CN112314593A - 一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，其原料按重量比份包括：氯化钠150‑250g、氯化钾8‑12g、D‑葡萄糖20‑30g、氢氧化钠3‑5g、苯酚红0.4‑0.6g、磷酸氢二钾2‑4g、磷酸氢二钠1‑1.5g、碳酸氢钠8‑9g、牛血清白蛋白4‑5g、2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮盐酸盐0.5‑0.9g和硫酸多粘菌素B 0.1‑0.5g，本发明涉及临床检验技术领域。该适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，制备的保存液具有良好的保存能力，可保证样本病毒在常温下保存一周以上，仍具备活性，2‑8℃低温保存时间更久，不会干扰PCR检测结果，具有很好的抗菌能力，对生产和使用环境要求较低，也不需要辐照灭菌，成本低廉，容易量产，可保证营养物质不被分解，配合HEPES缓冲液或者磷酸盐缓冲液，可保证PH稳定。
Description
技术领域
本发明涉及临床检验技术领域，具体为一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法。
背景技术
病毒感染是指病毒通过多种途径侵入机体，并在易感的宿主细胞中增殖的过程。人类病毒是指能感染人体或对人有致病作用的病毒，病毒感染的实质是病毒与机体、病毒与易感细胞相互作用的过程。病毒感染常因病毒种类、机体状态不同产生轻重不一的损伤或病毒性疾病。病毒致病是由侵入宿主、感染细胞开始的，致病作用表现在人整体和细胞两个方面，机体感染病毒后，可表现出不同的临床类型，依据有无症状，可分为显性感染和隐性感染；依据病毒滞留时间及症状持续时间长短，又可分为急性感染和持续性感染，为了全面分析病毒性感染发生的原因，往往需要将病毒从病患中分离出来并通过分析鉴定，以确定病毒感染类型，活体病毒可以最大程度保持样本的原始性，既可用于病毒的培养和分离，也可用于对病毒的各种分子生物检测，目前用来作为病毒运送保存液主要为Hanks液，但受运输、冷链、保存等因素影响，Hanks液的保存时间较短，病毒形态的完整性易受影响，不利于病毒的分离鉴定，也不利于病毒提取率，且易滋生细菌、真菌，导致Hanks液pH值下降，当Hanks液pH值小于7.4时，病毒稳定性下降，病毒的分解速度加快，难以长时间保存病毒活性。
与传统产品相比，本发明的适用于病毒样本常温保存的保存液具有以下优点：
1、良好的保存能力，可保证样本病毒在常温下保存一周以上，仍具备活性，2-8℃低温保存时间更久；
2、不会干扰PCR检测结果；
3、具有很好的抗菌能力，对生产和使用环境要求较低，也不需要辐照灭菌；
4、成本低廉，容易量产。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，具有良好的保存能力，可保证样本病毒在常温下保存一周以上，仍具备活性，不会干扰PCR检测结果，具有很好的抗菌能力，对生产和使用环境要求较低，也不需要辐照灭菌，成本低廉，容易量产。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其原料按重量比份包括：氯化钠150-250g、氯化钾8-12g、D-葡萄糖20-30g、氢氧化钠3-5g、苯酚红0.4-0.6g、磷酸氢二钾2-4g、磷酸氢二钠1-1.5g、碳酸氢钠8-9g、牛血清白蛋白4-5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.5-0.9g和硫酸多粘菌素B 0.1-0.5g。
优选的，其原料按重量比份包括：氯化钠200g、氯化钾10g、D-葡萄糖25g、氢氧化钠4g、苯酚红0.5g、磷酸氢二钾3g、磷酸氢二钠1.25g、碳酸氢钠8.75g、牛血清白蛋白4.5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.7g和硫酸多粘菌素B 0.3g。
优选的，其原料按重量比份包括：氯化钠150g、氯化钾8g、D-葡萄糖20g、氢氧化钠3g、苯酚红0.4g、磷酸氢二钾2g、磷酸氢二钠1g、碳酸氢钠8g、牛血清白蛋白4g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.5g和硫酸多粘菌素B0.1g。
