CN112602535B - 一种赤灵芝栽培培养基及栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种赤灵芝栽培培养基及栽培方法。该培养基由柚皮粉，柚子叶粉、椴木屑和无机盐组成，本发明以柚皮与柚子叶替代部分椴木屑的方式进行培养基改良，减少了对椴木的需求和依赖，且促进了柚皮与柚子叶的再利用；柚皮与柚子叶中富含的多糖、维生素及矿物质，为灵芝生长提供丰富营养，与高温真空干燥处理相比，经冷冻干燥处理的柚皮及柚子叶能明显提高灵芝中活性物质含量。赤灵芝培养过程中使用姜黄素锌固体分散体可有效抑制绿霉、青霉、毛霉生长，避免因农药的使用对赤灵芝品质造成影响。经本发明所述方法培育的赤灵芝品质大大提高，赤灵芝中灵芝多糖、灵芝孢子油以及灵芝三萜等活性成分的含量明显增加，方法简单，健康环保，适于推广。

Description

一种赤灵芝栽培培养基及栽培方法

技术领域

本发明属于栽培技术领域，更具体地，涉及一种赤灵芝栽培培养基及赤灵芝栽培过程中的病害防治方法。

背景技术

赤灵芝(G.lucidumkarst)，又称丹芝、红芝，系灵芝科灵芝属真菌。野生赤灵芝主要分布于天然林和天然次生阔叶林内，习生于高山潮湿沟溪旁的枯朽阔叶树上，常与树皮上的苔藓伴生。研究表明，赤灵芝子实体内的灵芝孢子粉富含药用价值较高的灵芝活性多糖，可提高人体免疫力，具有抗肿瘤、抗氧化、安神等众多保健功效，是辅助治疗心脑疾病和癌症的重要中药之一。随着人们对灵芝保健作用的深入了解，市场对灵芝孢子粉的需求不断扩大，对灵芝孢子粉质量的要求也不断提高。

在大别山种植赤灵芝，灵芝菌棒移栽出菇期容易受到绿霉、青霉、毛霉的侵扰，不仅影响赤灵芝菌丝生长发育，而且能直接从寄主菌丝体内吸取养分，破坏正常新陈代谢活动，影响赤灵芝的品质，同时降低赤灵芝成活率，需要采用农药进行病害的防治，但农药会影响赤灵芝及孢子粉的品质。

此外，大别山区赤灵芝栽培主要以椴木为主，栽培时忌用油脂类较多的松木和香气较多的木材，以壳斗科、桦木科等阔叶树种为好，每年栽培中需要砍伐大量木材作为基质进行接种前处理，这样培养赤灵芝的方法与当地林业部门的封山育林政策发生了冲突，如果想扩大栽培面积，就必须砍伐大量的木材，但林业部门许可每年砍伐木材的数量是有限的，难以满足扩大赤灵芝栽培的需要。

因此对赤灵芝的栽培培养基进行改良，减小其栽培过程中对木材的需求，并建立一种能有效防治病害但不影响赤灵芝品质的栽培方法对赤灵芝的栽培有重要意义。中国专利CN105924304A公开了一种灵芝栽培料及其制备方法，含有板栗壳、甘蔗渣、干柚子皮等成分，但该栽培料采用干柚皮，经过高温灭菌，柚皮中的挥发性精油、柚皮素等活性物质受到很大降解，影响其对灵芝的培养效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为克服赤灵芝栽培过程中对椴木等阔叶树种需求大且农药防治病害方法影响灵芝品质的问题。

本发明的第一个目的在于提供一种改良赤灵芝栽培培养基。

本发明的第二个目的在于提供一种赤灵芝栽培方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种赤灵芝栽培培养基，由柚皮粉，柚子叶粉、椴木屑和无机盐组成。

本发明对原有的赤灵芝栽培培养基进行改良，通过在椴木屑中添加柚皮粉与柚子叶粉作为赤灵芝栽培培养基，在减少椴木用量的还可提高赤灵芝中活性物质含量，同时促进了柚皮与柚子叶的再利用，且柚子叶中所含黄酮类化合物可帮助减少赤灵芝栽培过程中细菌的侵扰。柚皮及柚子叶富含挥发性精油、柚皮素、多糖、维生素、矿物质等营养成分，采用冷冻干燥方法，使柚皮及柚子叶最大限度保留其活性成分，可为灵芝生长提供丰富的营养物质，提高灵芝中活性物质含量。无机盐可为赤灵芝生长提供矿物质，尤其是钙离子，其影响灵芝产物代谢。

优选地，所述培养基中柚皮粉质量百分含量为10％～30％，柚子叶粉的质量百分含量为15％～40％，椴木屑的质量百分比为25％～60％，无机盐的质量百分比为2％～10％。

优选地，所述无机盐为石膏粉和/或碳酸钙。

进一步优选地，所述培养基由以下质量百分比的各组分组成：椴木屑25％～60％，柚皮叶粉10％～30％，柚子叶粉15％～40％，石膏粉1％～5％，碳酸钙1％～5％。

更优选地，所述柚皮粉和柚子叶粉由新鲜柚皮与柚子叶经-45℃冷冻干燥后再粉碎得到。同时，柚皮与柚子叶经过冷冻干燥保留了柚皮与柚子叶中纤维素酶活性及挥发性香精、柚皮素等活性物质，有益于进一步提高灵芝中活性物质含量。

一种赤灵芝栽培方法，在上述任一所述的赤灵芝栽培培养基上进行培养，分别在赤灵芝子实体生长的原基期、开伞期和成熟期喷洒姜黄素锌溶液，以防病害发生。

姜黄素锌溶液能够有效抑制绿霉、青霉、毛霉的生长，可避免农药对灵芝品质造成影响。所述姜黄素锌为姜黄素与醋酸锌络合形成的化合物(CN101205234A)，姜黄素锌络合物具有抗氧化、抗胃溃疡等药理活性。

优选地，所述培养为袋装培养。

优选地，所述姜黄素锌溶液为姜黄素锌固体分散体，其中姜黄素锌的含量范围为10mg/L～1000mg/L。所述姜黄素锌固体分散体，是以姜黄素锌化合物溶液中添加辅料PVP-K30增加姜黄素锌的水溶性。

进一步优选地，所述姜黄素锌的含量范围为10mg/L～1000mg/L。

进一步优选地，所述姜黄素锌的含量范围为30mg/L～700mg/L。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过添加柚皮粉与柚子叶粉改良原有的赤灵芝培养基，既减少了椴木的使用，也促进了柚皮与柚子叶的再利用，健康环保，柚皮与柚子叶还有助于提高赤灵芝中灵芝多糖、灵芝孢子油以及灵芝三萜等活性成分的含量；同时，在赤灵芝培养过程中搭配使用姜黄素锌固体分散体可有效抑制绿霉、青霉、毛霉生长，避免农药的使用对赤灵芝品质造成影响，本发明所述赤灵芝培养基及栽培方法的使用效果好，操作简便，利于推广。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1赤灵芝的栽培及灵芝孢子粉活性物质测定

原有赤灵芝栽培培养基配方：椴木屑76％，麸皮16％，玉米粉5％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％；

改良赤灵芝栽培培养基配方I：椴木屑42％，柚皮30％，柚子叶25％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％，其中柚皮及柚叶分别经过56℃真空干燥后粉碎，按比例加入培养基中。

改良赤灵芝栽培培养基配方II：椴木屑42％，柚皮30％，柚子叶25％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％，其中柚皮及柚叶分别经过-45℃冷冻干燥后粉碎，按比例加入培养基中。

培养基的制备方法及灭菌过程按照常规灵芝培养基的培养方法(代彦满等，赤灵芝菌种培养基的比较与筛选，西北林业学院学报，2019,34(4):162-165.)加以改良，区别在于椴木屑经过高压灭菌冷却后，与柚皮、柚子叶、石膏粉、碳酸钙按比例混合，然后接入赤灵芝菌种培养。

姜黄素锌溶液的配制：按照CN101205234A公开的方法，姜黄素锌化合物与聚乙烯吡咯烷酮K30的质量比为1∶8，将姜黄素和乙酸溶于有机溶剂，在氮气保护下，将含有乙酸锌的有机溶液滴加到含有姜黄素的有机溶液中，搅拌回流，冷却过滤，收集沉淀物，洗涤，沉淀物加入PVP-K30混合溶解于无水乙醇中，通氮气保护，均质，过滤，滤液喷雾干燥即可得到姜黄素锌化合物固体分散体。姜黄素锌溶液的配制方式采用水溶液配置，浓度为400mg/L。

赤灵芝菌采用袋装培养的方式，在改良培养基中培养，分别在赤灵芝子实体生长的原基期、开伞期和成熟期喷洒姜黄素锌溶液(含姜黄素锌400mg/L)，以防病害发生。

分别随机采集8个菌包的赤灵芝孢子粉，分别测定赤灵芝孢子粉中总多糖、灵芝孢子油以及灵芝三萜类含量。

赤灵芝孢子粉总多糖的提取：称取20g干燥的破壁赤灵芝孢子粉，90℃热水煮提3h，过滤，重复3次，合并滤液，经90℃水浴浓缩至总体积约50mL，冷却至室温后，加入3倍体积乙醇沉淀其中多糖成分，静置过夜后，3800r/min离心10min收集沉淀，沉淀用无水乙醇、乙醚洗涤，抽真空干燥得总多糖。计算总多糖与原赤灵芝孢子粉的干重比例。

赤灵芝孢子油提取：采用索氏提取法提取赤灵芝孢子油，准确称取5.0g干燥的破壁赤灵芝孢子粉于滤纸筒中；用已经干燥至恒质量的抽提瓶(已记录其质量)中倒入约2/3石油醚，使其能浸没滤纸筒，在萃取温度60℃条件下，萃取时间为4h得到石油醚萃取液，减压蒸馏后得到赤灵芝孢子油，测定赤灵芝孢子油总量与破壁赤灵芝孢子粉重量比值为赤灵芝孢子油百分含量。

总三萜类物质测定：热水提取过的赤灵芝孢子粉，干燥后称取10.0g，装入已经干燥至恒质量的抽提瓶(称取其质量)中，加入无水乙醇120mL，乙醇回流提取1.5小时，过滤后收集滤液，滤渣再加入无水乙醇120mL，乙醇回流提取1.5小时，过滤后合并2次滤液，减压干燥，称取干燥后固体重量，计算该重量与赤灵芝孢子粉(10.0g)比值为总三萜类物质百分含量。检测结果见表1。

表1柚皮及柚子叶对赤灵芝孢子粉活性物质的影响

与原有培养基相比较，^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001；

与改良培养基I比较，^#P<0.05.

从检测结果可知，改良后培养基I及培养基II培养获得的赤灵芝孢子粉中的总多糖、灵芝孢子油、三萜类物质含量显著高于原有培养基培养获得的赤灵芝孢子粉中的总多糖、灵芝孢子油、三萜类物质含量，提示赤灵芝培养基中添加柚皮及柚叶能够有效提高灵芝孢子粉中的总多糖、灵芝孢子油、三萜类物质含量。且经过-45℃冷冻干燥处理柚皮及柚叶处理的培养基培养获得灵芝孢子粉中的总多糖、灵芝孢子油、三萜类物质含量显著高于54℃真空干燥处理的培养基培养获得灵芝孢子粉中的总多糖、灵芝孢子油、三萜类物质含量，提示冷冻干燥后获得柚皮及柚叶比54℃真空干燥处理的柚皮及柚叶具有更好的提升灵芝品质的效果。

实施例2赤灵芝的栽培及灵芝孢子粉活性物质测定

原有赤灵芝栽培培养基配方：椴木屑76％，麸皮16％，玉米粉5％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％；

改良赤灵芝栽培培养基配方II：椴木屑25％，柚皮32％，柚子叶40％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％，其中柚皮及柚叶分别经过-45℃冷冻干燥后粉碎，按比例加入培养基中。

表2柚皮及柚子叶对赤灵芝孢子粉活性物质的影响

与原有培养基相比较，^**P<0.01；

实施例3赤灵芝的栽培及灵芝孢子粉活性物质测定

原有赤灵芝栽培培养基配方：椴木屑76％，麸皮16％，玉米粉5％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％；

改良赤灵芝栽培培养基配方II：椴木屑56％，柚皮10％，柚子叶30％，石膏粉2％，碳酸钙2％，其中柚皮及柚叶分别经过-45℃冷冻干燥后粉碎，按比例加入培养基中。

表3柚皮及柚子叶对赤灵芝孢子粉活性物质的影响

与原有培养基相比较，^*P<0.01；

实施例4赤灵芝的栽培及灵芝孢子粉活性物质测定

原有赤灵芝栽培培养基配方：椴木屑76％，麸皮16％，玉米粉5％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％；

改良赤灵芝栽培培养基配方II：椴木屑60％，柚皮25％，柚子叶12％，石膏粉1.5％，碳酸钙1.5％，其中柚皮及柚叶分别经过-45℃冷冻干燥后粉碎，按比例加入培养基中。

表4柚皮及柚子叶对赤灵芝孢子粉活性物质的影响

与原有培养基相比较，^*P<0.01；

实施例5姜黄素锌固体分散体对绿霉、青霉、毛霉的抑制作用

采用马铃薯～葡萄糖～琼脂培养基：去皮粉碎马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨5g，水1000mL。120℃高压灭菌30min后，降温至45℃，分别加入姜黄素锌固体分散体(姜黄素锌与辅料PVP～K30质量比例为1:6)，摇匀至姜黄素锌终浓度分别为30mg/L、60mg/L、120mg/L、240mg/L、480mg/L，混匀后倒入灭菌的平皿中，分别接种绿霉、青霉、毛霉置于28℃恒温培养3d，观察细菌的生长情况。

表5姜黄素锌对绿霉、青霉、毛霉生长的影响

+++代表细菌生长良好，细菌分布占平皿面积50％～100％

++代表细菌生长一般，细菌分布占平皿面积25％～49％

+代表细菌生长受到抑制，细菌分布占平皿面积1％～24％

～代表细菌生长完全抑制，细菌分布占平皿面积0％

以上研究表明姜黄素锌(480mg/L)可有效抑制绿霉、青霉、毛霉生长。

实施例6姜黄素锌固体分散体对灵芝培养中绿霉、青霉、毛霉的抑制作用

赤灵芝菌采用袋装培养的方式，在改良培养基II中培养，分别在赤灵芝子实体生长的原基期、开伞期和成熟期喷洒姜黄素锌溶液(含姜黄素锌100、200、300、400mg/L)，每个菌袋喷洒20毫升，以未喷洒姜黄素锌溶液的菌袋作为对照，计算每100个菌袋出现绿霉、青霉、毛霉的百分率，计算500个菌袋。

表6姜黄素锌对灵芝中绿霉、青霉、毛霉出现的影响

与不使用姜黄素锌溶液的菌袋相比较，^***P<0.001；

在灵芝培养过程中，未喷洒姜黄素锌溶液的培养基袋料有近三分之一的培养基袋料出现绿霉、青霉或毛霉生长，喷洒姜黄素锌溶液的培养基袋料出现绿霉、青霉或毛霉生长百分率，随姜黄素锌溶液使用浓度的提高而明显降低，提示姜黄素锌能够抑制有害霉菌生长效果明显。实验观察过程中未发现喷洒姜黄素锌溶液对赤灵芝的生长状态和品质有明显影响。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.姜黄素锌化合物在防治绿霉、青霉、毛霉中的应用，其特征在于，所述姜黄素锌化合物的结构式如式（I）所示：

式（I）。