CN112353748A - 基于富血小板血浆及大鲵活性肽的美容组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于富血小板血浆及大鲵活性肽的美容组合物，是将富血小板血浆、肉毒杆菌毒素、二氢杨梅素及大鲵活性肽与生理盐水混合得到混合液，所述混合液中富血小板血浆浓度为1×10⁸个/mL~1×10⁹个/mL，肉毒杆菌毒素浓度为1~20U/mL，二氢杨梅素浓度为0.1~2mg/mL，大鲵活性肽的分子量小于1000Da且浓度为0.1~1mg/mL；将混合液0.22μm滤膜除菌。在发挥肉毒杆菌毒素改善皮肤衰老作用的同时，有效减轻肉毒杆菌毒素的副作用，效果持续时间可达9~12个月，且整个过程中未出现面部僵直现象；二氢杨梅素与大鲵活性肽共同作用，有效提高对于酪氨酸酶的抑制作用。

Description

基于富血小板血浆及大鲵活性肽的美容组合物

技术领域

本发明涉及美容产品技术领域，具体涉及一种基于富血小板血浆及大鲵活性肽的美容组合物。

背景技术

人类皮肤的颜色与黑色素数量相关。黑色素为酪氨酸与多巴代谢产物，而酪氨酸酶催化这一过程，是黑色素生成的关键限速酶，因此，酪氨酸酶抑制剂已应用于外用美白化妆品及口服液中，但美白见效较慢。另外，生长过程中，皮肤在外界环境影响下不可避免的出现皱纹、色斑和松弛等衰老现象，为此人们亦开发出抑制衰老的美容产品。研究表明，注射富血小板血浆（Platelet-rich plasma, PRP）具有较好的皮肤修复作用，可有效收紧松弛皮肤，持续时间长，但见效缓慢。注射肉毒杆菌毒素可以阻断神经对肌肉的传导，从而使肌肉麻痹，达到除皱美容的目的，见效快（一般注射4～48小时内即可发挥作用），但会有僵硬、不自然等副作用，需要较长时间的恢复期，而且持续时间只能达到3～6个月。

专利号为2017100355214的中国发明专利，公开了“一种富血小板血浆组合物及其制备方法”，是将富血小板血浆、肉毒杆菌毒素及天然酪氨酸酶抑制剂（氧化白藜芦醇、白藜芦醇、熊果苷或桑皮苷）按比例进行组合。PRP和天然酪氨酸酶抑制剂共同作用可明显改善使用肉毒杆菌毒素带来的副作用，且能有效延长作用时间至8~12个月；PRP富含的细胞生长因子能促进细胞对天然酪氨酸酶抑制剂的吸收，加强天然酪氨酸酶抑制剂对酪氨酸酶抑制能力，减少黑色素形成，提高美白效果。然而，众所周知氧化白藜芦醇、白藜芦醇、熊果苷及桑皮苷等天然酪氨酸酶抑制剂分别可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂中，难溶于水，故上述组合物在制备过程中需要用少量溶剂（如实施例的DMSO）先将天然酪氨酸酶抑制剂溶解后再用生理盐水稀释。将残留有机溶剂的组合物注射皮肤后会对体造成损害。

目前，已有关于肽类活性物质具有抑制酪氨酸酶活性的相关报道。如宋永相等报导的海洋活性胶原肽（宋永相，孙谧，王跃军等. 海洋活性胶原肽的抗氧化性及对酪氨酸酶的抑制作用与初步分离研究. 中国食品学报，2009，9（5）：7-13）；李亚会报导的远东拟沙丁鱼蛋白多肽（李亚会，吉薇，吉宏武等. 远东拟沙丁鱼蛋白多肽（Sardinops sagaxpolypeptide）的制备及其对酪氨酸酶的抑制作用. 食品工业科技，2016， 37（6）:58-62,68）。

二氢杨梅素，多提取自葡萄科蛇葡萄属的一种木质藤本植物，也有用拐枣提取，其中主要活性成分为黄酮类化合物，具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种奇特功效；而二氢杨梅素是较为特殊的一种黄酮类化合物，具有较好的水溶解特性，除具有黄酮类化合物的一般特性外，还具有解除醇中毒、预防酒精肝、脂肪肝、抑制肝细胞恶化、降低肝癌的发病率等作用。

迄今为止，没有将二氢杨梅素与肽类活性物质共同作用，有效提高酪氨酸酶抑制率的相关报道。

发明内容

本发明为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种基于富血小板血浆及大鲵活性肽的美容组合物。

本发明的技术解决方案是：一种基于富血小板血浆和大鲵活性肽的美容组合物，是将富血小板血浆、肉毒杆菌毒素、二氢杨梅素及大鲵活性肽与生理盐水混合得到混合液，所述混合液中富血小板血浆浓度为1×10⁸个/mL~1×10⁹个/mL，肉毒杆菌毒素浓度为1~20U/mL，二氢杨梅素浓度为0.1~2mg/mL，大鲵活性肽的分子量小于1000Da且浓度为0.1~1mg/mL；将混合液0.22μm滤膜除菌。

所述大鲵活性肽按如下方法制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中加入1~3倍体积pH 7~8的0.01~0.1M磷酸缓冲液及与匀浆质量比0.1~1%的复合酶，酶解12~48 h；所述复合酶为海洋碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶按活力单位比为7：3混合；

b. 离心取上清，采用截留分子量为4000 Da以下、用物理吸附法制备的胰蛋白酶固定超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；再经过截留分子量1000Da的纳滤膜过滤，取透过纳滤膜的液体冻干。

本发明在发挥肉毒杆菌毒素改善皮肤衰老作用的同时，有效减轻肉毒杆菌毒素的副作用，效果持续时间可达9~12个月，且整个过程中未出现面部僵直现象；二氢杨梅素与大鲵活性肽共同作用，有效提高对于酪氨酸酶的抑制作用，使本发明产生速效、中效、长效的美白除皱效果。

具体实施方式

本发明的一种基于富血小板血浆和大鲵活性肽的美容组合物，是将富血小板血浆、肉毒杆菌毒素、二氢杨梅素及大鲵活性肽与生理盐水混合得到混合液，所述混合液中富血小板血浆浓度为1×10⁸个/mL~1×10⁹个/mL，肉毒杆菌毒素浓度为5U/mL，二氢杨梅素浓度为1mg/mL，大鲵活性肽的分子量小于1000Da且浓度为1mg/mL；将混合液0.22μm滤膜除菌。

所述富血小板血浆选用瑞士RegenLab富血小板血浆（PRP）制备用套装I型（Type IRegen ACR®-C Plus，瑞士REGEN LAB SA公司，国食药监械（进）字2014第3661397号），根据套装使用说明进行操作，提取的富血小板血浆中至少含有1×10⁸个血小板/mL。

所述大鲵活性肽按如下方法制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中加入2倍体积pH 7的0.01~0.1M磷酸缓冲液及与匀浆质量比1%的复合酶，酶解30h；所述复合酶为海洋碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶按活力单位比为7：3混合；

b. 离心取上清，采用截留分子量为4000 Da以下、用物理吸附法制备的胰蛋白酶固定超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；再经过截留分子量1000Da的纳滤膜过滤，取透过纳滤膜的液体冻干。所制备的冻干粉中质量95%以上为分子量小于800Da的大鲵活性肽。

肉毒杆菌毒素为美国艾尔建公司生产，生产批号C5298C3。

二氢杨梅素购于成都普瑞法科技开发有限公司。

实验例1：

分别以等量的二氢杨梅素、大鲵活性肽、二氢杨梅素和大鲵活性肽按照质量比1：1混合物（混合物），熊果苷（对照）为测试物进行酪氨酸酶抑制率测定。

酪氨酸酶抑制率的测定如表1。将序号1、序号 2与序号3摇匀，于30℃水浴中恒温10min，加入序号4，摇匀反应10min后立即在475nm处测定吸光度值。

酪氨酸酶抑制率=[(A₃-A₄)/(A₁-A₂)]×100%。

表1

酪氨酸酶抑制率测定结果如表2。

表2

实验例2：

选取10名女性脸部美容者，年龄23-55岁，有不同程度的面部皮肤松弛下垂、色素沉着、皮肤暗黄以及毛孔粗大等问题。

PRP制备：在无菌的情况下，抽取脸部美容者静脉外周血9~11ml，利用瑞士RegenLab富血小板血浆（PRP）制备用套装I型（Type I Regen ACR®-C Plus，瑞士REGENLAB SA公司，国食药监械（进）字2014第3661397号），根据套装使用说明进行操作，得到10组3~4ml富血小板血浆，血浆中至少含有4.1×10⁸/mL的血小板。

将得到的富血小板血浆与肉毒杆菌毒素、鲵活性肽、二氢杨梅素及生理盐水混合制成混合液，混合液中血小板终浓度为2.46×10⁸/mL~4.86×10⁸/ml、肉毒杆菌毒素为5U/ml，大鲵活性肽终浓度为1 mg/ml、二氢杨梅素终浓度为1g/ml，将混合液0.22μm滤膜除菌，得到如表3所示10组6ml组合物。

表3

将得到的10组组合物分别在对应的美容者脸部进行皮内点状注射，间隔约为5-6mm，每点注射约为0.05ml，总注射量为5.0~6.0ml，注射后每月随访，持续一年，结果如表4。

表4

在随访过程中发现，所有脸部美容者的皮肤都得到了改善，深皱纹变平坦，浅皱纹消失，面部颜色变浅，毛孔缩小，显著改善了脸部皮肤状态。效果持续时间9~12个月。在整个随访过程中，未发现出现面部僵直现象。

Claims (2)

1.一种基于富血小板血浆和大鲵活性肽的美容组合物，其特征在于将富血小板血浆、肉毒杆菌毒素、二氢杨梅素及大鲵活性肽与生理盐水混合得到混合液，所述混合液中富血小板血浆浓度为1×10⁸个/mL~1×10⁹个/mL，肉毒杆菌毒素浓度为1~20U/mL，二氢杨梅素浓度为0.1~2mg/mL，大鲵活性肽的分子量小于1000Da且浓度为0.1~1mg/mL；将混合液0.22μm滤膜除菌。

2.根据权利要求1所述的基于富血小板血浆和大鲵活性肽的美容组合物，其特征在于所述大鲵活性肽按如下方法制备：

a. 将大鲵肉匀浆，向匀浆中加入1~3倍体积pH 7~8的0.01~0.1M磷酸缓冲液及与匀浆质量比0.1~1%的复合酶，酶解12~48 h；所述复合酶为海洋碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶按活力单位比为7：3混合；

b. 离心取上清，采用截留分子量为4000 Da以下、用物理吸附法制备的胰蛋白酶固定超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体；再经过截留分子量1000Da的纳滤膜过滤，取透过纳滤膜的液体冻干。