CN112535716B - 一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂及其制备方法和应用，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：山白菊或柳叶斑鸠菊30～50份、姜黄20～60份、瘦肉20～40份，以及药学上可接受的辅料。本发明药效好，且口感偏淡、微甜，患者顺应性高。

Description

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药制造技术领域，具体地，本发明涉及一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂及其制备方法。

背景技术

肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，其主要的作用是防止过氧化、储存肝糖等，并对体内产生和体外摄入的多种物质起着生物转化的作用，通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。近年来，我国因长期饮酒造成的慢性肝损伤人群数量越来越多，慢性肝损伤进一步发展会导致酒精性肝炎、肝硬化及肝癌等严重疾病，酒精对肝脏损伤是一种众所周知的现象，明显的肝损伤标志是细胞酶渗入到血浆中，威胁人们的健康。

在肝细胞中，酒精性氧化压力可引起酒精性肝病，酒精诱导肝脏病理变化包括肝肿大和血清学变化，伴随着谷丙转氨酶(AST)，谷草转氨酶(ALT)和γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性的增加。ALT和AST是肝功能的可靠的指标，人体组织内虽然含有大量基质特异性转氨酶，但血清中只发现两种：天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)。在正常情况下，肝细胞膜能将细胞内的酶保持在细胞内，维持肝细胞和肝窦状间隙之间存在的一个明显酶浓度梯度(Gradient)。血清酶ALT和AST的增高表明细胞透性、损害或者肝细胞坏死的增加。越来越多的证据表明酒精导致肝脏不正常，因为氧化压力直接损害细胞膜。GGT是细胞膜结合酶，血清GGT增高是诱导剂使肝脏合成酶增加的结果。乙醇能增强酶的诱导。GGT在肝内主要位于内质网，而酒精中毒的最早期作用为内质网损伤，膜结合蛋白酶GGT被释放到血液中。

脂质过氧化是自由基引起的一系列的反应。机体内存在着大量多不饱和脂肪酸(PUFA)，它极易受到氧化作用的损伤，产生有细胞毒性的脂质过氧化物。酒精的脂质过氧化反应的主要毒性是直接损伤细胞膜，使细胞内PUFA过氧化，也使内质网溶酶体和线粒体等生物膜结构破坏，导致一系列的功能紊乱。

长期酒精深入导致肝组织氧化应激加剧，导致脂质过氧化和抗氧化酶活性降低。自由基清除酶如SOD、GST和GSH-Px是对抗氧化伤害的第一道防线。GSH-Px是细胞内抗氧化防御体系的主要成员之一，是清除H₂O₂与许多有机氢过氧化物的重要酶，与SOD一起，通过清除可以减轻和阻断脂质过氧化的引发作用。

GSTs是一种多基因家族同工酶，可催化GSH聚合为有害物质，保护细胞免受活性氧起重要作用。乙醇或者其代谢物可能是GST同工酶的目标物，GST酶活降低可能产生毒性。丙二醛(MDA)水平被广泛用于脂质过氧化指标。

在抗氧化体系中，非酶促抗氧化剂例如GSH等在生物体系中保护细胞免受脂质过氧化起到了很大的作用。GSH耗竭被认为是酒精性脂肪肝发生的重要机理之一。

脂肪肝已被定义为超过5％脂滴或者总脂肪超过5％肝重量。脂肪的聚集是对酒精过多摄入最早最普通的反应。酒精性脂肪肝的通常特点是肝脏肿大，血清和肝组织的TG水平的增加，伴随着脂滴的形成。在目前的研究中，酒精导致肝指标显著增加，血清和肝组织TG和TCH水平显著升高(P<0.05)，这表明酒精造成典型脂肪肝。

肝损伤直接导致人体免疫力下降，鼻炎、肠炎等炎症增加，如注意力不集中，思维无序，记忆力减退，面容憔悴，体力不支，严重影响人们的正常生活。肝损伤如果不引起足够的重视，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化，甚至是肝癌，因此防治此类肝损伤刻不容缓。

