CN112625923A - 类棘孢木霉及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一类棘孢木霉RR‑dl‑6‑11及其抗真菌的应用和类棘孢木霉RR‑dl‑6‑11粗提物及其抗微藻的应用。类棘孢木霉菌株RR‑dl‑6‑11，于2020年6月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.19914，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株是一株有潜力的抗病原真菌的木霉，可以减少化学药剂的使用，对农业生产和生态环境均具有良好的发展应用前景。

Description

类棘孢木霉及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一类棘孢木霉RR-dl-6-11及其抗真菌的应用和类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物及其抗微藻的应用。
背景技术
木霉是世界范围广泛分布的真菌，目前已知的木霉有300多种，其在土壤、水体、植物、植物残体和根际中普遍存在。木霉对多种病原真菌具有拮抗作用，其作用机制包括重寄生(平行重寄生、穿透重寄生和缠绕重寄生)、生产抗性分子、竞争营养和空间及诱导植物抗性等。重寄生作用过程是指对病原菌识别、接触、缠绕、穿透和寄生一系列连续步骤的复杂过程，最终导致寄主细胞畸变甚至溶解。现已知木霉菌至少对18个属29种植物病原真菌具有拮抗作用，木霉菌对多种植物病原真菌均有防治效果，如立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄孢属真菌(Botrytis spp.)、疫霉菌(Phytophthora spp.)、腐霉菌(Pythium spp.)、链格孢菌(Alternaria alternata)等。随着发展绿色农业新思想的提出，人们更加迫切地需要找到安全有效、环境友好型防治植物病害的措施，木霉菌作为一类广泛用于防治植物病害的生物真菌，可以有效防治多种植物病害。
近年来，赤潮危害频发，严重阻碍了渔业养殖和海洋经济发展。目前，对赤潮的防治对策主要还是施用化学药剂治理。虽然化学药剂起效快但对海洋生物和环境会造成二次伤害，因此找到高效遏制赤潮同时又对环境友好的解决方法成为人们日益迫切的需要。
由此可见，木霉菌作为生防菌株具有巨大的应用潜力，能够降低植物病害，减少化学污染，改良生态环境，对人类生产、生活和生态良好可持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一株具有广谱抗真菌性能的类棘孢木霉RR-dl-6-11及其抗真菌(镰刀菌属真菌、拟青霉属真菌、横梗霉属真菌、间座壳属真菌或篮状属真菌)的应用和类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物及其抗微藻的应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一株类棘孢木霉菌株，类棘孢木霉菌株RR-dl-6-11，于2020年6月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.19914，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
一种类棘孢木霉的应用，所述类棘孢木霉在作为抗真菌制剂中的应用。
所述真菌为层出镰刀菌(Fusariumproliferatun)、藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)、细拟青霉(Paecilomyces tenuis)、香港横梗霉(Lichtheimia hongkongensis)、间座壳属真菌(Diaporthe gulyae)或糙刺篮状菌(Talaromyces trachyspermus)。
一种类棘孢木霉的应用，所述类棘孢木霉在制备抗微藻制剂中的应用。
所述类棘孢木霉的发酵粗提物在制备抗海洋微藻制剂中的应用。
所述粗提物为
1)将类棘孢木霉(Trichoderma asperelloides)RR-dl-6-11菌株接种于PDA固体培养基中，在25℃活化5-7d，制得活化菌株；
2)将步骤1)制得的活化菌株接种至大米固体培养基中，在25℃的条件下发酵培养30d；
3)用适量的乙酸乙酯灭菌48h，菌丝晾干后粉碎，用二氯甲烷：甲醇(1:1，v/v)萃取，40℃减压蒸馏得到粗提物。
所述步骤2)中大米固体培养基的组分如下：大米50g/瓶，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，酵母5g/L，溴化钙0.3g/L，味精3g/L，海水500ml/L，pH值7.0～8.0。
所述海洋微藻为赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)、强壮前沟藻(Amphidiniumcarterae)、东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)或海洋卡盾藻(Chattonellamarina)。
一种抑制海洋微藻制剂，抑制剂含所述菌株。
所述抑制剂含所述菌株发酵粗提物。
所述粗提物为
