CN112575063A - 一种全血基因组dna保存剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用。属于生物技术领域。所述的全血基因组DNA保存剂，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。本发明的全血基因组DNA保存剂，能在室温下长期确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化；还可延长基因组样本在室温下的储存时间及远距离运输。本发明所涉及基因组DNA长期常温保存及提取方法可为疾病预防和疾病治疗以及法医刑侦等提供有力保障。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及生物基因样本常温保存技术，具体涉及一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用。
背景技术
基因组DNA(genomic DNA)是指组成生物基因组的所有DNA，人体基因组DNA蕴藏人体全部的遗传信息，是遗传和物种延续的物质基础，它使后代出现与亲代相似的性状。保存人体基因组DNA样本也即保存人体的全部遗传信息。近年来，随着基因组测序技术的高速发展以及国家一系列利好政策的推动，科学家已能对基因组DNA的遗传信息和生命密码进行全面的分析和解读。越来越多的研究证明，多种疾病特别是肿瘤，都是由于体细胞基因突变改变了细胞的性能，进而又改变了该组织和器官的性能，导致出现疾病症状。因此，在婴儿期以较低的成本将基因样本保存起来，待将来需要时将基因样本取出进行检测以对体细胞的突变进行监测，对预防疾病发生和疾病治疗具有重要意义。
目前，已有许多基因保存公司开展个人基因样本的保存服务，现有技术大多将分离获得的基因组DNA样本贮存在超低温条件下以长期维持其理化性质及生物学活性的稳定，其保存条件苛刻，成本较高，限制了其广泛应用。因此，开发能在常温下保存基因组DNA的技术，在降低基因保存的成本的同时确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化，对该领域的发展十分必要。
发明内容
本发明的首要目的是在于提供一种全血基因组DNA保存剂。
本发明的第二个目的是在于提供上述全血基因组DNA保存剂的制备方法。
本发明的第三个目的是在于提供上述全血基因组DNA保存剂的应用，旨在延长现有基因组DNA的保存时间并简化保存及提取的操作步骤。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种全血基因组DNA保存剂，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。
所述的抗凝血剂优选为1～150份，进一步优选为1～120份；更优选为1～50份。
所述的抗凝血剂优选为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
所述的血细胞稳定剂优选为2～200份；进一步优选为5～200份；更优选为120～200份；更优选为120～180份。
所述的血细胞稳定剂优选为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种。
所述的反应型细胞包封剂优选为1～100份；进一步优选为1～50份；更优选为5～20份。
所述的反应型细胞包封剂优选为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层优选为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机-无机杂化纳米层中的至少一种。
所述的反应型细胞包封剂优选为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、六氯合铂酸钾(K2PtCl6)、三氯氨铂酸钾(KPt(NH3)Cl3)、四氯铂酸钾(K2PtCl4)、六溴铂酸钾(K2PtBr6)；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、双(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、3-巯丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)、三甲基氯硅烷(TMCS)、氯三乙氧基硅烷(TECS)、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种。进一步优选为四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯、异丙醇铝、锆酸四丁酯、多巴胺和鞣酸中的一种；更优选为四氯合金酸(HAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯、异丙醇铝、锆酸四丁酯中的至少一种；最优选为钛酸四乙酯、六氯合铂酸(H2PtCl6)、正硅酸四乙酯(TEOS)和四氯合金酸(HAuCl4)中的至少一种。
所述的pH调节剂优选为0.1～100份；进一步优选为0.1～10份；更优选为0.1～0.5。
所述的pH调节剂优选为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)中的至少一种；更优选为盐酸、磷酸、醋酸、氨水中的至少一种。
所述的离子浓度调节剂优选为0.1～180份；更优选为5～100份。
所述的离子浓度调节剂优选为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种；更优选为氯化钠、磷酸一氢钠-磷酸二氢钠、醋酸钠和氯化铵中的至少一种。
一种全血基因组DNA保存剂的制备方法，包括如下步骤：将抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
