CN107338257B - 水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在育种中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物基因工程技术领域，具体公开了水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在育种中的应用；所述水稻OsGrxC2基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，序列全长384bp，编码127个氨基酸；OsGrxC2基因及其编码的蛋白可用于控制植株种胚的败育程度，有剂量效应，转OsGrxC2基因纯合植株种子会发生性状分离，产生无胚或者胚退化的材料，不能留种；同时，转OsGrxC2基因纯合植株稻谷千粒重和出米率提高，提高稻米产量和品质；因此，OsGrxC2基因可用于辅助培育无胚或胚退化水稻新品系，或用于培育高千粒重和高出米率水稻新品种，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域。更具体地，涉及水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在育种中的应用。
背景技术
谷氧还蛋白（Glutaredoxins，Grxs）是一类谷胱甘肽依赖型氧化还原酶，1976 年由Holmgren等在缺失Trx基因的大肠杆菌中首次发现，普遍存在于细菌、病毒、哺乳动物和植物中的小分子蛋白，分子量约为10-15 kDa。Grxs通过调节二硫键的氧化还原发挥作用，通常含有一个保守的双巯基cys-x-x-cys或者单巯基cys-x-x-ser活性位点。植物中的Grxs是以GrxS或GrxC活性位点的第四个残基为S或C命名，根据保守活性位点残基特点被分为CC-型、CPYC-型和CGFS-型（Lemaireet al., 2004; Rouhieret al., 2004）。一些编码Grxs蛋白的cDNAs已经从多种植物中分离（Shutian Li, 2014）。Rohini在2010年研究水稻中Grxs对各种逆境的响应时已经发现了48个Grxs基因，但这些Grxs基因大多功能还不清楚。现在已经报道Grxs基因的功能有：调控植物的发育，参与DNA合成、信号传导和胁迫响应，[Fe-S]簇的聚集等（Rouhieretal., 2004, 2007）。尽管Grxs在许多种植物中已经被鉴定，但是到目前为止只有一小部分基因进行了功能研究分析。OsGrxC2是本发明人研究的一个谷氧还蛋白，推测其可能在种子贮藏过程中发挥重要的作用。
胚是水稻种子的重要组成部分，胚的发生和发育直接影响着水稻的繁殖和发育，胚在植物传宗接代以及植物形态发生中都具有非常重要的作用。水稻的胚位于颖果腹侧基部，虽然只占颖果重量的2%～3%，却是颖果最重要的组成部分。稻胚是稻株新个体的原始体，在颖果成熟时已有胚芽、胚轴、胚根和子叶等器官的分化，胚的发育对稻株的个体发生和形态建成至关重要。目前已经研究的关于种胚发育的标记基因主要包括Roc1、ATML1、SCR、RAmy1A和OSH1等。Roc1、 ATML1基因在L1层表达，对L1表皮原是一个很好的分子标记。拟南芥SCR基因特异性的定位在内皮细胞层包括皮质、内皮起始细胞。RAmy1A和OSH1分别是上皮细胞和芽尖区域的分子标记基因。但目前对水稻胚胎发育相关的分子机制和细胞活动的认识甚少。
水稻（Oryza sativa L.）是世界重要粮食作物之一，全世界半数以上的人口以其为主食，水稻生产是关系到国计民生的大事，与我国粮食安全保障密切相关。水稻育种上的每一次突破，都必然给农业生产带来一次飞跃。水稻矮秆资源的发掘和利用，使水稻种植发生了第一次飞跃。70年代水稻野败型不育系的发掘和利用，我国“三系”杂交稻培育成功,使水稻种植发生了第二次飞跃。光温敏核不育等基因资源的发掘和利用又给水稻育种的突破带来新的途径。但进入21世纪，杂交稻的育成品种大多在低水平上重复，杂交稻种植面积出现了徘徊局面。究其主要原因是三系杂交稻目前所利用亲本的遗传背景相对狭窄，受恢复基因限制，杂种优势的潜力有限。三系法育种程序和生产环节复杂，以致选育新组合的周期长、效率低、推广环节多、种子成本高，二系杂交稻也存在制种难度较大等问题，影响了杂交稻的进一步发展。常规稻产量稳定品质好，然而我国植物品种保护制度不完善，也影响其进一步的应用。
因而，培育无胚水稻新品系，控制水稻种胚的败育程度，可为水稻育种提供新的材料和思路；过去，为了解决粮食安全问题，高产一直是我国水稻育种的首要目标；如今，兼顾高产与品质，早已成为育种的新常态和新要求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷和不足，提供水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在水稻育种中的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
一种水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2，其序列如SEQ ID NO：1所示，或SEQ ID NO：1所示序列经替换、缺失和/或添加一个或多个核苷酸且与SEQ ID NO：1所述基因所编码的蛋白具有同等功能的基因序列。
所述OsGrxC2基因序列全长384bp，编码127个氨基酸。
一种由水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或序列SEQ ID NO：2所示序列经替换、缺失、或/和添加一个或几个氨基酸残基而形成的具有同等功能的氨基酸序列、功能片段和/或突变体。
含有本发明OsGrxC2基因的表达载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。
优选地，所述的宿主细胞为植物细胞、原核细胞或酵母细胞。
优选地，所述的宿主细胞为农作物细胞，具体为禾本科植物细胞，如水稻细胞。
本发明研究发现，水稻OsGrxC2基因与水稻种胚发育以及水稻的产量和品质相关，OsGrxC2基因及其编码的蛋白可用于控制植株种胚的败育程度以及稻谷千粒重和出米率。
因此，水稻OsGrxC2基因具有重要的应用价值：
应用之一为水稻OsGrxC2基因在植物育种中的应用。
应用之二为水稻OsGrxC2蛋白在植物育种中的应用。
应用之三为水稻OsGrxC2基因在调控植物种胚的败育程度中的应用。
应用之四为水稻OsGrxC2蛋白在调控植物种胚的败育程度中的应用。
具体地，所述应用为在培育无胚或胚退化植物中的应用。
具体地，所述应用为在培育高千粒重和高出米率水稻品种中的应用。
具体地，是将OsGrxC2基因在植物体内进行表达。
具体地，是通过控制OsGrxC2基因的表达量从而控制水稻种胚的败育程度。
优选地，是将OsGrxC2基因的过表达载体导入到植物中进行过表达。
所述导入方式没有限定，只要是能使过表达载体成功导入到宿主细胞的方法都可行。
优选地，本发明提供一种利用农杆菌的植物改良方法，包括如下步骤：
S1.提供携带表达载体的农杆菌，所述的表达载体含有所述蛋白编码的OsGrxC2基因；
S2.将植物细胞或组织或器官与步骤S1中的农杆菌接触，从而使所述蛋白的编码基因转入植物细胞，并且整合到植物细胞的染色体上；
S3.挑选出成功转入OsGrxC2基因的植物细胞或组织或器官；
S4.将步骤S3中的植物细胞或组织或器官再生成植物。
所述的OsGrxC2基因既可为所述基因的cDNA序列，也可为所述基因的基因组基因序列；与所述基因具有90%以上同源性且编码相同功能蛋白的DNA序列，是将所述基因的cDNA货基因组序列用已知的方法分离和/或修饰和/或设计得到的。
所述的植物包括：水稻、小麦、玉米、高粱、拟南芥等及其它禾谷类作物，也包括其他一些重要的经济作物，例如棉花、油菜或番茄等。
另外，本发明还提供一种利用所述OsGrxC2基因用于水稻育种的方法，可产生无胚或者胚退化的材料，不能留种繁殖，或培育高千粒重和高出米率水稻品种，具体包括如下步骤：
S1.分离得到水稻种胚发育相关基因OsGrxC2；
S2.通过上述改良植物的方法获得OsGrxC2过量表达转基因TO代株系；
S3.TO代转基因株系后代F1出现分离比，去除野生型植株，保留F1代转基因纯合植株；
S4.F1代转基因纯合株系的下代植株的基因表达量呈现剂量效应，基因表达量高的植物会出现种胚退化至败育的现象（败育率15～50%），下一代种子由于无胚率高而达不到种子发芽率要求，不能留种繁殖。
本发明OsGrxC2过量表达水稻植株后代会出现不同程度的种胚退化至败育的现象，而且稻谷千粒重和出米率提高，提高了稻米产量和品质。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明的OsGrxC2基因及其编码蛋白可用于控制水稻种胚的败育程度，转OsGrxC2基因植株种子的下代材料会发生性状分离，产生无胚或者胚退化的材料，不能留种繁殖；同时，转OsGrxC2基因纯合植株稻谷千粒重和出米率提高，提高了稻米产量和品质，在水稻育种中具有广阔的应用前景。
（2）本发明OsGrxC2基因与水稻种胚发育有关，为我们研究控制种胚相关基因的表达调控提供了材料，也有助于植物种胚发育机制的研究。
附图说明
图1为水稻OsGrxC2基因过量表达转基因株系与受体品种“中花11（WT）”的表达量检测。转基因株系的表达量与WT相比都显著增加，特别是OE11和OE12表达量是WT的45倍左右。
图2为OsGrxC2基因在水稻不同组织中的表达模式分析。OsGrxC2基因在种子种的表达量比其他组织中的表达量高，25d种子的表达量是茎中表达量的35倍。
图3为水稻OsGrxC2基因过量表达株系与WT株系的种胚形态的比较。
其中，3A显示，水稻OsGrxC2基因过量表达转基因株系表达量高的（OE11和OE12）出现水稻种胚退化至败育。
3B显示，3A中的水稻种子吸水萌发12h后进行TTC染色。WT、OE2和OE6种胚正常并且有活力，而OE11和OE12水稻种胚已经退化完全检测不到活力。
图4为水稻OsGrxC2基因过量表达株系与WT株系的千粒重分析。转基因株系的千粒重比WT高，而且水稻种胚退化株系（OE11）千粒重增加更显著，可提高水稻出米率。
图5为水稻WT与OE11开花后5d、7d和10d种胚发育过程形态观察；其中，5A显示，WT植株开花后5d形成胚芽鞘，进行胚芽鞘和腹鳞分化。开花后7d形成幼胚，已经进行了第1叶原基分化。WT植株开花后10d形成成熟胚。但是OE11植株开花后5d，7d，10d胚的发育情况不正常，形成畸形胚。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1 OsGrxC2基因过表达载体的构建及转基因水稻植株的获得
1、水稻的培养
水稻种子放在50ml的三角瓶中个，先用75%酒精消毒90s，再用2.5%的次氯酸钠消毒45min，无菌水冲洗5次后，放在无菌滤纸上晾干，最后播种在灭菌的MS固体培养基（1.5%蔗糖，0.8%琼脂，pH 5.8）上，16h / 8h（28℃）的昼夜交替，白炽灯光照培养。
2、水稻RNA提取：采用本领域常规的Trizol法提取水稻RNA。
3、逆转录反应（cDNA合成）
用Takara公司的反转录试剂盒进行逆转录反应，反应体系和反应条件参考试剂盒说明书。
4、目的基因的PCR扩增
根据OsGrxC2基因的CDS以及酶切信息，分别选取合适的酶切位点将目的片段克隆到Pcambia1390表达载体上，其中所用引物如下：
5’端寡核苷酸引物序列为：
5’- ggatccATGGGAATCGCCTCCTCC -3’（SEQ ID NO：3）
3’端引物序列为：
5’- ggatccCTATGCGGTGATTGTCGTCTTTG -3’（SEQ ID NO：4）
PCR反应体系：10×Buffer 2μL，10 mM dNTP mix 2μL，MgSO4 0.8μL，Primer N（10μmol/L）0.5μL，Primer C（10 μmol/L）0.5μL，DNA模板1μL，KOD酶（2.5U/μl）0.5μL，ddH2O补充至20μL；
PCR反应程序：98℃变性2 min；按98℃ 10s，56℃ 30s，68℃ 30s共28个循环；68℃终延伸延伸6 min。
5、构建基因的过表达载体
过量表达OsGrxC2用的是PHQSN1载体，该载体由植物表达载体pCAMBIA1390改造而来，含有一个细菌复制起始点（ori）、卡那霉素基因、潮霉素抗性基因（Hygr）、UBI和CaMV35S启动子，NOS基因的终止信号序列以及后两者之间的限制性内切酶克隆位点（MCS）。将目标基因的编码序列克隆到UBI启动子之后，能够在其强驱动下获得很高的表达。
（1）OsGrxC2编码序列的克隆：
首先以水稻“中花11”（WT）的RNA为模板，合成第一条cDNA，用该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸为引物（SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4），用高保真Taq酶KOD进行扩增，获得含有酶切位点全长CDS 396bp的cDNA扩增产物。并将该产物加A克隆到PMD18-T载体，并对多个重组子进行测序，以验证序列的正确性。该重组的过渡质粒载体成为OsGrxC2-PMD18-T。
（2）将OsGrxC2-PMD18-T以及PHQSN1载体用BamH1单酶切后在将粘性末端连接，连接物转化大肠杆菌DH5α，在含有Kan（50μg/mL）的LB培养基上筛选转化子，挑选单菌落提取质粒，用BamH1酶切挑选出有约396bp片段插入的克隆，并用5’端引物测序检验核苷酸序列是否正确，并选择OsGrxC2正向连接表达载体的质粒进行下一步实验。正向成功构建OsGrxC2-PHQSN1质粒。把OsGrxC2-PHQSN1质粒转化农杆菌A. tumefaciens EHA105，在含有卡那霉素和利福平的培养基上挑取单克隆，并用PCR鉴定阳性克隆。
6、EHA105介导的水稻转化：
用农杆菌转化野生型中花11愈伤，经过预培养、侵染、共培养、筛选具有抗性的愈伤组织，分化、生根、炼苗移栽，得到转基因植株。农杆菌介导的水稻遗传转化体系主要应用Hiei等人报道的方法（参见Agrobacterium-mediated transformation of rice usingimmature embryos or calli induce from mature seed，2008，Nature protocol. Doi:10. 1038/nprot. 2008.46）基础上进行。
（1）挑选饱满的成熟种子去壳，用75%的酒精消毒90s，用2.5%NaCLO溶液摇45min，180rpm。无菌水漂洗3～5次，风干，铺在NBO培养基上，26℃暗培养4周，15天继代一次。
（2）将农杆菌在LB培养基上划线涂板，28℃暗培养3天。
（3）挑取单菌落接种到5ml含抗生素的LB液体培养基中，28℃震荡培养过夜。
（4）将新鲜的农杆菌菌液离心，收集（浓度适中）放入AAM液体培养基中，26℃避光培养2～5h。
（5）选择致密的愈伤组织颗粒（直径3～5mm）用于转化。将待转化的愈伤组织颗粒在准备好的AAM菌液中浸染5min，放在无菌滤纸上除去过多的菌液后，转移到共培养培养基中28℃暗培养3天。
（6）共培养后，用无菌水洗3次，用AAM培养液润洗一次，，吹干愈伤组织，然后将愈伤组织转移到筛选培养基含抗生素上筛选1个月。
（7）筛选后的抗性愈伤组织转移到分化培养基含抗生素上在光照条件下26℃继续培养至分化出绿苗。把小苗转移到生根培养基含抗生素中培养，将其从生根培养基中移除，洗净残留培养基，在清水中炼苗。当白色的新根长出时，将其移栽到温室或大田。
经筛选的阳性植株移至土壤生长，待成熟收集种子即得To代植株，经过HPT（潮霉素）筛选及半定量RT-PCR分析，我们从筛选到的株系中选择四个株系OE2、OE6、OE11和OE12进行后续实验。其表达量结果如图1所示，该四个株系中OsGrxC2基因表达水平较野生型均明显上调，且株系OE11和OE12上调非常显著，并出现了无种胚的种子，为后续实验提供了较为理想的研究材料。
实施例2 OsGrxC2基因的功能鉴定
1、OsGrxC2基因的组织定位观察
研究OsGrxC2基因的组织定位情况，分别于水稻4叶期、分蘖期、抽穗期取相应组织或器官提取总RNA，以OsActin为内参进行RT-qPCR检测，对OsGrxC2的组织特异性进行分析。结果如图2所示，在根、茎、分蘖期叶片、抽穗期剑叶、蘖、花序和种子中均能检测到该基因的表达，其在种子中表达水平最高，特别是蜡熟期种子表达量为茎中的45倍左右。该结果表明，OsGrxC2基因的表达并无组织特异性，是组成型表达基因，在种子成熟期表达量较高。其中所用的引物如下：
OsGrxC2的5’端寡核苷酸引物序列为：
5’- GGCACTTGCTGAATGGAC -3’（SEQ ID NO：5）
3’端引物序列为：
5’- TGCGGTGATTGTCGTCTT -3’（SEQ ID NO：6）
OsActin的5’端寡核苷酸引物序列为：
5’- GGAACTGGTATGGTCAAGGCT -3’（SEQ ID NO：7）
3’端引物序列为：
5’- ACACGGAGCTCGTTGTAGAAG -3’（SEQ ID NO：8）
2、转OsGrxC2基因水稻株系种胚的表型分析
表达量较高的转OsGrxC2基因水稻株系（OE11和OE12）后代出现了种胚退化至败育的现象（图3）。为了观察种胚退化至败育的情况，把WT和OE11胚退化种子用清水处理12h，然后纵切种子，进行TTC染色30min，然后在体式显微镜下观察胚的情况（图3）。发现WT与表达量低的转基因（OE2和OE6）种子被染成红色，说明WT、OE2和OE6种子有活力；但是OE11和OE12种子不能被染成红色而且没有萌发的迹象，说明OE11和OE12种胚已经退化至败育，没有活力，不能萌发产生后一代。成熟OsGrxC2过量表达种子粒重增加，表达量较高的株系OE12增加更明显（图4），增加了稻米的品质及出米率。为了进一步观察无胚材料的种胚退化过程，我们对WT和OE11种子进行5d、7d和10d发育阶段进行取材，然后进行石蜡切片，并用甲苯胺蓝染色，用正直荧光显微镜进行观察。结果发现OE11种子与WT相比在5d时开始种胚退化、形成畸形胚，如不进行根芽原基、胚芽鞘和腹鳞分化，细胞数量也较少（图5C-5E）；在7d时OE11细胞数量增多但是也不进行第2叶原基分化（图5H-5J）；在10d时OE11细胞数量减少，没有盾片的吸收细胞层分化（图5M-5O），形成不正常的胚而不能留种。推测OsGrxC2过量表达影响细胞胚的分化。
其中，石蜡切片依照以下步骤完成：
1）取材：取WT与OE11开花后5d、7d和10d种子，固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
2）脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h→85%酒精2h→90%酒精2h→95%酒精1h→无水乙醇I 30min→无水乙醇II 30min→醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min→二甲苯II 5-10min→蜡I 1h→蜡II 1h→蜡III 1h。
3）包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冰箱冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4）切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烘箱内烤片。
5）石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min→二甲苯Ⅱ20min→无水乙醇Ⅰ10min→无水乙醇Ⅱ10min→95%酒精5min→90%酒精5min→80%酒精5min→70%酒精5min→蒸馏水洗。
6）染色：甲苯胺蓝染液染色10min。
7）分化：95%酒精分化。
8）封片：电吹风吹干或烘箱吹干；二甲苯透明数分钟，中性树胶封片。
9）显微镜镜检，图像采集分析。
序列表
<110> 广东省农业科学院农业生物基因研究中心
<120> 水稻谷氧还蛋白基因OsGrxC2在育种中的应用
<130> 1712557ZBSH042
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 384
