CN112646757A - 丁香链霉菌及其在植物病害防治中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于微生物生物防治领域，本发明公开了一种丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl‑3，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020423。本发明还同时公开了上述丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl‑3的用途：用于植物病害防治，特别是用于大豆细菌性斑疹病的生物防治。

Description

丁香链霉菌及其在植物病害防治中的应用

技术领域

本发明属于微生物生物防治领域，涉及拮抗大豆细菌性斑疹病菌丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株及其在植物病害防治中的应用。

背景技术

大豆的细菌性病害贯穿大豆整个生长期，对大豆的幼苗、叶片、豆荚产生破坏，致使大豆产量品质下降。高温多雨的温暖湿润环境发病更加严重，在中国南北方大豆主产区均有不同程度流行与发生。

大豆细菌性斑疹病的病原菌为地毯草黄单胞大豆致病变种(Xanthomonasaxonopodis pv.glycines，Xag)。其发病时的典型症状是病斑初期呈现淡褐色小点，随即转化为大小为1～2mm暗褐色多角形的小斑，病斑周围有黄色晕圈；其后病斑稍隆起，中间的表皮开裂，形似斑疹，受害严重时会出现大片组织坏死并呈现火烧状，造成叶子早期脱落。

目前对于细菌性斑疹病的防治方法主要是化学防治，化学防治具有显而易见的局限性和危害性，当前也并没有特别有效的农药可以应用在细菌性病害的防治上。放线菌是一类广泛用于农业生产的重要生防微生物。宋迤明等(2012年)从水稻田土壤中分离筛选到1株白蚁链霉菌(S.termitum)ACT-2菌株，对水稻白叶枯病菌的生长和繁殖具有较强的抑制作用，其发酵液能保持稳定的抑菌能力；水稻盆栽试验结果表明：对水稻白叶枯病的生防效果最高可达80.80％，具有研发高效的新型微生物农药的前景。张艳军等(2014年)从分离筛选到1株拮抗Xoo病菌很强的放线菌(Streptomyces gramineus)12号，抑菌圈直径达60.9mm，将其作为微生物农药具有一定的应用价值和开发前景。近年来，众多学者已陆续筛选获得不同种类的拮抗放线菌，用于防治不同植物病害的报道不胜枚举。

例如为以下：

2013101936673的发明《一株具有抗菌作用的链霉菌及其应用》提供了一种链霉菌(Streptomyces sp.)GIM4.116，其代谢产物具有抗菌活性，特别是对具有多重耐药性的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有较好的活性，其还对导致植物青枯病的青枯劳尔氏菌具有较好的抑制作用。

2011101400883的发明《一株海洋链霉菌及其应用》公开了海洋链霉菌(Streptomyces sp.)FXJ7.388，其保藏号为CGMCC No.4474。对革兰氏阳性菌(耐药金黄色葡萄球菌MRSA 1-1、金黄色葡萄球菌CGMCC 1.2386、枯草芽孢杆菌CGMCC 1.2428)、白色念珠菌CGMCC 2.538具有抗性。

2009100210831的发明《用于防治猕猴桃细菌性溃疡病的内生链霉菌及其制备方法》公开了一种杨凌青色链霉菌(Streptomyces glaucus sp.nov yangling)TIASA5，保藏号为：GCMCC No.2132。该菌株对猕猴桃细菌性溃疡病具有较好的防治作用。

2017111572968的发明《一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用》公开了焊灰直丝链霉菌(Streptomyces chungwhensis)LA-5，保藏编号为CCTCC NO：M 2017683。该放线菌的发酵产物可抑制多种植物病原真菌及细菌，不但对灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、瓜果腐霉菌、立枯丝核菌等真菌有较好的抑制作用，还对花椰菜软腐病菌、番茄青枯病菌等病原细菌具有一定的生物活性。

2020104930791的发明《海洋灰平链霉菌HN60在抗细菌方面的应用》涉及海洋灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus)HN60，保藏编号：CGMCC No.18948。该菌株对于金黄色葡萄球菌、产气杆菌、变形杆菌具有明显的抑制作用。

2009100923364的发明《暗红产色链霉菌及其在病害生物防治中的应用》提供了链霉菌属暗红产色链霉菌(Streptomyces erythrochromogenes)MO28，保藏号为CGMCCNo.3228。该菌株具有抑制番茄灰霉病生长的作用。对串珠镰刀病、丁香假单胞病、辣椒灰霉、黄瓜灰霉病、茄子灰霉病、草莓灰霉病均具有防治效果。

2010101559005的发明《细黄链霉菌及其应用》公开了保藏编号为CGMCG No.3442的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)NMG2-4-8，其。该细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)对18种病原真菌和9种细菌有有显著拮抗作用，抗菌谱广。该细黄链霉菌对苜蓿霜霉病等农作物病原菌有很强的抑制作用，如对苜蓿霜霉病、白粉病、褐斑病、匍柄霉叶斑病、根腐病等显示出很好的防病效果。褐斑病、匍柄霉叶斑病均为植物病原真菌引起的病害。

2013105677061的发明《一株防治猕猴桃溃疡病的菌株及其制备方法》公开了杨凌青色链霉菌(Streptomyces glaucus sp.nov.yangling)TIASA5菌株，保藏编号为CGMCCNo.2132；对防治猕猴桃细菌性溃疡病效果显著。

2011100621465的发明《一株金黄垂直链霉菌及其应用》公开了金黄垂直链霉菌(Streptomyces aureoverticillatus)HN6，其保藏编号为CCTCC No.M2010293。拮抗多种真菌和细菌，且对香蕉枯萎病的防治效果好。

2018115684651的发明《一种防治马铃薯晚疫病的根际细菌及其用途》公开了链霉菌属Streptomyces sp.FXP04，保藏号为CGMCC No.16826。对马铃薯晚疫病表现出较好的防治效果。

201910983771X的发明《一株链霉菌、抑菌药物及其应用》公开了链霉菌(Streptomyces sp.)，保藏编号为CGMCC No.15109。该链霉菌可以拮抗多种植物病原真菌和卵菌，对小麦全蚀病、辣椒疫霉病等表现良好的生防效果。

以上专利中未见有对大豆相关病原菌有抑制效果的链霉菌。

在防治大豆细菌性斑疹病的拮抗微生物分离筛选研究中，尚未发现获得新放线菌用于防治该病害的报道。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种拮抗大豆细菌性斑疹病菌丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株及其在植物病害防治中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020423。

本发明还同时提供了上述丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3的用途：用于植物病害防治。

作为本发明的丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3的用途的改进：用于大豆细菌性斑疹病的生物防治。

本发明菌株的保藏信息如下：保藏名称：丁香链霉菌Sl-3 Streptomyceslilacinus Sl-3，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2020424，保藏日期为2020年8月14日。

本发明从不同生境土壤中分离得到165株放线菌，经初筛和复筛获得1株对大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv.glycines)具有较强体外抑制作用的拮抗菌株Sl-3。Sl-3菌株筛选自茶花(Camellia japonica)根际土壤，以期为大豆细菌性斑疹病的生物防治提供新的拮抗放线菌资源。依据形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列，鉴定为丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)。

丁香链霉菌Sl-3菌株对大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas axonopodispv.glycines，Xag)有显著抑制作用。即，丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株发酵滤液对大豆细菌性斑疹病菌有显著抑制作用，可以用来防治大豆细菌性斑疹病等。Sl-3菌株在高氏一号培养基上培养7d(温度为28℃)，0.22μm滤膜过滤得发酵滤液，取200μL发酵滤液，用牛津杯法测定对Xag的抑制作用，抑菌圈直径可达55±2.1mm(图5)。抗菌谱试验结果表明：链霉菌Sl-3菌株发酵滤液对3种植物病原细菌如水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas suringaepv.glycinea)和野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)有较强的抑制作用(见表3，图6)。盆栽防效试验表明：Sl-3菌株发酵滤液对大豆细菌性斑疹病的防效可达93％(见表4，图7)。链霉菌Sl-3菌株可为微生物源农药开发提供优良的菌株，在番茄、水稻、大豆等作物生物防治上有较好的应用前景。

综上，本发明是针对防治大豆细菌性斑疹病的化学防治和农业防治日益暴露出来的问题，利用微生物及其次级代谢产物进行大豆细菌性斑疹病的生物防治成为研究方向。本发明旨在提供1株对大豆细菌性斑疹病菌具有高拮抗作用的丁香链霉菌(Streptomyceslilacinus)Sl-3菌株。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是24株代表性放线菌纯菌株的菌落形态(高氏一号培养基，7d)；

