CN112313250A - 结合cd38的变体抗体 - Google Patents

Abstract

本公开提供了抗‑CD38 IgG类抗体，与具有原始野生型序列的亲本抗体相比，所述抗‑CD38 IgG类抗体具有改善的以更高的产率被制备的能力。本公开提供了一种突变的抗体轻链，其降低了切割异质性，从而改善了抗体轻链的同质群体的产生。

Description

结合CD38的变体抗体

本申请要求2018年6月20日，根据《美国法典》第35卷第119条提交的美国临时申请62/687,695，标题为“结合CD38的改良的变体抗体”的优先权，其全部内容在此参考并入。

在整个申请中，引用了各种出版物、专利和/或专利申请。出版物、专利和/或专利申请的公开内容在此参考并入到本申请中，以便更全面地描述本公开内容所涉及的当前最高水平。如果通过参考并入的任何材料与本申请的明确内容冲突，则以明确内容为准。

发明领域

本公开提供了相对于野生型序列具有变体轻链的抗-CD38 IgG类抗体。与野生型抗体相比，本公开的抗体可以具有以更高的产率被制备的能力和/或降低了切割异质性，这可以改善抗体轻链的同质性。

发明概述

CD38是一种45kD II型跨膜糖蛋白，所述跨膜糖蛋白具有长C-末端胞外域和短N-末端胞质域。所述CD38蛋白是一种双功能胞外酶，可以催化NAD⁺转化为环状ADP-核糖(cADPR)，也可以将cADPR水解为ADP-核糖。在个体发育过程中，CD38出现在CD34⁺定向干细胞和谱系定型的淋巴样细胞、红系细胞和骨髓细胞的祖细胞上。CD38表达主要在淋巴谱系中持续存在，并且在T细胞和B细胞发育的不同阶段具有不同的表达水平。

CD38在许多造血系统恶性肿瘤和源自各种造血系统恶性肿瘤的细胞系中上调，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、多发性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)、B和T急性淋巴细胞白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性髓细胞白血病(AML)、毛细胞白血病(HCL)、霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性髓细胞白血病(CML)。另一方面，造血系统最原始的多能干细胞是CD38^-。CD38在造血系统恶性肿瘤中的表达及其与疾病进展的相关性使CD38成为抗-CD38抗体治疗的诱人靶标。

据报道CD38参与Ca²⁺的动员(Morra等人，1998，美国实验生物学学会联合会杂志，12：581-592；Zilber等人，2000，美国科学院院报，97：2840-2845)以及许多信号分子(，包括淋巴和骨髓细胞或细胞系中的磷脂酶C-γ、ZAP-70、syk和c-cbl)通过酪氨酸磷酸化的信号转导(Funaro等人,1993,欧洲免疫学杂志,23:2407-2411；Morra等人,1998,FASEB杂志,12:581-592；Funaro等人,1990,免疫学杂志,145:2390-2396；Zubiaur等人,1997,免疫学杂志,159:193-205；Deaglio等人,2003,血液102:2146-2155；Todisco等人,2000,血液,95:535-542；Konopleva等人,1998,免疫学杂志,161:4702-4708；Zilber等人,2000,美国科学院院刊,97:2840-2845；Kitanaka等人,1997,免疫学杂志,159:184-192；Kitanaka等人,1999,免疫学杂志.,162:1952-1958；Mallone等人,2001,国际免疫学,13:397-409)。CD38被认为是淋巴和骨髓细胞正常发育过程中成熟和活化的重要信号分子。

CD38功能的证据来自CD38^-/^-基因敲除小鼠，其由于树突状细胞迁移缺陷而具有先天免疫缺陷和T细胞依赖性体液应答降低(Partida-Sanchez等人,2004,免疫学,20:279-291；Partida-Sanchez等人,2001,自然医学,7:1209-1216)。然而，尚不清楚小鼠中CD38的功能是否与人类相同，因为造血过程中CD38的表达模式在人与小鼠之间存在很大差异：a)与人类中的未成熟祖干细胞不同，小鼠中类似的祖干细胞表达出高水平的CD38(Randall等人,1996,血液,87:4057-4067；Dagher等人,1998,生物学的血液和骨髓移植,4:69-74),b)在人类B细胞发育期间，在生发中心B细胞和浆细胞中发现了高水平的CD38表达(Uckun,1990,血液,76:1908-1923；Kumagai等人,1995,实验医学杂志,181:1101-1110)，而在小鼠中，CD38在相应细胞中的表达水平较低(Oliver等人,1997,免疫学杂志.,158:108-1115；Ridderstad和Tarlinton，1998,免疫学杂志,160:4688-4695).

文献中已经描述了在各种肿瘤细胞和细胞系上具有不同增殖特性的几种抗人CD38抗体。例如，在来自多发性骨髓瘤患者或正常个体的外周血单核效应细胞存在下，具有小鼠Fab和人IgG1 Fc的嵌合OKT10抗体可非常有效地介导对抗淋巴瘤细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)(Stevenson等人,1991,血液,77:1071-1079)。研究显示抗-CD38抗体AT13/5的CDR移植的人源化形式对CD38阳性细胞系具有有效的ADCC活性。研究显示人类单克隆抗-CD38抗体通过ADCC和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)介导CD38阳性细胞系的体外杀伤作用，并延迟带有MM细胞系RPMI-8226的SCID小鼠内的肿瘤生长(WO2005/103083A2)。另一方面，几种抗-CD38抗体，IB4、SUN-4B7和OKT10，而不是IB6、AT1或AT2，可诱导正常个体的外周血单核细胞(PBMC)增殖(Ausiello等人，2000；组织抗原，56：539-547)。

据报道，已经有一些现有技术的抗体能够以依赖于基质细胞或依赖于基质的细胞因子的方式触发CD38⁺B细胞的凋亡。据报道，激动性抗-CD38抗体(IB4)可防止人类生发中心(GC)B细胞凋亡(Zupo等人，1994，欧洲免疫学杂志，24：1218-1222)，并诱导KG-1和HL-60AML细胞增殖(Konopleva等人1998，免疫学杂志，161：4702-4708)，但会诱导Jurkat T淋巴母细胞凋亡(Morra等人1998，FASEB杂志.，12：581-592)。另一种抗-CD38抗体T16诱导来自ALL患者的未成熟淋巴样细胞和白血病淋巴母细胞的细胞凋亡(Kumagai等人1995，实验医学杂志，181：1101-1110)，以及来自AML患者的白血病成髓细胞的凋亡(Todisco等人，2000，血液，95：535-542)，但T16仅在基质细胞或基质来源的细胞因子存在时诱导凋亡(IL-7，IL-3，干细胞因子)。

因此，用抗-CD38抗体靶向的抗体药物偶联物(ADC)，具有减少副作用的优势，有望提供有效的抗肿瘤活性。因此，本领域仍然需要基于CD38，特别是抗-CD38抗体的有效治疗。本发明提供了不同于全人源野生型序列的变体抗体序列。公开的变体抗体可以以高得多的产率生产和/或提供改善的轻链均质性。

本公开提供了结合CD38的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：1所示的序列，轻链可变区包含SEQ ID NO：3所示的序列。这样的抗原结合蛋白可以是，例如，单链抗体，其可以是全人源的。本公开提供了IgG类全人源抗体或抗体Fab片段，其包含重链和轻链，所述重链包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链可变区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。本公开提供了编码抗体轻链的核酸，所述抗体轻链包含具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区，其可以与编码抗体重链的核酸结合或进一步包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

本公开还提供了IgG类的变体抗体的群体，以及制备所述变体抗体的群体的方法。所述变体抗体的群体包含两种或更多种变体抗体(例如：多种变体抗体)。群体中的单个变体抗体包含各自具有两条抗体重链和两条抗体轻链的免疫球蛋白，其中所述轻链具有突变序列。轻链突变体序列降低了抗体制备过程中的切割异质性。例如，可以通过重组抗体重链和轻链的宿主细胞表达来制备变体抗体的群体。所述轻链变体序列可以在抗体制备期间将多肽长度异质性水平和氨基酸序列异质性水平降低约40-55％，从而降低变体抗体的制备中的异质性。

本公开提供了IgG类的变体抗体的群体，与表现出更高水平的多肽长度异质性和更高水平的氨基酸序列异质性的IgG类亲本野生型抗体的群体相比，其显示出降低的多肽长度异质性水平和降低的氨基酸序列异质性水平。变体抗体群体中的单个抗体包含具有野生型氨基酸序列的重链和具有突变氨基酸序列的轻链。轻链的突变氨基酸序列可以降低变体抗体群体中多肽长度异质性的水平并降低氨基酸序列异质性的水平约40-55％。

在一个实施方案中，变体抗体的群体包含具有重链的单个变体序列抗体，所述重链包含具有如SEQ ID NO：1所示的野生型氨基酸序列的重链可变区，以及具有轻链的单个变体抗体，所述轻链包含具有如SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列的轻链可变区。

在一个实施方案中，变体抗体的群体与CD38表位结合。

在一个实施方案中，变体抗体的群体包含全人源抗体。

在一个实施方案中，亲本野生型抗体群体中的单个亲本野生型抗体包含具有野生型氨基酸序列的轻链，其中约40-55％表现出多肽长度异质性和氨基酸序列异质性。

在一个实施方案中，变体抗体群体中的单个变体抗体包含具有突变氨基酸序列的轻链，其中约85-99％，85-100％，90-99％或90-100％表现出多肽长度同质性和氨基酸序列同质性。同质性可以量化为具有群体(例如，抗体轻链)中多数或大部分种类(例如：包含具有SEQ ID NO：3所示的序列的可变区的轻链)的长度和/或序列的群体成员的百分比。

在一个实施方案中，IgG类变体抗体的群体与CD38表位结合，并展现出与IgG类亲本野生型抗体群体相比，降低的多肽长度异质性水平和降低的序列异质性水平，而IgG类亲本野生型抗体的多肽长度异质性水平更高，序列异质性水平更高，其中变体序列群体中的单个抗体包含具有野生型氨基酸序列的重链和具有突变氨基酸序列的轻链，其中各个变体抗体的重链包含具有如SEQ ID NO：1所示的野生型氨基酸序列的重链可变区，其中各个变体抗体的轻链包含具有如SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列的轻链可变区，其中轻链的突变氨基酸序列使多肽长度异质性水平和序列异质性水平降低约40-55％。

本公开提供了全人源IgG类抗体的群体，所述全人源IgG类抗体包含具有SEQ IDNO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的轻链。

本公开提供了全人源Fab片段的群体，所述全人源Fab片段包含具有SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的轻链。

本公开提供了抗原结合蛋白的群体(例如：单链抗体，其可以是全人源的)，所述抗原结合蛋白包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列和SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列。在一个实施方案中，单链抗体包含通过肽接头连接在一起的重链可变区和轻链可变区。

本公开提供了抗原结合蛋白的群体(例如：全人源IgG类抗体)，所述抗原结合蛋白包含具有SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链，和含有在N末端附近具有两个点突变的SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的轻链，具体而言，第2位的丙氨酸被丝氨酸置换，第3位的甘氨酸被丙氨酸置换。在一个实施方案中，突变轻链的N末端包含QSALT(SEQ ID NO：6)所示的氨基酸序列。

本公开提供了变体抗体轻链的群体，所述变体抗体轻链的群体与亲本野生型抗体轻链的群体相比，多肽长度异质性水平降低，而氨基酸序列异质性水平降低，所述亲本野生型抗体轻链群体显示出更高水平的多肽长度和更高水平的氨基酸序列异质性。变体抗体轻链群体中的单个抗体轻链包含具有SEQ ID NO：3所示的突变氨基酸序列的轻链可变区。

在一个实施方案中，群体中的单个变体序列轻链包含全人源抗体轻链。

在一个实施方案中，亲本野生型抗体群体中的单个亲本野生型序列抗体轻链包含具有亲本野生型氨基酸序列的轻链可变区，其中约40-55％表现出多肽长度异质性和氨基酸序列异质性。

在一个实施方案中，变体抗体群体中的单个变体抗体包含具有突变氨基酸序列的轻链，其中约85-99％，85-100％，90-99％或90-100％表现出多肽长度同质性和氨基酸序列同质性。

在一个实施方案中，与具有较高水平的多肽长度异质性和较高水平的氨基酸序列异质性的亲本野生型抗体的群体相比，IgG类的变体抗体轻链表现出降低的多肽长度异质性水平和降低的氨基酸序列异质性水平。变体抗体轻链群体中的单个抗体轻链包含一个具有轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO：3所示的突变氨基酸序列，其中轻链的突变氨基酸序列使多肽长度异质性水平和氨基酸序列异质性水平降低约40-55％。

在一个实施方案中，全人源Fab片段包含具有SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列的轻链可变区的轻链。

在一个实施方案中，单链全人源抗体包含具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。

本公开提供了结合CD38表位的IgG类的全人源变体抗体，包含具有重链可变区的重链，所述重链可变区具有SEQ ID NO：1所示的野生型氨基酸序列，和具有轻链可变区的轻链，所述轻链可变区具有SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列。

本公开提供了结合CD38表位的全人源抗体Fab片段，其包含具有重链可变区的重链，所述重链可变区具有SEQ ID NO：1所示的野生型氨基酸序列,和具有轻链可变区的轻链，所述轻链可变区具有SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列。

本公开提供了结合CD38表位的抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)，其包含具有重链可变区的重链，所述重链可变区具有SEQ ID NO：1所示的野生型氨基酸序列，和具有轻链可变区的轻链，所述轻链可变区具有SEQ ID NO：3所示的突变的氨基酸序列。在一个实施方案中，单链抗体包含通过肽接头连接在一起的重链可变区和轻链可变区。

本公开提供了包含药学上可接受的赋形剂和IgG类的全人源抗体的药物组合物，所述IgG类全人源抗体包含具有SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变的氨基酸序列的轻链。

本公开提供了包含药学上可接受的赋形剂和全人源Fab片段的药物组合物，所述人源Fab片段包含具有SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链和具有SEQID NO：3所示的轻链可变区突变的氨基酸序列的轻链。

本发明提供了一种包含药学上可接受的赋形剂和抗原结合蛋白(例如，单链抗体，其可以是全人源的)的药物组合物，所述抗原结合蛋白包含具有SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变的氨基酸序列的轻链。

本公开提供了编码本公开的轻链的核酸。本公开内容提供了编码包含SEQ ID NO：3所示的轻链可变区氨基酸序列的抗体轻链的核酸。在一个实施方案中，所述核酸还包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，所述核酸编码全人源IgG类抗体。在一个实施方案中，所述核酸编码抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)。

本公开提供了编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的Fab片段的核酸。在一个实施方案中，所述核酸编码Fab片段，其还包含抗体重链。在一个实施方案中，所述核酸还包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。

本公开提供了编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的单链抗体的核酸。在一个实施方案中，所述核酸编码单链抗体，所述单链抗体还包括抗体重链。在一个实施方案中，所述核酸还包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。

本公开提供了与本公开公开的核酸可操作地连接的表达载体，例如编码具有SEQID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的抗体轻链。在一个实施方案中，载体还与编码抗体重链的核酸可操作地连接，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，表达载体与一种或多种编码全人源IgG类抗体的核酸可操作地连接。

本公开提供了表达载体，所述表达载体可操作地连接至编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的Fab片段的核酸。在一个实施方案中，载体编码Fab片段，其还包含抗体重链。在一个实施方案中，载体还与编码抗体重链的核酸可操作地连接，所述抗体包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。

本公开提供了表达载体，所述表达载体可操作地连接至编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)的核酸。在一个实施方案中，载体编码还包含抗体重链的单链抗体。在一个实施方案中，载体还与编码抗体重链的核酸可操作地连接，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。

本公开提供了包含本公开公开的编码抗体轻链的核酸的宿主细胞。本公开提供了宿主细胞，其携带与编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的抗体轻链的核酸可操作连接的表达载体。在一个实施方案中，宿主细胞携带的载体进一步可操作地连接至编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞携带第二表达载体，所述第二表达载体与编码抗体重链的核酸可操作地连接，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞表达抗体的轻链和重链。在一个实施方案中，宿主细胞表达具有轻链和重链的全人源IgG类抗体。

本公开提供了宿主细胞，所述宿主细胞具有表达载体，其可操作地连接至编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的Fab片段的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞携带的载体进一步可操作地连接至编码Fab片段的核酸，所述Fab片段包含SEQ IDNO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞携带第二表达载体，其与编码具有抗体重链的Fab片段的核酸可操作地连接，所述Fab片段包含抗体重链，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞表达具有轻链和重链的全人源Fab片段。

本公开提供了宿主细胞，所述宿主细胞携带可操作地连接至编码具有抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)的核酸的表达载体，所述抗原结合蛋白具有SEQ IDNO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞携带的载体进一步可操作地连接至编码单链抗体的核酸，所述单链抗体包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞表达具有轻链可变区和重链可变区的抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)。

本公开提供了制备全人源抗体轻链的方法，所述方法包括：在适于表达抗体轻链的条件下培养宿主细胞的群，其中所述群体中的单个宿主细胞带有表达载体，其与编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的抗体轻链的核酸可操作地连接。在一个实施方案中，群体中的单个宿主细胞携带表达载体，所述表达载体也可操作地连接至编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，群体中的单个宿主细胞携带第二表达载体，其与编码包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列的抗体重链的核酸可操作地连接。在一个实施方案中，宿主细胞的群表达抗体的轻链和重链。在一个实施方案中，宿主细胞的群表达具有轻链和重链的全人源IgG类抗体。在一个实施方案中，所述方法进一步包括：从宿主细胞的群中回收表达的抗体轻链。在一个实施方案中，所述方法进一步包括：从宿主细胞的群中回收表达的抗体轻链和重链。在一个实施方案中，90-100％表达和回收的抗体轻链具有正确的长度、正确的N-末端氨基酸、并且与SEQ ID NO：3所示的轻链可变区具有100％序列一致性。

本发明提供了一种制备全人源Fab片段的方法，所述方法包括：在适于表达Fab片段的条件下培养宿主细胞的群，其中所述群体中的单个宿主细胞具有与编码SEQ ID NO：3所示的具有轻链可变区突变氨基酸序列的抗体轻链的核酸可操作地连接的表达载体。在一个实施方案中，群体中的单个宿主细胞携带表达载体，所述表达载体也可操作地连接至编码Fab片段的核酸，所述Fab片段包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，群体中的单个宿主细胞携带第二表达载体，其与编码Fab片段重链的核酸可操作地连接，所述Fab片段包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞的群表达抗体的轻链和重链。在一个实施方案中，宿主细胞的群表达具有轻链和重链的全人源Fab片段。在一个实施方案中，所述方法进一步包括：从宿主细胞的群中回收表达的轻链。在一个实施方案中，所述方法进一步包括：从宿主细胞的群中回收表达的轻链和重链。在一个实施方案中，90-100％表达和回收的轻链具有正确的长度、正确的N-末端氨基酸、并且与SEQ ID NO：3所示的轻链可变区具有100％序列一致性。

本公开提供了一种制备抗原结合蛋白(例如：单链抗体，其可以是全人源的)的方法，所述方法包括：在适于表达单链抗体的条件下培养宿主细胞的群，其中所述群体中的单个宿主细胞具有与编码具有SEQ ID NO：3所示的轻链可变区突变氨基酸序列的抗体轻链的核酸可操作地连接的表达载体。在一个实施方案中，群体中的单个宿主细胞携带表达载体，所述表达载体也可操作地连接至编码单链抗体的核酸，所述单链抗体包含SEQ ID NO：1所示的重链可变区野生型氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞的群表达具有轻链可变区和重链可变区的全人源单链抗体。在一个实施方案中，所述方法进一步包括：从宿主细胞的群中回收表达的单链抗体。在一个实施方案中，90-100％表达和回收的轻链抗体具有正确的长度、正确的N-末端氨基酸、并且与SEQ ID NO：3所示的轻链可变区具有100％序列一致性。

附图说明

图1A示出了亲本野生型CD38 A2抗体，特别是包含SEQ ID NO：1示出的野生型序列的还原的去糖化抗体重链的液相色谱-质谱法(LC-MS)的结果。峰值用amu的分子量标记。

图1B示出了CD38 A2 SV变体抗体，特别是包含SEQ ID NO：1示出的野生型序列的还原的去糖化抗体重链的液相色谱-质谱法(LC-MS)的结果。峰值用amu的分子量标记。

图2A示出了亲本野生型CD38 A2抗体，特别是包含SEQ ID NO：2示出的野生型序列的抗体轻链的液相色谱-质谱法(LC-MS)的结果。峰值用amu的分子量标记。

图2B示出了变体CD38 A2 SV变体抗体，特别是包含SEQ ID NO：3示出的变体序列的抗体轻链的液相色谱-质谱法(LC-MS)的结果。峰值用amu的分子量标记。

图3A示出了亲本抗体CD38 A2的结合动力学的SPR传感图。

图3B示出了变体抗体CD38 A2 SV的结合动力学的SPR传感图。

发明详述

除非另有定义，否则本公开使用的技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常理解的含义除非另有定义。通常，与本公开描述的细胞和组织培养技术，分子生物学，免疫学，微生物学，遗传学，转基因细胞生产，蛋白质化学和核酸化学以及杂交有关的术语是本领域众所周知的并且通常在本领域中使用。除非另有说明，否则本公开提供的方法和技术通常根据本领域众所周知的常规程序进行，并且如本公开引用和讨论的各种一般性和更具体的参考文献中所述。参见，例如：Sambrook等人，分子克隆：实验手册，第二版，美国冷泉港实室期刊，冷泉港，纽约(1989)和Ausubel等人，分子生物学的当前方法，格林出版协会(1992)。许多基本公开献描述了标准抗体的生产过程，包括Borrebaeck(主编)，抗体工程，第二版弗里曼公司，纽约，1995；McCafferty等人，抗体工程，一种实用的方法，IRL于牛津出版社，牛津，英国，1996年；和Paul(1995)抗体工程方案Humana出版社，托托瓦，新泽西州，1995；保罗(主编)，基础免疫学，Raven出版社，纽约，1993；Coligan(1991)免疫学最新方案，威利/格林，纽约；Harlow和Lane(1989)抗体：实验室手册，美国冷泉港实室期刊，纽约；Stites等人(编辑)基础和临床免疫学(第四版)，Lange医学出版社，洛斯阿尔托斯，加利福尼亚州，及其引用的参考文献；编码单克隆抗体：原理和实践(第二版)，学术出版社，纽约，纽约，1986，以及Kohler和Milstein，自然，256：495-497，1975。在此引用的所有参考文献的全部内容在此参考并入。酶促反应和富集/纯化技术也是众所周知的，并根据制造商的说明书进行，如本领域通常完成的或如本公开所述。本公开描述的与分析化学，合成有机化学以及药物和药物化学相关的术语以及实验室程序和技术是众所周知的，并且在本领域中是常用的。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和输送以及患者治疗。

本公开提供的标题不是对本公开的各个方面的限制，可以通过整体上参考说明书来理解这些方面。

除非本公开上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。除非明显且明确地限制一个对象，否则单数形式的“一(a)”，“一个(an)”和“所述(the)”以及任何单词的单数形式都包括复数个对象。

应当理解，本公开中替代方案(例如“或”)的使用被认为是指替代方案中的任何一个或两者或它们的任何组合。

本公开所用的术语“和/或”应理解为是指每个指定的特征或部件具有或不具有其他特征或部件的具体公开。例如，在本公开中在诸如“A和/或B”之类的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”，“A或B”，“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在诸如“A，B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下各个方面：A、B和C；以及A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

如本公开所使用的，术语“包括”(comprising)，“包括”(including)，“具有”(having)和“包含”(containing)以及它们的语法变体，如本公开所使用的，是非限制性的，从而列表中的一项或多项不排除其他可以替代或添加到所列项中的项。应当理解，无论在何处用语言“包括”来描述方面，都还提供了以“由...组成”和/或“基本上由...组成”描述的类似方面。

如本公开所用，术语“大约”是指在如本领域普通技术人员所确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，这将部分取决于该值或组成如何被测量或确定，即测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“大约”或“近似地”可以表示一个或多个标准偏差之内。可替代地，“大约”或“近似地”可以指高达10％(即，±10％)或更大的范围，这取决于测量系统的局限性。例如，约5mg可包括4.5mg至5.5mg之间的任何数字。此外，特别是关于生物系统或过程，这些术语可以表示最多一个数量级或一个值的5倍。当在本公开中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应假定“大约”或“近似地”的含义在该特定值或组成的可接受误差范围内。

本公开使用的术语“肽”，“多肽”和“蛋白质”以及其他相关术语可互换使用，是指氨基酸的聚合物，并且不限于任何特定的长度。多肽可包含天然和非天然氨基酸。多肽包括重组或化学合成形式。多肽还包括尚未进行切割的前体分子，例如通过分泌性信号肽的切割或在某些氨基酸残基的非酶促切割。多肽包括已经切割的成熟分子。这些术语涵盖蛋白质序列的天然和人工蛋白质、蛋白质片段和多肽类似物(例如：突变蛋白、变体、嵌合蛋白和融合蛋白)，以及翻译后或共价或非共价修饰的蛋白。本公开描述了包含使用重组方法制备的结合CD38的结合蛋白的氨基酸序列的多肽(例如：抗-CD38抗体或其抗原结合部分)。

本公开使用的术语“核酸”、“多核苷酸”和“寡核苷酸”以及其他相关术语可互换使用，并且是指核苷酸的聚合物，并且不限于任何特定的长度。核酸包括重组形式和化学合成形式。核酸包括DNA分子(cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如：mRNA)、使用核苷酸类似物(例如：肽核酸和非天然存在的核苷酸类似物)产生的DNA或RNA的类似物，及其杂交。核酸分子可以是单链或双链的。在一个实施方案中，本公开的核酸分子包含编码抗体或其片段或scFv、衍生物、突变蛋白或变体的连续的开放阅读框。在一个实施方案中，核酸包含一种类型的多核苷酸或两种或更多种不同类型的多核苷酸的混合物。本公开描述了编码抗体轻链、抗体重链、抗-CD38抗体或其抗原结合部分的核酸。

术语“回收”(recover)或“回收”(recovery)或“回收”(recovering)以及其他相关术语是指从宿主细胞培养基或宿主细胞裂解物中或从宿主细胞膜中获得蛋白质(例如：抗体或其抗原结合部分)。在一个实施方案中，所述蛋白质由宿主细胞表达为重组蛋白质，所述重组蛋白质与介导表达的蛋白质的分泌的分泌信号肽序列融合。所述分泌的蛋白质可以从宿主细胞培养基中回收。在一个实施方案中，所述蛋白质由宿主细胞表达为重组蛋白，所述重组蛋白缺乏可从宿主细胞裂解物中回收的分泌信号肽序列。在一个实施方案中，所述蛋白质由宿主细胞表达为膜结合蛋白，可以使用洗涤剂回收所述蛋白以从宿主细胞膜释放所述表达的蛋白。在一个实施方案中，不管用于回收蛋白质的方法如何，都可以对该蛋白质进行从回收的蛋白质中去除细胞碎片的程序。例如，可以对回收的蛋白质进行色谱、凝胶电泳和/或透析。在一个实施方案中，色谱包括任何一种或任何组合或两种或更多种方法，包括亲和色谱、羟基磷灰石色谱、离子交换色谱、反相色谱和/或硅胶色谱。在一个实施方案中，亲和色谱包括蛋白质A或G(来自金黄色葡萄球菌的细胞壁成分)。

