CN112410224A - 一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 - Google Patents
一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112410224A CN112410224A CN202011302970.9A CN202011302970A CN112410224A CN 112410224 A CN112410224 A CN 112410224A CN 202011302970 A CN202011302970 A CN 202011302970A CN 112410224 A CN112410224 A CN 112410224A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- paramecium
- algae
- harmful
- blue
- culturing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000223785 Paramecium Species 0.000 title claims abstract description 113
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 title claims abstract description 26
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims abstract description 113
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 54
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract 1
- 241000192701 Microcystis Species 0.000 description 32
- 241000192542 Anabaena Species 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000223786 Paramecium caudatum Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 244000062645 predators Species 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/10—Protozoa; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical methods
-
- F—MECHANICAL ENGINEERING; LIGHTING; HEATING; WEAPONS; BLASTING
- F26—DRYING
- F26B—DRYING SOLID MATERIALS OR OBJECTS BY REMOVING LIQUID THEREFROM
- F26B9/00—Machines or apparatus for drying solid materials or objects at rest or with only local agitation; Domestic airing cupboards
- F26B9/06—Machines or apparatus for drying solid materials or objects at rest or with only local agitation; Domestic airing cupboards in stationary drums or chambers
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法。该方法将有害群体蓝藻进行富集、干燥和研磨获得单细胞和小群体的蓝藻藻粉，再将其用于草履虫的培养中。本发明不仅缓解了草履虫对群体藻的摄食障碍，在短时间内获得高密度的草履虫种群，同时降低草履虫大规模培养中饵料成本和对水质的污染，避免了复杂的饵料配比环节，藻粉也更适合长期保存。并且，通过草履虫对有害蓝藻的摄食和消化，将有害蓝藻进行有益转化，从而消除富营养化水体中有害蓝藻打捞收集上岸后续处置的环境危害，具有重要的现实意义。本发明中培养草履虫的有机碳源为有害群体蓝藻，该原材料在富营养化水体中常见且易获得。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法。
背景技术
草履虫是水体中常见的一种浮游原生动物，它们细胞结构简单且繁殖快，以浮游植物、细菌及一些有机碎屑等为食，是水生动物主要的食物资源，常作为一种天然饵料用于水生经济物种幼苗和观赏鱼类的培育，同时由于草履虫可以有机碎屑为食，也可以起到净化水质的作用。在科学研究中，草履虫具有易培养易观察的特征，也常被作为重要物种用于科学实验，如遗传学实验和水质监测等。因此，大规模快速培养草履虫是在其作为天然饵料和作为科学研究材料中的一项关键技术。
目前，在草履虫的常规培养中通常采用的有机碳源主要有稻草浸出液、细菌、牛肉汁、麦粒培养液、大米培养液、鲜奶、蛋白胨培养液等，尽管这些培养液材料能够在短时间内培育出高密度的草履虫，但其成本较高、易变质而影响水质，且不易控制其添加比例，因而不适宜于草履虫的长期大规模培养。此外，由于湖水中有机质有限，采用煮沸处理的湖水培养而获得的草履虫丰度较低，也不能满足短时间内获得高密度草履虫的需求。微藻是草履虫的天然饵料，而目前尚未见采用有害蓝藻大规模培养草履虫的技术公开。有害蓝藻大量增殖形成藻华，通常以群体形态存在，微型植食性水生动物受限于摄食方式及自身个体小等因素限制，对群体形态微囊藻的摄食效率相对较低，从而无法高效地转化利用这些有害蓝藻。常见的有害蓝藻治理方法主要包括喷洒化学试剂和机械操作等使藻细胞裂解失活。
