CN112646922A - 一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 - Google Patents

一种植物加工产品中转基因成分的检验方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。

Description

一种植物加工产品中转基因成分的检验方法
技术领域
本发明涉及转基因成分的测定技术领域，具体为一种植物加工产品中转基因成分的检验方法。
背景技术
食品，指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是中药材的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。对食品的定义为：可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，不包括烟草或只作药品用的物质。
现在越来越多转基因产品在我们的日常生活中，对食品安全也有着较大的影响，所以针对转基因成分和分量的检测格外的重要，目前的转基因检测方法不是很准确，因此，我们设计了一种植物加工产品中转基因成分的检验方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
前述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，所述Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
本发明的有益效果为：进行空白对照时，内源基因检测Ct值大于或等于40，外源基因或品系特异性检测Ct值大于或等于40；阴性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值大于或等于40；阳性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值小于或等于35；指标有一项不符合，说明PCR反应体系不正常，应重新进行实时PCR扩增，检测准确，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
附图说明
图1为本发明的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
参看图1：一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
优选的，步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
优选的，步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
优选的，步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
优选的，步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
优选的，步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
优选的，步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
优选的，Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
综上，本发明在使用时，进行空白对照时，内源基因检测Ct值大于或等于40，外源基因或品系特异性检测Ct值大于或等于40；阴性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值大于或等于40；阳性对照：内源基因检测Ct值小于或等于30，转化事件特异性检测Ct值小于或等于35；指标有一项不符合，说明PCR反应体系不正常，应重新进行实时PCR扩增，检测准确，通过具体的数值能够直接的体现检测的准确性，解决了目前的转基因检测方法不是很准确的问题。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)提取样品DNA，采用实时荧光PCR技术对样品DNA筛选基因或品系特异性片段扩增；
(2)根据实时荧光扩增曲线，判断该样品中是否含有转基因成分；
(3)对外源基因检测阳性的样品，或已知为转基因阳性的样品，根据PCR扩增结果，判定该样品中含有转基因品系成分。
2.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(1)中，采用具有相同效果的植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。
3.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：步骤(1)中，样品DNA用紫外分光光度计测定260nm和280nm处吸收值，分别计算核酸的纯度和浓度，计算公式如下，
DNA浓度(mg/mL)＝50×OD2so。
4.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)，判断该样品中是否含有转基因成分，采用每个样品应有2个平行实验，同时每次检测必须设立3个对照；
(1)阳性对照，为对应的转基因植物样品品系或含有相应外源基因的转基因植物样品基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA；
(2)阴性对照，非转基因植物样品DNA；
(3)空白对照，设两个，一是提取DNA时设置的提取空白对照，二是PCR反应的空白对照。
5.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)中，对实时荧光PCR预混液进行配制，DNA聚合酶(5U/μL)、PCR反应缓冲液、氯化镜、dNTPs和UNG酶按比例配制的溶液。
6.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(2)中，测试样品检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品不含所检基因或品系；测试样品检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于30，则可判断该样品含所检基因或品系；测试样品检测Ct值在36-40之间，调整模板浓度重做实时荧光PCR。
7.根据权利要求1所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述步骤(1)中，实时荧光PCR为实时荧光聚合酶链式反应，是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。
8.根据权利要求5所述的一种植物加工产品中转基因成分的检验方法，其特征在于：所述Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN103725777A (zh) * 2013-12-18 2014-04-16 南京佳邦食品有限公司 一种快速检测转基因大豆mon89788的实时荧光pcr方法

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