CN112345756A - 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法 - Google Patents

肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112345756A
CN112345756A CN202011072636.9A CN202011072636A CN112345756A CN 112345756 A CN112345756 A CN 112345756A CN 202011072636 A CN202011072636 A CN 202011072636A CN 112345756 A CN112345756 A CN 112345756A
Authority
CN
China
Prior art keywords
soaking
deglycosylation
ethanol
protein
slices
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011072636.9A
Other languages
English (en)
Inventor
梅杰
刘超英
王惠宇
许隽颖
顾丁一
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuxi Peoples Hospital
Original Assignee
Wuxi Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuxi Peoples Hospital filed Critical Wuxi Peoples Hospital
Priority to CN202011072636.9A priority Critical patent/CN112345756A/zh
Publication of CN112345756A publication Critical patent/CN112345756A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明提供一种肺癌组织中PD‑L1蛋白的检测方法，采用热变性介导的去糖基化方法对PD‑L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学方法检测PD‑L1蛋白表达状态。本发明方法采用热变性介导的去糖基化可显著提高PD‑L1(使用28‑8,CAL10,SP142抗体)的阳性检出率；去糖基化检测在本底PD‑L1低检出的病例中可获得更显著的提高，综上，采用热变性介导的去糖基化检测方法可成为确定PD‑1/PD‑L1免疫检查点抑制剂治疗获益患者的重要方法。

Description

肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法
技术领域
本发明涉及一种肿瘤组织中PD-L1蛋白的检测方法，尤其涉及一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法。
背景技术
细胞程序式死亡配体1(Programmed cell death 1ligand 1，PD-L1)，也称为表面抗原分化簇274(cluster of differentiation 274，CD274)或B7同源体(B7 homolog1，B7-H1)，是人类体内的一种蛋白质，由CD274基因编码。包括肺癌在内的多种恶性肿瘤细胞通过表达PD-L1来诱导形成免疫抑制性的肿瘤微环境，逃避机体的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞免于机体免疫系统的监视和清除。研究显示PD-L1在肺癌组织中的表达水平与患者的临床病理参数及预后存在显著的相关性。PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂在肺癌患者的治疗中表现出了令人惊喜的疗效及良好的耐受性，也提示了免疫治疗可以作为一种安全而有效的治疗方式。以PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗成为肺癌的治疗领域的新焦点。
目前决定肺癌患者能否接受PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗通常取决于PD-L1的表达状态。免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)检测方法是评估肺癌组织标本中的PD-L1蛋白表达状态常用方法，该方法被认为是PD-L1检测的通行标准。此外，应用不同克隆号PD-L1抗体检测的表达状态用于不同PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂的治疗指导。但越来越多的研究显示IHC方法用于PD-L1检测仍有较多局限性，最突出的是部分PD-L1阴性的患者在接受PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗后仍有显著的疗效。因此，更精确的免疫治疗分层标准仍有待进一步探究。
PD-L1是一个过糖基化修饰蛋白。糖基化的PD-L1存在于多种类型的肿瘤细胞中，包括黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌等。PD-L1蛋白在Western blotting检测上显示出一种异质性模式：存在与肿瘤细胞中的PD-L1在50kDa的位置处出现条带，而非糖基化形式的PD-L1在33kDa的位置处出现条带。