1)将类棘孢木霉(Trichoderma asperelloides)RR-dl-6-11菌株接种于PDA固体培养基中，在25℃活化5-7d，制得活化菌株；
2)将步骤1)制得的活化菌株接种至大米固体培养基中，在25℃的条件下发酵培养30d；
3)用适量的乙酸乙酯灭菌48h，菌丝晾干后粉碎，用二氯甲烷：甲醇(1:1，v/v)萃取，40℃减压蒸馏得到粗提物。
所述步骤2)中大米固体培养基的组分如下：大米50g/瓶，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，酵母5g/L，溴化钙0.3g/L，味精3g/L，海水500ml/L，pH值7.0～8.0。
本发明具有以下优点：
本发明提供一株分离于海洋松节藻藻栖类棘孢木霉RR-dl-6-11，该木霉对多种真菌(镰刀菌属真菌、拟青霉属真菌、横梗霉属真菌、间座壳属真菌或篮状属真菌)具有显著的抑制作用，均有重寄生的现象；同时本发明所提供的上述木霉的粗提物对能引起赤潮的赤潮异弯藻、强壮前沟藻、东海原甲藻和海洋卡盾藻的半数抑制浓度分别为2.4、3.9、8.8和2.1微克/毫升，可见本发明菌株是一株有潜力的抗病原真菌的木霉，可以减少化学药剂的使用，对农业生产和生态环境均具有良好的发展应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11的菌落图；
图2为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11的分生孢子图；
图3为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制层出镰刀菌RL-YLW-2-8生长的对照图；其中，图左为纯镰刀菌平板，图右为对峙平板；
图4为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制藤仓镰刀菌4.①.1F生长的对照图；其中，图左为纯镰刀菌平板，图右为对峙平板；
图5为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制细拟青霉菌RR-dl-2-7生长的对照图；其中，图左为纯拟青霉菌平板，图右为对峙平板；
图6为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制香港横梗霉菌C.2.1N生长的对照图；其中，图左为纯横梗霉菌平板，图右为对峙平板；
图7为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制间座壳属真菌6.Ⅱ.1N生长的对照图；其中，图左为纯间座壳属真菌平板，图右为对峙平板；
图8为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11抑制糙刺篮状菌C.1.2N生长的对照图；其中，图左为纯篮状菌平板，图右为对峙平板；
图9为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11与层出镰刀菌RL-YLW-2-8菌丝的重寄生显微图；图片摄于10×40倍倒置显微镜下；从左到右依次为平行重寄生、穿透重寄生和缠绕重寄生；
图10为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11与藤仓镰刀菌4.①.1F菌丝的重寄生显微图；图片摄于10×40倍倒置显微镜下；
图11为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11与香港横梗霉菌C.2.1N菌丝的重寄生显微图；图片摄于10×40倍倒置显微镜下；从左到右依次为平行重寄生、穿透重寄生和缠绕重寄生；
图12为本发明实施例提供的类棘孢木霉RR-dl-6-11与间座壳属真菌6.Ⅱ.1N菌丝的重寄生显微图；图片摄于10×40倍倒置显微镜下；从左到右依次为平行重寄生、穿透重寄生和缠绕重寄生。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
实施例1
一株类棘孢木霉Trichoderma asperelloides RR-dl-6-11，已于2020年6月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.19914。所述类棘孢木霉RR-dl-6-11从大连海域采集的松节藻内部组织中分离得到，其菌落在PDA培养基上形态如图1所示，在PDA培养基上，25℃培养3天半径约44mm。菌落圆形，放射状，气生菌丝发达，絮状；分生孢子2天后产生于接种点附近气生菌丝上，逐渐向远端扩展。在CMD培养基上，25℃培养3天半径约55mm。菌落圆形，边缘整齐，半透明，气生菌丝呈絮状，初期白色，逐渐变绿；分生孢子2天后产生于菌落边缘气生菌丝上，形成产孢簇。在SNA培养基上，25℃培养3天半径约39mm。菌落圆形，透明，气生菌丝少；分生孢子2天后产生于菌落边缘气生菌丝及产孢簇内，产孢簇球形，0.3–1mm，初期白色，逐渐变绿；分生孢子梗trichoderma-like，具明显主轴；瓶梗单生或2–4轮生，安瓿瓶形或烧瓶形，5.0–16×2.0–4.2μm，长宽比(1.8–)2.1–5.6(–6.1)，基部宽1.0–2.5μm；分生孢子绿色，球形或近球形，表面平滑，2.8–4.8×2.5–3.5μm，长宽比1–1.3(–1.5)。类棘孢木霉RR-dl-6-11在以上三种培养基上均不产生色素和特殊气味，其分生孢子的显微图如图2所示。
