CN112410300A - 一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移植方面的应用 - Google Patents

一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移植方面的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移植方面的应用。神经干细胞(NSCs)作为干细胞治疗神经类疾病中最有前景的细胞类型在治疗帕金森、脊髓损伤、脑中风等疾病中治疗前景广阔。外源性的NSCs移植对神经干细胞数量要求较高。但如果仅仅依赖NSCs常规培养，速度有限。本发明发现，异柚葡糖苷具有促进NSCs体外增殖的活性，且高浓度异柚葡糖苷对NSCs体外增殖活性的促进作用越强。

Description

一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移 植方面的应用
技术领域
本发明属于干细胞领域，涉及一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移植方面的应用。
背景技术
神经干细胞(Neural stem cells，NSCs)是一种组织特异性干细胞，发育上来源于神经上皮，具有自我更新和定向分化为神经细胞的潜能。作为干细胞治疗神经类疾病中最有前景的细胞类型，目前的基础与临床研究广泛集中于治疗帕金森、脊髓损伤、脑中风等疾病。由于数量及损伤后局部微环境的影响，单纯靠这类细胞自身增殖修复的可能性微乎其微。因此采用外源性的神经干细胞移植作用于损伤部位更具有治疗效果。
外源性的神经干细胞移植对神经干细胞数量要求较高，但是，如果仅仅依赖神经干细胞常规培养，速度有限。因此，提高神经干细胞体外增殖是神经干细胞移植的一个重要方向。
异柚葡糖苷(Isohemiphloin)是一种糖苷类化合物，目前没有异柚葡糖苷用于促进神经干细胞体外增殖的报道。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种成分在促进神经干细胞体外增殖进而用于神经干细胞移植方面的应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种成分在促进神经干细胞体外增殖方面中的应用，所述成分为异柚葡糖苷。在一个具体实施例中，采用MTT法测定了NSCs的增殖活性，结果：与对照组相比，异柚葡糖苷药物组吸光度显著升高，且呈现明显的剂量依赖效应。该结果表明，异柚葡糖苷具有促进NSCs体外增殖的活性，且高浓度异柚葡糖苷对NSCs体外增殖活性的促进作用越强。
一种成分在制备促进神经干细胞体外增殖的培养基中的应用，该成分为异柚葡糖苷。
一种促进神经干细胞体外增殖的培养基，含有有效浓度的异柚葡糖苷。
有益效果：
神经干细胞(NSCs)作为干细胞治疗神经类疾病中最有前景的细胞类型在治疗帕金森、脊髓损伤、脑中风等疾病中治疗前景广阔。外源性的NSCs移植对神经干细胞数量要求较高。但如果仅仅依赖NSCs常规培养，速度有限。本发明发现，异柚葡糖苷具有促进NSCs体外增殖的活性，且高浓度异柚葡糖苷对NSCs体外增殖活性的促进作用越强。
附图说明
图1为第3代NSCs在倒置相差显微镜下的观察结果；
图2为各组OD值(A)和相对增殖活性(B)；
具体实施方式
下面结合具体的实施例来介绍本发明的实质性内容，但不能以此限定本发明保护范围。
一、实验材料
SPF级雌性SD大鼠，怀孕15～17d，购于常州卡文斯实验动物有限公司。
异柚葡糖苷购自四川省维克奇生物科技有限公司，HPLC纯度≥98％。
胰蛋白酶、胎牛血清、B27、bFGF、青链霉素和DMEM/F12培养基购自碧云天生物。
二、实验方法
1、NSCs原代培养和传代
将孕鼠用10％水合氯醛肌肉注射麻醉后，取胎鼠，于无菌条件下取大脑，剥离脑膜，分离海马组织，剪碎，0.05％胰蛋白酶消化，加入完全培养基(含10％胎牛血清、2％B27、20ng/mL bFGF和1％双抗的DMEM/F12培养基)重悬，过200目细胞筛，制得单细胞悬液。计数，调整细胞密度至1×106/mL，接种于细胞培养瓶内，于饱和湿度、5％CO2、37℃条件培养，观察细胞生长情况，3～4d半量换液，5～7d传代1次。
2、MTT法测定NSCs的增殖活性
取生长状态良好的第3代NSCs制备密度为5×104/mL的单细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μL，于饱和湿度、5％CO2、37℃条件培养。24h后，按照药物组和对照组更换培养基：药物组更换为含2、5、10μM异柚葡糖苷的完全培养基，对照组更换为不含异柚葡糖苷的完全培养基，各5个复孔，继续培养48h后，各孔加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续培养4h后，弃上清，各孔加入150μL DMSO溶液，震荡充分溶解结晶，用酶标仪检测其在490nm处的吸光度(OD值)，以对照组相对增殖活性100％计，按照公式计算药物组相对增殖活性：药物组相对增殖活性(％)＝药物组OD值÷对照组OD值×100％。
3、统计学处理
实验数据均以平均值±标准偏差表示，组间差异比较采用t检验。
三、实验结果
1、NSCs培养与鉴定
NSCs取材培养5～7d后，可见大量神经球且神经球的体积和数量随着培养时间延长而变大增多。图1为第3代NSCs在倒置相差显微镜下的观察结果，NSCs纯度约95％。
2、NSCs的增殖活性
OD值和相对增殖活性如表1和图2所示，与对照组相比，药物组吸光度显著升高，且呈现明显的剂量依赖效应。该结果表明，异柚葡糖苷具有促进NSCs体外增殖的活性，且高浓度异柚葡糖苷对NSCs体外增殖活性的促进作用越强。
表1 OD值和相对增殖活性
Figure BDA0002791496960000031
综上可见，异柚葡糖苷具有促进NSCs体外增殖的活性，可以用于NSCs体外培养，制成促进NSCs体外增殖的培养基。
上述实施例用来介绍本发明的实质性内容，但不能以此限定本发明保护范围。

Claims (3)

1.一种成分在促进神经干细胞体外增殖方面中的应用，所述成分为异柚葡糖苷。
2.一种成分在制备促进神经干细胞体外增殖的培养基中的应用，该成分为异柚葡糖苷。
3.一种促进神经干细胞体外增殖的培养基，其特征在于：含有有效浓度的异柚葡糖苷。
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CN115025075A (zh) * 2021-03-08 2022-09-09 沈阳药科大学 Fk3的药物新用途

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