越来越多的证据表明PD-L1糖基化在PD-1/PD-L1介导的肿瘤免疫抑制中起重要作用。近期研究显示，通过对肿瘤组织切片进行去糖基化处理，可以显著提高PD-L1(28-8)的阳性检出率，同时，PD-L1常规IHC检测阴性的患者，若去糖基化检测结果为阳性，在接受免疫治疗后仍有较好疗效。
通常，去糖基化步骤可分为有、无热变性介导的两种技术方案，其中热变性介导的方法被认为是一种更彻底的去糖基化方法。现有的文献表明通过对肿瘤组织切片进行无热变性介导的去糖基化处理，可以显著提高PD-L1(28-8)的阳性检出率。但是，热变性介导的去糖基化方案能否提高PD-L1检出率、以及不同克隆号的PD-L1抗体是否对去糖基化方案有反应目前均未有相关研究报道。
发明内容
技术问题：为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法。
技术方案：本发明提供一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，采用热变性介导的去糖基化方法对PD-L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学检测方法检测PD-L1蛋白表达状态。
优选地，所述PD-L1检测抗体包括PD-L1 28-8、PD-L1 CAL10、PD-L1 SP142。
本发明提供了一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，包括以下步骤：
(1)IHC预处理：将肺癌组织切片脱蜡、水合，具体步骤为：将切片用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡，再依次在无水乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、70％乙醇中浸泡；PBS浸洗；
(2)灭活酶：在预处理后的切片上滴加3％H2O2-甲醇溶液，室温封闭；
(3)抗原修复：将放有灭活后的切片的耐高温塑料染色架放入盛有抗原修复缓冲液的染色盒内，置于微波炉中加热；将染色盒取出浸入流水中，自然冷却；PBS浸洗；
(4)去糖基化：将抗原修复后的切片用1×糖蛋白变性缓冲液孵育，孵育后置于冰上降温；再用配置的去糖基化试剂进行去糖基化处理；PBS浸洗；
(5)封闭及抗原-抗体反应:在去糖基化的切片上滴加1％BSA,室温孵育；甩去表面液体；再滴加稀释后的一抗，4℃过夜；PBS浸洗；
(6)一抗二抗反应：在步骤(5)反应后的切片上滴加稀释后的二抗，室温湿盒孵育；PBS浸洗；
(7)显色与终止显色：在步骤(6)反应后的切片上加新鲜配制的DAB溶液；镜下观察染色深浅，染好立即终止，用自来水轻柔冲洗，再用蒸馏水终止显色反应；
(8)苏木素复染：将步骤(7)显色后的切片放入苏木素染液，染色，用蒸馏水冲洗干净；
(9)脱水封片：将步骤(8)复染后的切片依次在70％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、无水乙醇乙醇中浸泡；再用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡；在切片上加中性树胶，加盖玻片；
(10)拍照及分析：采用Aperio Digital Pathology Slide Scanners设备扫描步骤(9)封片后的切片，并采用HALO数字病理评分系统对各切片进行分析。
优选地，所述去糖基化酶试剂配方为：60μl 10X GlycoBuffer 2(P0708,NewEngland Biolabs),60μl 10％NP40(P0708,New England Biolabs),180μl H2O,15μl重组PNGase F(P0708,New England Biolabs)。
有益效果：本发明方法采用热变性介导的去糖基化可显著提高PD-L1(使用28-8,CAL10,SP142抗体)的阳性检出率；去糖基化检测在本底PD-L1低检出的病例中可获得更显著的提高，该采用热变性介导的去糖基化检测方法可成为确定PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗获益患者的重要方法。
根据相关报道，结肠癌的PD-L1表达及检出率较低，我们对结肠癌组织切片进行本底、无热变性介导的去糖基化和热变性介导的去糖基化检测，我们发现热变性介导的去糖基化检测具有更高的PD-L1检出率；之后我们发现，采用热变性介导的去糖基化检测可显著提高PD-L1(使用28-8,CAL10,SP142抗体)的阳性检出率；此外，去糖基化检测在本底PD-L1低检出的病例中可获得更显著的提高。
附图说明
图1为结肠癌组织切片本底和去糖基化PD-L1的信号强度的比较。(A)为4个PD-L1(28-8)单克隆抗体染色在去或不去糖基化情况下的样本代表性图像；(B)为本底、无热变性介导的去糖基化和热变性介导的去糖基化PD-L1检测强度的比较，无热变性介导的去糖基化可以提高PD-L1检出率，热变性介导的去糖基化更显著地提高PD-L1检出率。
图2为PD-L1在肺癌和癌旁组织中的表达及与4个抗体(28-8，CAL10，73-10，SP142)的一致性比较。(A)为4个PD-L1单克隆抗体染色的样本代表性图像；(B)为4个PD-L1单克隆抗体检测的肺癌和癌旁PD-L1表达水平，结果示肺癌组织中的PD-L1表达高于癌旁组织；(C)为4个PD-L1单克隆抗体染色H-score相关性分析的热图，可见4个抗体对PD-L1检出具有较好的一致性。
图3为组织切片去糖基化前后PD-L1的信号强度的比较。(A)为4个PD-L1单克隆抗体染色在去或不去糖基化情况下的样本代表性图像；(B)为有或无样本去糖基化的4个PD-L1单克隆抗体染色的PD-L1表达强度，可见28-8，CAL10，SP142三个抗体检出率在去糖基化处理后被显著提高；(C)PD-L1 H评分(H-score)的变化倍数值(fold change，FC)及相应病例数。
图4为本底PD-L1表达水平与去糖基化检测前后表达变化倍数的相关性分析。(A)为28-8抗体；(B)为CAL10抗体；(C)为SP142抗体。此结果表明去糖基化检测在本底PD-L1低检出的病例中可获得更显著的提高。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明，旨在帮助阅读者更好的理解本发明的实质和特点，但并不以此来限定本发明。实施例中，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器商、试剂商所建议的条件操作。除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均可从正规渠道商购获得。
肺癌组织中PD-L1蛋白的检测，采用热变性介导的去糖基化方法对PD-L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学检测方法检测PD-L1蛋白表达状态，所述PD-L1检测抗体包括PD-L1 28-8、PD-L1 CAL10、PD-L1 SP142。
下面利用一个具体实例来说明本发明的肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，包括以下步骤：
(1)IHC预处理：将肺癌组织切片脱蜡、水合，具体步骤为：将切片用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡，再依次在无水乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、70％乙醇中浸泡；PBS浸洗；
(2)灭活酶：在预处理后的切片上滴加3％H2O2-甲醇溶液300μl，室温封闭；
(3)抗原修复：将放有灭活后的切片的耐高温塑料染色架放入盛有抗原修复缓冲液的染色盒内，置于微波炉中加热；将染色盒取出浸入流水中，自然冷却；PBS浸洗；
(4)去糖基化：将抗原修复后的切片用1×糖蛋白变性缓冲液(P0708,New EnglandBiolabs)孵育(95℃，5分钟)，孵育后置于冰上降温10秒；再用配置的去糖基化试剂300μl进行去糖基化处理，去糖基化试剂配置方法：60μl 10X GlycoBuffer 2(P0708,New EnglandBiolabs),60μl 10％NP40(P0708,New England Biolabs),180μl H2O,15μl重组PNGase F(P0708,New England Biolabs)；PBS浸洗；
(5)封闭及抗原-抗体反应:在去糖基化的切片上滴加1％BSA 300μl,室温孵育；甩去表面液体；再滴加稀释后的一抗300μl，4℃过夜；PBS浸洗；
(6)一抗二抗反应：在步骤(5)反应后的切片上滴加稀释后的二抗300μl，室温湿盒孵育；PBS浸洗；
(7)显色与终止显色：在步骤(6)反应后的切片上加新鲜配制的DAB溶液(DM817，Dako)300μl；镜下观察染色深浅，染好立即终止，用自来水轻柔冲洗，再用蒸馏水终止显色反应；
(8)苏木素复染：将步骤(7)显色后的切片放入苏木素染液(K8008，Dako)300μl，染色，用蒸馏水冲洗干净；
(9)脱水封片：将步骤(8)复染后的切片依次在70％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、无水乙醇乙醇中浸泡；再用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡；在切片上加中性树胶，加盖玻片；
(10)拍照及分析：采用Aperio Digital Pathology Slide Scanners设备扫描步骤(9)封片后的切片，并采用HALO数字病理评分系统对各切片进行分析。
表1使用的抗体、稀释浓度及抗原修复液
Figure BDA0002715563120000051
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，其特征在于：采用热变性介导的去糖基化方法对PD-L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学检测方法检测PD-L1蛋白表达状态。
2.根据权利要求1所述的肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，其特征在于：所述PD-L1检测抗体包括PD-L1 28-8、PD-L1 CAL10、PD-L1 SP142。
3.肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)IHC预处理：将肺癌组织切片脱蜡、水合，具体步骤为：将切片用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡，再依次在无水乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、70％乙醇中浸泡；PBS浸洗；
(2)灭活酶：在预处理后的切片上滴加3％H2O2-甲醇溶液，室温封闭；
(3)抗原修复：将放有灭活后的切片的耐高温塑料染色架放入盛有抗原修复缓冲液的染色盒内，置于微波炉中加热；将染色盒取出浸入流水中，自然冷却；PBS浸洗；
(4)去糖基化：将抗原修复后的切片用1×糖蛋白变性缓冲液孵育，孵育后置于冰上降温；再用配置的去糖基化试剂进行去糖基化处理；PBS浸洗；
(5)封闭及抗原-抗体反应:在去糖基化的切片上滴加1％BSA,室温孵育；甩去表面液体；再滴加稀释后的一抗，4℃过夜；PBS浸洗；
(6)一抗二抗反应：在步骤(5)反应后的切片上滴加稀释后的二抗，室温湿盒孵育；PBS浸洗；
(7)显色与终止显色：在步骤(6)反应后的切片上加新鲜配制的DAB溶液；镜下观察染色深浅，染好立即终止，用自来水轻柔冲洗，再用蒸馏水终止显色反应；
(8)苏木素复染：将步骤(7)显色后的切片放入苏木素染液，染色，用蒸馏水冲洗干净；
(9)脱水封片：将步骤(8)复染后的切片依次在70％乙醇中浸泡、85％乙醇中浸泡、95％乙醇中浸泡、无水乙醇乙醇中浸泡；再用二甲苯浸泡，更换二甲苯后再浸泡；在切片上加中性树胶，加盖玻片；
(10)拍照及分析：采用Aperio Digital Pathology Slide Scanners设备扫描步骤(9)封片后的切片，并采用HALO数字病理评分系统对各切片进行分析。
4.根据权利要求3所述的肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，其特征在于：所述去糖基化酶试剂配方为：60μl 10X GlycoBuffer 2(P0708,New England Biolabs),60μl 10％NP40(P0708,New England Biolabs),180μl H2O,15μl重组PNGase F(P0708,New EnglandBiolabs)。
CN202011072636.9A 2020-10-09 2020-10-09 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法 Pending CN112345756A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011072636.9A CN112345756A (zh) 2020-10-09 2020-10-09 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011072636.9A CN112345756A (zh) 2020-10-09 2020-10-09 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112345756A true CN112345756A (zh) 2021-02-09

Family

ID=74360562

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011072636.9A Pending CN112345756A (zh) 2020-10-09 2020-10-09 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112345756A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115290895A (zh) * 2022-02-21 2022-11-04 武汉百英诺生物科技有限公司 人pd-l1蛋白第162位赖氨酸的甲基化修饰在预测恶性肿瘤免疫治疗敏感性的应用
CN115541872A (zh) * 2022-09-22 2022-12-30 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） 一种pd-l1检测试剂盒及其检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08228795A (ja) * 1994-12-27 1996-09-10 Nakano Vinegar Co Ltd 糖鎖分析用試料の調製方法及び該試料を用いた診断方法
CN106604930A (zh) * 2014-05-30 2017-04-26 新英格兰生物实验室公司 去糖基化试剂和方法
CN109669040A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 一种用于增强pd-l1单克隆抗体使用效果的抗体稀释液及其使用方法
WO2019237012A1 (en) * 2018-06-07 2019-12-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Detection of immune checkpoint molecules by deglycosylation
CN111006928A (zh) * 2019-12-26 2020-04-14 武汉三鹰生物技术有限公司 一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08228795A (ja) * 1994-12-27 1996-09-10 Nakano Vinegar Co Ltd 糖鎖分析用試料の調製方法及び該試料を用いた診断方法
CN106604930A (zh) * 2014-05-30 2017-04-26 新英格兰生物实验室公司 去糖基化试剂和方法
WO2019237012A1 (en) * 2018-06-07 2019-12-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Detection of immune checkpoint molecules by deglycosylation
CN109669040A (zh) * 2018-12-14 2019-04-23 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 一种用于增强pd-l1单克隆抗体使用效果的抗体稀释液及其使用方法
CN111006928A (zh) * 2019-12-26 2020-04-14 武汉三鹰生物技术有限公司 一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANTHONY L. TARENTINO, ET AL.: "Deglycosylation of Asparagine-Linked Glycans by Peptide:N-Glycosidase F", 《BIOCHEMISTRY》 *
