CN112575047A - 一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法。发酵得到的发酵液先加入柠檬酸，柠檬酸酸化至发酵液pH为4，再进行浓缩。本发明提供的提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，通过使用柠檬酸酸化至发酵液pH为4，饲料用的抗菌肽天蚕素收率为85%‑95%，大大提高了饲料用的抗菌肽天蚕素的收率，而且方法比较简单。
Description
技术领域
本发明涉及饲料用的抗菌肽天蚕素，尤其涉及一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法。
背景技术
原来饲料用的抗菌肽天蚕素制备工艺为：种子制备—发酵—浓缩—喷雾干燥，收率50%-60%，收率较低。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法。
本发明的目的是以下述方式实现的：一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，发酵得到的发酵液先加入柠檬酸，柠檬酸酸化至发酵液pH为4，再进行浓缩。
一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，包括以下步骤，（1）种子制备；（2）发酵；（3）加入柠檬酸酸化至发酵液pH为4；（4）对酸化后的发酵液进行浓缩；（5）喷雾干燥，得饲料用抗菌肽天蚕素。
发酵步骤中的使用的发酵培养基为：按质量分数计，蛋白胨2%，玉米粉3%，豆饼粉2%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.6%，硫酸铵0.1%，其余为饮用水，发酵培养基ph为7.2。
相对于现有技术，本发明提供的提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，通过使用柠檬酸酸化至发酵液pH为4，饲料用的抗菌肽天蚕素收率为85%-95%，大大提高了饲料用的抗菌肽天蚕素的收率，而且方法比较简单。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容做出一些非本质的改进和调整。
下面实施例和对比例中菌种枯草芽孢杆菌来源相同。枯草芽孢杆菌为含天蚕素抗菌肽基因质粒转化的工程枯草芽孢杆菌，可用现有的基因工程手段得到。本申请中的参考ZL200810132258.1公开的方法得到。
实施例1
本申请提供的一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，包括以下步骤；
（1）种子制备：
（a）摇瓶菌种：在250 ml的锥形瓶上，装30ml LB培养基，将一个枯草芽孢杆菌菌落接种于LB培养基上，摇瓶培养条件下培养，培养条件为，温度为37℃、转速每分钟220转、培养10小时；
（b）种子罐培养：从种子培养到最后30M3发酵罐发酵培养需要3级种子扩大，一级种子扩大：将摇瓶培养好的种子按1：100分别扩大于3个500 ml的锥形瓶，装50ml种子培养基，种子培养条件下培养；二级种子扩大：将一级种子扩大的种子按1：100比例扩大于30L种子发酵罐，装15 L种子培养基，种子培养条件下培养；三级种子扩大：将二级扩大的种子按1：100扩大于3 M3种子发酵罐，装1.5 M3种子培养基，种子培养条件下培养；
种子培养基为LB培养基。种子培养条件为：温度为37℃，转速每分钟160转，罐压0.06Mpa.通风量1：1，接种量1%。一级种子扩大培养时间为10h，二级种子扩大培养时间为8h，三级种子扩大培养时间为6h。
（2）发酵：将三级种子扩大培养好的种子按1：20接种于30 M3发酵罐，装21 M3发酵培养基，发酵培养条件下培养。
发酵培养基：按质量分数计，蛋白胨2%，玉米粉3%，豆饼粉2%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.6%，硫酸铵0.1%，其余为饮用水，发酵培养基ph为7.2。发酵培养基121℃灭菌30分钟，然后接种菌种进行发酵培养。
发酵培养条件为，温度为37℃，转速每分钟150转，罐压0.05Pma，通风量1：1，培养30小时。
（3）发酵液调为ph值4
步骤（2）发酵培养30小时结束后，在发酵罐中搅拌加入柠檬酸，调发酵液ph值达到4，ph稳定后进入浓缩工序。
（4）发酵液浓缩
发酵液调ph4进入双效浓缩，浓缩温度72℃，真空度-0.06Mpa，体积浓缩一倍。
（5）喷雾干燥
浓缩后的发酵液加入10%的甲维粉载体混合均匀进入喷雾干燥，喷雾干燥条件，进风温度170℃，塔内温度96℃，喷干产品水份5%以下。
喷雾干燥后得到的产品的天蚕素含量检测采用高效液相法测定，天蚕素收率为95%。
对比例1
与实施例1相比，对比例除了不含有“发酵液调为ph值4”的步骤，其它步骤及步骤的条件都相同，即对比例1，不进行调节pH，直接进行发酵液浓缩。对比例1测得天蚕素收率为60%。
实施例2
本申请提供的一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，包括以下步骤；
（1）种子制备：
（a）摇瓶菌种：在250 ml的锥形瓶上，装30ml LB培养基，将一个枯草芽孢杆菌菌落接种于LB培养基上，摇瓶培养条件下培养，培养条件为，温度为34℃、转速每分钟220转、培养13小时；
（b）种子罐培养：从种子培养到最后30M3发酵罐发酵培养需要3级种子扩大，一级种子扩大：将摇瓶培养好的种子按1：100分别扩大于3个500 ml的锥形瓶，装50ml种子培养基，种子培养条件下培养；二级种子扩大：将一级种子扩大的种子按1：100比例扩大于30 L种子发酵罐，装15 L种子培养基，种子培养条件下培养；三级种子扩大：将二级扩大的种子按1：100扩大于3 M3种子发酵罐，装1.5 M3种子培养基，种子培养条件下培养；
种子培养基为LB培养基。种子培养条件为：温度为34℃，转速每分钟160转，罐压0.06Mpa.通风量1：1，接种量1%；一级种子扩大培养时间为13小时，二级种子扩大培养时间为11小时，三级种子扩大培养时间为9小时。
（2）发酵：将三级种子扩大培养好的种子按1：20接种于30 M3发酵罐，装21 M3发酵培养基，发酵培养条件下培养。
发酵培养基：按质量分数计，蛋白胨1.8%，玉米粉3.2%，豆饼粉2.1%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.6%，硫酸铵0.1%，其余为饮用水，发酵培养基ph为7.2。发酵培养基121℃灭菌30分钟，然后接种菌种进行发酵培养。
发酵培养条件为，温度为34℃，转速每分钟150转，罐压0.05Pma，通风量1：1，培养35小时。
（3）发酵液调为ph值4
步骤（2）发酵培养35小时结束后，在发酵罐中搅拌加入柠檬酸，调发酵液ph值达到4，ph稳定后进入浓缩工序。
（4）发酵液浓缩
发酵液调ph4进入双效浓缩，浓缩温度72℃，真空度-0.06Mpa，体积浓缩一倍。
（5）喷雾干燥
浓缩后的发酵液加入10%的甲维粉载体混合均匀进入喷雾干燥，喷雾干燥条件，进风温度170℃，塔内温度96℃，喷干产品水份5%以下。
喷雾干燥后得到的产品的天蚕素含量检测采用高效液相法测定，天蚕素收率为85%。
对比例2
与实施例1相比，对比例除了不含有“发酵液调为ph值4”的步骤，其它步骤及步骤的条件都相同，即对比例1，不进行调节pH，直接进行发酵液浓缩。对比例1测得天蚕素收率为50%。
实施例3
本申请提供的一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，包括以下步骤；
（1）种子制备：
（a）摇瓶菌种：在250 ml的锥形瓶上，装30ml LB培养基，将一个枯草芽孢杆菌菌落接种于LB培养基上，摇瓶培养条件下培养，培养条件为，温度为36℃下、转速每分钟220转、培养11.5小时；
（b）种子罐培养：从种子培养到最后30 M3发酵罐发酵培养需要3级种子扩大，一级种子扩大：将摇瓶培养好的种子按1：100分别扩大于3个500 ml的锥形瓶，装50 ml种子培养基，种子培养条件下培养；二级种子扩大：将一级种子扩大的种子按1：100比例扩大于30 L种子发酵罐，装15 L种子培养基，种子培养条件下培养；三级种子扩大：将二级扩大的种子按1：100扩大于3 M3种子发酵罐，装1.5 M3种子培养基，种子培养条件下培养；
种子培养基为LB培养基。种子培养条件为：温度为36℃，转速每分钟160转，罐压0.06Mpa.通风量1：1，接种量1%。一级种子扩大培养时间为11小时，二级种子扩大培养时间为9小时，三级种子扩大培养时间为7.5小时。
（2）发酵：将三级种子扩大培养好的种子按1：20接种于30 M3发酵罐，装21 M3发酵培养基，发酵培养条件下培养。
发酵培养基：按质量分数计，蛋白胨2.3%，玉米粉2.8%，豆饼粉1.9%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.6%，硫酸铵0.1%，其余为饮用水，发酵培养基ph为7.2。发酵培养基121℃灭菌30分钟，然后接种菌种进行发酵培养。
发酵培养条件为，温度为36℃，转速每分钟150转，罐压0.05Pma，通风量1：1，培养32小时。
（3）发酵液调为ph值4
步骤（2）发酵培养32小时结束后，在发酵罐中搅拌加入柠檬酸，调发酵液ph值达到4，ph稳定后进入浓缩工序。
（4）发酵液浓缩
发酵液调ph4进入双效浓缩，浓缩温度72℃，真空度-0.06Mpa，体积浓缩一倍。
（5）喷雾干燥
浓缩后的发酵液加入10%的甲维粉载体混合均匀进入喷雾干燥，喷雾干燥条件，进风温度170℃，塔内温度96℃，喷干产品水份5%以下。
喷雾干燥后得到的产品的天蚕素含量检测采用高效液相法测定，天蚕素收率为89%。
对比例3
与实施例1相比，对比例除了不含有“发酵液调为ph值4”的步骤，其它步骤及步骤的条件都相同，即对比例1，不进行调节pH，直接进行发酵液浓缩。对比例1测得天蚕素收率为56%。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，应当指出，对于本领域的及任何熟悉本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明整体构思前提下，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，及作出的若干改变和改进，这些也应该视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，其特征在于：发酵得到的发酵液先加入柠檬酸，柠檬酸酸化至发酵液pH为4，再进行浓缩。
2.根据权利要求1所述的提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）种子制备；（2）发酵；（3）加入柠檬酸酸化至发酵液pH为4；（4）对酸化后的发酵液进行浓缩；（5）喷雾干燥，得饲料用抗菌肽天蚕素。
3.根据权利要求1或2所述的提高饲料用的抗菌肽天蚕素收率的方法，其特征在于：发酵步骤中的使用的发酵培养基为：按质量分数计，蛋白胨2%，玉米粉3%，豆饼粉2%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.6%，硫酸铵0.1%，其余为饮用水，发酵培养基ph为7.2。
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