CN112345671B - 一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法 - Google Patents

一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于腹膜透析液技术领域，具体涉及一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，包括如下步骤：步骤1，配制混合对照品溶液；步骤2，配制丙酮酸钠对照品溶液；步骤3，配制乳酸钠对照品溶液；步骤4，配制供试品溶液；步骤5，高效液相色谱法测定。本发明方法操作简单，可以快捷准确的检测出乳酸盐型腹膜透析液中的丙酮酸盐，流动相中加入500mg/L的EDTA钙盐，色谱柱改为Aglient Hi‑Plex Ca柱(300×7.7mm，8μm)，流速改为0.3ml/min、流动相改为0.002mol/L的硫酸溶液，改变流速和流动相的pH，可以保护钙基色谱柱和防止与样品中糖的置换，改善了因和树脂表面上的钙离子的正电荷之间的相互作用相似的成分分离，改善了丙酮酸盐与葡萄糖以及其他杂质的分离度。

Description

一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法
技术领域
本发明属于腹膜透析液技术领域，具体涉及一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法。
背景技术
乳酸盐型腹膜透析液为复方制剂，是葡萄糖、氯化钠、氯化钙、氯化镁和乳酸钠的灭菌水溶液，临床上主要用于治疗急性或慢性肾功能衰竭、药物中毒、顽固性心力衰竭、严重电解质紊乱等。
葡萄糖和乳酸钠是有机化合物，在生产、储存和运输过程中均有可能发生降解，从而影响乳酸盐型腹膜透析液的质量，而已知的5-羟甲基糠醛是葡萄糖在高温条件下脱水产生的一个杂质，已经进行了有效控制；果糖是葡萄糖在高温或强碱条件下生成的同分异构体，渗透压调节作用一致，因此与葡萄糖疗效一致。在研究过程中，对乳酸盐型腹膜透析液及其有机原料葡萄糖和乳酸钠进行杂质分析时，发现会有新的降解杂质-丙酮酸盐生成，为了保证乳酸盐型腹膜透析液的质量，需要对丙酮酸盐进行控制。
目前对丙酮酸盐的检测用氨基柱进行测定，但在此条件下，乳酸盐型腹膜透析液中的乳酸盐和丙酮酸盐的位置重合，很难分离；还可以用气相色谱分析，但是需要衍生后再测定，方法繁琐。因此，在药品领域缺少能够简便、快捷、准确检测乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的方法，难于对乳酸盐型腹膜透析液的质量进行控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法。
本发明的实现过程如下：
一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，包括如下步骤：
步骤1，配制混合对照品溶液
分别精密称取无水葡萄糖对照品、果糖对照品、麦芽糖对照品、麦芽三糖对照品和丙酮酸钠对照品各适量，用流动相稀释制成葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽三糖和丙酮酸钠的混合对照品溶液；
步骤2，配制丙酮酸钠对照品溶液
精密称取丙酮酸钠对照品适量，用流动相稀释制成丙酮酸钠对照品溶液；
步骤3，配制乳酸钠对照品溶液
精密称取乳酸钠对照品适量，用流动相稀释制成乳酸钠对照品溶液；
步骤4，配制供试品溶液
取乳酸盐型腹膜透析液直接进样；
步骤5，高效液相色谱法测定
精密量取步骤1-步骤4中配制的溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；
其中，色谱条件为色谱柱：Aglient Hi-Plex Ca柱，300×7.7mm，8μm；流动相：500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液。
进一步，步骤1中，每1ml混合对照品溶液中含葡萄糖15mg、果糖300μg、麦芽糖100μg、麦芽三糖100μg和丙酮酸钠3μg。
进一步，步骤2中，每1ml丙酮酸钠对照品溶液中含丙酮酸钠10μg。
进一步，步骤3中，每1ml乳酸钠对照品溶液中含乳酸钠2mg。
进一步，步骤5中，流速：0.3ml/min；柱温：85℃；以示差折光检测器测定，检测池温度：40℃；进样量：20μl。
