CN112521436A - 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用 - Google Patents

一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112521436A
CN112521436A CN202011441951.4A CN202011441951A CN112521436A CN 112521436 A CN112521436 A CN 112521436A CN 202011441951 A CN202011441951 A CN 202011441951A CN 112521436 A CN112521436 A CN 112521436A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cytidylic acid
phase
citicoline
solution
intermediate product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011441951.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112521436B (zh
Inventor
张恒
齐峰
周艳
杨文吉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin Bainian Hanke Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Jilin Bainian Hanke Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin Bainian Hanke Pharmaceutical Co ltd filed Critical Jilin Bainian Hanke Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202011441951.4A priority Critical patent/CN112521436B/zh
Publication of CN112521436A publication Critical patent/CN112521436A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112521436B publication Critical patent/CN112521436B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种5’‑胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用。本发明中5’‑胞苷酸衍生物为5’‑胞苷酸二聚体，主要由5’‑胞苷酸和三乙胺、催化剂、溶剂反应制成。其中催化剂为二环己基碳二亚胺或1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐。该制备方法操作步骤简单、高效、环保，制备的5’‑胞苷酸二聚体纯度高。本发明还提供了针对5’‑胞苷酸二聚体的检测方法及检测条件，可快速、准备的分析出待测样品中的5’‑胞苷酸二聚体含量；该检测方法可用于胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂生产过程的质量控制，从而提升胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠制成的注射剂的用药安全。

