CN112494607A - 一种预防和治疗脑卒中的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物组合物，具体涉及一种预防和治疗脑卒中的药物组合物及其应用。药物组合物的药材原料由灯盏花、天麻、三七和水蛭组成，本药物组合物可通过口服发挥其抗凝、抗血栓及抗缺氧等功效，能有效延长局灶永久性脑缺血小鼠的生存期、延长双侧颈总动脉结扎致全脑缺血小鼠的耐缺氧时间，对缺血性脑卒中的防治及改善后遗症、降低复发率具有潜在的临床价值。组方药物协同增效，扬长避短，毒副作用少，具有良好的开发应用前景。

Description

一种预防和治疗脑卒中的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于中医药技术领域，涉及一种药物组合物，具体涉及一种预防和治疗脑卒中的药物组合物及其应用。

背景技术

脑卒中，俗称中风，分出血性中风和缺血性中风，临床75％以上为缺血性中风，即脑梗塞，主要由多种因素引发脑供血不足或供血障碍，而出现脑缺血缺氧性坏死。脑动脉粥样硬化和血栓形成是该疾病发生的主要病理基础，脑血管管腔的狭窄及痉挛，血液的聚集性增强，血液粘稠度增高，血流动力学变化等都可能造成脑动脉供血不足，最终发为脑卒中。脑卒中是导致世界人口死亡的三大疾病之一，是中老年人的常见病和多发病，致死致残率极高。

脑卒中发生的急性期，即前6h，疏通血管、保护脑细胞、恢复发病区域供血、减少和阻止脑组织进一步的受损和扩大，是减少和减轻该病致死致残的关键窗口期。但对多数患者而言，由于病情的复杂性，导致窗口期错过或者治疗效果有限。因此，预防该病的发生和后遗症康复治疗尤为重要。

中药制剂预防和治疗脑卒中研究已取得了实质性进展，并以其疗效好、不良反应小等特点在临床应用日益广泛。有研究表明，三七总皂苷、灯盏花素、川芎嗪、银杏内酯、葛根素、丹参、红花、丹红及脉络宁等注射剂，可以显著改善错过溶栓关键窗口期的卒中患者的症状，并能降低出血和复发的风险，尤其适合于轻、中型急性脑/心梗的治疗及其促进康复期的功能恢复。尽管治疗用中药制剂种类繁多，临床应用也积淀了丰富经验，但针对脑梗患者临床症状的复杂性，各药物在临床应用中仍存在不同程度的缺陷，现有药物还远远不能满足临床用药需求。并且现有的预防和治疗脑卒中的中药大多是以中药注射剂的形式应用于临床，而中药注射剂临床不良反应的日益增加以及患者依从性的影响、国家政策对中药注射剂的严格限制客观存在，有必要开发更安全有效的口服中药口服制剂以取代注射剂，保障广大群众用药的安全性和有效性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，本药物组合物可通过口服发挥其抗凝、抗血栓及抗缺氧等功效，能有效预防缺血性脑卒中的发生和治疗脑卒中后遗症，用以解决口服的脑卒中药物治疗效果不佳的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：

一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，所述药物组合物的药材原料由灯盏花、天麻、三七和水蛭组成。