发明内容
为解决上述现有技术存在的缺陷，本发明提供一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法。
本发明的目的是提供一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）将收集的高密度有害群体蓝藻进行裂解处理，所述的裂解处理的步骤如下：先将收集的含有有害群体蓝藻的藻液经4000-5000rpm离心10-20min获得藻泥；再将藻泥放置于50~65°C烘箱中进行干燥处理24~48小时；然后将干燥后的藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网，获得藻粉；
（2）将藻粉加至低密度草履虫培养液中，藻粉的浓度为0.1-1mg/mL，所述草履虫的初始接种量不少于10 ind/mL，于20~30℃的温度进行培养，培养过程中每24小时添加一次藻粉使培养液中藻粉的浓度不低于0.1mg/mL；
（3）在培养基中的草履虫培养4-7日后或草履虫浓度达到环境容纳量时，可将草履虫富集后收集或将草履虫添加至新鲜培养基中培养。
所述用于接种的草履虫的制备如下：先采集草履虫，分离获得纯种草履虫；向培养瓶中加入培养液和由有害群体蓝藻经裂解处理后的藻粉，所述培养液为稀释10-30倍的浮游生物专用培养基，藻粉的添加量为5 mg/mL，接种获得的纯种草履虫后于50 mL培养液中进行培养，直到草履虫密度达到300 ind/mL时，直接作为种源使用。
所述的草履虫为多小核草履虫Paramecium multimicronucleatum、大草履虫Paramecium caudatum中的一种或两种混合。
所述草履虫的初始接种量10-30ind/mL。
所述低密度草履虫培养液为经过不小于1μm的滤膜或滤器过滤的不含其它具有活性生物的湖水或清水，或由经过高温高压灭菌的浮游生物专用培养基稀释10-30倍后得到的培养液，且培养液的氮含量不高于25mg/L。
有益效果：本发明中有害群体蓝藻的干燥方法和裂解群体藻的步骤简单易操作，利于推广实施。同时，基于草履虫是藻类的主要捕食者，能够高效地摄食和消化有害蓝藻，从而在短时间内实现自身种群的快速增长，且不需要在添加有机质过程中经过一些过渡培养等重复步骤和培养液更换，因此本发明中草履虫的大规模培养方法避免了原有方法中存在的有机碳源高成本和低效益的问题，可用于草履虫的长期大规模培养中。此外，本发明将有害蓝藻进行资源利用，实现高效益的草履虫大规模快速培养，也解决了有害蓝藻清除和有效利用的难题，减轻有害蓝藻对水生环境的不利影响，具有重要的现实意义。
附图说明
图1为本发明中利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的操作示意图，其中有害蓝藻为群体蓝藻。
图2为本发明实施例1中多小核草履虫Paramecium mutimicronucleatum YZ在不同群体微囊藻处理中的生长情况示意图。
图3为本发明实施例2中大草履虫Paramecium caudatum YZ在不同群体微囊藻处理中的生长情况示意图。
图4为本发明实施例3中多小核草履虫Paramecium mutimicronucleatum YZ在不同鱼腥藻处理中的生长情况示意图。
具体实施方法
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和具体的实施例对本发明做更全面地阐述，但本发明的保护范围并不限于以下的具体实施例。
以下实施例所用改良BG-11培养基的配方为：每升含有25mgNaNO3，1mgK2HPO4，75mgMgSO4.7H2O，36mgCaCl2.2H2O，6mg柠檬酸，6mg柠檬酸铁铵，1mgEDTA，20mgNa2CO3，1mL微量元素溶液（2.86mgH3BO3，1.81mgMnCl2.4H2O，0.222mgZnSO4.7H2O，0.39mgNaMoO4.5H2O，0.079mgCuSO4.5H2O，0.0494mgCo(NO3)2.6H2O)，以及1mL维生素B12。
以下实施例中用于接种的草履虫通过以下处理获得：先采集草履虫，分离获得纯种草履虫；向培养瓶中加入培养液和由有害群体蓝藻经裂解处理后的藻粉，所述培养液为稀释10-30倍的浮游生物专用培养基，藻粉的添加量为5 mg/mL，接种获得的纯种草履虫后于50 mL培养液中进行培养，直到草履虫密度达到300 ind/mL时，直接作为种源使用。
实施例1
本实施例中的草履虫分别为从南京师范大学仙林校区采月湖、太湖和稻草浸出液中分离纯化的多小核草履虫Paramecium multimicronucleatum YZ，将该采集的草履虫经过处理后再分别以10只/mL的添加量分别接种于标记为处理组1、对照组1、对照组2、对照组3的四组培养液中，室温（20-30℃）下培养，并统计了草履虫种群的最大值及草履虫生长率，如图2所示。
处理组1为添加15mg有害微囊藻藻粉的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为150mL，培养过程中每24小时添加一次藻粉使培养液中藻粉的浓度达到0.1mg/L，连续添加5天。先将收集的有害群体微囊藻的藻液经4000rpm离心10min获得藻泥；再将藻泥放置于50°C烘箱中进行干燥处理24小时；然后将干燥后的藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网，获得藻粉。经过上述处理后的藻粉为单细胞微囊藻和粒径小于40μm小群体微囊藻群体的混合物。
对照组1为含5×106 cells/mL未经处理的有害群体微囊藻的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为150mL，培养过程中每24小时添加一次未经处理的有害群体微囊藻使培养液中微囊藻的浓度达到5×106 cells/mL，连续添加5天。未经处理的有害群体微囊藻为由野外直接采集的且未经任何处理的大群体微囊藻，通常是肉眼可见的颗粒状。
对照组2为添加15mg有害微囊藻藻粉的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为150mL，培养过程中每24小时添加一次有害微囊藻藻粉使培养液中藻粉的浓度达到0.1mg/L，连续添加5天。该藻粉的制备如下：先将收集的有害群体微囊藻的藻液经4000rpm离心10min获得藻泥；然后直接将藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网后获得。
对照组3为添加15mg有害微囊藻藻粉的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为150mL，培养过程中每24小时添加一次有害微囊藻藻粉使培养液中藻粉的浓度达到0.1mg/L，连续添加5天。该藻粉的制备如下：先将收集的有害群体微囊藻的藻液经4000rpm离心10min获得藻泥；再将藻泥放置于50°C烘箱中进行干燥处理24小时后获得。
结果表明：对照组1、对照组2、对照组3和处理组1的多小核草履虫Paramecium multimicronucleatum YZ分别达到种群最大丰度为191±8 ind/mL、1011±29 ind/mL、166±4 ind/mL和2524±129 ind/mL，在本实例中处理组1以有害蓝藻藻粉培养的草履虫在6天内，其种群数量相对于初始接种量增大了至少250倍，且比对照组1、对照组2、对照组3的草履虫种群数量分别高出13倍、2倍、15倍左右，且对照组1中仅有少量的群体藻被草履虫清除，说明未经处理的群体蓝藻不能有效地被草履虫利用，而采用本发明中的方法处理群体微囊藻获得的微囊藻藻粉可显著促进草履虫种群的增长，在短时间可以快速获得高密度的草履虫种群。特别是在处理组中，通过每日连续补充藻粉，可在6天内草履虫种群达到最大峰值，能获得约2500ind/mL的高密度草履虫，草履虫具有较强的吞噬活性，可直接用于进一步的扩大化培养中，或等草履虫种群在达到最大峰值的1~2天后，草履虫可将体内的有害藻细胞完全消化，将草履虫富集后作为饵料使用。
对照组2和处理组1的数据可以看出：若离心后的藻泥，不立即经过干燥，则容易腐烂分解，则后其再研磨中导致藻类营养流失；
对照组3和处理组1的数据可以看出：若干燥后的藻泥，不经过研磨，则藻泥成肉眼可见的大块状，草履虫仍然无法摄取；
基于草履虫的摄食特征，将高密度有害群体蓝藻进行干燥处理，通过研磨裂解群体形态的有害蓝藻，获得单细胞或小群体状的藻粉，以这种天然的微藻藻粉用于草履虫的大规模快速培养，不仅缓解了草履虫对群体藻的摄食障碍，在短时间内获得高密度的草履虫种群，同时降低草履虫大规模培养中饵料成本和对水质的污染，避免了复杂的饵料配比环节，藻粉也更适合长期保存。此外，本发明通过草履虫摄食有害蓝藻，从而将有害藻进行有益转化利用，可减轻养殖水体和一些天然湖泊的富营养化中有害蓝藻带来的不利影响，具有重要的现实意义。
实施例2
本实施例中将采集大草履虫Paramecium caudatum YZ经过处理后以30只/mL的添加量分别接种于含有约4×106 cells/mL未经处理的有害群体微囊藻细胞（对照组）和100mg有害微囊藻藻粉（处理组）的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为1L，室温下培养。本实例统计了草履虫种群的最大值以及草履虫生长率，如图3所示。
处理组为添加60mg有害微囊藻藻粉的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为1L，培养过程中每24小时添加一次藻粉使培养液中藻粉的浓度达到0.1mg/L，连续添加5天。先将收集的有害群体微囊藻的藻液经4000rpm离心10min获得藻泥；再将藻泥放置于50°C烘箱中进行干燥处理24小时；然后将干燥后的藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网，获得藻粉。经过上述处理后的藻粉为单细胞微囊藻和粒径小于40μm小群体微囊藻群体的混合物。
对照组1为含4×106 cells/mL未经处理的有害群体微囊藻的1/20改良BG-11培养基，培养液体积为1L，培养过程中每24小时添加一次未经处理的有害群体微囊藻使培养液中微囊藻的浓度达到4×106 cells/mL，连续添加5天。未经处理的有害群体微囊藻为由野外直接采集的且未经任何处理的大群体微囊藻，通常是肉眼可见的颗粒状。
结果表明：对照组和处理组的多小核草履虫Paramecium caudatum YZ分别达到种群最大丰度为142±4 ind/mL和2608±119 ind/mL，，在本实例中以有害蓝藻藻粉培养的草履虫在7天内，其种群数量相对于初始接种量增大了至少86倍。而对照组的草履虫相较于初始接种量仅增大4倍左右，且对照组中仅有少量的群体藻被草履虫清除，说明未经处理的群体蓝藻不能有效地被草履虫利用，而采用本发明中的方法处理群体微囊藻获得的微囊藻藻粉可显著促进草履虫种群的增长，在短时间可以快速获得高密度的草履虫种群。在本实施案例中，当草履虫种群达到最大峰值时，草履虫具有较强的吞噬活性，可直接用于进一步的扩大化培养中，或等草履虫种群在达到最大峰值的1~2天后，草履虫可将体内的有害藻细胞完全消化，将草履虫富集后作为饵料使用。
实施例3
本实施例中的有害蓝藻为从太湖富集的鱼腥藻，培养液为太湖的湖水。将多小核草履虫Paramecium multimicronucleatum YZ经过处理后以10只/mL的添加量分别接种于含有约5×106 cells/mL未经处理的鱼腥藻和15mg鱼腥藻藻粉的过滤湖水中，室温下培养。本实例统计了草履虫种群的最大值及草履虫生长率。
处理组为添加15mg有害鱼腥藻藻粉的过滤湖水，培养液体积为500mL，培养过程中每24小时添加一次藻粉使培养液中藻粉的浓度达到0.1mg/L，连续添加5天。先将收集的有害群体鱼腥藻的藻液经4000rpm离心10min获得藻泥；再将藻泥放置于50°C烘箱中进行干燥处理24小时；然后将干燥后的藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网，获得藻粉。经过上述处理后的藻粉为单细胞鱼腥藻和粒径小于40μm小群体鱼腥藻群体的混合物。
对照组为含5×106 cells/mL未经处理的有害群体鱼腥藻的过滤湖水，培养液体积为500mL，培养过程中每24小时添加一次未经处理的有害群体鱼腥藻使培养液中鱼腥藻的浓度达到4×106 cells/mL，连续添加5天。未经处理的有害群体鱼腥藻为由野外直接采集的且未经任何处理的大群体鱼腥藻，通常是肉眼可见的颗粒状。
结果表明：采用本发明专利处理的鱼腥藻藻粉所培养的草履虫，处理组的种群最大密度可达940±44 ind/mL；而将鱼腥藻直接投喂草履虫，对照组的种群密度最大达到30ind/mL，如图4所示。
Claims (5)
1.一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）将收集的高密度有害群体蓝藻进行裂解处理，所述的裂解处理的步骤如下：先将收集的含有有害群体蓝藻的藻液经4000-5000rpm离心10-20min获得藻泥；再将藻泥放置于50~65°C烘箱中进行干燥处理24~48小时；然后将干燥后的藻泥进行研磨，研磨后过孔径为40μm的筛网，获得藻粉；
（2）将藻粉加至低密度草履虫培养液中，藻粉的浓度为0.1-1mg/mL，所述草履虫的初始接种量不少于10 ind/mL，于20~30℃的温度进行培养，培养过程中每24小时添加一次藻粉使培养液中藻粉的浓度不低于0.1mg/mL；
（3）在培养基中的草履虫培养4-7日后或草履虫浓度达到环境容纳最大量时，可将草履虫富集后收集或将草履虫添加至新鲜培养基中培养。
2.根据权利要求1所述一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，所述用于接种的草履虫的制备如下：先采集草履虫，分离获得纯种草履虫；向培养瓶中加入培养液和由有害群体蓝藻经裂解处理后的藻粉，所述培养液为稀释10-30倍的浮游生物专用培养基，藻粉的添加量为5 mg/mL，接种获得的纯种草履虫后于50 mL培养液中进行培养，直到草履虫密度达到300 ind/mL时，直接作为种源使用。
3.根据权利要求1所述一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，所述的草履虫为多小核草履虫Paramecium multimicronucleatum、大草履虫Paramecium caudatum中的一种或两种混合。
4.根据权利要求1所述一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，所述草履虫的初始接种量10-30ind/mL。
5.根据权利要求1所述一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法，其特征在于，所述低密度草履虫培养液为经过不小于1μm的滤膜或滤器过滤的不含其它具有活性生物的湖水或清水，或由经过高温高压灭菌的浮游生物专用培养基稀释10-30倍后得到的培养液，且培养液的氮含量不高于25mg/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011302970.9A CN112410224A (zh) | 2020-11-19 | 2020-11-19 | 一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011302970.9A CN112410224A (zh) | 2020-11-19 | 2020-11-19 | 一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112410224A true CN112410224A (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=74773132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011302970.9A Pending CN112410224A (zh) | 2020-11-19 | 2020-11-19 | 一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112410224A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115557613A (zh) * | 2022-10-21 | 2023-01-03 | 青岛农业大学 | 一种基于四膜虫的生物治理蓝藻水华方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105907687A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-08-31 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种利用水华藻类为基质培养光合细菌的方法 |
