CN112535175B - 一种植物杀菌剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甘草酸植物杀菌剂，以及该杀菌剂在防治作物真菌及卵菌病害中的应用，所述植物杀菌剂活性成分为苷草酸，还可以加上农药学上可接受的辅料制备成药剂。本发明的苷草酸具有较强抑制荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌引起的作物疫病及真菌病害的发生。

Description

一种植物杀菌剂及其应用

技术领域

本发明涉及作物病害防治技术领域，更具体的说是涉及甘草酸作为植物杀菌剂在防治作物病害中的应用。

背景技术

植物病原卵菌引起的植物疫病给我国农作物和林木生产造成重大危害，年均经济损失高达数百亿元，目前，农业生产上针对真菌及卵菌病害的主要手段是大量使用化学农药。然而，由于化学农药作用位点单一，随着其使用次数的增加和使用年限的延长，抗性也越来越明显，并呈现出持续不断发展的趋势。因此，寻求高效广谱化学杀菌剂的安全替代药剂尤为迫切，近年来中药有效成分等天然产物在防治病害方面表现出了巨大的应用潜力。

中药和中药提取物等天然产物在防治植物病害方面具有抗菌效果好、抑菌范围广，毒性相对较低的特点，表现出了巨大的潜能。其中，甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)为豆科甘草属植物，其根、茎是常用的中草药，广泛分布于我国的东北，新疆，云南，内蒙古，安徽等地，甘草的成分复杂，主要含有三萜类，黄酮类，香豆精类化合物，三萜类化合物主要包含甘草酸和甘草次酸两种生物活性成分。甘草酸(glycyrrhizic acid)是甘草中最主要的活性成分，其含量高,生理活性强,具有抗炎﹑抗肝损伤的作用，甘草酸及其系列产品，对肉瘤、癌细胞生长有抑制作用，可增加人体免疫功能，而且也是很好的食品添加剂和香料基料。近年来，对甘草及其化合物甘草酸的研究主要在医药、化工、食品、日用化工等行业。但关于甘草酸对植物病原卵菌及真菌抑制作用的研究报道较少。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种植物杀菌剂，以甘草酸作为主要活性成分，用于抑制植物病原卵菌及真菌病害。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种植物杀菌剂，包括甘草酸。

甘草酸主要通过影响真菌细胞壁的形成和质膜生物合成等调节菌体细胞结构和功能、菌体能量生成、物质合成和功能，另外还可以诱导植物自身调节等。

优选的，在上述一种植物杀菌剂中，还包括农药学上可接受的辅料，所述辅料选自分散剂、润湿剂、崩解剂、粘结剂、消泡剂、抗冻剂、增稠剂、填料和溶剂中的一种或者多种。

优选的，在上述一种植物杀菌剂中，所述植物杀菌剂中甘草酸的浓度为200μg/mL-1000μg/mL。

本发明还公开了上述植物杀菌剂在防治作物病害中的应用。

优选的，在上述一种植物杀菌剂在防治作物病害中的应用中，所述植物杀菌剂用于防治作物真菌及卵菌病害。

优选的，在上述一种植物杀菌剂在防治作物病害中的应用中，所述植物杀菌剂主要防治由荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、大豆根腐病菌和花菜核盘菌引起的作物真菌及卵菌病害。

优选的，在上述一种植物杀菌剂在防治作物病害中的应用中，将所述植物杀菌剂兑水稀释10倍成药液后喷施，喷施时间为作物幼苗期或成株期，连续喷施2-3次，每次间隔10天。喷施过程是在作物叶面上下喷雾，控制液面不滴水。

上述技术方案的有益效果是：将甘草酸植物杀菌剂用于病害防治，采用预防为主，提前用药的原则，在高温、高湿条件下预防性用药和病发时及早喷药，可达到有效的作物病害防治效果。

优选的，在上述一种植物杀菌剂在防治作物病害中的应用中，所述药液中添加0.02％(V/V)吐温20，其中吐温20作为表面活性剂(分散剂)使用。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种植物杀菌剂及该植物杀菌剂在防治作物病害中的应用，具有以下优点：

本发明的中药剂来为天然来源，无毒副作用，不易导致病原微生物产生抗药耐药性，可用于防治荔枝霜霉病、大豆根腐病、大豆疫病和花菜菌核病等作物疫病和真菌病害，是一种低毒、有效的抑菌生物农药；

本发明采用平板抑菌和直接喷施实验，发现苷草酸对荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌均表现出较好的防治效果，抑制率均达到20-60％；室内盆栽药效结果表明，苷草酸对荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌的预防和治疗作用，防效均达到80％以上，且不易产生抗药性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为甘草酸处理对荔枝霜疫霉抑菌效果影响；

图2为甘草酸处理四种致病菌的抑菌效果；

图3为甘草酸处理对菌丝形态的影响(200×)；

图4为甘草酸处理对的四种致病菌细胞膜电导率影响；

图5为甘草酸处理后的四种致病菌SYTOX染色实验(200×)(与CK组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01)；

图6为甘草酸处理对四种致病菌POD酶的影响(与CK组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01)；

图7为荔枝霜疫霉叶片发病现象；

图8为尖孢镰刀菌叶片发病现象。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

在超净工作台上，首先将荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌分别接种到PDA培养基上，25℃黑暗培养5d后，在菌落边缘处分别用手术刀片割取0.5×0.5cm的菌丝块另置于新的PDA培养皿中(分别含0，200，400，600，800，1000μg/mL的甘草酸)，25℃黑暗培养5d，以不加甘草酸培养皿为对照。

参见图1-2，经过病原菌生长速率统计发现：1000μg/mL甘草酸对荔枝霜霉病和大豆根腐病供试菌株的生长及细胞形态抑制作用效果明显。

实施例2

在超净工作台上，首先将福建分离荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌分别接种到PDA培养基上，25℃黑暗培养5d后，在菌落边缘处分别用手术刀片割取0.5×0.5cm的菌丝块另置于一个新PDA培养皿中(含600μg/mL甘草酸)，25℃黑暗培养5d，作为试验组(GA)，以不加甘草酸作为对照组(CK)。

结合附图3，显微观察发现：与对照组比较，试验组四种致病菌菌丝顶端生长受到抑制，分隔间距缩短，出现分枝增多的现象。

利用SYTOX绿色死细胞核酸染料对四种致病菌的细胞膜进行染色，通过在荧光倒置显微镜先显绿色荧光的特性，观察甘草酸影响四种致病菌细胞膜的形成情况。参见图4-5，结果表明：荔枝霜疫霉空白组细胞膜成片粘附于载体上，绿色荧光物质如云絮状聚集，甘草酸处理后的只有少数细胞膜黏附并且大都呈分散状态，与空白对照组相比绿色荧光物质明显减少，并且稀薄，随着浓度增加粘附的细胞膜越少，绿色荧光物质也越少；尖孢镰刀菌组的甘草酸处理后绿色荧光物质也在不同程度上减少；大豆疫霉菌和核盘菌的空白对照组绿色荧光物质与处理组的差异不那么明显但总体上还是相对减少的状态。

利用试剂盒测定病原物抵御外界环境胁迫的重要防御酶-过氧化酶(POD)活性。参见图6，结果表明：与空白对照相比，甘草酸处理的四种致病菌内POD活性均显著降低，可见适宜浓度的甘草酸处理能大幅降低致病菌体内氧化酶活性和氧化物质含量，从而达到抑制致病菌致病的能力。

实施例3

选择大小一致并且叶龄相同的荷兰豆和荔枝叶片，同叶柄一起剪下，叶柄用棉球保湿，叶正面向上平铺于直径为15cm的湿滤纸培养皿中。将甘草酸粉末配制成浓度为600μg·mL^-1的药液备用。先在荷兰豆和荔枝叶片上喷药，喷药24h待药液阴干后，接种，用直径5mm的打孔器在培养2-3d的尖孢镰刀菌和荔枝霜疫霉的菌落边缘1/3处取菌饼，每片叶片接种一个菌饼，以蒸馏水为空白对照组，每处理3次重复，每重复选取6片叶子。在26℃下光照12h/黑暗12h交替培养2-3d，观察叶片病斑大小并拍照。参见图7-8，结果表明：荔枝霜疫霉、尖孢镰刀菌在甘草酸药剂的叶片上，形成的病斑均明显小于清水处理的对照叶片。

上述结果表明，甘草酸对荔枝霜疫霉菌、大豆疫霉菌、尖孢镰刀菌和核盘菌的生长及致病有明显抑制作用，说明甘草酸有作为植物杀菌剂的巨大潜力，同时也能推动其它作物病害的防治。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的方案而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (1)

1.一种植物杀菌剂在防治作物病害中的应用，其特征在于，所述植物杀菌剂由甘草酸和农药学上可接受的辅料组成，且所述植物杀菌剂中甘草酸的浓度为800µg/mL-1000µg/mL；

所述植物杀菌剂的防治对象是由荔枝霜疫霉菌引起的作物真菌病害。

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