图2是链霉菌Sl-3菌株的菌落和显微形态特征(高氏一号培养基，7d)；

图3是链霉菌Sl-3菌株生理生化部分实验结果；

图4基于16S rDNA 序列构建的链霉菌Sl-3菌株进化树；

图5为链霉菌Sl-3菌株发酵滤液对大豆细菌性斑疹病菌生长的抑制作用；

左图为对照，牛津杯里加的是高氏一号培养液；右图为抑菌圈，牛津杯里加的是链霉菌Sl-3菌株的发酵滤液。

图6为链霉菌Sl-3菌株菌饼对大豆细菌性斑疹病菌等生长的抑制作用；

图7为链霉菌Sl-3发酵滤液对大豆细菌性斑疹病的防效实验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株的筛选和鉴定

1菌株

(1)放线菌菌株：来自不同生境的土壤(例如：水稻田土壤、大豆田土壤、草坪土壤、茶花地土壤、番茄地土壤等)中分离、纯化、筛选和鉴定，保藏放线菌菌株。

(2)大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv.glycines，以下均缩写为Xag)为大豆病原细菌，用作放线菌拮抗作用筛选的指示菌。

2培养基

(1)高氏一号固体培养基：可溶性淀粉20g、KNO₃ 1g、K₂HPO₄ 0.5g、MgSO₄·7H₂O0.5g、NaCl 0.5g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、琼脂20g，水1000mL，pH 7.1。用于放线菌菌株的分离纯化和鉴定。

(2)高氏一号液体培养基：配方同(1)，但不加琼脂，用于放线菌菌株的液体发酵培养。

(3)NA固体培养基：牛肉浸膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖2.5g、琼脂15-20g、水1000mL、pH7.1。用于Xag病菌的培养。

NA液体培养基(NA培养液)：不加入琼脂，其余同NA固体培养基。

3实验方法

3.1放线菌菌株的分离纯化和保藏

用土壤梯度稀释涂布法分离。取干燥土样1g于99mL无菌水中，120r/min摇床上振荡30min。上清液进行梯度稀释(10^-2～10^-6)，选择合适的浓度(10^-5)取100μL均匀涂布于高氏一号培养基(含50μg·mL^-1重铬酸钾)平板上，28℃恒温箱培养7d，直到出现菌落。挑取具有典型放线菌菌落特征的单菌落转接到另一高氏一号培养基平板上，经3次划线纯化，得纯菌株。将纯菌株编号，置于4℃冰箱中保存，备用。

3.2拮抗Xag放线菌菌株的筛选

3.2.1共培养法初筛

将Xag接种于NA培养液中，摇床活化培养(160r/min、28℃)；当菌体密度达到OD₆₀₀为0.6时，取100μL菌液均匀涂布于NA固体培养基上。

将已活化的放线菌菌株菌饼(直径6mm)接种于NA固体培养基中间，28℃培养48h，观察抑菌圈。根据抑菌圈有无和大小初步筛选有拮抗作用的放线菌菌株，并将其用25％甘油保藏。

3.2.2牛津杯法复筛

(1)放线菌菌株的发酵培养：将有拮抗作用的放线菌菌株接种至高氏一号培养基平板中，于28℃培养箱中培养3d，用6mm打孔器取1菌饼接种到装有100mL高氏一号培养液的250mL锥形瓶中摇床振荡培养(200r/min、28℃)5d后，将发酵液置于50mL离心管中12000r/min离心10min，上清液用0.22μm有机滤膜过滤，除去残余孢子，得到发酵滤液。

(2)Xag的培养：将Xag接种于NA培养液中，摇床活化培养(160r/min、28℃)，当菌密度达到OD₆₀₀为0.6时，取100μL菌液均匀涂布于NA固体培养基上。取200μL放线菌菌株的发酵滤液，用牛津杯法测定各放线菌菌株发酵液对Xag的抑制作用。根据抑菌圈大小选择出拮抗作用较强的放线菌菌株。

3.3拮抗Xag放线菌Sl-3菌株的鉴定

3.3.1形态特征观察

取Sl-3菌株1菌饼(直径6mm)，接于高氏一号培养基平板上28℃活化培养3d；取1菌饼(直径6mm)转接种于新的高氏一号培养基平板上，28℃培养7d，观察菌落大小、形态、质地、表面、色泽等特征。用插片法和埋片法培养Sl-3菌株，光学显微镜和扫描电镜下观察Sl-3菌株的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝等形态特征，并拍照。

