CN112577793A - 一种双层膜过滤杯及其应用 - Google Patents
一种双层膜过滤杯及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112577793A CN112577793A CN201910932553.3A CN201910932553A CN112577793A CN 112577793 A CN112577793 A CN 112577793A CN 201910932553 A CN201910932553 A CN 201910932553A CN 112577793 A CN112577793 A CN 112577793A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- membrane
- filter
- filter cup
- aperture
- double
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims abstract description 175
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 64
- 239000010410 layer Substances 0.000 claims description 65
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims description 37
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims description 37
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims description 37
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 18
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 12
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 12
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 10
- 238000007447 staining method Methods 0.000 claims description 10
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 claims description 5
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 claims description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 claims description 2
- 239000003012 bilayer membrane Substances 0.000 claims 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 21
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 15
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 13
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 11
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 6
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 6
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 6
- WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 4-hexylbenzene-1,3-diol Chemical compound CCCCCCC1=CC=C(O)C=C1O WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 5
- 241001251200 Agelas Species 0.000 description 4
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 235000015655 Crocus sativus Nutrition 0.000 description 3
- 244000124209 Crocus sativus Species 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical group OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000004248 saffron Substances 0.000 description 3
- 235000013974 saffron Nutrition 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000218232 Artocarpus Species 0.000 description 2