本发明所述类棘孢木霉RR-dl-6-11的ITS(核糖体DNA内转录间隔区间)序列，如下所示：
TAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTT-ACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCA。
类棘孢木霉RR-dl-6-11的TEF1序列，如下所示：
AGGTAAGCTAATTTCACTGCTTTTCCCATCAATTTTTGGCACAATTATATGCCCGACAATTCTGTTCTCAGTTTTGTCTTTCTTTTTTCAGCATCACCCCGCTTTGCCAGCCTACCTACCCCTCCTTTGGCACAGCAAAAAATTTTCTCGCTGCCTTGTTTGGCTTTTAGTGGGGTGTCAATTTTGTTTGACGGCAACCCCACTATCGCCACTGTACCTCTTTCCATCATCCACCACATGCTTTTGTTCAATCGCATCGTCTATTTTCAATATCTCTTGTTCATTATGCTGATCATGCTTCAATCAATAGGAAGCCGCCGAACTCGGCAAGGGTTCCTTCAAGTATGCGTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGACATTGCCCTCTGGAAGTTCGAGACTCCCAAGTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTTTGGACACTTCAGTCGACATTGCAAGATCGTCATTCTAACATACTCTCCCCACAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCATCAAGAACATGATCACTGGTACCTCCCAGGCTGACTGCGCTATCCTGATTATCGCTGCCGGTACTGGTGAGTT
类棘孢木霉RR-dl-6-11的act序列，如下所示：
GTCCTGCTCACCGAGGCCCCTATCAACCCCAAGTCCAACCGTGAGAAGATGACCCAGATTGTCTTCGAGACCTTCAACGCTCCCGCTTTCTACGTCTCCATCCAGGCCGTTCTGTCCCTGTACGCCTCCGGTCGTACCACCGGTATCGTTCTTGACTCCGGTGACGGTGTTACCCACGTTGTCCCCATCTACGAGGGTTTCGCTCTTCCTCACGCCATTGCTCGTGTTGACATGGCTGGTCGTGATCTTACCGACTACCTGATGAAGATCCTGGCTGAGCGTGGTTACACTTTCTCCACCACCGCCGAGCGAGAAATCGTTCGTGATATCAAGGAGAAGCTCTGCTACGTCGCTCTCGACTTCGAGCAGGAGATCCAGACTGCTGCCCAGAGCTCCAGCTTGGAGAAGTCCTACGAGCTTCCCGACGGTCAGGTCATCACCATCGGCAACGAGCGATTCCGTGCTCCTGAGGCTCTGTTCCAGCCTTCTGTCCTTGGTCTTGAGAGCGGTGGTATCCACGTCACCACTTTCAACTCCATCATGAAGTGCGATGTCGACGTCCGAAAGGACCTGTACGGCAACATTGTCATGGTAAGTGAATTGAGCATTCAACAAACAGGCTCTAATAGCAGTGCTAATGATGTATTTCCCAATCTAGTCTGGTGGTACCACCATGTACCCCGGTCTCTCCGAC
根据菌株RR-dl-6-11的显微特征，分子实验所产生的ITS、TEF1和act序列结果，菌株RR-dl-6-11的鉴定结果为类棘孢木霉。
实施例2
类棘孢木霉RR-dl-6-11的抗真菌活性
方法：
1)纯培养的类棘孢木霉RR-dl-6-11采用PDA平板培养基，培养温度为25℃；所测真菌分别为层出镰刀菌RL-YLW-2-8/藤仓镰刀菌4.①.1F/细拟青霉菌RR-dl-2-7/香港横梗霉菌C.2.1N/间座壳属真菌6.Ⅱ.1N/糙刺篮状菌C.1.2N也分别用PDA培养基于25℃条件下培养。
2)具体抗真菌过程为：用打孔器从纯培养的类棘孢木霉RR-dl-6-11和所测不同真菌菌落边缘打出直径为5mm的圆形菌块，将木霉与各真菌分别倒置接种在同一PDA平板两边缘，相距5-6cm，设定3个重复，同时以只接种所测真菌菌落的平板为对照，培养温度设定为25℃。此外，为了便于取样观察，在两个接种块之间放置1-2个小盖玻片。由于木霉比所测菌株的生长更快，在接种所测真菌的48h后再接种类棘孢木霉RR-dl-6-11。
培养21d后，取两菌落接触处的小盖玻片在倒置显微镜下观察，两菌间是否存在重寄生关系(参见图3-12)。
结果：如图3-8所示，在对峙平板中，类棘孢木霉RR-dl-6-11生长迅速，能与所测真菌形成抑菌圈或其绿色的孢子覆盖于所测真菌上。如图9-12通过倒置显微镜观察两菌接触处的菌丝发现，类棘孢木霉RR-dl-6-11对所测真菌有重寄生作用，表现为菌丝平行重寄生、穿透重寄生和缠绕重寄生，在显微镜下观察可见类棘孢木霉RR-dl-6-11菌丝缠绕、附着在寄主菌丝上，寄主菌丝的形态改变，原生质浓缩、液泡化、萎陷而最终分解。
