CN112646000A - 一种紫苏籽肽粉及其制备方法、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种紫苏籽肽粉及其制备方法、应用。所述紫苏籽肽粉含有紫苏籽肽，所述紫苏籽肽的含量在85wt%以上；其中，80%以上紫苏籽肽的分子量小于500 Dalton。所述紫苏籽肽粉的制备方法，将紫苏籽脱脂，依次经过蛋白质提取、酶解、分离纯化、浓缩和干燥后，得到紫苏籽肽粉。本发明制备方法操作简单，提取率高，生产耗时短，更加适合大规模生产；采用本发明的制备方法制得的紫苏籽肽粉具有高纯度、低分子量的特点，水溶性好，其水溶液澄清无杂质，具有较高的生物效价和营养价值，可应用于预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的制备。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种紫苏籽肽粉及其制备方法、应用。
背景技术
紫苏，又名赤苏、红苏、香苏，系具有特殊香气的唇形科紫苏属一年生草本植物，在我国黑龙江、四川、安徽、宁夏、辽宁、陕西等省均有栽培。紫苏籽是紫苏成熟的果实，又称苏子，有民间食疗珍品之称，和紫苏均名列我国传统的药食同源目录中。紫苏籽富含油脂，出油率30-50％，此外，种子中还有蛋白质、维生素E、维生素B1、甾醇、磷脂等。现代医学研究证实，紫苏籽中的有效成分对人体具有提高记忆力和视网膜反射能力、抗衰老、抗过敏、降血压、降血脂、增强免疫等保健功能和药用功效。
随着紫苏籽油产量的不断增大，紫苏籽油加工的副产物-紫苏籽饼粕的综合利用也亟待解决。紫苏籽饼粕大多被用作饲料或者被废弃，不仅资源浪费，而且造成环境污染。紫苏籽粕中含有高达40wt％蛋白质，含有人体必需的8种氨基酸，谷氨酸、精安酸、赖氨酸的含量高于其它油料，是一种优质的植物蛋白，其营养价值高，具有很高的开发潜力。目前对紫苏饼粕的开发利用，主要停留在紫苏蛋白的分离提取上，更加深入的研究较少。
植物活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。人体摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以低肽形式消化吸收的，以游离氨基酸形式吸收的比例很小，活性肽能自主抑制对脂肪的吸收，并与脂肪发生作用，产生脂肪酶，能促进脂肪的分解。同时活性肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多，表明活性肽的生物效价和营养价值比游离氨基酸更高。当前对于紫苏籽蛋白肽工业制备工艺的研究较少。
专利CN 10624319 A、CN 106317170A和CN 106478770A公开了紫苏籽抗氧化肽的制备方法，使用石油醚对紫苏籽脱脂后，用碱性蛋白酶酶解后，使用凝胶色谱柱分离纯化，再用高效液相色谱法(洗脱剂为乙腈和水)进行细分，得到抗氧化七肽。此专利公开的方法很难适用于大规模生产，原因为：1.石油醚和乙腈为易燃易爆炸溶剂，对人体健康伤害大，对环境造成污染，不为绿色生产；2.使用凝胶色谱和高效液相色谱法，设备要求高，无法大批量生产。因此寻找一种工艺简便、绿色环保、高收率、低成本的工业制备方法成为国内外研究热点。
发明内容
本发明为了克服上述现有技术中存在的问题，提供了一种高纯度、低分子量的紫苏籽肽粉。
本发明还提供了一种紫苏籽肽粉的制备方法，该方法操作简单，提取率高，生产耗时短，更加适合大规模生产。
本发明还提供了一种紫苏籽肽粉在制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的应用。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种紫苏籽肽粉，所述紫苏籽肽粉含有紫苏籽肽，所述紫苏籽肽的含量在85wt％以上；其中，80％以上紫苏籽肽的分子量小于500Dalton。
作为优选，所述紫苏籽肽的分子量Dalton分布如下：
<5％紫苏籽肽的分子量>1000Dalton；
5～10％紫苏籽肽的分子量1000～500Dalton；
45～55％紫苏籽肽的分子量500～200Dalton；
<30％紫苏籽肽的分子量＜200Dalton；
所述紫苏籽肽的数均分子量17～463，重均分子量30～484。
本发明紫苏籽肽的含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T22729-2008所述的肽含量的测定方法进行；肽相对分子量分布的测定方法是参照GB/T22492-2008附录A和GB/T 22729-2008附录A所述的高效凝胶过滤色谱法(GPC)进行。
作为优选，所述紫苏籽肽粉的制备原料为唇形科紫苏属植物紫苏的种子。
一种紫苏籽肽粉的制备方法，将紫苏籽脱脂，依次经过蛋白质提取、酶解、分离纯化、浓缩和干燥后，得到紫苏籽肽粉。