| CN110117543A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-08-13 | 汪敏军 | 高密度培养球等鞭金藻制备藻粉的方法 |
-
2020
- 2020-11-19 CN CN202011302970.9A patent/CN112410224A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105907687A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-08-31 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种利用水华藻类为基质培养光合细菌的方法 |
| CN110117543A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-08-13 | 汪敏军 | 高密度培养球等鞭金藻制备藻粉的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BERNA ET AL.: "The Utilization of Bacteria As Food For Paramecium Bursaria", 《TRANSACTIONS OF THE AMERICAN MICROSCOPICAL SOCIETY》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115557613A (zh) * | 2022-10-21 | 2023-01-03 | 青岛农业大学 | 一种基于四膜虫的生物治理蓝藻水华方法 |
| CN115557613B (zh) * | 2022-10-21 | 2024-06-04 | 青岛农业大学 | 一种基于四膜虫的生物治理蓝藻水华方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106754461B (zh) | 一种生物絮团及其制备方法和应用 | |
| US8673619B2 (en) | Production of cyanobacterial or algal biomass using chitin as a nitrogen source | |
| CN102584430B (zh) | 一种利用废弃茧丝蛋白制造氨基酸鱼塘肥水剂的方法 | |
| CN113481102B (zh) | 一株淡水小球藻Chlorella sorokiniana及其培养方法与应用 | |
| CN111187731A (zh) | 一种生物改底培藻水质改良菌剂及其制备方法 | |
| CN103589672A (zh) | 一种有效菌水质净化剂的制备方法 | |
| CN105582890A (zh) | 一种复合纳米生物质炭材料的制备方法及其应用 | |
| CN101407761B (zh) | 酵母融合菌、白地霉菌和根霉菌液体菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN108004190B (zh) | 芽孢杆菌用于增加小球藻生物量的方法 | |
| US10173913B2 (en) | Process of treating buchu mercaptan production wastewater using microalgae and chitin as a nitrogen source | |
| CN105600942A (zh) | 一种利用蓝藻水华形成生物絮团的方法 | |
| KR102185297B1 (ko) | 가축분뇨액비품질인증(ｌｆｑｃ)에 기초한 액비 생산 방법과 이를 통해 생산된 고품질 액비 및 클로렐라 미생물비료 제조방법 | |
| CN112410224A (zh) | 一种利用有害蓝藻大规模快速培养草履虫的方法 | |
| CN113354100A (zh) | 高浓度氨氮废水经适度硝化后耦合丝状藻进行氮磷资源回收与碳中和的方法 | |
| Shan et al. | Ammonia and nitrite nitrogen removal in shrimp culture by Vibrio alginolyticus VZ5 immobilized in SA beads | |
| CN106465695B (zh) | 一种强化型生态基及其制备方法 | |
| CN112080442A (zh) | 一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂及其制备方法 | |
| CN109395699A (zh) | 一种利用微藻处理废水并回收磷素的方法 | |
| CN1340462A (zh) | 利用枯草芽孢杆菌的水产养殖环境生物修复方法 | |
| CN104030459A (zh) | 一种半咸水养殖用微生物制剂及制备方法和应用 | |
| CN111423985B (zh) | 淡水硅藻培育方法 | |
| CN113801835A (zh) | 一种利用黑水虻虫沙制作培藻营养液的工艺 | |
| CN111204876A (zh) | 一种高效净化和利用水产养殖尾水的方法 | |
| CN110980857A (zh) | 一种生鱼养殖用调水剂 | |
| CN115251088B (zh) | 一种用于虾蟹养殖的控害藻浮游生态调节剂、制备方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |