CN112574089A - 一种光诱导的多功能交联剂、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一类通式(I)所示的光诱导的多功能交联剂，该类交联剂主要用于生物大分子相互作用中的应用，如蛋白质‑蛋白质相互作用，蛋白质‑核酸相互作用。该类交联剂能够用于细胞裂解液的生物学样品或者细胞中，进行捕捉蛋白质‑蛋白质相互作用或者蛋白质与核酸之间相互作用，并用于后续蛋白质富集和蛋白质交联质谱分析中的应用。所述的光诱导多功能交联剂在生物大分子的相互作用研究中具有重要应用潜力和的实用价值。

Description

一种光诱导的多功能交联剂、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于蛋白质交联及其蛋白质分析研究技术领域，主要涉及一种光诱导的多功能交联剂的制备以及在蛋白质相互作用和蛋白质的质谱分析中的应用。
背景技术
蛋白质是细胞活性和功能的执行者，蛋白质功能的发挥依靠蛋白质与蛋白质相互作用来实现。蛋白质相互作用在细胞凋亡与坏死、新陈代谢及生长繁殖等过程中具有重要作用，同时蛋白质相互作用出现异常也将会影响细胞活性和功能的发挥，进而引发许多疾病，如神经退行性疾病、癌症等。因此寻找和发现新的蛋白质功能，及新的蛋白质-蛋白质间的相互作用网络是生命科学领域一直所关注的基础研究问题，也是探索疾病发生发展机制的基本研究内容。通过发现新的蛋白质功能，及对蛋白质相互作用机制新的理解，进而对某个蛋白质相互作用进行特异性抑制或激活，从而发现作用机理明确、有效且特异的新药物靶点，以及疾病分子标记物发现，为新药研发以及疾病治疗开辟新的途径。
由于有些蛋白质间相互作用是微弱、瞬时、不稳定的，因此，如何捕捉和发现细胞内的新的蛋白质-蛋白质相互作用，在蛋白质组学和生命科学研究领域是一个巨大的挑战；而现有以蛋白质-蛋白质间的亲和作用为基础的常用技术，经常难以检测到这些相互作用。
基于化学交联剂的蛋白质相互作用的捕捉给蛋白质组学和蛋白质的研究带来了非常大的推到作用(Science,2012,337,1348-1352；Anal Bioanal Chem 2017,409,33-44)。蛋白质复合物的化学交联剂是一类小分子化合物，具有2个或者更多的针对特殊基团(-NH2、-COOH、-HS等)的反应性末端，可以和2个或者更多的蛋白质上的氨基酸残基分别偶联，从而使相互的蛋白质分子结合在一起。早期，人们普遍使用戊二醛作为蛋白质交联剂连接抗体和指示剂(如酶类)，但其缺点是由于交联基团是随机的，容易形成杂乱的多聚体。后来，更具选择特异性的交联剂，例如NHS(针对-NH2)和马来酰亚胺(针对-HS)在蛋白质相互作用的研究中得到了更为广泛的应用。巧妙地运用交联剂可以在蛋白质相互作用研究，免疫学，癌症治疗等领域取得意想之外的收获，目前蛋白质交联剂种类非常多。这些蛋白质的化学交联剂的缺点是交联过程是不可控的，所获得的蛋白质相互作用假阳性的比率比较高；同时蛋白质存在自交联和背景信号高等问题，因此，这种化学交联剂在很大程度上限制了在蛋白质相互作用研究中的应用。
光诱导的蛋白质交联剂是指该类交联剂作用于蛋白质后，在特定波长的光照射下，产生高活性的中间体，与其蛋白质上的作用位点形成不可逆共价键结合的化学反应。由于光交联反应具有速度快、条件简单、适合于原位反应等优点，光交联剂被应用于研究蛋白与小分子、生物大分子、蛋白或受体间的相互作用。目前该技术已经成为生物化学家和分子生物学家研究生物体系中空间相邻组分及生物大分子间相互作用的一个重要工具。
常见的光交联基团根据其在光照射下生成活性中间体的不同，大致分为四类：氮宾(Nitrenes)类、卡宾(Carbenes)类、碳正离子(Carbocations)和自由基(Radicals)类。目前应用最为广泛的光交联基团有苯甲酮、叠氮苯和3-三氟甲基-3-苯基二吖丙啶(3-trifluoromethyl-3-phenyldiazir ine，TFMD)，(Mol Biosyst,2008,4,473-480；Curr.Opin.Chem.Biol.2013,17,90-101；Chem.Soc.Rev.2013,42,3289–3301)。理想的光交联基团应具备以下几个特征：(1)具有一定的化学稳定性，耐受普通的化学反应；(2)在自然光中具有合理的稳定性；(3)无相应的光照条件下稳定，在紫外光照下很容易光解；(4)光解后的活性中间体既能与X-H(X为杂原子，X＝N,S,O)官能团反应，也能与C-H官能团反应；(5)光解中间体与受体作用得到的产物应该比较稳定，能够耐受分离、纯化和分析等操作。
虽然这些光交联可以实现时间可分辨的蛋白质交联，然而这些光交联剂并没有反应位点和反应官能团的选择性，光诱导产生的高活性中间体，主要通过自由基机理在相互作用的蛋白质复合物中通过C-H键或者X-H(X＝N,S,O)的插入，实现共价交联。因此，这些光交联剂并没有选择性，相应的蛋白质交联技术产生的交联肽段结构复杂、质谱数据难以解析、假阳性高等问题，给后续的质谱分析和蛋白质相互作用的确认带来了非常大的困难。同时，含有上述提到的四类光活性的官能团，因结构特殊性在合成上也较为困难。
因此，开发一种具有反应位点或者残基选择性的蛋白质光交联剂，非常必要及具有非常重要的科学意义和实用价值；在一定程度上能够克服上述已有的这些交联剂存在的问题，并能够促进蛋白质相互作用的发现和质谱相关领域的研究。因此本发明的一个目的是通过设计一类具有光交联位点选择性的蛋白质交联剂，发展为一类光诱导的多功能交联剂，用于捕捉蛋白质相互作用并有助于简化后续质谱的分析并可以减少所获得相互作用蛋白的假阳性比率。相应的该类具有反应位点选择性的光诱导的多功能交联剂可以更为广泛的用于蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，实现相互作用的复合物被交联并被富集、解析及确认。
发明内容
本发明的发明人通过设计一类结构简单以及容易合成的具有光交联活性的反应官能团，该类光活性能团主要含有邻硝基苄醇的结构。该类反应官能团在光诱导的条件下，主要和胺基反应，在蛋白质复合物中主要和蛋白质中的赖氨酸的侧链胺基反应，形成结构稳定的交联片段。我们通过邻硝基苄醇被光激活机理深入解析和苯环上电子效应、取代基位置的考察，设计合成了一系列含有邻硝基苄醇官能团以及其他具有化学交联活性的官能团，发展成多种不同交联性质和功能的组合，根据不同生物大分子的特点以及研究目的的需要，这些多功能的交联试剂可以实现不同方式的交联和时间可控的蛋白质交联，实现蛋白质的有效捕捉。
本发明开发的邻硝基苄醇结构，在邻硝基苄醇的苯环上不含有甲氧基，这和已有的一些光交联试剂有很大的不同(CN 109824565 A)。在光激活的条件下，产生的活性中间体具有较长的半衰期(大于30分钟)，能够和赖氨酸的侧链胺基实现高效的反应；苯环上不含甲氧基时可以使活性中间体在和赖氨酸进行反应时，由于反应位阻减小，反应中间体有很好的反应活性，有望获得更高的反应效率。同时，由于苯环上不含有甲氧基，因此该反应官能团的疏水性减弱，有助于在生物样品如蛋白质存在的缓冲液中更好地和赖氨酸反应，获得一些突出的反应速度和蛋白质的交联效率。同时，因结构的改变能够获得具有更佳交联效率的交联剂。另一方面，邻硝基苄醇官能团与赖氨酸交联反应的到的交联片段非常稳定，与赖氨酸反应可以在非常温和的条件下实现，反应速度非常快，反应效率高。因此，本发明开发的光诱导的多功能交联剂具有很好的捕捉相互作用蛋白质的能力，在蛋白质组学和蛋白质相互作用和生物大分复合物相互作用的研究中具有重要应用潜力和的实用价值。
本发明的一个目的是提供通式(I)所示的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物作为一类光诱导的多功能交联剂。
本发明的另一个目的是提供该类化合物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供该类化合物在在生物大分子相互作用中的应用，如蛋白质-蛋白质相互作用，蛋白质-核酸相互作用，蛋白质复合物与核酸之间相互作用；蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，细胞器之间以及蛋白质与细胞器等之间的任一一种相互作用的捕捉以及后续对交联片段的分析。该类交联剂能够用于细胞裂解液、经常规实验操作处理后的生物学样品或者活体细胞中，进行捕捉蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质与核酸之间相互作用，蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，并用于后续生物大分子富集、蛋白质凝胶电泳、蛋白质印迹、蛋白质交联质谱分析中的应用。
本发明提供如下通式(Ⅰ)所示的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物：
Figure BDA0002712069500000041
其中
Figure BDA0002712069500000042
选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000043
R1选自氢原子、卤素、C2-6烷氧基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C3-10环烷基、5-8元杂环基、C6-10芳基、5-6元杂芳基，其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、C1-C6烷氧基、氰基、硝基取代基所取代，并且R1不为甲氧基；
X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-NH-CH2-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-O-CH2-、-CH2-、-COO-、-OCO-、-O-、-S-、-SO2-、-C≡C-、-C＝C-、-SO2NH-、-NHCONH-、-NHCSNH-、-NH-、-CONH-CH2-、或X不存在；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-SO2-、-SO-、-S-S-、-NH-N＝C-、-N＝N-、
Figure BDA0002712069500000051
五元杂芳环、六元杂芳环、C3-6烷基环、C3-6杂烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、-NR2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、C1-4烷基；
R2为氢、甲基；
R3选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000052
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
a为0，1，2或3；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8；
优选地，通式(Ⅰ)所示所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，
其中
Figure BDA0002712069500000053
选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000061
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-NH-CH2-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-O-CH2-、-CH2-、-COO-、-OCO-、-O-、-S-、-SO2-、-C≡C-、-C＝C-、-SO2NH-、-NHCONH-、-NHCSNH-、-NH-、-CONH-CH2-、或X不存在；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-SO2-、-SO-、-S-S-、-NH-N＝C-、-N＝N-、
Figure BDA0002712069500000062
五元杂芳环、六元杂芳环、C3-6烷基环、C3-6杂烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、-NR2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、C1-4烷基；
R2为氢、甲基；
R3选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000071
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8；
更优选地，如通式(Ⅰ)所示所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，
其中
Figure BDA0002712069500000072
选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000073
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-NH-CH2-、-O-CH2-、-COO-、-O-、-CONH-CH2-；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-S-S-、-SO2-、-SO-、-NH-N＝C-、
Figure BDA0002712069500000081
六元杂芳环、C3-6烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、甲基；
R3选自以下基团：
Figure BDA0002712069500000082
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8；
进一步优选地，如通式(Ⅰ)所示所述化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物选自如下通式：
Figure BDA0002712069500000091
其中，L和
Figure BDA0002712069500000092
的定义与上述定义中相同；
在一优选实施方式中，如通式(Ⅰ)所示所述化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物选自如下通式：
Figure BDA0002712069500000101
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，
Figure BDA0002712069500000102
和X的定义与权利要求1相同；
n1、n2和n3为0～10的整数；
n4、n5、n6、n12、n13、n15和n16为0～8的整数；
n7、n8、n17、n36、n40、n50和n51为2～8的整数；
n9、n10、n11、n14、n18、n19、n20、n21、n22、n23、n24、n25、n26、n27、n28、n29、n30、n31、n32、n33、n34、n35、n37、n38、n39、n41、n42、n43、n44、n45、n46、n47、n48和n49为1～8的整数；
更优选地，通式(I)的化合物选自下列化合物：
Figure BDA0002712069500000111
Figure BDA0002712069500000121