采用上述技术方案，技术原理以及有益效果如下：灯盏花为本药物组合物君药，天麻作为臣药，三七作为佐药，水蛭作为使药，天麻、三七和水蛭协同增强灯盏花改善脑循环和治疗脑卒中的效果。本发明中各药物虽然均在预防和治疗脑卒中临床上有应用，但通过发明人大量研究发现每味药单用均存在一定程度的缺陷和不足，但将四种药物配伍到一起，可以取长补短、协同增效。经实验研究(详见实验例)，发明人发现灯盏花提取物对小鼠凝血时间的延长效果不佳，对急性脑缺血的保护效果不佳，因此灯盏花不能作为一种全能的治疗脑卒中的药物进行临床应用。灯盏花的上述不足并不能通过增加用药量来克服，过高的用药量会导致药物吸收的抑制。发明人对大量候选药材进行了筛选和研究，研究了灯盏花和其他药材配伍的效果，大部分药材均不能克服灯盏花存在的上述缺陷。而天麻、三七和水蛭这三种药材和灯盏花共用却显示了良好的抗凝、抗血栓及抗脑缺血缺氧及对脑梗模型的保护作用。本方案中在灯盏花中加入了天麻、三七和水蛭三种成分，可以克服灯盏花在上述几个方面的不足，使得本药物组合物在抗凝血、抗血栓形成和抗脑缺血缺氧损伤三个方面均具有较好的效果，是一种全面的预防和治疗脑卒中的药物组合物。

实验证明本品可通过经口给药，实现抗凝血、抗血栓形成和抗脑缺血缺氧损伤的功效。除此之外，本品每日剂量经安全性试验表明，组合物经口给药毒性小、安全性高。小鼠一日给药剂量为60.8g/kg(相当于临床拟用量的907倍)时，未见动物发生明显毒性反应。小鼠以临床拟用剂量的112倍剂量进行连续14天重复给药毒性试验，除血糖水平有所下降外，未见一般状况、肝肾功能及主要脏器系数发生与给药相关的毒性变化。

综上所述，本方案提供一种预防和治疗脑卒中(脑梗塞)的药物组合物，其由灯盏花、天麻、三七和水蛭四味药组成。组方药物协同增效，扬长避短，毒副作用少，具有良好的开发应用价值。本药物组合物可通过口服发挥其抗凝、抗血栓及抗缺氧等功效，能有效预防缺血性脑卒中的发生和治疗脑卒中后遗症。对于轻、中型急性脑梗，本口服中药口服制剂有望取代注射剂，进而保障广大群众用药的安全性和有效性。

进一步，灯盏花、天麻、三七和水蛭的质量比为4:3:2:1。

采用上述技术方案，上述比例的药物组合物可获得最佳治疗效果。研究表明，上述比例的组合物，小鼠对全部药效试验均有效的最低有效剂量为0.75g/kg。

进一步，所述药物组合物由如下方法制备而成：对灯盏花、天麻和三七进行提取操作，分别获得灯盏花提取物、天麻提取物和三七提取物；将水蛭粉碎获得水蛭粉；将灯盏花提取物、天麻提取物、三七提取物和水蛭粉混合，获得药物组合物。

采用上述技术方案，通过提取操作将灯盏花、天麻和三七中的有效成分富集，实现增加药效的作用。

进一步，使用水为溶剂对灯盏花、天麻和三七进行提取操作。

采用上述技术方案，使用水为溶剂绿色环保，相对于使用有机溶剂提取，避免了毒性物质的引入。

进一步，所述药物组合物的剂型为胶囊剂。

采用上述技术方案，胶囊剂为常规剂型便于服用。

进一步，所述药物组合物的剂型为片剂。

采用上述技术方案，片剂为常规剂型便于服用。

进一步，所述药物组合物的剂量为每日6-15g。

采用上述技术方案，根据文献公式Db＝Da.Rab(Rab＝0.081)结合中药临床用药实际，建议人体每日拟用剂量为生药6-18g。

进一步，药物组合物作为抗凝剂的应用。

采用上述技术方案，本药物组合物以0.38、0.76、1.50g/kg剂量连续给药5天，能延长断尾小鼠的出血时间，并能显著延长小鼠的凝血时间，说明药物组合物具有抗凝功能，可作为抗凝剂应用于脑卒中的预防和治疗中。在本方案中，抗凝剂是指能够延长出血时间或者延长凝血时间的药物。