本发明所述脱脂方法为溶剂法、冷榨法或超临界提取法，优选地使用冷榨脱脂法和超临界提取法；本发明将紫苏籽超临界提取法或者冷榨脱脂制备紫苏籽粕，发明人做了相关实验，与热榨方法相比，超临界提取法或者冷榨后蛋白质提取率至少高出5wt％左右，同时含量高出20wt％左右，与溶剂脱脂法相比，无溶剂残留，对人体无害，工艺安全系数高。
本发明所述蛋白提取法为碱提酸沉法以及高效逆流提取法，优选地使用高效逆流提取法；分离纯化方法可以为滤膜过滤法和树脂分离法，优选地使用滤膜过滤法；浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法；干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法，优选地使用喷雾干燥法，使用喷雾干燥法不仅节约了干燥时间，而且产品质粒均匀。
作为优选，包括以下步骤：
(1)将紫苏籽脱脂，得到脱脂紫苏籽粕；
(2)在脱脂紫苏籽粕中加入水，调节pH至8～12于室温提取，弃去滤渣，得到紫苏籽蛋白液；
(3)将紫苏籽蛋白液加热至35～60℃，将pH值调节至2～10，加入至少紫苏籽粕重量的0.1wt％以上的生物酶，搅拌酶解至少3h后，煮沸灭活至少2min，得到蛋白酶解液；该步骤直接使用紫苏籽蛋白液进行酶解，没有将紫苏籽蛋白进行干燥，这样不仅减少了蛋白质干燥时的损失，也简化了制备工艺的步骤，提高生产效率；
(4)将蛋白酶解液使用微滤膜处理，在40～80℃下浓缩至固含为3～5wt％时，干燥得到紫苏籽肽粉。
作为优选，步骤(2)中，采用高效逆流提取法提取蛋白质，包括以下步骤：
(a)将脱脂紫苏籽粕分为等质量的三份，记为脱脂紫苏籽粕A，脱脂紫苏籽粕B和脱脂紫苏籽粕C；
(b)在脱脂紫苏籽粕A中加入水，调节pH至8～12于室温一次提取0.5～2h，过滤，得第一滤渣和第一滤液；
(c)在第一滤渣中加入水，调节pH至8～12于室温二次提取0.5～2h，过滤，得第二滤渣和第二滤液，将第二滤渣弃去；
(d)在脱脂紫苏籽粕B中加入步骤(b)得到的第一滤液，调节pH至8～12于室温一次提取0.5～2h，过滤，得第三滤渣和第三滤液；
(e)在第三滤渣中加入水，调节pH至8～12于室温二次提取0.5～2h，过滤，得第四滤渣和第四滤液，将第四滤渣弃去；
(f)在脱脂紫苏籽粕C中加入步骤(c)得到的第二滤液，调节pH至8～12于室温一次提取0.5～2h，过滤，得第五滤渣和第五滤液；
(g)在第五滤渣中加入第四滤液，调节pH至8～12于室温二次提取0.5～2h，过滤，得第六滤渣和第六滤液，将第六滤渣弃去；
(h)合并第三滤液、第五滤液和第六滤液，调节pH为3～5，静置0.5～2h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积比为1:(10～30)的水，搅拌均匀，得到紫苏籽蛋白液。
本发明优选高效逆流提取法蛋白质，相比普通的碱提酸沉法，蛋白质的提取率提高了10wt％以上，同时减少了用水量，节约生产成本。
作为优选，步骤(b)中，水与脱脂紫苏籽粕A的重量比为1：(5～15)。
作为优选，步骤(3)中，所述的酶解所用的生物酶可以为中性蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、酸性蛋白酶、胃蛋白酶(酶活力≥50万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)、无花果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)、罗汉果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)中的一种或几种。
本发明使用的蛋白酶均为食用酶，并且来源广泛、成本低、添加量少。
作为优选，步骤(4)中，所述微滤膜的孔径为0.1～0.5μm。
本发明仅用孔径为0.1～0.5μm微滤膜进行处理，没有再使用超滤膜再次纯化，所得的紫苏籽肽粉，其分子量低，含量高，水溶性好，其水溶液澄清无杂质，此外，微滤膜比超滤膜孔径大很多，生产耗时短，更加适合大规模生产。
一种如上述任一所述的紫苏籽肽粉在制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的应用。
因此，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明的制备方法操作简单，提取率高，生产耗时短，更加适合大规模生产；
(2)采用本发明的制备方法制得的紫苏籽肽粉具有高纯度、低分子量的特点，水溶性好，其水溶液澄清无杂质，具有较高的生物效价和营养价值，可应用于预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的制备。
附图说明
图1是高效逆流提取法提取蛋白质的流程示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。
实施例1
(1)将紫苏籽冷榨脱脂，得到脱脂紫苏籽粕；
(2)参照图1，采用高效逆流提取法提取蛋白质：
(a)将脱脂紫苏籽粕分为等质量的三份，每份100Kg，分别记为脱脂紫苏籽粕A，脱脂紫苏籽粕B和脱脂紫苏籽粕C；