Description

一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠 及其注射剂中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用。
背景技术
5’-胞苷酸是制备胞二磷胆碱及胞磷胆碱钠的关键中间体，胞二磷胆碱(英文名：Citicoline)，化学名为胆碱胞嘧啶核苷二磷酸酯。胞二磷胆碱是人体内磷脂合成途径中的前体物质，也是卵磷脂合成中的辅酶，能参与体内卵磷脂的生物合成。当大脑功能下降时，脑组织内的卵磷脂含量显著减少。补充外源性胞二磷胆碱即能激活卵磷脂的生物合成，剌激脑干网状结构的兴奋，提高苏醒阈值，恢复神经组织机能，改善脑代谢和神经传导，增强上行性网状结构激活系统的功能，降低脑血管阻力，增加脑血流量，改善大脑血液循环，促进大脑物质代谢，功能恢复。临床用于治疗颅脑损伤或脑血管意外所引起的神经系统的后遗症及急性胰腺炎。胞二磷胆碱的合成一般以胞苷为起始原料，以磷酸三乙酯为溶剂，与三氯氧磷反应生成5’-胞苷酸，然后再在DCC催化下与吗啡啉反应生成5’-磷酸吗啉胞苷钠盐，在与氯化磷酸胆碱反应生成胞二磷胆碱。合成路线如下式所示：
Figure BDA0002822610080000011
在对胞二磷胆碱合成工艺研究过程中，我们首次发现了5’-胞苷酸的衍生物(5’-胞苷酸二聚体)，5’-胞苷酸二聚体化学名为((2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧嘧啶-1(2H)-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)磷酸二氢甲酯二聚体，英文名为 ((2R,3S,4R,5R)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1(2H)-yl)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)meth yldihydrogen phosphate Dimer分子式为C18H26N6O15P2，分子量为628.38。通过对5’-胞苷酸二聚体的注射给药急性毒性实验发现，经注射的小鼠有中毒症状和死亡现象，提示5’- 胞苷酸二聚体可能具有较高的注射给药毒性。因此5’-胞苷酸二聚体的存在直接影响胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂的质量以及药用毒性。
因此有必要开发5’-胞苷酸二聚体的制备方法以及相应的检测方法，以便在胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂的生产过程中能严格的控制5’-胞苷酸二聚体的含量，把控成品质量，提升胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠制成的注射剂的用药安全。5’-胞苷酸二聚体的制备及检测方法在原料药和注射剂的检测中的应用是非常具有意义的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种5’-胞苷酸衍生物为5’-胞苷酸二聚体。
进一步的，所述5’-胞苷酸二聚体的化学结构式如下；
Figure BDA0002822610080000021
进一步的，所述5’-胞苷酸二聚体主要由5’-胞苷酸、三乙胺、催化剂、溶剂反应制得。
进一步的，所述催化剂为二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
进一步的，所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、甲苯中的任意一种或多种。
一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法，包括以下步骤；
S1.将5’-胞苷酸溶解于溶剂中，缓慢滴加三乙胺溶液，加入催化剂，搅拌，升温至97-105℃，反应，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于无水乙醇溶液中，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，搅拌，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，搅拌，析晶，抽滤，温度为30-35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体。
进一步的，所述的一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法，包括以下步骤；
S1.将5’-胞苷酸溶解于溶剂中，缓慢滴加三乙胺溶液，滴加速度为0.1-0.5ml/min，加入催化剂，搅拌，升温至97-105℃，反应18-72h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于无水乙醇溶液中，搅拌6-8h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌2-3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，搅拌，析晶3-4h，抽滤，温度为30-35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体。
进一步的，所述步骤S2中，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1。
一种5’-胞苷酸衍生物在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用，利用高效液相色谱检测法检测胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的5’-胞苷酸衍生物含量；所述高效液相色谱检测法检测条件为：
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为33-37℃；
流动相以磷酸盐缓冲液为A相，以甲醇为B相；
检测波长为276nm；流速为1ml/min；进样体积为10μl；洗脱方式为梯度洗脱。
进一步的，该检测方法中梯度洗脱条件为：
0-5min,A相95％，B相5％；
5-12min,A相95→90％，B相5→10％；
12-25min，A相90→80％，B相10→20％；
25-25.01min，A相80→95％，B相20→5％；
25.01-35min，A相95％，B相5％。
进一步的，所述磷酸盐缓冲液由0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液和四丁基铵溶液体积比 1:1混合，所述四丁基铵溶液是0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5得到。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明利用5’-胞苷酸和三乙胺在催化剂二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐催化作用下，反应制得5’-胞苷酸二聚体，该制备方法操作步骤简单、高效、环保，制备的5’-胞苷酸二聚体纯度高。另外，本发明还提供了针对5’-胞苷酸二聚体的检测方法检测条件，利用高效液相色谱法可快速、准备的分析出待测样品中的5’-胞苷酸二聚体含量；该检测方法可用于胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂中5’-胞苷酸二聚体的含量检测，其含量检测有利于胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂生产过程的质量控制，提升胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠制成的注射剂的用药安全，减少用药风险。因此本发明提供的5’-胞苷酸二聚体的制备方法及检测方法在原料药和注射剂的检测中的应用是非常具有意义的。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的核磁共振氢谱；
图2是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的质谱；
图3是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的红外光谱图；
图4是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的紫外光谱图(纯化水溶解)；
图5是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的波长与吸光度数据图(纯化水溶解)；
图6是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的紫外光谱图(盐酸溶液溶解)；
图7是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的波长与吸光度数据图(盐酸溶液溶解)；
图8是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的紫外光谱图(氢氧化钠溶液溶解)；
图9是本发明中实施例4制备的5′-胞苷酸二聚体的波长与吸光度数据图(氢氧化钠溶液溶解)；
图10是本发明中实施例9“5′-胞苷酸二聚体的纯度检测”高效液相色谱图；
图11是本发明中实施例10中“胞二磷胆碱中5′-胞苷酸二聚体的含量检测”的高效液相色谱图；
图12是本发明中实施例11中“胞磷胆碱钠中5′-胞苷酸二聚体的含量检测”的高效液相色谱图；
图13是本发明中实施例12中“胞二磷胆碱注射剂中5′-胞苷酸二聚体的含量检测”的高效液相色谱图；
图14是本发明中实施例13中“胞磷胆碱钠注射剂中5′-胞苷酸二聚体的含量检测”的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种5’-胞苷酸衍生物的制备实施例
实施例1
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为二环己基碳二亚胺，溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml N,N-二甲基甲酰胺中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.1ml/min，加入二环己基碳二亚胺，搅拌，升温至97℃，反应56h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml的无水乙醇溶液中，搅拌6h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌26h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶36h，抽滤，温度为306℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体3.5g，收率为31％。
实施例2
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为二环己基碳二亚胺，溶剂为N,N-二甲基乙酰胺。
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于80ml N,N-二甲基乙酰胺中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.2ml/min，加入二环己基碳二亚胺，搅拌，升温至97℃，反应24h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌2h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶3h，抽滤，温度为 31℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体2.8g，收率25％。
实施例3
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml N,N-二甲基甲酰胺中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.3ml/min，加入6g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌，升温至105℃，反应30h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌2.5h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶3.5h，抽滤，温度为32℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体3.2g，收率28％。
实施例4
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为二环己基碳二亚胺，溶剂为甲醇。
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml的甲醇溶液中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.4ml/min，加入6g的二环己基碳二亚胺，搅拌，升温至100℃，反应18h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶3.5h，抽滤，温度为32℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体3.8g，收率34％。
实施例5
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，溶剂为乙醇。
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml的乙醇溶液中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.4ml/min，加入6g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌，升温至 102℃，反应56h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶3h，抽滤，温度为 35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体3.1g，收率27％。
实施例6
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，溶剂为乙酸乙酯；
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml的乙酸乙酯中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.5ml/min，加入6g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌，升温至 100℃，反应56h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶4h，抽滤，温度为 35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体4.4g，收率39％。
实施例7
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为二环己基碳二亚胺，溶剂为乙醇；
