CN112521457B - 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用 - Google Patents

一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112521457B
CN112521457B CN202011596618.0A CN202011596618A CN112521457B CN 112521457 B CN112521457 B CN 112521457B CN 202011596618 A CN202011596618 A CN 202011596618A CN 112521457 B CN112521457 B CN 112521457B
Authority
CN
China
Prior art keywords
analgesic
analgesic peptide
injection
peptide
mice
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011596618.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112521457A (zh
Inventor
孙同毅
高媛媛
梅迪
郭莉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Weifang Medical University
Original Assignee
Weifang Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Weifang Medical University filed Critical Weifang Medical University
Priority to CN202011596618.0A priority Critical patent/CN112521457B/zh
Publication of CN112521457A publication Critical patent/CN112521457A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112521457B publication Critical patent/CN112521457B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118及其应用。所述镇痛肽CI118的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其分离自华蟾素注射液，具有显著的镇痛活性，且具有结构简单、获取方便、镇痛作用好的优点。所述镇痛肽CI118能够应用于治疗疼痛的药物的制备，因此具有很好的的临床应用前景。

Description

一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118及其应用
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118及其应用。
背景技术
华蟾素注射液(Cinobufacini，简称华蟾素)是以我国传统药材中华大蟾蜍阴干全皮为主要原料，经严格工艺加工提取、精制而成的水溶性注射剂，具有清热解毒、利水消肿、化瘀溃坚等作用。自20世纪80年代上市至今已广泛用于肝癌等多种恶性肿瘤的治疗，以及癌性疼痛、肿瘤热、癌性胸腔积液、顽固性呃逆等肿瘤相关并发症的辅助治疗。华蟾素注射液在临床应用时，常单用或与化疗药联用治疗原发性肝癌、肺癌、食管癌和胃癌等多种中晚期肿瘤以及慢性乙型肝炎，获得一定的治疗效果。近年来的体内外药理实验亦证明华蟾素注射液具有显著的抗肿瘤作用及免疫增强作用。
多肽是由10～100个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物。现在多肽在医学领域已有了广泛的用途，比如用于抑菌的抗菌肽，用于心血管疾病的多肽，检测病毒、细胞、支原体等的多肽等。因此，具有镇痛性的多肽也可能成为具有良好应用前景的临床候选药物。
发明内容
本发明的目的是提供了一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118及其应用。所述镇痛肽CI118具有显著的镇痛活性，其结构简单、制备方便。
为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
进一步的，所述镇痛肽CI118具有显著的镇痛活性。
进一步的，所述镇痛肽CI118分离自华蟾素注射液。
本发明还提供了所述的分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118在制备用于治疗或缓解疼痛的药物中的应用。
进一步的，所述疼痛包括炎症引起的疼痛、高温或热刺激引起的疼痛、腹痛、急性疼痛。
进一步的，所述镇痛肽CI118的使用浓度为5-10mg/ml。
进一步的，所述镇痛肽CI118能够明显的缓解疼痛。
与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：
本发明从华蟾素注射液中分离纯化得到了具有镇痛活性的新型镇痛肽CI118，该镇痛肽CI118的氨基酸序列经蛋白质数据库进行搜寻比较，未发现有任何相同多肽，并且华蟾素注射液镇痛肽CI118具有结构简单、镇痛作用好的优点。
本发明通过实验证明华蟾素注射液镇痛肽CI118具有很好的镇痛作用，在小鼠疼痛实验动物模型实验中均显示了良好的镇痛作用，且应用范围广泛，与其他的镇痛多肽相比，本发明的镇痛肽CI118具有结构简单、获取方便等有益特点，具有广阔的临床应用前景。
附图说明
图1为镇痛肽CI118注射后小鼠第一次扭体时间结果。
图2为镇痛肽CI118注射后20分钟内小鼠的醋酸扭体次数结果。
图3为镇痛肽CI118注射后小鼠舔足潜伏期结果。
图4为镇痛肽CI118注射后福尔马林实验小鼠一相结果。
图5为镇痛肽CI118注射后福尔马林实验小鼠二相结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1、华蟾素注射液镇痛肽CI118的获取
华蟾素注射液购买自安徽华润金蟾药业股份有限公司，将华蟾素注射液进行蛋白多肽组学分析，根据多肽组学鉴定结果，从华蟾素注射液中共鉴定到120条不同的多肽分子。根据其氨基酸序列，采用固相合成法合成后，分别使用醋酸扭体实验、热板实验，福尔马林模型实验以及角叉菜胶模型实验进行镇痛活性筛选，从而获得具有镇痛活性的华蟾素注射液镇痛肽CI118。
2、镇痛肽CI118的分子鉴定
(1)氨基酸序列的测定：
将人工固相合成的多肽粗产物经过高效液相色谱纯化，纯化得到的华蟾素注射液镇痛肽CI118在全自动蛋白质序列测定仪上经Edman降解法，测定华蟾素注射液镇痛肽CI118的氨基酸全序列，结果表明华蟾素注射液镇痛肽CI118的氨基酸序列为VMLTGVSPFQCE(SEQ ID NO.1)。
(2)质谱分子量测定：
使用基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)检测华蟾素注射液镇痛肽CI118的精确分子量，结果显示华蟾素注射液镇痛肽CI118质谱测定的分子量为1264.90Da。
实施例2
一、镇痛肽CI118的镇痛活性测定
为深入了解镇痛肽CI118的镇痛活性，利用醋酸扭体动物疼痛模型和热板法动物疼痛模型进行研究，结果表明镇痛肽CI118在醋酸扭体动物疼痛模型中和热板法动物模型中均显示了较好的镇痛活性，分述如下：
1、镇痛肽CI118对小鼠醋酸扭体疼痛模型的镇痛作用
实验动物采用SPF级4周龄昆明种小鼠(体重18-22g)。将小鼠随机分为对照组(无菌生理盐水)、阳性药物组(50mg/kg阿司匹林)、CI118组(50mg/kg镇痛肽CI118)，每组各10只小鼠。将镇痛肽CI118溶解于无菌生理盐水至稀释浓度为5mg/ml。CI118组的小鼠左侧腹腔注射5mg/ml的镇痛肽CI118稀释液200μl；阳性药物组小鼠左侧腹腔注射等体积的50mg/kg的阿司匹林；对照组小鼠左侧腹腔注射等体积的无菌生理盐水。30分钟后，三组小鼠的右侧腹腔注射250μl的0.7％的醋酸溶液，分别记录小鼠注射醋酸后第一次出现扭体的时间和20分钟内扭体的次数。
如图1和图2所示，镇痛肽CI118能延长小鼠第一次出现扭体的时间并减少小鼠醋酸扭体次数，显现了其对醋酸引起的动物疼痛具有明显的镇痛效果。
2、镇痛肽CI118对小鼠热板法疼痛模型的镇痛作用
实验采用雌性昆明小鼠(体重18-22g)，先在实验前24小时筛选基础热痛阈在5-30秒内的小鼠。将小鼠随机分为对照组(无菌生理盐水)、阳性药物组(50mg/kg阿司匹林)、CI118组(50mg/kg镇痛肽CI118)，每组各10只小鼠。将镇痛肽CI118溶解于无菌生理盐水至稀释浓度为5mg/ml。CI118组的小鼠采用腹腔注射5mg/ml镇痛肽CI118 200μl；阳性药物组小鼠腹腔注射等体积的50mg/kg阿司匹林；对照组小鼠腹腔注射等体积的无菌生理盐水。给药后半个小时，将三组的小鼠放入热板仪，记录小鼠第一次出现舔足的时间。
如图3所示，镇痛肽CI118能提高小鼠对热板疼痛的痛阈，延长小鼠第一次舔后足的时间，说明镇痛肽CI118对高温或热刺激引起的疼痛具有镇痛效果。
二、镇痛肽CI118对福尔马林诱导的疼痛实验
将小鼠随机分为对照组(无菌生理盐水)、阳性药物组(50mg/kg阿司匹林)、CI118组(镇痛肽CI118)，每组各10只小鼠。将镇痛肽CI118溶解于无菌生理盐水至稀释浓度为5mg/ml。CI118组的小鼠采用腹腔注射5mg/ml镇痛肽CI118 200μl；阳性药物组小鼠腹腔注射等体积的50mg/kg阿司匹林；对照组小鼠腹腔注射等体积的无菌生理盐水。腹腔注射给药30min后，于小鼠右后脚注射20μl 3％的福尔马林溶液，记录一相(0-5min)和二相(15-30min)的舔足时间。
如图4-5所示，实验结果表明CI118可显著降低小鼠一、二相的舔足时间，且镇痛肽CI118对小鼠的一相舔足时间要短于阿司匹林，说明镇痛肽CI118对急性疼痛具有镇痛效果，且优于阿司匹林的效果，而CI118对强直期疼痛也具有很好的镇痛效果。
三、镇痛肽CI118对角叉菜胶致小鼠足肿胀模型的镇痛作用
采用角叉菜胶致小鼠足肿胀实验评价镇痛肽CI118的抗炎作用。将小鼠随机分为正常组、模型组(卡拉胶)、阳性组(10mg/kg吲哚美辛)、CI118组(10mg/kg镇痛肽CI118)，每组各10只小鼠。将镇痛肽CI118溶解于无菌生理盐水至稀释浓度为5mg/ml。正常组和模型组小鼠腹腔注射无菌生理盐水，CI118组小鼠注射5mg/ml镇痛肽CI118 200μl，阳性组小鼠注射10mg/kg的吲哚美辛；在腹腔注射药物30min后，正常组小鼠右后足注射30μl生理盐水，模型组注射30μl 1％卡拉胶，阳性组和3RL组小鼠分别注射30μl 1％角叉菜胶，自2h后每隔一小时测量小鼠的右后足趾厚度。实验结果(表1)表明，镇痛肽CI118对角叉菜胶小鼠足部肿胀无明显的抑制效果，说明镇痛肽CI118无抗炎的作用。
表1：角叉菜胶致小鼠足肿胀模型的足趾厚度
Figure BDA0002868135890000041
Figure BDA0002868135890000051
综上所述，本发明通过系列实验获得了镇痛肽CI118，并通过各种小鼠疼痛实验动物模型实验证明镇痛肽CI118具有显著的镇痛效果，而且应用范围广泛，可以用于治疗或缓解炎症引起的疼痛、高温或热刺激引起的疼痛、腹痛、急性疼痛等多种疼痛中，可以应用于治疗或缓解疼痛药物的制备。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 潍坊医学院
<120> 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Val Met Leu Thr Gly Val Ser Pro Phe Gln Cys Glu
1 5 10

Claims (3)

1. 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118，其特征在于：所述镇痛肽CI118的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的分离自华蟾素注射液的镇痛肽CI118在制备用于治疗疼痛的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述疼痛包括炎症引起的疼痛、高温引起的疼痛、腹痛。
CN202011596618.0A 2020-12-29 2020-12-29 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用 Active CN112521457B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011596618.0A CN112521457B (zh) 2020-12-29 2020-12-29 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011596618.0A CN112521457B (zh) 2020-12-29 2020-12-29 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112521457A CN112521457A (zh) 2021-03-19
CN112521457B true CN112521457B (zh) 2022-03-01

Family

ID=74977460

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011596618.0A Active CN112521457B (zh) 2020-12-29 2020-12-29 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112521457B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116041431B (zh) * 2022-12-28 2024-06-25 潍坊医学院 一种来源于中华大蟾蜍的改造镇痛多肽g2a及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103275187A (zh) * 2013-06-14 2013-09-04 四川科伦新光生物科技开发有限公司 一种镇痛肽fi及其基因和应用
CN104356218A (zh) * 2014-11-11 2015-02-18 中国科学院昆明动物研究所 少棘蜈蚣镇痛肽前体蛋白Ssm-A及其产物Ssm-A1和Ssm-A2的制备和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1980000216A1 (en) * 1978-07-10 1980-02-21 Univ Illinois Inhibition by peptides of tolerance to and dependence on morphine
CN101845099A (zh) * 2010-04-23 2010-09-29 中国药科大学 一种长效镇痛肽及其应用
CN104017066B (zh) * 2014-05-07 2016-08-10 徐州医学院 一段具有明显镇痛作用的多肽
CN106432422B (zh) * 2016-12-18 2019-04-02 唐琼瑶 一组具有镇痛作用的肽及其药物组合物和应用
CN110559444B (zh) * 2019-10-16 2023-08-25 南京中医药大学 蟾酥多肽在作为药物促渗剂中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103275187A (zh) * 2013-06-14 2013-09-04 四川科伦新光生物科技开发有限公司 一种镇痛肽fi及其基因和应用
CN104356218A (zh) * 2014-11-11 2015-02-18 中国科学院昆明动物研究所 少棘蜈蚣镇痛肽前体蛋白Ssm-A及其产物Ssm-A1和Ssm-A2的制备和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112521457A (zh) 2021-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2016165102A1 (en) Therapeutic peptides for cerebrovascular diseases
CN112521457B (zh) 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci118及其应用
US20110207921A1 (en) Sulfated derivative of gastrodia elata polysaccharide, preparation method and antitumor use thereof
CN113150049B (zh) 青钱柳的提取物及其抗痛风和降尿酸应用
CN112679579B (zh) 一种分离自华蟾素注射液的镇痛肽ci5及其应用
CN103113456B (zh) 具有抗血小板聚集活性的僵蚕多肽及其制备方法和应用
CN109557203B (zh) 白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法
CN112979640B (zh) 一类生物碱二聚体类化合物及其在制备pd-1/pd-l1通路抑制剂中的应用
CN104894200B (zh) 路氏双髻鲨软骨血管生成抑制因子的制备方法
CN112679594B (zh) 一种抗菌肽Buforin IIB的改造体镇痛肽BRL及其应用
WO2014173058A1 (zh) 一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途
CN111732633B (zh) 一种抗肿瘤多肽和在制备抗肿瘤药物方面的用途
CN115109135B (zh) 一种具有抗肝癌和抑制肝纤维化功效的土鳖虫蛋白提取物及其应用
CN104892729B (zh) 一种路氏双髻鲨软骨血管生成抑制因子
CN109966470B (zh) 环二肽在创面修复药物中的应用
WO2014173056A1 (zh) 槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途
CN113527424B (zh) 一种茯苓多肽及其抗病毒作用
CN108976308B (zh) 辽东楤木根多糖提取物及其制备方法和在肝损伤保护中的用途
CN118221837A (zh) 一种月季花中新均一多糖的制备及其在抗纤维化药物中的应用
WO2017220051A2 (zh) 盐酸苄丝肼的药物组合物及其降血糖的医药用途
CN115304686B (zh) 一种牛膝多糖、其制备工艺和用途
CN108409540B (zh) 一种治疗骨关节炎的化合物及其制备与应用
JPH0643323B2 (ja) ニンニクの加工法
JP2001010970A (ja) カワリハラタケの抗腫瘍性画分
WO2012011619A1 (ko) 마황으로부터 에페드린을 고수율로 분리하는 방법 및 에페드린을 유효 성분으로 하는 면역증강보조제

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant