CN112592932B - 一种植物育性相关蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物育性相关蛋白及其应用。本发明保护通过降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量得到雄性不育植物的方法。本发明还保护通过沉默或抑制目的植物中GmMS1基因的表达或敲除GmMS1基因得到雄性不育植物的方法。本发明对于植物育性研究及不育植物的育种有重要意义。

Description

一种植物育性相关蛋白及其应用

技术领域

本发明涉及大豆分子遗传育种领域，具体涉及一种植物育性相关蛋白及其应用。

背景技术

大豆是世界上最为重要的油料作物和高蛋白粮食作物。在我国，大豆是四大粮食作物之一，对保证国家粮食安全、改善城乡人民生活和增加农民收入有十分重要的作用。

大豆是典型的短日照作物，单个品种的适种范围大都在1-1.5个纬度之间，不同纬度地区间引种会因日照长度的变化导致开花时间、成熟期提前或延迟，造成产量下降甚至颗粒无收。同时，我国地域范围大，生态类型多，育种水平不均衡，迫切需要加强优异种质资源的交流应用，提升大豆育种的整体水平，提高我国大豆单产水平。

大豆是典型自花授粉作物，花朵小、去雄难，不利于传统的人工杂交工作的开展。这严重限制了大豆种质资源的挖掘利用，严重限制了优异基因位点的聚合利用。基于大豆雄性不育突变体的大豆轮回群体选择技术，可以有效拓宽大豆种质资源的遗传基础，具有广泛的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物育性相关蛋白及其应用。

第一方面，本发明保护一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量，得到雄性不育植物；

所述GmMS1蛋白是如下(A1)或(A2)或(A3)：

(A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(A2)来源于大豆且与(A1)具有98％以上同一性且与植物雄性育性相关的蛋白质；

(A3)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的蛋白质。

上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

第二方面，本发明保护一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：沉默或抑制目的植物中GmMS1基因的表达或敲除GmMS1基因，得到雄性不育植物：

所述GmMS1基因是如下任一所述的DNA分子：

(B1)序列表的序列2所示的DNA分子；

(B2)序列表的序列7所示的DNA分子；

(B3)在严格条件下与(B1)或(B2)限定的DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；

(B4)与(B1)或(B2)或(B3)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且具有相同功能的蛋白的DNA分子。

所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO₄和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

所述沉默或抑制目的植物中GmMS1基因的表达或敲除GmMS1基因，为突变目的植物中GmMS1基因使目的植物中GmMS1基因表达量降低或使目的植物中GmMS1基因发生功能缺失。

所述使目的植物中GmMS1基因表达量降低或使目的植物中GmMS1基因发生功能缺失是通过使目的植物中GmMS1基因发生突变；所述突变为缺失突变和/或插入突变和/或能够导致基因功能缺失的其他突变。

所述使目的植物基因组中GmMS1基因表达量降低或使目的植物基因组中GmMS1基因发生功能缺失是通过基因编辑技术实现的。

在本发明的实施例中，所述使目的植物基因组中GmMS1基因表达量降低或使目的植物基因组中GmMS1基因发生功能缺失是利用CRISPR/Cas9使目的植物中GmMS1基因发生如下(A)或(B)所述突变：

(A)序列表的序列2自5’端第51位碱基和52位碱基之间插入碱基A；

(B)序列表的序列7自5’端第749位碱基和750位碱基之间插入碱基A。

所述CRISPR/Cas9的靶序列如序列表的序列6所示。

所述利用CRISPR/Cas9使目的植物中GmMS1基因发生如下(A)或(B)所述突变包括如下步骤：将靶向所述靶序列的CRISPR/Cas9敲除载体导入目的植物中，得到转基因植物。所述CRISPR/Cas9载体具体可为将引物二聚体插入Cas9/gRNA载体得到的重组载体；所述引物二聚体是将F2(5’-TTGCGCCGAGGTCTAAGATACAG-3’)和引物R2(5’-AACCTGTATCTTAGACCTCGGCG-3’)退火形成的。

将靶向所述靶序列的CRISPR/Cas9敲除载体导入目的植物，具体可为：通过农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。

在本发明的实施例中，所述使目的植物基因组中GmMS1基因表达量降低或使目的植物基因组中GmMS1基因发生功能缺失是利用CRISPR/Cas9使目的植物中GmMS1基因发生如下(C)或(D)所述突变：

(C)序列表的序列2发生自5’端第18位碱基至23位碱基的缺失突变；

(D)序列表的序列7发生自5’端第716位碱基至721位碱基的缺失突变。

所述CRISPR/Cas9的靶序列如序列表的序列4所示。

所述利用CRISPR/Cas9使目的植物中GmMS1基因发生如下(C)或(D)所述突变包括如下步骤：将靶向所述靶序列的CRISPR/Cas9敲除载体导入目的植物中，得到转基因植物。所述CRISPR/Cas9载体具体可为将引物二聚体插入Cas9/gRNA载体得到的重组载体；所述引物二聚体是将F1(5’-TTGGACGGGAACACCTGTGGCGG-3’)和引物R1(5’-AACCCGCCACAGGTGTTCCCGTC-3’)退火形成的。

将靶向所述靶序列的CRISPR/Cas9敲除载体导入目的植物，具体可为：通过农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。

第三方面，本发明保护GhBZR3蛋白或其相关生物材料在调控植物育性中的应用；

所述相关生物材料为如下(1)-(3)中的任一种：

(1)GhBZR3蛋白的编码基因；

(2)用于沉默或抑制目的植物中(1)的表达或敲除(1)的物质；

(3)用于降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量的物质；

所述GmMS1蛋白如前文所述。

所述GhBZR3蛋白的编码基因(GmMS1基因)如前文所述。

所述“用于沉默或抑制目的植物中(1)的表达或敲除(1)的物质”或“用于降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量的物质”具体可为CRISPR/Cas9敲除载体或含有所述载体的重组菌；所述CRISPR/Cas9敲除载体的靶序列如序列表的序列4或序列6所示。所述CRISPR/Cas9载体具体可为将引物二聚体插入Cas9/gRNA载体得到的重组载体；所述引物二聚体是将F2(5’-TTGCGCCGAGGTCTAAGATACAG-3’)和引物R2(5’-AACCTGTATCTTAGACCTCGGCG-3’)退火形成的。所述CRISPR/Cas9载体具体可为将引物二聚体插入Cas9/gRNA载体得到的重组载体；所述引物二聚体是将F1(5’-TTGGACGGGAACACCTGTGGCGG-3’)和引物R1(5’-AACCCGCCACAGGTGTTCCCGTC-3’)退火形成的。

