CN112574938B - 一种用于膜过滤富集细菌的痰处理液及其应用 - Google Patents

一种用于膜过滤富集细菌的痰处理液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于膜过滤富集细菌的痰处理液及其应用。本发明提供的痰处理液由以下成分组成：氢氧化钠0.5‑4％、二硫苏糖醇0.1‑1％和次氯酸钠6‑12％。该痰处理液由于含有强碱性溶液，可以将痰液中的结核分枝杆菌完全灭活，提高了操作人员的安全保障。通过实验表明，使用该痰处理液处理后的痰液很容易被过滤，可有效提高痰液样本的滤膜通过率。

Description

一种用于膜过滤富集细菌的痰处理液及其应用
技术领域
本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种用于膜过滤富集细菌的痰处理液及其应用。
背景技术
根据卫生部的肺结核诊断标准，结核病的诊断依据主要包括流行病学史、临床表现、影像学改变、实验室检测以及抗结核治疗有效等五个方面，其中，在痰或病理组织中找到结核分枝杆菌是结核病诊断的金标准，而直接涂片显微镜检查和结核分枝杆菌培养正是发现细菌学诊断依据的主要手段之一。在结核病诊断中，直接涂片镜检发挥着至关重要的作用，是我国目前结核病防治规划中发现肺结核病患者的最主要手段。
直接涂片镜检具有简单、快捷、不需要昂贵设备等优点，至今仍然是全球，尤其是欠发达国家和地区结核病诊断的主要手段。然而，直接涂片镜检技术也一直屡遭诟病，在涂片染色的操作过程中需要反复冲洗玻片，此步骤导致菌的大量损失，因此根据统计，需要样本中分枝杆菌的含量达到103-104个/ml时才能获得阳性检查结果；另外涂片检查的质量依赖于检查者的技术水平、责任心、检查时间，同时样本的质量也对检查结果有至关重要的影响。此外，直接涂片镜检技术一般需要暴露操作，样品容易产生气溶胶等，使得操作人员有很高的感染风险。因此，提高临床实验室的工作质量一直是我国结核病防治规划中的重点内容。
研究表明，相比于直接涂片显微镜检测结核分枝杆菌，对样本进行前处理后富集的方法可以提高阳性检出率，而通过膜过滤富集结核分枝杆菌正是有效提高阳性检出率的方法之一。临床上一般采用自然咳痰法和吸痰法收集痰液标本，这样获取的痰液标本具有明显的非均质性，细菌等成分的分布很不均匀，所以痰液不能直接过滤，必须经过消化液处理后才能过滤。目前，国内外对于临床痰标本消化处理所使用的商品化消化液有很多，但都是针对临床痰标本细菌分离培养的，并没有针对用于膜过滤富集结核分枝杆菌的痰处理液。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种痰处理液。
本发明提供的痰处理液为如下M1)-M3)中任一种：
M1)包括氢氧化钠、二硫苏糖醇和次氯酸钠；
M2)包括氢氧化钠和二硫苏糖醇；
M3)包括氢氧化钠和次氯酸钠。
上述痰处理液中，
所述氢氧化钠在所述痰处理液中的质量分数可为0.5-4％；
所述二硫苏糖醇在所述痰处理液中的质量分数可为0.1-1％；
所述次氯酸钠在所述痰处理液中的质量分数可为6-12％。
进一步的，所述痰处理液由所述氢氧化钠、所述二硫苏糖醇、所述次氯酸钠和水组成。所述水具体可为纯化水。
更进一步的，所述氢氧化钠在所述痰处理液中的质量分数为0.5％或4％；
所述二硫苏糖醇在所述痰处理液中的质量分数为0.1％或0.2％；
所述次氯酸钠在所述痰处理液中的质量分数为6％或10％或12％。
本发明的另一个目的是提供一种产品；所述产品包括上述痰处理液；
所述产品的功能为如下N1)或N2)或N3)：
N1)提高痰液样本的滤膜通过率；
N2)富集痰液样本中结核分枝杆菌；
N3)检测痰液样本中的结核分枝杆菌。
本发明又有一个目的是提供上述痰处理液或产品的新用途。
本发明提供了上述痰处理液或产品在如下P1)-P6)中任一种中的应用：
P1)提高痰液样本的滤膜通过率；
P2)制备提高痰液样本的滤膜通过率的产品；
P3)富集痰液样本中结核分枝杆菌；
P4)制备富集痰液样本中结核分枝杆菌的产品；
P5)检测痰液样本中结核分枝杆菌；
P6)制备检测痰液样本中结核分枝杆菌的产品。
本发明还有一个目的是提供一种提高痰液样本的滤膜通过率的方法。
本发明提供的提高痰液样本的滤膜通过率的方法包括用上述痰处理液处理痰液样本的步骤。
进一步的，所述处理的方法为将上述痰处理液与痰液样本混匀，静置。
更进一步的，所述痰处理液与所述痰液样本等体积混匀，静置30-120分钟。
本发明还有一个目的是提供一种富集痰液样本中结核分枝杆菌的方法。
本发明提供的富集痰液样本中结核分枝杆菌的方法包括如下步骤：
Q1)将上述痰处理液与痰液样本混匀，静置，得到处理后痰液；
Q2)采用膜过滤法过滤所述处理后痰液，实现富集痰液样本中的结核分枝杆菌。
进一步的，所述痰处理液与所述痰液样本等体积混匀。
更进一步的，所述静置的时间可为30-120分钟，具体可为90分钟。
本发明的最后一个目的是提供一种检测痰液样本中结核分枝杆菌的方法。
本发明提供的检测痰液样本中结核分枝杆菌的方法包括如下步骤：
S1)按照上述方法富集痰液样本中的结核分枝杆菌；
S2)采用染色法检测滤膜上富集的结核分枝杆菌，实现痰液样本中结核分枝杆菌的检测。
所述S2)中，所述染色法可为现有技术中常规的用于抗酸菌检测的染色方法，如抗酸染色法、荧光染色法。
为了使痰液能够顺利通过滤膜，实现结核分枝杆菌在滤膜上的富集，以便进行下一步的检测，本发明提供了一种用于膜过滤富集结核分枝杆菌的痰处理液。本发明提供的痰处理液由以下成分组成：氢氧化钠0.5-4％、DTT 0.1-1％和次氯酸钠6-12％。该痰处理液由于含有强碱性溶液，可以将痰液中的结核分枝杆菌完全灭活，提高了操作人员的安全保障。通过实验表明，使用本发明的痰处理液处理后的痰液很容易被滤膜过滤。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的氢氧化钠是广州化学试剂厂的产品，货号为1310-73-2；二硫苏糖醇DTT是OXOID的产品，货号为3483-12-3；次氯酸钠是阿拉丁的产品，货号为7681-52-9。
实施例1、用于膜过滤富集结核菌的痰处理液
为了使痰液能够顺利通过滤膜，实现结核分枝杆菌在膜上富集，以便进行下一步的检测，本发明提供了一种用于膜过滤富集结核分枝杆菌的痰处理液。该痰处理液由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和水(纯化水)组成。
根据各组分浓度的不同，共制备得到如下四种痰处理液：
痰处理液1由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和纯化水组成，其中，氢氧化钠在痰处理液中的质量分数为0.5％；二硫苏糖醇在痰处理液中的质量分数为0.1％；次氯酸钠在痰处理液中的质量分数为6％。
痰处理液2由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和纯化水组成，其中，氢氧化钠在痰处理液中的质量分数为4％；二硫苏糖醇在痰处理液中的质量分数为0.1％；次氯酸钠在痰处理液中的质量分数为12％。
痰处理液3由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和纯化水组成，其中，氢氧化钠在痰处理液中的质量分数为4％；二硫苏糖醇在痰处理液中的质量分数为0.2％；次氯酸钠在痰处理液中的质量分数为12％。
痰处理液4由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和纯化水组成，其中，氢氧化钠在痰处理液中的质量分数为4％；二硫苏糖醇在痰处理液中的质量分数为0.2％；次氯酸钠在痰处理液中的质量分数为10％。
实施例2、痰处理液在提高痰液样本的滤膜通过率中的应用
本实施例中的痰液样本来源于经诊断为结核病患者的痰液，共50份。
一、实验组
1、痰液的处理
将实施例1中的痰处理液1和痰液样本按照体积比为1：1的比例混匀，静置90分钟，得到处理后痰液1。
将实施例1中的痰处理液2和痰液样本按照体积比为1：1的比例混匀，静置90分钟，得到处理后痰液2。
将实施例1中的痰处理液3和痰液样本按照体积比为1：1的比例混匀，静置90分钟，得到处理后痰液3。
将实施例1中的痰处理液4和痰液样本按照体积比为1：1的比例混匀，静置90分钟，得到处理后痰液4。
2、过滤
(1)将孔径为0.8μm的PC膜装入可换膜针头式过滤器(可换膜针头式过滤器型号为millipore SX0002500，购自millipore公司)的中间位置，得到带有滤膜的过滤器。
(2)将步骤1获得的处理后痰液1、处理后痰液2、处理后痰液3、处理后痰液4分别加入到带有滤膜的过滤器中进行负压抽滤(Agela负压SPE装置)，使处理后痰液通过滤膜，杂质和细菌被滤膜截留。
3、计算痰液样本的通过率，通过率＝完全通过滤膜的痰液样本数量/总痰液样本数×100％。
二、对照组
1、痰液的处理
将质量分数为4％的氢氧化钠水溶液和痰液样本按照体积比为1：1的比例混匀，静置30分钟，得到处理后痰液。
2、过滤
(1)将孔径为0.8μm的PC膜装入可换膜针头式过滤器(可换膜针头式过滤器型号为millipore SX0002500，购自millipore公司)的中间位置，得到带有滤膜的过滤器。
(2)将步骤1获得的处理后痰液加入到带有滤膜的过滤器中进行负压抽滤(Agela负压SPE装置)，使处理后痰液通过滤膜，杂质和细菌被滤膜截留。
3、计算痰液样本的通过率，通过率＝完全通过滤膜的痰液样本数量/总痰液样本数×100％。
三、通过率比较
实验组与对照组的痰液样本的通过率如表1所示，从表中可以看出：实验组中的处理后痰液1、处理后痰液2、处理后痰液3、处理后痰液4的通过率分别为84％、92％、90％和96％，均高于对照组(65％)。说明本发明的痰处理液可有效提高痰液样本的滤膜通过率，其中，痰处理液4为效果最好的痰处理液。
表1、实验组与对照组的痰液样本的通过率
组别 痰样本数量 通过率
实验组(痰处理液1) 50 84％
实验组(痰处理液2) 50 92％
实验组(痰处理液3) 50 90％
实验组(痰处理液4) 50 96％
对照组 50 65％

Claims (8)

1.一种痰处理液，所述痰处理液由氢氧化钠、二硫苏糖醇、次氯酸钠和水组成；
所述氢氧化钠在所述痰处理液中的质量分数为4％；
所述二硫苏糖醇在所述痰处理液中的质量分数为0.2％；
所述次氯酸钠在所述痰处理液中的质量分数为10％。
2.一种产品，其包括权利要求1所述的痰处理液；
所述产品的功能为如下N1)或N2)或N3)：
N1)提高痰液样本的滤膜通过率；
N2)富集痰液样本中结核分枝杆菌；
N3)检测痰液样本中的结核分枝杆菌。
3.权利要求1所述的痰处理液或权利要求2所述的产品在如下P1)-P3)中任一种中的应用：
P1)制备提高痰液样本的滤膜通过率的产品；
P2)制备富集痰液样本中结核分枝杆菌的产品；
P3)制备检测痰液样本中结核分枝杆菌的产品。
4.一种提高痰液样本的滤膜通过率的方法，包括用权利要求1所述的痰处理液处理痰液样本的步骤。
5.一种富集痰液样本中结核分枝杆菌的方法，包括如下步骤：
Q1)将权利要求1所述的痰处理液与痰液样本混匀，静置，得到处理后痰液；
Q2)采用膜过滤法过滤所述处理后痰液，实现痰液样本中的结核分枝杆菌的富集。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述痰处理液与所述痰液样本等体积混匀。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述静置的时间为30-120分钟。
8.一种检测痰液样本中结核分枝杆菌的方法，包括如下步骤：
S1)按照权利要求5-7任一所述的方法富集痰液样本中的结核分枝杆菌；
S2)采用染色法检测滤膜上富集的结核分枝杆菌，实现痰液样本中结核分枝杆菌的检测；
所述方法为非疾病诊断或治疗目的。
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