(b)在脱脂紫苏籽粕A中加入1000L水，调节pH至8.0～8.5于室温一次提取0.5h，过滤，得第一滤渣和第一滤液；
(c)在第一滤渣中加入水，调节pH至8.0～8.5于室温一次提取0.5h，过滤，得第二滤渣和第二滤液，将第二滤渣弃去；
(d)在脱脂紫苏籽粕B中加入步骤(b)得到的第一滤液，调节pH至8～12于室温一次提取0.5h，过滤，得第三滤渣和第三滤液；
(e)在第三滤渣中加入水，调节pH至8.0～8.5于室温一次提取0.5h，过滤，得第四滤渣和第四滤液，将第四滤渣弃去；
(f)在脱脂紫苏籽粕C中加入步骤(c)得到的第二滤液，调节pH至8.0～8.5于室温一次提取0.5h，过滤，得第五滤渣和第五滤液；
(g)在第五滤渣中加入第四滤液，调节pH至8～12于室温一次提取0.5h，过滤，得第六滤渣和第六滤液，将第六滤渣弃去；
(h)合并第三滤液、第五滤液和第六滤液，调节pH为4.0～4.5，静置0.5h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入3000L的水，搅拌均匀，得到紫苏籽蛋白液；
(3)将紫苏籽蛋白液加热至45℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解3h后，煮沸灭活2min，得到蛋白酶解液；
(4)将蛋白酶解液使用孔径为0.1μm的微滤膜处理后，在80℃下浓缩至固含为4wt％时，喷雾干燥，进口温度为150℃，出口温度为55℃，得到27.5kg紫苏籽肽粉，产率27.5wt％。采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为86.4％，小于500Dalton分子量占82.1％。
实施例2
(1)将紫苏籽使用超临界萃取脱脂，得到脱脂紫苏籽粕；
(2)将100kg紫苏籽粕，记录为A，与1500L的水混合，调节pH至9.5～10.0于室温提取1h；提取完成后，过滤，滤渣进行二次提取，滤液倒入等量的紫苏籽粕，记录为B，调节pH至9.5～10.0于室温提取1h；B完成第一次提取后，滤液待用，滤渣继续进行第二次提取；A完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入等量的紫苏籽粕，记录为C，调节pH至9.5～10.0于室温提取1h；B完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入C完成第一次提取的滤渣中提取1h，而C第一次提取的滤液待用；样品C完成第二次提取后，滤渣弃去，滤液待用；最后合并以上待用滤液，调节pH为3.0～3.5，静置1h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积为3000L的水，搅拌均匀，得到紫苏籽蛋白液；
(3)将紫苏籽蛋白液加热至50℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级木瓜蛋白酶(酶活力为40万u/g)，搅拌酶解3h后，煮沸灭活2min，得到蛋白酶解液；
(4)将蛋白酶解液使用孔径为10μm的微滤膜处理后，在50℃下浓缩至固含为3wt％时，冷冻干燥得到25.6kg紫苏籽肽粉，产率25.6wt％。采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为87.0％，小于500Dalton分子量占80.8％。
实施例3
(1)将紫苏籽冷榨脱脂，得到脱脂紫苏籽粕；
(2)将100kg紫苏籽粕，记录为A，与500L的水混合，调节pH至8.0～8.5于室温提取1h；提取完成后，过滤，滤渣进行二次提取，滤液倒入等量的紫苏籽粕，记录为B，调节pH至8.0～8.5于室温提取1h；B完成第一次提取后，滤液待用，滤渣继续进行第二次提取；A完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入等量的紫苏籽粕，记录为C，调节pH至8.0～8.5于室温提取1h；B完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入C完成第一次提取的滤渣中提取1h，而C第一次提取的滤液待用；样品C完成第二次提取后，滤渣弃去，滤液待用；最后合并以上待用滤液，调节pH为3.5～4.0，静置1h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积为2000L的水，搅拌均匀，得到紫苏籽蛋白液；
(3)将紫苏籽蛋白液加热至55℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级菠萝蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解4h后，煮沸灭活5min，得到蛋白酶解液；
(4)将蛋白酶解液使用孔径为5μm的微滤膜处理后，在60℃下浓缩至固含为5wt％时，冷冻干燥得到26.4kg紫苏籽肽粉，产率26.4wt％。采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为88.2％，小于500Dalton分子量占81.7％。
生物活性检测：
1.DPPH自由基清除实验：
1.1DPPH乙醇溶液的配制：精密称取DPPH 4mg，置于100mL棕色容量瓶中，加入50mL乙醇，超声30s，用乙醇定容至刻度，摇匀，待用。本品须现配现用。
1.2供试品溶液的配制：配制合适浓度的紫苏籽肽溶液，待用。
1.3操作步骤：准确吸取2mL供试品溶液和2mL DPPH溶液混合均匀；准确吸取2mL供试品溶液和2mL乙醇混合均匀；准确吸取2mL DPPH溶液和2mL乙醇混合均匀，室温放置30min，在515nm波长处测定吸光度，并根据以下计算公式计算自由基清除率：IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和DPPH混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示DPPH和溶剂混合后溶液的吸光度。
2.ABTS+自由基清除实验：
2.1PBS缓冲液的配制：称取氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.24g，十二水合磷酸氢二钠3.62g，置于1000mL烧杯中，加入800mL蒸馏水，搅怑使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.4，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。
2.2ABTS+贮存溶液的配制：精密称取ABTS+78mg左右，置于20mL棕色容量瓶中，加入15mL蒸馏水，超声5min，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精密称取过硫酸钾76mg左右，置于2mL棕色容量瓶中，加入1mL蒸馏水，超声使其溶解，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确吸取352μL过硫酸钾溶液加入至ABTS溶液中，摇匀，静置过夜。
2.3ABTS+工作溶液的配制：精确吸取贮存溶液1mL，加入65mL左右PBS缓冲液，摇匀。
2.4供试品溶液的配制：配制合适浓度的紫苏肽溶液。
2.5操作步骤：准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL ABTS工作溶液混合均匀；准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL PBS缓冲液混合均匀；准确吸取5mL ABTS工作溶液和0.5mL PBS缓冲液混合均匀，立即在734nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和ABTS混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示ABTS和溶剂混合后溶液的吸光度。
3.SRSA超氧阴离子自由基清除实验：
3.1 0.1moL/L PBS缓冲液(pH7.4)的配制：称取氯化钠80g，氯化钾2g，磷酸二氢钾2.4g，三水合磷酸氢二钾23.1g，置于1000mL烧杯中，加入600mL蒸馏水，搅怑使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.2，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。
3.2 150μmoL/L NBT溶液的配制：准确称取NBT 12.5mg置于100mL棕色容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
3.3 60μmoL/L PMS溶液的配制：准确称取PMS 18.8mg，置于1000mL的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
3.4 468μmoL/L NADH溶液的配制：准确称取NADH 33.9mg，置于100mL的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
3.5供试品溶液的配制：配制合适浓度的紫苏肽溶液。
3.6工作液的配制：取1mL 0.1moL/L PBS缓冲液(pH7.4)于容量瓶中，加入1mL 150μmoL/L NBT溶液，加入2mL 468μmoL/L NADH溶液，加入1mL 60μmoL/L PMS溶液，搅拌均匀，25℃下反应5min，与560nm波长处测定其吸光度值。
3.7操作步骤：准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL上述工作溶液混合均匀；准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL蒸馏水混合均匀；准确吸取5mL上述工作溶液和0.5mL蒸馏水混合均匀，立即在560nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和SRSA混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示SRSA和溶剂混合后溶液的吸光度。
分别配制制备实施例1-3中的紫苏肽产品浓度为0.5mg/mL和1mg/mL，没食子酸为阳性对照，测试结果如表1所示：
表1.紫苏多肽粉抗氧化活性测试结果
由表1可知，不同生物酶酶解所得的紫苏多肽均有较好的抗氧化活性，可见所需生物酶的种类不同对产品的活性影响不大。由此可知，紫苏多肽是具有开发潜力的新资源食品和药品，因此紫苏多肽有可能防止人体中细胞老化、改善记忆力、延缓衰老、保护心血管、防止老年痴呆等作用，更深层的生物活性正在研究之中。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (10)
1.一种紫苏籽肽粉，其特征在于，所述紫苏籽肽粉含有紫苏籽肽，所述紫苏籽肽的含量在85wt%以上；其中，80%以上紫苏籽肽的分子量小于500 Dalton。
2.根据权利要求1所述的一种紫苏籽肽粉，其特征在于，所述紫苏籽肽的分子量Dalton分布如下：
< 5%紫苏籽肽的分子量> 1000 Dalton；
5 ~ 10%紫苏籽肽的分子量1000 ~ 500 Dalton；
45 ~ 55%紫苏籽肽的分子量500 ~ 200 Dalton；
<30%紫苏籽肽的分子量＜200 Dalton；
所述紫苏籽肽的数均分子量17~463，重均分子量30 ~ 484。
3.根据权利要求1所述的一种紫苏籽肽粉，其特征在于，所述紫苏籽肽粉的制备原料为唇形科紫苏属植物紫苏的种子。
4.一种如权利要求1-3任一所述的紫苏籽肽粉的制备方法，其特征在于，将紫苏籽脱脂，依次经过蛋白质提取、酶解、分离纯化、浓缩和干燥后，得到紫苏籽肽粉。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将紫苏籽脱脂，得到脱脂紫苏籽粕；
（2）在脱脂紫苏籽粕中加入水，调节pH至8~12于室温提取，弃去滤渣，得到紫苏籽蛋白液；
（3）将紫苏籽蛋白液加热至35~60℃，将pH值调节至2~10，加入至少紫苏籽粕重量的0.1wt%以上的生物酶，搅拌酶解至少3 h后，煮沸灭活至少2 min，得到蛋白酶解液；
（4）将蛋白酶解液使用微滤膜处理，在40~80℃下浓缩至固含为3~5wt%时，干燥得到紫苏籽肽粉。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，采用高效逆流提取法提取蛋白质，包括以下步骤：
（a）将脱脂紫苏籽粕分为等质量的三份，记为脱脂紫苏籽粕A，脱脂紫苏籽粕B和脱脂紫苏籽粕C；
（b）在脱脂紫苏籽粕A中加入水，调节pH至8~12于室温一次提取0.5~2 h，过滤，得第一滤渣和第一滤液；
（c）在第一滤渣中加入水，调节pH至8~12于室温二次提取0.5~2 h，过滤，得第二滤渣和第二滤液，将第二滤渣弃去；
（d）在脱脂紫苏籽粕B中加入步骤（b）得到的第一滤液，调节pH至8~12于室温一次提取0.5~2 h，过滤，得第三滤渣和第三滤液；
（e）在第三滤渣中加入水，调节pH至8~12于室温二次提取0.5~2 h，过滤，得第四滤渣和第四滤液，将第四滤渣弃去；
（f）在脱脂紫苏籽粕C中加入步骤（c）得到的第二滤液，调节pH至8~12于室温一次提取0.5~2 h，过滤，得第五滤渣和第五滤液；
（g）在第五滤渣中加入第四滤液，调节pH至8~12于室温二次提取0.5~2 h，过滤，得第六滤渣和第六滤液，将第六滤渣弃去；
（h）合并第三滤液、第五滤液和第六滤液，调节pH为3~5，静置0.5~2 h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积比为1:（10~30）的水，搅拌均匀，得到紫苏籽蛋白液。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（b）中，水与脱脂紫苏籽粕A的重量比为1：（5~15）。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述生物酶选自中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶、无花果蛋白酶、罗汉果蛋白酶中的一种或几种。
9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述微滤膜的孔径为0.1~10 µm。
10.一种如权利要求1-3任一所述的紫苏籽肽粉在制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的应用。
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