第四方面，本发明还保护(C1)或(C2)在植物育种中的应用；

(C1)前文任一所述方法；

(C2)前文任一所述的GhBZR3蛋白或其相关生物材料。

所述育种的目的可为培育雄性不育植物。

以上任一所述植物为(D1)或(D2)或(D3)：

(D1)双子叶植物或单子叶植物；

(D2)豆科植物；

(D3)大豆。

所述大豆具体可为大豆品种Jack。

上述任一所述方法培育得到的雄性不育植物也属于本发明的保护范围。

本发明对于植物育性研究及不育植物的育种有重要意义。

附图说明

图1为GmMS1基因编辑的测序检测结果。

图2为GmMS1基因编辑植株的不育表型。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

发芽培养基：3.1g/L B5培养基基础盐(Gamborgs Basal Salt Mixture，Phytotech G768)，20g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(Gamborgs Vitamin Solution，Phytotech G219)，7g/L琼脂，pH 5.8。

共培养液体培养基：2.0g/L MS基础盐混合物(Murashige&Skoog Basal SaltMixture)，3.9g/L吗啉乙磺酸(MES)，30g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(GamborgsVitamin Solution，Phytotech G219)，150mg/L二硫苏糖醇，40mg/L乙酰丁香酮，2mg/L玉米素，pH 5.4。

共培养培养基：2.0g/L MS基础盐混合物(Murashige&Skoog BasalSaltMixture)，3.9g/L吗啉乙磺酸，30g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(GamborgsVitamin Solution，Phytotech G219)，150mg/L二硫苏糖醇，40mg/L乙酰丁香酮，2mg/L玉米素，7g/L琼脂，pH 5.4。

恢复培养基：3.1g/L B5培养基基础盐(Gamborgs Basal Salt Mixture，Phytotech G768)，0.98g/L吗啉乙磺酸，30g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(GamborgsVitamin Solution，Phytotech G219)，150mg/L头孢噻肟(cefotaxime)，450mg/L特美汀(timentin)，1mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine)，7g/L琼脂，pH 5.7。

筛选培养基：3.1g/L B5培养基基础盐(Gamborgs Basal Salt Mixture，Phytotech G768)，0.98g/L吗啉乙磺酸，30g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(GamborgsVitamin Solution，Phytotech G219)，150mg/L头孢噻肟，450mg/L特美汀，1mg/L6-苄氨基嘌呤，7g/L琼脂，6mg/L草丁膦(glufosinate)，pH 5.7。

伸长培养基：4.0g/L MS基础盐混合物(Murashige&Skoog Basal Salt Mixture)，0.6g/L吗啉乙磺酸，30g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(Gamborgs VitaminSolution，Phytotech G219)，150mg/L头孢噻肟，450mg/L特美汀，0.1mg/L吲哚乙酸(3-Indoleacetic acid)，0.5mg/L赤霉素(Gibberellic acid)，1mg/L玉米素，7g/L琼脂，6mg/L草丁膦，pH 5.6。

生根培养基：2.0g/L MS基础盐混合物(Murashige&Skoog Basal SaltMixture)，0.6g/L吗啉乙磺酸，20g/L蔗糖，1ml/L B5培养基维生素溶液(Gamborgs VitaminSolution，Phytotech G219)，7g/L琼脂，3mg/L草丁膦，pH 5.7。

大豆品种Jack的种子：参考文献：Wei Liu,Bingjun Jiang,Liming Ma,ShouweiZhang,Hong Zhai,Xin Xu,Wensheng Hou,Zhengjun Xia,Cunxiang Wu,Shi Sun,TingtingWu,Li Chen,Tianfu Han,Functional diversification ofFlowering Locus T homologsin soybean:GmFT1a and GmFT2a/5a have opposite roles in controlling floweringand maturation,New Phytologist,2018,217(3):1335-1345.；国家种质库保存号：WDD01579，公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。

实施例1、大豆雄性核不育基因GmMS1的获得

对大豆基因组进行测序和功能分析，发现一个大豆雄性核不育基因，将其命名为GmMS1基因，其CDS如序列表的序列2所示，基因组序列如序列表的序列7所示。所述GmMS1基因编码的蛋白质命名为GmMS1蛋白，如序列表的序列1所示。

实施例2、GmMS1基因在调控大豆育性中的应用

一、Crisper/CAS9基因编辑载体的构建

1、gRNA靶点设计与合成

设计两个靶点序列，分别为

靶点1：GACGGGAACACCTGTGGCGGTGG；

靶点2：CGCCGAGGTCTAAGATACAGAGG。

靶点1和靶点2中，下划线为PAM序列。

根据靶点序列分别设计两对引物：

靶点1引物：

F1:5’-TTGGACGGGAACACCTGTGGCGG-3’；

R1:5’-AACCCGCCACAGGTGTTCCCGTC-3’。

靶点2引物：

F2:5’-TTGCGCCGAGGTCTAAGATACAG-3’；

R2:5’-AACCTGTATCTTAGACCTCGGCG-3’。

2、引物二聚体的形成

将引物F1和引物R1分别稀释成10μM，配置反应体系：F15μl、R15μl、H₂O 15μl。混匀后95℃反应3min，然后自然冷却至25℃，然后16℃，5min，得到引物二聚体1。