3.3.2生理生化特征实验

对Sl-3菌株进行淀粉水解、明胶液化、尿素利用、碳源氮源的利用等生理生化试验。

3.3.3 16S rDNA序列分析

提取Sl-3菌株的基因组DNA，扩增16S rDNA序列，送上海生物工程公司测序。将测序得到的16S rDNA序列提交至GenBank并利用BLAST比对后进行分析，采用MEGA-X软件中Neighbor-Joining法构建系统发育树确定所属的放线菌种类。

4实验结果

4.1放线菌纯菌株的获得

通过分离纯化从不同生境土壤样品中分离纯化共获165株放线菌纯菌株，24株代表性放线菌纯菌株的在高氏一号培养基培养7d的菌落如图1所示。

4.2拮抗Xag放线菌菌株的筛选

利用共培养法和牛津杯法对165株放线菌纯菌株进行Xag的抑制效果的初筛和复筛，结果不同放线菌菌株对抑制Xag作用存在较大差异。经筛选获1株拮抗作用较强的放线菌菌株，编号为Sl-3菌株，牛津杯法测定的抑菌圈直径达55±2.1mm，Sl-3菌株分离于茶花(Camellia japonica)根际土壤(图5)。

4.3 Sl-3菌株的鉴定结果

Sl-3菌株形态特征：高氏一号培养基上28℃培养7d，菌落较大、呈玫瑰红色，表面丝绒状；光学显微镜观察成熟的气生菌丝中可见红色色素颗粒；气生菌丝分化形成孢子丝，孢子丝呈直链形或者波浪形(图2)。

生理生化试验结果表明：Sl-3菌株呈革兰氏阳性，能水解淀粉、纤维素、脂肪、明胶、尿素和酪蛋白(表1、图3)；可利用多种碳源，利用效果较佳的是葡萄糖、麦芽糖、肌醇等(表2)；可利用多种氮源，较佳氮源是蛋白胨、(NH₄)₂SO₄、赖氨酸、组氨酸；适宜酸碱度是pH7.1，适宜培养温度是28℃。最适转速为200r/min。

表1、链霉菌Sl-3菌株生理生化试验结果

注：++++表示能力很强，+++表示能力强，++表示能力中，+表示能力较弱，-表示无。

表2、链霉菌Sl-3菌株碳源、氮源利用试验结果

注：+++表示生长旺盛，++表示生长良好，+表示生长一般，—表示不生长。

16S rDNA序列分析结果表明：其长度为1388bp，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所述：

与丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)的进化距离最近(图4)，相似性达99.6％。根据Sl-3菌株的形态特征、生理生化试验结果和16S rDNA序列，结合链霉菌属(Streptomyces)分种检索表和进化树分析，将Sl-3菌株鉴定为丁香链霉菌(Streptomyceslilacinus)。

菌株Sl-3进行了保藏，保藏信息如下：保藏名称：丁香链霉菌Sl-3 Streptomyceslilacinus Sl-3，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2020424，保藏日期为2020年8月14日。

实施例2、丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株抗菌谱测定

1菌株

(1)丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株。

(2)6种代表性植物病原细菌：水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzicola)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas suringae pv.glycinea)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)、番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonassyringae pv.tomato)、烟草青枯病菌(Ralstortia solonacearum)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)6种代表性植物病原细菌(见表3)，用于Sl-3菌株发酵滤液抗细菌谱测定。

2培养基

(1)牛肉膏蛋白胨液体培养基(牛肉膏蛋白胨培养液)：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、加水至1000mL，pH调至7.4；

牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基：在牛肉膏蛋白胨液体培养基的基础上加琼脂粉18g。

用于植物病原细菌的培养。

(2)高氏一号培养基：用于Sl-3菌株的发酵种子和发酵培养。

3实验方法

3.1 Sl-3菌株的培养和发酵滤液的制备

用打孔器取Sl-3菌株1菌饼(直径6mm)，接种于高氏一号培养液中，装液量50/250mL、初始pH 7.1，200r/min，28℃恒温摇床培养72h，作为种子液。按照4％接种量将种子液接种于高氏一号发酵培养液(200/500mL)中，摇床发酵培养7d。将发酵液置于50mL离心管中12000r/min离心10min，上清液用0.22μm有机滤膜过滤，除去残余孢子，得到发酵滤液，备用。