进一步，药物组合物作为抗血栓药物的应用。

采用上述技术方案，本药物组合物以0.38、0.76、1.50g/kg的剂量连续灌胃给药5天，均能明显抑制角叉菜胶诱导小鼠的尾部血栓形成，明显降低胶原-肾上腺素诱导血栓形成小鼠的死亡率。说明本药物组合物对体内血栓形成均有明显对抗作用，可作为抗血栓药物应用于脑卒中的预防和治疗中。在本方案中，抗血栓药物是指能够消除或减小血栓，或者防止血栓形成的药物。

进一步，药物组合物作为抗脑缺血缺氧药物的应用。

采用上述技术方案，本药物组合物以0.38、0.76、1.50g/kg剂量连续给药5天，能够延长双侧颈总动脉结扎致全脑缺血小鼠的耐缺氧时间；连续给药10天，能延长局灶永久性脑缺血小鼠的生存时间。说明本药物组合物对急性脑缺血缺氧有一定保护作用，可作为抗脑缺血缺氧药物应用于脑卒中的预防和治疗中。

在本方案中，脑缺血缺氧是指各种原因引起的脑组织中血液供应不足，进而导致脑组织供氧不足，最终导致相关脑部病变或损伤(脑卒中是导致脑缺血缺氧的原因之一)。引起上述脑部病变的原因和机制包括但不限于：脑在缺氧情况下，糖酵解作用增加，大量丙酮酸被还原成乳酸，细胞内酸中毒发展快且严重。糖酵解时仅产生少量ATP，由于能量来源不足，脑细胞不能维持细胞膜内外的离子浓度差，脑细胞的氧化代谢功能受到损害。本方案的抗脑缺血缺氧药物是指能够防止脑缺血缺氧现象产生，并缓解和治疗脑缺血缺氧造成的脑部损伤的药物。

具体实施方式

实施例1

分别取灯盏花4kg、天麻3kg、三七2kg，分别进行提取操作，对三种药材功效成分的提取方法一致，具体如下：先将药材(灯盏花、天麻或三七)粉碎过40目筛，获得药粉，然后在药粉中加水、加热回流提取3次，每次加5倍量(V/W，即每1kg总药材中加入5L水)，每次提取的时长为2h。每次提取完成之后过滤取滤液(提取液)，合并3次的提取液，浓缩得浸膏，然后浸膏在60℃的条件下减压干燥然后粉碎，分别得三种药材提取物：灯盏花提取物(0.8kg)、天麻提取物(0.45kg)、三七提取物(0.5kg)。另取水蛭1kg，研磨粉碎，过100目筛，得水蛭粉。将上述全部量的灯盏花提取物、天麻提取物、三七提取物和水蛭粉混合均匀，形成四种药材的混合物(对四种药材的混合物取样，并用于后续实验例)，用50％乙醇制粒，40℃减压干燥，粉碎，获得混合药粉。使用混合药粉填装胶囊(每粒0.4g)，得6700粒。推荐服用剂量为：每日服用三次，每次服用2-4粒(相当于每次服用药材3-6g)。

实施例2：

分别取灯盏花4kg、天麻3kg、三七2kg，分别粉碎，过120目筛；另取水蛭1kg，研磨粉碎，过100目筛，得水蛭粉。取以上四种粉末，混合均匀，填装胶囊(0.5g/粒)，得18850粒。推荐服用剂量为：每日服用三次，每次服用4-6粒(相当于每次服用药材2-3g)。

实验例1：抗凝以及抗血栓作用研究

采用实施例1制备的样品，通过对小鼠出、凝血时间测定；角叉菜胶诱导尾血栓形成及胶原-肾上腺素诱导脑血栓形成试验；考察灯盏花、天麻、三七及水蛭合用对抗凝、抗血栓有无协同作用，为组方依据提供试验支撑。