由上述可见本发明类棘孢木霉RR-dl-6-11具有显著的抗真菌活性；具体在PDA平板上接种了类棘孢木霉RR-dl-6-11和层出镰刀菌/藤仓镰刀菌/细拟青霉/香港横梗霉/间座壳属真菌/糙刺篮状菌，类棘孢木霉RR-dl-6-11生长迅速，能够抑制所测真菌的生长，在倒置显微镜下能看到，类棘孢木霉RR-dl-6-11对所测真菌有重寄生的现象；可见所述的类棘孢木霉RR-dl-6-11对多种真菌都有抑制活性，具有广谱的抗菌活性。
实施例3
类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物的制备方法
1)将类棘孢木霉(Trichoderma asperelloides)RR-dl-6-11菌株接种于PDA固体培养基中，在25℃活化5-7d，制得活化菌株；
2)将步骤1)制得的活化菌株切成小块接种至大米固体培养基中，在25℃的条件下发酵培养30d；
3)用适量的乙酸乙酯灭菌48h，菌丝晾干后粉碎，用二氯甲烷：甲醇(1:1，v/v)萃取，减压蒸馏得到粗提物。
所述的大米固体培养基成分为大米50g/瓶，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，酵母5g/L，溴化钙0.3g/L，味精3g/L，海水500ml/L，pH值7.0～8.0。
实施例4
类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物抑微藻活性实验：
具体为：活化供试微藻，取对数生长期的微藻，用已灭菌的f/2培养基，稀释上述培养至对数生长期的微藻，稀释至藻细胞浓度约为5×104个/毫升，取96孔板，每孔加195微升藻液为测试培养板。样品组和对照组各设三个平行，样品组加含浓度为20毫克/毫升的类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物的5微升二甲基亚砜(DMSO)溶液，空白对照组加5微升二甲基亚砜(DMSO)，阳性对照组加5微升浓度为20毫克/毫升的CuSO4溶液。培养温度20℃，光照强度2000Lux，光暗比14:10(小时)条件下，培养24小时。其中供试微藻为海洋卡盾藻、东海原甲藻、赤潮异弯藻或强壮前沟藻。
利用血球计数板，在显微镜下对各实验组中微藻进行计数；而后将上述抑制率大于50％的实验组，进一步计算其半数抑制浓度IC50值。将配置好的终浓度为20毫克/毫升的类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物的DMSO溶液依次经DMSO进行稀释，最终得到11组浓度依次降低的组分(2000、1000、500、200、100、50、20、10、5、2、1微克/毫升)。观察并计算各浓度梯度下化合物的微藻抑制率，取抑制率在0-100之间至少5个浓度梯度，计算IC50值。
实验结果：上述类棘孢木霉RR-dl-6-11粗提物对赤潮异弯藻、强壮前沟藻、东海原甲藻和海洋卡盾藻的半数抑制浓度分别为2.4微克/毫升、3.9微克/毫升、8.8微克/毫升和2.1微克/毫升，具有抑制赤潮异弯藻、强壮前沟藻、东海原甲藻和海洋卡盾藻的作用。
由上述可见，本发明类棘孢木霉RR-dl-6-11的粗提物对海洋微藻(赤潮异弯藻、强壮前沟藻、东海原甲藻和海洋卡盾藻)有显著的抑制活性。
序列表
<110> 中国科学院烟台海岸带研究所
<120> 类棘孢木霉及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 600
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
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<211> 608
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
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tctgttctca gttttgtctt tcttttttca gcatcacccc gctttgccag cctacctacc 120
cctcctttgg cacagcaaaa aattttctcg ctgccttgtt tggcttttag tggggtgtca 180
attttgtttg acggcaaccc cactatcgcc actgtacctc tttccatcat ccaccacatg 240
cttttgttca atcgcatcgt ctattttcaa tatctcttgt tcattatgct gatcatgctt 300
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gactcccaag tactatgtca ccgtcattgg tatgttttgg acacttcagt cgacattgca 480
agatcgtcat tctaacatac tctccccaca gacgctcccg gtcaccgtga tttcatcaag 540
aacatgatca ctggtacctc ccaggctgac tgcgctatcc tgattatcgc tgccggtact 600
ggtgagtt 608
<210> 3
<211> 694
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtcctgctca ccgaggcccc tatcaacccc aagtccaacc gtgagaagat gacccagatt 60
gtcttcgaga ccttcaacgc tcccgctttc tacgtctcca tccaggccgt tctgtccctg 120
tacgcctccg gtcgtaccac cggtatcgtt cttgactccg gtgacggtgt tacccacgtt 180
gtccccatct acgagggttt cgctcttcct cacgccattg ctcgtgttga catggctggt 240
cgtgatctta ccgactacct gatgaagatc ctggctgagc gtggttacac tttctccacc 300
accgccgagc gagaaatcgt tcgtgatatc aaggagaagc tctgctacgt cgctctcgac 360
ttcgagcagg agatccagac tgctgcccag agctccagct tggagaagtc ctacgagctt 420
cccgacggtc aggtcatcac catcggcaac gagcgattcc gtgctcctga ggctctgttc 480
cagccttctg tccttggtct tgagagcggt ggtatccacg tcaccacttt caactccatc 540
atgaagtgcg atgtcgacgt ccgaaaggac ctgtacggca acattgtcat ggtaagtgaa 600
ttgagcattc aacaaacagg ctctaatagc agtgctaatg atgtatttcc caatctagtc 660
tggtggtacc accatgtacc ccggtctctc cgac 694

Claims (10)

1.一株类棘孢木霉菌株，其特征在于：类棘孢木霉菌株RR-dl-6-11，于2020年6月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.19914，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种权利要求1所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述类棘孢木霉在作为抗真菌制剂中的应用。
3.按权利要求2所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述真菌为层出镰刀菌(Fusariumproliferatun)、藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)、细拟青霉(Paecilomyces tenuis)、香港横梗霉(Lichtheimia hongkongensis)、间座壳属真菌(Diaporthe gulyae)或糙刺篮状菌(Talaromyces trachyspermus)。
4.一种权利要求1所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述类棘孢木霉在制备抗微藻制剂中的应用。
5.按权利要求4所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述类棘孢木霉的发酵粗提物在制备抗海洋微藻制剂中的应用。
6.按权利要求4所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述粗提物为
1)将类棘孢木霉(Trichoderma asperelloides)RR-dl-6-11菌株接种于PDA固体培养基中，在25℃活化5-7d，制得活化菌株；
2)将步骤1)制得的活化菌株接种至大米固体培养基中，在25℃的条件下发酵培养30d；
3)用适量的乙酸乙酯灭菌48h，菌丝晾干后粉碎，用二氯甲烷：甲醇(1:1，v/v)萃取，40℃减压蒸馏得到粗提物。
7.按权利要求4-6任意一项所述的类棘孢木霉的应用，其特征在于：所述海洋微藻为赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)、强壮前沟藻(Amphidinium carterae)、东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)或海洋卡盾藻(Chattonella marina)。
8.一种抑制海洋微藻制剂，其特征在于：抑制剂含权利要求1所述菌株。
9.按权利要求8所述的抑制海洋微藻制剂，其特征在于：抑制剂含权利要求1所述菌株发酵粗提物。
10.按权利要求8所述的抑制海洋微藻制剂，其特征在于：所述粗提物为
1)将类棘孢木霉(Trichoderma asperelloides)RR-dl-6-11菌株接种于PDA固体培养基中，在25℃活化5-7d，制得活化菌株；
2)将步骤1)制得的活化菌株接种至大米固体培养基中，在25℃的条件下发酵培养30d；
3)用适量的乙酸乙酯灭菌48h，菌丝晾干后粉碎，用二氯甲烷：甲醇(1:1，v/v)萃取，40℃减压蒸馏得到粗提物。
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