CN112322496B - 一种新冠病毒s1蛋白的灌流生产系统及方法 - Google Patents

一种新冠病毒s1蛋白的灌流生产系统及方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及细胞生物学技术领域，提供了一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统及方法，包括：细胞反应器，用于培养表达S1蛋白的细胞株；灌流系统，包括过滤装置、出液管、回液管和第一循环泵，所述过滤装置的主体内设有孔径为0.1‑0.2μm的中空纤维柱，用于过滤透出液，截留细胞培养液中的S1蛋白；所述出液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的下端相连通；所述回液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的上端相连通；所述第一循环泵设置于所述出液管与所述中空纤维柱相连的管路中。本发明系统投入成本低且S1蛋白产量高。

Description

一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统及方法
技术领域
本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统及方法。
背景技术
2019年底暴发了被称为2019冠状病毒病（COVID-19）的疫情，此次疫情在全世界的蔓延引起广泛关注。经研究发现，新冠病毒（COVID-19）的基因组编码四种结构蛋白，其中S蛋白是一类三聚体跨膜糖蛋白，其在病毒表面形成特殊的花冠结构。根据蛋白结构功能S蛋白可以被分成两个功能单位：S1和S2蛋白亚基，S1包含受体结合区域（receptor bindingdomain, RBD），负责识别和结合细胞受体；S2含有膜融合过程所需的基本元件，负责将S蛋白锚定在病毒膜上并介导病毒膜与宿主细胞膜的融合。所以S蛋白是介导病毒进入宿主细胞的主要蛋白，也是感染后引起宿主免疫系统产生中和性抗体的主要靶标。而S1蛋白因其特异性识别位点的功能，应用于IgG/IgM抗体检测试剂盒的研发与生产中。S1蛋白应用广泛，市场需求量大，但是受生产设备成本和单位产量等因素的制约，当前在短时间内满足供货需求困难。
发明内容
本发明提供一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统及方法，本发明系统投入成本低且S1蛋白产量高。
本发明提供一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，包括：细胞反应器，用于培养表达S1蛋白的细胞株；灌流系统，包括过滤装置、出液管、回液管和第一循环泵，所述过滤装置的主体内设有孔径为0.1-0.2μm的中空纤维柱，用于过滤透出液，截留细胞培养液中的S1蛋白；所述出液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的下端相连通；所述回液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的上端相连通；所述第一循环泵设置于所述出液管与所述中空纤维柱相连的管路中。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，还包括导出管和蛋白纯化装置，所述导出管的第一端与所述细胞反应器相连，所述蛋白纯化装置与所述导出管的第二端相连，用于定期取出一定体积的细胞培养液并从中纯化出S1蛋白。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，所述过滤装置连接有第二循环泵，用于排出透出液。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，所述细胞反应器的底部设有称重器。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，还包括相互连接的导入管和第三循环泵，且所述导入管与所述细胞反应器相连，用于补入与排出的透出液重量相等的新鲜培养基。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，所述第一循环泵、所述第二循环泵和所述第三循环泵为蠕动泵。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，所述细胞反应器内设有搅拌装置。
根据本发明提供的一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，所述细胞培养液中培养的细胞为HEK293细胞改造的表达S1蛋白的稳定细胞株。
本发明还提供一种根据所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，包括：
将表达S1蛋白的细胞以一定密度接种，控制细胞反应器内的培养参数，得到适宜细胞生长的培养环境；
基于细胞密度进行灌流，使细胞密度维持在一定峰值范围内，当细胞反应器内细胞存活率低于80%，全部导出进行纯化，得到S1蛋白。
根据本发明提供的一种生产方法，细胞为HEK293细胞改造的表达S1蛋白的稳定细胞株，细胞接种密度为0.5-0.6×106cells/ml；培养参数包括：搅拌转速为80-130rpm，溶氧量为40%-60%，pH值为7.0，温度为37℃；细胞密度达到4-5×106cells/ml后开始灌流，灌流体积为每天1-2倍培养体积，循环流速为2-3L/min，细胞密度维持的峰值范围为30-40×106cells/ml。
本发明提供的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统及方法，使用本发明的灌流生产系统投入成本低，通过灌流的方式，相较于传统Fed Batch（分批补料式培养）工艺，本发明培养的最高细胞密度提升3-4倍，又通过截留蛋白的方式，S1蛋白单位产量提升约5倍。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统结构示意图；
图2是本发明提供的新冠病毒S1蛋白的灌流生产方法的流程示意图；
图3是本发明提供的生产方法得到的细胞密度及相应的表达量实验数据图；
附图标记：
1：细胞反应器；2：过滤装置；201：中空纤维柱；202：第二循环泵；3：出液管；4：回液管；5：第一循环泵；6：导出管；7：称重器；8：搅拌装置。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明实施例的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明实施例和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明实施例的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明实施例的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明实施例中的具体含义。
在本发明实施例中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明实施例的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
下面结合图1描述本发明的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统。
根据本发明的一方面实施例，如图1所示，本发明新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统，主要包括：细胞反应器1和灌流系统。
在细胞反应器1内导入细胞培养液，用于培养能够表达新冠病毒S1蛋白（以下简称“S1蛋白”）的细胞株。
灌流系统主要包括过滤装置2、出液管3、回液管4和第一循环泵5，其中，过滤装置2的主体内设有多个竖向并列设置的中空纤维柱201，且中空纤维柱201的孔径为0.1-0.2μm，用于过滤透出液，截留细胞培养液中的S1蛋白。
出液管3的两端分别与细胞反应器1和中空纤维柱201的下端相连通，具体的：出液管3的下端贯穿细胞反应器1延伸至细胞反应器1内的细胞培养液中，出液管3的上端贯穿过滤装置2的主体与中空纤维柱201的下端相连通，用于将细胞反应器1内的细胞培养液流出至中空纤维柱201内。
回液管4的两端分别与细胞反应器1和中空纤维柱201的上端相连通，具体的：回液管4的下端贯穿细胞反应器1延伸至细胞反应器1内的细胞培养液中，回液管4的上端贯穿过滤装置2的主体与中空纤维柱201的上端相连通，用于将经中空纤维柱201过滤后的细胞培养液流回至细胞反应器1内。
第一循环泵5设置于出液管4与中空纤维柱201相连的管路中，用于细胞培养液的循环。
因此，使用本发明的灌流生产系统投入成本低，通过灌流的方式，相较于传统FedBatch（分批补料式培养）工艺，本发明培养的最高细胞密度可以提升3-4倍，又通过截留蛋白的方式，S1蛋白单位产量可以提升约5倍。
进一步的，本发明灌流生产系统还包括导出管6和蛋白纯化装置（图中未示出），导出管6的第一端贯穿细胞反应器1延伸至细胞反应器1内的细胞培养液中，蛋白纯化装置与导出管6的第二端相连，用于定期取出一定体积的细胞培养液并从中纯化出S1蛋白。因此，本发明相较于传统的从透出液中纯化目的蛋白的灌流工艺，本发明工艺从细胞反应器内定期取出一定体积的细胞培养液纯化蛋白，导出的收获体积从1-2倍培养体积减小到0.2-0.5倍培养体积，减轻了纯化压力。
可以理解的是，在导出管6与蛋白纯化装置之间也可以设置第四循环泵（图中未示出），便于出液。
根据一些实施例，过滤装置2连接有第二循环泵202，用于排出透出液。
并且，细胞反应器1的底部设有称重器7，实时检测细胞反应器1的整体重量。
在该实施例中，本发明还包括相互连接的导入管（图中未示出）和第三循环泵（图中未示出），且导入管与细胞反应器1相连，根据称重器7检测的数值，实时补入与排出的透出液重量相等的新鲜培养基，保持细胞反应器1的整体重量恒定，即保持细胞反应器1内的细胞培养液的体积恒定，有利于维持细胞的培养环境，提高S1蛋白的产量。
本发明第一循环泵5、第二循环泵202、第三循环泵和第四循环泵的具体种类不受特别限制，在该实施例中，本发明均优选为蠕动泵。
此外，细胞反应器1内设有搅拌装置8，用于混匀细胞培养液，使细胞均匀分布在细胞培养液中。
可以理解的是，本发明细胞培养液中培养的细胞种类不受特别限制，只要能够表达新冠病毒S1蛋白即可，例如可以是HEK293细胞改造的表达S1蛋白的稳定细胞株。
本发明灌流生产系统的主要工作原理为：开始灌流，打开第一循环泵5，设置循环流速，细胞培养液沿出液管3流入中空纤维柱201过滤透出液，并截留细胞培养液中的S1蛋白后，从回液管4返回到细胞反应器1中，打开第二循环泵202，根据灌流体积设置流速，透出液从第二循环泵202的A口流出。并且细胞反应器1带有称重器7，整体重量保持恒定，即随着透出液从A口流出，细胞反应器1会自动开启第三循环泵，通过导入管补入与排出的透出液重量相等的新鲜培养基。
需要说明的是，本发明因灌流生产系统使用的是0.1-0.2μm孔径的中空纤维柱201，S1蛋白会被截留在细胞反应器1内，当细胞密度达到设定值后，通过导出管6定期取出一定体积的细胞培养液，并从取出的细胞培养液中纯化出目的S1蛋白。
下面对本发明提供的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法进行描述，下文描述的生产方法与上文描述的灌流生产系统可相互对应参照。
根据本发明的另一方面实施例，如图2所示，本发明新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，主要包括：
S1、细胞培养：将表达S1蛋白的细胞以一定密度接种，控制细胞反应器内的培养参数，得到适宜细胞生长的培养环境。
在本发明具体实施例中，细胞培养液中培养的细胞为基于HEK293细胞改造的表达S1蛋白的稳定细胞株，细胞接种密度为0.5-0.6×106cells/ml；培养参数包括：搅拌转速为80-130rpm，溶氧量为40%-60%，pH值为7.0，温度为37℃。
S2、灌流培养：基于细胞密度进行灌流，使细胞密度维持在一定峰值范围内，当细胞反应器内细胞存活率低于80%，全部导出进行纯化，得到S1蛋白。
在本发明具体实施例中，细胞反应器内的细胞密度达到4-5×106cells/ml后开始灌流，灌流体积为每天1-2倍培养体积，第一循环泵的循环流速为2-3L/min，细胞密度维持的峰值范围为30-40×106cells/ml。
上述步骤S2还包括：当细胞反应器内的细胞密度达到设定峰值范围30-40×106cells/ml 后，每天通过导出管取出0.2-0.5倍培养体积的细胞培养液，并从取出的细胞培养液中纯化出目的S1蛋白。
如图3所示，示出了利用本发明上述灌流生产系统及方法得到的细胞密度及相应的表达量实验数据，其中，自生产开始直至收获的细胞密度为折线图，相应的表达量为矩形图，横坐标为培养时间，单位为hour，纵坐标左侧为细胞密度，单位为×106cells/ml，纵坐标右侧为单位产量，单位为mg/L，培养周期25天，可以得出：细胞密度峰值维持在30-40×106cells/ml，收获时S1蛋白单位产量1.49g/L，相较于传统Fed Batch（分批补料式培养）工艺单位产量提升约5倍，并且在相同培养体积以及培养周期内，本灌流工艺较Fed Batch（分批补料式培养）工艺的S1蛋白产量提升8.5倍左右。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，所述灌流生产系统包括：
细胞反应器，用于培养表达S1蛋白的细胞株；
灌流系统，包括过滤装置、出液管、回液管和第一循环泵，所述过滤装置的主体内设有孔径为0.1-0.2μm的中空纤维柱，用于过滤透出液，截留细胞培养液中的S1蛋白；
所述出液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的下端相连通；
所述回液管的两端分别与所述细胞反应器和所述中空纤维柱的上端相连通；
所述第一循环泵设置于所述出液管与所述中空纤维柱相连的管路中，所述第一循环泵为蠕动泵；
还包括导出管和蛋白纯化装置，所述导出管的第一端与所述细胞反应器相连，所述蛋白纯化装置与所述导出管的第二端相连，用于定期取出一定体积的细胞培养液并从中纯化出S1蛋白；其特征在于，所述生产方法包括：
将表达S1蛋白的细胞以0.5-0.6×106cells/ml密度接种，控制细胞反应器内的培养参数，培养参数包括：搅拌转速为80-130rpm，溶氧量为40%-60%，pH值为7.0，温度为37℃，得到适宜细胞生长的培养环境，细胞为HEK293细胞改造的表达S1蛋白的稳定细胞株；
细胞密度达到4-5×106cells/ml后开始灌流，灌流体积为每天1-2倍培养体积，循环流速为2-3L/min，使细胞密度维持在30-40×106cells/ml峰值范围内，当细胞反应器内的细胞密度达到设定峰值范围30-40×106cells/ml 后，每天通过导出管取出0.2-0.5倍培养体积的细胞培养液，并从取出的细胞培养液中纯化出S1蛋白，当细胞反应器内细胞存活率低于80%，全部导出进行纯化，得到S1蛋白。
2.根据权利要求1所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，其特征在于，所述过滤装置连接有第二循环泵，用于排出透出液。
3.根据权利要求2所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，其特征在于，所述细胞反应器的底部设有称重器。
4.根据权利要求3所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，其特征在于，还包括相互连接的导入管和第三循环泵，且所述导入管与所述细胞反应器相连，用于补入与排出的透出液重量相等的新鲜培养基。
5.根据权利要求4所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，其特征在于，所述第二循环泵和所述第三循环泵为蠕动泵。
6.根据权利要求1所述的新冠病毒S1蛋白的灌流生产系统的生产方法，其特征在于，所述细胞反应器内设有搅拌装置。
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CN103305417A (zh) * 2012-03-07 2013-09-18 无锡药明康德生物技术有限公司 进行蛋白生产的高产量反应器及其生产方法和应用
WO2014051503A1 (en) * 2012-09-27 2014-04-03 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Tangential flow perfusion system
CN109689191B (zh) * 2016-07-25 2021-11-19 瑞普利金公司 交替切向流快速收获
CN115845617A (zh) * 2018-03-08 2023-03-28 瑞普利金公司 切向流深度过滤系统和使用其进行过滤的方法
JP7308067B2 (ja) * 2019-04-17 2023-07-13 株式会社日立製作所 細胞培養精製装置及び細胞培養精製方法
CN212199294U (zh) * 2020-04-03 2020-12-22 郑州伊美诺生物技术有限公司 生物反应器灌流培养装置

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