- DKNPRRRKHAEUMW-UHFFFAOYSA-N Iodine aqueous Chemical compound [K+].I[I-]I DKNPRRRKHAEUMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBIXEXWLHSRNKB-UHFFFAOYSA-N ammonium oxalate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C([O-])=O VBIXEXWLHSRNKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 2
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 2
- KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N auramine O Chemical compound [H+].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000983 mordant dye Substances 0.000 description 2
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 2
- 241000592335 Agathis australis Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 240000008154 Piper betle Species 0.000 description 1
- 235000008180 Piper betle Nutrition 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- -1 carbolic acid compound Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D36/00—Filter circuits or combinations of filters with other separating devices
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
- G01N1/4005—Concentrating samples by transferring a selected component through a membrane
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种双层膜过滤杯及其应用。所述双层膜过滤杯包括由上至下依次连接的过滤杯主体、环形结构和连接座；所述过滤杯主体底部中间设有圆孔；所述过滤杯主体与所述环形结构可拆卸连接，连接处设有用于托住大孔径滤膜的网状滤膜底托；所述环形结构与所述连接座可拆卸连接；所述连接座内设有用于托住小孔径滤膜的砂芯滤板；所述连接座底部设有空心圆柱结构；所述大孔径滤膜可通过将所述环形结构卸下取出；所述小孔径滤膜可通过将所述连接座卸下取出。本发明的过滤杯在富集膜上加一层孔径较大的滤膜作为初滤，把待测样本中较大颗粒的杂质先截留住，避免堵住孔径较小的富集膜。通过实验证明：利用该双层膜过滤杯检测样本中细菌的灵敏度更高。
Description
技术领域
本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种双层膜过滤杯及其应用。
背景技术
对细菌进行涂片染色制片并镜检是医学检验中诊断细菌感染性疾病的常用手段，也是生物学研究中区分不同类型细菌的重要手段。传统的涂片染色方法是先使样本中的细菌通过火焰加热法、冷冻干燥法或化学法等粘附固定在玻片上，然后滴加染液对细菌进行着色，最后清洗染液滴加镜油于显微镜下镜检。由于该方法检出率低、操作复杂、受人为因素影响较大，因此近几年出现了一些先富集细菌再进行染色制片的方法，其中膜过滤富集能有效的把细菌截留在膜上，达到良好的富集效果。但痰液的成分十分复杂，粘度可大可小，很多痰液样本消化后其中的杂质容易堵住膜孔发生堵膜现象，样本过不了膜导致检测失效。
发明内容
本发明的目的是提供一种双层膜过滤杯及其在检测待测样本中细菌中的应用。
本发明首先保护一种双层膜过滤杯，所述双层膜过滤杯包括由上至下依次连接的过滤杯主体、环形结构和连接座；
所述过滤杯主体底部中间设有圆孔；
所述过滤杯主体与所述环形结构可拆卸连接，连接处设有用于托住大孔径滤膜的网状滤膜底托；
所述环形结构与所述连接座可拆卸连接；
所述连接座内设有用于托住小孔径滤膜的砂芯滤板；
所述连接座底部设有空心圆柱结构；
所述大孔径滤膜可通过将所述环形结构卸下取出；
所述小孔径滤膜可通过将所述连接座卸下取出。
上述双层膜过滤杯中，所述双层膜过滤杯还包括与所述过滤杯主体配套的杯封盖。
进一步的，所述过滤杯主体底部围绕所述圆孔设有向下延伸的上夹层内套(上夹层内套采用中空结构)；所述环形结构的内侧壁设有第一L形台阶，所述上夹层内套通过所述第一L形台阶与所述环形结构紧配合；
所述上夹层内套(上夹层内套中空结构)底部设有用于托住大孔径滤膜的网状滤膜底托，所述网状滤膜底托与所述环形结构的第一L形台阶固定连接，所述网状滤膜底托与所述上夹层内套之间设有密封垫；
所述环形结构设有向下延伸的下夹层内套(下夹层内套采用中空结构)，所述连接座设有供所述下夹层内套插入的第二L形台阶，所述下夹层内套通过所述第二L形台阶与所述连接座紧配合；
