CN112336715A - 大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用 - Google Patents

大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用，属于杀菌剂技术领域。本发明首次发现了大花旋覆花素能够有效的抑制猪胸膜肺炎放线杆菌。同时，本发明首次发现大花旋覆花素能够破除猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜。除此之外，本发明首次发现大花旋覆花素能够抑制猪胸膜肺炎放线杆菌对于猪肺上皮细胞的黏附。因此，可将大花旋覆花素用于制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病的药物。

Description

大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的 应用
技术领域
本发明涉及杀菌剂技术领域，尤其涉及大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用。
背景技术
随着抗生素在临床上的广泛应用，越来越多的病原菌对抗生素产生了耐药性。病菌的耐药性给畜禽养殖造成了严重的损失。如何有效的对抗细菌感染已经成为世界各国所共同关注的问题，抗生素的替代策略也引起人类的广泛关注。
猪胸膜肺炎放线杆菌病也被称之为猪传染性胸膜肺炎，是由猪肺炎放线杆菌所引起的危害集约化猪场的呼吸道疾病之一，其以胸膜炎和肺炎症状及病变为主要特征。由于该病通常是急性发病因此会迅速引起感染猪的呼吸困难甚至引起猪的快速死亡，因此给养猪业造成巨大的经济损失。目前，针对猪胸膜放线杆菌病的治疗多是采用抗生素进行治疗，极易引起细菌产生耐药性，因此选择可以替代抗生素的药物显得尤为重要。
大花旋覆花素是由大花旋覆花中提取的一种天然植物提取物。目前，关于大花旋覆花素的研究相对较小，已经发现的生物功能主要包括抗炎，抗过敏，抗肿瘤等作用。但是，关于大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌的抑制尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的用途。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了大花旋覆花素在抑制猪胸膜肺炎放线杆菌中的应用。
优选地，所述大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度为62.5ug/ml。
优选地，所述大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌的最小杀菌浓度为125ug/ml。
此外，本发明提供了大花旋覆花素在制备抑制猪胸膜肺炎放线杆菌杀菌剂中的应用。
此外，本发明提供了一种抑制猪胸膜肺炎放线杆菌的杀菌剂，所述杀菌剂的核心有效成分为大花旋覆花素。
此外，本发明提供了大花旋覆花素在制备破除猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜的杀菌剂中的应用。
此外，本发明提供了大花旋覆花素在制备降低猪胸膜肺炎放线杆菌细菌黏附的杀菌剂中的应用。
除此之外，本发明提供了大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明首先发现了大花旋覆花素能够有效的抑制猪胸膜肺炎放线杆菌；
同时，本发明首次发现大花旋覆花素能够破除猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜；
除此之外，本发明首次发现大花旋覆花素能够抑制胸膜肺炎放线杆菌对于猪肺上皮细胞的黏附。因此，可将大花旋覆花素用于制备治疗胸膜肺炎放线杆菌病的药物。
附图说明
图1胸膜肺炎放线杆菌生物被膜结晶紫染色结果图
图2 胸膜肺炎放线杆菌生物被膜吸光度结果图
图3胸膜肺炎放线杆菌黏附抑制率结果图。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1
大花旋覆花素的最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC检测
最小抑菌浓度检测
（1）实验分组为 500ug/ml，250ug/ml，125ug/ml，62.5ug/ml，31.25ug/ml，15.60ug/ml大花旋覆花素和阴性对照组ddH20；