3.2植物病原细菌的活化

将保藏于4℃的6种病原细菌分别接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，于28℃活化培养2d。然后转接于新的牛肉膏蛋白胨固体培养基上于28℃培养2d，用于细菌抗菌谱测定。

3.3 Sl-3菌株抗细菌谱的测定

将已经活化培养的6种植物病原细菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养液中，摇床培养(160r/min、28℃)，当菌密度达到OD₆₀₀为0.6时，取100μL菌液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基上。另取200μL Sl-3菌株的发酵滤液，用牛津杯法测定Sl-3发酵液对6种植物病原细菌的抑制作用。

4实验结果

对6种代表性植物病原细菌抗菌谱测定结果表明(表3、图6)：链霉菌Sl-3菌株发酵滤液对3种植物病原细菌水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas suringae pv.glycinea)和野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris pv.campestris)均有较强的抑制作用；但对烟草青枯病菌(Ralstortiasolonacearum)和水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)抑制作用相对较弱；对番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringae pv.tomato)基本无抑制作用。

表3、链霉菌Sl-3菌株发酵滤液对6种代表性植物病原细菌的抑制效果

注：不同小写字母表示在P<0.05水平存在显著差异

实施例3链霉菌Sl-3菌株发酵滤液对大豆细菌性斑疹病的防效研究

1病菌和大豆品种

(1)用于防效的放线菌：丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3菌株。

(2)病原菌：大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv.glycines，Xag)

(3)大豆品种：选用对大豆细菌性斑疹病感病的周豆36号品种。

2培养基和农药

(1)高氏一号固体和液体培养基，用于Sl-3菌株的培养、发酵和发酵滤液制备。

(2)NA培养基：牛肉浸膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖2.5g、琼脂15-20g、水1000mL、pH 7.2(液体培养基不加琼脂)。用于Xag病菌的培养。

(3)波尔多液农药(1:1:200)：硫酸铜5g、生石灰5g、水1000mL。

3实验方法

3.1大豆苗的培育

将大小均一饱满的大豆种子于75％酒精中表面消毒30s，无菌水冲洗5次以上，播种于育苗盘置于光照培养箱培养5d，当幼苗长出2片叶子后转入育苗盆置于光照培养箱培养25d，培养条件：光照16h、温度24℃，黑暗8h、温度23℃，湿度65％，两天浇一次水，一周喷营养液一次。

3.2 Xag病菌的培养

将保藏于4℃的Xag病菌接种于NA培养基(含50mg/mL羧苄青霉素)平板上，于28℃活化培养1d；挑取单菌落接入至有3mL NA液体基的10mL试管中，活化至OD＝0.6；取1mL菌液加入至100mL NA液体培养基(含50mg/mL羧苄青霉素)中培养至OD＝0.6；取Xag病菌NA培养液，12000r/min离心5min，去上清加入无菌水，配制成OD＝0.6的Xag病菌清水悬液，用于防效试验。

3.3 Sl-3菌株发酵滤液的制备

用打孔器取Sl-3菌株1菌饼(直径6mm)，接种于高氏一号培养液中，装液量50/250mL、初始pH 7.1，200r/min，28℃恒温摇床培养72h，作为种子液。按照4％接种量将种子液接种于高氏一号发酵培养液中，摇床发酵培养7d。将发酵液置于50mL离心管中12000r/min离心10min，上清液用0.22μm有机滤膜过滤，除去残余孢子，得到发酵滤液。

3.4盆栽防效初步研究

(1)无菌水空白对照组(CK1)：用无菌水，均匀喷洒在大豆叶片正反两面，并时刻保持接种处湿润，不做其他处理；

(2)Xag病菌处理对照组(CK2)：用OD＝0.6的Xag病菌清水悬液均匀喷洒在大豆叶片正反两面，并使接种部分时刻保持湿润，不做其他处理；

(3)方法①处理组(M1)：先用喷壶将Sl-3菌株发酵滤液喷洒于大豆叶片正反两面，喷洒剂量为100μL/cm²，每隔0.5h喷洒一次，共喷6次；最后一次喷洒12h后，按照CK2的处理方法接种，并对接种部位做好保湿措施；

(4)方法②处理组(M2)：按照CK2的处理方法接种Xag病菌，并对接种部位做好保湿措施。接种12h后按照方法①喷洒Sl-3菌株发酵滤液；

(5)农药处理组(M3)：先用喷壶将100μL/cm²农药(波尔多液)喷洒于大豆叶片正反两面，喷洒剂量为100μL/cm²，每0.5h喷洒一次，共喷6次；喷洒12h后，按照CK2的处理方法接种，并对接种部位做好保湿措施。

