CN112335547A - 一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，包括如下步骤：选择组培植物苗：选择帝王类植物中的至少一种作为组培植物苗；培育组培植物苗：将选好的组培植物苗进行无菌处理后，进行诱导，得到无菌材料的丛生芽团，然后对诱导好的芽团进行微生物检测，经过微生物检测后得到无菌芽团，再进一步培育；选择组培微瓶景容器：容器包括容器主体和盖体，盖体包括外层该和内层塞，内层塞设有透气区，所述透气去设置透气膜；培育组培微瓶景：先配制组培微瓶景基质，然后栽培帝王类组培微瓶景。与传统技术相比，本发明首次系统提出组培微瓶景理念，利用组培技术给合微型瓶景，形成组培微瓶景，观赏周期可达2‑3年。

Description

一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法

技术领域

本发明涉及一种植物的栽培方法，特别是涉及一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法。

背景技术

所谓“微瓶景”，即把若干种植物植入加盖玻璃/透明容器内种植，经巧妙的构思布置成型花园的形式，就形成微瓶景。

近年随着市场的多元化需求，常规微瓶景受到市场喜欢，但其细菌、病毒等微生物，不宜在家中随意放置，观赏期相对较短，通常1～5个月。

帝王类(Philodendron SPP)植物属天南星科蔓绿绒属总称，木质攀援植物。茎干节间短，叶片似茎生，节间常生有许多不定根，单叶互生，叶片巨大，常呈莲座状簇生于茎顶，叶片有光泽，宽披针形，基部心形，尖端常微下垂。佛焰苞花序腋生。品种叶片有绿色、黄色、红褐色、花斑等多种色彩，具有很强的观赏性，尤其是喜荫环境。通常是作为室内中大盆栽植物攀沿柱状盆栽植物观赏使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用组培技术给合微型瓶景，形成组培微瓶景，克服现有常规微瓶景观赏期短等问题。

为了达成上述目的，本发明的技术方案是：

一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

选择组培植物苗：选择帝王类植物中的至少一种作为组培植物苗；

培育组培植物苗：将选好的组培植物苗进行无菌处理后，进行诱导，得到无菌材料的丛生芽团，然后对诱导好的芽团进行微生物检测，经过微生物检测后得到无菌芽团，经检测的无菌芽团进一步培育，得到组培无菌丛生芽团；

选择组培微瓶景容器：容器包括容器主体和盖体，盖体包括外层该和内层塞，所述外层盖与所述容器主体螺合在一起，所述内层塞与所述容器主体的开口相紧配，所述内层塞设有透气区，所述透气去设置透气膜；

培育组培微瓶景：先配制组培微瓶景基质，然后栽培帝王类组培微瓶景。

进一步地，在微生物检测过程中，将芽团切成单芽/团，然后接入改良的MS培养基进行增殖培育，其中，该改良的MS培养基添加有蛋白胨100～200mg/L、6-BA 0.01-2.0mg·L^-1、IAA 0.01-2.0mg·L^-1、蔗糖25～30g·L^-1和卡拉胶3.5～6.5g·L^-1。

进一步地，在组培无菌丛生芽团的培育过程中，将经过细菌检测的无菌芽团切成2～3芽/团，高度控制在10～15mm,超过高度的部分需要将顶部叶片去掉保留高度15mm，接种在改良的MS培养基，改良的MS培养基中含有500mg的NH₄NO₃，并添加6-BA 0.01～1.0mg/L、IAA 0.01-1.0mg/L、蔗糖15～25g/L和卡拉胶4.5～6.5g/L，改良的MS培养基的pH值5.7。

进一步地，在组培无菌丛生芽团的培育过程中，培养条件为：温度20±0.50℃，光照12±1H/D,光强35.75-85μmol/m²/s,光源LED组合光源6W：4R：1FR，,培养周期4～5周。

进一步地，在配制组培微瓶景基质时，加入KNO₃ 800mg、6-BA0.01-0.1mg·L^-1和NAA0.01～0.2mg/L，进一步加入蔗糖10～20g·L^-1和PPP333 0.01～0.5mg/L，然后添加食用色素10～50mg/L，溶解后加入凝固剂卡拉胶和低酰结冷胶共2.0～5.0g/L，并调整pH值至5.5～6.5。

