CN111440804B - 玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了玉米ZmBES1/BZR1‑5基因在培育大籽粒植物中的应用，本专利明确了玉米ZmBES1/BZR1‑5基因与植物籽粒发育的关系，验证了玉米ZmBES1/BZR1‑5基因在提高植物籽粒大小的应用上的效果。利用玉米ZmBES1/BZR1‑5基因可以用于培育高产作物，玉米ZmBES1/BZR1‑5基因在植物籽粒发育领域，特别是植物高产领域具有广阔的应用前景，其经济效益潜力巨大。

Description

玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用

技术领域

本发明涉及玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用，属于基因工程领域。

背景技术

玉米和水稻都是我国重要的粮食作物，高产育种是确保我国粮食安全和农业可持续发展的有效保障之一。玉米和水稻产量与籽粒的粒重密切相关，粒重是指每粒种子的重量，很大程度上粒重由种子的大小决定。因此，发掘能够提高粒重的基因，对农作物高产育种有很大的应用价值。在现代农业中，提高作物种子重量或籽粒大小在作物改良中很关键，近年来植物种子大小的调控机制研究进展迅速，目前已成为植物领域研究的热点和前沿。

籽粒大小和千粒重是受多基因控制的数量性状，在不同种质资源中存在的不同等位基因是造成表型差异的内在原因。水稻中关于粒型和籽粒大小的研究较为充分，中国科学院上海生命科学研究院克隆出的控制粒重的GW2位点基因，该基因控制细胞数目和颖壳大小，从而影响胚乳细胞数目和大小、籽粒灌浆速度，最终影响籽粒长宽和粒重，这个位点编码的一种未知的泛E3环型连接酶可能与泛素-蛋白体的降解途径密切相关(Song等，2007)。Motoyuki(2005)构建了一套Habataki(籼稻)×Koshihikan(粳稻)的RIL群体并利用这套群体定位到了调控水稻穗粒数的QTL位点Gnl，通过进一步的研究证明了改位点由Gnla和Gnlb共同组成。其中Gnla位点可以通过编码一种细胞分裂素氧化酶/脱氢酶来降解细胞分裂素氢受体，从而可以使花器分生组织细胞分裂素得到逐渐积累，进而使生殖器官的细胞数也逐渐变多，最终导致粒重增加。

虽然玉米中相关研究较为有限，但也有部分基因，例如申请号为CN201711459421.0，专利名称为玉米籽粒大小基因ZmUrb2、其表达产物、其克隆引物、其表达载体及应用的专利，其揭示了基因ZmUrb2在提高玉米籽粒大小的作用。

然而，以上内容基本都是对单一的水稻或者玉米的作用，而不能对玉米和水稻均可以产生有益效果。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用。明确了玉米ZmBES1/BZR1-5基因与植物籽粒发育的关系，验证了玉米ZmBES1/BZR1-5基因在提高植物籽粒大小的应用上的效果。

玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用。

进一步的，上述应用中所述玉米ZmBES1/BZR1-5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，作为本发明的基因在培育大籽粒植物中的应用的改进：促进植物的籽粒的粒径增大，所述的粒径指籽粒的粒长和粒宽。

一种培育大籽粒植物的方法：上调植物中ZmBES1/BZR1-5基因的表达，以获得籽粒大小改良的植株。

进一步的，上述方法中所述上调植物中ZmBES1/BZR1-5基因的表达：设计ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物进行该基因的PCR扩增，利用扩增产物和载体构建包含ZmBES1/BZR1-5基因的重组质粒，利用农杆菌介导将上述重组质粒转化入植物中，进行ZmBES1/BZR1-5基因过量表达，即可获得大籽粒植物。

进一步的，上述方法中所述玉米ZmBES1/BZR1-5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，上述方法中所述的ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2-3所示。

进一步的，上述方法中所述的载体指双子叶植物表达载体pCAMBIA2300-35-eGFP。

进一步的，上述方法中所述的重组质粒为35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

有益效果：

(1)明确了玉米ZmBES1/BZR1-5基因与植物籽粒发育的关系，验证了玉米ZmBES1/BZR1-5基因在提高植物籽粒大小的重要性。

(2)提供玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用，可以用于培育高产作物。玉米ZmBES1/BZR1-5基因在植物籽粒发育领域，特别是植物高产领域具有广阔的应用前景，其经济效益潜力巨大。

附图说明

图1转ZmBES1/BZR1-5基因拟南芥种子T₄代的表型。

图2转ZmBES1/BZR1-5基因拟南芥种子T₅代的表型。

图3转ZmBES1/BZR1-5基因拟南芥种子T₆代的表型。

图4转基因水稻籽粒表型分析图。

图5玉米突变体籽粒性状分析图。

具体实施方式

为了使本技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步说明，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部，本发明不受下述实施例的限制。

实施例1基因克隆及载体构建

取五叶期玉米幼苗叶片，液氮速冻研磨，使用总RNA提取试剂盒Trizol(TaKaRa)并按照其说明书提取总RNA。用PrimeScriptTM RT regeant Kit试剂盒(Takara公司)，以总RNA为模板进行cDNA的合成。

用NCBI网站Primer-BLAST设计ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物(如表1所示)，根据双子叶植物表达载体pCAMBIA2300-35-eGFP多克隆位点，在其上游引物入Sal I酶切位点，下游引物引入Spe I位点，具体序列如表1所示：

表1 ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物序列

按表2所示反应体系加样，进行扩增。温度循环程序为：94℃3min；98℃10s，最适退火温度72℃20s，30个循环；72℃5min；4℃保持。

表2 PCR扩增反应体系

分别对PCR回收产物、pCAMBIA2300质粒进行双酶切，按表3反应体系进行加样。将酶切体系混匀，置于30℃水浴锅中，酶切6～8h，酶切产物加入上样缓冲液后，直接电泳，回收酶切产物，按表4进行酶切片段连接。

表3双酶切体系

表4连接反应体系

连接产物转化大肠杆菌，并进行菌落PCR检测。提取重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定之后，组质粒菌液送测序公司进行DNA的序列测序鉴定，经测序正确的质粒将于下一步拟南芥和水稻转化。

实施例2拟南芥转化及籽粒性状分析

用农杆菌介导的花絮浸染法将35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP载体转化拟南芥Col-0。

1、花序浸染法转化

(1)取含有重组质粒的农杆菌，在含有卡那霉素(Kana)和利福平(Rif)的YEP平板上划线，28℃培养2～3d。

(2)挑取农杆菌单菌落接种在3mL含Kana和Rif的YEP液体培养基中，28℃，200r/min，振荡过夜培养。

(3)在100mL液体YEP培养基中(含Kana和Rif)，接种1mL过夜培养的起始农杆菌菌液，28℃振荡培养至菌液OD600值为1.2～1.5。

(4)4℃5000r/min离心10min收集细胞，用5％蔗糖溶液悬浮菌体并调OD600值至0.8～1.0，按0.01％～0.02％的比例加入表面活性剂silwetL-77。

(5)用拟南芥专用营养土盆栽培养拟南芥哥伦比亚生态型Col-0幼苗，开花后修剪已形成果荚和已经开放的花，用上述浸染液浸泡花序1.5～2.0min，黑暗培养10h。

(6)在适宜的条件下培养3～4周，收集种子，进行下一步筛选处理。

2、抗性培养基筛选

(1)将收获的侵染后种子，分装至1.5mL的EP管，用500μL的70％酒精浸泡30s。

(2)吸掉酒精后，用500μL的10％次氯酸钠浸泡5～10min，期间不断摇晃离心管以至种子与次氯酸钠充分接触。

(3)用灭菌水清洗种子4～6次，待种子沉下后，弃上层ddH₂O；200μL的0.1％琼脂水悬浮种子。

(4)将种子点播至含50mg/L Kana的1/2MS培养基中培养。

(5)重复上述步骤，直至收获T₃代纯合的阳性苗。

3、PCR鉴定

(1)取植物新鲜组织100mg，加入液氮充分碾磨。加入400μL缓冲液FP1和6μL的RNase A(10mg/mL)，漩涡振荡1min，室温放置10min。

(2)加入130μL缓冲液FP2，充分混匀，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(3)可选步骤：将上清液再次12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(4)向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，此时会出现絮状基因组DNA。12000r/min离心2min，弃上清，保留沉淀。

(5)加入600μL 70％乙醇，涡旋振荡5s，12000r/min离心2min，弃上清。

(6)重复步骤(5)。

(7)开盖倒置，室温5～10min，彻底晾干残余的乙醇。

(8)加入适量洗脱缓冲液TE，65℃水浴10～60min溶解DNA，期间颠倒混匀数次助溶，最终得到DNA溶液。

(9)使用PCR引物如表1，以提取的基因组DNA为模板进行PCR检测，程序为94℃，3min；94℃30s，最适退火温度30s，72℃60s/kb，35个循环；72℃5min；4℃保存。

(10)收获转化的拟南芥T₂代种子消毒后，播种于含有Kana的1/2MS固体培养基上，7～8d后，全部为绿色健壮的植株既纯合转化体，而非纯和转化体则表现为3:1的分离(正常生长和黄化死亡植株所成的比例)。奠定为纯合的T₂代种子用作进一步分析。

纯合株系种子在1/2MS培养基培养1周后，取根尖制备玻片，在荧光显微镜下观察eGFP蛋白是否表达并拍照。

4、结果分析

图1-3中的Ⅰ为转基因株系eGFP检测；图1-3中的Ⅱ为种子表型的对照图；图1-3中的Ⅲ指种子长、宽统计分析；图1-3中的Ⅳ指千粒重统计分析；图1-3中的WT指野生型对照；图1-3中的L5和L8均为独立转基因株系。图1-3中的*与**分别表示p<0.05，p<0.01。

由图1-3中I可以看出，转基因株系L5和L8中eGFP均被检测到，说明35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP被成功转入且目的基因可成功表达翻译。因此，选择L5和L8的纯合株系用于后续研究。由图1-3中Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ可以看出，转基因株系种子的长、宽及千粒重较对照均显著增加，在T₄、T₅、T₆代中均有相同表型，说明此表型可以稳定遗传。

实施例3水稻转化及籽粒性状分析

为进一步确认ZmBES1/BZR1-5的功能，我们将35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP转化水稻(中花11)进行过量表达。

1、农杆菌介导转化水稻

(1)水稻愈伤诱导与继代

挑选成熟水稻种子并剥离颖壳，倒入50ml离心管中，加入75％乙醇消毒1min，倒掉乙醇，无菌水冲洗一遍，再加入30％次氯酸钠消毒20min后，无菌水冲洗5-6遍。用灭菌过滤纸吸干水分，将种子转移到诱导培养基上，每皿20-25颗种子。愈伤长出后用于农杆菌转化。

(2)农杆菌培养及浸染

将含35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP载体的农杆菌EHA105在含有卡那霉素和利福平的平板上划线，28℃黑暗培养2天至出现单菌落。准备浸染液，加入AS(1000倍稀释)，调整菌体浓度至OD₆₀₀为0.3-0.5，即为共培养转化水稻用的农杆菌悬浮液。

挑选愈伤状态良好，颜色鲜黄，质地圆润坚硬，颗粒直径在3mm左右的愈伤组织，放入100ml无菌三角瓶中，加入适量农杆菌悬浮液，室温放置浸染20分钟，并不时晃动。倒掉菌液，将愈伤组织放在无菌滤纸上吸去多余菌液，随即转移到铺有一层无菌滤纸的固体共培养基上，26℃黑暗培养3天。

(3)筛选培养

共培养3天后的愈伤组织转入已灭菌的三角瓶中，加入无菌水冲洗两边，第三遍用含有500ul/L羧苄青霉素的无菌水冲洗一遍，移液枪吸掉多余水分后将愈伤转移到无菌滤纸上利用超净台的风吹干愈伤上的水，吹风时间控制在30min左右，待愈伤吹干后转移到筛选培养基上进行筛选培养，培养条件28-30度，暗培养。筛选时长3-4周。

(4)分化再生与幼苗生根

筛选一个月后，将阳性愈伤挑取到分化培养基上进行分化再生。每个分化皿上放16颗阳性愈伤，置于28-30℃温室中光照培养。一般10天左右可将愈伤冒出绿点，在经过10天左右会有幼苗分化出。

待分化出的幼苗长到2-3cm左右，将幼苗转移到生根培养基上让幼苗长大，生根培养条件28-30℃，无菌光照培养。

2、PCR鉴定

(1)取水稻幼苗叶片100mg，加入液氮充分碾磨。加入400μL缓冲液FP1和6μL的RNase A(10mg/mL)，漩涡振荡1min，室温放置10min。

(2)加入130μL缓冲液FP2，充分混匀，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(3)可选步骤：将上清液再次12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(4)向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，此时会出现絮状基因组DNA。12000r/min离心2min，弃上清，保留沉淀。

(5)加入600μL 70％乙醇，涡旋振荡5s，12000r/min离心2min，弃上清。

(6)重复步骤(5)。

(7)开盖倒置，室温5～10min，彻底晾干残余的乙醇。

(8)加入适量洗脱缓冲液TE，65℃水浴10～60min溶解DNA，期间颠倒混匀数次助溶，最终得到DNA溶液。

(9)使用PCR引物如表1，以提取水稻苗叶片的基因组DNA为模板进行PCR检测，程序为94℃，3min；94℃30s，最适退火温度30s，72℃60s/kb，35个循环；72℃5min；4℃保存。

3、转基因株系籽粒性状分析

对PCR鉴定阳性的幼苗移栽大田，进行繁种，对获得的T2代株系的种子粒长、粒宽及百粒重进行统计分析。

4、结果分析

对T₂代阳性株系的籽粒统计分析表明，如图4所示，图4中的WT为野生型对照；图4中的OE-1、OE-7及OE-13均为T₂代转基因株系；图4中的A为4种不同水稻株系的种子表型；图4中的B为4种不同水稻株系的10粒种子粒长(10-KL)；图4中的C指4种不同水稻株系的10粒种子粒宽(10-KW)；图4中的D为4种不同水稻株系的千粒重(SGW)；图4中的*表示p<0.05。由图4可明显看出，转基因株系的籽粒粒长、粒宽及千粒重较野生型对照均显著增加。

实施例4玉米ZmBES1/BZR1-5基因突变体籽粒分析

1、突变体获得与鉴定

为了进一步在玉米中评估ZmBES1/BZR1-5基因对籽粒大小的影响，我们购买了ZmBES1/BZR1-5基因的UniformMu转座子插入突变体及EMS诱变的玉米突变体。

UniformMu转座子插入突变体从MaizeGDB获得，其ID为Mu1009926，转座子插入ZmBES1/BZR1-5基因的第6个外显子。EMS诱变的玉米突变体从Maize EMS induced MutantDatabase(MEMD)购买，其ID为EMS3-051de，诱变位点在第7个外显子(C10072T，CAA/TAA)导致翻译提前终止。将突变体种植于大田，于五叶期取叶片按CTAB法提取DNA，进行突变体PCR扩增鉴定。

2、突变体PCR鉴定

(1)取田间五叶期玉米叶片100mg，加入液氮充分碾磨。加入400μL缓冲液FP1和6μL的RNase A(10mg/mL)，漩涡振荡1min，室温放置10min。

(2)加入130μL缓冲液FP2，充分混匀，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(3)可选步骤：将上清液再次12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中。

(4)向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，此时会出现絮状基因组DNA。12000r/min离心2min，弃上清，保留沉淀。

(5)加入600μL 70％乙醇，涡旋振荡5s，12000r/min离心2min，弃上清。

(6)重复步骤(5)。

(7)开盖倒置，室温5～10min，彻底晾干残余的乙醇。

(8)加入适量洗脱缓冲液TE，65℃水浴10～60min溶解DNA，期间颠倒混匀数次助溶，最终得到DNA溶液。

(9)使用PCR引物EMS-F 5'-AAGCGACATGCCTCACAAGA-3'和EMS-R

5'-TGCAAGAGTAGCAAGCGACA-3'，对EMS突变体基因组DNA为模板进行PCR检测，程序为94℃，3min；94℃30s，最适退火温度30s，72℃60s/kb，35个循环；72℃5min；4℃保存。PCR扩增产物送公司测序并进行序列比对，分析突变位点。

(10)使用PCR引物Mu-F 5'-TTGGATTGGGTGCTTCAGGGGA-3'，Mu-R

5'-TTTGTCAGGCAAGGGAGGAACAACA-3'及TIR6

5'-AGAGAAGCCAACGCCAWCGCCTCYATTTCGTC-3'，对UniformMu突变体基因组DNA为模板进行PCR检测，程序为94℃，3min；94℃30s，最适退火温度30s，72℃60s/kb，35个循环；72℃5min；4℃保存。

(11)开花期，将检测阳性的突变体分别单株进行人工授粉以进行自交，获得突变纯合体后，对各植株的粒长、粒宽及百粒重分别进行统计分析。

3、结果分析

对突变体及其野生型对照的籽粒大小进行统计分析结果如图5所示，图5中的I指B73野生型与EMS突变体B1-5的表型和主要指标的对比图；图5中的II为W22野生型与UniformMu突变体W1-5表型和主要指标的对比图；图5中的A指不同玉米材料的表型对照图；图5中的B为不同玉米材料的20粒种子粒长(20-KL)；图5中的C指不同玉米材料的20粒种子粒宽(20-KW)；图5中的D指不同玉米材料的百粒重(HGW)；*表示p<0.05。由图5可明显看出，突变体与其野生型对照比较，其籽粒的粒长、粒宽与百粒重均显著降低。

虽然，上文已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 四川农业大学

<120> 玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用

<130> 2020

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1956

<212> DNA

<213> 序列

<400> 1

atgaagcacc cgctgcaccg cgacggggag tcgtacccgt cacctccgcc gcagcggcgg 60

ccgcgcgggt tcgcctccgc tcccgctccc gcggcggggg cttcgccgcg gaggcgaggt 120

gtgcaggagc gggagcggga gcgggagaag gagcggacga agctgcggga gcggcaccgg 180

cgcgccatca ctggccgcat gctggccggg ctccggcagc acggcaactt cccgctcccc 240

gcgcgcgccg acatgaacga cgtcctcgcc gccctcgccc gcgccgccgg ctggaccgtg 300

caacccgatg gcaccacctt ccgctcctcc aaccaaccac tcctgcctcc tcctccccag 360

ctgcacggag cattccaggt tgcttctgtg gaaaccccag ctttgatcaa cactctgagc 420

agttatgcca tcgggacacc attagattct caggcatcag ccctacaaac agatgacagt 480

ctgtcaccat catcactgga ctcagttgtg gcagaccgac gcataaagac tgagaaccac 540

gggaattcca gttcagtcag ctctctcaac tgtatggaca atgatcagca gttaacgaga 600

tcagtattat tccccgatga ttacacgaaa actccatata taccagttta tgcttctttg 660

cctatgggta ttattaatag tcactgtcaa ttagtggacc cagagagtgt acgcgctgag 720

ctaaggcaac tgaagtctct gaacgtggac ggggttgttg ttgactgttg gtgggggatt 780

gtagaagcct ggactcctcg gaaatatgaa tggtctggtt acagggacct ttttggtata 840

attaaagagt tcaagctgaa agttcaggtt gtattgtcat ttcatgggtc tggagagact 900

ggatctggtg atgtgttaat ctctctccca aagtggatca tggaaattgc aaaagagaac 960

caggatatat tttttacaga ccgcgaaggt agaagaaaca cagaatgcct ttcctggggg 1020

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aggagtttcc atatggaatt cagaaactta tctgaagagg gccttgtttc ttctatcgaa 1140

attggattgg gtgcttcagg ggagctaaga tatccttcat gtccagaaac aatgggctgg 1200

aaatatcctg gtattggtga gtttcagtgt tatgacaggt acatgcaaaa gaatctacgg 1260

caatcagcat tgtcccgggg tcatttgttt tgggcacgag ggcctgataa cgctggctat 1320

tataattcaa gaccacatga aactggcttt ttttgtgatg gaggcgacta tgacagctac 1380

tatggacgtt ttttccttaa ctggtactct ggagtcctca tggatcatgt cgatcaggtg 1440

ctgtcgcttg ctactcttgc atttgatggt gcagaaatag ttgtgaaggt tccatctatc 1500

tactggtggt acaggactgc gagccacgcc gcagagctca cagcggggtt ctacaacact 1560

acgaacagag acggatactc tccagttttc agaatgctca agaagcactc tgtgatcctt 1620

aagctcgtct gctacggacc cgagtacaca gttcacgaga aggacgacga cgaagcgttt 1680

gcggatccgg aaggtctaac ctggcaggtc atcaacgcgg cgtgggatca gggactaccg 1740

ctctgtatcg agagcgctct tccgtgccgt aatggtgagg cgtattcccg catcctcgac 1800

acggcgaagc ctagggacga tcctgatcgt caccatgccg cgtcctttgc gtaccgtcag 1860

cagcagcagc ccccgctccg agaagcttgc ctttcggagc tctgcacctt cgtaaagtgc 1920

atgcacgggg aggctcccca gaatggggaa ggttga 1956

<210> 2

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

acgcgtcgac atgaagcacc cgctgcaccg 30

<210> 3

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

ggactagtac cttccccatt ctggggagcc 30

<210> 4

<211> 3245

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

aattcccatg gagtcaaaga ttcaaataga ggacctaaca gaactcgccg taaagactgg 60

cgaacagttc atacagagtc tcttacgact caatgacaag aagaaaatct tcgtcaacat 120

ggtggagcac gacacgcttg tctactccaa aaatatcaaa gatacagtct cagaagacca 180

aagggcaatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga aacctcctcg gattccattg 240

cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag gaaggtggct cctacaaatg 300

ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc tctgccgaca gtggtcccaa 360

agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa gacgttccaa ccacgtcttc 420

aaagcaagtg gattgatgtg atatctccac tgacgtaagg gatgacgcac aatcccacta 480

tccttcgcaa gacccttcct ctatataagg aagttcattt catttggaga ggacagggta 540

cccggggatc ctctagagtc gacatgaagc acccgctgca ccgcgacggg gagtcgtacc 600

cgtcacctcc gccgcagcgg cggccgcgcg ggttcgcctc cgctcccgct cccgcggcgg 660

gggcttcgcc gcggaggcga ggtgtgcagg agcgggagcg ggagcgggag aaggagcgga 720

cgaagctgcg ggagcggcac cggcgcgcca tcactggccg catgctggcc gggctccggc 780

agcacggcaa cttcccgctc cccgcgcgcg ccgacatgaa cgacgtcctc gccgccctcg 840

cccgcgccgc cggctggacc gtgcaacccg atggcaccac cttccgctcc tccaaccaac 900

cactcctgcc tcctcctccc cagctgcacg gagcattcca ggttgcttct gtggaaaccc 960

cagctttgat caacactctg agcagttatg ccatcgggac accattagat tctcaggcat 1020

cagccctaca aacagatgac agtctgtcac catcatcact ggactcagtt gtggcagacc 1080

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ttgttgactg ttggtggggg attgtagaag cctggactcc tcggaaatat gaatggtctg 1380

gttacaggga cctttttggt ataattaaag agttcaagct gaaagttcag gttgtattgt 1440

catttcatgg gtctggagag actggatctg gtgatgtgtt aatctctctc ccaaagtgga 1500

tcatggaaat tgcaaaagag aaccaggata tattttttac agaccgcgaa ggtagaagaa 1560

acacagaatg cctttcctgg gggattgaca aagaacgagt ccttcgtggg agaactggca 1620

ttgaggtctg ttttgatttc atgaggagtt tccatatgga attcagaaac ttatctgaag 1680

agggccttgt ttcttctatc gaaattggat tgggtgcttc aggggagcta agatatcctt 1740

catgtccaga aacaatgggc tggaaatatc ctggtattgg tgagtttcag tgttatgaca 1800

ggtacatgca aaagaatcta cggcaatcag cattgtcccg gggtcatttg ttttgggcac 1860

gagggcctga taacgctggc tattataatt caagaccaca tgaaactggc tttttttgtg 1920

atggaggcga ctatgacagc tactatggac gttttttcct taactggtac tctggagtcc 1980

tcatggatca tgtcgatcag gtgctgtcgc ttgctactct tgcatttgat ggtgcagaaa 2040

tagttgtgaa ggttccatct atctactggt ggtacaggac tgcgagccac gccgcagagc 2100

tcacagcggg gttctacaac actacgaaca gagacggata ctctccagtt ttcagaatgc 2160

tcaagaagca ctctgtgatc cttaagctcg tctgctacgg acccgagtac acagttcacg 2220

agaaggacga cgacgaagcg tttgcggatc cggaaggtct aacctggcag gtcatcaacg 2280

cggcgtggga tcagggacta ccgctctgta tcgagagcgc tcttccgtgc cgtaatggtg 2340

aggcgtattc ccgcatcctc gacacggcga agcctaggga cgatcctgat cgtcaccatg 2400

ccgcgtcctt tgcgtaccgt cagcagcagc agcccccgct ccgagaagct tgcctttcgg 2460

agctctgcac cttcgtaaag tgcatgcacg gggaggctcc ccagaatggg gaaggtacta 2520

gtaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc 2580

tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca 2640

cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc 2700

ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca 2760

tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca 2820

tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca 2880

ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg 2940

ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga 3000

agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc 3060

tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca 3120

accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca 3180

tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca 3240

agtaa 3245

Claims (5)

1.玉米ZmBES1/BZR1-5基因在培育大籽粒植物中的应用，其特征在于，促进植物的籽粒的粒径增大，所述的粒径指籽粒的粒长和粒宽，所述玉米ZmBES1/BZR1-5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种利用如权利要求1中 所述的玉米ZmBES1/BZR1-5基因培育大籽粒植物的方法，其特征在于，上调植物中ZmBES1/BZR1-5基因的表达，以获得籽粒大小改良的植株。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述上调植物中ZmBES1/BZR1-5基因的表达：设计ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物进行该基因的PCR扩增，利用扩增产物和载体构建包含ZmBES1/BZR1-5基因的重组质粒，利用农杆菌介导将上述重组质粒转化入植物中，进行ZmBES1/BZR1-5基因过量表达，即可获得大籽粒植物。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的ZmBES1/BZR1-5基因的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2-3所示。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的重组质粒为35S-ZmBES1/BZR1-5-eGFP，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

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