所述下夹层内套(下夹层内套中空结构)底部设有用于托住小孔径滤膜的砂芯滤板，所述连接座设有供所述砂芯滤板插入的第三L形台阶，所述砂芯滤板通过所述第三L形台阶与所述连接座紧配合；
所述砂芯滤板与所述下夹层内套之间设有密封垫。
更进一步的，所述过滤杯主体与所述环形结构通过螺纹连接；
所述环形结构与所述连接座通过螺纹连接；
所述网状滤膜底托边缘与所述环形结构的第一L形台阶通过粘贴作用连接。
上述双层膜过滤杯中，所述滤膜可为PVDF膜、PC膜或不锈钢网。
进一步的，所述大孔径滤膜可为PVDF膜；所述小孔径滤膜可为PC膜。
更进一步的，所述大孔径滤膜的孔径可为5-12μm；所述小孔径滤膜的孔径可为0.2-0.8μm。
在实际应用中，可根据检测对象的不同选择孔径大小合适的滤膜，如检测对象为痰液时，大孔径滤膜的孔径为5μm，小孔径滤膜的孔径为0.8μm。
上述双层膜过滤杯中，所述砂芯滤板孔径可为5-10μm，具体可为10μm。
上述双层膜过滤杯中，所述圆孔直径可为4-6mm，具体可为5mm。
本发明还保护一种产品，所述产品包括上述双层膜过滤杯和抽滤装置。
上述产品中，所述抽滤装置可为负压抽滤装置或自动过滤染色制片机。在本发明的一个具体实施例中，所述负压抽滤装置为Agela负压SPE装置。
上述双层膜过滤杯或产品在富集待测样本中细菌或检测待测样本中细菌中的应用也均属于本发明的保护范围。
本发明还保护利用上述双层膜过滤杯检测待测样本中细菌的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)拧开上述双层膜过滤杯的杯封盖，加入待测样本；
(2)完成步骤(1)后，将上述双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入抽虑装置中进行抽滤，使所述待测样本中的细菌截留在小孔径滤膜上；
(3)完成步骤(2)后，采用染色法对截留在小孔径滤膜上的细菌进行染色；
(4)完成步骤(3)后，将所述双层膜过滤杯的连接座卸下，取出小孔径滤膜并进行镜检，实现待测样本中细菌的检测。
上述方法中，所述染色法可为抗酸染色法或荧光染色法或革兰氏染色法。
上述应用或方法中，所述待测样本可为痰液、血液或髓液等。在本发明的一个具体实施例中，所述待测样本为痰液或菌液。
本发明提供了一种双层膜过滤杯，该双层膜过滤杯在富集膜上加一层孔径较大的滤膜作为初滤，把痰液样本中较大颗粒的杂质先截留住，避免堵住孔径较小的富集膜。通过实验证明：基于本发明的双层膜过滤杯检测痰液中细菌的最低检测限比现有技术中的直接涂片法低，说明本发明检测方法的灵敏度更高，且具有安全、自动化、操作简便和检出率高的优点，在细菌检测与诊断领域具有良好的应用前景。
附图说明
图1为双层膜过滤杯的结构图。1、杯封盖；2、过滤杯主体；3、环形结构；4、连接座；5、网状滤膜底托；6、砂芯滤板、7、上夹层内套；8、下夹层内套；9、第一L形台阶；10、第二L形台阶；11、第三L形台阶；12、圆孔；13、空心圆柱结构。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的砂芯滤板是石家庄瑞登塑料制品有限公司的产品，货号为VSP-666，孔径大小为10μm。
实施例1、双层膜过滤杯及其使用方法
一、双层膜过滤杯
本发明的双层膜过滤杯由杯体和与所述杯体配套的杯封盖1组成，所述杯体周壁封闭，底部设有空心圆柱结构13；
所述杯体包括由上至下依次连接的过滤杯主体2、环形结构3和连接座4；所述过滤杯主体2与所述环形结构3可拆卸连接；所述环形结构3与所述连接座4可拆卸连接。
所述过滤杯主体2底部中间设有圆孔12(圆孔直径为5mm)。
所述过滤杯主体2底部围绕所述圆孔12设有向下延伸的上夹层内套7，所述上夹层内套7采用中空结构；所述环形结构3的内侧壁设有第一L形台阶9，所述上夹层内套7通过所述第一L形台阶9与所述环形结构3紧配合。在所述上夹层内套7的中空结构底部设有用于托住大孔径滤膜(孔径为5μm的PVDF膜)的网状滤膜底托5，所述网状滤膜底托5边缘与所述环形结构的第一L形台阶9通过粘贴作用固定连接，所述网状滤膜底托5与所述上夹层内套7之间设有密封垫。
所述环形结构3设有向下延伸的下夹层内套8，所述下夹层内套8采用中空结构；所述连接座4设有供所述下夹层内套8插入的第二L形台阶10，所述下夹层内套8通过所述第二L形台阶10与所述连接座4紧配合。
所述下夹层内套8的中空结构底部设有用于托住小孔径滤膜(孔径为0.8μm的PC膜)的砂芯滤板6(孔径为10μm)，所述连接座4设有供所述砂芯滤板6插入的第三L形台阶11，所述砂芯滤板6通过所述第三L形台阶11与所述连接座4紧配合；所述砂芯滤板6与所述下夹层内套8之间设有密封垫。
所述连接座底部设有空心圆柱结构13。
所述小孔径滤膜可通过将所述环形结构3拧下取出。
所述小孔径滤膜可通过将所述连接座4拧下取出。
二、双层膜过滤杯的使用方法
1、拧开双层膜过滤杯的杯封盖，加入待测样本。
2、完成步骤1后，将双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入负压抽虑装置或自动过滤染色制片机中进行负压抽滤，待测样本在压力差下先通过上层孔径较大的滤膜进行初滤，把待测样本中较大颗粒的杂质先截留住再通过下层孔径较小的滤膜进行细菌富集，最终细菌被截留在下层孔径较小的滤膜上。
3、完成步骤2后，向双层膜过滤杯中加入染色液进行染色、脱色、复染、清洗。
4、完成步骤3后，将连接座拧下，取出小孔径滤膜，并对滤膜进行镜检。
实施例2、双层膜过滤杯在抗酸染色法镜检抗酸菌中的应用
本实施例中的痰液样本来源于经诊断为结核病患者的痰液。分别采用本发明的双层膜过滤杯进行抗酸染色法镜检抗酸菌和直接涂片法检测痰液样本中的抗酸菌。
一、实验组
1、样本的消化处理
将痰液样本和痰碱性消化液等体积混匀，室温消化30min，得到消化后的痰液样本。
2、消化产物的过滤
(1)将实施例1中的双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入负压抽虑装置(Agela负压SPE装置)中，拧开双层膜过滤杯的杯封盖，加入消化后的痰液样本，进行负压抽滤。
(2)痰液在压力差下先通过上层大孔径滤膜，再通过下层小孔径滤膜。
3、抗酸染色法镜检抗酸菌
(1)向双层膜过滤杯中加入初染液(购自珠海贝索，主要成分为石碳酸复红)，浸泡滤膜1-20min，负压抽滤干净。
(2)向双层膜过滤杯中加入洗脱液(购自珠海贝索，成分为酸性酒精)，浸泡滤膜1-5min，负压抽滤干净。
(3)向双层膜过滤杯中加入复染液(购自珠海贝索，主要成分为亚甲基蓝)，浸泡滤膜1-5min，负压抽滤干净。
(4)从双层膜过滤杯中取出小孔径滤膜，截留细菌面向上置于玻片上，往中间滴加镜油，显微镜下观察染色细菌。
二、对照组
1、挑取适量痰液样本置于玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2、待冷却后放置在染色架上，滴加初染液(购自珠海贝索，主要成分为石碳酸复红)，盖满痰膜，染色20min。
3、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
4、滴加洗脱液(购自珠海贝索，成分为酸性酒精)，布满痰膜，脱色1min。
5、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去标本上剩余的水。
6、滴加复染液(购自珠海贝索，主要成分为亚甲基蓝)，盖满痰膜，复染1min。
7、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的水，自然干燥或烘箱烘干。
8、向菌膜中间滴加镜油，置于显微镜下观察染色细菌。
三、检测结果
基于本发明的双层膜过滤杯进行抗酸染色法镜检抗酸菌和对照组的检测结果如表1所示。结果表明：基于本发明的双层膜过滤杯进行抗酸染色法镜检抗酸菌的最低检测限比现有技术中的直接涂片法低，说明本发明检测方法的灵敏度更高。
表1、抗酸染色法镜检抗酸菌的结果
| 抗酸菌浓度/mL | 3×10<sup>6</sup>条 | 3×10<sup>5</sup>条 | 3×10<sup>4</sup>条 | 3×10<sup>3</sup>条 | 3×10<sup>2</sup>条 | 0条 |
| 本发明方法 | ++++ | +++ | ++ | + | - | - |
| 直接涂片法 | + | + | - | - | - | - |
注：“-”代表阴性；“+”代表3～9个抗酸菌/300视野；“++”代表1～9个抗酸菌/10视野；“+++”代表1～9个抗酸菌/1视野；“++++”代表≥10个抗酸菌/1视野。
实施例3、双层膜过滤杯在荧光染色法镜检抗酸菌中的应用
本实施例中的痰液样本来源于经诊断为结核病患者的痰液。分别采用本发明的双层膜过滤杯进行荧光染色法镜检抗酸菌和直接涂片法检测痰液样本中的抗酸菌。
一、实验组
1、样本的消化处理
将痰液样本和痰碱性消化液等体积混匀，室温消化30min，得到消化后的痰液样本。
2、消化产物的过滤
(1)将实施例1中的双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入负压抽虑装置(Agela负压SPE装置)中，拧开双层膜过滤杯的杯封盖，加入消化后的痰液样本，进行负压抽滤。
(2)痰液在压力差下先通过大孔径滤膜，再通过小孔径滤膜。
3、荧光染色法镜检抗酸菌
(1)向双层膜过滤杯中加入初染液(购自珠海贝索，主要成分为金胺O)，浸泡滤膜1-20min，负压抽滤干净。
(2)向双层膜过滤杯中加入洗脱液(购自珠海贝索，成分为酸性酒精)，浸泡滤膜1-5min，负压抽滤干净。
(3)向双层膜过滤杯中加入复染液(购自珠海贝索，主要成分为高锰酸钾)，浸泡滤膜1-5min，负压抽滤干净。
(4)从双层膜过滤杯中取出小孔径滤膜，截留细菌面向上置于玻片上，往中间滴加镜油，荧光显微镜下观察染色细菌。
二、对照组
1、挑取适量痰液置于玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2、待冷却后放置在染色架上，滴加初染液(购自珠海贝索，主要成分为金胺O)，盖满痰膜，染色20min。
3、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
4、滴加洗脱液(购自珠海贝索，成分为酸性酒精)，布满痰膜，脱色1min。
5、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去标本上剩余的水。
6、滴加复染液(购自珠海贝索，主要成分为高锰酸钾)，盖满痰膜，复染1min。
7、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的水，自然干燥或烘箱烘干。
8、向菌膜中间滴加镜油，置于荧光显微镜下观察染色细菌。
三、检测结果
基于本发明的双层膜过滤杯进行荧光染色法镜检抗酸菌和对照组的检测结果如表2所示。结果表明：基于本发明的双层膜过滤杯进行荧光染色法镜检抗酸菌的最低检测限比现有技术中的直接涂片法低，说明本发明检测方法的灵敏度更高。
表2、荧光染色法镜检抗酸菌的结果
| 抗酸菌浓度/mL | 3×10<sup>5</sup>条 | 3×10<sup>4</sup>条 | 3×10<sup>3</sup>条 | 3×10<sup>2</sup>条 | 3×10<sup>1</sup>条 | 0条 |
| 本发明方法 | ++++ | +++ | ++ | + | - | - |
| 直接涂片法 | ++ | + | - | - | - | - |
注：“-”代表阴性；“+”代表3～9个抗酸菌/300视野；“++”代表1～9个抗酸菌/10视野；“+++”代表1～9个抗酸菌/1视野；“++++”代表≥10个抗酸菌/1视野。
实施例4、双层膜过滤杯在革兰氏染色法镜检细菌中的应用
本实施例中的痰液样本来源于经诊断为结核病患者的痰液。分别采用本发明的双层膜过滤杯进行革兰氏染色法镜检细菌和直接涂片法检测痰液样本中的细菌。
一、实验组
1、样本的消化处理
将痰液样本和痰碱性消化液等体积混匀，室温消化30min，得到消化后的痰液样本。
2、消化产物的过滤
(1)将实施例1中的双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入负压抽虑装置(Agela负压SPE装置)中，拧开双层膜过滤杯的杯封盖，加入消化后的痰液样本，进行负压抽滤。
(2)痰液在压力差下先通过上层大孔径滤膜，再通过下层小孔径滤膜。
3、革兰氏染色法镜检细菌
(1)向双层膜过滤杯中加入初染液(购自珠海贝索，主要成分为草酸铵结晶紫染)，浸泡滤膜1min，负压抽滤干净。
(2)向双层膜过滤杯中加入无菌水，负压抽滤干净。
(3)向双层膜过滤杯中加入媒染染液(购自珠海贝索，主要成分为碘-碘化钾)，浸泡滤膜1min，负压抽滤干净。
(4)向双层膜过滤杯中加入脱色液(购自珠海贝索，成分为乙醇(95％)或丙酮酸)，浸泡滤膜30s，负压抽滤干净。
(5)向双层膜过滤杯中加入复染液(购自珠海贝索，成分为蕃红染液或者沙黄)，浸泡滤膜30s，负压抽滤干净。
(6)从双层膜过滤杯中取出小孔径滤膜，截留细菌面向上置于玻片上，往中间滴加镜油，显微镜下观察染色细菌。
二、对照组
1、挑取适量痰液置于玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2、待冷却后放置在染色架上，滴加初染液(购自珠海贝索，主要成分为草酸铵结晶紫)，盖满菌膜，染色1min。
3、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
4、滴加媒染染液(购自珠海贝索，主要成分为碘-碘化钾)，布满菌膜，浸泡玻片1min，负压抽滤干净。
5、滴加洗脱液(购自珠海贝索，成分为乙醇(95％)或丙酮酸)，布满菌膜，脱色30s。
6、滴加复染液(购自珠海贝索，成分为蕃红染液或者沙黄)，盖满菌膜，复染30s。
7、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的水，自然干燥或烘箱烘干。
8、向菌膜中间滴加镜油，置于显微镜下观察染色细菌。
三、检测结果
基于本发明的双层膜过滤杯进行革兰氏染色法镜检细菌和对照组的检测结果如表3所示。结果表明：基于本发明的双层膜过滤杯进行革兰氏染色法检测革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的最低检测限比现有技术中的直接涂片法低，说明本发明检测方法的灵敏度更高。
表3、革兰氏染色法镜检细菌的结果
| 阳性菌浓度/mL | 3×10<sup>6</sup>条 | 3×10<sup>5</sup>条 | 3×10<sup>4</sup>条 | 3×10<sup>3</sup>条 | 3×10<sup>2</sup>条 | 0条 |
| 本发明方法 | ++++ | +++ | ++ | + | - | - |
| 直接涂片法 | + | - | - | - | - | - |
| 阴性菌浓度/mL | 3×10<sup>6</sup>条 | 3×10<sup>5</sup>条 | 3×10<sup>4</sup>条 | 3×10<sup>3</sup>条 | 3×10<sup>2</sup>条 | 0条 |
| 本发明方法 | ++++ | +++ | ++ | + | - | - |
| 直接涂片法 | + | - | - | - | - | - |
注：“-”代表阴性；“+”代表3～9个细菌/300视野；“++”代表1～9个细菌/10视野；“+++”代表1～9个细菌/1视野；“++++”代表≥10个细菌/1视野。
Claims (10)
1.一种双层膜过滤杯，其特征在于：所述双层膜过滤杯包括由上至下依次连接的过滤杯主体、环形结构和连接座；
所述过滤杯主体底部中间设有圆孔；
所述过滤杯主体与所述环形结构可拆卸连接，连接处设有用于托住大孔径滤膜的网状滤膜底托；
所述环形结构与所述连接座可拆卸连接；
所述连接座内设有用于托住小孔径滤膜的砂芯滤板；
所述连接座底部设有空心圆柱结构；
所述大孔径滤膜可通过将所述环形结构卸下取出；
所述小孔径滤膜可通过将所述连接座卸下取出。
2.根据权利要求1所述的双层膜过滤杯，其特征在于：所述双层膜过滤杯还包括与所述过滤杯主体配套的杯封盖。
3.根据权利要求1或2所述的双层膜过滤杯，其特征在于：所述过滤杯主体底部围绕所述圆孔设有向下延伸的上夹层内套；所述环形结构的内侧壁设有第一L形台阶，所述上夹层内套通过所述第一L形台阶与所述环形结构紧配合；
或，所述上夹层内套底部设有用于托住大孔径滤膜的网状滤膜底托，所述网状滤膜底托边缘与所述环形结构的第一L形台阶固定连接，所述网状滤膜底托与所述上夹层内套之间设有密封垫；
或，所述环形结构设有向下延伸的下夹层内套，所述连接座设有供所述下夹层内套插入的第二L形台阶，所述下夹层内套通过所述第二L形台阶与所述连接座紧配合；
或，所述下夹层内套底部设有用于托住小孔径滤膜的砂芯滤板，所述连接座设有供所述砂芯滤板插入的第三L形台阶，所述砂芯滤板通过所述第三L形台阶与所述连接座紧配合；
或，所述砂芯滤板与所述下夹层内套之间设有密封垫。
4.根据权利要求1-3任一所述的双层膜过滤杯，其特征在于：所述过滤杯主体与所述环形结构通过螺纹连接；
或，所述环形结构与所述连接座通过螺纹连接；
或，所述网状滤膜底托边缘与所述环形结构的第一L形台阶通过粘贴作用连接。
5.根据权利要求1-4任一所述的双层膜过滤杯，其特征在于：所述滤膜为PVDF膜、PC膜或不锈钢网；
或，所述大孔径滤膜为PVDF膜；
或，所述小孔径滤膜为PC膜。
6.根据权利要求1-5任一所述的双层膜过滤杯，其特征在于：所述砂芯滤板的孔径为5-10μm；
或，所述大孔径滤膜的孔径为5-12μm；
或，所述小孔径滤膜的孔径为0.2-0.8μm。
7.一种用于检测待测样本中细菌的产品，其包括权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯和抽滤装置。
8.权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯或权利要求7所述的产品在富集待测样本中细菌中的应用；
或，权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯或权利要求7所述的产品在检测待测样本中细菌中的应用。
9.利用权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯检测待测样本中细菌的方法，包括如下步骤：
(1)拧开权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯的杯封盖，加入待测样本；
(2)完成步骤(1)后，将权利要求1-6任一所述的双层膜过滤杯底部的空心圆柱结构放入抽虑装置中进行抽滤，使所述待测样本中的细菌截留在小孔径滤膜上；
(3)完成步骤(2)后，采用染色法对截留在小孔径滤膜上的细菌进行染色；
(4)完成步骤(3)后，将所述双层膜过滤杯的连接座卸下，取出小孔径滤膜并进行镜检，实现待测样本中细菌的检测。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述待测样本为痰液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910932553.3A CN112577793A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种双层膜过滤杯及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910932553.3A CN112577793A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种双层膜过滤杯及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112577793A true CN112577793A (zh) | 2021-03-30 |
Family
ID=75111026
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910932553.3A Pending CN112577793A (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种双层膜过滤杯及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112577793A (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102042924A (zh) * | 2010-10-30 | 2011-05-04 | 湖南省天骑医学新技术有限公司 | 一种细胞或细菌的染色、制片方法 |
| CN203196412U (zh) * | 2013-04-24 | 2013-09-18 | 浙江硕华医用塑料有限公司 | 微孔滤膜过滤器 |
| CN103555810A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-02-05 | 山东省食品药品检验所 | 药品微生物检验双滤膜过滤方法 |
| CN203700355U (zh) * | 2014-02-13 | 2014-07-09 | 山东省食品药品检验所 | 药品微生物限度检查用开放式双滤膜过滤器 |
| US20140220190A1 (en) * | 2013-02-04 | 2014-08-07 | Coffee Star S.A. | Capsule for the Preparation of Beverages |
| CN203894092U (zh) * | 2013-12-23 | 2014-10-22 | 湖南省天骑医学新技术有限公司 | 过滤膜夹层杯 |
| CN205313537U (zh) * | 2015-12-07 | 2016-06-15 | 常州福隆生物有限公司 | 循环肿瘤细胞收集装置 |
-
2019
- 2019-09-29 CN CN201910932553.3A patent/CN112577793A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102042924A (zh) * | 2010-10-30 | 2011-05-04 | 湖南省天骑医学新技术有限公司 | 一种细胞或细菌的染色、制片方法 |
| US20140220190A1 (en) * | 2013-02-04 | 2014-08-07 | Coffee Star S.A. | Capsule for the Preparation of Beverages |