进一步地，在栽培帝王类组培微瓶景时，将培育好的无菌丛生芽团在无菌条件下，接种栽培至组培微瓶景基质中，将栽培好植物的容器，放置在环境20～25℃，RH30～60％，光强在20～60umol/m²/s培养3～5W，待其植株生长出新叶或新芽，且有时新根系长出，植物正常生长，基质透明性好，形成一个完整的观赏体，观赏周期可达到2～3年。

进一步地，透气膜采用PTFE电子膜。

采用上述技术方案后，本发明一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，具有以下有益效果：

A、系统选用帝王类植物，经过组培技术培养后，丛生性强，紧凑，具有多种叶色搭配，其观赏性好，适宜室内弱光的环境观赏。

B、通过特定组培技术将帝王类植物丛生芽团培育成无病害、无污染的且获得性状一致的植株，可批量生产。

C、经过特定内生菌检测培养植物内生菌检测流程，保证瓶景内观察植物无菌生长，确保2～3年稳定生长，保证观观赏的稳定性。

D、瓶景容器选用双层盖，内盖透气膜，外盖保持与容器口美观性，起到防止病菌通过外盖直接进入容器内污染，同时还减少植株水分及营养的蒸发，可保证植物合理的生长需要，延长观赏期限和效果。

E、生长抑制剂PPP333、食用色素与凝固剂结合，保证基质的均一透明且具有多种色彩，在整个生长过程中形成稳定的基质，随着时间的推移，其组培的瓶景观赏效果不同，也可观察到植物在其生长、长叶、长芽的全过程。

F、将帝王类植物通过现代植物组培技术较系统组培微瓶景中，整个微瓶景内洁净、无病虫害、无微生物，提升了可放置区域，

G、系统将帝王类多种植物利用组培技术与微盆景相结合，通过特定培养基的控制和容器的协调组培，可放置室内弱光常温条件下观赏期24～36个月，并观察到植物生长的生长流程。

F、第一次系统提出组培微瓶景理念，也为其它植物的组培微瓶景提供新的思路。

附图说明

图1为本发明组培微瓶景容器的结构示意图。

图中：

容器主体-1； 盖体-2；

外层盖-21； 内层塞-22；

透气膜-221。

具体实施方式

为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。

本发明一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，包括如下步骤：

(一)选择组培植物苗

帝王类植物包括红帝王(Philodendron'Imperial Red')、绿帝王(Philodendron'Imperial Green')、金帝王(Philodendron'Imperial Golden')、日本帝王(Philodendron'Red King')、红公主(Philodendron'Red Emerald')、花衣公主(Philodendron rudrumcv.'Pink Princess')、月光蔓绿绒(Philodendron hybrid'Moonlight')、阳光热情(Philodendron'Tropical Sunshine')、黑神(Philodendron'Black Cardinal')、超级原子(Philodendron selloum'Super Atom')等。

选择上述帝王类植物中的至少一种作为组培植物苗。

(二)培育组培植物苗

1、无菌材料的诱导

将选好的组培植物苗，通过控水、控肥约8～10天让植株自然干燥失水至呈萎蔫状，取其茎尖分生部位，其长度5～15mm，用0.1％升汞常规消毒4～8分钟后，再用无菌水清洗3～4次后，接种到改良的MS培养基(置于培养容器内)进行诱导，改良的MS培养在基础MS培养基的基础上添加6-BA 0.1-3.0mg·L^-1、IAA 0.1-2.0mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1和卡拉胶5.5g·L^-1，改良的MS培养基的pH值5.7。培养容器选用常规的300ml组培容器瓶即可。

培养条件为：温度24±1.5℃，光照12±1H/D,光照强度25.75-45μmol·m-2·s^-1,培养周期5～6周；

按上述培养条件将培养过程重复持续2～3次，即可获得无菌材料的丛生芽团，芽数2～6个芽/团。

2、增殖培育无菌芽团

(1)筛选无菌芽团

将诱导好的芽团进行微生物(特别是细菌)检测，具体地，将芽团切成单芽/团，然后接入改良的MS培养基进行增殖培育，其中，该改良的MS培养基在基础MS培养基的基础上添加蛋白胨100～200mg/L、6-BA 0.01-2.0mg·L^-1、IAA 0.01-2.0mg·L^-1、蔗糖25～30g·L^-1和卡拉胶3.5～6.5g·L^-1，改良的MS培养基pH值5.7。

培养条件为：温度23±1.0℃，光照12±1H/D,光强25.75-65μmol·m-2·s^-1,培养4～6周；

按上述培养条件将培养过程重复持续2～3次，可将感染的且存在植物体内的内生菌植株淘汰，保留无菌的芽团用。

需要说明的是，组培苗通常是无菌的，但是也可能存在潜在细菌病毒。本发明的细菌检测过程，通过特定的培养基，将有带细菌、病毒的隐性表现组培苗显现出来，从而得到经确认的无菌芽团。改良的MS培养基中含有蛋白胨，蛋白胨在本培养基中具有检测芽团是否携带病原菌的作用。

(2)培育组培无菌丛生芽团

经过检测的无菌芽团大小不一，将经过细菌检测的无菌芽团切成2～3芽/团，高度控制在10～15mm,超过高度的需要将顶部叶片去掉保留高度15mm。接种在改良的MS培养基，改良的MS培养基具体将基础MS培养基中的NH₄NO₃的量改为500mg，并添加6-BA0.01～1.0mg/L、IAA 0.01-1.0mg/L、蔗糖15～25g/L、卡拉胶4.5～6.5g/L，改良的MS培养基的pH值5.7。

培养条件为：温度20±0.50℃，光照12±1H/D,光强35.75-85μmol/m2/s,光源LED组合光源6W：4R：1FR(6白、4红、1远红),培养周期4～5周。

本发明中组培无菌丛生芽团的培育经过特定培养基，特别是合理控制NH₄NO₃的量，并结合优选的光质，保证培养的芽团大小均匀，防止叶片徒长，使得叶片一致性强，保证后期叶色亮丽，株型紧凑，苗的观赏性好。

本发明中，MS是Murashige and Skoog的缩写，(基础)MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。具体配方如下：

大量元素(母液Ⅰ)

NH₄NO₃ 1650mg/L

KNO₃ 1900mg/L

CaCl₂·2H₂O 440mg/L

MgSO₄·7H₂O 370mg/L

KH₂PO₄ 170mg/L

微量元素(母液Ⅱ)

KI 0.83mg/L

H₃BO₃ 6.2mg/L

MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L

ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L

CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L

CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L

铁盐(母液Ⅲ)

FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L

Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L

有机成分(母液Ⅳ)

肌醇 100mg/L

ⅣB烟酸 0.5mg/L

盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5mg/L

盐酸硫胺素(维生素B1) 0.5mg/L

甘氨酸 2mg/L

蔗糖 30g/L

琼脂 8g/L

pH值 5.8。

(三)选择组培微瓶景容器

选用玻璃、塑料、试管和三角瓶等透明或半透明的容器即可。容器经过灭菌(湿热、化学灭菌、物理灭菌选择其一)不变型，具有保持透明或半透明形态的特定容器。

如图1所示，容器包括容器主体1和盖体2。盖体2包括外层盖21和内层塞22，内层塞22与容器主体1的开口端相紧配。外层盖21设有内螺纹，容器主体1的开口端设有外螺纹，外层盖21与容器主体1之间螺合在一起。二者之间形成有螺纹间的配合间隙。可实现外层盖21内外的气体流通。

需要说明的是，内螺纹和外螺纹均为微螺纹，微螺旋沟槽大小为0.5～2mm，容器主体1的开口端的气体可通过螺纹间隙与外界相通。

内层塞22设有透气区，透气区设置透气膜221，容器主体1通过透气膜221进行换气(植物需要的CO₂、O₂可以进入容器内)，实现容器主体1内代谢气体的交换，延长微瓶景的观赏周期。