S1.将6g的5’-胞苷酸溶解于60ml的乙醇溶液中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.5ml/min，加入6g的二环己基碳二亚胺，搅拌，升温至98℃，反应56h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌8h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌28h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶4h，抽滤，温度为33℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体2.5g，收率22％。
实施例8
5’-胞苷酸衍生物，5’-胞苷酸二聚体的制备
原料准备：催化剂为二环己基碳二亚胺，溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
S1.将90g的5’-胞苷酸溶解于900ml的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，缓慢滴加6ml三乙胺溶液，滴加速度为0.5ml/min，加入95g的二环己基碳二亚胺，搅拌，升温至100℃，反应72h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物 A；
S2.将中间产物A溶于200ml无水乙醇溶液中，搅拌7h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌，析晶4h，抽滤，温度为 32℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体3.4g，收率30％。
急性毒性试验
为检测5’-胞苷酸二聚体的急性毒性，对小鼠进行注射给药急性毒性试验，小鼠体重在20-22g，计算半数致死量LD50值；
在射给药急性毒性实验采用最大剂量给药量实验法，将实施例4制备的5’-胞苷酸二聚体配制成0.125g/ml浓度尾静脉注射给药，给药剂量分别为0.8ml/只、0.4ml/只、0.2ml/ 只、0.1ml/只、0.05ml/只，观察14天恢复期内小鼠的体重、进食量、一般外观表现、中毒症状与死亡数。结果表明：5组给药剂量下，小鼠全部死亡，详见表1。
将给药浓度降低至0.0625g/ml对小鼠进行尾静脉注射给药，给药剂量分别为0.1ml/ 只、0.12ml/只、0.14ml/只、0.16ml/只、0.19ml/只，观察14天恢复期内小鼠的体重、进食量、一般外观表现、中毒症状与死亡数。结果表明：5组给药剂量下1组和2组无小鼠死亡；3组4只小鼠死亡2只；4组6只小鼠死亡4只；5组4只小鼠死亡3只；详见表1。
Figure BDA0002822610080000091
表1
半数致死量LD50计算：0.14*0.0625*50＝437.5mg/kg
以上试验证明，在注射给药急性毒性实验中，小鼠有中毒症状和死亡现象，提示5’- 胞苷酸二聚体可能具有较高的注射给药毒性，半数致死量为437.5mg/kg。
一种5’-胞苷酸衍生物的检测实施例
实施例9
检测波长的确定：取实施例4制备的5’-胞苷酸二聚体，依据紫外分光光度法扫描5’-胞苷酸二聚体紫外光谱，分别用纯化水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液对其溶解，结果图 4-9，根据检测结果分析5’-胞苷酸二聚体在波长为273.8nm-279.8nm范围出现较强的吸收峰；确定5’-胞苷酸二聚体在波长为276nm有特征吸收峰。因此在利用高效液相色谱法检测5’-胞苷酸二聚体含量时，最佳的检测波长为276nm.
5′-胞苷酸二聚体的纯度检测：
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填充剂
流动相：磷酸盐缓冲液为A相(取0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5，得到四丁基铵溶液；将0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与四丁基铵溶液体积比1:1混合，得到磷酸盐缓冲液)，甲醇为B相；
梯度洗脱条件：
0-5min,A相95％，B相5％；
5-12min,A相95→90％，B相5→10％；
12-25min，A相90→80％，B相10→20％；
25-25.01min，A相80→95％，B相20→5％；
25.01-35min，A相95％，B相5％。
将5′-胞苷酸二聚体加入到流动相中溶解，按照每1ml流动相中含5′-胞苷酸二聚体 2.5mg，配制成待测液；水做空白溶液；
将流动相、待测液、空白溶液三组样品送入液相色谱仪中进行检测，每组进样体积为 10μl，色谱柱温度为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长设定为276nm。检测结果如图10所示。
实施例10
胞二磷胆碱中5′-胞苷酸二聚体的含量检测：
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填充剂
流动相：磷酸盐缓冲液为A相(取0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5，得到四丁基铵溶液；将0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与四丁基铵溶液体积比1:1混合，得到磷酸盐缓冲液)，甲醇为B相；
梯度洗脱条件：
0-5min,A相95％，B相5％；
5-12min,A相95→90％，B相5→10％；
12-25min，A相90→80％，B相10→20％；
25-25.01min，A相80→95％，B相20→5％；
25.01-35min，A相95％，B相5％。
将胞二磷胆碱加入到流动相中溶解，按照每1ml流动相中含胞二磷胆碱2.5mg，配制成待测液；水做空白溶液；
将流动相、待测液、空白溶液三组样品送入液相色谱仪中进行检测，每组进样体积为10μl，色谱柱温度为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长设定为276nm。检测结果如图11 所示。
实施例11
胞磷胆碱钠中5′-胞苷酸二聚体的含量检测
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填充剂
流动相：磷酸盐缓冲液为A相(取0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5，得到四丁基铵溶液；将0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与四丁基铵溶液体积比1:1混合，得到磷酸盐缓冲液)，甲醇为B相；
梯度洗脱条件：
0-5min,A相95％，B相5％；
5-12min,A相95→90％，B相5→10％；
12-25min，A相90→80％，B相10→20％；
25-25.01min，A相80→95％，B相20→5％；
25.01-35min，A相95％，B相5％。
将胞磷胆碱钠加入到流动相中溶解，按照每1ml流动相中含胞磷胆碱钠2.5mg，配制成待测液；水做空白溶液；
将流动相、待测液、空白溶液三组样品送入液相色谱仪中进行检测，每组进样体积为 10μl，色谱柱温度为37℃，流速为1.0ml/min，检测波长设定为276nm。检测结果如图12所示。
实施例12
胞二磷胆碱注射剂中5′-胞苷酸二聚体的含量检测
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填充剂
流动相：磷酸盐缓冲液为A相(取0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5，得到四丁基铵溶液；将0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与四丁基铵溶液体积比1:1混合，得到磷酸盐缓冲液)，甲醇为B相；A相与B相体积比为95:5；
将胞二磷胆碱注射剂加入到流动相中溶解，按照每1ml流动相中含胞二磷胆碱注射剂 2.5mg，配制成待测液；水做空白溶液；
将流动相、待测液、空白溶液三组样品送入液相色谱仪中进行检测，每组进样体积为 10μl，色谱柱温度为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长设定为276nm。检测结果如图13所示。
实施例13
胞磷胆碱钠注射剂中5′-胞苷酸二聚体的含量检测
色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填充剂
流动相：磷酸盐缓冲液为A相(取0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5，得到四丁基铵溶液；将0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液与四丁基铵溶液体积比1:1混合，得到磷酸盐缓冲液)，甲醇为B相；A相与B相体积比为95:5；
将胞磷胆碱钠注射剂加入到流动相中溶解，按照每1ml流动相中含胞磷胆碱钠注射剂 2.5mg，配制成待测液；水做空白溶液；
将流动相、待测液、空白溶液三组样品送入液相色谱仪中进行检测，每组进样体积为 10μl，色谱柱温度为33℃，流速为1.0ml/min，检测波长设定为276nm。检测结果如图14所示。
结果分析：由图10“5′-胞苷酸二聚体的纯度检测”高效液相色谱图；根据波峰面积使用面积归一法计(测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率)算得，5′-胞苷酸二聚体的纯度为98.7％，因此本发明提供的制备方法制备的5′-胞苷酸二聚体具有较高纯度。图11-14，分别为胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂中5’-胞苷酸二聚体含量检测的高效液相色谱图，根据5′-胞苷酸二聚体的特征吸收峰峰面积计算得到；
图11：胞二磷胆碱中的5′-胞苷酸二聚体含量为0.83％；
图12：胞磷胆碱钠中的5′-胞苷酸二聚体含量为2.70％；
图13：胞二磷胆碱注射剂中的5′-胞苷酸二聚体含量为0.59％；
图14：胞磷胆碱钠注射剂中的5′-胞苷酸二聚体含量为1.85％。
由以上计算结果可知，胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠及其制成的注射剂均含有不同数量的5′-胞苷酸二聚体，且胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠制成的注射剂中5′-胞苷酸二聚体含量相比胞二磷胆碱、胞磷胆碱钠原料中的含量较高，因此其注射给药的安全风险升高。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种5’-胞苷酸衍生物，其特征在于；所述5’-胞苷酸衍生物为5’-胞苷酸二聚体。
2.根据权利要求1所述的一种5’-胞苷酸衍生物，其特征在于；所述5’-胞苷酸二聚体的化学结构式如下；
Figure FDA0002822610070000011
3.根据权利要求1所述的一种5’-胞苷酸衍生物，其特征在于；所述5’-胞苷酸二聚体主要由5’-胞苷酸、三乙胺、催化剂、溶剂反应制得。
4.根据权利要求3所述的一种5’-胞苷酸衍生物，其特征在于：所述催化剂为二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
5.根据权利要求3所述的一种5’-胞苷酸衍生物，其特征在于：所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯中的任意一种。
6.一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤；
S1.将5’-胞苷酸溶解于溶剂中，缓慢滴加三乙胺溶液，加入催化剂，搅拌，升温至97-105℃，反应，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于无水乙醇溶液中，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，搅拌，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，搅拌，析晶，抽滤，温度为30-35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体。
7.根据权利要求6所述的一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤；
S1.将5’-胞苷酸溶解于溶剂中，缓慢滴加三乙胺溶液，滴加速度为0.1-0.5ml/min，加入催化剂，搅拌，升温至97-105℃，反应18-72h，TLC检测反应进程，原料荧光点消失即为反应终止，减压抽滤，得到中间产物A；
S2.将中间产物A溶于无水乙醇溶液中，搅拌6-8h，抽滤得到中间产物B；将中间产物B溶于甲醇溶液中，中间产物B与甲醇溶液的体积比为1:1，搅拌2-3h，抽滤，向滤液中滴加乙酸乙酯，搅拌，析晶3-4h，抽滤，温度为30-35℃，真空干燥，得到产品5’-胞苷酸二聚体。
8.根据权利要求7所述的一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1:1。
9.一种5’-胞苷酸衍生物在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用，其特征在于：利用高效液相色谱检测法检测胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的5’-胞苷酸衍生物含量；所述高效液相色谱检测法检测条件为：
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为33-37℃；
流动相以磷酸盐缓冲液为A相，以甲醇为B相；
检测波长为276nm；
流速为1ml/min；进样体积为10μl；
梯度洗脱条件为：
0-5min,A相95％，B相5％；
5-12min,A相95→90％，B相5→10％；
12-25min，A相90→80％，B相10→20％；
25-25.01min，A相80→95％，B相20→5％；
25.01-35min，A相95％，B相5％。
10.根据权利要求9所述的一种5’-胞苷酸衍生物一种5’-胞苷酸衍生物在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液由0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液和四丁基铵溶液体积比1:1混合，所述四丁基铵溶液是0.01mol/L四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节pH值至4.5得到。
CN202011441951.4A 2020-12-08 2020-12-08 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用 Active CN112521436B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011441951.4A CN112521436B (zh) 2020-12-08 2020-12-08 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011441951.4A CN112521436B (zh) 2020-12-08 2020-12-08 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112521436A true CN112521436A (zh) 2021-03-19
CN112521436B CN112521436B (zh) 2022-09-16

Family

ID=74999787

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011441951.4A Active CN112521436B (zh) 2020-12-08 2020-12-08 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112521436B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL28348A (en) * 1966-08-08 1971-11-29 Upjohn Co Ara-cytidine phosphates,oligomers thereof and their preparation
US3787392A (en) * 1970-12-02 1974-01-22 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the preparation of nucleoside diphosphate esters
WO2007030227A2 (en) * 2005-07-29 2007-03-15 The Board Of Governors For Higher Education, Modified oligonucleotides containing diphosphodiester internucleotide linkages
WO2008104408A2 (en) * 2007-02-27 2008-09-04 K. U. Leuven Research & Development Phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
CN102952167A (zh) * 2012-11-29 2013-03-06 南京工业大学 胞苷5’-磷酸二钠的溶析结晶方法
CN105732752A (zh) * 2016-03-18 2016-07-06 新乡学院 一种胞二磷胆碱及其合成方法
CN110174482A (zh) * 2019-07-08 2019-08-27 苏州天马药业有限公司 一种同时测定胞磷胆碱钠及九种有关物质的uplc分析方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL28348A (en) * 1966-08-08 1971-11-29 Upjohn Co Ara-cytidine phosphates,oligomers thereof and their preparation
US3787392A (en) * 1970-12-02 1974-01-22 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the preparation of nucleoside diphosphate esters
WO2007030227A2 (en) * 2005-07-29 2007-03-15 The Board Of Governors For Higher Education, Modified oligonucleotides containing diphosphodiester internucleotide linkages
WO2008104408A2 (en) * 2007-02-27 2008-09-04 K. U. Leuven Research & Development Phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
CN102952167A (zh) * 2012-11-29 2013-03-06 南京工业大学 胞苷5’-磷酸二钠的溶析结晶方法
CN105732752A (zh) * 2016-03-18 2016-07-06 新乡学院 一种胞二磷胆碱及其合成方法
CN110174482A (zh) * 2019-07-08 2019-08-27 苏州天马药业有限公司 一种同时测定胞磷胆碱钠及九种有关物质的uplc分析方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANAIS DEPAIX, ET AL.: "One-Pot Synthesis of Nucleotides and Conjugates in Aqueous Medium", 《EUROPEAN JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY》 *
GOZEN ERTEM, ET AL.: "Synthesis of RNA oligomers on heterogeneous templates", 《NATURE》 *
HYOJIN KO, ET AL.: "Structure-Activity Relationship of Uridine 5’-Diphosphoglucose Analogues as Agonists of the Human P2Y14 Receptor", 《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *
KONG-JIANG WANG, ET AL.: "Effect of Inhibitors on the Montmorillonite Clay-catalyzed Formation of RNA: Studies on the Reaction Pathway", 《ORIGINS OF LIFE AND EVOLUTION OF THE BIOSPHERE》 *
何晓艳等: "胞磷胆碱钠注射液中有关物质研究", 《中国药师》 *
国家药典委员会编: "《中国药典》", 31 January 2010, 中国医药科技出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112521436B (zh) 2022-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102702293A (zh) 用于肿瘤治疗的水溶性铂配合物及其制备方法
CN113171371B (zh) 一种抑制乙型肝炎病毒基因表达的rna抑制剂及其应用
Nagorny et al. Chiral phosphoric acid catalyzed stereoselective spiroketalizations
CN113433242B (zh) Molnupiravir含量及有关物质的检测方法
CN108517033A (zh) 一种新型双重脑靶向脂质材料及其在药物传递系统的应用
CN1869683A (zh) 银杏内酯原料的指纹图谱质量检测方法
CN102283854A (zh) 一种麦角甾苷的应用
CN112521436B (zh) 一种5’-胞苷酸衍生物的制备方法及在胞磷胆碱、胞磷胆碱钠及其注射剂中的应用
CN111122724B (zh) 阿卡波糖及有关物质的分析方法
Carr et al. Simultaneous quantification of procainamide and N-acetylprocainamide with high-performance liquid chromatography
Horecker et al. A comparison of C14-labeling patterns in deoxyribose and ribose in mammalian cells
CN114113385B (zh) β-烟酰胺单核酸含量和有关物质的测定方法
CN102818867B (zh) 一种鉴别注射用核糖核酸ⅱ的方法
CN110198713A (zh) 一种银杏提取物药用原料及其制备方法
Bennett et al. 2'-0-(α-Methoxyethyl) nucleoside 5'-diphosphates as single-addition substrates in the synthesis of specific oligoribonucleotides with polynucleotide phosphorylase
CN114057709A (zh) 一种葛根素酸酯衍生物及其制备方法与应用
CN110174482B (zh) 一种同时测定胞磷胆碱钠及九种有关物质的uplc分析方法
CN110117630A (zh) 一种右旋糖酐蔗糖酶的糖基化应用以及将其用于制备咖啡酸苯乙酯糖苷的方法
CN112245391A (zh) 抗肿瘤脂质组合物
JP2000078956A (ja) 飲食物および薬品
CN112250728A (zh) 一种抗病毒熊果酸衍生物及其制备方法
CN102670698B (zh) 千斤拔提取物在制备防治糖尿病药物中的应用
CN105949146A (zh) 截短侧耳素-替唑尼特杂合药物及其制备方法
CN112457285B (zh) 一种萘并吡喃酮类富集物的制备方法
CN117924395A (zh) 具式i结构的胞磷胆碱钠杂质的制备、分离检测方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zhang Heng

Inventor after: Zhou Yan

Inventor after: Yang Wenji

Inventor before: Zhang Heng

Inventor before: Qi Feng

Inventor before: Zhou Yan

Inventor before: Yang Wenji

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant