CN112461964A - 一种银杏内酯的检测方法 - Google Patents
一种银杏内酯的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112461964A CN112461964A CN202011287218.1A CN202011287218A CN112461964A CN 112461964 A CN112461964 A CN 112461964A CN 202011287218 A CN202011287218 A CN 202011287218A CN 112461964 A CN112461964 A CN 112461964A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- detecting
- leaf extract
- ginkgolides
- ginkgo leaf
- bilobalide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229930184727 ginkgolide Natural products 0.000 title claims abstract description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000009429 Ginkgo biloba extract Substances 0.000 claims abstract description 44
- MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N bilobalide Chemical compound O([C@H]1OC2=O)C(=O)[C@H](O)[C@@]11[C@@](C(C)(C)C)(O)C[C@H]3[C@@]21CC(=O)O3 MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N 0.000 claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 117
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 claims description 23
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 23
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 23
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 22
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 13
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 13
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims description 12
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 11
- 229930063422 Bilobalide A Natural products 0.000 claims description 10
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 10
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 10
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- SQOJOAFXDQDRGF-ZMVGXLHTSA-N ginkgolide b Chemical compound O[C@H]([C@]12[C@H](C(C)(C)C)C[C@H]3OC4=O)C(=O)O[C@H]2O[C@]24[C@@]13[C@H](O)[C@@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@]21O SQOJOAFXDQDRGF-ZMVGXLHTSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 4
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- 229940068052 ginkgo biloba extract Drugs 0.000 abstract description 14
- 235000020686 ginkgo biloba extract Nutrition 0.000 abstract description 14
- SQOJOAFXDQDRGF-WJHVHIKBSA-N ginkgolide B Natural products O=C1[C@@H](C)[C@@]2(O)[C@@H]([C@H](O)[C@]34[C@@H]5OC(=O)[C@]23O[C@H]2OC(=O)[C@H](O)[C@@]42[C@H](C(C)(C)C)C5)O1 SQOJOAFXDQDRGF-WJHVHIKBSA-N 0.000 abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 6
- AMOGMTLMADGEOQ-FNZROXQESA-N Ginkgolide C Chemical compound O([C@H]1O2)C(=O)[C@H](O)C31[C@]14[C@@H](O)[C@@H]5OC(=O)[C@@H](C)[C@]5(O)[C@@]12C(=O)O[C@@H]4[C@@H](O)[C@H]3C(C)(C)C AMOGMTLMADGEOQ-FNZROXQESA-N 0.000 abstract description 4
- FPUXKXIZEIDQKW-MFJLLLFKSA-N ginkgolide A Natural products O=C1[C@H](C)[C@@]2(O)[C@@H](O1)C[C@]13[C@@H]4OC(=O)[C@]21O[C@@H]1OC(=O)[C@H](O)[C@]31[C@@H](C(C)(C)C)C4 FPUXKXIZEIDQKW-MFJLLLFKSA-N 0.000 abstract description 4
- AMOGMTLMADGEOQ-DPFZUGDXSA-N ginkgolide C Natural products O=C1[C@@H](C)[C@]2(O)[C@H]([C@H](O)[C@@]34[C@H]5[C@H](O)[C@@H](C(C)(C)C)[C@]63[C@H](O)C(=O)O[C@H]6O[C@@]24C(=O)O5)O1 AMOGMTLMADGEOQ-DPFZUGDXSA-N 0.000 abstract description 4
- FPUXKXIZEIDQKW-VKMVSBOZSA-N ginkgolide-a Chemical compound O[C@H]([C@]12[C@H](C(C)(C)C)C[C@H]3OC4=O)C(=O)O[C@H]2O[C@]24[C@@]13C[C@@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@]21O FPUXKXIZEIDQKW-VKMVSBOZSA-N 0.000 abstract description 4
- SQOJOAFXDQDRGF-MMQTXUMRSA-N ginkgolide-b Chemical compound O[C@H]([C@]12[C@H](C(C)(C)C)C[C@H]3OC4=O)C(=O)O[C@H]2O[C@]24[C@@]13[C@@H](O)[C@@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@]21O SQOJOAFXDQDRGF-MMQTXUMRSA-N 0.000 abstract 1
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 description 8
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- -1 terpene lactones Chemical class 0.000 description 6
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 6
- 241000218628 Ginkgo Species 0.000 description 5
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 4
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 2-O-acetyl-1-O-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000011714 Glycine Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010076533 Glycine Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- POIFMTAKTQCOIW-UHFFFAOYSA-N O.O1CCCC1.C(CC)O Chemical compound O.O1CCCC1.C(CC)O POIFMTAKTQCOIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700023400 Platelet-activating factor receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000030769 platelet activating factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000000956 solid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
Abstract
本发明涉及一种银杏内酯的检测方法，属于复杂样品前处理及药物分析化学领域，具体步骤包括对银杏叶提取物检测前的提取、净化和检测，本发明对银杏叶提取物中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C具有稳定、良好的提取及净化能力，检测结果稳定性好，精确度和准确性明显提升，RSD可小于0.5%。
Description
技术领域
本发明涉及一种银杏内酯的检测方法，属于复杂样品前处理及药物分析化学领域。
背景技术
银杏是一种裸子植物落叶乔木，我国自古以来就有银杏叶入药和食疗的记载。20世纪70年代初在国外特别是欧洲利用银杏叶提取物来治疗心脑血管疾病包括脑血管动脉粥样硬化和中枢外周血流紊乱的研究出现，其药用价值受到了更为广泛的关注。银杏叶提取物的有效成分主要包括黄酮类和萜类内酯类等，其中萜类内酯类为血小板活化因子及甘氨酸受体特异性拮抗剂，具有广泛的药理作用，在预防、治疗心脑血管疾病及保护中枢神经系统方面显示了较好的市场前景。因此，实现对银杏叶提取物中萜类内酯总含量的准确测定是银杏叶制剂质量控制的关键指标之一，其中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C四种成分的总含量则是常用的评价指标。
由于植物自身成分极为复杂，实现对银杏叶提取物所含白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的准确测定必然需要依托一定的分离净化手段。目前常用的前处理方法主要参考《中国药典》，但是在应用的过程中发现，由于前处理相对简单，只依靠乙酸乙酯固液萃取，并不能实现很好的净化效果，检测稳定性也较差，日间RSD的5％～10％左右。同时经过研究发现，该方法中的4次乙酸乙酯萃取并不能将银杏内酯充分萃取，随着萃取遍数的增加，内酯含量持续增加，说明银杏内酯的含量检测结果偏低。目前国内外的研究也一直围绕在银杏内酯的前处理方法上，如引入硅藻土、树脂、固相萃取、结晶等净化手段，但是目前仍然没有对其有较大的改善。
本申请为解决这一难题，将银杏内酯的前处理方法进行一系列的改进，最终使银杏内酯的检测精度和准确性得到明显提升。
发明内容
本发明的目的是提供一种银杏内酯的检测方法，包括检测前的提取、净化步骤和检测步骤，主要用于银杏叶提取物中萜类内酯类的准确定量，尤其是白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C四种成分的含量的准确测定。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种银杏内酯的检测方法，包括以下步骤：
(1)称取银杏叶提取物，并向其中加入90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入pH值为4.8～6.2的10～50mmol/L磷酸盐缓冲溶液形成银杏叶提取物分散液；
(2)向步骤(1)的分散液中加入Merck硅藻土，将其置于振荡器中，在一定的条件下处理30～60min，然后将其转移至滤纸筒中；
(3)将步骤(2)的滤纸筒装入索氏提取装置，以乙酸乙酯为溶剂，在一定温度下索氏抽提0.5～3h，提取结束后将得到的提取液冷却至室温；
(4)将步骤(3)得到的提取液浓缩至固含量大于90％，然后加入50％的甲醇水溶液溶液，在4～10℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液；
(5)将步骤(4)得到的上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测得到各组分的色谱峰。
(6)根据步骤(5)得到的色谱峰，通过峰面积对其中的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B以及银杏内酯C的含量分别进行计算，加和得到银杏内酯的含量。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中90％的甲醇水溶液与银杏叶提取物的体积质量比为1:1～8:1，所述磷酸盐缓冲溶液与银杏叶提取物的体积质量比为20:1～400:1。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(2)中Merck硅藻土与银杏叶提取物的质量比为50:1～500:1。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(2)的处理条件为温度20～60℃、转速50～100rpm。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(3)中乙酸乙酯与银杏叶提取物的体积质量比为400:1～2000:1。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(3)中索氏提取的温度为200～250℃。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(4)中50％甲醇溶液与银杏叶提取物的体积质量比为10:1～200:1。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(5)的检测色谱条件为：选取Eclipse Plus C18、100*4.6mm、3.5μm色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱，蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术效果有：
本发明对银杏叶提取物中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C具有稳定、良好的提取及净化能力；本发明检测结果稳定性好，精度和准确性明显提升，实现了对银杏叶提取物中萜类内酯总含量的准确测定。
银杏叶提取物在90％的甲醇水溶液中溶解后能够在缓冲液中得到充分的扩散；使用pH值为4.8～6.2磷酸缓冲液分散，以使Merck硅藻土能够得到有效的吸附杂质、纯化有效物质。
使用乙酸乙酯进行索氏提取，乙酸乙酯对银杏内酯的选择性较好，索氏的动态提取能够将银杏内酯充分的提取，这是静态吸附解析所不能比拟的。
附图说明
图1是本发明银杏提取物分散液的高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器分析色谱图；
其中，1a、采用本发明步骤(1)处理得到的银杏提取物分散液的高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器分析色谱图，1b、采用本发明步骤(1)～(5)处理得到的银杏提取物分散液的高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器分析色谱图，1c、混合标准品液色谱图(白果内酯浓度为0.524mg/mL、银杏内酯A浓度为0.428mg/mL、银杏内酯B浓度为0.304mg/mL、银杏内酯C浓度为0.070mg/mL)。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明：
一种银杏内酯的检测方法，先对银杏叶提取物进行提取、净化，再对处理得到的提取上清液进行检测。具体包括以下步骤：
(1)称取银杏叶提取物，并向其中加入银杏叶提取物质量1～8倍体积的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入银杏叶提取物质量20～40倍体积的pH值为4.8～6.2的10～50mmol/L磷酸盐缓冲溶液形成银杏叶提取物分散液；
(2)向步骤(1)的分散液中加入银杏叶提取物质量50～500倍的Merck硅藻土，将其置于振荡器中，在30℃、50～100rpm的条件下处理30～60min。然后将其转移至滤纸筒中；
(3)将步骤(2)的滤纸筒装入索氏提取装置，以银杏叶提取物质量400～2000倍体积的乙酸乙酯为溶剂，在200～250℃下索氏抽提0.5～3h，提取结束后将得到的提取液冷却至室温；
(4)将步骤(3)得到的提取液浓缩至固含量大于90％，然后加入银杏叶提取物质量10～200倍体积的50％甲醇水溶液，在4～10℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液；
(5)将步骤(4)得到的上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。其色谱条件为：选取Eclipse Plus C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱，蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。
(6)根据步骤(5)得到色谱峰，对其中的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B以及银杏内酯C的含量分别进行计算后加和得到银杏内酯的含量。
实施例1
称取0.1g银杏叶提取物加入0.5mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入10mL的pH值为5.8的20mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土10g，将其置于振荡器中，在30℃、60rpm的条件下处理30min。然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以100mL乙酸乙酯为溶剂，在250℃下进行索氏抽提1.5h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
实施例2
称取0.1g银杏叶提取物加入1mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入20mL的pH值为4.8的50mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土15g，将其置于振荡器中，在30℃、100rpm的条件下处理60min，然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以150mL乙酸乙酯为溶剂，在200℃下进行索氏抽提3h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入10mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
实施例3
称取0.1g银杏叶提取物加入0.25mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入5mL的pH值为6.2的10mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土5g，将其置于振荡器中，在30℃、100rpm的条件下处理40min，然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以50mL乙酸乙酯为溶剂，在220℃下进行索氏抽提2h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入2.5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
对比例1
按照中国药典的方法进行检测，取银杏叶提取物0.15g，加水10mL，置水浴中温热使溶散，加入2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次(15mL、10mL、10mL、10mL)合并提取液，用5％醋酸钠溶液20mL洗涤，分出醋酸钠液，再用乙酸乙酯10mL洗涤，合并乙酸乙酯液，利用旋转蒸发仪浓缩至干，然后用甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45μm滤膜过滤，收集滤液即得。分别精密吸取对照品溶液5μL、10μL，供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，液相条件为：C18柱，正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84)为流动相，流速0.7mL/min，柱温箱温度30℃。漂移管温度100℃，气体流速2.7L/min。结果如下表所示：
对比例2
精确称取银杏叶提取物0.75g，在磁力搅拌的条件下用乙酸乙酯在40℃下提取3次(分别用150mL、100mL、100mL)，每次10min，合并提取液，利用旋转蒸发仪浓缩至干，样品用甲醇溶解并转移至25mL容量瓶中，最后利用甲醇定容，摇匀，以0.45μm滤膜过滤，收集滤液即得。然后利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为C18柱，流动相流速0.7mL/min，柱温箱温度30℃。蒸发光散射检测器条件：漂移管温度100℃，气体流速2.7L/min。流动相条件：有机相甲醇加水相。结果如下表所示：
对比例3
称取0.1g银杏叶提取物加入0.5mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入10mL pH值为5.8的20mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土10g，将其置于振荡器中，在30℃、60rpm条件下处理30min。然后将其整体转移至层析柱中，用500mL的乙酸乙酯进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至固含量大于90％。此后加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mmol/L，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
对比例4
称取0.1g银杏叶提取物加入0.5mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入10mL pH值为5.8的20mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土10g，将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以100mL乙酸乙酯为溶剂，在250℃下进行索氏提取1.5h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
对比例5
称取0.1g银杏叶提取物加入10mL的pH值为5.8的20mmol/L磷酸盐缓冲溶液，超声处理10min。加入Merck硅藻土10g，将其置于振荡器中，在30℃、60rpm条件下处理30min。然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以100mL乙酸乙酯为溶剂，在250℃下进行索氏提取1.5h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
对比例6
称取0.1g银杏叶提取物加入0.5mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入10mL pH值为5.8的20mmol/L磷酸盐缓冲溶液。加入Merck硅藻土10g，将其置于振荡器中，在30℃、60rpm条件下处理30min。然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，以100mL乙酸乙酯为溶剂，在250℃下进行索氏提取1.5h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用尼龙材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
对比例7
称取0.1g银杏叶提取物加入0.5mL的90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入10mL纯水，利用盐酸调节pH至5。加入Merck硅藻土10g，将其置于振荡器中，在30℃、60rpm条件下处理30min。然后将其整体转移至滤纸筒中。此后将滤纸筒装入索氏提取装置，在250℃下进行索氏提取1.5h，提取结束后冷却至室温，然后浓缩至固含量大于90％。加入5mL 50％的甲醇水溶液溶液，在4℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液。将上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测。液相条件为：C18(100*4.6mm，3.5μm)色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱。蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。结果如下表所示：
各实施例及对照例的银杏内酯含量的RSD结果对比见下表：
如上表所示：本发明检测方法的检测稳定、精确度和准确性较中国药典方法及其他方法得到了显著地提升，检测结果的RSD均小于0.5％，实现了对银杏叶提取物中萜类内酯总含量的准确测定。
Claims (8)
1.一种银杏内酯的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取银杏叶提取物，并向其中加入90%的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入pH值为4.8～6.2的10～50mmol/L磷酸盐缓冲溶液形成银杏叶提取物分散液；
（2）向步骤（1）的分散液中加入Merck硅藻土，将其置于振荡器中，在一定的条件下处理30～60min，然后将其转移至滤纸筒中；
（3）将步骤（2）的滤纸筒装入索氏提取装置，以乙酸乙酯为溶剂，在一定温度下索氏抽提0.5～3h，提取结束后将得到的提取液冷却至室温；
（4）将步骤（3）得到的提取液浓缩至固含量大于90%，然后加入50%的甲醇水溶液溶液，在4～10℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液；
（5）将步骤（4）得到的上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测得到各组分的色谱峰；
（6）根据步骤（5）得到的色谱峰，通过峰面积对其中的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B以及银杏内酯C的含量分别进行计算，加和得到银杏内酯的含量。
2.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中90%的甲醇水溶液与银杏叶提取物的体积质量比为1:1～8:1，所述磷酸盐缓冲溶液与银杏叶提取物的体积质量比为20:1～400:1。
3.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中Merck硅藻土与银杏叶提取物的质量比为50:1～500:1。
4.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）的处理条件为温度20～60℃、转速50～100rpm。
5.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中乙酸乙酯与银杏叶提取物的体积质量比为400:1～2000:1。
6.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中索氏提取的温度为200～250℃。
7.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中50%甲醇溶液与银杏叶提取物的体积质量比为10:1～200:1。
8.根据权利要求1所述的一种银杏内酯的检测方法，其特征在于：所述步骤（5）的检测色谱条件为：选取Eclipse Plus C18、100*4.6mm、3.5μm色谱柱，柱温40℃，流动相为甲醇和水，进行梯度洗脱，蒸发光散射器的漂移管稳定设定为110℃，气体流量为3.0L/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011287218.1A CN112461964A (zh) | 2020-11-17 | 2020-11-17 | 一种银杏内酯的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011287218.1A CN112461964A (zh) | 2020-11-17 | 2020-11-17 | 一种银杏内酯的检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112461964A true CN112461964A (zh) | 2021-03-09 |
Family
ID=74837139
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011287218.1A Pending CN112461964A (zh) | 2020-11-17 | 2020-11-17 | 一种银杏内酯的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112461964A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101156893A (zh) * | 2005-02-07 | 2008-04-09 | 贵阳云岩西创药物科技开发有限公司 | 杏丹注射剂的质量控制方法 |
| CN104034826A (zh) * | 2014-07-08 | 2014-09-10 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种银杏叶提取物中萜类内酯的检测方法 |
| CN105372338A (zh) * | 2014-08-08 | 2016-03-02 | 南京中科药业有限公司 | 复方银灵通胶囊的质量检测方法 |
-
2020
- 2020-11-17 CN CN202011287218.1A patent/CN112461964A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101156893A (zh) * | 2005-02-07 | 2008-04-09 | 贵阳云岩西创药物科技开发有限公司 | 杏丹注射剂的质量控制方法 |
| CN104034826A (zh) * | 2014-07-08 | 2014-09-10 | 上海信谊百路达药业有限公司 | 一种银杏叶提取物中萜类内酯的检测方法 |
| CN105372338A (zh) * | 2014-08-08 | 2016-03-02 | 南京中科药业有限公司 | 复方银灵通胶囊的质量检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 秦建平等: "HPLC-ELSD法测定白果中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C", 《现代药物与临床》 * |
| 高翠华等: "索氏提取-HPLC-ELSD 法检测银杏叶片中萜类内酯的含量", 《当代化工》 * |
| 黄琴伟等: "银杏叶总内酯对照提取物在银杏叶含量测定中的应用", 《医药导报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yubin et al. | The extraction, separation and purification of alkaloids in the natural medicine | |
| CN108872447B (zh) | 基于亲水性固相萃取的甲状腺抑制剂的检测方法 | |
| Chen et al. | The electrospun polyacrylonitrile/covalent organic framework nanofibers for efficient enrichment of trace sulfonamides residues in food samples | |
| CN104458993A (zh) | 壮药材滇桂艾纳香hplc指纹图谱的建立方法 | |
| Chen et al. | Polystyrene/poly (dibenzo-18-crown-6) composite nanofibers for the selective adsorption of plasma catecholamines | |
| CN106124645A (zh) | 针头式固相萃取过滤器 | |
| CN101721516B (zh) | 栀子提取物的制备方法 | |
| CN111803541B (zh) | 远志属植物中总口山酮的提取纯化方法及应用 | |
| CN101732379B (zh) | D101大孔吸附树脂富集纯化竹节参总皂苷工艺 | |
| CN103764158B (zh) | 一种抗快速性心律失常的制剂及其制备方法 | |
| CN112461964A (zh) | 一种银杏内酯的检测方法 | |
| CN109265494B (zh) | 从滇山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法 | |
| CN104645667B (zh) | 扩张床色谱与逆流色谱在线联用方法、应用及装置 | |
| CN110542734B (zh) | 一种复方中药的人参茎叶总皂苷含量检测方法 | |
| CN112125894B (zh) | 利用天然深共晶溶剂绿色高效提取红车轴草异黄酮的方法 | |
| CN115184497A (zh) | 一种测定铁皮石斛中2,4-表芸苔素内酯含量的方法 | |
| CN110687224B (zh) | 雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法 | |
| CN109212108B (zh) | 一种同时测定稻米和大豆中三种痕量喹啉类除草剂的气相色谱-质谱联用法 | |
| CN1947740B (zh) | 独一味药材、中间体及其注射液的指纹图谱检测方法 | |
| CN106645439B (zh) | 一种石菖蒲提取物中成分的检测方法 | |
| CN111487345B (zh) | 一种银杏叶提取物生产过程样品中总银杏酸快速检测方法 | |
| CN112079890A (zh) | 一种泰拉霉素d的分离纯化方法 | |
| CN105998154B (zh) | 狭山野豌豆中总黄酮的制备方法 | |
| CN114814034B (zh) | 同时检测浙麦冬中皂苷和黄酮含量的液相色谱方法 | |
| CN113740472B (zh) | 一种温郁金中杀螨剂的微提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210309 |