将引物F2和引物R2分别稀释成10μM，配置反应体系：F25μl、R25μl、H₂O 15μl。混匀后95℃反应3min，然后自然冷却至25℃，然后16℃，5min，得到引物二聚体2。

3、取步骤2得到的引物二聚体1配置反应体系：Cas9/gRNA载体1μl、引物二聚体11μl、Solution11μl、Solution21μl、H₂O 6μl。16℃反应2小时。

上述载体和试剂来自北京唯尚立德生物科技有限公司，货号VK005-15。

反应结束，得到重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-1，重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-1中含有序列表的序列3所示的的DNA分子(已经测序验证)，表达sgRNA。sgRNA的靶序列为序列4。

4、取步骤2得到的引物二聚体2配置反应体系：Cas9/gRNA载体1μl、引物二聚体21μl、Solution11μl、Solution21μl、H₂O 6μl。16℃反应2小时。

上述载体和试剂来自北京唯尚立德生物科技有限公司，货号VK005-15。

反应结束，得到重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-2，重组表达重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-2中含有序列表的序列5所示的DNA分子，表达sgRNA(已经测序验证)。sgRNA的靶序列为序列6。

二、重组农杆菌的制备

将步骤3和步骤4构建的重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-1和重组载体CRISPR/Cas9-GmMS1-2分别导入导入根癌农杆菌EHA105，得到重组农杆菌GmMS1-1和重组农杆菌GmMS1-2。

三、基因编辑大豆的获得

取步骤二得到的重组农杆菌，采用根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化方法转化大豆，具体转化方法如下：

(1)选取大小均匀一致、无病斑、无裂纹，表面光滑、无褶皱的饱满大豆品种Jack的种子，将其装入玻璃培养皿中。然后放入干燥器内，敞开培养皿。在干燥器中放入一个玻璃烧杯，先加入100mL次氯酸钠，再向烧杯中滴入4mL的浓盐酸。凡士林涂于干燥器盖的四周后盖上干燥器，形成密封状态。然后将干燥器置于通风橱中，种子消毒16-20h。

(2)完成步骤(1)后，将灭菌的种子下胚轴垂直向上接入发芽培养基中，培养皿不封口，放在25℃，16h光照/18小时黑暗的组培间培养1d。

(3)完成步骤(2)后，以萌发的大豆种子的子叶节为外植体。首先剥去大豆种皮，纵切分离两片子叶，在子叶与胚轴交接部位(子叶节)划成条状伤口，将划伤的外植体放入含重组农杆菌重悬液的共培养液体培养基(菌液OD值为0.6—0.8)中，28℃浸染30min，侵染后，将外植体(子叶)内平面向下接种于表面铺有滤纸的共培养培养基中，25℃、16h光照/18小时黑暗条件下培养5天。

(4)完成步骤(3)后，将外植体转入恢复培养基中，25℃、16h光照/18小时黑暗条件下培养7d。

(5)完成步骤(4)后，切除外植体产生的主芽，将其转入筛选培养基中，25℃、16h光照/18小时黑暗条件下培养21d。

(6)完成步骤(5)后，剥去褐化的叶片，将产生的不定芽转入伸长培养基中，进行伸长。15d继代一次，继代2-3次。期间将产生的伸长苗转入生根培养基中，进行生根。

(7)完成步骤(6)，待根长出，将苗子从培养基中取出，移栽到装有基质的小盆中进行炼苗。炼苗1周后，转入大盆生长，获得T0代植株。

(8)对T0代植株进行检测，检测方法如下：

分别提取转基因植株和野生型植株基因组DNA，以此为模板，用检测引物进行PCR扩增。

F-614:CGCCATAGTGAAGTAGCGGA；

R-614:CAGTTGAAAACAAACTTACCGAAGG。

PCR反应条件：先95℃预变性5min；然后95℃30sec，56℃30sec，72℃1min，35个循环；再72℃延伸10min。将PCR产物送去测序，筛选基因编辑植株。

测序结果显示，重组农杆菌GmMS1-1转化大豆后，共得到60株T0代植株，在T1后代中得到1株为在GmMS1基因中发生突变且为纯合型突变的植株，与野生型相比，纯合突变植株的差异在于：存在6bp的缺失，该缺失位于序列2的第18位和第23位之间(GGCGGT)。重组农杆菌GmMS1-2转化大豆后，共得到56株T0代植株，在T1后代中得到5株为在GmMS1基因中发生突变且为纯合型突变的植株，与野生型相比，纯合突变植株的差异在于：存在一个核苷酸的差异(即发生了一个插入突变且为纯合型，该插入位于序列2的第51位和52位之间，插入的单碱基为A，测序结果见图1)，该核苷酸的差异引起移码，从而不能有效表达GmMS1蛋白(图1)。

四、大豆育性检测

待测植株：野生型植株、5株纯合型突变植株(转入重组农杆菌GmMS1-2得到的插入突变植株)。

室外自然条件下，盆栽种植待测植株。

结果如图2所示。结果显示，野生型对照植株结荚正常，籽粒饱满，而GmMS1基因编辑移码突变的纯合植株为雄性不育植株，不能正常结荚。这些结果说明对GmMS1基因进行编辑可以导致雄性不育。

序列表

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> 一种植物育性相关蛋白及其应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 950

<212> PRT

<213> 大豆(Glycine max (Linn.) Merr.)