DAVID S. ETTINGER, MD, ET AL.: "Non–Small Cell Lung Cancer，Version 1.2020 Featured Updates to the NCCN Guidelines.", 《JOURNAL OF THE NATIONAL COMPREHENSIVE CANCER NETWORK》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115290895A (zh) * 2022-02-21 2022-11-04 武汉百英诺生物科技有限公司 人pd-l1蛋白第162位赖氨酸的甲基化修饰在预测恶性肿瘤免疫治疗敏感性的应用
WO2023155896A1 (zh) * 2022-02-21 2023-08-24 武汉百英诺生物科技有限公司 人pd-l1蛋白第162位赖氨酸的甲基化修饰在预测恶性肿瘤免疫治疗敏感性的应用
CN115541872A (zh) * 2022-09-22 2022-12-30 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） 一种pd-l1检测试剂盒及其检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Delellis et al. Immunoperoxidase technics in diagnostic pathology: report of a workshop sponsored by the National Cancer Institute
US8911951B2 (en) Plasma kallikrein fragments as diagnostic biomarkers for lung cancers
Jackson et al. Immunohistochemical techniques
O’brien et al. Immunocytochemical Localization of Carcinoembryonic Antigen in Benign and Malignant Colorectal Tissues: Assessment of Diagnostic Value.
US9618512B2 (en) Biomarker for breast cancer
US5895748A (en) Panel of antibodies for detecting cadherins and catenins in tissues and method of using the panel of antibodies
CN110007082B (zh) Icosl蛋白在制备乳腺癌预后评估试剂盒中的应用
CN112345756A (zh) 肺癌组织中pd-l1蛋白的检测方法
WO2010033597A2 (en) Methods for detecting overexpression of sparc and therapeutic and diagnostic methods relating to same
CN102687011A (zh) 癌症生物标志物及其应用
WO2014100220A2 (en) Antibody cocktail systems and methods for classification of histologic subtypes in lung cancer
Boran et al. Reliability of the 34βE12, keratin 5/6, p63, bcl-2, and AMACR in the diagnosis of prostate carcinoma
US5591595A (en) Detection of complexes which include basement membrane components as diagnostic of cancer and other diseases
Tsubura et al. Immunohistochemical demonstration of keratins 8 and 14 in benign tumours of the skin appendage
CN113281515A (zh) 一种tipe3免疫组织化学检测试剂盒及其使用方法和应用
CN111679077A (zh) 肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
EP3762726A1 (en) A method of detecting magea4
CN112649614A (zh) Cd8+肿瘤浸润淋巴细胞作为标志物在食管小细胞癌预后判断中的应用
Umemura et al. Utility of immunohistochemistry in breast cancer practice
CN116718779A (zh) 一种提高pd-l1检测灵敏度的方法及其应用
CN110095605B (zh) 一种肺癌的筛查试剂盒
CN114062676B (zh) 一种用于防伪的抗体试剂缓冲液及其应用
CN113607534B (zh) 一种染色方法、试剂盒及应用
CN104515847B (zh) 尿液铁蛋白轻链和重链的应用
Tao et al. Direct chemiluminescent imaging detection of human serum proteins in two‐dimensional polyacrylamide gel electrophoresis

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination