CN112472737A - 一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药技术领域,具体涉及一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法,本发明提供的治疗前列腺癌的中药组合物包括的原料和质量份数为:防己5‑9份、红景天2‑5份、黄芪2‑5份、桔梗1‑3份、蒲公英1‑3份、金银花1‑3份。本发明提供的治疗前列腺癌的中药组合物能够诱导PC‑3肿瘤细胞自噬,具有显著的PC‑3肿瘤细胞抑制效果,该中药组合物配伍合理、作用机理清晰、治疗成本低、副作用小,能够有效治疗前列腺癌。

Description

一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
技术领域
本发明属于中药技术领域,具体涉及一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法。
背景技术
前列腺癌是恶性肿瘤的一类,常见于老年男性,其发病率在西方一些国家仅次于肺癌,占男性恶性肿瘤的第二位,且发病率也在逐年上升。有资料显示,我国前列腺癌的潜在发生率,在70岁以上人群中高达25%。
随着中药现代化的发展,中药在治疗癌症方面产生了独特的优势。中医药与手术、放疗、化疗等局部杀灭方法最大的不同是强调整体调节,充分调动机体的防御及免疫监视机制,发挥多层次、多环节、多靶点的综合调节作用,从整体调节机体脏腑、经络、阴阳、气血功能,做到“正气内守”,通过自身调节,“泻其有余,补其不足”,达到“阴阳平复”。中药的这种调节作用有可能抑制肿瘤及肿瘤术后亢进的促血管生成因子,恢复其与抑制因子之间的平衡,抑制肿瘤血管生成,从而有助于减少肿瘤组织局部血供,通过缺血、缺氧等饥饿方式限制肿瘤的增殖并阻断其入血扩散的途径,消除术后残留癌细胞生存及转移的环境,消灭残存的癌细胞,防止肿瘤的复发和转移。同时,中药的不良反应相对小,无骨髓毒性,在用药上可保持一定的连续性,在抑制肿瘤血管生成,防止和控制肿瘤转移方面有较大优势。
中国专利申请CN108339041A公开了一种用于治疗前列腺癌的中药,配方中的喜树果直接提取得到的喜树碱有较大的副作用,限制了该中药的使用。
中国专利申请CN109381662A公开了一种治疗前列腺癌的中药组合物及其制备方法,经过对照实验证实了该中药组合物取得了一定的疗效,但所用中药组分过多,且没有进一步探究该中药组合物的作用机制。
发明内容
鉴于现有技术的不足,本发明旨在提供一种配伍合理、作用机理清晰、治疗成本低、副作用小,能够有效治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法。
本发明的技术方案是:
一种治疗前列腺癌的中药组合物,包括以下原料及其质量份数:防己5-8份、红景天2-5份、黄芪2-5份、桔梗1-3份、蒲公英1-3份、金银花1-3份。
进一步地,还包括以下原料及其质量份数:防己6份、红景天4份、黄芪4份、桔梗2份、蒲公英1份、金银花1份。
本发明的另一目的在于提供一种治疗前列腺癌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1防己的处理:将防己粉碎后过100目筛,经超临界CO2萃取,减压浓缩,在所得浓缩物中加入盐酸溶液至pH为3-5,搅拌5min,静置3h,过滤,所得滤液加入氢氧化钠溶液至pH为8-10,搅拌5min,静置3h,过滤,所得滤液经大孔吸附树脂吸附,并用体积分数为80%乙醇溶液洗脱,制得高纯度的防己诺林碱;
S2其他药材的处理:取红景天、黄芪、桔梗、蒲公英和金银花,将各原料混合,粉碎过100目筛,得到混合粉末,将步骤S2得到的混合粉末加入到混合粉末质量3-4倍的乙醇水溶液中浸泡,浸泡后进行超声处理,过滤,得到提取液和滤渣,所得滤渣按照步骤S2对混合粉末的处理步骤重复操作2次,将所有得到的提取液混合;
S3中药组合物的制备:将步骤S1制得的防己防己诺林碱和步骤S2制得的滤出液混合,浓缩,浓缩后烘干,制得该中药组合物。
进一步地,所述步骤S1所述搅拌的搅拌速度均为60r/min。
进一步地,所述步骤S2混合粉末在乙醇水溶液中浸泡的时间为1-2h。
进一步地,所述步骤S2所述乙醇水溶液为体积分数为20-40%的乙醇水溶液。
进一步地,所述步骤S2所述超声处理的时间为15-35min,超声处理的功率为120-150W,超声处理时的温度为50-70℃。
本发明中,防己味苦、性寒,归膀胱、肺经,功效祛风止痛、利水消肿,临床常用于治疗风湿痹痛、水肿脚气、小便不利和湿疹疮毒等症。防己中所含的生物碱类化合物双苄基异喹啉类为其主要的药效物质基础,主要药用成分为粉防己碱和防己诺林碱。临床活性包括抗炎镇痛、抗氧化、免疫调节和抗肿瘤、诱导细胞自噬凋亡等作用。
红景天味甘、苦,性平,归肺、心经。具有益气活血,通脉平喘之功。主要用于气虚血瘀,胸痹心痛,中风偏瘫,倦怠气喘。
黄芪味甘,性微温,归脾、肺经,具有补气固表,托毒排脓,利尿,生肌的功效。
桔梗味苦、辛,性平,具有宣肺,利咽,祛痰,排脓的功效。用于咳嗽痰多,胸闷不畅,咽痛音哑,肺痈吐脓。
蒲公英味苦、甘,寒。主要用于疔疮肿毒,乳痈,瘰疬,目赤,咽痛,肺痈,肠痈,湿热黄疸,热淋涩痛等。
金银花性甘、寒,主治外感风热或温病发热,中暑,热毒血痢,痈肿疔疮,喉痹,多种感染性疾病。
与现有技术相比,本发明取得的有益效果是:
(1)本发明提供的中药组合物配伍合理,该中药组合物由防己、红景天、黄芪、桔梗、蒲公英、金银花制成,其中防己为主药,发挥主要的抗癌作用,其余药材能进一步加强其抗癌效果,具有良好的协同作用,在取得较好的抑制和凋亡前列腺癌细胞的同时,减少副作用的发生。
(2)本发明通过细胞实验证实了该中药组合物对PC-3肿瘤细胞具有显著的抑制效果,并通过对比例的实验证明了该技术方案的不可替代性,本发明提供的中药组合物作为一个整体发挥出了较高的抗癌活性,为进一步开发相关制剂提供了有力基础。
(3)本发明进一步通过58例不同程度的前列腺癌患者病例,验证了该中药组合物确实具有显著的抑制效果,整体有效率达到了80%以上。
(4)本发明通过对防己提取方法的改进,先通过超临界流体萃取药材的有效成分,然后通过酸碱沉降法除去酚类、有机酸等杂质,并经过大孔吸附树脂进一步纯化,能够获得更高纯度的防己诺林碱,经实验证实能够产生更好的治疗效果。
(5)本发明提供的中药组合物制备方法易于操作,所需药材容易获得,具有显著的经济价值和应用前景。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式,将本发明的所述内容做进一步解释。但本发明上述主题的范围不仅限于以下实施例。
实施例1、一种治疗前列腺癌的中药组合物
所述治疗前列腺癌的中药组合物,由以下原料和质量份数制成:防己5份、红景天2份、黄芪2份、桔梗1份、蒲公英1份、金银花1份。
所述治疗前列腺癌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1防己的处理:将防己粉碎后过100目筛,经超临界CO2萃取,控制萃取釜的温度为45℃,萃取釜压力为30MPa,萃取时间为1.5h,减压浓缩,在所得浓缩物中加入盐酸溶液至pH为5,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液加入氢氧化钠溶液至pH为8,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液经大孔吸附树脂(D101-辽源新材料)吸附,并用体积分数为80%乙醇溶液洗脱,制得高纯度的防己诺林碱;
S2其他药材的处理:取红景天、黄芪、桔梗、蒲公英和金银花,将各原料混合,粉碎过100目筛,得到混合粉末,将步骤S2得到的混合粉末加入到混合粉末质量3倍的体积分数为20%乙醇水溶液中浸泡1h,浸泡后进行超声处理,超声处理的时间为15-min,超声处理的功率为120W,超声处理时的温度为50℃,过滤,得到提取液和滤渣,所得滤渣按照步骤S2对混合粉末的处理步骤重复操作2次,将所有得到的提取液混合;
S3中药组合物的制备:将步骤S1制得的防己防己诺林碱和步骤S2制得的滤出液混合,浓缩,浓缩后烘干,制得该中药组合物。
实施例2、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
一种治疗前列腺癌的中药组合物,由以下原料和质量份数组成:防己8份、红景天5份、黄芪5份、桔梗3份、蒲公英3份、金银花3份。
所述治疗前列腺癌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1防己的处理:将防己粉碎后过100目筛,经超临界CO2萃取,控制萃取釜的温度为45℃,萃取釜压力为30MPa,萃取时间为1.5h减压浓缩,在所得浓缩物中加入盐酸溶液至pH为3,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液加入氢氧化钠溶液至pH为8,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液经大孔吸附树脂(D101-辽源新材料)吸附,并用体积分数为80%乙醇溶液洗脱,制得高纯度的防己诺林碱;
S2其他药材的处理:取红景天、黄芪、桔梗、蒲公英和金银花,将各原料混合,粉碎过100目筛,得到混合粉末,将步骤S2得到的混合粉末加入到混合粉末质量3-4倍的体积分数为40%乙醇水溶液中浸泡2h,浸泡后进行超声处理,超声处理的时间为35min,超声处理的功率为150W,超声处理时的温度为70℃,过滤,得到提取液和滤渣,所得滤渣按照步骤S2对混合粉末的处理步骤重复操作2次,将所有得到的提取液混合;
S3中药组合物的制备:将步骤S1制得的防己防己诺林碱和步骤S2制得的滤出液混合,浓缩,浓缩后烘干,制得该中药组合物。
实施例3、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
一种治疗前列腺癌的中药组合物,由以下原料和质量份数组成:防己6份、红景天4份、黄芪4份、桔梗2份、蒲公英1份、金银花1份。
所述治疗前列腺癌的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1防己的处理:将防己粉碎后过100目筛,经超临界CO2萃取,控制萃取釜的温度为45℃,萃取釜压力为30MPa,萃取时间为1.5h减压浓缩,在所得浓缩物中加入盐酸溶液至pH为3,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液加入氢氧化钠溶液至pH为8,搅拌5min,搅拌速度为60r/min,静置3h,过滤,所得滤液经大孔吸附树脂(D101-辽源新材料)吸附,并用体积分数为80%乙醇溶液洗脱,制得高纯度的防己诺林碱;
S2其他药材的处理:取红景天、黄芪、桔梗、蒲公英和金银花,将各原料混合,粉碎过100目筛,得到混合粉末,将步骤S2得到的混合粉末加入到混合粉末质量3-4倍的体积分数为40%乙醇水溶液中浸泡2h,浸泡后进行超声处理,超声处理的时间为25min,超声处理的功率为120W,超声处理时的温度为60℃,过滤,得到提取液和滤渣,所得滤渣按照步骤S2对混合粉末的处理步骤重复操作2次,将所有得到的提取液混合;
S3中药组合物的制备:将步骤S1制得的防己防己诺林碱和步骤S2制得的滤出液混合,浓缩,浓缩后烘干,制得该中药组合物。
对比例1、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
本对比例与实施例3相似,不同之处在于,所述治疗前列腺癌的中药组合物由防己7份、红景天4份、黄芪4份、桔梗2份、蒲公英1份组成。
对比例2、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
本对比例与实施例3相似,不同之处在于,所述治疗前列腺癌的中药组合物由防己7份、红景天4份、黄芪4份、桔梗2份、金银花1份组成。
对比例3、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
本对比例与实施例3相似,不同之处在于,所述治疗前列腺癌的中药组合物由防己9份、桔梗4份、蒲公英3份、金银花3份组成。
对比例4、一种治疗前列腺癌的中药组合物及制备方法
本对比例与实施例3相似,不同之处在于,没有对防己进行步骤S1的特殊处理,而是和红景天、黄芪等其他药材按照步骤S2共同处理。
实验例1、PC-3肿瘤细胞实验
1.实验材料
1.1实验用细胞株:人前列腺癌细胞PC-3(誉驰生物)。
1.2实验药品:本发明实施例1-3和对比例1-3制得的中药组合物,均制成浓度为20mg/ml。
1.3实验方法:MTT比色法。
2.实验具体步骤:
S1:将PC-3细胞用DMEM(普诺赛)和10%FBS(依莱萨生物)于37℃、5%二氧化碳条件下进行培养,在细胞生长到对数期时,收集细胞并弃去培养液,使用PBS(自配)清洗3次,加入3ml0.25%胰蛋白酶(普诺赛)-0.04%EDTA(自配),在37℃消化2min,加入5ml细胞生长培养基(森贝伽),吹打细胞后转入离心管,在1000rpm下离心5min。
S2:将细胞种于96孔培养板中,每孔加入细胞悬液180μl,随后放入细胞培养箱中在37℃、5%二氧化碳的条件下培养。
S3:在细胞生长到60%,加入实验药品,继续培养24h,然后加入20μlMTT溶液(自配),继续培养4h,然后倒去上清液,用吸水纸拍干,每孔加入200μlDMSO(自配),置于摇床低速震荡10min,使结晶物溶解,使用酶联免疫检测仪在490nm的波长处测量各孔的吸光值。
S4:实验还设置了本底和对照孔,每组设有6个复孔。
实验结果的抑制率计算方式为:细胞增殖抑制率%=(对照孔OD值-给药孔OD)/对照孔OD值×100%,实验重复3次取平均数。
3.实验结果
表1PC-3肿瘤细胞实验结果
组别 抑制率%
对照组 0
实施例1 26.62±7.68
实施例2 31.14±8.32
实施例3 32.32±8.64
对比例1 22.85±6.43
对比例2 22.47±7.16
对比例3 23.46±8.35
对比例4 22.25±6.72
由表1可以得出,实施例3为实施例中的最优方案,在浓度为20mg/ml时抑制率最高能达到40.96%,证实了该方案配伍最为合理,通过协同作用能够产生最好的疗效;对比例1-3则对该中药组合物的组成进行不同的改变,对比例1和对比例2分别减少了金银花和蒲公英,对比例3减少了红景天和黄芪(减少的同时都相应增加了其他药材的用量),能够看出本技术方案作为一个整体,在减少其他药材的同时明显降低了抑制效果,同时,通过对比例4的数据可以证实,高纯度的防己提取物确实能够提升整个技术方案的抑制肿瘤细胞的技术效果,本发明技术方案具有不可替代性。
实验的设计思路是:本发明在先已经通过应用抗体芯片及免疫印迹的方法发现了防己中的防己诺林碱体外诱导PC-3细胞自噬的信号通路,并证实了该组分具有的蛋白酶体抑制作用与其诱导肿瘤自噬的关系,看到了其作为治疗前列腺癌的药物应用前景,为进一步加强疗效,组成了该中药组合物,经证实确实取得了显著的疗效,具有广泛的应用前景。
实验例2、临床实验
入组人员:确诊为患有前列腺癌的术后患者共58例,年龄范围50-65岁,来自于院内泌尿外科及相关科室,分为实施例组30例(以实施例3制得的中药组合物制成汤剂,一次100ml,一日两次)、常规组28例(氟他胺片(双益),250mg/片,一日三片,一次一片)。
疗效判断标准:
显著有效:连续用药3个月,与治疗前相比可测病灶的垂直直径的总和减少大于50%,同时期间没有新生病灶;
有效:连续用药3个月,与治疗前相比可测病灶的垂直直径的总和减少小于50%,同时期间没有新生病灶;
无效:症状无改善或有新病灶出现。
实验结果:
表2临床实验结果
组数 入组人数 显著有效人数 有效数 无效数 整体有效率
实施例组 30 18 8 4 86.7%
常规组 28 9 13 6 78.6%
由表2的实验数据可知,经过3个月的治疗,并辅以直肠指检和直肠超声检查,实施例组整体有效率高于常规组,但显著有效人数明显高于常规组,证明其不仅能够有效控制新生病灶的产生,更是能够抑制肿瘤细胞生长,减小可测病灶直径。

Claims (7)

1.一种治疗前列腺癌的中药组合物,其特征在于,包括以下原料及其质量份数:防己5-8份、红景天2-5份、黄芪2-5份、桔梗1-3份、蒲公英1-3份、金银花1-3份。
2.如权利要求1所述治疗前列腺癌的中药组合物,其特征在于,包括以下原料及其质量份数:防己6份、红景天4份、黄芪4份、桔梗2份、蒲公英1份、金银花1份。
3.如权利要求1或2所述治疗前列腺癌的中药组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1防己的处理:将防己粉碎后过100目筛,经超临界CO2萃取,减压浓缩,在所得浓缩物中加入盐酸溶液至pH为3-5,搅拌5min,静置3h,过滤,所得滤液加入氢氧化钠溶液至pH为8-10,搅拌5min,静置3h,过滤,所得滤液经大孔吸附树脂吸附,并用体积分数为80%乙醇溶液洗脱,制得高纯度的防己诺林碱;
S2其他药材的处理:取红景天、黄芪、桔梗、蒲公英和金银花,将各原料混合,粉碎过100目筛,得到混合粉末,将步骤S2得到的混合粉末加入到混合粉末质量3-4倍的乙醇水溶液中浸泡,浸泡后进行超声处理,过滤,得到提取液和滤渣,所得滤渣按照步骤S2对混合粉末的处理步骤重复操作2次,将所有得到的提取液混合;
S3中药组合物的制备:将步骤S1制得的防己防己诺林碱和步骤S2制得的滤出液混合,浓缩,浓缩后烘干,制得该中药组合物。
4.如权利要求3所述中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S1所述搅拌的搅拌速度均为60r/min。
5.如权利要求3所述中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S2混合粉末在乙醇水溶液中浸泡的时间为1-2h。
6.如权利要求3所述中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S2所述乙醇水溶液为体积分数为20-40%的乙醇水溶液。
7.如权利要求3所述中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S2所述超声处理的时间为15-35min,超声处理的功率为120-150W,超声处理时的温度为50-70℃。
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