CN112494520B - 蛤蚧或其提取物在制备抗抑郁症药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蛤蚧或其提取物在制备抗抑郁症药物中的应用，所述蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧（Gekko gecko Linnaeus）除去内脏后的干燥体，蛤蚧提取物为蛤蚧的乙醇提取物。蛤蚧提取物的提取方法为：取蛤蚧，加入乙醇先浸泡40～80min，再加热进行回流提取40～80min，过滤，滤渣重复进行回流提取多次，最后合并多次提取得到的滤液并进行浓缩回收乙醇即得。本发明首次发现蛤蚧或其提取物具有明显的抗抑郁活性，具有制备预防或治疗抑郁症及其相关疾病的药物制剂的成药潜力，且药物制剂的制备方法简单，成本低，成药经济效益好。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种蛤蚧或其提取物在制备抗抑郁症药物中的应用。
背景技术
抑郁症是一种以情绪低落、兴趣缺乏、睡眠障碍等为主要特征的情感障碍性精神类疾病，具有两高一难的治疗特点（发病率高、复发率高、治愈难）。现阶段用于治疗抑郁症的药物主要为单胺氧化酶抑制剂、单胺氧化酶再摄取抑制剂、三环类药物等，这些药物普遍存在起效慢、有效率低、不良反应多等缺点。中医药典籍有使用中药治疗抑郁症的记载，且民间临床实践中使用中药治疗抑郁症疗效确切、安全性高；现有研究也表明，不少中药材的提取物或中药复方制剂都在抗抑郁方面具有一定的活性，而且，中药具有副作用小、综合治疗能力强等优点，因此，开发高效低毒的抗抑郁中药制剂是当今临床亟需解决的重要问题。
蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧（Gekko gecko Linnaeus）除去内脏的干燥体，性平味咸，归肺、肾经，化学成分主要有氨基酸、脂类、微量元素等，具有补肺益肾、助阳益精、纳气定喘的功效，常用于肺气不足、阳痿遗精、虚喘气促、劳嗽咳血的治疗。现代药理研究表明，蛤蚧提取物具有补肾壮阳、抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老、缓解哮喘、增强免疫功能等作用。如：罗谋伦等人在文章“蛤蚧抗衰老作用的实验研究”中指出，蛤蚧乙醇提取物（GEA）可延长雌雄果蝇平均寿命及半数死亡时间，提高雄雌果蝇飞翔活力及耐寒能力，研究还发现，GEA可延长小鼠缺氧存活时间。蒋兴伟和胡丽娜在文章“蛤蚧乙醇提取液对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响”中的研究表明，蛤蚧乙醇提取液能有效抑制大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡，从而改善大鼠卵巢功能，并可能由此延缓大鼠卵巢的衰老。张胜昌等人在文章“蛤蚧乙醇提取液影响去势大鼠胫骨TGF-β1表达的研究”中表明，蛤蚧乙醇提取液可能诱导骨微环境中TGF-β1表达增加，进而抑制破骨样细胞的生成，有效地预防绝经后骨质疏松的发生。杨帆等人在文章“蛤蚧肽对小鼠免疫功能的调节作用” 中的研究表明，蛤蚧肽对免疫功能低下小鼠的免疫功能具有明显的增强作用。李蕾在其硕士毕业论文“蛤蚧蛋白分离提取及其抗肿瘤分子机制研究”中的研究表明，3kD-20kD蛤蚧蛋白组分可通过调高BAX基因mRNA及蛋白表达水平诱导HepG-2细胞凋亡坏死，通过调高BAX基因mRNA及蛋白表达、降低BCL-2基因mRNA及蛋白表达，改变BAX/BCL-2比值诱导K562细胞凋亡坏死。周烨在其硕士毕业论文“广西蛤蚧对缓解期哮喘小鼠作用机理的研究”中的研究表明，广西蛤蚧可延长哮喘小鼠的引喘潜伏期；广西蛤蚧可降低哮喘小鼠外周血及BALF中EOS数量；广西蛤蚧可降低哮喘小鼠血清中IgE含量，血浆中PAF含量，有效调节血清IL-4/IFN-γ平衡；广西蛤蚧能明显改善哮喘小鼠的肺组织损伤。专利CN101002801B公开了一种增强免疫力的保健食品，该增强免疫力的保健食品是由蛤蚧粉或其乙醇提取物为主要原料制成的，在原料中还可以加入冬虫夏草发酵菌丝粉和薏苡仁；该保健食品可补肺益肾、助阳固精、纳气定喘，具有增强免疫力、抗氧化的功效，适用于免疫力低下、机体衰弱人群。
可见，目前对于蛤蚧的研究也不少，但是现有公开文献中只公开了将蛤蚧在补肺益肾、助阳益精、纳气定喘、抗肿瘤、增强免疫功能等方面使用；暂时还没有将蛤蚧提取物用于治疗抑郁症及其引起的相关疾病的药物，且治疗或抑制抑郁症的药物中也未含有蛤蚧提取物。因此，如何将蛤蚧扩大化使用，使之产生最大的功效，发挥出应有的效能，至今仍是医学医药研究的主攻方向。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛤蚧或其提取物在制备抗抑郁症药物中的应用，本发明首次发现蛤蚧或其提取物具有明显的抗抑郁活性，具有制备预防或治疗抑郁症及其相关疾病的药物制剂的成药潜力，且药物制剂的制备方法简单，成本低，成药经济效益好。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
蛤蚧或其提取物在制备预防/治疗抑郁症的药物、食品或保健品中的应用。
所述蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧除去内脏后的干燥体，蛤蚧提取物为蛤蚧的乙醇提取物。
所述蛤蚧的乙醇提取物，提取方法为：
（1）取蛤蚧，加入4～8倍量体积浓度为85～95%的乙醇先浸泡40～80min，然后加热进行回流提取40～80min，过滤，收集滤液；
（2）滤渣再加入4～8倍量体积浓度为85～95%的乙醇，继续加热进行回流提取40～80min，过滤，收集滤液；
（3）重复提取滤渣1～3次，合并多次提取得到的滤液并进行浓缩回收乙醇，即得。
以上所述的蛤蚧提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的用于预防或治疗抑郁症及其相关疾病的药物制剂。
所述制剂包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。
所述的常规辅料包括淀粉、乳糖、糊精、磷酸钙、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮中一种以上。
本发明的有益效果是：
1、本发明首次发现蛤蚧或蛤蚧提取物具有明显的抗抑郁活性，可将其加入到食品或保健品中起到预防抑郁症的作用；同时，还可以将蛤蚧或蛤蚧提取物制备成预防或治疗抑郁症及其相关疾病的药物制剂，为开发抗抑郁症创新药物提供新的物质基础，具有潜在且巨大的社会效益和经济效益。
2、本发明的蛤蚧提取物提取方法简单、成本低、污染小，有利于节能减排条件下的大规模生产，产业化前景好。
3、本发明分别通过悬尾实验 (tail suspension test，TST)和强迫游泳实验(forced swimming，FST)研究了蛤蚧提取物对小鼠悬尾和强迫游泳的影响，以及通过研究蛤蚧提取物对利血平诱导的抑郁症大鼠行为学、血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的影响等，有力证明了本发明的蛤蚧提取物在抑郁症状上具有明显的抗抑郁活性。
4、本发明的蛤蚧或蛤蚧提取物还具有补肺益肾、助阳益精、纳气定喘等功效，可用于肺气不足、阳痿遗精、虚喘气促、劳嗽咳血等症，可以在用于预防或治疗抑郁症的同时起到治疗其他合并症的效果。
5、蛤蚧可以与其他药材进行配伍组成复方药用于预防或治疗抑郁症，还可以将蛤蚧提取物与辅料混合制成片剂、胶囊或颗粒剂，这些制剂较为方便服用，能单独或者搭配其他药剂服用，通过内服能将药性通过血液快速输送至病症部位进行有效治疗。
具体实施方式
为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。
实施例1 蛤蚧提取物的制备
取蛤蚧1kg，加入6L体积浓度为90%的乙醇先浸泡60min，然后加热进行回流提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L体积浓度为90%的乙醇，继续加热进行回流提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L体积浓度为90%的乙醇，继续加热进行回流提取60min，过滤，收集滤液；合并3次提取液并进行浓缩回收乙醇成膏，即得。
实施例2 蛤蚧提取物的制备
取蛤蚧1kg，加入4L体积浓度为95%的乙醇先浸泡80min，然后加热进行回流提取40min，过滤，收集滤液；滤渣再加入4L体积浓度为95%的乙醇，继续加热进行回流提取40min，过滤，收集滤液；滤渣再加入4L体积浓度为95%的乙醇，继续加热进行回流提取40min，过滤，收集滤液；合并3次提取液并进行浓缩回收乙醇成膏，即得。
实施例3 蛤蚧提取物的制备
取蛤蚧1kg，加入8L体积浓度为85%的乙醇先浸泡40min，然后加热进行回流提取80min，过滤，收集滤液；滤渣再加入8L体积浓度为85%的乙醇，继续加热进行回流提取80min，过滤，收集滤液；滤渣再加入8L体积浓度为85%的乙醇，继续加热进行回流提取80min，过滤，收集滤液；合并3次提取液并进行浓缩回收乙醇成膏，即得。
实施例4 蛤蚧提取物的制备