| CN203196412U (zh) * | 2013-04-24 | 2013-09-18 | 浙江硕华医用塑料有限公司 | 微孔滤膜过滤器 |
| CN103555810A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-02-05 | 山东省食品药品检验所 | 药品微生物检验双滤膜过滤方法 |
| CN203894092U (zh) * | 2013-12-23 | 2014-10-22 | 湖南省天骑医学新技术有限公司 | 过滤膜夹层杯 |
| CN203700355U (zh) * | 2014-02-13 | 2014-07-09 | 山东省食品药品检验所 | 药品微生物限度检查用开放式双滤膜过滤器 |
| CN205313537U (zh) * | 2015-12-07 | 2016-06-15 | 常州福隆生物有限公司 | 循环肿瘤细胞收集装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3179785B2 (ja) | 生物試料の捕集試験装置及び捕集試験方法 | |
| JP3479300B2 (ja) | 細胞学検査用単層採取のための方法と装置 | |
| US8778629B2 (en) | Sterility test method and totally enclosed bacterial ampoule incubator used by it | |
| Manoni et al. | Mid-stream vs. first-voided urine collection by using automated analyzers for particle examination in healthy subjects: an Italian multicenter study | |
| CN202141618U (zh) | 细胞、细菌染色制片机 | |
| CN114854529A (zh) | 用于调配液体特别是体液的装置和方法 | |
| WO1996030542A1 (fr) | Methode de determination rapide d'un nombre de bacteries et equipement destine a une telle operation | |
| CN111733072A (zh) | 一种循环肿瘤细胞筛选分离装置及方法和应用 | |
| CN112577793A (zh) | 一种双层膜过滤杯及其应用 | |
| Mulvany | Chapter VII Membrane Filter Techniques in Microbiology | |
| CN210140589U (zh) | 一种检测样本收集装置 | |
| CN101430281A (zh) | 饮用水中隐孢子虫卵囊和贾第虫孢囊的活性检测方法 | |
| CN110596102A (zh) | 富集细胞并对细胞着色的流体控制装置及方法 | |
| CN106754720A (zh) | 一种循环肿瘤细胞富集与显微成像样本制作装置 | |
| CN112574863A (zh) | 一种基于双层膜过滤的细菌检测方法 | |
| CN112577794A (zh) | 一种无影胶黏取膜富集细菌的制片方法及其应用 | |
| CN103196906B (zh) | 用于检测临床标本中白假丝酵母的特异性方法 | |
| CN111103424A (zh) | 一种用于检测人体的尿液标本中肿瘤细胞的检测试剂盒 | |
| JP2604908Y2 (ja) | 細菌検出器具 | |
| CN109295158A (zh) | 一种快速的灭菌效果评价方法 | |
| HU193267B (en) | Process and equipment for the detection of contaminants | |
| JP7446255B2 (ja) | 遠心ろ過カートリッジ及び微生物検査方法 | |
| CN114544285A (zh) | 一种用于痰结核分枝杆菌检测的悬浮染色样本的制备方法 | |
| CN110095463B (zh) | 一种乳糜定性检测的试剂盒 | |
| CN217466393U (zh) | 用于形态学检测的制样器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 528315 room 401-421, floor 1-3, building a, Foshan China Europe service center, No. 2, South Lingnan Avenue, xingle community, Lecong Town, Shunde District, Foshan City, Guangdong Province Applicant after: Tibikon Biotechnology (Guangdong) Co.,Ltd. Address before: 528315 block a, Central Europe center, South 2, Lingnan Avenue, Shunde District, Foshan City, Guangdong Province Applicant before: TB Healthcare Co.,Ltd. |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210330 |