<400> 1

Met Thr Gly Thr Pro Val Ala Val Ala Ala Ala Thr Pro Arg Ser Lys

1 5 10 15

Ile Gln Arg Asn Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gly Pro Lys Val Arg Glu

20 25 30

Glu Lys Ile Arg Val Thr Val Arg Met Arg Pro Leu Asn Thr Lys Glu

35 40 45

Gln Ala Met Tyr Asp Leu Ile Ala Trp Asp Cys Leu Asp Glu His Thr

50 55 60

Ile Val Phe Lys Asn Pro Asn Gln Glu Arg Pro Thr Thr Pro Tyr Thr

65 70 75 80

Phe Asp Lys Val Phe Ala Pro Thr Cys Ser Thr His Lys Val Tyr Glu

85 90 95

Glu Gly Ala Lys Asp Val Ala Leu Ser Ala Leu Ser Gly Ile Asn Ala

100 105 110

Thr Ile Phe Ala Tyr Gly Gln Thr Ser Ser Gly Lys Thr Phe Thr Met

115 120 125

Arg Gly Val Thr Glu Ser Ala Ile Lys Asp Ile Tyr Asp Tyr Ile Lys

130 135 140

Asn Thr Pro Glu Arg Asp Phe Ile Leu Arg Ile Ser Ala Leu Glu Ile

145 150 155 160

Tyr Asn Glu Thr Val Ile Asp Leu Leu Lys Arg Glu Ser Gly Pro Leu

165 170 175

Arg Leu Leu Asp Asp Pro Glu Lys Gly Thr Ile Val Glu Lys Leu Asn

180 185 190

Glu Glu Val Ala Glu Asp Arg Gln His Leu Arg Arg Leu Ile Gly Ile

195 200 205

Cys Glu Ala Gln Arg Gln Val Gly Glu Thr Ala Leu Asn Asp Lys Ser

210 215 220

Ser Arg Ser His Gln Ile Ile Arg Leu Thr Val Glu Ser Ser Leu Arg

225 230 235 240

Glu Ser Ser Gly His Val Lys Ser Tyr Ile Ala Ser Leu Asn Phe Val

245 250 255

Asp Leu Ala Gly Ser Glu Arg Ile Ser Gln Thr Asn Thr Cys Gly Ala

260 265 270

Arg Met Lys Glu Gly Ser His Ile Asn Arg Ser Leu Leu Thr Leu Ala

275 280 285

Ser Val Ile Arg Lys Leu Ser Gly Gly Lys Cys Gly His Ile Pro Tyr

290 295 300

Arg Asp Ser Lys Leu Thr Arg Ile Leu Gln Ser Ser Leu Gly Gly Asn

305 310 315 320

Ala Arg Thr Ala Ile Ile Cys Thr Ile Ser Pro Ser Leu Ser His Val

325 330 335

Glu Gln Thr Arg Asn Thr Leu Ala Phe Ala Thr Ser Ala Lys Glu Val

340 345 350

Ile Asn Thr Ala Arg Val Asn Met Val Val Ser Asn Lys Thr Leu Val

355 360 365

Arg Gln Leu Gln Lys Glu Val Ala Arg Leu Glu Gly Glu Leu Arg Ser

370 375 380

Pro Asp Leu Ser Val Asn Ser Cys Leu Arg Ser Leu Leu Ala Glu Lys

385 390 395 400

Glu Leu Lys Ile Gln Gln Met Glu Arg Asp Met Glu Asp Leu Arg Arg

405 410 415

Gln Arg Asp Leu Ala Gln Thr Gln Leu Asp Leu Glu Arg Arg Val Asn

420 425 430

Lys Val Pro Lys Gly Ser Asn Asp Cys Gly Pro Ser Ser Gln Ile Val

435 440 445

Arg Cys Leu Ser Phe Pro Glu Glu Asn Lys Ser Ala Asn Gly Lys Arg

450 455 460

Thr Pro Glu Arg Arg Glu Ala Val Gly Arg Gln Ala Met Leu Lys Asn

465 470 475 480

Leu Leu Ala Ser Pro Asp Pro Ser Ile Leu Val Gly Glu Ile Arg Lys

485 490 495

Leu Glu Asp Arg Gln Leu Gln Leu Cys Glu Asp Ala Asn Arg Ala Leu

500 505 510

Glu Val Leu His Gln Asp Phe Ala Thr His Lys Leu Gly Asn Gln Glu

515 520 525

Thr Ala Glu Thr Met Ser Lys Val Leu Ser Glu Ile Lys Asp Leu Val

530 535 540

Ala Ala Ser Ser Thr Pro Glu Glu Ile Val Ala Ala Asp Lys Ala Asp

545 550 555 560

Leu Met Glu Lys Ile Thr Gln Leu Lys Asn Gln Gly Asn Thr Ile Ala

565 570 575

Ser Leu Glu Arg Lys Leu Glu Asn Val Gln Lys Ser Ile Asp Lys Leu

580 585 590

Val Ser Ala Phe Asn Ala Glu Glu Thr Pro Glu Asn Lys Thr Thr Pro

595 600 605

Leu Arg Arg Lys Lys Ile Leu Pro Phe Thr Leu Ser Asn Ser Pro Asn

610 615 620

Met Gln His Ile Ile Arg Ala Pro Cys Ser Pro Leu Ser Ser Ser Arg

625 630 635 640

Lys Ala Met Glu His Asp Ile Glu Asn Arg Ala Pro Glu Asn Asn Ile

645 650 655

Gly Ile Ser Gly Ser Asp Ser Phe Ala Lys Phe His Lys Asp Thr Pro

660 665 670

Arg Lys Asp Asp Lys Ser Cys Asp Ser Ile Leu Ser Arg Ala Gly Ser

675 680 685

Pro Ala Thr Arg Lys Ser Lys Ser Val Asn Val Met Lys Ile Gln Lys

690 695 700

Met Phe Lys Asn Ala Ala Glu Glu Asn Ile Arg Ser Phe Arg Val Tyr

705 710 715 720

Val Thr Glu Leu Lys Glu Leu Val Ala Lys Leu His Tyr Gln Lys Gln

725 730 735

Leu Leu Val Cys Gln Val Leu Glu Leu Glu Ala Asn Lys Ser Leu Asn

740 745 750

Glu Glu Lys Asp Thr Pro Asp Arg Ser Pro Leu Pro Trp His Ile Leu

755 760 765

Phe Asp Gln Gln Arg Lys Gln Ile Ile Met Leu Trp His Leu Cys His

770 775 780

Ile Ser Leu Val His Arg Thr Gln Phe Phe Leu Leu Leu Gly Gly Asp

785 790 795 800

Pro Ser Asp Gln Ile Tyr Met Glu Val Glu Leu Arg Arg Leu Thr Arg

805 810 815

Leu Glu Gln His Leu Ala Glu Leu Gly Asn Ala Ser Pro Ala Leu Leu

820 825 830

Gly Asp Glu Pro Ala Gly Ser Val Ser Ala Ser Ile Arg Ala Leu Lys

835 840 845

Gln Glu Arg Glu His Leu Ala Arg Lys Val Asn Thr Lys Leu Thr Ala

850 855 860

Glu Glu Arg Glu Leu Leu Tyr Ala Lys Trp Glu Val Pro Pro Val Gly

865 870 875 880

Lys Gln Arg Arg Leu Gln Phe Val Asn Lys Leu Trp Thr Asp Pro Tyr

885 890 895

Asn Met Gln His Val Gln Glu Ser Ala Glu Ile Val Ala Lys Leu Ile

900 905 910

Asp Phe Ser Val Ser Asp Glu Asn Ser Lys Asp Met Ile Glu Leu Asn

915 920 925

Phe Ser Ser Pro Phe Asn Lys Lys Thr Trp Ala Gly Trp Asn Phe Ile

930 935 940

Ser Asn Leu Leu Asn Leu

945 950

<210> 2

<211> 2850

<212> DNA

<213> 大豆(Glycine max (Linn.) Merr.)

<400> 2

atgacgggaa cacctgtggc ggtggctgcg gcaacgccga ggtctaagat acagaggaat 60

gcttcaggta cgccgggtgg ccccaaagtt cgggaggaga aaattcgagt cacggttcgg 120

atgaggccgc tcaatacaaa ggagcaagct atgtacgatc taattgcttg ggattgtttg 180

gatgaacaca ctattgtgtt caagaatcca aaccaagaga ggcctacaac accatacacc 240

ttcgataaag tttttgcacc tacgtgctca actcataagg tttatgaaga aggggctaaa 300

gatgttgctt tatcagcact ttctggaatc aatgcaacaa tatttgcgta tgggcagact 360

agcagtggta agacattcac gatgagaggc gtcactgaaa gtgctattaa agacatctac 420

gactacatta agaatacacc agaaagggat tttattctga gaatctctgc tctggaaatc 480

tataatgaga ctgtcataga ccttctgaaa cgtgaatctg gtcctcttcg gctcttggat 540

gatcctgaga aagggactat tgtggaaaag ctgaatgaag aagtagctga agatcgtcaa 600

catcttaggc gcttaattgg catctgcgaa gctcaaaggc aagtgggaga aactgcttta 660

aatgataaaa gctcaagatc acatcaaata atcaggctga ctgtagaaag cagccttcgt 720

gaaagttcag gtcacgtaaa gtcttacata gcaagtttga attttgtgga tcttgctgga 780

agtgaacgca tctctcaaac aaatacatgt ggagcaagaa tgaaggaagg cagccacatc 840

aaccgaagtt tgttgacact tgcatcagtc atcaggaagc taagtggcgg aaaatgtggt 900

cacataccat atagagactc aaaattgaca cgaatattgc agtcttcatt aggagggaat 960

gctcgaacag cgattatctg taccataagt ccttccttaa gtcatgtgga gcaaacaaga 1020

aatacactag catttgctac cagtgcaaag gaagtcatta atactgcccg agttaatatg 1080

gtcgtttcaa ataagacact agttagacag ttgcaaaagg aagttgcgag gcttgaaggg 1140

gagttacgaa gccctgacct ttctgtgaat tcatgtctaa ggtcattgct agctgaaaag 1200

gagttgaaaa ttcagcagat ggagagggat atggaagatc tgaggcgaca gagagacctt 1260

gcacaaactc aacttgatct ggaaagaaga gtgaataaag ttccaaaggg atcaaacgat 1320

tgtgggccct ctagtcaaat agtcagatgt ctttcttttc ctgaagagaa caaatcagct 1380

aatggtaaac gtacgccaga gcgacgagag gcagtgggca ggcaggcaat gctgaagaat 1440

ttattggctt ctcctgatcc atccatactg gttggtgaaa tccgaaagct tgaggatcgg 1500

cagctccagc tctgtgagga tgcaaatcga gctcttgaag ttctgcacca ggattttgca 1560

actcacaaac ttgggaatca agaaactgct gaaaccatgt cgaaagtact atctgaaata 1620

aaagacttag tagctgccag ctctactcca gaagaaattg tggcagcaga taaggccgac 1680

ctaatggaaa agatcacaca gttgaaaaat caagggaaca ccattgcatc tttagaaagg 1740

aagctggaga atgttcaaaa atctatagac aagcttgtgt ctgcttttaa tgcagaggag 1800

actccagaaa acaagacgac ccctctgaga aggaagaaaa ttcttccttt cacattaagc 1860

aacagtccca acatgcagca tataatacgt gctccttgct cgcctctctc ctcttcgcgt 1920

aaagcaatgg aacatgacat tgagaacagg gcaccggaaa acaacattgg catctctggc 1980

agtgattctt ttgctaagtt tcataaagat actccacgaa aggatgataa aagttgtgat 2040

tctattttat cacgggcagg aagcccagct acaaggaaat caaaatcagt gaatgtgatg 2100

aagattcaaa agatgttcaa gaatgctgcg gaggagaaca ttcggagctt cagagtttat 2160

gttaccgagt taaaagagct agtggcaaaa ctgcattacc agaagcagct actggtttgc 2220

caggttttgg aactggaagc aaacaagtca ttaaatgaag aaaaggatac acctgatcgg 2280

tctcccttgc catggcatat actatttgat cagcagagaa agcaaattat catgttatgg 2340

catttatgcc acatatctct tgtgcaccgg acacagtttt ttcttctgtt aggaggagac 2400

ccttctgatc agatatatat ggaagttgaa cttagaagat tgactcggtt agaacagcac 2460

ctggcagagc ttgggaatgc tagtcctgca cttctaggtg atgagcctgc aggctctgtt 2520

tcagcaagca ttagagctct gaagcaagaa agggaacatc ttgctaggaa ggtgaacact 2580

aaacttacag cagaggagag ggaactgctt tatgcaaaat gggaagttcc tccagttgga 2640

aaacaaagga gactgcaatt tgtaaataaa ttgtggaccg acccttataa catgcaacat 2700

gtgcaagaaa gtgctgaaat tgtagcaaag ctcattgatt tcagtgtatc tgatgaaaac 2760

agcaaggata tgattgaatt aaacttttca agccctttta ataagaaaac atgggcgggc 2820

tggaacttta tatcaaatct tctaaatttg 2850

<210> 3

<211> 548

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ttcgttgaac aacggaaact cgacttgcct tccgcacaat acatcatttc ttcttagctt 60

tttttcttct tcttcgttca tacagttttt ttttgtttat cagcttacat tttcttgaac 120

cgtagctttc gttttcttct ttttaacttt ccattcggag tttttgtatc ttgtttcata 180

gtttgtccca ggattagaat gattaggcat cgaaccttca agaatttgat tgaataaaac 240

atcttcattc ttaagatatg aagataatct tcaaaaggcc cctgggaatc tgaaagaaga 300

gaagcaggcc catttatatg ggaaagaaca atagtatttc ttatataggc ccatttaagt 360

tgaaaacaat cttcaaaagt cccacatcgc ttagataaga aaacgaagct gagtttatat 420

acagctagag tcgaagtagt gattggacgg gaacacctgt ggcgggtttt agagctagaa 480

atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg 540

cttttttt 548

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gacgggaaca cctgtggcgg 20

<210> 5

<211> 548

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ttcgttgaac aacggaaact cgacttgcct tccgcacaat acatcatttc ttcttagctt 60

tttttcttct tcttcgttca tacagttttt ttttgtttat cagcttacat tttcttgaac 120

cgtagctttc gttttcttct ttttaacttt ccattcggag tttttgtatc ttgtttcata 180

gtttgtccca ggattagaat gattaggcat cgaaccttca agaatttgat tgaataaaac 240

atcttcattc ttaagatatg aagataatct tcaaaaggcc cctgggaatc tgaaagaaga 300

gaagcaggcc catttatatg ggaaagaaca atagtatttc ttatataggc ccatttaagt 360

tgaaaacaat cttcaaaagt cccacatcgc ttagataaga aaacgaagct gagtttatat 420

acagctagag tcgaagtagt gattgcgccg aggtctaaga tacaggtttt agagctagaa 480

atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg 540

cttttttt 548

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cgccgaggtc taagatacag 20

<210> 7

<211> 6884

<212> DNA

<213> 大豆(Glycine max (Linn.) Merr.)