（2）将猪胸膜肺炎放线杆菌的数量调整为2×105CFU/ml接种于96孔板中，按照实验分组添加大花旋覆花素（每组浓度重复3次），将96孔板放入培养箱中，培养24h；
（3）没有出现浑浊的孔，即为大花旋覆花素的最小抑菌浓度；
最小杀菌浓度检测
（1）将细菌继续培养24h，从没有出现浑浊的孔中吸取菌液，均匀的涂布在琼脂平板上，放入37℃培养箱中，培养36h，观察结果；
（2）细菌菌落个数不超过5的孔中的大花旋覆花素的浓度为最小杀菌浓度。
实验结果显示，大花旋覆花素的最小抑菌浓度为62.5 ug/ml，最小杀菌浓度为125ug/ml。
实施例2
大花旋覆花素的杀菌效果检测
（1）将猪胸膜肺炎放线杆菌在液体培养基中培养至OD600为1；
（2）细胞分组为大花旋覆花素（125ug/ml），阳性对照组（100ug/ml青霉素），阴性对照组ddH20；
（3）放入37℃摇床培养，分别在2h，4h, 6h, 12h和24h检测菌液的OD600值。
Figure 320156DEST_PATH_IMAGE002
从表中可以看出，大花旋覆花素对猪胸膜肺炎放线杆菌具有显著的杀菌效果，差异具有统计学意义。
实施例3
大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜的抑制效果
（1）将对数期的猪胸膜肺炎放线杆菌添加于96孔聚苯乙烯微型板中；
（2）实验分组：125ug/ml大花旋覆花素，对照组ddH2O；
（3）按照实验分组处理猪胸膜肺炎放线杆菌，将微型版培养板置于培养箱中培养24h，去除培养基，加入无菌PBS清洗；
（4）使用70%甲醇固定30min，去除固定液，加入结晶紫进行染色；
（5）染色5min后，去除染色液，用水进行清洗，并进行拍照；
（6）加入70%乙醇溶解生物被膜，并在OD570下检测吸光度。
实验结果如图1和图2所示，从图中可以看出，大花旋覆花素能够显著的抑制猪胸膜肺炎放线菌的生物被膜，差异具有统计学意义（对照组为2.117±0.156，大花旋覆花素为0.113±0.055，P< 0.0001）。
实施例4
大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌细菌黏附的抑制作用
（1）将猪肺上皮细胞SJPL接种于24孔板中，加入62.5 ug/ml大花旋覆花素，125ug/ml大花旋覆花素和空白组（每个处理设置3个重复）；
（2）加入1×108CFU/ml猪胸膜肺炎放线杆菌，放入细胞培养箱中培养6h；
（3）去除上清，使用PBS轻轻的洗孔3次，洗去未黏附的细胞；
（4）每孔加入200ul 0.1% Triton-X100,轻摇混匀后，室温放置15min使细胞充分裂解，收集孔中的液体；
（5）经生理盐水梯度稀释后进行平板菌落计数；
（6）黏附抑制率（%）=（空白组细菌菌落数-实验组细菌菌落数）/空白组细菌菌落数×100%。
实验结果如图3所示，从图中可以看出，62.5 ug/ml大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌对于猪肺上皮细胞SJPI黏附的抑制作用是40.67±1.528；125ug/ml大花旋覆花素的黏附抑制作用为78.33±2.517。上述结果说明大花旋覆花素能够显著的抑制猪胸膜肺炎放线杆菌对于猪肺上皮细胞的黏附作用，从而降低猪感染猪胸膜肺炎放线杆菌病的概率。
本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述，当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.大花旋覆花素在抑制猪胸膜肺炎放线杆菌中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度为62.5ug/ml。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大花旋覆花素对于猪胸膜肺炎放线杆菌的最小杀菌浓度为125ug/ml。
4.大花旋覆花素在制备抑制猪胸膜肺炎放线杆菌杀菌剂中的应用。
5.一种抑制猪胸膜肺炎放线杆菌的杀菌剂，其特征在于，所述杀菌剂的核心有效成分为大花旋覆花素。
6.大花旋覆花素在制备破除猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜的杀菌剂中的应用。
7.大花旋覆花素在制备降低猪胸膜肺炎放线杆菌细菌黏附的杀菌剂中的应用。
8.大花旋覆花素在制备治疗猪胸膜肺炎放线杆菌病药物中的应用。
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