CN112375119A - 一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物有效成分分离纯化技术领域，且公开了一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：选料：选取1‑2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；搅碎：将原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品，纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素；本发明采用CH3COOC2H5诱导剂和一种磁性纳米粒子澄清剂，可以提高大幅提升提高蜕皮激素的回收率和纯度，而且本发明成本较低，有利于蜕皮激素进行大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物有效成分分离纯化技术领域，具体为一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法。
背景技术
中国发明专利CN103788162A公开了一种从菠菜中提取蜕皮激素的方法，取菠菜叶片，在液氮中研磨成粉末，加入体积比9∶1MeOH-CHCl3混合液或100％MeOH溶液至 50ml，在37°C下震荡2小时，过滤，萃取两次，收集MeOH层，减压干燥，再用异丙醇重新溶解样品，过滤后即可进行高效液相色谱分析，测定其含量。但是此方法仅仅局限于实验室小型生产，且对菠菜原料的新鲜程度有限制，在非菠菜大面积上市的季节，不能满足生产要求；目前有的厂家从筋骨草中、露水草中、水竹中、水龙骨等提取蜕皮激素的，鲜有从菠菜中提取蜕皮激素；蜕皮激素，是从鸭跖草科植物珍珠露水草根部提取得到的一种活性物质，是一种内源甾醇类化物，根据纯度不同分为白色、灰白色、淡黄色或淡棕色结晶性粉末，广泛用于养殖、保健、化妆品、医药行业；但现如今市面上的蜕皮激素产品中，蜕皮激素的纯度不够，容易造负面效果，因此发明出一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法尤为重要。
现如今的蜕皮激素的分离纯化方法，大多采用大孔树脂柱分离纯化蜕皮激素，成本加高且工艺复杂，而且所得到的蜕皮激素的处厚度不高，无法进行一次性大规模的分离纯化，为此，我们提出一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法。
发明内容
为了克服上述的技术问题，本发明提供一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法。
本发明所要解决的技术问题：
（1）如何提高蜕皮激素的回收率；
（2）如何提高蜕皮激素的纯度。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
进一步地，所述露水草干根为10-20份，诱导剂为50-60份，澄清剂为10-15份；所述诱导剂具体为CH3COOC2H5；所述露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为8-12℃；所述露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在15-35℃，烘干时间为10-15min；所述二次烘干温度应控制在10-15℃，烘干时间为5-10min。
进一步地，所述搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为30-60min;所述露水草粉末为3-5μm。
进一步地，所述高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
进一步地，所述提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为250-300℃；检测器温度250-300℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为70-80℃。
进一步地，所述澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：50-60份FeCl3 6H2o、50-60份FeCl2 4H2o、20-30份HCl、30-40份N2、50-60份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
进一步地，所述步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，所述步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
本发明的有益效果：
（1）本发明一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法采用一种CH3COOC2H5作为诱导剂进行蜕皮激素分离提取，相较于传统的乙醇水提取方式，该方法能够大幅度提升回收率，而且该诱导剂不含有毒成分，从而有利于减少环境污染。
（2）本发明一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，提出一种澄清剂，该澄清剂第一步将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4，第二步再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中，第三步最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂，该澄清剂止方法简单，而且杂质吸附率，进而能够大幅度提高蜕皮激素的纯度。
附图说明
图1是本发明分离纯化方法的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
露水草干根为10份，诱导剂为50份，澄清剂为10份；诱导剂具体为CH3COOC2H5；露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为8℃；露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在15℃，烘干时间为10min；二次烘干温度应控制在10℃，烘干时间为5min。
搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为30-60min;露水草粉末为3-5μm。
高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为250℃；检测器温度250℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为70℃。
澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：50份FeCl36H2o、50份FeCl2 4H2o、20份HCl、30份N2、50份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
实施例2
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
露水草干根为12份，诱导剂为55份，澄清剂为12份；诱导剂具体为CH3COOC2H5；露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为10℃；露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在20℃，烘干时间为10-min；二次烘干温度应控制在12℃，烘干时间为7min。
搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为35min;露水草粉末为3-5μm。
高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为280℃；检测器温度280℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为74℃。
澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：55份FeCl36H2o、55份FeCl2 4H2o、25份HCl、35份N2、55份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
实施例3
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
露水草干根为18份，诱导剂为58份，澄清剂为13份；诱导剂具体为CH3COOC2H5；露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为10℃；露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在31℃，烘干时间为13min；二次烘干温度应控制在13℃，烘干时间为9min。
搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为45min;露水草粉末为3-5μm。
高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为280℃；检测器温度280℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为78℃。
澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：58份FeCl36H2o、58份FeCl2 4H2o、28份HCl、38份N2、58份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
实施例4
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
露水草干根为19份，诱导剂为59份，澄清剂为14份；诱导剂具体为CH3COOC2H5；露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为11℃；露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在33℃，烘干时间为14min；二次烘干温度应控制在14℃，烘干时间为9min。
搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为58min;露水草粉末为3-5μm。
高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为290℃；检测器温度290℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为79℃。
澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：59份FeCl36H2o、59份FeCl2 4H2o、29份HCl、39份N2、59份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
实施例5
一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
露水草干根为20份，诱导剂为60份，澄清剂为15份；诱导剂具体为CH3COOC2H5；露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为12℃；露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在35℃，烘干时间为15min；二次烘干温度应控制在15℃，烘干时间为10min。
搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为60min;露水草粉末为3-5μm。
高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为300℃；检测器温度300℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为80℃。
澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：60份FeCl36H2o、60份FeCl2 4H2o、30份HCl、40份N2、60份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5中的方法进行高纯度蜕皮激素的分离纯化，测的澄清剂分量、杂质吸附率和纯度，结果如下表所示；
从上表中能够看出实施例1-5的澄清剂分量为15-55份，杂质吸附率为76-80%，纯度为5-35%，对比实例1-5的澄清剂分量、杂质吸附率和纯度可知：当澄清剂分量达到35份时，杂质吸附率达到最优化点，此时蜕皮激素的纯度最高，所以该高纯度蜕皮激素的分离纯化方法能够提高蜕皮激素的纯度，而且该澄清剂制作简单，成本较低，进而有利于使蜕皮激素进行大规模分离纯化。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，其具体分离纯化包括如下步骤：
（1）选料：选取1-2年生的，无腐烂、无霉变、无肉眼可见杂质的露水草，取其露水草根进行清洗、晾干、去皮、烘干，得到露水草干根作为原料；
（2）搅碎：将步骤（1）中的原料置放进搅碎机中进行搅碎，然后过60目筛，得到露水草粉末；
（3）提取分离：将露水草粉末置入高效液相色谱仪中进行分离，并加入诱导剂，提取得到蜕皮激素样品；
（4）纯化：利用澄清剂对蜕皮激素样品进行吸附，得到高纯度蜕皮激素。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述露水草干根为10-20份，诱导剂为50-60份，澄清剂为10-15份；所述诱导剂具体为CH3COOC2H5；所述露水草根进行清洗，需要将露水草根与蒸馏水放入超声波清洗器中清洗，其中蒸馏水的温度为8-12℃；所述露水草根烘干分为一次烘干和二次烘干，其一次烘干温度应控制在15-35℃，烘干时间为10-15min；所述二次烘干温度应控制在10-15℃，烘干时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述搅碎机的转速为8000r/min，其搅碎时间为30-60min;所述露水草粉末为3-5μm。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪包括溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和记录系统。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述提取分离时，高效液相色谱仪的进样口温度为250-300℃；检测器温度250-300℃，其色谱柱转速为1000r/min，色谱柱温度为70-80℃。
6.根据权利要求4所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述澄清剂具体为一种磁性纳米粒子澄清剂，其具体由以下重量份制成：50-60份FeCl3 6H2o、50-60份FeCl2 4H2o、20-30份HCl、30-40份N2、50-60份NH3 H2o和余量水，其具体制备过程如下：
步骤一：将FeCl3 6H2o和FeCl2 4H2o分别倒入俩口烧瓶中，并分别加入水和HCl，并且通入N2，再利用电动搅拌其分别对进行充分搅拌，得到Fecl3和 Fe3O4；
步骤二：再将水和NH3 H2o倒入三颈烧瓶中，通入N2再利用电动搅拌其分别对进行搅拌，然后将步骤一中得到Fecl3和Fe3O4倒入该三颈烧瓶中；
步骤三：最后在25℃恒温浴锅中恒温晶化20min，得到磁性纳米粒子澄清剂。
7.根据权利要求6所述的一种高纯度蜕皮激素的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤一中搅拌速率为300r/min,搅拌时间为10min，所述步骤二中搅拌速率为500r/min,搅拌时间为5min。
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| CN113956319A (zh) * | 2021-09-23 | 2022-01-21 | 西安尚诚生物科技有限公司 | 一种提取精制蜕皮甾酮的方法 |
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