<400> 7

ttgaagtagc cgttactata cacacctctt actatctctg gaactttgaa tttcagagcg 60

tttttttctc tttcgaaaag taaacctcgt cgtcgttcat tcgttctttc tctctttcag 120

atcgattgca gaatttattt cgccactcca aactacgtcg ttcagcattt ccaccggcga 180

ctgagcctcc tcttcttcat ctgcaagtac ttcttttctt tcatttcaca aagaatcaat 240

ttctttttca ataaacgtgc tcgattagtt gaattgaatg tgcctagtaa agatcaacaa 300

gaagaagaag aagatttagc aaaatatcat atgaaacaga tgtcaatcgc catagtgaag 360

tagcggatta ctattttgtt tttttttcgg aggtgttctg ataggtgatt tgttgggcga 420

ttcagcaatt ttaaaagctt cagatcgtgc taggttttag cttaatcttc attcgctctt 480

tttgcaatgt agctaattca gaaatcgata tccgtttttc tttctattac cgttttcatc 540

caaatcagtg acctccaaag ttgcaacggt tttcggaaga acatggctta gctattattt 600

ataatgttct ttatttcaag tattttctct ttagaaatga agtgctgtaa actgctgttg 660

ctgacggatc gatctgcaga aattgaaggc agagctcgat gacgggaaca cctgtggcgg 720

tggctgcggc aacgccgagg tctaagatac agaggaatgc ttcaggtacg ccgggtggcc 780

ccaaagttcg ggaggagaaa attcgagtca cggttcggat gaggccgctc aatacaaagg 840

agcaagctat gtacgatcta attgcttggg attgtttgga tgaacacact attgtgttca 900

agaatccaaa ccaagagagg cctacaacac catacacctt cggtaagttt gttttcaact 960

gtgttttttt tttccgagag gaatttgata aacttacatt ttcgtgaaca gaaattcatg 1020

aatttatatt taaatttctg tataaatggg aggtaatgaa tataaacctg gttaacgttc 1080

tagtgcgttt attgtttaac gttgtttgag tggatttgta tttgttaagt ttctatttcc 1140

ttttatataa catttatctt atttgttatt tgttacttgt tacctttttt cttattatta 1200

tttgttatgt tgcagataaa gtttttgcac ctacgtgctc aactcataag gtttatgaag 1260

aaggggctaa agatgttgct ttatcagcac tttctggaat caatggtaac ttgttctcag 1320

ctaatgcttg tgttagatta cgggatgttt tagatgcatt caaaagtttc atttttttgc 1380

agcaacaata tttgcgtatg ggcagactag cagtggtaag acattcacga tgagaggcgt 1440

cactgaaagt gctattaaag acatctacga ctacattaag aatgtgagtt actagtttac 1500

tgttgatacc taccaaactt tatatgtcaa ttatcttcta ctgagtataa agtagaaggc 1560

tattcatgag ttgaatccta ttagtattta tcaagattaa ttgcaggatt tgatggcaat 1620

tacttgcaat tatgaacatt ttttattcgt ttcaatttcc acagacacca gaaagggatt 1680

ttattctgag aatctctgct ctggaaatct ataatgagac tgtcatagac cttctgaaac 1740

gtgaatctgg tcctcttcgg ctcttggatg atcctgaggt atagttcagg gctaaaccct 1800

gaacggaaat ttgtcaggga tgctttaaaa tttccttgat ttgtcgcaaa tcctgaggta 1860

gattttttct ttggtacaga aagggactat tgtggaaaag ctgaatgaag aagtagctga 1920

agatcgtcaa catcttaggc gcttaattgg catctgcgaa ggtaatctag aaatctggtg 1980

tggtttgtca tgtgagacat atataggttt ctcaagagca tacagtatca ccatgttgtt 2040

tggctaagac ttttatatct cactattggt gatgttctct ttgtatagaa accatgaaaa 2100

tatataagtt gtgggcattt tgcacttagg ttatctgcat agtactattg ttcatgtaaa 2160

tattgtatct gcagctcaaa ggcaagtggg agaaactgct ttaaatgata aaagctcaag 2220

atcacatcaa ataatcaggc tggtaagctc agctgaggaa gtacaagtat tcattataat 2280

gcatgcatat ttcagattgg ttaatttacc catttatttt ctctggctac tttatgcgga 2340

gattagaaat aagacttatg cttactgctc tgtaatcact attttcatac gaatatttca 2400

gactgtagaa agcagccttc gtgaaagttc aggtcacgta aagtcttaca tagcaagttt 2460

ggtatgtttc gtcttcatag cttgacttga tagtcttgat aacaagctag tcatagtgat 2520

gaatcattat tataacctca cagaattttg tggatcttgc tggaagtgaa cgcatctctc 2580

aaacaaatac atgtggagca agaatgaagg aaggcagcca catcaaccga agtttgttga 2640

cacttgcatc agtcatcagg aagctaaggt ccaacatctt taaatatcaa aatgcatgtg 2700

gctactttgt tattgttctt ctacaaaaga gccatgatta taaaaattta gcagccaaga 2760

tcaacaagat gtagagaaaa aaaaatacta aaaggcccat ttgtttgtgt gttttttttt 2820

ataagaaaaa catttttttt aaattaaaaa tatgtttaaa atctccacaa taattgattt 2880

ttttttaaat aaaaaatcct caacaagatt ttaatatttt ttgcttttaa tcatcaaatg 2940

tcacattaaa gttgtcttgt gacatgaagg taggttcaaa tctttgaaac agtcgctcta 3000

cttacagggg gataagactg cttacatcta tcctttcaat atctcactag gaagaagcct 3060

catgcaccag gctactcttt ttgttcaaac tgaaaagttt ttgacaacta ctaatatact 3120

tgtggaatcc agtttttctc gtaatcattt tcatttgatg actagaaatt gtttactgag 3180

gaagttggtt aatttgaaat tgtttattgt ggaagttggt taatttgaaa ttggcattga 3240

ttattattat gatgaagtaa agacctgtag agctatgtaa tttggtcaat agacaggcgt 3300

ccgattcagc ttttggaggt tttcttttgc tttgcagtgg cggaaaatgt ggtcacatac 3360

catatagaga ctcaaaattg acacgaatat tgcagtcttc attaggaggg aatgctcgaa 3420

cagcgattat ctgtaccata agtccttcct taagtcatgt ggagcaaaca agaaatacac 3480

tagcatttgc taccagtgca aaggaagtca ttaatactgc ccgagttaat atggtatgat 3540

taaatgtcta aatataatta tgatttggtt gattgaagag tagattagta tgaaaatctt 3600

ttctcctcgt gttcttatat tacttgataa aatcattttt tcccaaaaat ttgttttcaa 3660

acagaagctt gcagcagttt ggcatctttc aatctttttg acaagtgtaa atttggatag 3720

tagctctcct aggtttctga tacttagttc atagcctagc ccaccttgac tagcagcaaa 3780

gtgtatttgt ttggtagaag tatttgaaat tattgagaaa agtgatggat gcaccttctt 3840

cataaaaagc accttgtctt ttatttcggg tggcaattat agaggacttg ttttcccctc 3900

tactcgctaa gtgatattca tttttttttg ttatttcgag aagccacctc attgattaca 3960

agctttcata ttttccatga aaaaagaaag gtatatacta agatagatgg tgatgatcat 4020

ttaacaggtc gtttcaaata agacactagt tagacagttg caaaaggaag ttgcgaggct 4080

tgaaggggag ttacgaagcc ctgacctttc tgtgaattca tgtctaaggt cattgctagc 4140

tgaaaaggag ttgaaaattc agcaggtaca aacttcttta cttggtctta actttcatgt 4200

taactttact gtgttaaaat ttttgaacta acctcttctc tgagtcctct agatggatat 4260

tataatggta ttctttggag ttcttacatt attattatct cttgtctcaa gatgtggtca 4320

ataatttgat ttctatgtag ctaaacattc caacattcaa gtaaaatatt catatactct 4380

ttgtgtatgc aatgggttta actttcccat tccacaatgg atcaaaatcc cgggaactgg 4440

cttcccgttg tctgcttttc ttgtcgaatg aactgtgaaa gaccaattta ttagtaacac 4500

ttaattgtct tttcttgagc ttttagaaga gaaactcttt tggatgaatt gaattgataa 4560

acacaaattt gcagatggag agggatatgg aagatctgag gcgacagaga gaccttgcac 4620

aaactcaact tgatctggaa agaagagtga ataaagttcc aaaggtattt ggaatggtca 4680

tatcacatta ttgtaaccct gatttagact tctgactcaa attatataat tcttgcaggg 4740

atcaaacgat tgtgggccct ctagtcaaat agtcagatgt ctttcttttc ctgaagagaa 4800

caaatcagct aatggtaaac gtacgccaga gcgacgagag gcagtgggca ggcaggcaat 4860

gctgaagaat ttattggctt ctcctgatcc atccatactg gttggtgaaa tccgaaagct 4920

tgaggatcgg cagctccagc tctgtgagga tgcaaatcga gctcttgaag ttctgcacca 4980

ggattttgca actcacaaac ttgggaatca agaaactgct gaaaccatgt cgaaagtact 5040

atctgaaata aaagacttag tagctgccag ctctactcca gaagaaattg tggcagcaga 5100

taaggccgac ctaatggaaa agatcacaca gttgaaaaat caagggaaca ccattgcatc 5160

tttagaaagg aagctggaga atgttcaaaa atctatagac aagcttgtgt ctgcttttaa 5220

tgcagaggag actccagaaa acaagacgac ccctctgaga aggaagaaaa ttcttccttt 5280

cacattaagc aacagtccca acatgcagca tataatacgt gctccttgct cgcctctctc 5340