所述的全血基因组DNA保存剂在全血基因组DNA的长期常温保存和提取中的应用。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将上述全血基因组DNA保存剂与全血共孵育，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温即可长期保存。
所述的全血基因组DNA保存剂与全血优选按体积比100:1～100计算。
所述的共孵育优选为温度-197～37℃；时间为5min～168h；进一步优选为温度-80～37℃，时间为2～48h；更优选为温度-80℃～25℃，时间为2～24h。
所述的室温优选为20～35℃；更优选为25～30℃。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将上述用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本外部的包封剂降解掉，然后用基因组总DNA提取试剂盒提取基因组DNA。
所述的降解包封剂的试剂优选包括酸、碱、缓冲液和螯合剂中的至少一种。
所述的酸优选为氢氟酸、硫酸和王水中的至少一种。
所述的缓冲液优选为氢氟酸-氟化铵缓冲液。
所述的螯合剂优选为EDTA。
所述的降解包封剂的试剂与基因组原位包封样本中的全血优选按体积比0.1～100:1计算；更优选按1～50:1计算。
所述的将长期保存的基因组样本外部的包封剂降解掉的方法优选为利用降解包封剂的试剂破坏包封剂的结构，脱除基因组原位包封样本外部的包封层，释放出血细胞。
所述的基因组总DNA提取试剂盒优选为全血基因组DNA提取试剂盒。
上述全血基因组DNA的长期常温保存方法和/或全血基因组DNA的提取方法在疾病预防和疾病治疗以及法医刑侦领域中的应用。
本发明提供的技术方案具有如下有益效果：
(1)本发明的全血基因组DNA保存剂，能在室温下长期确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化；还可延长基因组样本在室温下的储存时间及远距离运输。本发明所涉及基因组DNA长期常温保存及提取方法可为疾病预防和疾病治疗以及法医刑侦等提供有力保障。
(2)本发明的保存剂中各成分相互配合，协同作用，长期高效地保护基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性，避免在保存、运输过程中，遗传信息的丢失或变化；不同于前期的技术，本发明在细胞层面保护基因组DNA，在需要提取基因组DNA时再破坏包封层，并使用商用试剂盒提取基因组DNA，可以大幅度缩减前期保存过程的步骤，利于该技术的推广。
附图说明
图1为实施例1的基因组原位包封样本的扫描电子显微镜结果图。
图2为性能测试中，实施例1用试剂盒提取的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合实施例进一步阐述本发明的内容，但本发明的内容并不仅仅局限于以下实施例。
若无特殊说明，本申请的试剂原料均可通过市购得到。
实施例1
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：100份抗凝血剂乙二胺四乙酸二钾，120份血细胞稳定剂蔗糖，10份反应型细胞包封剂正硅酸四乙酯(TEOS)，0.2份1mol/L HCl水溶液作为pH调节剂，10份离子浓度调节剂氯化钠和759.8份无RNase纯化水。
将上述抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将1.8mL上述全血基因组DNA保存剂与0.2mL全血在-80℃共孵育24h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(25℃)即可长期保存。使用SEM观察样本形貌，如图1所示。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本与40％氢氟酸水溶液(40％氢氟酸水溶液与基因组原位包封样本中的全血的体积比为10:1)于室温共孵育10min，以降解掉基因组原位包封样本外部的包封层，然后用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
实施例2
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：120份抗凝血剂肝素钠，200份血细胞稳定剂羟乙基淀粉，20份反应型细胞包封剂四氯合金酸(HAuCl4)，0.5份pH调节剂磷酸(1mol/L磷酸水溶液)，10份离子浓度调节剂磷酸一氢钠-磷酸二氢钠和649.5份无RNase纯化水。
将上述抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将10mL上述全血基因组DNA保存剂与0.1mL全血在4℃共孵育2h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(30℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本外部的包封剂用王水(V硝酸:V盐酸＝1:3)降解掉，具体降解方法为：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本与王水于室温共孵育20min，王水与基因组原位包封样本中的全血的体积比为100:1，然后用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
对比例1：无抗凝血剂对照例
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：100份血细胞稳定剂海藻糖，50份反应型细胞包封剂钛酸四乙酯，1份pH调节剂醋酸水溶液(1mol/L醋酸水溶液)，10份离子浓度调节剂醋酸钠和839份无RNase纯化水。
将血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将10mL上述全血基因组DNA保存剂与10mL全血在25℃共孵育5h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(35℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组样本外部的包封剂用30％(v/v)硫酸降解掉，具体降解方法为：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本与30％(v/v)硫酸水溶液于室温共孵育10min，30％(v/v)硫酸水溶液与基因组原位包封样本中的全血的体积比为1:1，然后用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
对比例2：无血细胞稳定剂对照例
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：120份抗凝血剂乙二胺四乙酸二钾，100份反应型细胞包封剂六氯合铂酸(H2PtCl6)，0.8份pH调节剂HCl，5份离子浓度调节剂氯化钠和749.2份无RNase纯化水。
将抗凝血剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将10mL上述全血基因组DNA保存剂与0.1mL全血在37℃共孵育15min，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(30℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本外部的包封剂用王水(V硝酸：V盐酸＝1:3)降解掉，具体降解方法为：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本与王水于室温共孵育20min，王水与基因组原位包封样本中的全血的体积比为20:1，然后用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
对比例3：无反应型细胞包封剂对照例
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：80份抗凝血剂肝素锂，200份血细胞稳定剂聚乙烯醇，20份pH调节剂氨水(2.5％v/v氨水)，20份离子浓度调节剂氯化铵和680份无RNase纯化水。
将抗凝血剂、血细胞稳定剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将5mL上述全血基因组DNA保存剂与0.2mL全血在4℃共孵育48h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(20℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将上述用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本直接使用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
对比例4：无pH调节剂及离子浓度调节剂对照例
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：100份抗凝血剂乙二胺四乙酸二钾，120份血细胞稳定剂蔗糖，10份反应型细胞包封剂正硅酸四乙酯(TEOS)和770份无RNase纯化水。
将抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将2mL上述全血基因组DNA保存剂与0.2mL全血在-80℃共孵育24h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组样本置于室温(30℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组样本外部的包封剂用49％HF水溶液和40％NH4F水溶液(49％HF水溶液和40％NH4F水溶液按体积比1:6混合)的混合液降解掉，具体降解方法为：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本与49％HF水溶液和40％NH4F水溶液的混合液(49％HF水溶液和40％NH4F水溶液按体积比1:6混合)于室温共孵育20min，49％HF水溶液和40％NH4F水溶液的混合液与基因组原位包封样本中的全血的体积比为8:1，然后用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
对比例5：未脱除包封剂对照例
一种全血基因组DNA保存剂，其配方为如下按重量份计的组分：120份抗凝血剂肝素钠，200份血细胞稳定剂羟乙基淀粉，20份反应型细胞包封剂四氯合金酸(HAuCl4)，0.5份pH调节剂磷酸(1mol/L磷酸水溶液)，10份离子浓度调节剂磷酸一氢钠-磷酸二氢钠质量比例为1:1和649.5份无RNase纯化水。
将抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将5mL上述全血基因组DNA保存剂与1mL全血在4℃共孵育2h，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温(25℃)即可长期保存。
一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组样本直接使用基因组总DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒，购于天根生化科技(北京)有限公司)提取基因组DNA。
性能测试：
本发明中的测试方法如下：
扫描电镜SEM观察：将保存好的基因组DNA样本分散在水中，并滴加到干净的玻璃片上使用扫描电镜观察。
DNA浓度检测：通过使用全血基因组DNA试剂盒提取各个加速老化样本中的基因组DNA。取2μL待测样品加入NANODROP检测池，通过其260nm处的吸光度反推出基因组DNA的浓度。
DNA结构完整性检测：通过使用全血基因组DNA试剂盒提取各个加速老化样本中的基因组DNA，使用琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA的完整性。
qPCR检测：
1.PCR反应体系的设置：
RT-PCR模板：G-6PD
上引物A：CTAACCACACACCTGTTCCCTC
下引物B：AGCCCACGATGAAGGTGTTTT
上样量为2μL；
a.溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。BeyoFast SYBR Green qPCR Mix(2X)完全融解并混匀后置于冰浴上或冰盒内。
b.参考下列配方在室温或冰浴上设置PCR反应体系(8连管)：
每个PCR反应的试剂量(20μL)；
BeyoFast SYBR Green qPCR Mix(2X)(qPCR预混液)10μL；
正向引物和反向引物的混合物(3μM/管)2μL；
DNA模板2μL；
无RNA酶水6μL；
2.PCR反应程序：
a.预变性：95℃，2min；
b.变性：95℃，15s；
c.退火/延伸：60℃，15-30s(退火温度由引物Tm值来确定)；
d.重复步骤b和步骤c，总共40个循环；
e.熔解曲线分析(可选)：95℃/15s，60℃/15s，95℃/15s；
f.使用荧光定量PCR仪提供的软件分析结果。
将实施例1-2和对比例1-5的基因组原位包封样本置于高温高湿环境(70℃，70％湿度)放置0、7、14、21、28天后，直接提取基因组原位包封样本，检测样本内基因组DNA的浓度，DNA结构的完整性，及用qPCR检测循环次数CT值。
实施例1用试剂盒提取的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳结果如图2所示。
样本内基因组DNA的浓度结果如下表1所示，CT值结果如下表2所示。
表1：
注：“实”代表实施例，例如：实1代表实施例1；“对”代表对比例，例如：对1代表对比例1。
表2：
注：“实”代表实施例，例如：实1代表实施例1；“对”代表对比例，例如：对1代表对比例1。
从表1和表2可以看出：无反应型细胞包封剂的对照例3，基因组DNA降解明显，几乎无DNA保护效果。而对照例5中不脱除包封剂则会显著影响DNA的提取效果。本发明实施例1和2的保存剂中各成分相互配合，即使在高温高湿环境中也能高效地保护基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种全血基因组DNA保存剂，其特征在于，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。
2.根据权利要求1所述的全血基因组DNA保存剂，其特征在于，所述的抗凝血剂为1～150份；
所述的抗凝血剂为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；
所述的血细胞稳定剂为2～200份；
所述的血细胞稳定剂为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种；
所述的反应型细胞包封剂为1～100份；
所述的反应型细胞包封剂为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机-无机杂化纳米层中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的全血基因组DNA保存剂，其特征在于，所述的反应型细胞包封剂为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸、四氯合金酸钾、六氯合铂酸、六氯合铂酸钾、三氯氨铂酸钾、四氯铂酸钾、六溴铂酸钾；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、双(三甲基硅烷基)乙酰胺、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巯丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种；
所述的pH调节剂为0.1～100份；
所述的pH调节剂为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和三羟甲基氨基甲烷中的至少一种；
所述的离子浓度调节剂为0.1～180份；
所述的离子浓度调节剂为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种。
4.一种全血基因组DNA保存剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1-4任一所述的抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。
5.权利要求1-3任一所述的全血基因组DNA保存剂在全血基因组DNA的长期常温保存和提取中的应用。
6.一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1-4任一所述的全血基因组DNA保存剂与全血共孵育，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温即可长期保存。
7.根据权利要求6所述的全血基因组DNA的长期常温保存方法，其特征在于，所述的全血基因组DNA保存剂与全血按体积比100:1～100计算；
所述的共孵育为温度-197～37℃；时间为5min～168h。
8.一种全血基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：将上述用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本外部的包封剂降解掉，然后用基因组总DNA提取试剂盒提取基因组DNA。
9.根据权利要求8所述的全血基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的降解包封剂的试剂包括酸、碱、缓冲液和螯合剂中的至少一种。
10.权利要求6或7所述的全血基因组DNA的长期常温保存方法和/或权利要求8或9任一所述的全血基因组DNA的提取方法在疾病预防和疾病治疗以及法医刑侦领域中的应用。
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