进一步，500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为：称取EDTA钙盐500mg，加0.002mol/L硫酸溶液使溶解成1000ml，过滤，即得500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液；其中，0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为取浓硫酸0.12ml，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000ml得到0.002mol/L硫酸溶液。
本发明方法中，EDTA钙盐全称为乙二胺四乙酸二钠钙。
本发明的积极效果：
(1)采用本发明方法，可以将丙酮酸盐和乳酸盐很好的分离。
(2)本发明方法操作简单，可以快捷准确的检测出乳酸盐型腹膜透析液中的丙酮酸盐。
(3)流动相中加入500mg/L的EDTA钙盐，可以保护钙基色谱柱和防止与样品中糖的置换。
(4)色谱柱改为Aglient Hi-Plex Ca柱(300×7.7mm，8μm)，该色谱柱的分离原理是基于配体交换反应。乳酸分子上的羟基被去质子化，从而带上一个很强的负电荷，与树脂表面上的钙离子的正电荷之间的相互作用使乳酸钠被保留，从而达到分离，改善了乳酸和丙酮酸因极性相似而不容易分离的问题。
(5)流速改为0.3ml/min、流动相改为0.002mol/L的硫酸溶液，改变流速和流动相的pH，改善了因和树脂表面上的钙离子的正电荷之间的相互作用相似的成分分离，改善了丙酮酸盐与葡萄糖以及其他杂质的分离度。
(6)柱温改为85℃，提高了分辨率，同时降低了因流动相的粘度而带来的高压，有利于保护色谱柱。
(7)本发明通过高效液相色谱法对乳酸盐型腹膜透析液中的丙酮酸盐进行检测，从而对乳酸盐型腹膜透析液的质量进行控制，有利于优化工艺，提高产品质量和安全性。
附图说明
图1为流动相色谱图；
图2为丙酮酸钠对照品溶液定位色谱图；
图3为乳酸钠对照品溶液定位色谱图；
图4为混合对照品溶液色谱图；
图5为供试品溶液色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，包括如下步骤：
步骤1，配制混合对照品溶液
分别精密称取无水葡萄糖对照品、果糖对照品、麦芽糖对照品、麦芽三糖对照品和丙酮酸钠对照品各适量，用流动相稀释制成葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽三糖和丙酮酸钠的混合对照品溶液；每1ml混合对照品溶液中含葡萄糖15mg、果糖300μg、麦芽糖100μg、麦芽三糖100μg和丙酮酸钠3μg。
步骤2，配制丙酮酸钠对照品溶液
精密称取丙酮酸钠对照品适量，用流动相稀释制成丙酮酸钠对照品溶液；每1ml丙酮酸钠对照品溶液中含丙酮酸钠10μg。
步骤3，配制乳酸钠对照品溶液
精密称取乳酸钠对照品适量，用流动相稀释制成乳酸钠对照品溶液；每1ml乳酸钠对照品溶液中含乳酸钠2mg。
步骤4，配制供试品溶液
取乳酸盐型腹膜透析液直接进样；
步骤5，高效液相色谱法测定
精密量取步骤1-步骤4中配制的溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；
其中，色谱条件为色谱柱：Aglient Hi-Plex Ca柱，300×7.7mm，8μm；流动相：500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液；流速：0.3ml/min；柱温：85℃；以示差折光检测器测定，检测池温度：40℃；进样量：20μl。500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为：称取EDTA钙盐500mg，加0.002mol/L硫酸溶液使溶解成1000ml，过滤，即得500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液；其中，0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为取浓硫酸0.12ml，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000ml得到0.002mol/L硫酸溶液。
对本实例的方法进行方法学验证：
(一)专属性：取流动相、丙酮酸钠对照品溶液、乳酸钠对照品溶液和混合对照品溶液进行测定，结果见表1，色谱图见图1-图4。
表1专属性结果
Figure BDA0002833179950000041
由表1实验结果表明：流动相不干扰样品检测；乳酸钠和丙酮酸钠的保留时间相差很大，乳酸钠和丙酮酸钠能完全分离；混合对照品溶液中各杂质峰之间的分离度都大于1.0，各杂质能完全分离，该方法专属性良好。
(二)检测限：以信噪比3:1为标准，测得丙酮酸盐的检测限为0.04μg/ml。
(三)定量限：以信噪比10:1为标准，测得丙酮酸盐的检测限为0.1μg/ml。
(四)系统适用性：平行配制6份相同浓度的丙酮酸钠对照品溶液进行测定，结果见表2。
表2系统适用性结果
Figure BDA0002833179950000051
由表2实验结果表明：平行配制6份相同浓度的丙酮酸钠对照品溶液的保留时间和峰面积的RSD均小于1.0％，该方法系统适用性良好。
(五)重复性：平行配制6份供试品溶液进行测定，结果见表3。
表3重复性结果
Figure BDA0002833179950000052
由表3实验结果表明：平行测定6份供试品溶液，丙酮酸钠峰面积的RSD小于1.0％，该方法重复性良好。编号1的供试品溶液的色谱图见图5。
(六)溶液稳定性：分别取丙酮酸钠对照品溶液和供试品溶液，室温放置，分别于0h、6h、12h和24h进行测定，计算丙酮酸钠峰面积的RSD，结果见表4。
表4溶液稳定性结果
Figure BDA0002833179950000053
由表4实验结果表明：丙酮酸钠对照品溶液和供试品溶液在室温下放置24h，丙酮酸钠峰面积的RSD均小于2.0％，说明在24小时内丙酮酸钠对照品溶液和供试品溶液稳定性良好。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作出的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施仅限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干简单推演或替换，都应该视为属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，配制混合对照品溶液
分别精密称取无水葡萄糖对照品、果糖对照品、麦芽糖对照品、麦芽三糖对照品和丙酮酸钠对照品各适量，用流动相稀释制成葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽三糖和丙酮酸钠的混合对照品溶液；
步骤2，配制丙酮酸钠对照品溶液
精密称取丙酮酸钠对照品适量，用流动相稀释制成丙酮酸钠对照品溶液；
步骤3，配制乳酸钠对照品溶液
精密称取乳酸钠对照品适量，用流动相稀释制成乳酸钠对照品溶液；
步骤4，配制供试品溶液
取乳酸盐型腹膜透析液直接进样；
步骤5，高效液相色谱法测定
精密量取步骤1-步骤4中配制的溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；
其中，色谱条件为色谱柱：Aglient Hi-Plex Ca柱，300×7.7mm，8μm；流动相：500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液，流速：0.3ml/min；柱温：85℃；以示差折光检测器测定，检测池温度：40℃。
2.根据权利要求1所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于：步骤1中，每1ml混合对照品溶液中含葡萄糖15mg、果糖300μg、麦芽糖100μg、麦芽三糖100μg和丙酮酸钠3μg。
3.根据权利要求1所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于：步骤2中，每1ml丙酮酸钠对照品溶液中含丙酮酸钠10μg。
4.根据权利要求1所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于：步骤3中，每1ml乳酸钠对照品溶液中含乳酸钠2mg。
5.根据权利要求1所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于：步骤5中，进样量：20μl。
6.根据权利要求1所述乳酸盐型腹膜透析液中丙酮酸盐的测定方法，其特征在于：500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为：称取EDTA钙盐500mg，加0.002mol/L硫酸溶液使溶解成1000ml，过滤，即得500mg/L的EDTA钙盐的0.002mol/L硫酸溶液；其中，0.002mol/L硫酸溶液的配制过程为取浓硫酸0.12ml，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000ml得到0.002mol/L硫酸溶液。
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