CN102462703B - 木蹄层孔菌子实体的两种提取物的抑菌活性研究 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及木蹄层孔菌的两种提取物的抑菌活性及其二者内部的相关抑菌活性成分，研究表明这两种提取物对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538等多种致病菌有明显的抑制作用，其中活性成分确定为大极性成分。属于中药有效成分提取制备及其在医药和防腐剂领域的应用。这两种提取物及其活性成分可用于预防和治疗由细菌引起的各种疾病。
Description
技术领域：
本发明公开了木蹄层孔菌子实体的两种提取物的抑菌活性，研究表明这两种提取物大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538具有较好的抑制作用，并且确定该菌具有抑制细菌的活性成分为极性大的成分，存在于其甲醇和水两种提取物中。属于中药有效成分提取制备及其在医药和保健品领域中的应用。
背景技术：
随着广谱抗生素的广泛应用，耐药致病真菌和致病细菌不断增多，医学界一直致力于寻找安全有效的抗菌药物。我国的药用真菌资源非常丰富，药用真菌中存在很多活性强、毒性低的有效成分，对常见致病菌有一定的抑菌、杀菌作用，对治疗和预防疾病起着重要作用。本发明选用常见的致病细菌大肠杆菌ATCC 8099、金黄色葡萄球菌ATCC 6538分别为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，且大肠杆菌是人和动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内，致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品等引起疫病流行，是最常见的泌尿道感染病原菌。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可以找到，并且是人类化脓感染中最常见的病原菌，常引起疖、痈和毛囊炎等皮肤感染。选择以上菌种有普遍代表性。对木蹄层孔菌子实体的甲醇提取物和水提物进行体外抑菌活性的研究，为进一步开发和研究新型临床抗菌药物奠定了基础。
发明内容：
本发明公开了木蹄层孔菌子实体的两种提取物的抑菌活性，这两种提取物能够明显地杀伤细菌。
按药剂学方法，可以将本发明木蹄层孔菌中两种提取物经过进一步分离制成多种临床药物剂型作为治疗细菌引起的疾病的药物，所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型
本发明的药物含有疗效有效量的这两种提取物中的大极性成分确定为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上述的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体。
本发明可以组合物的形式通过口服、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分与一种或多种载体或药物组合，制成所需剂型。本发明公开了这种提取物的具体提取方法，梯度提取法，见附图。
下述的药理实验证实了这两种提取物具有治疗和预防细菌引起的疾病的药理活性。
木蹄层孔菌子实体的两种提取物的抑菌活性的检测
摘要方法：采用滤纸扩散法和平板涂布法检测这两种化合物的体外抑菌活性和最小抑菌浓度(MIC值)。结果：①结果表明甲醇提取物浓度为50mg·ml-1时，对大肠杆菌ATCC 8099抑菌作用最强，抑菌率最高可达到99.39％；水提取物当浓度为100mg·ml-1时，对金黄色葡萄球菌ATCC 6538的抑制作用最强，抑菌率最高可达到95.54％。结论：这两种提取物具有较好的抑菌活性，能够明显地杀伤细菌细胞。
1材料
1.1药物：木蹄层孔菌(Fomes fomentarius)子实体的甲醇提取物和水提取物。阿米卡星、庆大霉素、氯霉素、头孢曲松购于吉林大药房。
1.2菌种：致病性大肠杆菌(ATCC 8099)、致病性金黄色葡萄球菌(ATCC6538)，来自吉林农业大学动物科学学院。
1.3仪器：高压灭菌锅(YXQ-LS-5OS II)，上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品；二氧化碳细胞培养箱(HH·CP-01W)，上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品；医用型洁净工作台(DL-CJ-1N)，北京东联哈尔仪器制造有限公司产品；水浴恒温振动器(SHA-CA)，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司产品。
2方法和结果
2.1方法
2.1.1体外抑菌方法：在无菌条件下将大肠杆菌ATCC8099、金黄 色葡萄球菌ATCC6538菌液均匀涂在MHA培养基上，用直径为7mm的圆形滤纸片蘸取供试溶液和阳性药，间隔并均匀放在涂有菌液的培养基上，每组做5个平行，放入二氧化碳培养箱中(37℃)培养16～18h。观察并采用十字交叉法测量抑菌圈直径，记录数据，实验数据采用SPSS方差分析，列表统计。所得数据均以均值(X)±标准差(SD)来表示。
抑菌率的计算公式：
实验数据用 
表示，并采用SPSS 18.0for Windows统计软件进
行分析。P＜0.05说明在统计学上呈显著差异，P＜0.01说明在统计学上呈极显著差异。
2.1.2最低抑菌浓度(MIC)测定：采用试管二倍稀释法测，用MH液体培养基(2mL/管)将药物对倍稀释成系列浓度每个浓度3个重复管，然后加入0.1mL菌液。在37℃培养箱中培养24h，以混浊度为指标检查该管中有无细菌生长，眼观选出不显示混浊试管，分别取其液体涂布于琼脂平板培养基上，于恒温培养箱培养24h，观察结果。琼脂平板上无细菌生长而含药液浓度最低者，即为该种药物对该菌株的最低抑菌浓度。
2.2结果
2.2.1体外抑菌实验和最低抑菌浓度测定
2.2.1.1对大肠杆菌ATCC8099的抑制作用
木蹄层孔菌子实体甲醇提取物与其他5个层的提取物相比，对大肠杆菌ATCC 8099的抑制作用最强，且成量效关系。甲醇提取物的三个浓度对大肠杆菌ATCC 8099的抑制作用与对照组相比均有极显著差异(P＜0.01)，当浓度为50mg·ml-1时，抑菌活性最强，抑菌率
为99.39％，最小抑菌浓度(MIC)25mg·ml-1。
结果如表1、3所示。
表1各提取物对大肠杆菌ATCC8099的抑菌效应(X±SD)(n＝5)
2.2.1.2对金黄色葡萄球菌ATCC6538的抑制作用
浓度为100mg·ml-1的水提物、50mg·ml-1的甲醇提取物均对金黄色葡萄球菌ATCC6538有较高的抑菌作用。抑菌率分别为95.54％、95.10％，最小抑菌浓度(MIC)分别为50mg·ml-1、25mg·ml-1。
结果如表2、3所示。
表2各提取物对金黄色葡萄球菌ATCC 6538的抑菌效应(X±SD)(n＝5)
表3各提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)测定
3结论
由以上结果可知，这两种提取物物能够抑制大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538的生长，并且有显著性，确定这两种提取物中的抑菌活性成分为大极性的成分。
上述实验结果表明，木蹄层孔菌子实体的两种提取物对细菌具有预防治疗作用。因此，可用于预防治疗细菌引起的疫病及其功能性保健品的应用。
附图说明：附图为说明书中说明的本发明公开的这种提取物的具体提取方法，方法的名称为梯度提取法。
Claims (2)
1.木蹄层孔菌子实体水提物、甲醇提取物在制备抑菌药物中的用途，其特征在于所述水提取物、甲醇提取物的制备方法为木蹄层孔菌子实体用石油醚34℃提取III次，残渣用氯仿58℃提取III次，残渣用乙酸乙酯60℃提取III次，残渣用丙酮58℃提取III次，残渣用甲醇60℃提取III次合并浓缩得到甲醇提取物，残渣继续用水60℃提取III次合并浓缩得到水提取物。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所说的药物是任何一种药剂学上所说的剂型。
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| 刘菊香等.木蹄层孔菌多糖分离纯化及其结构初步鉴定.《食品科学》.2009,第30卷(第24期),80-83. |
| 木蹄层孔菌多糖分离纯化及其结构初步鉴定;刘菊香等;《食品科学》;20091231;第30卷(第24期);80-83 * |
| 木蹄层孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响;高慧灵等;《南方医科大学学报》;20090320;第29卷(第03期);458-461 * |
| 高慧灵等.木蹄层孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响.《南方医科大学学报》.2009,第29卷(第03期),458-461. |
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