CN112321661A - 一种高纯甲钴胺的制备方法 - Google Patents

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刘涛
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赵建强
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Abstract

本发明涉及一种高纯甲钴胺的制备方法，特别涉及一种利用动态轴向压缩柱大规模分离制备甲钴胺的一种方法。本发明的一种高纯甲钴胺的制备方法可直接采用含有甲钴胺粗品来制备，不需要大量的前处理，过程简单、易控制，工艺技术简单。本发明方法的优点还在于使用梯度洗脱的方式，一次分离制备就可以得到纯度不低于99.5%的甲钴胺。

Description

一种高纯甲钴胺的制备方法
技术领域
本发明涉及一种制备方法，具体涉及一种高纯甲钴胺的制备方法。
背景技术
甲钴胺化学名为Co-[α-(5,6-二甲基苯并咪唑基)-]-Coβ-甲基钴酰胺，是日本卫材株式会社研制开发的辅酶维生素B12类药物，为抗贫血新药，用于糖尿病周围神经疾病及因缺乏维生素B12引起的巨幼红细胞贫血，现周围神经疾病的治疗。与其它维生素B12类药物相比，甲钴胺在神经系统内传递性好，可促进核酸、蛋白及脂肪的代谢。药理上通过促进神经细胞内核酸和蛋白质以及神经髓鞘的合成，从而修复受损伤的周围神经。临床上对糖尿病神经障碍、多发性神经炎等周围神经疾病尤其对麻木、疼痛及麻痹有明显效果，是目前临床上治疗该类疾病的有效药物，并且副作用极小。此外，有研究表明，甲钴胺是有效治疗帕金森症、阿尔兹海默综合征、肌肉萎缩和神经衰弱的潜在药物。
发明内容
本发明公开了一种高纯甲钴胺的制备方法，其技术思路是根据高效液相色谱法的原理，利用动态轴向压缩柱大规模分离制备甲钴胺，解决了目前在纯化甲钴胺过程中存在的成本高、效率低、生产周期长、环境污染严重等问题，操作简单，成本低，生产周期短，收率高，可重复性好。
本发明的技术方案是：一种高纯甲钴胺的制备方法，包括使用制备型高效液相色谱法纯化甲钴胺的方法，所述制备型高效液相色谱法采用的色谱柱为动态轴向压缩柱；其步骤如下：
（1）提供甲钴胺粗品；
（2）将甲钴胺粗品溶于水后超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；
（3）使用制备型高效液相色谱法对滤液进行分离纯化，分段收集甲钴胺对应谱带的馏分；
（4）将收集到的甲钴胺馏分进行后处理，得到甲钴胺纯品。
进一步地，所述的动态轴向压缩柱内填充的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。
进一步地，所述十八烷基硅烷键合硅胶的粒度为5um-20um。
进一步地，所述制备型高效液相色谱法使用的流动相位为有机溶剂和水的混合溶液，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、丙酮中的一种。
进一步地，所述流动相中有机溶剂和水的体积比率范围为20:80-0:100。
进一步地，所述制备型高效液相色谱法采用梯度洗脱。
进一步地，所述的动态轴向压缩柱的填充内径范围为50mm-1600mm。
进一步地，所述后处理包括减压旋蒸浓缩、冻干干燥。
进一步地，所述超声处理为超声溶解，该过程温度为30摄氏度，溶解时间2-3分钟。
进一步地，所述滤膜过滤为用有机过滤膜过滤溶解液，所述有机过滤膜的孔径为0.2-2um。
有益效果
本发明的一种高纯甲钴胺的制备方法，可直接采用含有甲钴胺粗品来制备，不需要大量的前处理，过程简单、易控制，工艺技术简单。本发明方法的优点还在于使用梯度洗脱的方式，一次分离制备就可以得到纯度不低于99.5%的甲钴胺。本发明使用的流动相是反相高效液相色谱中常用的试剂，适用于大规模制备生产。
附图说明
图1是甲钴胺粗品的液相色谱法测定图谱。
图2是动态轴向压缩柱Φ50×650mm的制备谱图。
图3是动态轴向压缩柱Φ50×650mm的液相色谱法测定图谱。
图4是动态轴向压缩柱Φ800×750mm的制备谱图。
图5是动态轴向压缩柱Φ800×750mm的液相色谱法测定图谱。
图6是动态轴向压缩柱Φ1600×860mm的制备谱图。
图7是动态轴向压缩柱Φ1600×860mm的液相色谱法测定图谱。
具体实施方式
本发明方法中，甲钴胺粗品为生物发酵后所得，其可购买得到或根据已知方法来制备，甲钴胺粗品中的甲钴胺含量不受特别限制。
实施例1
1.取50g粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2.将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ50×650mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为10um，上样量50g，0到250分钟，甲醇/水溶液的体积比由0:100到20:80，紫外可见光度检测器的检测波长为342nm，收集保留时间在120至220min为甲钴胺的馏分，当甲钴胺洗脱完毕后，流动相切换成高比例甲醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。浓缩、冻干后，HPLC检测分析纯度分别为99.7%。
实施例2
1、取12kg粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2、将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ800×750mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为10um，上样量12kg，0到250分钟，乙腈/水溶液的体积比由0:100至20:80，紫外可见光度检测器的检测波长为342nm，收集保留时间在100至200min为甲钴胺的馏分，当甲钴胺洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。浓缩冻干后，HPLC检测分析纯度分别为99.9%。
实施例3
1、取20kg粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2、将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ1600×860mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为10um，上样量20kg，0到300分钟，乙醇/水溶液的体积比由0:100至20:80，紫外可见光度检测器的检测波长为342nm，收集保留时间在100至240min为甲钴胺的馏分，当甲钴胺洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。浓缩冻干后，HPLC检测分析纯度分别为99.7%和99.8%。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：包括使用制备型高效液相色谱法纯化甲钴胺的方法，所述制备型高效液相色谱法采用的色谱柱为动态轴向压缩柱；其步骤如下：
步骤一：提供甲钴胺粗品；
步骤二：将甲钴胺粗品溶于水后超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；
步骤三：使用制备型高效液相色谱法对滤液进行分离纯化，分段收集甲钴胺对应谱带的馏分；
步骤四：将收集到的甲钴胺馏分进行后处理，得到甲钴胺纯品。
2.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述的动态轴向压缩柱内填充的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。
3.根据权利要求2所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶的粒度为5um-20um。
4.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法的方法，其特征在于：所述制备型高效液相色谱法使用的流动相位为有机溶剂和水的混合溶液，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、丙酮中的一种。
5.根据权利要求4所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述流动相中有机溶剂和水的体积比率范围为20:80-0:100。
6.根据权利要求4所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述制备型高效液相色谱法采用梯度洗脱。
7.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述的动态轴向压缩柱的填充内径范围为50mm-1600mm。
8.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述后处理包括减压旋蒸浓缩和冻干干燥。
9.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述超声处理为超声溶解，该过程温度为30摄氏度，溶解时间2-3分钟。
10.根据权利要求1所述的一种高纯甲钴胺的制备方法，其特征在于：所述滤膜过滤为用有机过滤膜过滤溶解液，所述有机过滤膜的孔径为0.2-2um。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08143590A (ja) * 1994-11-24 1996-06-04 Meiji Seika Kaisha Ltd 高純度メチルコバラミンの製造方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPH08143590A (ja) * 1994-11-24 1996-06-04 Meiji Seika Kaisha Ltd 高純度メチルコバラミンの製造方法

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