本发明的盖体2采用双层(外层盖21和内层塞22)设计，可大大降低容器主体1内发生污染的概率。

作为一种优选地实施方式，透气膜221采用PTFE电子膜，植物需要的CO₂、O₂等物质可通过)。

(1)PTFE电子膜的特性如下：

1)纤维交错排列结构，薄膜孔隙率达到85％以上，空气能顺畅流通。

2)膜孔径为0.1-1μm，能有效阻隔水滴，防水等级能达到IPX7以上。

3)膜刚性好，密度适中，隔音音损较小。

(2)PTFE电子膜的的产品分类如下表：

PTFE电子透气膜具有纤维交错排列的微孔结构，通过双向拉伸工艺，经过高温热定型处理，微孔结构稳定,有效拦截粉尘颗粒表面过滤机理，轻松除尘；膜孔径小，孔径小而均匀疏水性强，表面能低，具有良好的非黏附能力，有效除去表面堆积的灰尘，用水洗或反吹可恢复性能，延长使用寿命阻值低过滤效率可达99.999995％拥有高的过滤效率，可满足超高效空气过滤器过滤效率的等级要求，相比其它过滤材料，PTFE电子透气膜过滤性能是较好的。

(四)培育组培微瓶景

1、组培微瓶景基质的配制

先加去离子水(或自来水，无杂质)于定容容器内，去离子水的添加量为定容容器容积的1/2，然后加入基础MS培养基(不加NH₄NO₃)、KNO₃ 800mg、6-BA 0.01-0.1mg·L^-1和NAA0.01～0.2mg/L，进一步加入蔗糖10～20g·L^-1和PPP333 0.01～0.5mg/L，然后添加食用色素10～50mg/L，溶解后加入凝固剂卡拉胶和低酰结冷胶共2.0～5.0g/L，并用1N HCl或1NNaOH调整pH值至5.5～6.5，最终定容。

然后根据观赏期长度或容器大小的不同，分装组培微瓶景基质，通常占各分装瓶容积的1/10～1/8，基质厚度通常为10～60mm，并封好各分装瓶口保证分装容器的瓶口向上，防止基质流出。

将分装好的基质在119±2℃，1.06±0.02Kg/cm²压力下，湿热灭菌15～30分钟，而后冷却后于环境22～25℃，RH30～60％，黑暗下待凝固剂与容器粘成一体，形成稳定固体基质(即微瓶培养基)

2、帝王类组培微瓶景栽培

将步骤(二)培育好的无菌植物(即无菌丛生芽团)，选择完整性的组培小苗，通常在1～2芽/团，株高根据容器大小调整，高度5～35mm，在净化车间无菌工作台或环境下，将其接种栽培到已灭菌好的微瓶培养基中，让其直立，并按植物方向性栽培，保证植物与容器、基质协调，最后先放置带有透气膜221的内层塞22、再旋紧外层盖21，保证整个操作过程均在无菌环境中进行。

将栽培好植物的容器(步骤三选择的)，放置在环境20～25℃，RH30～60％，光强在20～60umol/m²/s培养3～5W，待其植株生长出新叶或新芽，且有时新根系长出，植株生长与营养充分吻合，整体透明性好，植株与栽培营养基质生长好，植物正常生长，基质透明性好，形成一个完整的观赏体，观赏周期可达到2～3年。

采用上述技术方案后，本发明一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，具有如下有益效果：

A、组培苗微瓶景系统选用帝王类植物，经过组培技术培养后，丛生性强，紧凑，具有多种叶色搭配，其观赏性好，适宜室内弱光的环境观赏。

B、通过特定组培技术将帝王类植物丛生芽团培育成无病害、无污染的且获得性状一致的植株，可批量生产。

C、经过特定内生菌检测培养植物内生菌检测流程，保证瓶景内观察植物无菌生长，确保2～3年稳定生长，保证观观赏的稳定性。

D、瓶景容器选用双层盖，内盖透气膜，外盖保持与容器开口美观性，起到防止病菌通过外层盖直接进入容器内污染，同时还减少植株水分及营养的蒸发，可保证植物合理的生长需要，延长观赏期限和效果。

E、生长抑制剂PPP333、食用色素与凝固剂结合，保证基质的均一透明且具有多种色彩，在整个生长过程中形成稳定的基质，随着时间的推移，其组培的瓶景观赏效果不同，也可观察到植物在其生长、长叶、长芽的全过程。

F、将帝王类植物通过现代植物组培技术较系统组培微瓶景中，整个微瓶景内洁净、无病虫害、无微生物，提升了可放置区域，适用范围更广。

G、系统将帝王类多种植物利用组培技术与微瓶景相结合，通过特定培养基的控制和容器的协调组培，可放置室内弱光常温条件下观赏期24～36个月，并观察到植物生长的生长流程。

F、第一次系统提出组培微瓶景理念，为其它植物的组培微瓶景提供新的思路。

上述实施例和附图并非限定本发明的产品形态和式样，以及本发明的培育方法，任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应视为不脱离本发明的专利范畴。

Claims (7)

1.一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

选择组培植物苗：选择帝王类植物中的至少一种作为组培植物苗；

培育组培植物苗：将选好的组培植物苗进行无菌处理后，进行诱导，得到无菌材料的丛生芽团，然后对诱导好的芽团进行微生物检测，经过微生物检测后得到无菌芽团，经检测的无菌芽团进一步培育，得到组培无菌丛生芽团；

选择组培微瓶景容器：容器包括容器主体和盖体，盖体包括外层该和内层塞，所述外层盖与所述容器主体螺合在一起，所述内层塞与所述容器主体的开口相紧配，所述内层塞设有透气区，所述透气去设置透气膜；

培育组培微瓶景：先配制组培微瓶景基质，然后栽培帝王类组培微瓶景。

2.如权利要求1所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：在微生物检测过程中，将芽团切成单芽/团，然后接入改良的MS培养基进行增殖培育，其中，该改良的MS培养基添加有蛋白胨100～200mg/L、6-BA 0.01-2.0mg·L^-1、IAA 0.01-2.0mg·L^-1、蔗糖25～30g·L^-1和卡拉胶3.5～6.5g·L^-1。

3.如权利要求1所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：在组培无菌丛生芽团的培育过程中，将经过细菌检测的无菌芽团切成2～3芽/团，高度控制在10～15mm,超过高度的部分需要将顶部叶片去掉保留高度15mm，接种在改良的MS培养基，改良的MS培养基中含有500mg的NH₄NO₃，并添加6-BA 0.01～1.0mg/L、IAA 0.01-1.0mg/L、蔗糖15～25g/L和卡拉胶4.5～6.5g/L，改良的MS培养基的pH值5.7。

4.如权利要求3所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：在组培无菌丛生芽团的培育过程中，培养条件为：温度20±0.50℃，光照12±1H/D,光强35.75-85μmol/m²/s,光源LED组合光源6W：4R：1FR，,培养周期4～5周。

5.如权利要求1所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：在配制组培微瓶景基质时，加入KNO₃ 800mg、6-BA 0.01-0.1mg·L^-1和NAA 0.01～0.2mg/L，进一步加入蔗糖10～20g·L^-1和PPP333 0.01～0.5mg/L，然后添加食用色素10～50mg/L，溶解后加入凝固剂卡拉胶和低酰结冷胶共2.0～5.0g/L，并调整pH值至5.5～6.5。

6.如权利要求1所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：在栽培帝王类组培微瓶景时，将培育好的无菌丛生芽团在无菌条件下，接种栽培至组培微瓶景基质中，将栽培好植物的容器，放置在环境20～25℃，RH30～60％，光强在20～60umol/m²/s培养3～5W，待其植株生长出新叶或新芽，且有时新根系长出，植物正常生长，基质透明性好，形成一个完整的观赏体，观赏周期可达到2～3年。

7.如权利要求1所述的一种帝王类组培苗微瓶景的培育方法，其特征在于：透气膜采用PTFE电子膜。

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