Figure BDA0002712069500000131
Figure BDA0002712069500000141
Figure BDA0002712069500000151
Figure BDA0002712069500000161
Figure BDA0002712069500000171
Figure BDA0002712069500000181
Figure BDA0002712069500000191
Figure BDA0002712069500000201
Figure BDA0002712069500000211
Figure BDA0002712069500000221
其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“烃基”是指只含有碳原子和氢原子的取代基，非限制性地包括甲基、乙基、异丙基、丙基、环己基、苯基等。
术语“C1-C6烷基”是指链上具有1至6个碳原子的直链或支链饱和烃基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。
术语“环烷基”是指由碳原子组成的饱和环状烷基，非限制性地包括环丁基、环戊基、环己基等。
术语“C3-C10环烷基”是指含3至10个碳原子的饱和单-或多-环系，非限制性地包括环丙基，环丁基，环戊基，或环己基。
术语“C6-C10芳基”是指包含6-10个环原子但环原子中不含杂原子的芳香族环基，如苯基、萘基。
术语“5-8元杂环基”是指含有一个或多个饱和和/或部分饱和环，其包括5至8个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫的杂原子，其余环原子为碳；例如，环氧丙烷、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基。
术语“5-6元杂芳基”是指包含5-6个环原子且在环原子中含有1-4个杂原子作为环成员的单价芳香环基团。杂原子可以选自氮、氧或硫。
术语“互变异构体”是指容易通过互为异构体的化学反应互变的结构异构体，该反应一般导致伴随单键和相邻双键转变的氢原子或质子的形式移动。
术语“对映体”是指互为镜像而不可重叠的立体异构体。
“非对映体”是指具有两个或者两个以上的手性中性，并且不成镜像的立体异构体。
“消旋体”是指两个互为镜像的立体异构体，旋光性相反，互相抵消了旋光性。
盐是指分子与对应的有机酸、无机酸或者有机碱、无机碱形成相应的盐的，例如化合物的盐酸、甲酸、三氟乙酸、琥珀酸、甲磺酸盐等。
“水合物”是指含有水的化合物。
本发明也包含这里公布的任何一种新的中间体。
本发明有一个方面提供了通式(I)所示的降解剂的制备方法，所述方法选自如下方法之一：
合成方法一：
Figure BDA0002712069500000231
其中n1为0～10的整数，n2为0～5的整数，n3为0～10的整数
步骤1-1：化合物1A在碳酸氢钠、水和丙酮条件下回流水解得到化合物1B；
步骤1-2：化合物1B溶于DMF，在咪唑存在下与叔丁基二甲基氯硅烷反应得到化合物1C；
步骤1-3：化合物1C溶于干燥四氢呋喃，加入硼烷还原得到化合物1D；
步骤1-4：化合物1D和1E在缩合条件下生成化合物1G；
步骤1-5：化合物1G在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1H；
步骤1-6：化合物1D和1F在缩合条件下生成化合物1J；
步骤1-7：化合物1J在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1K；
步骤1-8：化合物1D和1L溶于乙腈中，在碳酸钾作用下回流反应得到化合物1M；
步骤1-9：化合物1M在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1N。
合成方法二：
Figure BDA0002712069500000241
其中n为0～5的整数
步骤2-1：化合物2和NHS缩合生成化合物2A；
步骤2-2：化合物1B和2B在缩合条件下生成化合物2C；
步骤2-3：化合物2A和2C在缩合条件下生成化合物2D。
合成方法三：
Figure BDA0002712069500000242
步骤3-1：化合物1B与NHS缩合生成化合物3A；
步骤3-2：化合物3B在SDI，KI条件下得化合物3C；
步骤3-3：化合物3C在加入HCl的1,4-二氧六环溶液室温反应得化合物3D；
步骤3-4：化合物3D和3A在缩合条件下得化合物3E。
合成方法四：
Figure BDA0002712069500000243
其中n1为0～10的整数，n2为0～5的整数
步骤4-1：化合物4A和1E在缩合条件下得化合物4B；
步骤4-2；化合物4B在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物4C；
步骤4-3：化合物4A和IF在缩合条件下得化合物4D；
步骤4-4：化合物4D在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物4F。
合成方法五：
Figure BDA0002712069500000251
步骤5-1：化合物5A和1,4-二溴丁烷在碳酸钾条件下得化合物5B；
步骤5-2：化合物5B与氯甲酸4-硝基苯酯，羧酸羧肼乙酯和TEA反应得到化合物5C；
步骤5-3：化合物5C和叠氮化钠反应得化合物5D；
步骤5-4：化合物5D用三苯基磷还原后，与化合物1C缩合得化合物5E；
步骤5-4：化合物5E与K2CO3加热反应后，用盐酸甲醇溶液室温反应得化合物5F。合成方法六：
Figure BDA0002712069500000252
步骤6-1：化合物6A和双(2-溴乙基)醚在碳酸钾回流条件下得化合物6B；
步骤6-2：化合物6B与甲基三苯基溴化磷和NaH反应的化合物6C；
步骤6-3：化合物6C和苯二甲酰亚胺钾盐反应得化合物6D；
步骤6-4：化合物6D与水合肼反应得化合物6E；
步骤6-5：化合物1C与对硝基苯基氯甲酸酯在DIPEA条件下室温反应得到化合物6F；
步骤6-6：化合物6F与6E缩合得化合物6G；
步骤6-7：化合物6G与一氯化碘，叠氮化钠反应，并在叔丁醇钾作用下得化合物6H；
步骤6-8：化合物6H在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物6I。
本发明提供了的如式(I)的光诱导的多功能交联剂在生物大分子相互作用中的应用，如蛋白质-蛋白质相互作用，蛋白质-核酸相互作用，蛋白质复合物与核酸之间相互作用。
本发明提供了的如式(I)的光诱导的多功能交联剂，用于蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，细胞器之间以及蛋白质与细胞器之间的任意一种相互作用的捕捉以及后续的分析。
本发明提供了如式(I)的光诱导的多功能交联剂，用于细胞裂解液、经试验处理后的生物学样品或者活体细胞中，进行捕捉蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质与核酸之间相互作用，并用于后续蛋白质富集、蛋白质凝胶电泳、蛋白质印迹、蛋白质交联质谱分析中的应用。
附图说明
图1示出了光诱导的多功能交联剂73与蛋白质相互作用的电泳图。
具体实施方式
实施例6：N-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺
Figure BDA0002712069500000261
步骤1-1：将4-溴甲基-3-硝基苯甲酸(5.0g，19.31mmol，1.0eq)溶于60mL丙酮中，加入60mL水，搅拌均匀。之后加入无水碳酸钠(7.16g，67.58mmol，3.5eq)。所得混合物在70℃反应2小时。用LC-MS监测反应。反应完成后，用2N的盐酸调节pH到3～4，乙酸乙酯萃取，干燥，旋走溶剂得到化合物1D 4.02g，为黄色固体，无需进一步纯化，直接投下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(d,J＝1.6Hz,1H),8.36(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,1H),5.11(s,2H).
步骤1-2：将化合物1A(54mg,0.275mmol)加入2:1CH2Cl2和三氟乙酸(1.5mL)的溶液中，在室温下搅拌1h后真空除去溶剂得黄色油状物。
步骤1-3：将化合物1D(104mg,0.275mmol)，HATU(104mg，0.275mmol)和所得油状物1B溶于无水DMF中,将DIPEA(227μL，1.38mmol)添加到该溶液中。将反应在室温搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥。真空除去溶剂后，残留物通过快速色谱纯化，得到化合物1C，为黄色油状物(30mg，32％)。1H NMR(600MHz,DMSO)δ8.74(t,J＝5.5Hz,1H),8.49(d,J＝1.7Hz,1H),8.20(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.99(s,2H),5.65(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.5Hz,2H),3.39(t,J＝7.1Hz,2H),3.25(dd,J＝12.8,6.9Hz,2H),1.53–1.46(m,4H),1.34–1.29(m,2H),1.25–1.22(m,2H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.1,163.8,146.6,141.1,134.4,134.0,132.0,128.4,123.0,59.9,37.0,28.8,27.9,25.9,25.8.HRMS(ESI-Q-TOF):m/z[M+H]+:376.1496.
实施例223：N-(6-(2-溴乙酰氨基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺
Figure BDA0002712069500000271
步骤2-1：将2-溴乙酸(2.00g，14.39mmol)溶于无水1,4-二氧六环(15mL)中，加入NHS(1.66g，14.39mmol)，在0℃下滴加DCC(3.27g，15.83mmol)的无水1,4-二恶烷(5mL)溶液，将反应混合物在室温搅拌2h并过滤，真空浓缩滤液，得到呈黄色油状的化合物2A(2.43g，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.64(s,2H),2.83(s,4H).
步骤2-2：在无水DMF(10mL)中加入化合物1D(400mg，2.03mmol)，HATU(849mg，2.23mmol)和叔丁基(6-氨基己基)氨基甲酸酯(483mg，2.23mmol)在0℃下逐滴滴加DIPEA(1mL，6.09mmol)，然后将混合物在室温下搅拌过夜。向混合物中加入H2O，并用乙酸乙酯萃取3次。有机层用水，盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过二氧化硅色谱法纯化，得到化合物2C，为黄色油状物(670mg，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(t,J＝5.5Hz,1H),8.50(d,J＝1.7Hz,1H),8.21(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.77(t,J＝5.4Hz,1H),5.66(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.4Hz,2H),3.27(dd,J＝12.9,6.7Hz,2H),2.89(q,J＝6.6Hz,2H),1.56–1.48(m,2H),1.36(s,9H),1.35–1.17(m,6H).
步骤2-3：将化合物2C(102mg，0.30mmol)溶解在1,4-二氧六环(15mL)中，并加入4MHCl/1,4-二氧六环(4mL)，将反应混合物在室温搅拌6h，浓缩，得到产物，无需进一步纯化即可用于下一步。将产物溶解在无水DMF(5mL)中，加入Et3N(0.13mL，0.90mmol)，然后在0℃下加入在无水DMF(3mL)中的化合物2A(78mg，0.332mmol)。将反应混合物在室温搅拌15分钟，并加入H2O和乙酸乙酯有机层用水和，盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。残余物通过二氧化硅色谱法纯化，得到化合物2D，为黄色固体(75mg，60％)。1H NMR(600MHz,DMSO)δ8.75(t,J＝5.5Hz,1H),8.50(d,J＝1.6Hz,1H),8.24(t,J＝5.1Hz,1H),8.21(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),4.87(s,2H),3.81(s,2H),3.27(dd,J＝13.0,6.8Hz,2H),3.06(dd,J＝12.9,6.8Hz,2H),1.56–1.50(m,2H),1.44–1.39(m,2H),1.33–1.28(m,4H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ165.8,163.9,146.6,141.2,134.1,132.1,128.4,123.0,59.9,39.4,38.9,29.6,28.9,28.8,26.2,26.0.HRMS(ESI-Q-TOF):m/z[M+H]+:416.0819.
实施例229：4-(2-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)乙基)苯基硫代氟酸酯
Figure BDA0002712069500000281
步骤3-1：化合物1D(1.00g，5.07mmol)和NHS(702mg，6.08mmol)溶于DMF(15mL)中，加入EDCI·HCl(1.16g，6.08mmol)，将反应混合物在室温搅拌2h。向混合物中加入H2O，并用乙酸乙酯萃取3次。有机层用2.8％KHSO4，盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。残余物通过二氧化硅色谱法纯化，得到呈黄色油状的产物化合物3A(710mg，48％)。
步骤3-2：在干燥的两室反应瓶的A室中充满1,1'-磺酰亚胺基咪唑(SDI，1.487g，7.5mmol)和氟化钾(KF，1.162g，20.0mmol)。接下来，在B室中加入化合物3B(1.18g,5.0mmol)，三乙胺(1.53mL，11.0mmol)和二氯甲烷(DCM，4mL)。最后，通过室A中的隔垫注射加入15mL三氟乙酸(TFA)/水混合物，在室温下搅拌18小时后，小心地取下其中一个盖以释放残余压力。将B室中加入H2O，并用乙酸乙酯萃取3次，经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将粗产物通过二氧化硅色谱法纯化得到白色固体825mg，收率52％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33–7.24(m,4H),3.37(dd,J＝12.9,6.4Hz,2H),2.83(t,J＝6.9Hz,2H),1.42(s,9H).