目前对于肝损伤的治疗一般视病情轻重分别给与不同的治疗方法，轻度肝损伤主要是养成健康的生活习惯，远离引起疾病的因素，如改善饮食、居住环境，远离酒精等毒素，再辅助相应的利肝药物；而严重的肝损伤则必须住院治疗。

药物治疗中，无论西药还是中药，都会存在一定的不良反应，这更加重了肝脏的负担，治肝又伤肝，因此，肝病的治疗需防治结合，当今社会，人际交往、业务交流都离不开酒文化的影响，而这部分人多数是青壮年，是社会和家庭的顶梁柱，因此怎样治疗肝细胞受酒精的损伤是亟待解决的重要问题。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，该颗粒剂药效好，且口感偏淡、微甜，患者顺应性高。

为达到上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

山白菊或柳叶斑鸠菊30～50份、姜黄20～60份、瘦肉20～40份，以及药学上可接受的辅料。

本发明中，药学上可接受的辅料的添加量，可根据制剂领域内的常规操作进行，比如根据提取药液的量或有效成分的量或药粉的量进行添加，在本发明的制备方法中也有相关的描述。

优选地，所述药学上可接受的辅料为乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉中的一种或多种。

进一步优选地，所述乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉的质量比为8～10:0.1～0.3:0.3～0.6:0.1～0.5。

本发明提供了一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)提取

称取处方量的山白菊或柳叶斑鸠菊、鲜姜黄及瘦肉，隔水煎煮，煎煮液减压浓缩、醇沉、减压浓缩至药材：药液＝4～8:1g/mL时，备用；

将煎煮后的瘦肉，合并、混匀，自然放凉后，进行冷冻干燥，粉碎，过筛，备用；

2)制粒

采用乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉作为辅料，乳糖：麦芽糊精：木糖醇：水溶性淀粉的质量比例为8～10:0.1～0.3:0.3～0.6:0.1～0.5；

按照药液：辅料＝4～7:1的重量比，过筛混合均匀，制粒，整粒，即得药液部分颗粒；

将冷冻干燥的瘦肉粉与辅料按照1～3:2的重量比混合后，过筛，制粒，整粒，即得瘦肉部分颗粒；

将药液部分颗粒和瘦肉部分颗粒过筛混合均匀，过筛即得颗粒剂。

优选地，步骤1)中，隔水煎煮的次数为两次，第一次8～12倍水，隔水加热1～2小时；第二次8～12倍水，隔水加热0.5～1小时。

优选地，步骤1)中，减压浓缩的温度：50-60℃，真空度：≤-0.1MPa。

优选地，步骤1)中，冷冻干燥的温度：≤-45℃，真空度：≤-0.1MPa。

本发明还提供了上述颗粒剂在制备用于治疗酒精性肝损伤的药物中的应用。

相对于现有技术，本发明具有如下的优点：

1、本发明将有效成分制备为颗粒剂，相比于采用传统中药服用方法，有效成分浓度增高，药效较传统汤剂方法有较好提高。

2、药液部分在浓缩时采用的是减压浓缩(60℃)、瘦肉部分采用冷冻干燥(-45℃)，从而最大程度的对有效成分进行了保护；

3、溶化性极好：80℃以上的水中，1分钟可以完全溶解；40℃以上的水中，2分钟可以完全溶解；室温水5分钟内可以完全溶剂；

4、口感偏淡、微甜，用水冲服后，像饮料一样美味；

5、保质期为36个月，携带、贮存都非常的方便，患者顺应性高。

附图说明

图1本发明实施例11对小鼠急性酒精性肝损伤病理结果；

图2本发明实施例12对大鼠急性酒精性肝损伤病理结果。

具体实施方式

本说明书中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或者类似特征中的一个例子而已。所述仅仅是为了帮助理解本发明，不应该视为对本发明的具体限制。

下面以附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

山白菊30份、姜黄20份、猪瘦肉20份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉。

实施例2

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

柳叶斑鸠菊50份、姜黄60份、牛瘦肉30份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖及水溶性淀粉。

实施例3

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

柳叶斑鸠菊30份、姜黄60份、猪瘦肉40份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖、麦芽糊精及水溶性淀粉。

实施例4

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

山白菊50份、姜黄20份、牛瘦肉30份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖、木糖醇及水溶性淀粉。

实施例5

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

山白菊50份、姜黄60份、猪瘦肉20份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉的质量比为9:0.2:0.5:0.3。

实施例6

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

柳叶斑鸠菊40份、姜黄40份、鸡心肉30份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉的质量比为8:0.1:0.3:0.1。

实施例7

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，所述颗粒剂包括以下重量份的组分：

山白菊50份、姜黄60份、鸡心肉30份，以及药学上可接受的辅料，所述辅料为乳糖：麦芽糊精：木糖醇：水溶性淀粉的质量比例为10:0.3:0.6:0.5。

实施例8

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1成分提取

1.1提取

按照实施例1-7中任一实施例称取处方量的山白菊或柳叶斑鸠菊、鲜姜黄及瘦肉(瘦肉用带孔纱布包好)，置于200L的不锈钢桶中，桶中加入10倍量的水，置于500L的敞口锅中，敞口锅中加水180L，隔水加热。第一次10倍水，隔水加热1.5小时；第二次10倍水，隔水加热0.5小时。

1.2浓缩

将两次煎煮液合并，减压浓缩(温度：60℃，真空度：-0.1MPa)至药材：药液＝1:1时(相对密度1.08,50℃)，备用。

1.3精制

用2倍量95％乙醇进行醇沉，减压回收乙醇(温度：50℃，真空度：-0.1MPa)至无醇味，浓缩至药材：药液＝6:1时(相对密度1.12,50℃)，备用。

1.4瘦肉处理

将煎煮后的瘦肉除去纱布，合并、混匀，自然放凉后，置于-20℃冰箱中，预冻2h后，置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥(温度：-45℃，真空度：-0.1MPa)，将冷冻干燥后的瘦肉，粉碎，过100目筛，备用。

2成型工艺

2.1辅料处理

辅料选择的原则有两个：颗粒成型性好、水溶性好。根据文献资料及实际操作的经验确定四种辅料乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉。乳糖-麦芽糊精-木糖醇-水溶性淀粉的质量比例为9:0.2:0.5:0.3。四种辅料按照上述配比过100目筛，混匀，备用。

2.2制粒

药液部分和瘦肉部分分别制粒，具体工艺参数如下：

(1)药液部分

按照药液：辅料＝5.5:1的比例(重量比)，过60目筛混合均匀，用95％乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，用16目筛整粒，即得药液部分颗粒。

(2)瘦肉部分

将冷冻干燥的瘦肉粉与辅料按照1:2的比例混合后，过100目筛，用95％的乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，16目筛整粒，即得瘦肉部分颗粒。

3包装工艺

将药液部分颗粒和瘦肉部分颗粒过筛混合均匀，过筛2次，置于自动包装机中进行包装，每袋10g，即得本工艺颗粒制剂。

实施例9

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1成分提取

1.1提取

按照实施例1-7中任一实施例称取处方量的山白菊或柳叶斑鸠菊、鲜姜黄及及瘦肉(瘦肉用带孔纱布包好)，置于200L的不锈钢桶中，桶中加入8倍量的水，置于500L的敞口锅中，敞口锅中加水180L，隔水加热。第一次8倍水，隔水加热1小时；第二次8倍水，隔水加热0.5小时。

1.2浓缩

将两次煎煮液合并，减压浓缩(温度：60℃，真空度：-0.1MPa)至药材：药液＝1:1时(相对密度1.08,50℃)，备用。

1.3精制

用2倍量95％乙醇进行醇沉，减压回收乙醇(温度：50℃，真空度：-0.1MPa)至无醇味，浓缩至药材：药液＝4:1时，备用。

1.4瘦肉处理

将煎煮后的瘦肉除去纱布，合并、混匀，自然放凉后，置于-20℃冰箱中，预冻2h后，置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥(温度：-45℃，真空度：-0.1MPa)，将冷冻干燥后的瘦肉，粉碎，过100目筛，备用。

2成型工艺

2.1辅料处理

辅料选择的原则有两个：颗粒成型性好、水溶性好。根据文献资料及实际操作的经验确定四种辅料乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉。乳糖-麦芽糊精-木糖醇-水溶性淀粉的质量比例为8:0.1:0.3:0.1。四种辅料按照上述配比过100目筛，混匀，备用。

2.2制粒

药液部分和瘦肉部分分别制粒，具体工艺参数如下：

(1)药液部分

按照药液：辅料＝4:1的比例(重量比)，过60目筛混合均匀，用95％乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，用16目筛整粒，即得药液部分颗粒。

(2)瘦肉部分

将冷冻干燥的瘦肉粉与辅料按照3:2的比例混合后，过100目筛，用95％的乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，16目筛整粒，即得瘦肉部分颗粒。

3包装工艺

将药液部分颗粒和瘦肉部分颗粒过筛混合均匀，过筛2次，置于自动包装机中进行包装，每袋10g，即得本工艺颗粒制剂。

实施例10

一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1成分提取

1.1提取

按照实施例1-7中任一实施例称取处方量的山白菊或柳叶斑鸠菊、鲜姜黄及及瘦肉(瘦肉用带孔纱布包好)，置于200L的不锈钢桶中，桶中加入12倍量的水，置于500L的敞口锅中，敞口锅中加水180L，隔水加热。第一次12倍水，隔水加热2小时；第二次12倍水，隔水加热1小时。

1.2浓缩

将两次煎煮液合并，减压浓缩(温度：50℃，真空度：-0.1MPa)至药材：药液＝1:1时(相对密度1.08,50℃)，备用。

1.3精制

用2倍量95％乙醇进行醇沉，减压回收乙醇(温度：50℃，真空度：-0.1MPa)至无醇味，浓缩至药材：药液＝8:1时，备用。

1.4瘦肉处理

将煎煮后的瘦肉除去纱布，合并、混匀，自然放凉后，置于-20℃冰箱中，预冻2h后，置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥(温度：-45℃，真空度：-0.1MPa)，将冷冻干燥后的瘦肉，粉碎，过100目筛，备用。

2成型工艺

2.1辅料处理

辅料选择的原则有两个：颗粒成型性好、水溶性好。根据文献资料及实际操作的经验确定四种辅料乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉。乳糖-麦芽糊精-木糖醇-水溶性淀粉的质量比例为10:0.3:0.6:0.5。四种辅料按照上述配比过100目筛，混匀，备用。

2.2制粒

药液部分和瘦肉部分分别制粒，具体工艺参数如下：

(1)药液部分

按照药液：辅料＝7:1的比例(重量比)，过60目筛混合均匀，用95％乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，用16目筛整粒，即得药液部分颗粒。

(2)瘦肉部分

将冷冻干燥的瘦肉粉与辅料按照2:2的质量比例混合后，过100目筛，用95％的乙醇过16目筛制粒，60℃烘干，16目筛整粒，即得瘦肉部分颗粒。

3包装工艺

将药液部分颗粒和瘦肉部分颗粒过筛混合均匀，过筛2次，置于自动包装机中进行包装，每袋10g，即得本工艺颗粒制剂。

以下通过药效试验证明本发明的技术效果

实施例11颗粒剂与传统口服汤剂对小鼠急性酒精性肝损伤的疗效比对

1实验材料

1.1实验动物

昆明种小鼠，60只，清洁级，6-8周龄，雌雄各半。合格证号：NO.11400700382984。

1.2试剂

红星二锅头酒56度，北京红星股份有限公司；受试药由中央民族大学提供(颗粒剂以及传统口服汤剂-采用隔水蒸的方法得到)；谷胱甘肽片(glutathione，GSH)，由重庆药友制药有限公司生产，产品批号：18041350；护肝片，由黑龙江葵花药业有限公司生产，批号：201810168；肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)elisa试剂盒，由MULTISCIENCES公司提供，批号：A28281211；丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒，批号20190316：谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GS H-Px)活性试剂盒，批号20190318：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性的检测试剂盒，批号20190314，GGT检测试剂盒，批号20190411：均购自南京建成生物工程研究所。

1.3仪器

电子秤：万特，离心机：德国Eppendorf-5430，酶标仪：美国BIO-TEK型号ELx800。

2动物分组、给药及造模方法

60只昆明种小鼠适应性喂养3天后，随机分为6组(每组10只)，即对照组、模型组、受试药传统汤剂组、受试药颗粒剂组、GSH组和护肝片组。

除正常组外，其余组给小鼠灌服56°白酒(12mL/kg)，每天1次，连续7d，正常组给予等体积蒸馏水灌胃。受试药组以2.6g/kg灌胃受试药灭菌水溶液；GSH组以GSH 200mg/kg灌胃，护肝片组以600mg/kg灌胃。均连续灌胃7天，每天1次。正常对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。各组小鼠均常规饲养，自由饮食水。末次灌胃结束12h后，颈椎脱臼处死小鼠，取材检测相关指标(ALT含量、AST含量、GGT、GSH、MDA、SOD、TNF及病理检测)。

3数据分析及处理

实验数据以均数±标准差

表示，统计以SPSS25.0完成。组间差异采用单因素方差分析(ANVOA)，组间两两比较若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，检验水准α＝0.05。

4实验结果：

4.1颗粒剂对小鼠急性酒精性肝损伤肝功能的影响

如表1所示，模型组与对照组比较各转氨酶均明显升高，说明模型制作成功。传统汤剂法和颗粒剂治疗组对酒精所致的肝脏转氨酶的升高均有较为明显的降低作用，说明其对肝脏具有较好的保护作用，其疗效与护肝片和GSH相当。颗粒剂组明显优于传统汤剂组，部分疗效甚至优于GSH组。

表1 颗粒剂对小鼠急性酒精性肝损伤肝功能的影响(U/L)

注：与模型组相比*p<0.05；**p<0.01

4.2颗粒剂对小鼠急性酒精性肝损伤相关指标的影响

如表2所示，模型组与对照组比较各指标均有显著差异，说明模型制作成功。传统汤剂治疗组和颗粒剂治疗组对酒精所致的肝脏各氧化损伤指标均有较为明显的逆转作用，说明其对肝脏的氧化损伤具有较好的对抗作用，其疗效与护肝片和GSH相当。颗粒剂组明显优于传统汤剂组，部分疗效甚至优于护肝片和GSH。

表2 颗粒剂对小鼠急性酒精性肝损伤相关指标的影响

注：与模型组相比*p<0.05；**p<0.01

4.3颗粒剂对小鼠急性酒精性肝损伤病理结果的影响

如图1所示，低倍镜下观察各组，各组的基本形态和正常组相似，肝索和肝血窦清晰可见，但模型组的肝细胞染色较其他各组浅里面有大量的未染色区域，可能是肝细胞内脂滴融合所致；高倍镜下：正常组肝细胞的细胞质染色不均一，内部脂滴所在处细胞质不着色，细胞质内可见1-2个细胞核位于细胞的中央，肝血窦内可见血窦内皮细胞和血细胞等；模型组肝细胞的体积增大，细胞质基本不着色，细胞核多位于细胞的一侧，可能是酒精所致的肝内脂滴增多并且这些脂滴融合将细胞挤向一侧所致，肝索间肝血窦不明显；GSH组肝细胞的染色和正常组类似，但窦隙较窄，与模型组相比肝细胞细胞质的染色较深，内部脂滴少而小；护肝片组的肝细胞形态和正常组类似，细胞质染色不均一，与模型组相比肝细胞细胞质的染色较深，内部脂滴少而小。受试药颗粒剂和传统汤剂组肝细胞和正常组的类似，但细胞质内有一些明显的空染区域；颗粒剂组肝细胞较传统汤剂组染色深，空染区域少，脂滴少而小。以上结果说明模型组有不同程度的损伤肝细胞使肝细胞内的脂滴增加并融合，GSH、护肝片和受试药组都能不同程度的对酒精所致的肝损伤进行保护，减少肝细胞内脂肪堆积，其中受试药颗粒剂组要好于传统汤剂组。

实施例12颗粒剂与传统汤剂对大鼠慢性酒精性肝损伤的疗效比对

1实验材料

1.1实验动物

SD大鼠84只，雄性，体重200～230g，合格证号：NO.1100111911011983。

1.2试剂

红星二锅头酒56度，北京红星股份有限公司；丙二醛(malondialdehyde，MDA)厂家：南京建成生物工程研究所，批号：20190619，和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)试剂盒，厂家：南京建成生物工程研究所，批号：20190613；肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)ELISA试剂盒，厂家：杭州联科生物技术有限公司，批号：A38290222；核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)ELISA试剂盒，厂家：武汉华美生物工程有限公司，批号：G21017314；甘油三脂TG，厂家：南京建成生物工程研究所，批号:20190613；丙氨酸氨基转移酶ALT，厂家：南京建成生物工程研究所，批号：20190531；谷草转氨酶AST，厂家：南京建成生物工程研究所，批号：20190614；受试药由中央民族大学提供(颗粒剂以及传统口服汤剂-采用隔水蒸的方法得到)；联苯双酯(bifendate)滴丸购自浙江医药股份有限公司；其余试剂均为分析纯。

1.3仪器

电子秤：万特，离心机：德国Eppendorf-5430，酶标仪：美国BIO-TEK型号ELx800。

2动物分组、给药及造模方法

84只SD大鼠适应性喂养1周后随机分为7组(n＝12)：空白对照组、模型组、联苯双酯滴丸阳性对照组(2.25mg/kg)，谷胱甘肽阳性对照组(120mg/kg)，护肝片阳性对照组(0.42g/kg)及传统汤剂组和颗粒剂组(1.8g/kg)，每组大鼠灌胃给药，除空白组给予生理盐水外，其余各组均给予56度红星二锅头灌胃，每天09：00给予二锅头灌胃1次，二锅头开始剂量为第1周10mL/kg，以后每周递增1mL，持续灌胃4周，大鼠造模的同时给予药物治疗，每天14：00阳性对照组给予阳性药和受试药均以1ml/100g浓度灌胃1次，空白组及模型组均给予相应体积生理盐水。实验结束即第4周末，大鼠隔夜禁食12h后麻醉状态下心脏取血，分离血清，迅速解剖取出肝脏，称量重量后，剪取肝组织200g制备组织匀浆，另取同一肝叶、同一位置、大小约0.5cm×0.5cm的肝组织，以40g/L多聚甲醛固定，其余肝组织－80℃冰箱保存。

3数据分析及处理

实验数据以均数±标准差

表示，统计以SPSS25.0完成。组间差异采用单因素方差分析(ANVOA)，组间两两比较若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett’s T3法，检验水准α＝0.05。

4实验结果：

4.1颗粒剂对大鼠慢性酒精性肝损伤肝功能的影响

如表3所示，模型组与对照组比较各转氨酶均明显升高，说明模型制作成功。传统汤剂组和颗粒剂治疗组对酒精所致的肝脏转氨酶的升高均有较为明显的降低作用，说明其对肝脏具有较好的保护作用，其疗效与护肝片和GSH相当，均优于联苯双酯。颗粒剂组明显优于传统汤剂组，部分疗效甚至优于护肝片和GSH。

表3 颗粒剂对大鼠慢性酒精性肝损伤肝功能的影响(U/L)

组别	n	ALT	AST
				对照组	12	10.915±0.907**	8.680±0.658**
模型组	8	24.988±2.083	16.470±1.666
				传统汤剂组	10	17.449±0.943*	11.674±0.959**
颗粒剂组	12	15.354±1.074**	10.513±0.851**
				护肝片组	10	17.075±1.444*	12.629±0.995**
GSH组	11	13.675±1.603**	10.222±0.504**
				联苯双酯组	11	17.561±1.352*	13.273±1.104*

注：与模型组比较*p<0.05；**p<0.01

4.2颗粒剂对大鼠慢性酒精性肝损伤相关指标的影响

如表4所示，模型组与对照组比较各指标均有显著差异，说明模型制作成功。传统汤剂组和颗粒剂治疗组对酒精所致的肝脏各氧化损伤指标均有较为明显的逆转作用，说明其对肝脏的氧化损伤具有较好的对抗作用。颗粒剂明显优于传统汤剂，其疗效优于护肝片和联苯双酯，与GSH相当。

表4 颗粒剂对大鼠慢性酒精性肝损伤相关指标的影响

注：与模型组比较*p<0.05；**p<0.01

4.3颗粒剂对大鼠慢性酒精性肝损伤病理结果的影响

如图2所示，低倍镜下观察各组，正常组肝索和肝血窦清晰可见，模型组的肝细胞染色较其他各组浅里面有大量的未染色区域，可能是肝细胞内脂滴融合所致；高倍镜下：正常组肝细胞的细胞质染色不均一，内部脂滴所在处不着色，细胞质内可见1-2个细胞核位于细胞的中央，肝血窦内可见血窦内皮细胞和血细胞等；模型组肝细胞的体积增大，细胞质基本不着色，细胞核多位于细胞的一侧，可能是酒精所致的肝内脂滴增多并且这些脂滴融合将细胞挤向一侧所致，肝索间肝血窦不明显；联脂组肝细胞的体积较正常组大，有的细胞核偏向于细胞的一侧，肝索内的肝血窦不明显；GSH组肝细胞的染色和正常组类似，但窦隙较窄，与模型组相比肝细胞细胞质的染色较深，内部脂滴少而小；护肝片组的肝细胞形态和正常组类似，细胞质染色不均一，与模型组相比肝细胞细胞质的染色较深，内部脂滴少而小。受试药组肝细胞和正常组的类似，但细胞质内有一些明显的空染区域，肝细胞染色比模型组染色深，脂滴少而小；颗粒剂组肝细胞较传统汤剂组染色深，空染区域少。以上结果说明模型组有不同程度的损伤肝细胞使肝细胞内的脂滴增加并融合，联苯双酯、GSH、护肝片和受试药组都能不同程度的对酒精所致的肝损伤进行保护，减少肝细胞内脂肪堆积，其中受试药颗粒剂要好于传统汤剂组。

本发明的工艺参数(如温度、时间等)区间上下限取值以及区间值都能实现本法，在此不一一列举实施例。

本发明未详细说明的内容均可采用本领域的常规技术知识。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (9)

1.一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂，其特征在于，所述颗粒剂由以下重量份的组分组成：

山白菊或柳叶斑鸠菊30～50份、姜黄20～60份、瘦肉20～40份，以及药学上可接受的辅料。

2.根据权利要求1所述的颗粒剂，其特征在于，所述瘦肉为猪瘦肉、牛瘦肉或鸡心肉。

3.根据权利要求1所述的颗粒剂，其特征在于，所述药学上可接受的辅料为乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的颗粒剂，其特征在于，所述乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉的质量比为8～10:0.1～0.3:0.3～0.6:0.1～0.5。

5.一种用于治疗酒精性肝损伤的颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1）提取

称取处方量的山白菊或柳叶斑鸠菊、鲜姜黄及瘦肉，隔水煎煮，煎煮液减压浓缩、醇沉、减压浓缩至药材：药液=4～8:1 g/mL时，备用；

将煎煮后的瘦肉，合并、混匀，自然放凉后，进行冷冻干燥，粉碎，过筛，备用；

2）制粒

采用乳糖、麦芽糊精、木糖醇及水溶性淀粉作为辅料，乳糖：麦芽糊精：木糖醇：水溶性淀粉的质量比例为8～10:0.1～0.3:0.3～0.6:0.1～0.5；

按照药液：辅料=4～7:1的重量比，过筛混合均匀，制粒，整粒，即得药液部分颗粒；

将冷冻干燥的瘦肉粉与辅料按照1～3:2的重量比混合后，过筛，制粒，整粒，即得瘦肉部分颗粒；

将药液部分颗粒和瘦肉部分颗粒过筛混合均匀，过筛即得颗粒剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，隔水煎煮的次数为两次，第一次8～12倍水，隔水加热1～2小时；第二次8～12倍水，隔水加热0.5～1小时。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，减压浓缩的温度：50-60℃，真空度：≤-0.1MPa。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，冷冻干燥的温度：≤-45℃，真空度：≤-0.1MPa。

9.权利要求1-4任一项所述颗粒剂在制备用于治疗酒精性肝损伤的药物中的应用。

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