ctcttcgcgt aaagcaatgg aacatgacat tgagaacagg gcaccggaaa acaacattgg 5400

catctctggc agtgattctt ttgctaagtt tcataaagat actccacgaa aggatgataa 5460

aagttgtgat tctattttat cacgggcagg aagcccagct acaaggaaat caaaatcagt 5520

gaatgtgatg aagattcaaa agatgttcaa gaatgctgcg gaggagaaca ttcggagctt 5580

cagagtttat gttaccgagt taaaagagct agtggcaaaa ctgcattacc agaagcagct 5640

actggtttgc caggtaaggt tttttgattt ccactactat gctataataa tgtgtgctgc 5700

aatgctcgtt ttgccatttt aggaaaactg tttctcacat tgaatcatgt cagcatttgt 5760

ttcaggttaa acctattgca gataatgctt gtatgagttt aagactttaa gtgtaatagt 5820

aatttgttat tcttattggc gtataatatg ctgatacctt ttatcccctg cacgcacggg 5880

tttaggtttt ggaactggaa gcaaacaagt cattaaatga agaaaaggat acacctgatc 5940

ggtctccctt gccatggcat atactatttg atcagcagag aaagcaaatt atcatgttat 6000

ggcatttatg ccacatatct cttgtgcacc ggacacagtt ttttcttctg ttaggaggag 6060

acccttctga tcagatatat atggaagttg aacttagaag attgactcgg ttagaacagc 6120

acctggcaga gcttgggaat gctagtcctg cacttctagg tgatgagcct gcaggctctg 6180

tttcagcaag gtatgctcgt gtctttgaaa gacatgtgtc ttttttgaca attcctgcta 6240

gtcctgcact tctaggtgtc tttgataatt ccttaaatca agtgtctttg ataaagctcg 6300

tgtatttgaa aaacaggttt attttagaaa attctaataa attagtgcat ggccttgcac 6360

gcttttattt gtataatgag cagagaatag tatattaatc ttttgctatt gattgatcat 6420

caaatgcagc attagagctc tgaagcaaga aagggaacat cttgctagga aggtgaacac 6480

taaacttaca gcagaggaga gggaactgct ttatgcaaaa tgggaagttc ctccagttgg 6540

aaaacaaagg agactgcaat ttgtaaataa attgtggacc gacccttata acatgcaaca 6600

tgtgcaagaa agtgctgaaa ttgtagcaaa gctcattgat ttcagtgtat ctgatgaaaa 6660

cagcaaggat atgattgaat taaacttttc aagccctttt aataagaaaa catgggcggg 6720

ctggaacttt atatcaaatc ttctaaattt gtaaacacat tgttgtagtt gtacgtcatt 6780

tgtagttgag aagagaagta gagaactatc aaatatatat aatatttcga ttccattaac 6840

tgattattag gtgtacaagt ggcatgtttg caagaaagaa agaa 6884

Claims (9)

1.一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量，得到雄性不育植物；

所述GmMS1蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示；

所述植物为大豆。

2.一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：沉默或抑制目的植物中GmMS1基因的表达或敲除GmMS1基因，得到雄性不育植物：

所述GmMS1基因是如下任一所述的DNA分子：

(B1)序列表的序列2所示的DNA分子；

(B2)序列表的序列7所示的DNA分子；

所述植物为大豆。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述沉默或抑制目的植物中GmMS1基因的表达或敲除GmMS1基因，为突变目的植物中GmMS1基因使目的植物中GmMS1基因表达量降低或使目的植物中GmMS1基因发生功能缺失。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述使目的植物中GmMS1基因表达量降低或使目的植物中GmMS1基因发生功能缺失是通过使目的植物中GmMS1基因发生突变；所述突变为缺失突变和/或插入突变和/或能够导致基因功能缺失的其他突变。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述使目的植物基因组中GmMS1基因表达量降低或使目的植物基因组中GmMS1基因发生功能缺失是通过基因编辑技术实现的。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述使目的植物基因组中GmMS1基因表达量降低或使目的植物基因组中GmMS1基因发生功能缺失是利用CRISPR/Cas9使目的植物中GmMS1基因发生如下(A)或(B)所述突变：

(A)序列表的序列2自5’端第51位碱基和52位碱基之间插入碱基A；

(B)序列表的序列7自5’端第749位碱基和750位碱基之间插入碱基A。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9的靶序列如序列表的序列6所示。

8.GmMS1蛋白或其相关生物材料在调控植物育性中的应用；

所述相关生物材料为如下(1)-(3)中的任一种：

(1) GmMS1蛋白的编码基因；

(2)用于沉默或抑制目的植物中(1)的表达或敲除(1)的物质；

(3)用于降低或抑制目的植物中GmMS1蛋白的活性和/或含量的物质；

所述GmMS1蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示；

所述植物为大豆。

9.(C1)或(C2)在植物育种中的应用；

(C1)权利要求1-7中任一所述方法；

(C2)权利要求8中所述的GmMS1蛋白或其相关生物材料；所述育种的目的为培育雄性不育大豆；

所述植物为大豆。

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