优选的，其原料按重量比份包括：氯化钠250g、氯化钾12g、D-葡萄糖30g、氢氧化钠5g、苯酚红0.6g、磷酸氢二钾4g、磷酸氢二钠1.5g、碳酸氢钠9g、牛血清白蛋白5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.9g和硫酸多粘菌素B 0.5g。
本发明还公开了一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将所用器皿用75％乙醇消毒后置于操作台，操作环境用紫外线和臭氧灭菌1小时后，开始配置试剂；
S2、将25g缓冲液或者磷酸氢二钠和磷酸氢二钾加入一定量的水溶解，并定容到1000ml；
S3、取氢氧化钠，加入一定量的水溶解，定容至1000ml；
S4、依次称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、D-葡萄糖和苯酚红，加入一定量的水，使其充分溶解，倒入一个25L的容器内；
S5、依次往容器内加入100ml缓冲液和150ml氢氧化钠溶液，将容器内的液体加到19-21L，加入防腐剂10ml；
S6、将容器定容到25L，充分搅拌，密封，即得成品。
优选的，所述步骤S5中调节产品PH为7.2-7.8，渗透压为285-315，颜色为红色、粉红色或无色。
优选的，所述步骤S2和S5中缓冲液为磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
优选的，所述步骤S5中防腐剂为proclin防腐剂。
优选的，所述步骤S2-S4所用的水为二次蒸馏水或三次蒸馏水中的一种。
优选的，配置环境为不低于十万级的净化车间，且环境经过紫外线和臭氧灭菌，所用的器皿经过75％乙醇灭菌后并于环境一同灭菌，时间不低于1小时。
(三)有益效果
本发明提供了一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法。与现有技术相比具备以下有益效果：
(1)、该适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，制备的保存液呈弱碱性PH在7.2-7.8之间，并且利用苯酚红进行显色标定，确保有效的弱碱性环境，为病毒存活提供适宜的酸碱度，其渗透压在285-315之间，与人体渗透压几乎相等，并且含有葡萄糖、蛋白质、氨基酸等适合病毒摄取的营养物质，另外有proclin等防腐剂抑制微生物繁殖，可保证营养物质不被分解，配合HEPES缓冲液或者磷酸盐缓冲液，可保证PH稳定，良好的保存能力，可保证样本病毒在常温下保存一周以上，仍具备活性，2-8℃低温保存时间更久，同时不会干扰PCR检测结果。
(2)、该适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，制备的保存液可常温保存，避免了一般样本需要在低温冷藏或者冷冻的限制，极大的降低了成本，提供工作效率，成本低廉，容易量产，具有很好的抗菌能力，对生产和使用环境要求较低，也不需要辐照灭菌。
附图说明
图1为本发明制备方法的流程图；
图2为本发明实施例中保存液的组分型号表图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图2，本发明实施例提供三种技术方案：一种适用于病毒样本常温保存的保存液及其制备方法，具体包括以下实施例：
实施例1
一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其原料按重量比份包括：氯化钠200g、氯化钾10g、D-葡萄糖25g、氢氧化钠4g、苯酚红0.5g、磷酸氢二钾3g、磷酸氢二钠1.25g、碳酸氢钠8.75g、牛血清白蛋白4.5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.7g和硫酸多粘菌素B0.3g。
本发明实施例还公开了一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将所用器皿用75％乙醇消毒后置于操作台，操作环境用紫外线和臭氧灭菌1小时后，开始配置试剂；
S2、将磷酸氢二钠和磷酸氢二钾加入一定量的水溶解，并定容到1000ml；
S3、取氢氧化钠，加入一定量的水溶解，定容至1000ml；
S4、依次称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、D-葡萄糖和苯酚红，加入一定量的水，使其充分溶解，倒入一个25L的容器内；
S5、依次往容器内加入100ml缓冲液和150ml氢氧化钠溶液，将容器内的液体加到20L，加入防腐剂10ml，调节产品PH为7.5，渗透压为300，颜色为红色，防腐剂为proclin防腐剂；
S6、将容器定容到25L，充分搅拌，密封，即得成品。
本发明实施例，步骤S2和S5中缓冲液为磷酸盐缓冲液。
本发明实施例，步骤S2-S4所用的水为二次蒸馏水。
本发明实施例中，配置环境为十万级的净化车间，且环境经过紫外线和臭氧灭菌，所用的器皿经过75％乙醇灭菌后并于环境一同灭菌，时间为1小时。
实施例2
一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其原料按重量比份包括：氯化钠150g、氯化钾8g、D-葡萄糖20g、氢氧化钠3g、苯酚红0.4g、磷酸氢二钾2g、磷酸氢二钠1g、碳酸氢钠8g、牛血清白蛋白4g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.5g和硫酸多粘菌素B 0.1g。
本发明实施例还公开了一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将所用器皿用75％乙醇消毒后置于操作台，操作环境用紫外线和臭氧灭菌1小时后，开始配置试剂；
S2、将25g缓冲液加入一定量的水溶解，并定容到1000ml；
S3、取氢氧化钠，加入一定量的水溶解，定容至1000ml；
S4、依次称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、D-葡萄糖和苯酚红，加入一定量的水，使其充分溶解，倒入一个25L的容器内；
S5、依次往容器内加入100ml缓冲液和150ml氢氧化钠溶液，将容器内的液体加到19L，加入防腐剂10ml，调节产品PH为7.2，渗透压为285，颜色为粉红色，防腐剂为proclin防腐剂；
S6、将容器定容到25L，充分搅拌，密封，即得成品。
本发明实施例，步骤S2和S5中缓冲液为HEPES缓冲液。
本发明实施例，步骤S2-S4所用的水为三次蒸馏水。
本发明实施例中，配置环境为十万级的净化车间，且环境经过紫外线和臭氧灭菌，所用的器皿经过75％乙醇灭菌后并于环境一同灭菌，时间为1小时。
实施例3
一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其原料按重量比份包括：氯化钠250g、氯化钾12g、D-葡萄糖30g、氢氧化钠5g、苯酚红0.6g、磷酸氢二钾4g、磷酸氢二钠1.5g、碳酸氢钠9g、牛血清白蛋白5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.9g和硫酸多粘菌素B 0.5g。
本发明实施例还公开了一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将所用器皿用75％乙醇消毒后置于操作台，操作环境用紫外线和臭氧灭菌1小时后，开始配置试剂；
S2、将磷酸氢二钠和磷酸氢二钾加入一定量的水溶解，并定容到1000ml；
S3、取氢氧化钠，加入一定量的水溶解，定容至1000ml；
S4、依次称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、D-葡萄糖和苯酚红，加入一定量的水，使其充分溶解，倒入一个25L的容器内；
S5、依次往容器内加入100ml缓冲液和150ml氢氧化钠溶液，将容器内的液体加到21L，加入防腐剂10ml，调节产品PH为7.8，渗透压为315，颜色为无色，防腐剂为proclin防腐剂；
S6、将容器定容到25L，充分搅拌，密封，即得成品。
本发明实施例，步骤S2和S5中缓冲液为磷酸盐缓冲液。
本发明实施例，步骤S2-S4所用的水为二次蒸馏水。
本发明实施例中，配置环境为十万级的净化车间，且环境经过紫外线和臭氧灭菌，所用的器皿经过75％乙醇灭菌后并于环境一同灭菌，时间为1小时。
本发明实施例1-3中制备保存液所使用各组分的CAS选型号如图2的表所示。
综上，本发明制备的保存液呈弱碱性PH在7.2-7.8之间，并且利用苯酚红进行显色标定，确保有效的弱碱性环境，为病毒存活提供适宜的酸碱度，其渗透压在285-315之间，与人体渗透压几乎相等，并且含有葡萄糖、蛋白质、氨基酸等适合病毒摄取的营养物质，另外有proclin等防腐剂抑制微生物繁殖，可保证营养物质不被分解，配合HEPES缓冲液或者磷酸盐缓冲液，可保证PH稳定，良好的保存能力，可保证样本病毒在常温下保存一周以上，仍具备活性，2-8℃低温保存时间更久，同时不会干扰PCR检测结果，同时，本发明制备的保存液可常温保存，避免了一般样本需要在低温冷藏或者冷冻的限制，极大的降低了成本，提供工作效率，成本低廉，容易量产，具有很好的抗菌能力，对生产和使用环境要求较低，也不需要辐照灭菌。