(1)考察抗凝的协同作用

选用18～20g雄性ICR小鼠，分2批进行实验。每批均按体重随机分为10组：溶媒对照；阳性对照阿司匹林30mg/kg、复方丹参(含丹参、三七、冰片)0.48g/kg；灯盏花提取物2.0g/kg；天麻提取物1.5g/kg；三七提取物2.5g/kg；水蛭粉1.0g/kg；组合物0.38、0.75及1.50g/kg；每组12只。组合物选用的是实施例1中四种药材的混合物

各组动物每日分别按剂量经口灌胃给药1次，连续5天，溶媒对照组给予0.5％CMC-Na，容积均为20mL/kg。第1批实验末次给药后30min，将小鼠尾尖5mm处剪断，从出血开始(滤纸上出现血迹)计时，每30秒用滤纸吸去血滴一次，直到出血自然停止(滤纸上无血迹)的时间即为出血时间；第2批实验末次给药后30min，取内径0.5mm、长10cm毛细玻管自小鼠一侧眼球内眦插入球后静脉丛，至血液流入毛细玻管内开始计时，血液注满后将毛细玻管取出平放于桌上，每隔30秒折断二端毛细管约0.5cm，至血凝丝出现为止的时间即为凝血时间。结果见表1。

表1：抗凝协同作用考察

与对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

由表1可见，除1.5g/kg的天麻提取物外，其余给药组均能明显延长小鼠的出血时间；除2.0g/kg的灯盏花提取物及2.5g/kg的三七提取物外，其余给药组均能明显延长小鼠的凝血时间；组合物三剂量均有明显抗凝作用，且有效剂量均低于灯盏花提取物、天麻提取物和三七提取物的剂量，表明灯盏花、天麻、三七及水蛭合用可产生抗凝协同作用。

(2)考察抗血栓的协同作用

选用19～22g雄性ICR小鼠，分2批进行实验。每批均按体重随机分为10组：溶媒对照；阳性对照阿司匹林30mg/kg、复方丹参0.48g/kg；灯盏花提取物2.0g/kg；天麻提取物1.5g/kg；三七总提取物2.5g/kg；水蛭粉1.0g/kg；组合物0.38、0.75及1.50g/kg；每组12只。各组动物每日分别按剂量经口灌胃给药1次，连续5天，溶媒对照组给予0.5％CMC-Na，容积均为20mL/kg。第1批实验末次给药后30min，每鼠按15mg/kg剂量腹腔注射角叉菜胶10mL/kg，造模24h后观察与测量每鼠尾部血栓形成情况，计算各组小鼠的血栓形成率(血栓长/全尾长×100)；第2批实验末次给药后30min，每鼠按0.1mL/10g.bw的剂量静脉注射由胶原蛋白-肾上腺素制成的诱导剂，观察并记录15min内各组动物偏瘫发生率及死亡率。结果见表2。

表2：抗血栓协同作用考察

与对照组比较：*P<0.05，**P<0.01

由表2可见，所有给药组均能明显降低胶原-肾上腺素诱导脑血栓形成小鼠的死亡率；除1.5g/kg天麻提取物外，其余给药组均可明显抑制角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成；组合物三剂量对三种小鼠血栓模型均有明显抑制作用，且有效剂量均低于灯盏花提取物和三七提取物的剂量，表明灯盏花、天麻、三七及水蛭合用可产生抗血栓的协同作用。

实验例2：药物组合物对脑梗模型动物的有效性验证

(1)组合物对线栓致永久性脑缺血小鼠生存期的影响

选择26～30g雄性ICR小鼠，以4％水合氯醛腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，按文献方法行手术分离单侧颈总动脉，插入直径为0.128mm的尼龙线栓，小心推入颈内动脉至感到阻力时停止，此时线栓的头端已堵住大脑中动脉血流。将切口及线栓一起结扎防止脱出，缝合皮肤，即制备成右侧永久性大脑中动脉阻断(PMCAO)模型小鼠；假手术组除不插线外其余均同模型组。将模型动物按体重及手术顺序循环分为7组：模型对照组；阳性对照ASP100mg/k、复方丹参片0.48g/kg组；组合物1.50、0.75、0.38g/kg三剂量组；另设假手术组10只动物。造模后1小时，各组动物按剂量灌胃给药，容积均为20mL/kg。剔除造模后3h行为学评分(0分，无神经缺损症状；1分，左前肢不能完全伸直；2分，向外侧旋转；3分，向左侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失)低于1分、高于3分及造模后3h内死亡的动物(假手术组评分为0)，各组模型小鼠如未能存活至预计时间点，则重新制作模型补足，保证每组纳入试验的成模动物数为12只。造模次日继续给药，1次/d，连续观察10天并记录各组每只小鼠的存活时间，观察期结束仍存活者按10天(240h)计算，按下式计算各组生存延长率。结果见表3。

存活时间＝死亡时间－造模时间

延长率＝(给药组存活时间－模型存活时间)/模型组存活时间*100％

表3对pMCAO小鼠生存时间的影响

与对照组相比较：*P<0.05，**P<0.01

由表3可见，所有给药组治疗给药10天，均能不同程度降低局灶永久性脑缺血小鼠的死亡率、延长生存期，其中以组合物中、高剂量作用为显著，其余给药组仅有作用趋势而无统计学差异(p>0.05)。

(2)对全脑缺血小鼠耐缺氧时间的影响

选择22～24g雄性ICR小鼠72只，分组及给药见表4，每组12只。各组动物每日分别按剂量灌胃给药1次，连续5天，溶媒对照组给予0.5％CMC-Na，容积均为20mL/kg。末次给药后30min，按400mg/kg剂量腹腔注射水合氯醛麻醉动物，15分钟(末次给药45min)后将小鼠仰位固定，行颈部正中切口，分离并结扎双侧颈总动脉，观察记录每鼠呼吸停止的时间为缺氧耐受时间。结果见表4。

表4对全脑缺血小鼠耐缺氧时间的影响

与对照组相比较：*P<0.05；**P<0.01

由表4可见，各给药组均能不同程度延长双侧颈总动脉结扎脑缺血小鼠的耐缺氧时间，其中组合物3剂量组延长作用明显，但无明显剂量依赖性；ASP和复方丹参组仅有作用趋势而无统计学差异(p>0.05)。

实验例3：药物组合物安全性研究

ICR小鼠一日内按最大浓度及最大给药量灌胃给予组合物2次，折合剂量为60.8g/kg(相当于临床拟用量的907倍)，未见动物发生明显毒性反应。

ICR小鼠每天1次以1.9、3.8、7.6g/kg剂量连续14天灌胃给予组合物，除对血糖水平有所下降外，未见一般状况、肝肾功能及主要脏器系数发生与给药相关的毒性变化。本试验未观察到毒性反应的剂量(NOAEL)为7.6g/kg/day，相当于临床拟用量的112倍。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的药材原料由灯盏花、天麻、三七和水蛭组成。

2.根据权利要求1所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，灯盏花、天麻、三七和水蛭的质量比4:3:2:1。

3.根据权利要求2所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由如下方法制备而成：对灯盏花、天麻和三七进行提取操作，分别获得灯盏花提取物、天麻提取物和三七提取物；将水蛭粉碎获得水蛭粉；将灯盏花提取物、天麻提取物、三七提取物和水蛭粉混合，获得药物组合物。

4.根据权利要求3所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，使用水为溶剂对灯盏花、天麻和三七进行提取操作。

5.根据权利要求4所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为胶囊剂。

6.根据权利要求4所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为片剂。

7.根据权利要求4所述的一种预防和治疗脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂量为每日6-15g。

8.根据权利要求1-7中任一项权利要求所述的药物组合物作为抗凝剂的应用。

9.根据权利要求1-7中任一项权利要求所述的药物组合物作为抗血栓药物的应用。

10.根据权利要求1-7中任一项权利要求所述的药物组合物作为抗脑缺血缺氧药物的应用。