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 1
atgggaatcg cctcctcctc ctcctcgacc ccggaatcca ggaagatggc gctcgccaag 60
gccaaggaga ccgtcgcctc cgctcccgtc gtcgtctaca gcaagtctta ctgtcctttt 120
tgcgtccgtg tgaagaagtt gttcgagcag cttggagcaa ctttcaaggc cattgagttg 180
gatggggaga gtgatggatc tgagctgcag tcggcacttg ctgaatggac tggacaaagg 240
actgttccaa atgtcttcat caatgggaag catattggtg gctgtgatga tactttggca 300
ttgaacaatg aagggaagct ggtgcctctg ctgaccgagg ctggagcaat tgccagttct 360
gcaaagacga caatcaccgc atag 384
<210> 2
<211> 127
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
Met Gly Ile Ala Ser Ser Ser Ser Ser Thr Pro Glu Ser Arg Lys Met
1 5 10 15
Ala Leu Ala Lys Ala Lys Glu Thr Val Ala Ser Ala Pro Val Val Val
20 25 30
Tyr Ser Lys Ser Tyr Cys Pro Phe Cys Val Arg Val Lys Lys Leu Phe
35 40 45
Glu Gln Leu Gly Ala Thr Phe Lys Ala Ile Glu Leu Asp Gly Glu Ser
50 55 60
Asp Gly Ser Glu Leu Gln Ser Ala Leu Ala Glu Trp Thr Gly Gln Arg
65 70 75 80
Thr Val Pro Asn Val Phe Ile Asn Gly Lys His Ile Gly Gly Cys Asp
85 90 95
Asp Thr Leu Ala Leu Asn Asn Glu Gly Lys Leu Val Pro Leu Leu Thr
100 105 110
Glu Ala Gly Ala Ile Ala Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ile Thr Ala
115 120 125
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 3
ggatccatgg gaatcgcctc ctcc 24
<210> 4
<211> 29
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 4
ggatccctat gcggtgattg tcgtctttg 29
<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 5
ggcacttgct gaatggac 18
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 6
tgcggtgatt gtcgtctt 18
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 7
ggaactggta tggtcaaggc t 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 8
acacggagct cgttgtagaa g 21
Claims (7)
1.SEQ ID NO：1所述基因或SEQ ID NO：2所述蛋白在调控水稻种胚的败育程度中的应用。
2.SEQ ID NO：1所述基因或SEQ ID NO：2所述蛋白在培育无胚或胚退化水稻品种中的应用。
3.SEQ ID NO：1所述基因或SEQ ID NO：2所述蛋白在培育高千粒重和高出米率水稻品种中的应用。
4.根据权利要求2或3任一项所述的应用，其特征在于，将SEQ ID NO：1所述基因在水稻体内进行表达。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述表达为过表达。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，构建过量表达SEQ ID NO：1所述基因的重组表达载体，并转化水稻植株。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过控制SEQ ID NO：1所述基因的表达量从而控制水稻种胚的败育程度。
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