取蛤蚧1kg，加入8L体积浓度为95%的乙醇先浸泡40min，然后加热进行回流提取80min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L体积浓度为90%的乙醇，继续加热进行回流提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入4L体积浓度为85%的乙醇，继续加热进行回流提取40min，过滤，收集滤液；合并3次提取液并进行浓缩回收乙醇成膏，即得。
实施例5 蛤蚧提取物片剂的制备
【处方】由实施例1的方法制得的蛤蚧提取物（取相当于蛤蚧药材3kg的量）、干淀粉550g；
【制备方法】将所得的蛤蚧提取物、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，压制成1000片，所得的蛤蚧提取物片，每片含蛤蚧药材3g。
以上所述的干淀粉、羧甲基纤维素钠和滑石粉均可在市场上购买得到。
实施例6 蛤蚧提取物胶囊的制备
【处方】由实施例1的方法制得的蛤蚧提取物（取相当于蛤蚧药材3kg的量）、干淀粉550g；
【制备方法】将所得的蛤蚧提取物、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，分装成1000 粒，所得的蛤蚧提取物胶囊，每粒含蛤蚧药材3g。
以上所述的干淀粉、羧甲基纤维素钠和滑石粉均可在市场上购买得到。
实施例7 蛤蚧提取物颗粒剂的制备
【处方】由实施例1的方法制得的蛤蚧提取物（取相当于蛤蚧药材10kg的量）、干淀粉550g；
【制备方法】将所得的蛤蚧提取物、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，分装成1000袋，所得的蛤蚧提取物颗粒，每袋含蛤蚧药材10g。
以上所述的干淀粉、羧甲基纤维素钠和滑石粉均可在市场上购买得到。
药性试验
为了验证本发明蛤蚧提取物的抗抑郁活性，本申请人进行了以下试验：
1、蛤蚧提取物对小鼠悬尾的影响
供试品：所述蛤蚧提取物均是由实施例1中所述方法制备而成。
处理方法：采用雄性昆明小鼠，体重18-22g，每组10只。分别设置对照组，阳性组（氟西汀10 mg.kg-1），蛤蚧提取物高、中、低剂量组（分别相当于蛤蚧药材12、6、3g.kg-1）。对照组给予等量的蒸馏水，各组均连续灌胃给药10d，末次给药1h后测试。将单个小鼠在距尾尖部约2cm处用医用胶布固定在悬尾箱（长30cm×宽30cm×高25cm）上部支架上，使其成倒挂状态，头部离箱底约5cm。悬挂6 min，记录后4 min内累计不动的时间（不动状态即小鼠停止挣扎不动或无任何活动）。
结果：如表1所示，与对照组相比，灌胃给予蛤蚧提取物10d后，高、中、低剂量组均可显著缩短小鼠悬尾不动时间，差异有统计学意义（*P＜0.05）。
2、蛤蚧提取物对小鼠强迫游泳的影响
供试品：所述蛤蚧提取物均是由实施例1中所述方法制备而成。
处理方法：采用雄性昆明小鼠，体重18-22 g，每组10只。分别设置对照组，阳性组（氟西汀10mg.kg-1），蛤蚧提取物高、中、低剂量组（分别相当于蛤蚧药材12、6、3g.kg-1）。对照组给予等量的蒸馏水，各组均连续灌胃给药10d，末次给药1h后测试。将小鼠单独放入缸内水深 10cm的圆柱形玻璃缸中（高20cm、直径14cm），水温 25℃±2℃，从小鼠进入水面后计时6min，记录后4min内游泳累计不动的时间（指小鼠在水中停止挣扎或显示漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面）。
结果：如表2所示，与对照组相比，灌胃给予蛤蚧提取物10d后，高、中剂量组均可显著缩短小鼠游泳不动时间（*P＜0.05）。
3、蛤蚧提取物对利血平引起的抑郁症大鼠的影响
供试品：所述蛤蚧提取物均是由实施例1中所述方法制备而成。
处理方法：雄性SD大鼠50只，体重180-220g，喂养适应1周后，按空腹体重随机分为5组，即对照组、模型组、阳性组、蛤蚧提取物高剂量组、蛤蚧提取物低剂量组，每组10只。对照组大鼠每天腹腔注射生理盐水0.5mL.kg-1，其余各组大鼠每天腹腔注射利血平0.5mg.kg-1造模，连续注射10天；自第一天开始造模后开始，注射完生理盐水或利血平后按照以下给药方式灌胃给药：阳性组给予氟西汀1.8mg.kg-1，蛤蚧提取物高剂量组给予相当于蛤蚧药材12g.kg-1的蛤蚧提取物，蛤蚧提取物低剂量组给予相当于蛤蚧药材6g.kg-1的蛤蚧提取物，对照组、模型组给予同等体积的蒸馏水，每天1次。
自造模后，每天观察各组大鼠行为学情况：记录各组大鼠上睑下垂、运动抑制等情况。上睑下垂观察时，将大鼠放在支架上，观察大鼠眼睑不能睁开1/2的动物只数，计算对抗率，对抗率=(1-上睑下垂大鼠／组内动物总数)×100％；运动抑制观察时，将动物放于直径40cm的圆形白板的中心位置观察30s，观察不同组中大鼠呆在圈内的时间。
末次给药后1h，于大鼠腹主动脉取血，离心取血清，检测血清中5-HT、DA、MAO、IL-6、TNF-α的水平，观察蛤蚧提取物对利血平诱导大鼠抑郁症血清神经递质及炎症因子的影响。取大脑前额皮层，匀浆，离心取上清，检测前额皮层中MAO、IL-6、 TNF-α的水平，观察蛤蚧提取物对利血平诱导大鼠抑郁症前额皮层中神经递质及炎症因子的影响。
结果：（1）蛤蚧提取物对利血平诱导的抑郁症大鼠行为学的影响
如表3所示，造模后第4天，对照组大鼠没有眼睑下垂现象；模型组有8只大鼠出现眼睑下垂，与对照组相比其对抗率差异有统计学意义（P＜0.01）；蛤蚧提取物高剂量组出现4只大鼠眼睑下垂、低剂量组出现5只大鼠眼睑下垂，与模型组相比其对抗率均有所升高。如表4所示，造模后第4天，与对照组相比，模型组大鼠在圈内保留时间显著增加（##P＜0.01）；与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组在圈内保留时间显著减少（*P＜0.05）。
（2）蛤蚧提取物对利血平诱导的抑郁症大鼠血清神经递质及炎症因子的影响
如表5所示，与对照组相比，模型组大鼠血清中5-HT、DA的水平明显降低（#P＜0.05）。与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组大鼠血清中5-HT的水平明显升高（*P＜0.05）；蛤蚧提取物高剂量组大鼠血清中DA的水平明显升高（*P＜0.05），低剂量组没有显著性差异。与对照组相比，模型组大鼠血清中MAO、IL-6的水平明显升高（#P＜0.05）。与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组大鼠血清中MAO、IL-6的水平明显降低（*P＜0.05）。与对照组相比，模型组大鼠血清中TNF-α的水平明显升高（##P＜0.01）。与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组大鼠血清中TNF-α的水平均显著降低（*P＜0.05，**P＜0.01）。与模型组相比，阳性对照组大鼠血清中5-HT、DA、MAO、IL-6、TNF-α的水平均具有显著性差异（*P＜0.05）。
（3）蛤蚧提取物对利血平诱导的抑郁症大鼠前额皮层神经递质及炎症因子的影响
如表6所示，与对照组相比，模型组大鼠前额皮层中MAO的水平明显升高（#P＜0.05），与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组大鼠前额皮层中MAO的水平明显降低（*P＜0.05）；与对照组相比，模型组大鼠前额皮层中IL-6、TNF-α的水平明显升高（##P＜0.01），与模型组相比，蛤蚧提取物高、低剂量组大鼠前额皮层中IL-6、TNF-α的水平明显降低（*P＜0.05）。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.蛤蚧提取物在制备预防/治疗抑郁症的药物中的应用，所述蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧除去内脏后的干燥体，蛤蚧提取物为蛤蚧的乙醇提取物；所述蛤蚧的乙醇提取物的提取方法为：
（1）取蛤蚧，加入4～8倍量体积浓度为85～95%的乙醇先浸泡40～80min，然后加热进行回流提取40～80min，过滤，收集滤液；
（2）滤渣再加入4～8倍量体积浓度为85～95%的乙醇，继续加热进行回流提取40～80min，过滤，收集滤液；
（3）重复提取滤渣1～3次，合并多次提取得到的滤液并进行浓缩回收乙醇，即得。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，蛤蚧提取物添加常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的用于预防或治疗抑郁症的药物制剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述制剂包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的常规辅料包括淀粉、乳糖、糊精、磷酸钙、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮中一种以上。
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