步骤3-3：化合物3C(200mg，0.626mmol)溶于HCl的1,4-二氧六环溶液中，将反应混合物在室温搅拌6h，浓缩，得到产物，无需进一步纯化即可用于下一步。
步骤3-4：残留物溶于无水DMF中，加入3A(185，0.626mmol)和三乙胺(175μL，1.25mmol)，室温反应15分钟，并加入H2O和乙酸乙酯有机层用水和,盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。残余物通过二氧化硅色谱法纯化，得到化合物3E(159mg，63％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.91(t,J＝5.4Hz,1H),8.47(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(dd,J＝25.2,8.7Hz,4H),5.66(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.5Hz,2H),3.54(dd,J＝12.9,6.8Hz,2H),2.93(t,J＝7.1Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO)δ38.65(s).
实施例247：N-(4-(4-(3,5-二氧杂-1,2,4-三唑烷基-4-基)苯氧基)丁基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺
Figure BDA0002712069500000291
步骤4-1：向在无水DMF(15mL)中的化合物1D(2.50g，12.7mmol)中加入TBSCl(3.82g，25.4mmol)和咪唑(1.73g，25.4mmol)，并在室温下搅拌过夜。向反应混合物中添加10％Na2CO3溶液，然后在0℃下用1M HCl将pH调节至5-6，用乙酸乙酯萃取水层3次，并将有机层用1M HCl洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，得到为黄色固体的化合物4G(3.40g，86％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.60(s,1H),8.49(s,1H),8.29(d,J＝8.1Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),5.10(s,2H),0.92(s,9H),0.11(s,6H).
步骤4-2：将氧羰酰-4-羟基苯胺(3.00g，14.34mmol)和1,4-二溴丁烷(9.29g，43.0mmol)溶于ACN(80mL)中，加入K2CO3(2.97g，21.5mmol)并回流12h。将反应混合物过滤，浓缩并通过硅胶色谱法纯化，得到为白色固体的化合物4A(2.62g，53％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),6.82(d,J＝9.0Hz,2H),3.93(t,J＝6.3Hz,2H),3.60(t,J＝6.7Hz,2H),2.00–1.90(m,2H),1.85–1.75(m,2H),1.45(s,9H).
步骤4-3：将化合物4A(1.60g，4.64mmol)溶于4M HCl/1,4-二氧六环中，并在室温搅拌2h。将混合物真空浓缩。将残余物溶于无水THF(70mL)中，在0℃下加入三乙胺(1.93ml，13.9mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(1.50g，7.42mmol)，并在室温下搅拌过夜。再向混合物添加羧酸羧肼乙酯(772mg，7.42mmol)和三乙胺(1.0ml，7.42mmol)，并搅拌3h。向混合物添加1MHCl，H2O和乙酸乙酯。将水层用乙酸乙酯萃取3次，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，得到为白色固体的化合物4B(1.25g，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.88(s,1H),8.53(s,1H),7.90(s,1H),7.34(d,J＝8.9Hz,2H),6.83(d,J＝9.0Hz,2H),4.05(q,J＝7.1Hz,2H),3.94(t,J＝6.3Hz,2H),3.60(t,J＝6.7Hz,2H),2.06–1.90(m,2H),1.87–1.74(m,2H),1.19(t,J＝6.8Hz,3H).
步骤4-4：化合物4B(400mg，1.07mmol)溶于无水DMF(10mL)中，加入NaN3(140mg，2.14mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌3h，然后加入水和乙酸乙酯。将水层用乙酸乙酯萃取3次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈棕色油状的产物化合物4C(341mg，95％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.88(s,1H),8.53(s,1H),7.90(s,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),4.05(q,J＝7.1Hz,2H),3.93(t,J＝6.0Hz,2H),3.40(t,J＝6.7Hz,2H),1.79–1.62(m,4H),1.19(t,J＝6.7Hz,3H).
步骤4-5：将化合物4C(300mg，0.89mmol)溶于无水THF(10mL)中，氮气保护下加入PPh3(303mg，1.16mmol)，并搅拌3h。向反应混合物加入H2O(2mL)，并在50℃下搅拌12h。将反应混合物浓缩，得到粗产物，无需进一步纯化。加入溶于无水DMF(10mL)中的化合物4G(277mg，0.89mmol)，加入NHS(134mg，1.16mmol)和EDCI·HCl(341mg，1.78mmol)，搅拌3h后，向反应混合物中加入H2O和乙酸乙酯，水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过二氧化硅色谱纯化，得到为黄色固体的化合物4D(322mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.88(s,1H),8.81(t,J＝5.3Hz,1H),8.52(s,2H),8.23(d,J＝8.1Hz,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.82(d,J＝8.9Hz,2H),5.08(s,2H),4.05(q,J＝7.1Hz,2H),3.94(t,J＝5.9Hz,2H),3.39–3.31(m,2H),1.85–1.62(m,4H),1.19(t,J＝6.7Hz,3H),0.91(s,9H),0.11(s,6H).
步骤4-6：化合物4D(200mg，0.35mmol)溶于MeOH，加入碳酸钾，并在50℃下反应，反应完全后，将反应液的pH调节至2，在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。残余物通过硅胶色谱纯化，得到为黄色固体的化合物4E(65mg，42％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.32(s,2H),8.82(t,J＝5.5Hz,1H),8.52(d,J＝1.7Hz,1H),8.23(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,2H),7.01(d,J＝9.0Hz,2H),5.65(s,1H),4.87(s,2H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.37(d,J＝6.8Hz,2H),1.83–1.75(m,2H),1.71(dt,J＝13.7,6.7Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ164.0,157.8,153.8,146.6,141.2,134.0,132.1,128.5,127.6,124.5,123.1,114.6,67.4,59.9,29.0,26.2,25.6.HRMS(ESI-Q-TOF):m/z[M+H]+:444.1516.
实施例250：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(2-(2-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸酯
Figure BDA0002712069500000311
步骤5-1：将对羟基苯甲醛(2.0g,16.34mmol)和化合物2,2'-二溴二乙醚(6.2mL,49mmol)溶于60mL乙腈中，室温条件下加入碳酸钾(6.78g，49mmol),升温回流反应过夜，TLC监测反应完全后，过滤浓缩，经硅胶柱层析得到化合物5A 3.7g为白色固体，收率82％。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ9.89(s,1H),7.88–7.79(m,2H),7.06–6.98(m,2H),4.23(dd,J＝5.3,4.0Hz,2H),3.96–3.86(m,4H),3.50(t,J＝6.2Hz,2H).
步骤5-2：将甲基三苯基溴化磷(5.65g,13.82mmol),60％氢化钠(790mg,19.77mmol)溶于80mL无水四氢呋喃中，在0℃下加入化合物5A(3.6g,13.18mmol)的20mL四氢呋喃溶液,缓慢升至室温反应6h,TLC监测反应完全后,减压浓缩，加入饱和氯化铵溶液，用乙酸乙酯萃取，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经硅胶柱层析得化合物5B为白色固体2.28g，收率80％。
步骤5-3：将化合物5B(2.27g,8.37mmol)溶于DMF中，室温条件下，加入邻苯二甲酰亚胺钾盐(1.86g,10.05mmol)，升温至80℃反应6h。TLC监测反应完全后，冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到5C为白色固体2.39g，收率为98％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.94–7.82(m,4H),7.34–7.28(m,2H),6.85–6.78(m,2H),6.66(ddd,J＝17.5,11.0,3.0Hz,1H),5.61(dd,J＝17.6,3.1Hz,1H),5.14(dd,J＝10.9,3.1Hz,1H),4.12–4.06(m,2H),3.90–3.76(m,6H).
步骤5-4：将化合物5C(2.3g,7mmol)溶于50mL乙醇中,加入85％水合肼，升温回流反应2h，反应完全后，冷却至室温，减压浓缩，固体加入0.1N的氢氧化钠溶液洗涤，过滤，滤液用二氯甲烷萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到为无色透明油状物1.38g的化合物5D。
步骤5-5：化合物4G(4.69g，15.06mmol，1.0eq)溶于50mL无水四氢呋喃中，冰浴，加入硼烷(1M，2.0eq，30.12mmol，30.12mL)，之后在50℃反应2h。反应完成后，冰浴条件下用甲醇淬灭反应，旋走溶剂，柱层析得到4.03g黄色油状物5E，收率为90％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(s,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.9Hz,1H),5.08(s,2H),4.79(s,2H),0.96(s,9H),0.14(s,6H).
步骤5-6：将化合物5E(478mg,1.6mmol)溶于无水四氢呋喃中，在0℃加入对硝基苯基氯甲酸酯(518mmol,2.57mmol),三乙胺(559μL,4.02mmol)，升至室温反应过夜，浓缩直接投下一步。
步骤5-7：将5F重新溶四氢呋喃中冷却至0℃，加入化合物5E(500mg,2.41mmol)和三乙胺(447μL,3.22mmol)，升至室温反应4h.TLC监测反应完全后，加入0.5N HCl淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经硅胶柱层析得到5G为浅黄色固体308mg，收率89％。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.03(s,1H),7.75(q,J＝8.1Hz,2H),7.42(t,J＝5.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,2H),6.90(d,J＝8.7Hz,2H),6.65(dd,J＝17.7,11.0Hz,1H),5.65(dd,J＝17.7,1.0Hz,1H),5.21–5.07(m,3H),5.01(s,2H),4.11–4.02(m,2H),3.75–3.69(m,2H),3.49(t,J＝5.9Hz,2H),3.18(q,J＝5.8Hz,2H),0.90(s,9H),0.09(s,6H).
步骤5-8：在-20℃下，将一氯化碘(417mg，2.5mmol)的乙腈溶液(5mL)加入到叠氮化钠(278mg,4.27mmol)的乙腈悬浊液中，搅拌0.5h后，加入5G(454mg,0.855mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，相同温度反应1h后，加入饱和硫代硫酸钠淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物。将粗品溶10mL乙醚中，0℃下加入叔丁醇钾(114mg,1.28mmol)，反应1h后，加入饱和氯化铵淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物。再将粗品溶于10mL甲苯中，加热至110℃反应2h,减压浓缩，经硅胶柱层析得到5H为黄色固体330mg，收率71％。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.02(s,1H),7.85–7.79(m,2H),7.78–7.70(m,2H),7.43(t,J＝5.7Hz,1H),7.19(d,J＝8.7Hz,2H),5.11(s,2H),5.00(s,2H),4.24–4.17(m,2H),3.83–3.71(m,2H),3.51(t,J＝5.8Hz,2H),3.24–3.10(m,2H),1.63(s,2H),0.90(s,9H),0.08(s,6H).
步骤5-9：将5H(330mg,0.607mmol)溶于10mL干燥的四氢呋喃中，加入1M TBAF的四氢呋喃溶液(1.2mL),室温反应1h后，减压浓缩柱层析得到5I为黄色固体110mg,收率33％。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.01(d,J＝1.3Hz,1H),7.85–7.78(m,3H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(t,J＝5.6Hz,1H),7.19(d,J＝8.7Hz,2H),5.55(t,J＝5.5Hz,1H),5.11(s,2H),4.80(d,J＝5.5Hz,2H),4.25–4.15(m,2H),3.81–3.71(m,2H),3.51(t,J＝5.8Hz,2H),3.19(dd,J＝11.6,5.8Hz,2H),1.63(s,2H).ESI-MS[M+H]+m/z＝430.31,ESI-MS[M-H]-m/z＝428.31.
根据合成方法一至方法六，以及实施例实施例6,223,229,247,250的合成方法，可以合成以下化合物。
实施例225：N-(2-(2-(4-(4-(3,5-二氧杂-1,2,4-三唑烷基-4-基)苯氧基)乙氧基)乙基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(225)
ESI-MS[M+H]+m/z＝459.14，实测值为459.27。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.29(s,2H),8.90(t,J＝5.4Hz,1H),8.52(d,J＝1.6Hz,1H),8.22(d,J＝8.2Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,2H),6.99(d,J＝9.0Hz,2H),5.76(s,1H),4.87(s,2H),4.16–4.09(m,2H),3.82–3.75(m,2H),3.64(t,J＝5.8Hz,2H),3.48(dd,J＝11.3,5.6Hz,2H).