待病情发展趋于稳定后，记录并统计发病情况。以叶片为单位调查病情，大豆细菌性斑疹病病情分0～4级标准如下：

0级：叶片无病斑；

1级：病斑面积占叶面积的1/4以下；

2级：病斑面积占叶面积的1/4～1/2左右；

3级：病斑面积占叶面积的1/2～3/4，近一半叶片枯死；

4级：病斑面积占叶面积的3/4以上，一半以上或全面叶片枯死。

病情指数(％)＝∑(病级×各病级株数)/(4×总株数)×100

相对防效(％)＝(CK2病情严重度-处理病情严重度)/CK2病情严重度×100

4实验结果

实验结果如表4(图7)所示：Sl-3菌株发酵滤液处理可显著降低大豆细菌性斑疹病的病情指数。方法①处理(M1)对大豆细菌性斑疹病相对防效93.17％，具有较好的防治效果；从方法②处理(M2)与农药处理(M3)防效结果可看出，Sl-3菌株发酵滤液处理防治效果优于农药防治效果；实验结果还表明先喷Sl-3菌株发酵滤液防治效果优于先接种Xag病菌再喷发酵滤液，即对大豆细菌性斑疹病的防治效果预防效果优于治疗效果。

表4、放线菌Sl-3菌株发酵滤液对大豆细菌性斑疹病的相对防效

注：不同小写字母表示在P<0.05水平存在显著差异。

说明：背景技术中所述的各类链霉菌按照实施例3的M1处理组进行实验，所得结果均显示该现有链霉菌均未见有防冶大豆细菌性斑疹病的效果。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

<110> 浙江师范大学

<120> 丁香链霉菌及其在植物病害防治中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1388

<212> DNA

<213> 丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)

<400> 1

gtccgaaacg atgaagccct tcggggtgga ttagtggcga acgggtgagt aacacgtggg 60

caatctgccc tgcactctgg gacaagccct ggaaacgggg tctaataccg gatatgacct 120

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gcttgttggt ggggtgatgg cctaccaagg cgacgacggg tagccggcct gagagggcga 240

ccggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata 300

ttgcacaatg ggcgaaagcc tgatgcagcg acgccgcgtg agggatgacg gccttcgggt 360

tgtaaacctc tttcagcagg gaagaagcga aagtgacggt acctgcagaa gaagcgccgg 420

ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggcgca agcgttgtcc ggaattattg 480

ggcgtaaaga gctcgtaggc ggcttgtcgc gtcggatgtg aaagcccggg gcttaacccc 540

gggtctgcat tcgatacggg caggctagag ttcggtaggg gagatcggaa ttcctggtgt 600

agcggtgaaa tgcgcagata tcaggaggaa caccggtggc gaaggcggat ctctgggccg 660

atactgacgc tgaggagcga aagcgtgggg agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc 720

acgccgtaaa cgttgggaac taggtgtggg cgacattcca cgtcgtccgt gccgcagcta 780

acgcattaag ttccccgcct ggggagtacg gccgcaaggc taaaactcaa aggaattgac 840

gggggcccgc acaagcagcg gagcatgtgg cttaattcga cgcaacgcga agaaccttac 900

caaggcttga catacaccgg aaagcgctag agatagtgcc ccccttgtgg tcggtgtaca 960

ggtggtgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1020

cgcaaccctt gtcctgtgtt gccagcatgc ccttcggggt gatggggact cacaggagac 1080

tgccggggtc aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgtct 1140

tgggctgcac acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgataccgcg aggtggagcg 1200

aatctcaaaa agccggtctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc atgaagttgg 1260

agttgctagt aatcgcagat cagcattgct gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1320

accgcccgtc acgtcacgaa agtcggtaac acccgaagcc ggtggcccaa cccttgtgga 1380

gggagccg 1388

Claims (3)

1.丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3，其特征是：保藏编号为CCTCC NO：M2020423。

2.如权利要求1所述的丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3的用途，其特征是：用于植物病害防治。

3.根据权利要求2所述的丁香链霉菌(Streptomyces lilacinus)Sl-3的用途，其特征是：用于大豆细菌性斑疹病的生物防治。

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