉毒素潜在污染风险的方法 | |
| CN103031382B (zh) | 食品及饲料中貂源性成分实时荧光pcr检测方法 | |
| CN106834434B (zh) | 用于检测COX-1、COX-2和GPIIIa基因多态性的核酸、试剂盒及方法 | |
| CN112646922A (zh) | 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 | |
| Aleixandre-Tudo et al. | Evolution of phenolic composition during barrel and bottle aging | |
| EP2518145A1 (en) | Method for qualitative and quantitative detection of common wheat | |
| CN117385059A (zh) | 一种预示绒山羊布病风险抗性的插入/缺失标记方法、检测试剂盒及其应用 | |
| CN117051138A (zh) | 一种单管检测23种食品致病菌的试剂盒 | |
| Onetto et al. | SO2 and copper tolerance exhibit an evolutionary trade-off in Saccharomyces cerevisiae | |
| Longin et al. | Evaluation of three Brettanomyces qPCR commercial kits: Results from an interlaboratory study | |
| Onache et al. | Comparison of some DNA extraction methods from monovarietal must and wines | |
| CN101451164A (zh) | 一种用于检测菊花褪绿斑驳类病毒的方法 | |
| CN105543231B (zh) | 伏马毒素b1核酸适配体链置换探针的筛选及应用 | |
| CN105755141A (zh) | 一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用 | |
| CN104419758A (zh) | 一种斑点叉尾鮰与长鳍叉尾鮰的分子遗传鉴别方法 | |
| CN103060460A (zh) | 检测含有nos终止子的转基因水稻的引物、试剂盒和方法 | |
| CN114032299B (zh) | 检测slc10a1基因的多个突变位点的悬浮磁珠液相芯片试剂盒 | |
| CN108950039B (zh) | Dna条形码、引物、试剂盒、方法和应用 | |
| CN111218520A (zh) | 转基因大豆gts-40-3-2品系efirm检测探针及其应用 | |
| CN110195110A (zh) | 一种检测MTHFR基因C677T rs1801133SNP位点的试剂盒 | |
| Moine et al. | TaqMan® and HRM approaches for SNP genotyping in genetic traceability of musts and wines | |
| CN102367485A (zh) | 用于pcr检测植物病害的内参基因的引物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210413 |