实施例226：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(2-(2-(4-(3,5-二氧代-1,2,4，三唑烷丁-4-基)苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(226)
ESI-MS[M+H]+m/z＝489.15，实测值为490.70。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.33(s,2H),8.02(d,J＝1.3Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(t,J＝5.6Hz,1H),7.36–7.26(m,2H),7.02(d,J＝8.9Hz,2H),5.55(s,1H),5.11(s,2H),4.80(s,2H),4.16–4.04(m,2H),3.78–3.69(m,2H),3.50(t,J＝5.9Hz,2H),3.19(dd,J＝11.6,5.8Hz,2H).
实施例227：N-(2-(2-(2-(2-(4-(3,5-二氧杂-1,2,4-三唑啉丁-4-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(227)
ESI-MS[M+H]+m/z＝503.17，实测值为503.20。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.52(d,J＝1.8Hz,1H),8.15(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),7.94(d,J＝8.1Hz,1H),7.35–7.28(m,2H),7.02–6.94(m,2H),4.97(s,2H),4.16–4.09(m,2H),3.89–3.83(m,2H),3.77–3.71(m,2H),3.71–3.66(m,4H),3.60(q,J＝5.1Hz,2H).
实施例230：4-(2-((((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)氨基)乙基)苯基硫代氟酸酯(230)1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.99(d,J＝1.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.3Hz,3H),7.40(d,J＝8.7Hz,2H),5.55(t,J＝5.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.81(d,J＝5.6Hz,2H),3.26(dd,J＝13.0,6.9Hz,2H),2.79(t,J＝7.1Hz,2H).ESI-MS[M+H]+m/z＝428.07，实测值为428.26
实施例233：4-(2-(3-(4-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)丁基)脲基)乙基)苯基硫代氟酸酯(233)
ESI-MS[M+H]+m/z＝512.14，实测值为512.05。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(t,J＝5.6Hz,1H),8.51(d,J＝1.6Hz,1H),8.22(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.5Hz,2H),7.39(d,J＝8.7Hz,2H),5.87(t,J＝5.5Hz,1H),5.81(t,J＝5.6Hz,1H),5.65(t,J＝5.4Hz,1H),4.87(d,J＝5.3Hz,2H),3.29–3.19(m,4H),3.00(dd,J＝12.4,6.5Hz,2H),2.73(t,J＝7.0Hz,2H),1.50(dd,J＝14.7,7.0Hz,2H),1.46–1.33(m,2H).
实施例235：4-(2-(3-(3-(3-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)丙基)脲基)乙基)苯基硫代氟酸酯(235)
ESI-MS[M+H]+m/z＝498.12，实测值为498.25。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.77(t,J＝5.5Hz,1H),8.51(d,J＝1.7Hz,1H),8.21(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.6Hz,2H),7.40(d,J＝8.7Hz,2H),5.94(dd,J＝9.0,5.5Hz,2H),5.65(t,J＝5.4Hz,1H),4.87(d,J＝5.1Hz,2H),3.30–3.21(m,5H),3.04(q,J＝6.5Hz,2H),2.74(t,J＝7.0Hz,2H),1.61(p,J＝6.8Hz,2H).
实施例237：4-(2-(3-(6-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)己基)脲基)乙基)苯基硫代氟酸酯(237)
ESI-MS[M+H]+m/z＝540.17，实测值为540.36。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(t,J＝5.4Hz,1H),8.51(d,J＝1.4Hz,1H),8.22(dd,J＝8.1,1.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.76–7.62(m,2H),7.50(d,J＝8.5Hz,2H),7.39(d,J＝8.6Hz,2H),5.83(dt,J＝17.2,5.6Hz,2H),5.67(s,1H),4.86(s,2H),3.25(ddd,J＝17.0,12.9,6.7Hz,4H),2.95(dd,J＝12.1,6.2Hz,2H),2.73(t,J＝7.0Hz,2H),1.70–1.59(m,2H),1.58–1.47(m,3H),1.43–1.31(m,5H).
实施例239：4-((2-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基甲酰基)苯基硫代氟酸酯(239)
ESI-MS[M+H]+m/z＝441.06，实测值为441,13。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.91(s,1H),8.79(s,1H),8.50(d,J＝1.7Hz,1H),8.21(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),8.06–7.99(m,2H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),7.72(d,J＝8.7Hz,2H),5.65(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.6Hz,2H),3.51–3.44(m,4H).
实施例240：4-((2-((((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)氨基)乙基)氨基甲酰基)苯基硫代氟酸酯(240)
ESI-MS[M+H]+m/z＝471.07，实测值为471.17
实施例241：4-((4-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)丁基)氨基甲酰基)苯基硫代氟酸酯(241)
ESI-MS[M+H]+m/z＝469.10，实测值为469.19。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.79(t,J＝5.3Hz,1H),8.66(t,J＝5.4Hz,1H),8.51(d,J＝1.3Hz,1H),8.22(d,J＝8.1Hz,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,2H),5.66(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.5Hz,2H),3.33–3.25(m,4H),1.67–1.50(m,4H).
实施例242：4-((4-((((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)氨基)丁基)氨基甲酰基)苯基硫代氟酸酯(242)
ESI-MS[M+H]+m/z＝499.11，实测值为499.23。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.62(t,J＝5.4Hz,1H),8.06–7.97(m,3H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(dd,J＝10.1,5.0Hz,3H),7.37(t,J＝5.7Hz,1H),5.55(t,J＝5.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.81(d,J＝5.7Hz,2H),3.26(dd,J＝12.5,6.5Hz,2H),3.03(dd,J＝12.6,6.5Hz,2H),1.62–1.40(m,4H).
实施例243：N-(2-(2-氯乙酰胺基)乙基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(243)
ESI-MS[M+H]+m/z＝315.06，实测值为315.28。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.85(t,J＝5.2Hz,1H),8.50(d,J＝1.6Hz,1H),8.36(t,J＝5.5Hz,1H),8.21(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.2Hz,1H),5.66(t,J＝5.9Hz,1H),4.87(s,2H),4.06(s,2H),3.42–3.24(m,8H).
实施例244：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(2-溴乙酰氨基)丁基)氨基甲酸酯(244)
ESI-MS[M+H]+m/z＝417.05，实测值为416.21。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.25(t,J＝5.1Hz,1H),8.01(d,J＝1.5Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(t,J＝5.6Hz,1H),5.10(s,2H),4.81(s,2H),3.81(s,2H),3.03(dd,J＝30.4,5.6Hz,4H),1.47–1.34(m,4H).
实施例245：N-(4-(2-溴乙酰氨基)丁基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(245)
ESI-MS[M+H]+m/z＝387.04，实测值为387.17。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.77(t,J＝5.5Hz,1H),8.51(d,J＝1.6Hz,1H),8.42(t,J＝5.5Hz,1H),8.22(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,1H),5.65(t,J＝5.5Hz,1H),5.08(s,2H),4.87(d,J＝5.5Hz,2H),3.31–3.25(m,2H),3.23–3.11(m,2H),1.64–1.42(m,4H).
实施例246：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(6-(2-溴乙酰氨基)己基)氨基甲酸酯(246)
ESI-MS[M+H]+m/z＝445.08，实测值为445.09。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.23(s,1H),8.00(d,J＝1.2Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(s,1H),5.55(t,J＝5.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.81(d,J＝5.6Hz,2H),3.81(s,2H),3.04(dd,J＝12.9,6.8Hz,2H),2.98(dd,J＝13.1,6.6Hz,2H),1.50–1.29(m,8H).
实施例248：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(6-(2-氯乙酰胺基)己基)氨基甲酸酯(248)
ESI-MS[M+H]+m/z＝401.14，实测值为401.21。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.16(s,1H),8.01(d,J＝1.2Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(t,J＝5.6Hz,1H),5.55(t,J＝5.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.81(d,J＝5.6Hz,2H),4.02(s,2H),3.06(dd,J＝12.9,6.7Hz,2H),2.98(dd,J＝13.0,6.7Hz,2H),1.39(m,4H),1.24(m,4H).
实施例249：N-(2-(2-(2-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)乙氧基)乙基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(249)
ESI-MS[M+H]+m/z＝399.14，实测值为399.25。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.86(t,J＝5.4Hz,1H),8.49(d,J＝1.4Hz,1H),8.21(d,J＝8.1Hz,1H),7.91(d,J＝8.1Hz,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,2H),7.16(d,J＝8.6Hz,2H),5.63(t,J＝5.5Hz,1H),4.86(d,J＝5.5Hz,2H),4.26–4.19(m,2H),3.85–3.78(m,2H),3.65(t,J＝5.8Hz,2H),3.48(dd,J＝11.4,5.7Hz,2H),1.63(s,2H).
实施例253：N-(2-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)乙基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(253)
ESI-MS[M+H]+m/z＝355.12，实测值为355.17。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.82(s,1H),8.51(d,J＝1.1Hz,1H),8.22(d,J＝8.1Hz,1H),7.97–7.78(m,3H),7.18(d,J＝8.7Hz,2H),5.66(t,J＝5.5Hz,1H),4.87(d,J＝5.1Hz,2H),4.12(dt,J＝17.5,6.3Hz,2H),3.44–3.35(m,2H),1.86–1.67(m,4H),1.63(s,1H).
实施例1：5-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)-N-(4-(羟甲基-3-硝基苄基)戊酰胺(1)
ESI-MS[M+H]+m/z＝438.16，实测值为438.28
实施例2：1-(6-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)己基)-1H-吡咯-2,5-二酮(2)
ESI-MS[M+H]+m/z＝362.16，实测值为362.38
实施例3：1-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)丁基)-1H-吡咯-2,5-二酮(3)
ESI-MS[M+H]+m/z＝334.13，实测值为334.18
实施例4：3-((2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)二硫基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(4)
ESI-MS[M+H]+m/z＝426.07，实测值为426.26
实施例5：4-(羟甲基)-3-硝基苄基5-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)戊酸酯(5)ESI-MS[M+H]+m/z＝439.14，实测值为439.36
实施例7：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-(2-(2-(2-，2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(7)
ESI-MS[M+H]+m/z＝423.13，实测值为423.36
实施例8：1-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)丁基)-1H-吡咯-2,5-二酮(8)
ESI-MS[M+H]+m/z＝435.12，实测值为335.16
实施例9：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-((2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)二硫烷基)丙酸酯(9)
ESI-MS[M+H]+m/z＝427.06，实测值为427.20
实施例10：4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丁酰胺(10)
ESI-MS[M+H]+m/z＝348.11，实测值为348.36
实施例11：6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4,5-二羟基-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)己酰胺(11)
ESI-MS[M+H]+m/z＝408.13，实测值为408.25
实施例12：3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(12)
ESI-MS[M+H]+m/z＝334.10，实测值为334.26
实施例13：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁基)氨基甲酸酯(13)
ESI-MS[M+H]+m/z＝378.12，实测值为378.30
实施例14：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-(2,5-二氧杂-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸酯(14)
ESI-MS[M+H]+m/z＝335.08，实测值为335.30
实施例15：5-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)戊酰胺(15)
ESI-MS[M+H]+m/z＝362.13，实测值为362.35
实施例16：1-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁基)-3-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)脲(16)
ESI-MS[M+H]+m/z＝377.14，实测值为377.26
实施例17：4-(羟甲基)-3-硝基苄基4-(2,5-二氧-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸酯(17)
ESI-MS[M+H]+m/z＝349.10，实测值为349.24
实施例18：N，N-双(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)-2-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)乙酰胺(18)
ESI-MS[M+H]+m/z＝457.13，实测值为457.08
实施例19：(1R，4R)-4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)甲基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)环己烷-1-甲酰胺(19)
ESI-MS[M+H]+m/z＝402.16，实测值为402.26
实施例20：6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)己酰胺(20)
ESI-MS[M+H]+m/z＝376.14，实测值为376.26
实施例21：4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)丁酰胺(21)
ESI-MS[M+H]+m/z＝348.11，实测值为348.26
实施例22：3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)苯甲酰胺(22)
ESI-MS[M+H]+m/z＝382.10，实测值为382.22
实施例23：1-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)丁基)-1H-吡咯-2,5-二酮(23)
ESI-MS[M+H]+m/z＝334.13，实测值为334.25
实施例24：4-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丁酰胺(24)
ESI-MS[M+H]+m/z＝424.14，实测值为424.26
实施例25：4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)甲基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)环己烷-1-甲酰胺(25)
ESI-MS[M+H]+m/z＝402.16，实测值为402.42
实施例26：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯乙基)氨基甲酸酯(26)
ESI-MS[M+H]+m/z＝426.12，实测值为426.56
实施例27：3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(2-(3-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙基)丙酰胺(27)
ESI-MS[M+H]+m/z＝449.16，实测值为449.26
实施例28：4-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)丁酰胺(28)
ESI-MS[M+H]+m/z＝424.14，实测值为424.20
实施例29：6-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰氨基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)己酰胺(29)
ESI-MS[M+H]+m/z＝447.18，实测值为447.10
实施例30：1-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰氨基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)-3,6,9,12-四氧代-15-酰胺(30)
ESI-MS[M+H]+m/z＝581.24，实测值为581.36
实施例31：11-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)酰胺(31)
ESI-MS[M+H]+m/z＝446.22，实测值为446.36
实施例32：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(1R，4R)-4-(((2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)甲基)环己烷-1-甲酸(32)
ESI-MS[M+H]+m/z＝403.14，实测值为403.20
实施例33：3-(羟甲基)-4-硝基苄基6-(2,5-二氧杂-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(33)
ESI-MS[M+H]+m/z＝377.13，实测值为377.20
实施例34：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-(2,5-二氧-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸酯(34)
ESI-MS[M+H]+m/z＝349.10，实测值为349.18
实施例35：1-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰氨基)-N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)-3,6,9,12-四氧代-15-酰胺(35)
ESI-MS[M+H]+m/z＝581.24，实测值为581.2
实施例36：3-(羟甲基)-4-硝基苄基1-(2,5-二氧杂-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧杂-7,10,13,16-四氧杂-4-氮杂-19-酸酯(36)
ESI-MS[M+H]+m/z＝582.22，实测值为582.24
实施例37：3-(羟甲基)-4-硝基苄基3-(2,5-二氧-2-，5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯甲酸酯(37)
ESI-MS[M+H]+m/z＝383.08，实测值为383.12
实施例38：1-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)丁基)-1H-吡咯-2,5-二酮(38)
ESI-MS[M+H]+m/z＝335.12，实测值为335.14
实施例39：4-(羟甲基)-3-硝基苄基4-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)丁酸酯(39)
ESI-MS[M+H]+m/z＝425.13，实测值为425.26
实施例40：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-(((2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)甲基)环己烷-1-甲酸(40)
ESI-MS[M+H]+m/z＝403.14，实测值为403.20
实施例41：3-(羟甲基)-4-硝基苄基3-(2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)乙氧基)丙酸酯(41)
ESI-MS[M+H]+m/z＝450.14，实测值为450.20
实施例42：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)苯基)丁酸酯(42)
ESI-MS[M+H]+m/z＝425.13，实测值为425.20
实施例43：3-(羟甲基)-4-硝基苄基6-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)己酸酯(43)
ESI-MS[M+H]+m/z＝448.30
实施例44：3-(羟甲基)-4-硝基苄基11-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)十一酸酯(44)
ESI-MS[M+H]+m/z＝448.16，实测值为448..40
实施例45：N-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(45)
ESI-MS[M+H]+m/z＝347.11，实测值为348.30
实施例46：6-叠氮基-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)己酰胺(46)
ESI-MS[M+H]+m/z＝322.14，实测值为322.18
实施例47：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-叠氮己酸酯(47)
ESI-MS[M+H]+m/z＝323.13，实测值为323.25
实施例48：3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(48)
ESI-MS[M+H]+m/z＝368.15，实测值为368.27
实施例49：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙酸酯(49)
ESI-MS[M+H]+m/z＝369.13，实测值为369.16
实施例50：6-((4-叠氮基-2-硝基苯基)氨基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)己酰胺(50)
ESI-MS[M+H]+m/z＝458.17，实测值为458.29
实施例51：5-叠氮基-N-(2-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)丙基)二硫基)乙基)-2-硝基苯甲酰胺(51)
ESI-MS[M+H]+m/z＝522.12，实测值为522.15
实施例52：3-((2-(2-(7-叠氮基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-3-基)乙酰氨基)乙基)二硫基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(52)
ESI-MS[M+H]+m/z＝587.13，实测值为587.16
实施例53：4-叠氮基-2-羟基-N-(2-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-3-氧代丙基)二硫基)乙基)苯甲酰胺(53)
ESI-MS[M+H]+m/z＝507.10，实测值为507.12
实施例54：3-((4-叠氮基苯基)二硫基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(54)
ESI-MS[M+H]+m/z＝420.09，实测值为420.15
实施例55：5-叠氮-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-2-硝基苯甲酰胺(55)
ESI-MS[M+H]+m/z＝373.08，实测值为373.12
实施例56：4-叠氮基-2-羟基-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)苯甲酰胺(56)
ESI-MS[M+H]+m/z＝344.09，实测值为344.12
实施例57：4-(羟甲基)-3-硝基苄基4-叠氮基-2-羟基苯甲酸酯(57)
ESI-MS[M+H]+m/z＝345.08，实测值为345.38
实施例58：5-叠氮基-N-(2-(3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)丙基)二硫基乙基)-2-硝基苯甲酰胺(58)
ESI-MS[M+H]+m/z＝523.10，实测值为523.45
实施例59：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-((2-(2-(2-(7-叠氮基-4-甲基-2-氧代-2H-铬-3-基)乙酰胺基)乙基)二硫烷基)丙酸酯(59)
ESI-MS[M+H]+m/z＝588.11，实测值为588.62
实施例60：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-((4-叠氮基-2-硝基苯基)氨基)己酸酯(60)
ESI-MS[M+H]+m/z＝459.15，实测值为459.23
实施例61：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-((2-(4-叠氮基-2-羟基苯甲酰胺基)乙基)二硫烷基)丙酸酯(61)
ESI-MS[M+H]+m/z＝508.09，实测值为508.44
实施例62：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-((4-叠氮苯基)二硫烷基)丙酸酯(62)
ESI-MS[M+H]+m/z＝421.06，实测值为421.26
实施例63：4-(羟甲基)-3-硝基苄基5-叠氮基-2-硝基苯甲酸酯(63)
ESI-MS[M+H]+m/z＝374.07，实测值为374.01
实施例65：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-叠氮基苯甲酸酯(65)
ESI-MS[M+H]+m/z＝329.08，实测值为329.32
实施例66：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基10-(((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-10-氧代癸酸酯(66)
ESI-MS[M+H]+m/z＝464.20，实测值为464.18
实施例67：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-3-氧丙基)二硫烷基)丙酸酯(67)
ESI-MS[M+H]+m/z＝472.08，实测值为472.10
实施例68：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-3-氧丙基)二硫烷基)丙酸酯(68)
ESI-MS[M+H]+m/z＝473.06，实测值为473.56
实施例69：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(2-(((4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙基)琥珀酸酯(69)
ESI-MS[M+H]+m/z＝524.14，实测值为524.26
实施例70：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸酯(70)
ESI-MS[M+H]+m/z＝468.15，实测值为468.25
实施例71：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基6-(4-((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基己酸酯(71)
ESI-MS[M+H]+m/z＝533.25，实测值为533.40
实施例72：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)戊酸酯(72)
ESI-MS[M+H]+m/z＝380.14，实测值为380.16
实施例74：癸二酸酯1-(2,5-二氧杂吡咯烷-1-基)10-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)(74)
ESI-MS[M+H]+m/z＝465.18，实测值为465.56
实施例75：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)苯甲酸酯(75)
ESI-MS[M+H]+m/z＝400.11，实测值为400.20
实施例76：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)苯甲酸酯(76)
ESI-MS[M+H]+m/z＝401.09，实测值为401.42
实施例77：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(2-(((4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙基)琥珀酸酯(77)
ESI-MS[M+H]+m/z＝525.13，实测值为525.54
实施例78：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸酯(78)
ESI-MS[M+H]+m/z＝469.14，实测值为469.56
实施例79：2,5-二氧吡咯烷基-1-基6-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)己酸酯(79)
ESI-MS[M+H]+m/z＝547.23，实测值为547..56
实施例80：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基5-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)戊酸酯(80)
ESI-MS[M+H]+m/z＝394.12，实测值为394.42
实施例81：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)己二酸酯(81)
ESI-MS[M+H]+m/z＝409.12，实测值为409.38
实施例82：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-5-氧戊酸酯(82)
ESI-MS[M+H]+m/z＝394.12，实测值为394.28
实施例84：1-((5-((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-5-氧戊烷酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(84)
ESI-MS[M+H]+m/z＝482.04，实测值为482.26
实施例85：1-((7-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-7-氧庚酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(85)
ESI-MS[M+H]+m/z＝525.07，实测值为525.28
实施例86：1-((5-((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-5-氧戊二酰基-2,2,4,4-d4)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(86)
ESI-MS[M+H]+m/z＝486.07，实测值为486.20
实施例87：2,5-5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(2-(3-((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(87)
ESI-MS[M+H]+m/z＝498.16，实测值为498.10
实施例88：1-((8-(((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-8-氧辛基-2,2,7,7-d4)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(88)
ESI-MS[M+H]+m/z＝528.11，实测值为528.40
实施例89：1-((3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-3-氧丙基)二硫烷基)丙酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(89)
ESI-MS[M+H]+m/z＝560.00，实测值为560.10
实施例90：1-((8-(((4-(羟甲基)-3-硝基苯基)氨基)-8-氧辛酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(90)
ESI-MS[M+H]+m/z＝524.09，实测值为524.08
实施例91：1-((5-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-5-氧戊烷酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(91)
ESI-MS[M+H]+m/z＝483.02，实测值为483.38
实施例92：1-((5-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-5-氧戊烷酰基-2,2,4,4-d4)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(92)
ESI-MS[M+H]+m/z＝487.05，实测值为487.14
实施例93：1-((8-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-8-氧辛酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(93)
ESI-MS[M+H]+m/z＝525.07，实测值为525.28
实施例94：1-((8-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-8-氧辛酰基-2,2,7,7-d4)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(94)
ESI-MS[M+H]+m/z＝529.10，实测值为529.21
实施例95：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(2-(3-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(95)
ESI-MS[M+H]+m/z＝499.15，实测值为499.24
实施例96：1-((3-((3-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)-3-氧丙基)二硫烷基)丙酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(96)
ESI-MS[M+H]+m/z＝560.98，实测值为560.86
实施例97：4-(羟甲基)-3-硝基苯基4-((3-((2,5-二氧杂吡咯烷-1-基)氧基)-3-氧丙基)二硫烷基)丁酸酯(97)
ESI-MS[M+H]+m/z＝473.06，实测值为473.10
实施例98：1-(2,5-二氧杂吡咯烷-1-基)4-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)2,3-二羟基琥珀酸酯(98)
ESI-MS[M+H]+m/z＝399.06，实测值为399.18
实施例99：1-((7-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-7-氧庚庚酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(99)
ESI-MS[M+H]+m/z＝524.09，实测值为524.14
实施例100：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-4-氧代丁基)磺酰基)丁酸酯(100)
ESI-MS[M+H]+m/z＝501.48，实测值为501.65
实施例101：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(1R，4R)-4-((((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(101)
ESI-MS[M+H]+m/z＝420.17，实测值为420.16
实施例102：1-((4-((((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(102)
ESI-MS[M+H]+m/z＝522.11，实测值为522.18
实施例103：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(3-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)丙酰胺基)乙氧基)丙酸酯(103)
ESI-MS[M+H]+m/z＝467.17，实测值为467.30
实施例104：1-((4-(4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)苯基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(104)
ESI-MS[M+H]+m/z＝544.09，实测值为544.20
实施例105：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)苯基)丁酸(105)
ESI-MS[M+H]+m/z＝442.15，实测值为442.25
实施例106：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基1-(3-(羟甲基)-4-硝基苯基)-5-氧-9,12,15,18-四氧-2,6-二氮杂二十烷-21-酸酯(106)
ESI-MS[M+H]+m/z＝599.25，实测值为599.30
实施例107：1-((11-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)十一烷酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(107)
ESI-MS[M+H]+m/z＝566.17，实测值为566.19
实施例108：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(1r，4r)-4-((((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)甲基)环己烷-1-甲酸(108)
ESI-MS[M+H]+m/z＝421.15，实测值为421.28
实施例109：1-((4-(2-((4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基钠2,5-二氧吡咯烷钠-3-磺酸(109)
ESI-MS[M+H]+m/z＝626.08，实测值为626.10
实施例110：1-((6-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(110)
ESI-MS[M+H]+m/z＝497.08，实测值为497.12
实施例111：1-((4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(111)
ESI-MS[M+H]+m/z＝469.05，实测值为469.10
实施例112：1-((3-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)苯甲酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(112)
ESI-MS[M+H]+m/z＝503.03，实测值为503.06
实施例113：1-((4-(4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基氧基)苯基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(113)
ESI-MS[M+H]+m/z＝545.08,实测值为545.36
实施例114：1-((4-((((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)甲基)环己烷-1-羰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(114)
ESI-MS[M+H]+m/z＝523.09，实测值为523.16
实施例115：1-((6-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(115)
ESI-MS[M+H]+m/z＝497.08，实测值为497.18
实施例116：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(3-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)丙酰胺基)乙氧基)丙酸酯(116)
ESI-MS[M+H]+m/z＝468.15,实测值为468.21
实施例117：1-((4-(4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基氧基)苯基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(117)
ESI-MS[M+H]+m/z＝545.08,实测值为545..36
实施例118：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)苯基)丁酸酯(118)
ESI-MS[M+H]+m/z＝443.14，实测值为443.22
实施例119：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基1-(3-(羟甲基)-4-硝基苯基)-5-氧-2-9,12,15,18-五氧六-6-氮杂二十烷-21-酸酯(119)
ESI-MS[M+H]+m/z＝600.23，实测值为600.39
实施例120：1-((4-(2-((4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基钠2,5-二氧吡咯烷钠-3-磺酸钠(120)
ESI-MS[M+H]+m/z＝625.08，实测值为625.29
实施例121：1-((11-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氧基)十一烷酰)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(121)
ESI-MS[M+H]+m/z＝567.15，实测值为567.34
实施例122：1-((6-(3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(122)
ESI-MS[M+H]+m/z＝510.07，实测值为510.12
实施例123：1-((11-(3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)十一烷酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(123)
ESI-MS[M+H]+m/z＝580.15，实测值为580.24
实施例124：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-(2-(3-(3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)丙酰胺基)乙氧基)丙酸酯(124)
ESI-MS[M+H]+m/z＝481.15，实测值为480.20
实施例125：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基1-(3-(羟甲基)-4-硝基苯基)-1,5-二氧杂-9,12,15,18-四氧杂-2,6-二氮杂二十烷-21-酸酯(125)
ESI-MS[M+H]+m/z＝613.23，实测值为613.49
实施例126：1-((6-(3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(126)
ESI-MS[M+H]+m/z＝511.06,实测值为511.24
实施例127：1-((4-(3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(127)
ESI-MS[M+H]+m/z＝482.04，实测值为482.11
实施例128：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(1r，4r)-4-(((3-(羟甲基)-4-硝基苯甲酰胺基)甲基)环己烷-1-甲酸(128)
ESI-MS[M+H]+m/z＝434.15，实测值为434.32
实施例129：1-((6-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(129)
ESI-MS[M+H]+m/z＝496.09，实测值为496.21
实施例130：1-((4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)丁酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(130)
ESI-MS[M+H]+m/z＝468.06,实测值为468.12
实施例131：((3-((2,5-二氧杂吡咯烷-1-基)氧基)-3-氧丙基)二硫烷基)4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酸甲酯(131)
ESI-MS[M+H]+m/z＝445.03，实测值为445.33
实施例132：1-((3-((((((4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰基)氧基)甲基)二硫烷基)丙酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(132)
ESI-MS[M+H]+m/z＝546.97,实测值为546.87
实施例133：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)苯甲酸酯(133)
ESI-MS[M+H]+m/z＝400.11，实测值为400.21
实施例134：1-((4-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)苯甲酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(134)
ESI-MS[M+H]+m/z＝502.05，实测值为502.12
实施例135：1-((6-((3-(羟甲基)-4-硝基苄基)氨基)己酰基)氧基)-2,5-二氧吡咯烷-3-磺酸钠(135)
ESI-MS[M+H]+m/z＝496.09，实测值为496.20
实施例136：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-3-氧丙基)硫基)丙酸酯(136)
ESI-MS[M+H]+m/z＝440.10，实测值为340.32
实施例137：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基5-((5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-5-氧戊基)硫基)戊酸酯(137)
ESI-MS[M+H]+m/z＝496.17，实测值为496.41
实施例138：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((3-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基甲酰基)苄基)脲基)甲基)苯甲酸酯(138)
ESI-MS[M+H]+m/z＝590.18，实测值为590.66
实施例139：5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-2-甲基-3-氧丙基)硫基)-2-甲基丙酸酯(139)
ESI-MS[M+H]+m/z＝568.14，实测值为568.38
实施例140：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(3-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-4-氧代丁基)脲基)丁酸酯(140)
ESI-MS[M+H]+m/z＝494.18，实测值为494.50
实施例141：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(E)-6-(2-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基甲酰基)亚苄基)肼基)烟酸酯(141)
ESI-MS[M+H]+m/z＝547.15，实测值为547.42
实施例142：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)苯甲酸酯(142)
ESI-MS[M+H]+m/z＝401.11，实测值为401.01
实施例143：N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-6-(4-异氰酸基)己酰胺(143)
ESI-MS[M+H]+m/z＝398.16，实测值为398.33
实施例144：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-(4-异氰酸根合苯基)己酸酯(144)
ESI-MS[M+H]+m/z＝399.15，实测值为399.33
实施例145：(4-((4-异氰酸基)氨基)甲基)-2-硝基苯基)甲醇(145)
ESI-MS[M+H]+m/z＝300.09，实测值为300.18
实施例146：(4-((4-异氰酸酯苯基)甲基)-2-硝基苯基)甲醇(146)
ESI-MS[M+H]+m/z＝301.07，实测值为301.37
实施例147：4-(羟甲基)-3-硝基苯基5-(2-溴乙酰氨基)戊酸酯(147)
ESI-MS[M+H]+m/z＝389.03，实测值为389.12
实施例148：5-(2-溴乙酰基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)戊酰胺(148)
ESI-MS[M+H]+m/z＝388.04，实测值为388.12
实施例149：7-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-1-碘庚烷-2-酮(149)
ESI-MS[M+H]+m/z＝421.05，实测值为421.30
实施例150：N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-7-碘-6-氧庚酰胺(150)
ESI-MS[M+H]+m/z＝435.03，实测值为435.28
实施例151：4-(羟甲基)-N-(7-碘-6-氧代庚基)-3-硝基苯甲酰胺(151)
ESI-MS[M+H]+m/z＝435.03，实测值为435.25
实施例152：1-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-3-(5-碘-4-氧代戊基)脲(152)
ESI-MS[M+H]+m/z＝436.03，实测值为436.17
实施例153：1-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-3-(2-碘乙基)脲(153)
ESI-MS[M+H]+m/z＝380.0，实测值为380.10
实施例154：N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)-4-(2-碘乙酰氨基)苯甲酰胺(154)
ESI-MS[M+H]+m/z＝470.01，实测值为470.24
实施例155：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(2-碘乙基)氨基甲酸酯(155)
ESI-MS[M+H]+m/z＝380.00，实测值为380.18
实施例156：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-(2-碘乙酰氨基)苯甲酸酯(156)
ESI-MS[M+H]+m/z＝471.00，实测值为471.32
实施例157：N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-2-碘乙酰胺(157)
ESI-MS[M+H]+m/z＝350.98，实测值为351.21
实施例158：(4-((2-碘乙氧基)甲基)-2-硝基苯基)甲醇(158)
ESI-MS[M+H]+m/z＝337.98，实测值为338.31
实施例159：4-(2-羟甲基)-3-硝基苄基4-(2-碘乙酰氨基)苯甲酸酯(159)
ESI-MS[M+H]+m/z＝471.00，实测值为47,1.21
实施例160：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(5-碘-4-氧戊基)氨基甲酸酯(160)
ESI-MS[M+H]+m/z＝437.01，实测值为437.10
实施例161：5-二氧杂吡咯烷-1-基8-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-8-氧辛酸酯(161)
ESI-MS[M+H]+m/z＝436.43，实测值为436.21
实施例162：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(2-(((4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙基)琥珀酸酯(162)
ESI-MS[M+H]+m/z＝524.13，实测值为524.31
实施例163：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(163)
ESI-MS[M+H]+m/z＝420.17，实测值为420.22
实施例164：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)丁酸酯(164)
ESI-MS[M+H]+m/z＝366.12，实测值为366.23
实施例165：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-3-氧丙基)硫基)丙酸酯(165)
ESI-MS[M+H]+m/z＝441.09，实测值为441.32
实施例166：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基5-((5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-5-氧戊基)硫基)戊酸酯(166)
ESI-MS[M+H]+m/z＝497.15，实测值为497.47
实施例167：N-(5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)戊基)-3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺(167)
ESI-MS[M+H]+m/z＝465.16，实测值为465.50
实施例168：2-((2-((2,5-二氧吡咯烷-1-基)氧基)羰基)氧基)乙基)磺基)乙基(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基甲酸酯(168)
ESI-MS[M+H]+m/z＝504.16，实测值为504.08
实施例169：2,5-二氧吡咯烷-1-基2,3-二羟基-4-((3-羟基-4-(硝基甲基)苄基)氨基)-4-氧代丁酸酯(169)
ESI-MS[M+H]+m/z＝412.09，实测值为412.20
实施例170：N-(3-(羟甲基)-4-硝基苄基)-4-(1-(吡啶-2-基二硫基)乙基)苯甲酰胺(170)
ESI-MS[M+H]+m/z＝456.10，实测值为456.35
实施例171：4-(羟甲基)-3-硝基-N-(5-(3-(吡啶-2-基二硫基)丙胺基)戊基)苯甲酰胺(171)
ESI-MS[M+H]+m/z＝479.13，实测值为479.41
实施例172：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(E)-6-(2-(4-((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)亚苄基)肼基)烟酸酯(172)
ESI-MS[M+H]+m/z＝548.13，实测值为548.21
实施例173：O-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)SS-(吡啶-2-基)碳(二硫代过氧酸酯)(173)
ESI-MS[M+H]+m/z＝353.02，实测值为353.18
实施例174：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺基)己酸酯(174)
ESI-MS[M+H]+m/z＝494.13，实测值为494.23
实施例175：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((3-(4-((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)苄基)脲基)甲基)苯甲酸酯(175)
ESI-MS[M+H]+m/z＝591.16，实测值为591.25
实施例176：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(3-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-4-氧代丁基)脲基)丁酸酯(176)
ESI-MS[M+H]+m/z＝495.16，实测值为495.21
实施例177：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-2-甲基-3-氧丙基)硫基)-2-甲基丙酸酯(177)
ESI-MS[M+H]+m/z＝469.12，实测值为469.33
实施例178：3-(羟甲基)-4-硝基苄基4-(1-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基)苯甲酸酯(178)
ESI-MS[M+H]+m/z＝457.08，实测值为457.21
实施例179：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基6-(((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)氨基)己酸酯(179)
ESI-MS[M+H]+m/z＝438.14,实测值为438.26
实施例180：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基3-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)苯甲酸酯(180)
ESI-MS[M+H]+m/z＝401.09，实测值为401.26
实施例181：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)甲基)环己烷-1-甲酸(181)
ESI-MS[M+H]+m/z＝421.15，实测值为421.23
实施例182：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)丁酸(182)
ESI-MS[M+H]+m/z＝367.11，实测值为367.20
实施例183：S-(2-(2-(((5-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)-3-氧戊基)氧基)乙氧基)乙基)乙硫醇酸酯(183)
ESI-MS[M+H]+m/z＝400.14，实测值为400.24
实施例184：4-(羟甲基)-3-硝基苄基3-(2-(2-(乙酰硫基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(184)
ESI-MS[M+H]+m/z＝402.11，实测值为402.07
实施例185：5-(4-甲酰基苯基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)戊酰胺(185)
ESI-MS[M+H]+m/z＝357.14，实测值为357.21
实施例186：4-(羟甲基)-3-硝基苯基5-(4-甲酰基苯基)戊酸酯(186)
ESI-MS[M+H]+m/z＝358.12，实测值为358.17
实施例187：2,5-二氧杂吡咯烷-1-基(2-(((4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)乙基)琥珀酸酯(187)
ESI-MS[M+H]+m/z＝525.13，实测值为525.17
实施例188：2-(4-(5-肼基-5-氧代戊基)苯基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)乙酰胺(188)
ESI-MS[M+H]+m/z＝402.16，实测值为401.10
实施例189：6-肼基-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-6-氧代己胺(189)
ESI-MS[M+H]+m/z＝325.14，实测值为325.17
实施例190：2-(4-(5-肼基-5-氧戊基)苯基)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)乙酰胺(190)
ESI-MS[M+H]+m/z＝401.17，实测值为401.27
实施例191：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-肼基-6-氧己酸(191)
ESI-MS[M+H]+m/z＝326.13，实测值为326.17
实施例192：3-((3-肼基-3-氧代丙基)硫代)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺(192)
ESI-MS[M+H]+m/z＝357.12，实测值为357.34
实施例193：4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)丁酰肼(193)
ESI-MS[M+H]+m/z＝284.12，实测值为284.01
实施例194：4-((4-(羟甲基)-3硝基苄基)氨基)丁酰肼(194)
ESI-MS[M+H]+m/z＝283.13，实测值为283.27
实施例195：(R)-5-氨基-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-6-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)己酰胺(195)
ESI-MS[M+H]+m/z＝350.18，实测值为350.21
实施例196：N-(5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)戊基)-3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酰胺(196)
ESI-MS[M+H]+m/z＝378.21，实测值为378.25
实施例197：N-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)-3-((2-(3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酰氨基)乙基)二硫基)丙酰胺(197)
ESI-MS[M+H]+m/z＝442.11，实测值为442.31
实施例198：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(R)-5-氨基-6-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)己酸酯(198)
ESI-MS[M+H]+m/z＝351.17，实测值为351.27
实施例199：4-(羟甲基)-N-(5-(3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酰氨基)戊基)-3-硝基苯甲酰胺(199)
ESI-MS[M+H]+m/z＝392.19，实测值为392.24
实施例200：4-(羟甲基)-3-硝基苯基3-((2-(3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酰胺基)乙基)二硫烷基)丙酸酯(200)
ESI-MS[M+H]+m/z＝443.10，实测值为443.41
实施例202：4-(羟甲基)-3-硝基苄基6-(3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酰胺基)己酸酯(202)
ESI-MS[M+H]+m/z＝407.19，实测值为407.12
实施例203：3-(羟甲基)-4-硝基苄基3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酸酯(203)
ESI-MS[M+H]+m/z＝294.10，实测值为294.05
实施例204：5-(1,2-二硫戊环-3-基)-N-(2-(2-(2-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)戊酰胺(204)
ESI-MS[M+H]+m/z＝502.20，实测值为502.41
实施例205：5-(1,2-二硫戊环-3-基)-N-(2-(2-(2-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)戊酰胺(205)
ESI-MS[M+H]+m/z＝503.18，实测值为503.34
实施例206：4-(羟甲基)-3-硝基苄基-5-亚氨基-5-甲氧基戊酸盐酸盐(206)
ESI-MS[M+H]+m/z＝347.09，实测值为347.21
实施例207：4-(4-(羟甲基)-3-硝基苯氧基)丁酰胺盐酸盐(207)
ESI-MS[M+H]+m/z＝305.08，实测值为305.14
实施例208：6-(3-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)脲基)己酰胺盐酸盐(208)
ESI-MS[M+H]+m/z＝389.15，实测值为389.18
实施例209：甲基6-(((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氧基)羰基)氨基)盐酸己酸盐(209)
ESI-MS[M+H]+m/z＝390.14,实测值为390.24
实施例210：5-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基)-5-氧戊亚氨酸甲酯盐酸盐(210)
ESI-MS[M+H]+m/z＝346.11，实测值为346.22
实施例211：4,4'-(羰基双(氮杂环)双(N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丁酰胺)(211)
ESI-MS[M+H]+m/z＝561.22，实测值为561.34
实施例212：4,4'-((羰基(氮烷二基))二(亚甲基))二(N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)苯甲酰胺)(212)ESI-MS[M+H]+m/z＝657.22，实测值为657.42
实施例213：3,3'-二硫基二(N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)丙酰胺)(213)
ESI-MS[M+H]+m/z＝539.12，实测值为539.24
实施例214：双(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)2,2'-二硫基二乙酸酯(214)
ESI-MS[M+H]+m/z＝513.06，实测值为513.12
实施例215：(E)-N-(4-(羟甲基)-3-硝基苄基)-6-(2-(4-((4-(羟甲基)-3-硝基苄基)氨基甲酰基)苯亚甲基)肼基)烟酰胺(215)
ESI-MS[M+H]+m/z＝614.20，实测值为614.17
实施例216：N-(3-(丁-3-炔酰胺)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(216)
ESI-MS[M+H]+m/z＝457.16，实测值为457.23
实施例217：N-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-(5-(2-氧代六氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(217)
ESI-MS[M+H]+m/z＝614.26，实测值为614.15
实施例218：N-(3-(丁-3-烯酰氨基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(218)
ESI-MS[M+H]+m/z＝459.18，实测值为459.30
实施例219：N-(3-(3-叠氮基丙酰胺)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(219)
ESI-MS[M+H]+m/z＝488.18，实测值为487.25
实施例220：N-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-(丙-2-炔-1-基氨基甲酰基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(220)
ESI-MS[M+H]+m/z＝457.16，实测值为457.30
实施例221：N-(3-((3-叠氮基丙基)氨基甲酰基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(221)
ESI-MS[M+H]+m/z＝502.20，实测值为502.15
实施例222：N-(3-(丁-3-烯-1-基氨基甲酰基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(222)
ESI-MS[M+H]+m/z＝473.20，实测值为473.36
实施例224：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(4-(3,5-二氧代-1,2,4-三唑烷基-4-基)苯氧基)丁基)氨基甲酸酯(224)
ESI-MS[M+H]+m/z＝473.15，实测值为473.31
实施例228：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(2-(2-(2-(4-(4-(3,5-二氧-1,2,2,4-三唑啉丁-4-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(228)
ESI-MS[M+H]+m/z＝533.18，实测值为533.45
实施例231：4-(2-(4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺基)乙基)苯磺酰氟(231)
ESI-MS[M+H]+m/z＝382.06，实测值为382.78
实施例232：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(氟磺酰基)苯乙基)氨基甲酸酯(232)
ESI-MS[M+H]+m/z＝412.07，实测值为412.30
实施例234：4-(1-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)-3,10-二氧代-2-氧杂-4,9,11-三氮杂环丁烷-13-基)苯基硫代氟酸酯(234)
ESI-MS[M+H]+m/z＝542.15，实测值为542.37
实施例236：4-(1-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)-3,9-二氧代-2-氧杂-4,8,10-三氮杂十二烷-12-基)苯基硫代氟酸酯(236)
ESI-MS[M+H]+m/z＝528.13，实测值为528.19
实施例238：4-(1-(4-(羟甲基)-3-硝基苯基)-3,12-二氧代-2-氧杂-4,11,13-三氮杂十五烷-15-基)苯基硫代氟酸酯(238)
ESI-MS[M+H]+m/z＝570.18，实测值为570.25
实施例251：N-(4-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)丁基)-4-(羟甲基)-3-硝基苯甲酰胺(251)
ESI-MS[M+H]+m/z＝383.15，实测值为383.20
实施例252：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(4-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)丁基)氨基甲酸酯(252)
ESI-MS[M+H]+m/z＝413.16，实测值为413.16
实施例254：4-(羟甲基)-3-硝基苄基(2-(4-(2H-叠氮基-3-基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(254)
ESI-MS[M+H]+m/z＝385.13，实测值为385.20
实施例255：光诱导的多功能交联剂应用于蛋白质相互作用交联
为了验证Afbody在交联剂73存在下能够通过控制紫外光照，来共价捕捉与其相互作用的MBP-Z。我们将纯化后的Afbody蛋白与MBP-Z蛋白4℃混匀共孵育30min，使具有相互作用的MBP-Z和Afbody蛋白自发的相互结合，然后通过365nm紫外光照，使其发生共价交联，从而获得共价结合的MBP-Z和Afbody的蛋白复合物。MBP-Z-蛋白纯化后，用PBS(PH＝7.4)透析置换缓冲液，并通过加入PBS调控蛋白浓度为1mg/ml。Afbody蛋白纯化后，同样用PBS透析置换缓冲液，通过超滤透析将蛋白浓度浓缩到2mg/ml。在1.5ml EP管中加入如下反应体系中，两种蛋白质的浓度比为Afbody：MBP-Z＝5，轻轻吹打混匀，加入的交联剂73在反应液中的浓度为1mM,4℃共孵育30min，再转移到石英比色皿中，冰上365nm UV光照10min，然后变性进行SDS-PAGE电泳。8％的SDS-PAGE电泳结果如图1(左)所示，发现了MBP-Z和Afbody的共价交联条带。从而证明了本实验室设计合成的交联剂73能够实现共价捕捉MBP-Z和Afbody蛋白复合物。
为了进一步验证GST蛋白中，能够通过控制紫外光照，在交联剂73存在下能够共价捕捉与其相互作用的另一分子GST蛋白。我们将纯化后的GST蛋白蛋白4℃孵育30min，使GST蛋白分子结合，然后通过365nm紫外光照，进而获得共价结合的GST蛋白复合物。GST蛋白纯化后，用PBS(PH＝7.4)透析置换缓冲液，并通过加入PBS调控，最终用Nano-100微量分光光度计测量出蛋白浓度为5mg/ml。在1.5ml EP管中加入GST蛋白，加入的交联剂73在反应液中的浓度为1mM，4℃共孵育30min，再转移到石英比色皿中，冰上365nm UV光照10min，然后变性进行SDS-PAGE电泳。10％的SDS-PAGE电泳结果如图1所示(右)，发现了GST二聚体交联条带。从而证明了交联剂73能够实现GST二聚体蛋白复合物的共价捕捉。
综上所述，本发明开发的光诱导的多功能交联剂具有很好的捕捉相互作用蛋白质的能力，实现蛋白复合物的捕捉。该类交联剂在生物大分子相互作用中的应用，如蛋白质-蛋白质相互作用，蛋白质-核酸相互作用，蛋白质复合物与核酸之间相互作用；蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，细胞器之间以及蛋白质与细胞器等之间的任一一种相互作用的捕捉以及后续对交联片段的分析。该类交联剂同样能够用于细胞裂解液、经常规实验操作处理后的生物学样品或者活体细胞中，进行捕捉蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质与核酸之间相互作用，蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，并用于后续生物大分子富集、蛋白质凝胶电泳、蛋白质印迹、蛋白质交联质谱分析中的应用。因此，本发明开发的光诱导的多功能交联剂，在蛋白质组学和蛋白质相互作用和生物大分复合物相互作用的研究中具有重要应用潜力和突出的实用价值。

Claims (10)

1.一种通式(Ⅰ)所示的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物及各种形式的盐或其水合物：
Figure FDA0002712069490000011
其中
Figure FDA0002712069490000012
选自以下基团：
Figure FDA0002712069490000013
R1选自氢原子、卤素、C2-6烷氧基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C3-10环烷基、5-8元杂环基、C6-10芳基、5-6元杂芳基，其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、C1-C6烷氧基、氰基、硝基取代基所取代，并且R1不为甲氧基；
X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-NH-CH2-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-O-CH2-、-CH2-、-COO-、-OCO-、-O-、-S-、-SO2-、-C≡C-、-C＝C-、-SO2NH-、-NHCONH-、-NHCSNH-、-NH-、-CONH-CH2-、或X不存在；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-SO2-、-SO-、-S-S-、-NH-N＝C-、-N＝N-、
Figure FDA0002712069490000021
五元杂芳环、六元杂芳环、C3-6烷基环、C3-6杂烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、-NR2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、C1-4烷基；
R2为氢、甲基；
R3选自以下基团：
Figure FDA0002712069490000022
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
a为0，1，2或3；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8。
2.如权利要求1所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，
其中
Figure FDA0002712069490000023
选自以下基团：
Figure FDA0002712069490000031
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-NH-CH2-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-O-CH2-、-CH2-、-COO-、-OCO-、-O-、-S-、-SO2-、-C≡C-、-C＝C-、-SO2NH-、-NHCONH-、-NHCSNH-、-NH-、-CONH-CH2-、或X不存在；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-SO2-、-SO-、-S-S-、-NH-N＝C-、-N＝N-、
Figure FDA0002712069490000032
五元杂芳环、六元杂芳环、C3-6烷基环、C3-6杂烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、-NR2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、C1-4烷基；
R2为氢、甲基；
R3选自以下基团：
Figure FDA0002712069490000041
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8。
3.如权利要求1所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，
其中
Figure FDA0002712069490000042
选自以下基团:
Figure FDA0002712069490000043
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，X选自-NH-CO-、-O-CO-CH2-、-NH-COO-CH2-、-NH-CO-NH-CH2-、-COOCH2-、-CO-NH-、-NH-CH2-、-O-CH2-、-COO-、-O-、-CONH-CH2-；
L选自-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CH2-W2-(CH2)m3-、-W4-(CH2)m4-W3-(CH2)m5-W5-、-(CH2)m2-W1-(CH2CH2O)m1-CH2CHR3-W2-(CH2)m3-或-W4-(CH2)m4-CHR3-W3-(CH2)m5-W5-，其中，W1、W2分别独立选自-CO-、-OCO-、-COO-、-NHCO-、-CONH-或者不存在，W3选自-O-、-NH-、-CH2-、-S-、-S-S-、-SO2-、-SO-、-NH-N＝C-、
Figure FDA0002712069490000051
六元杂芳环、C3-6烷基环或者W3不存在，W4、W5分别独立选自-O-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-OCO-、-COO-、-C(R1)2-、六元杂芳环、C3-6烷基环或者不存在；
R1为氢、氘、甲基；
R3选自以下基团：
Figure FDA0002712069490000052
m1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m2为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m3为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m4为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
m5为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10；
b1为0，1，2，3，4，5，6，7或8；
b2为1，2，3，4，5，6，7或8。
4.如权利要求1所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，其中通式(Ⅰ)的化合物选自如下通式：
Figure FDA0002712069490000061
其中，L和
Figure FDA0002712069490000062
的定义与权利要求1相同。
5.如权利要求1所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，其中通式(Ⅰ)的化合物选自如下通式：
Figure FDA0002712069490000071
其中，X一端与邻硝基苄醇的芳基相连，
Figure FDA0002712069490000072
和X的定义与权利要求1相同；
n1、n2和n3为0～10的整数；
n4、n5、n6、n12、n13、n15和n16为0～8的整数；
n7、n8、n17、n36、n40、n50和n51为2～8的整数；
n9、n10、n11、n14、n18、n19、n20、n21、n22、n23、n24、n25、n26、n27、n28、n29、n30、n31、n32、n33、n34、n35、n37、n38、n39、n41、n42、n43、n44、n45、n46、n47、n48和n49为1～8的整数。
6.如权利要求1所述的化合物、其互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物，其中通式(Ⅰ)的化合物选自下列化合物：
Figure FDA0002712069490000081
Figure FDA0002712069490000091
Figure FDA0002712069490000101
Figure FDA0002712069490000111
Figure FDA0002712069490000121
Figure FDA0002712069490000131
Figure FDA0002712069490000141
Figure FDA0002712069490000151
Figure FDA0002712069490000161
Figure FDA0002712069490000171
Figure FDA0002712069490000181
Figure FDA0002712069490000191
7.一种制备通式(Ⅰ)所示的化合物的方法，所述方法选自如下方法之一：
合成方法一：
Figure FDA0002712069490000192
其中n1为0～10的整数，n2为0～5的整数，n3为0～10的整数，
步骤1-1：化合物1A在碳酸氢钠、水和丙酮条件下回流水解得到化合物1B；
步骤1-2：化合物1B溶于DMF，在咪唑存在下与叔丁基二甲基氯硅烷反应得到化合物1C；
步骤1-3：化合物1C溶于干燥四氢呋喃，加入硼烷还原得到化合物1D；
步骤1-4：化合物1D和1E在缩合条件下生成化合物1G；
步骤1-5：化合物1G在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1H；
步骤1-6：化合物1D和1F在缩合条件下生成化合物1J；
步骤1-7：化合物1J在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1K；
步骤1-8：化合物1D和1L溶于乙腈中，在碳酸钾作用下回流反应得到化合物1M；
步骤1-9：化合物1M在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物1N；
合成方法二：
Figure FDA0002712069490000201
其中n为0～5的整数
步骤2-1：化合物2和NHS缩合生成化合物2A；
步骤2-2：化合物1B和2B在缩合条件下生成化合物2C；
步骤2-3：化合物2A和2C在缩合条件下生成化合物2D；
合成方法三：
Figure FDA0002712069490000202
步骤3-1：化合物1B与NHS缩合生成化合物3A；
步骤3-2：化合物3B在SDI，KI条件下得化合物3C；
步骤3-3：化合物3C在加入HCl的1,4-二氧六环溶液室温反应得化合物3D；
步骤3-4：化合物3D和3A在缩合条件下得化合物3E；
合成方法四：
Figure FDA0002712069490000203
其中n1为0～10的整数，n2为0～5的整数，
步骤4-1：化合物4A和1E在缩合条件下得化合物4B；
步骤4-2；化合物4B在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物4C；
步骤4-3：化合物4A和IF在缩合条件下得化合物4D；
步骤4-4：化合物4D在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物4F；
合成方法五：
Figure FDA0002712069490000211
步骤5-1：化合物5A和1,4-二溴丁烷在碳酸钾条件下得化合物5B；
步骤5-2：化合物5B与氯甲酸4-硝基苯酯，羧酸羧肼乙酯和TEA反应得化合物5C；
步骤5-3：化合物5C和叠氮化钠反应得化合物5D；
步骤5-4：化合物5D用三苯基磷还原后，与化合物1C缩合得化合物5E；
步骤5-4：化合物5E与K2CO3加热反应后，用盐酸甲醇溶液室温反应得化合物5F；
合成方法六：
Figure FDA0002712069490000212
步骤6-1：化合物6A和双(2-溴乙基)醚在碳酸钾回流条件下得化合物6B；
步骤6-2；化合物6B与甲基三苯基溴化磷和NaH反应的化合物6C；
步骤6-3：化合物6C和苯二甲酰亚胺钾盐反应得化合物6D；
步骤6-4：化合物6D与水合肼反应得化合物6E；
步骤6-5：化合物1C与对硝基苯基氯甲酸酯在DIPEA条件下室温反应得到化合物6F；
步骤6-6：化合物6F与6E缩合得化合物6G；
步骤6-7：化合物6G与一氯化碘，叠氮化钠反应，并在叔丁醇钾作用下得化合物6H；
步骤6-8：化合物6H在四丁基氟化铵溶液条件下，室温反应得化合物6I。
8.一种权利要求1至6中任意一种光诱导的多功能交联剂在生物大分子相互作用中的应用，如蛋白质-蛋白质相互作用，蛋白质-核酸相互作用，蛋白质复合物与核酸之间相互作用。
9.一种权利要求1至6中任意一种光诱导的多功能交联剂，用于蛋白质与小分子、生物大分子与受体或配体间的相互作用，细胞器之间以及蛋白质与细胞器之间的任一种相互作用的捕捉以及后续的分析应用。
10.一种权利要求1至6中任意一种光诱导的多功能交联剂，用于细胞裂解液、经试验处理后的生物学样品或者活体细胞中，进行捕捉蛋白质-蛋白质相互作用或者蛋白质与核酸之间相互作用，并用于后续蛋白质富集、蛋白质凝胶电泳、蛋白质印迹、蛋白质交联质谱分析中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717082A (zh) * 2021-09-03 2021-11-30 温州医科大学 一种具有光降解功能的酰肼物质及其制备方法和应用
CN114773202A (zh) * 2022-04-13 2022-07-22 电子科技大学长三角研究院(湖州) 一种用于分析互穿网络拓扑结构对材料性能影响的探针的制备方法及应用
WO2024026315A3 (en) * 2022-07-26 2024-03-07 Massachusetts Institute Of Technology Protein extraction, protein identification, and spatial proteomics using photocleavable anchor in swellable material

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110177617A1 (en) * 2009-05-29 2011-07-21 Claudia Bich Cross-linking reagents for molecular interactions analysis
WO2019006317A1 (en) * 2017-06-29 2019-01-03 City Of Hope PROGRAMMABLE THERMOSENSITIVE GELS
CN109824565A (zh) * 2019-03-25 2019-05-31 华东理工大学 一种光响应性多功能化学交联剂及其制备方法与应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110177617A1 (en) * 2009-05-29 2011-07-21 Claudia Bich Cross-linking reagents for molecular interactions analysis
WO2019006317A1 (en) * 2017-06-29 2019-01-03 City Of Hope PROGRAMMABLE THERMOSENSITIVE GELS
CN109824565A (zh) * 2019-03-25 2019-05-31 华东理工大学 一种光响应性多功能化学交联剂及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AJAY H. BANSODE ET AL.: "Metal-free hypervalent iodine/TEMPO mediated oxidation of amines and mechanistic insight into the reaction pathways", 《RSC ADV.》 *
COLUMBUS, OHIO, US REGISTRY[ONLINE]: "STN检索报告" *
EMIL F. HOLMQUIST ET AL.: "ReactELISA: Monitoring a Carbon Nucleophilic Metabolite by ELISAa Study of Lipid Metabolism", 《ANAL. CHEM.》 *
JI-HUN SEO ET AL: "UV-Cleavable Polyrotaxane Cross-Linker for Modulating Mechanical Strength of Photocurable Resin Plastics" *
SHASHI ET AL.: "Total Synthesis of Enisorine D and its Analogues", 《SYNTHESIS》 *
YONGHYEON BAEK ET AL.: "Selective C–C bond formation from rhodiumcatalyzed C–H activation reaction of 2-arylpyridines with 3-aryl-2H-azirines", 《CHEM. SCI.》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717082A (zh) * 2021-09-03 2021-11-30 温州医科大学 一种具有光降解功能的酰肼物质及其制备方法和应用
CN114773202A (zh) * 2022-04-13 2022-07-22 电子科技大学长三角研究院(湖州) 一种用于分析互穿网络拓扑结构对材料性能影响的探针的制备方法及应用
CN114773202B (zh) * 2022-04-13 2023-07-21 电子科技大学长三角研究院(湖州) 一种用于分析互穿网络拓扑结构对材料性能影响的探针的制备方法及应用
WO2024026315A3 (en) * 2022-07-26 2024-03-07 Massachusetts Institute Of Technology Protein extraction, protein identification, and spatial proteomics using photocleavable anchor in swellable material

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