同时本说明书中未作详细描述的内容均属于本领域技术人员公知的现有技术。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其特征在于：其原料按重量比份包括：氯化钠150-250g、氯化钾8-12g、D-葡萄糖20-30g、氢氧化钠3-5g、苯酚红0.4-0.6g、磷酸氢二钾2-4g、磷酸氢二钠1-1.5g、碳酸氢钠8-9g、牛血清白蛋白4-5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.5-0.9g和硫酸多粘菌素B 0.1-0.5g。
2.根据权利要求1所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其特征在于：其原料按重量比份包括：氯化钠200g、氯化钾10g、D-葡萄糖25g、氢氧化钠4g、苯酚红0.5g、磷酸氢二钾3g、磷酸氢二钠1.25g、碳酸氢钠8.75g、牛血清白蛋白4.5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.7g和硫酸多粘菌素B 0.3g。
3.根据权利要求1所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其特征在于：其原料按重量比份包括：氯化钠150g、氯化钾8g、D-葡萄糖20g、氢氧化钠3g、苯酚红0.4g、磷酸氢二钾2g、磷酸氢二钠1g、碳酸氢钠8g、牛血清白蛋白4g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.5g和硫酸多粘菌素B 0.1g。
4.根据权利要求1所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液，其特征在于：其原料按重量比份包括：氯化钠250g、氯化钾12g、D-葡萄糖30g、氢氧化钠5g、苯酚红0.6g、磷酸氢二钾4g、磷酸氢二钠1.5g、碳酸氢钠9g、牛血清白蛋白5g、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐0.9g和硫酸多粘菌素B 0.5g。
5.一种权利要求1-4任意一项所述的适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、将所用器皿用75％乙醇消毒后置于操作台，操作环境用紫外线和臭氧灭菌1小时后，开始配置试剂；
S2、将25g缓冲液或者磷酸氢二钠和磷酸氢二钾加入一定量的水溶解，并定容到1000ml；
S3、取氢氧化钠，加入一定量的水溶解，定容至1000ml；
S4、依次称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、D-葡萄糖和苯酚红，加入一定量的水，使其充分溶解，倒入一个25L的容器内；
S5、依次往容器内加入100ml缓冲液和150ml氢氧化钠溶液，将容器内的液体加到19-21L，加入防腐剂10ml；
S6、将容器定容到25L，充分搅拌，密封，即得成品。
6.根据权利要求5所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中调节产品PH为7.2-7.8，渗透压为285-315，颜色为红色、粉红色或无色。
7.根据权利要求5所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤S2和S5中缓冲液为磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
8.根据权利要求5所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中防腐剂为proclin防腐剂。
9.根据权利要求5所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤S2-S4所用的水为二次蒸馏水或三次蒸馏水中的一种。
10.根据权利要求5所述的一种适用于病毒样本常温保存的保存液的制备方法，其特征在于：配置环境为不低于十万级的净化车间，且环境经过紫外线和臭氧灭菌，所用的器皿经过75％乙醇灭菌后并于环境一同灭菌，时间不低于1小时。
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