术语“分离的”是指基本上不含其他细胞物质的蛋白质(例如：抗体或其抗原结合部分)或多核苷酸。使用本领域公知的蛋白质纯化技术，可以通过分离使蛋白质基本不含天然相关成分(或与细胞表达系统或用于产生抗体的化学合成方法相关的成分)。在一些实施方案中，术语分离的还指基本上不含相同物种的其他分子的蛋白质或多核苷酸，例如分别具有不同氨基酸或核苷酸序列的其他蛋白质或多核苷酸。可以使用本领域众所周知的技术(包括低分辨率方法，例如凝胶电泳，和高分辨率方法，例如HPLC或质谱法)来测定所需分子的同质性纯度。在一个实施方案中，可以分离任何抗体轻链、抗体重链、抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白。

本公开所用的“抗原结合蛋白”和相关术语是指包含与抗原结合的部分以及任选地使抗原结合部分采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或框架部分的蛋白质。抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如：抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。所述抗原结合蛋白可包括，例如具有移植的CDR或CDR衍生物的替代蛋白支架或人工支架。此类支架包括但不限于抗体衍生的支架，其包含被引入以例如稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变，以及包括例如生物相容性聚合物的全合成支架。参见，例如，Korndorfer等人，2003，蛋白质：结构，功能和生物信息学，第53卷，第1：121-129页；Roque等人，2004，生物技术进步，20：639-654。另外，可以使用肽抗体模拟物(“PAM”)以及基于抗体模拟物的支架，所述抗体模拟物利用纤连蛋白组分作为支架。本公开描述了结合CD38的抗原结合蛋白。

抗原结合蛋白可以具有，例如免疫球蛋白的结构。在一个实施方案中，“免疫球蛋白”是指由两对相同的多肽链组成的四聚体分子，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每条链的羧基末端部分定义一个恒定区，主要负责效应子功能。人类轻链被分类为κ或λ轻链。重链被分类为μ，δ，γ，α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgM，IgD，IgG，IgA和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或更多氨基酸的“J”区域相连，重链还包括约10个以上氨基酸的“D”区域。总体参考，基础免疫学杂志第7章(Paul，W，主编，第二版，Raven出版社，纽约，(1989))(其全部内容在此参考并入)。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点，使得完整的免疫球蛋白具有两个抗原结合位点。在一个实施方案中，抗原结合蛋白可以是具有不同于四聚体免疫球蛋白分子但仍结合靶抗原或结合两种或更多种靶抗原的结构的合成分子。例如，合成的抗原结合蛋白可以包含抗体片段，1-6条或更多条多肽链，多肽的不对称装配体或其他合成分子。本公开描述了特异性结合CD38的具有免疫球蛋白样特性的抗原结合蛋白。

免疫球蛋白链的可变区显示出由三个高变区，也称为互补决定区或CDR，连接的相对保守的框架区(FR)的相同一般结构。从N-末端到C-末端，轻链和重链均包含FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4结构域。

可将一个或多个CDR共价或非共价地掺入分子中以使其成为抗原结合蛋白。抗原结合蛋白可以将所述CDR作为较大的多肽链的一部分掺入，可以将所述CDR共价连接到另一条多肽链，或者可以非共价地掺入所述CDR。所述CDR允许抗原结合蛋白特异性结合特定的目标抗原。

氨基酸到每个结构域的分配是根据Kabat等人，在具有免疫学意义的蛋白质序列，第五版，美国卫生和公共服务部，美国公众健康服务局，美国国立卫生研究院，美国国立卫生研究院第91-3242号，1991，中的定义。免疫球蛋白链中氨基酸的其他编号系统包括IMGT.RTM.(国际ImMunoGeneTics信息系统；Lefranc等人，发育与比较免疫学，29：185-203；2005)和AHo(Honegger和Pluckthun，分子生物学杂志309(3)：657-670；2001)；Chothia(Al-Lazikani等人，1997，分子生物学杂志273：927-948；Contact(Maccallum等人，1996，分子生物学杂志262：732-745，和Aho(Honegger和Pluckthun，2001，分子生物学杂志309：657-670。

本公开使用的“抗体”(antibody)和“抗体”(antibodies)及相关术语是指完整的免疫球蛋白或其特异性结合抗原的抗原结合部分。抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶或化学切割来产生。抗原结合部分尤其包括Fab，Fab'，F(ab')2，Fv，结构域抗体(dAbs)和互补决定区(CDR)片段，单链抗体(scFv)，嵌合抗体，双抗体，三抗体，四抗体和多肽，它们包含至少一部分免疫球蛋白，足以使多肽与抗原特异性结合。

抗体包括重组产生的抗体和抗原结合部分。抗体包括非人类，嵌合，人源化和全人源抗体。抗体包括单特异性，多特异性(例如：双特异性，三特异性和高阶特异性)。抗体包括四聚体抗体，轻链单体，重链单体，轻链二聚体，重链二聚体。抗体包括F(ab')2片段，Fab'片段和Fab片段。抗体包括单结构域抗体，单价抗体，单链抗体，单链可变片段(scFv)，骆驼化抗体，亲和体，二硫键连接的Fv(sdFv)，抗-独特型抗体(anti-Id)，小抗体。抗体包括单克隆和多克隆群体。本公开描述了包含抗体轻链和重链的抗-CD38抗体。

本公开使用的“抗原结合结构域”，“抗原结合区域”或“抗原结合位点”和其他相关术语是指抗原结合蛋白的一部分，其包含与抗原相互作用的氨基酸残基(或其他部分)并有助于抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力。对于特异性结合其抗原的抗体，这将包括至少一个其CDR结构域的至少一部分。本公开描述了来自抗-CD38抗体的抗原结合结构域。

如本公开在抗体或抗原结合蛋白或抗体片段的上下文中所使用的术语“特异性结合”(specific binding)，“特异性结合”(specifically binds)或“特异性结合”(specifically binding)以及其他相关术语是指，相对于其他分子或部分与抗原的非共价或共价优先结合(例如：相对于其他可用抗原，抗体特异性结合特定抗原)，。在一个实施方案中，如果抗体以10^-5M或更小，或10^-6M或更小，或10^-7M或更小或10^-8M或更小，或10^-9M或更小，或10^-10M或更小的解离常数KD结合抗原，则抗体特异性结合靶抗原。本公开描述了特异性结合CD38的抗-Cd38抗体。

在一个实施方案中，可使用BIACORE表面等离子体激元共振(SPR)测定法测量解离常数(KD)。表面等离子体激元共振是指一种光学现象，可通过检测生物传感器基质(例如使用BIACORE系统(GE Healthcare的Biacore生命科学部门，皮斯卡特维，新泽西州))中蛋白质浓度的变化来分析实时相互作用。

如本公开所用，“表位”和相关术语是指被抗原结合蛋白(例如：被抗体或其抗原结合部分)结合的抗原的一部分。表位可以包含被抗原结合蛋白结合的两个或更多个抗原的部分。表位可以包含抗原或两个或多个抗原的不连续部分(例如：在抗原的一级序列中不连续的氨基酸残基，但在抗原的三级和四级结构的背景下，它们彼此之间的距离足够近，可以被抗原结合蛋白结合)。通常，抗体的可变区，特别是CDR，与表位相互作用。本公开描述了结合CD38多肽(抗原)的表位的抗-CD38抗体及其抗原结合蛋白。

本公开使用的“抗体片段”，“抗体部分”，“抗体的抗原结合片段”或“抗体的抗原结合部分”和其他相关术语是指除完整抗体以外的分子，其包含与完整抗体所结合的抗原结合的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv，Fab，Fab'，Fab'-SH，F(ab')2；Fd；Fv片段以及dAb；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如：scFv)；多肽，其包含足以赋予多肽抗原结合特异性的抗体的至少一部分。抗体的抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学切割来产生。抗原结合部分尤其包括Fab，Fab'，F(ab')2，Fv，结构域抗体(dAb)和互补决定区(CDR)片段，嵌合抗体，双抗体，三抗体，四抗体和包含至少一部分免疫球蛋白的多肽，其足以赋予抗原与抗体片段的结合特性。本公开描述了抗-CD38抗体的抗原结合片段。

术语“Fab”，“Fab片段”和其他相关术语是指包含可变轻链区(VL)，恒定轻链区(CL)，可变重链区(VH)和第一恒定区(CH1)的单价片段。Fab能够结合抗原。F(ab')2片段是一个二价片段，包含两个通过铰链区的二硫键连接的Fab'片段。F(ab')2具有抗原结合能力。Fd片段包含VH和CH1区域。Fv片段包含VL和VH区。Fv可以结合抗原。dAb片段具有VH结构域，VL结构域或VH或VL结构域的抗原结合片段(美国专利号6,846,634和6,696,245；美国公开申请号2002/02512、2004/0202995、2004/0038291、2004/0009507，2003/0039958；和Ward等人，自然，341：544-546，1989)。本公开描述了包含来自抗-CD38抗体的抗原结合部分的Fab片段。

单链抗体(scFv)是一种抗体，其中VL和VH区通过接头(例如：氨基酸残基的合成序列)连接以形成连续蛋白链。优选地，接头足够长以允许蛋白质链自身折叠并形成单价抗原结合位点(参见，例如，Bird等人，1988，科学242：423-26和Huston等人，1988，美国科学院院报85：5879-83)。本公开描述了包含来自抗-CD38抗体的抗原结合部分的单链抗体。

双抗体是包含两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链均包含通过接头连接的VH和VL结构域，所述接头太短而无法在同一条链上的两个结构域之间配对，因此允许每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对(参见，例如Holliger等人，1993，美国科学院院报，90：6444-48，和Poljak等人，1994，结构，2：1121-23)。如果双抗体的两条多肽链相同，则由它们配对产生的双抗体将具有两个相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可用于制备具有两个不同抗原结合位点的双抗体。类似地，三抗体和四抗体是分别包含三个和四个多肽链并分别形成三个和四个抗原结合位点的抗体，抗原结合位点可以相同或不同。可以使用来自本公开所述的任何抗-CD38抗体的抗原结合部分来制备双抗体，三抗体和四抗体构建体。

术语“人源抗体”是指具有一个或多个源自人免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。在一个实施方案中，所有可变和恒定结构域均源自人免疫球蛋白序列(例如：全人源抗体)。这些抗体可以用多种方式制备，其实例如下所述，包括通过重组方法或通过用目的抗原对小鼠进行免疫，所述小鼠经基因修饰以表达源自人重链和/或轻链编码基因的抗体。本公开描述了全人源抗-CD38抗体及其抗原结合蛋白。

“人源化”抗体是指具有与源自非人物种抗体的序列相差一个或多个氨基酸替代，缺失和/或添加的序列的抗体，使得人源化抗体在给人类受试者施用时，与非人物种抗体相比，诱导免疫反应的可能性较小，和/或诱导的免疫反应较小。在一个实施方案中，使非人物种抗体的重链和/或轻链的框架和恒定结构域中的某些氨基酸突变以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，来自人源抗体的恒定结构域与非人物种的可变结构域融合。在另一个实施方案中，非人源抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基被改变以降低当将非人源抗体施用于人类受试者时可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残基要么对抗体与其抗原的免疫特异性结合不是至关重要的，要么对氨基酸序列所做的改变是保守的改变，以使人源化抗体与抗原的结合不比非人源抗体与抗原的结合显著恶化。如何制备人源化抗体的实例可以在美国专利号6,054,297、5,886,152和5,877,293中找到。

本公开所用的术语“嵌合抗体”和相关术语是指包含来自第一抗体的一个或多个区域和来自一个或多个其他抗体的一个或多个区域的抗体。在一个实施方案中，一个或多个所述CDR源自人源抗体。在另一个实施方案中，所有所述CDR都源自一个人源抗体。在另一个实施方案中，来自一种以上人源抗体的所述CDR在嵌合抗体中混合并匹配。例如，嵌合抗体可以包含来自第一人源抗体的轻链的CDR1，来自第二人抗体的轻链的CDR2和CDR3，以及来自第三抗体的重链的CDR。在另一个实例中，CDR源自不同物种，例如人和小鼠，或人和兔子，或人和山羊。本领域技术人员将理解，其他组合也是可能的。

此外，构架区可以源自相同的抗体之一，源自一种或多种不同抗体，例如人源抗体，或源自人源化抗体。在嵌合抗体的一个实施例中，重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体相同、同源或衍生，而链的其余部分(一个或多个)与来自另一个物种或属于另一个抗体类别或亚类的抗体(多个抗体)相同，同源或衍生。还包括表现出所需生物学活性(即特异性结合靶抗原的能力)的此类抗体的片段。嵌合抗体可以由本公开所述的抗-CD38抗体的一部分制备。

如本公开所用，术语“变体”多肽和多肽的“变体”是指包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含，相对于参照多肽序列，一个或多个氨基酸残基插入，缺失和/或取代到所述氨基酸序列中。多肽变体包括融合蛋白。以相同的方式，变体多核苷酸包含核苷酸序列，相对于另一多核苷酸序列，具有一个或多个核苷酸插入，缺失和/或取代到核苷酸序列中。多核苷酸变体包括融合多核苷酸。

如本公开所用，术语多肽的“衍生物”是指已经被化学修饰的多肽(例如：抗体)，例如通过与另一化学部分结合，例如聚乙二醇，白蛋白(例如：人血清白蛋白)，磷酸化和糖基化。除非另有说明，否则术语“抗体”除了包括包含两条全长重链和两条全长轻链的抗体之外，还包括其衍生物，变体，片段和突变蛋白，其实例描述如下。

如本公开所用，术语“Fc”或“Fc区”是指抗体重链恒定区位于铰链区中或铰链区之后，并终止于重链的C末端的部分。所述Fc区包括CH和CH3区域的至少一部分，并且可以包括或可以不包括铰链区域的一部分。两条各自带有半个Fc区的多肽链可以二聚形成完整的Fc结构域。Fc结构域可以结合Fc细胞表面受体和免疫补体系统的一些蛋白质。Fc结构域展示效应子功能，包括两种或多种活性的任何一种或任何组合，所述活性包括补体依赖性细胞毒性(CDC)，抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)，抗体依赖性吞噬作用(ADP)，调理作用和/或细胞结合。Fc结构域可以结合Fc受体，包括FcγRI(例如：CD64)，FcγRII(例如：CD32)和/或FcγRIII(例如：CD16a)。

如本公开所用，术语“标记的抗体”或相关术语是指抗体及其抗原结合部分在其中是未标记或与可检测的标记或部分连接以进行检测，其中可检测的标记或部分是放射性的，比色的，抗原的，酶促的，可检测的珠子(例如磁珠或电极珠(例如：金))，生物素，链霉亲和素或蛋白质A。可使用多种标记，包括但不限于放射性核素，荧光剂，酶，酶底物，酶辅因子，酶抑制剂和配体(例如：生物素，半抗原)。本公开所述的任何抗-CD38抗体可以是未标记的或可以与可检测的标记或部分连接。

本公开使用的“同一性百分比”或“同源性百分比”和相关术语是指两个多肽之间或两个多核苷酸序列之间的相似性的定量测量。两个多肽序列之间的同一性百分比是两个多肽序列之间共享的比对位置上相同氨基酸数量的函数，其中考虑了缺口数量和每个缺口的长度，可能需要引入以优化两个多肽序列的比对。以类似的方式，两个多核苷酸序列之间的同一性百分比是两个多核苷酸序列之间共享的比对位置上相同核苷酸的数量的函数，其中考虑了缺口的数量和每个缺口的长度，可能需要引入以优化两个多核苷酸序列的比对。可以使用数学算法完成两个多肽序列之间或两个多核苷酸序列之间的序列比较和同一性百分比的确定。例如，两个多肽或两个多核苷酸序列的“同一性百分比”或“同源性百分比”可以通过使用GAP计算机程序(GCG Wisconsin Package的一部分，版本10.3(Accelrys，圣地亚哥，加利福尼亚))使用其默认参数比较序列来确定。关于测试序列，诸如“包括与Y具有至少X％同一性的序列”的表述是指当与如上所述的序列Y进行比对时，测试序列包含与Y的至少X％的残基相同的残基。

在一个实施方案中，测试抗体的氨基酸序列可以与组成任何本公开所述的抗-CD38抗体或抗原结合蛋白的轻链和/或重链多肽的任何氨基酸序列相似但不相同。测试抗体与多肽之间的相似性可以与构成任何本公开所述的抗-CD38抗体或抗原结合蛋白的任何轻链和/或重链多肽至少95％相同，或96％或至少96％相同，或至少97％相同，或至少98％相同，或至少99％相同。在一个实施方案中，相似的多肽可在重链和/或轻链内包含氨基酸取代。在一个实施方案中，氨基酸取代包括一个或多个保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有有相似化学性质(例如：电荷或疏水性)侧链(R基团)的的另一个氨基酸残基取代的氨基酸。通常，保守的氨基酸取代基本上不会本质上改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列通过保守取代而彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似度以校正取代的保守性质。进行该调整的手段是本领域技术人员众所周知的。参见，例如Pearson(1994)分子生物学方法，24：307-331，其全部内容在此参考并入。具有类似化学性质的侧链的氨基酸基团的实例包括：(1)脂肪族侧链：甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳族侧链：苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；(5)基本侧链：赖氨酸，精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及(7)含硫侧链是半胱氨酸和蛋氨酸。

抗体可以从诸如血清或血浆的来源获得，所述来源包含具有变化的抗原特异性的免疫球蛋白。如果对此类抗体进行亲和纯化，则可以针对特定的抗原特异性进行富集。这种富含抗体的制剂通常由少于约10％的对特定抗原具有特异性结合活性的抗体制成。将这些制剂进行几轮亲和纯化可以增加对抗原具有特异性结合活性的抗体的比例。以这种方式制备的抗体通常称为“单特异性”。单特异性抗体制剂可以由约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，97％，99％或99.9％的对特定抗原具有特异性结合活性的抗体组成。可以使用如下所述的重组核酸技术产生抗体。

本公开使用的“载体”和相关术语是指可以与外来遗传物质(例如核酸转基因)可操作地连接的核酸分子(例如：DNA或RNA)。载体可用作将外来遗传物质引入细胞(例如：宿主细胞)的媒介。载体可以包括至少一种限制性核酸内切酶识别序列，用于将转基因插入载体中。载体可以包括至少一种赋予抗生素抗性或可选择特征的基因序列，以帮助选择携带载体-转基因构建体的宿主细胞。载体可以是单链或双链核酸分子。载体可以是线性或环状核酸分子。载体的一种类型是“质粒”，其是指可以与转基因连接并能够在宿主细胞中复制，转录和/或翻译该转基因的线性或环状双链染色体外DNA分子。病毒载体通常包含可与转基因连接的病毒RNA或DNA主链序列。可以修饰病毒主链序列以禁用感染，但是保留病毒主链和共连接的转基因插入宿主细胞基因组中。病毒载体的实施例包括逆转录病毒，慢病毒，腺病毒，腺相关，杆状病毒，乳头病毒，牛痘病毒，单纯疱疹病毒和Epstein Barr病毒载体。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如：包含细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。在引入宿主细胞后，将其他载体(例如：非游离型的哺乳动物载体)整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。

“表达载体”是一种载体，所述表达载体可以包含一个或多个调控序列，例如诱导型和/或组成型启动子和增强子。表达载体可以包括核糖体结合位点和/或聚腺苷酸化位点。调控序列指导与表达载体连接的转基因的转录或转录和翻译，所述表达载体被转导到宿主细胞中。调节序列可以控制转基因表达的水平，时间和/或位置。调节序列可以，例如直接在转基因上发挥作用，或通过一种或多种其他分子(例如：与调节序列和/或核酸结合的多肽)的作用发挥作用。调控序列可以是载体的一部分。调节序列的其他实例描述于，例如Goeddel，1990，基因表达技术：酶学方法185，学术出版社，圣地亚哥，加利福尼亚州和Baron等人，1995，核酸研究，23：3605-3606。表达载体可包含编码本公开所述的任何轻链，重链或抗-CD38抗体的至少一部分的核酸。

当转基因和载体之间存在连接以允许载体中包含的转基因序列起作用或表达时，转基因与载体“可操作地连接”。在一个实施方案中，当调控序列影响转基因的表达时(例如：表达的水平，时间或位置)，转基因与调控序列“可操作地连接”。

本公开使用的术语“转染的”或“转化的”或“转导的”或其他相关术语是指将外源核酸(例如：转基因)被转移或引入宿主细胞的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”宿主细胞是已经用外源核酸(转基因)转染，转化或转导的细胞。所述宿主细胞包括原代受试细胞及其后代。可以将编码本公开所述的任何轻链，重链或抗-CD38抗体的至少一部分的外源核酸引入宿主细胞。可以将包含本公开所述的任何轻链，重链或抗-CD38抗体的至少一部分的表达载体引入宿主细胞，并且所述宿主细胞可以表达包含至少一部分轻链，重链或抗-CD38抗体的多肽。

如本公开所用，术语“宿主细胞”或“或宿主细胞的群”或相关术语是指已向其中引入外源(外源或转基因)核酸的细胞(或其群体)。所述外源核酸可以包括与转基因可操作地连接的表达载体，并且宿主细胞可以用于表达由外源核酸(转基因)编码的核酸和/或多肽。宿主细胞(或其群体)可以是培养的细胞或可以从受试者中提取。所述宿主细胞(或其群体)包括原代受试细胞及其后代，而无需考虑传代次数。与亲代细胞相比，后代细胞可能携带或可能不携带相同的遗传物质。宿主细胞包括子代细胞。在一个实施方案中，宿主细胞描述了已经以任何方式修饰，转染，转导，转化和/或操纵以表达抗体的任何细胞(包括其后代)，如本公开所公开的。在一个实例中，可以用表达载体引入宿主细胞(或其群体)，所述表达载体可操作地连接至编码本公开所述的所需抗体或其抗原结合部分的核酸。宿主细胞及其群体可以携带稳定整合到宿主基因组中的表达载体，也可以携带染色体外表达载体。在一个实施方案中，宿主细胞及其群体可以携带染色体外载体，其在几次细胞分裂后存在或瞬时存在，并在几次细胞分裂后丢失。

宿主细胞可以是原核生物，例如大肠杆菌，也可以是真核生物，例如单细胞真核生物(例如：酵母或其他真菌)，植物细胞(例如：烟草或番茄植物细胞)，哺乳动物细胞(例如：人细胞，猴细胞，仓鼠细胞，大鼠细胞，小鼠细胞或昆虫细胞)或杂交细胞。在一个实施方案中，可以向宿主细胞中引入与编码所需抗体的核酸可操作连接的表达载体，从而产生转染/转化的宿主细胞，其在适合于被转染/转化的宿主细胞表达抗体的条件下培养，并且任选地从转染/转化的宿主细胞中回收抗体(例如：从宿主细胞裂解物中回收)或从培养基中回收。在一个实施方案中，宿主细胞包含非人源细胞，包括CHO，BHK，NS0，SP2/0和YB2/0。在一个实施方案中，宿主细胞包括人源细胞，包括HEK293，HT-1080，Huh-7和PER.C6。宿主细胞的实施例包括猴肾细胞的COS-7系(ATCC CRL 1651)(参见Gluzman等人，1981，Cell 23：175)，L细胞，C127细胞，3T3细胞(ATCC CCL 163)，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或其衍生物，例如在无血清培养基中生长的Veggie CHO和相关细胞系(参见Rasmussen等人，1998，细胞工程技术，28：31)或DHFR不足的CHO菌株DX-B 11(参见Urlaub等人，1980，美国科学院院报，77：4216-20)，HeLa细胞，BHK(ATCC CRL 10)细胞系，源自非洲绿猴肾细胞系CV1(ATCC CCL 70)的CV1/EBNA细胞系(参见McMahan等人，1991，EMBO杂志，10：2821)，人胚胎肾细胞例如293，293EBNA或MSR 293，人表皮A431细胞，人Colo 205细胞，其他转化的灵长类细胞系，正常二倍体细胞，源自原代组织，原代外植体，HL-60，U937，HaK或Jurkat细胞体外培养的细胞株。在一个实施方案中，宿主细胞包括淋巴样细胞，例如Y0，NS0或Sp20。在一个实施方案中，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，但不是人宿主细胞。通常，宿主细胞是可以用编码多肽的核酸转化或转染的培养细胞，然后可以在宿主细胞中表达该核酸。短语“转基因宿主细胞”或“重组宿主细胞”可用于表示已经用待表达的核酸转化或转染的宿主细胞。宿主细胞也可以是包含所述核酸的细胞，但所述核酸不以所需水平表达，除非将调控序列引入所述宿主细胞中，从而使其与所述核酸可操作地连接。应当理解，术语宿主细胞不仅指特定的对象细胞，而且还指这种细胞的后代或潜在后代。因为某些修饰可能由于例如突变或环境影响而在后代中发生，所以此类后代实际上可能与亲本细胞不同，但仍包括在本公开所用术语的范围内。

本公开的多肽(例如：抗体和抗原结合蛋白)可以使用本领域已知的任何方法来产生。在一个实例中，通过将编码多肽的核酸序列(例如DNA)插入重组表达载体中，所述重组表达载体被引入宿主细胞并在促进表达的条件下被宿主细胞表达的重组核酸方法产生多肽。

重组核酸操作的一般技术描述于，例如在Sambrook等人在分子克隆：实验室手册，卷1-3，美国冷泉港实室期刊，第2版，1989年，或在F.Ausubel等人，在分子生物学的现行规程(绿色出版和威立-Interscience：纽约，1987年)中，以及定期的更新，其全部内容在此参考并入。编码多肽的核酸(例如：DNA)可操作地连接至表达载体，所述表达载体携带一种或多种合适的源自哺乳动物，病毒或昆虫基因的转录或翻译调控元件。此类调节元件包括转录启动子，控制转录的任选操纵子序列，编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列以及控制转录和翻译终止的序列。所述表达载体可以包括赋予在宿主细胞中复制能力的复制起点。所述表达载体可以包括赋予选择以促进对转基因宿主细胞(例如：转化体)的识别的基因。

所述重组DNA还可以编码可用于纯化蛋白质的任何类型的蛋白质标签序列。蛋白质标签的实施例包括但不限于组氨酸标签，FLAG标签，myc标签，HA标签或GST标签。与细菌，真菌，酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的合适的克隆和表达载体可以在克隆载体：实验室手册，(Elsevier，纽约，1985)中找到。

可以使用适合宿主细胞的方法将所述表达载体构建体引入所述宿主细胞。用于将核酸引入宿主细胞的多种方法在本领域中是已知的，包括但不限于电穿孔；使用氯化钙，氯化铷，磷酸钙，DEAE-葡聚糖或其他物质进行转染；病毒转染；非病毒转染；微粒轰击；脂质转染；和感染(例如：当载体是传染性试剂时)。合适的宿主细胞包括原核生物，酵母，哺乳动物细胞或细菌细胞。

合适的细菌包括革兰阴性或革兰阳性微生物，例如大肠杆菌或芽孢杆菌。酵母，优选来自酿酒酵母物种的酵母，例如酿酒酵母，也可以用于产生多肽。各种哺乳动物或昆虫细胞培养系统也可以用于表达重组蛋白。Luckow和Summers(生物/科技，6：47，1988)综述了在昆虫细胞中产生异源蛋白质的杆状病毒系统。合适的哺乳动物宿主细胞系的实例包括内皮细胞、COS-7猴肾细胞、CV-1、L细胞、C127、3T3、中国仓鼠卵巢(CHO)、人胚肾细胞、HeLa、293、293T和BHK细胞系。通过培养合适的宿主/载体系统以表达重组蛋白来制备纯化的多肽。对于许多应用而言，本公开公开的许多多肽的小尺寸将使其在大肠杆菌中表达作为优选的表达方法。然后从培养基或细胞提取物中纯化所述蛋白质。转基因宿主细胞可以表达任何轻链，重链或抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白。

本公开公开的抗体和抗原结合蛋白也可以使用细胞翻译系统产生。为此目的，必须修饰编码多肽的核酸，以允许体外转录产生mRNA，并允许mRNA在正在使用的特定无细胞系统中进行无细胞翻译(真核生物，例如哺乳动物或酵母无细胞翻译系统或原核生物，例如无细菌细胞翻译系统。

编码本公开公开的各种多肽中的任何一种的核酸可以化学合成。可以选择密码子使用以便改善在细胞中的表达。这种密码子的使用将取决于所选的细胞类型。已经开发出针对大肠杆菌和其他细菌以及哺乳动物细胞，植物细胞，酵母细胞和昆虫细胞的专用密码子使用模式。参见例如：Mayfield等人，美国科学院院报，2003 100(2)：438-42；Sinclair等人，蛋白表达与纯化，2002(1)：96-105；Connell N D.生物技术最新观点，2001 12(5)：446-9；Makrides等人，微生物评论，1996 60(3)：512-38；和Sharp等人，酵母，1991 7(7)：657-78。

本公开所述的抗体和抗原结合蛋白也可以通过化学合成(例如：通过固相肽合成，第二版，1984，皮尔斯化学公司，伊利诺伊州罗克福德中描述的方法)产生。对蛋白质的修饰也可以通过化学合成来产生。

本公开所述的抗体和抗原结合蛋白可以通过蛋白质化学领域中通常已知的蛋白质的分离/纯化方法来纯化。非限制性实例包括萃取，重结晶，盐析(例如：用硫酸铵或硫酸钠)，离心，透析，超滤，吸附色谱，离子交换色谱，疏水色谱，正相色谱，反相色谱，凝胶过滤，凝胶渗透色谱，亲和色谱，电泳，逆流分布或这些的任意组合。纯化后，可以通过本领域已知的多种方法中的任何一种，包括但不限于过滤和透析，将多肽交换到不同的缓冲液中和/或浓缩。

本公开所述的纯化的抗体和抗原结合蛋白优选为至少65％纯，至少75％纯，至少85％纯，更优选至少95％纯，最优选至少98％纯。不管纯度的确切数值如何，所述多肽都足够纯以用作药物产品。本公开所述的任何轻链，重链或抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白均可通过转基因宿主细胞表达，然后使用任何本领域已知的方法纯化至约65-98％的纯度或高水平的纯度。

在某些实施方案中，本公开的抗体和抗原结合蛋白可进一步包含翻译后的修饰。实施例性的翻译后蛋白质修饰包括磷酸化，乙酰化，甲基化，ADP-核糖基化，泛素化，糖基化，羰基化，磺酰化，生物素化或多肽侧链或疏水基团的添加。结果，修饰的多肽可包含非氨基酸成分，例如脂质，多糖或单糖和磷酸盐。糖基化的优选形式是唾液酸化，其将一个或多个唾液酸部分缀合至多肽。唾液酸部分改善了溶解度和血清半衰期，同时还降低了蛋白质的可能的免疫原性。参见Raju等人，生物化学，2001 31；40(30)：8868-76。

在一个实施方案中，本公开所述的抗体和抗原结合蛋白可以被修饰成可溶的多肽，其包括将所述抗体和抗原结合蛋白连接至非蛋白质聚合物。在一个实施方案中，非蛋白质聚合物以美国专利号4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337中所述的方式包含聚乙二醇(“PEG”)，聚丙二醇或聚氧化烯。

PEG是一种可商购的水溶性聚合物，或者可以根据本领域众所周知的方法通过开环聚合乙二醇来制备(Sandler和Karo，聚合物合成，美国学术出版社，纽约，第3卷，p.138-161)。术语“PEG”广泛用于涵盖任何聚乙二醇分子，而不考虑大小或PEG末端的修饰，并且可以由下式表示：X-O(CH2CH2O)n-CH2CH2OH(1)，其中n为20至2300且X为H或末端修饰，例如C1-4烷基。在一个实施方案中，PEG的末端用羟基或甲氧基终止，即X是H或CH3(“甲氧基PEG”)。PEG可以包含结合反应所需的其他化学基团；这是由于分子的化学合成所致；或者是间隔物以获得分子部分间的最佳距离。另外，这种PEG可以由连接在一起的一个或多个PEG侧链组成。具有一个以上PEG链的PEG称为多臂或支链PEG。支链PEG可以例如通过将聚环氧乙烷加入各种多元醇中而制备，所述多元醇包括甘油，季戊四醇和山梨糖醇。例如，可以从季戊四醇和环氧乙烷制备四臂支链PEG。支链PEG描述于，例如EP-A 0 473 084和美国专利号5,932,462。PEG的一种形式包括通过赖氨酸的伯氨基连接的两个PEG侧链(PEG2)(Monfardini等人，结合物化学.6(1995)62-69)。

PEG修饰的多肽的血清清除率可以以相对于未修饰的抗体和结合多肽的抗原结合蛋白的清除率的约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或甚至90％被调节(例如：增加或减少)。所述PEG修饰的抗体和抗原结合蛋白可具有半衰期(t1/2)，其相对于未修饰多肽的半衰期有所延长。相对于未修饰的抗体和抗原结合蛋白的半衰期，PEG修饰的多肽的半衰期可以提高至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％，125％，150％，175％，200％，250％，300％，400％或500％，甚至1000％。在一些实施方案中，蛋白质半衰期是在体外确定的，例如在缓冲盐溶液或血清中。在其他实施方案中，蛋白质半衰期是体内半衰期，例如蛋白质在动物的血清或其他体液中的半衰期。

本公开提供了治疗组合物，所述治疗组合物包含与药学上可接受的赋形剂混合的本公开所述的任何轻链，重链或抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白。赋形剂包括载体，稳定剂和赋形剂。药学上可接受的赋形剂的赋形剂包括，例如惰性稀释剂或填充剂(例如：蔗糖和山梨糖醇)，润滑剂，助流剂和抗粘剂(例如：硬脂酸镁，硬脂酸锌，硬脂酸，二氧化硅，氢化植物油或滑石粉)。其他实例包括缓冲剂，稳定剂，防腐剂，非离子型去污剂，抗氧化剂和等渗剂。

治疗组合物及其制备方法在本领域中是众所周知的，并且在例如“雷明顿：药学的科学与实践”(第20版，A.R.Gennaro A R.，2000，利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司，宾夕法尼亚州，费城)中找到。可以配制用于肠胃外给药的治疗组合物，并且可以包含例如赋形剂，无菌水，盐水，聚亚烷基二醇例如聚乙二醇，植物来源的油或氢化萘。生物可相容的，可生物降解的丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用于控制本公开所述的抗体(或其抗原结合蛋白)的释放。纳米颗粒制剂(例如：可生物降解的纳米颗粒，固体脂质纳米颗粒，脂质体)可用于控制抗体(或其抗原结合蛋白)的生物分布。其他潜在有用的肠胃外递送系统包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒，渗透泵，可植入的输注系统和脂质体。制剂中抗体(或其抗原结合蛋白)的浓度取决于许多因素，包括要施用的药物的剂量和给药途径。

任何抗-CD38抗体(或其抗原结合部分)都可以药学上可接受的盐的形式施用，例如在制药工业中通常使用的无毒酸加成盐或金属络合物。酸加成盐的实例包括有机酸，例如乙酸，乳酸，帕莫酸，马来酸，柠檬酸，苹果酸，抗坏血酸，琥珀酸，苯甲酸，棕榈酸，辛二酸，水杨酸，酒石酸，甲基磺酸，甲苯磺酸或三氟乙酸等；聚合酸，例如单宁酸，羧甲基纤维素等；无机酸例如盐酸，氢溴酸，硫酸磷酸等。金属络合物包括锌，铁等。在一个实例中，抗体(或其抗原结合部分)在乙酸钠的存在下配制以增加热稳定性。

可配制用于口服的任何抗-CD38抗体(或其抗原结合部分)，包括含有与无毒药学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂。口服制剂也可以以可咀嚼片剂的形式提供，或者以将活性成分与惰性固体稀释剂混合的硬明胶胶囊的形式提供，或者以将活性成分与水或油介质混合的软明胶胶囊的形式提供。

如本公开所用，术语“受试者”是指人类和非人类动物，包括脊椎动物，哺乳动物和非哺乳动物。在一个实施方案中，所述受试者可以是人，非人灵长类，猿猴，猿，鼠(例如：小鼠和大鼠)，牛，猪，马，犬，猫，羊，狼，蛙科或鱼。

术语“施用”(administering)，“施用的”(administered)和语法变体是指使用本领域技术人员已知的各种方法和给药系统中的任何一种将药剂物理地引入受试者。本公开公开的制剂的实施例性施用途径包括静脉内，肌内，皮下，腹膜内，脊髓或其他肠胃外给药途径，例如通过注射或输注。如本公开所用，短语“肠胃外给药”是指通常通过注射而不是肠内和局部给药的施用方式，并且包括但不限于静脉，肌肉，动脉，鞘内，淋巴，瘤内，囊内，眶内，心内，皮内，腹膜，气管，皮下，关节内，囊下，蛛网膜下，脊椎内，硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。在一些实施方案中，通过非肠胃外途径例如口服施用制剂。其他非肠胃外途径包括局部，表皮或粘膜施用途径，例如鼻内，阴道，直肠，舌下或局部。也可以例如一次，多次和/或在一个或多个延长的时期内进行施用。可使用本领域已知的方法和递送途径将本公开所述的任何抗-CD38抗体(或其抗原结合蛋白)施用于受试者。

术语“有效量”，“治疗有效量”或“有效剂量”或相关术语可以互换使用，是指抗体或抗原结合蛋白(例如：本公开所述的任何抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白)的量，当施用于受试者时，足以实现与肿瘤或癌症抗原表达相关的疾病或病症的可测量的改善或预防。当单独或组合使用时，本公开提供的抗体的治疗有效量将取决于抗体和组合的相对活性(例如：在抑制细胞生长中)以及取决于受试者和所治疗的疾病状况，受试者的体重，年龄和性别，受试者疾病状况的严重性，给药方式等，这些可以通过本领域普通技术人员容易地确定。

在一个实施方案中，治疗有效量将取决于待治疗的受试者和待治疗的疾病的某些方面，并且可以由本领域技术人员使用已知技术来确定。通常，每天以约0.01g/kg至约50mg/kg，优选每天以0.01mg/kg至约30mg/kg，最优选以0.1mg/kg至约20mg/kg的量施用多肽。所述多肽可以每天(例如：每天一次，两次，三次或四次)施用，或者优选地不那么频繁地(例如：每周，每两周，每三周，每月或每季度一次)施用。另外，如本领域中已知的，可能需要调整年龄以及体重，总体健康，性别，饮食，给药时间，药物相互作用和疾病的严重性。

本公开提供了用于治疗患有与CD38表达相关的疾病的受试者的方法。所述疾病包括表达与肿瘤相关的抗原的癌细胞或肿瘤细胞。在一个实施方案中，所述癌症或肿瘤包括前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，头颈癌，膀胱癌，皮肤癌，结直肠癌，肛门癌，直肠癌，胰腺癌，肺癌(包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌)，平滑肌瘤，脑，神经胶质瘤，胶质母细胞瘤，食道癌，肝癌，肾癌，胃癌，结肠癌，宫颈癌，子宫癌，子宫内膜癌，外阴癌，喉癌，阴道癌，骨癌，鼻腔癌，鼻旁窦癌，鼻咽癌，口腔癌，口咽癌，喉癌，下咽癌，唾液腺癌，输尿管癌，尿道癌，阴茎癌和睾丸癌。

在一个实施方案中，癌症包括血液癌症，其包括白血病，淋巴瘤，骨髓瘤和B细胞淋巴瘤。血液系统癌症包括多发性骨髓瘤(MM)，非霍奇金淋巴瘤(NHL)包括伯基特淋巴瘤(BL)，B慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)，系统性红斑狼疮(SLE)，B和T急性淋巴细胞性白血病(ALL)，急性髓细胞性白血病(AML)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤，慢性髓性白血病(CML)，毛细胞白血病(HCL)，滤泡性淋巴瘤，Waldenstrom巨球蛋白血症，套细胞淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤(HL)，浆细胞骨髓瘤，前体B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤，浆细胞瘤，巨细胞骨髓瘤，浆细胞骨髓瘤，重链骨髓瘤，轻链或本斯-琼斯骨髓瘤，淋巴瘤样肉芽肿病，移植后淋巴组织增生性疾病，免疫调节性疾病，类风湿关节炎，重症肌无力，特发性血小板减少性紫癜，抗磷脂综合征，恰加斯病，Grave’s病，韦格纳肉芽肿病，结节性多动脉炎，干燥综合征，寻常型天疱疮，硬皮病，多发性硬化症，抗磷脂综合征，ANCA相关性血管炎，Goodpasture病，川崎病，自身免疫性溶血性贫血和急进性肾小球肾炎，重链疾病，原发性或与免疫细胞相关的淀粉样变性和单克隆丙种球蛋白病意义尚未确定。

抗-CD38抗体在2016年4月8日提交的美国专利申请号15/094,384中公开(其公开全部内容在此参考并入)。该抗体在本公开中称为“亲本”和/或“野生型”抗体，其包含具有重链可变区的亲本野生型重链，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列以及具有轻链可变区的亲本野生型轻链，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

本公开提供了变体抗体，其包含亲本野生型重链和轻链，所述亲本野生型重链具有包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链可变区，所述亲本野生型轻链具有包含SEQID NO：3所示的突变氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开提供了制备变体序列轻链或包含该变体序列轻链的抗原结合蛋白的方法，其中所述轻链的突变氨基酸序列减少或消除了轻链异质群体的产生，所述轻链异质群体包含理想和不理想的轻链的混合物。相反，制备亲本野生型轻链会产生具有高水平异质性的抗体轻链群体。

重组抗体的重链和轻链通常被设计为在其N-末端包括一个分泌信号肽，以使前体抗体链在宿主细胞的胞质中表达并在整个宿主细胞膜上转运。所述转运的前体抗体链通过宿主细胞表达的信号肽肽酶在分泌信号肽处进行位点特异性切割，从而形成成熟的抗体链。从已经在分泌信号肽中的特定位点切割的前体抗体链产生同质的成熟抗体链群体，以产生具有相同长度和序列以及相同N-和C末端的成熟抗体链群体是所需要的。然而，重组抗体链的产生通常产生具有不同链长和序列以及不同N-和/或C-末端的异质群体。异质性的一种来源是由分泌信号肽或抗体链的N-末端区域在可变位点处的切割引起的，这引起链的截断和延长。还已知切割异质性是由分泌信号肽中及其附近的肽键的非酶促降解引起的，例如在某些氨基酸如天冬氨酸，甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，蛋氨酸或天冬酰胺上的非酶促降解。不管导致切割异质性的机制如何，不精确的切割都会导致抗体链群体异质性。切割异质性可以减少抗体与其靶抗原的结合。在某些情况下，切割异质性改变抗体链的电荷，导致抗体pI(等电点)值发生不良变化，从而导致表达的抗体链群体中的电荷异质性。总体而言，切割异质性会降低抗体功效，缩短储存寿命，并使其难以始终如一地产生同质产品，从而使抗体链变得不那么理想或不适合生物生产。

本公开提供了具有突变的氨基酸序列的变体抗体轻链，其被设计为减少在宿主细胞表达期间发生的切割异质性，从而降低轻链群体异质性。所述抗体轻链包含在其N-末端附近突变的氨基酸序列，其邻接分泌信号肽，以减少切割异质性。不希望被理论所束缚，假定本公开所述的抗体轻链中的氨基酸突变降低了由于酶促和/或非酶促切割事件而引起的切割异质性。

抗体轻链的异质群体包含理想的和不理想的轻链的混合物。所述理想的轻链具有正确的长度，正确的N-和C-末端氨基酸残基，并包含具有与SEQ ID NO：3 100％相同的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述理想的链是链总数中的相对多数或大多数种类。不理想的轻链具有不正确的长度(例如：更长或更短)，不正确的N和/或C-末端氨基酸残基，和/或包含具有与SEQ ID NO：3不100％相同的氨基酸序列的轻链可变区。

在以下讨论中，相对于SEQ ID NO：2表达增加，数值减少和数量减少。在一些实施方案中，所述轻链序列突变通过增加理想的轻链的百分比并且减少或甚至消除不理想的轻链的百分比而减少了异质轻链群体的产生。

在一些实施方案中，所述轻链序列突变使轻链制备中(例如：在轻链群体中)不理想的轻链的百分比降低约10-30％，或约30-50％，或约50-70％，或约70-90％，或约90-95％，或约95-99％或更高的水平。

在一些实施方案中，轻链序列突变使轻链制备中(例如：在轻链群体中)理想的轻链的百分比增加约10-30％，或约30-50％，或约50-70％，或约70-90％，或约90-95％，或约95-99％或更高的水平。

在一个实施方案中，所述轻链序列突变在N-末端附近包含两个点突变，特别是位置2的丙氨酸被丝氨酸替代，以及位置3的甘氨酸被缬氨酸替代(参见SEQ ID NO：3的位置2和3)。所述轻链序列突变增加了理想轻链的百分比，因此突变体轻链的制备物包含约98-100％的具有正确长度，正确的N-末端氨基酸和100％序列的理想轻链(图2A和B)。

在一个实施方案中，所述轻链序列突变包括在N-末端附近具有两个点突变的SEQID NO：2所示的氨基酸序列，特别是在位置2的丙氨酸被丝氨酸替代，以及在位置3的甘氨酸被丙氨酸替代。在一个实施方案中，突变轻链的N-末端包含氨基酸序列QSALT(SEQ ID NO：6)。所述轻链序列突变增加了理想轻链的百分比，因此突变体轻链的制备物包含约98-100％的具有正确的长度，正确的N-末端氨基酸和100％序列的理想轻链(表2)。

本公开所述的轻链突变体序列可提供减少的切割异质性并改善抗体轻链的产生和产率。可操作地连接至抗体轻链的分泌信号肽的类型和/或序列并不重要。

相反，所述亲本野生型轻链(SEQ ID NO：2)产生不理想的和理想的轻链的异质混合物。亲本野生型轻链的制备可以产生高百分比的截短轻链，其中多达35-65％的轻链是不理想的截短轻链(参见表2以及图2A和B)。例如，亲本野生型轻链的制备可包含约10-30％，或约30-50％，或约50-70％，或约70-90％，或约90-95％，或约95-99％或更高含量的不理想的截短的轻链形式。

本公开提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞表达包含分泌信号肽的氨基酸序列的前体多肽，所述分泌信号肽可操作地连接至抗体轻链的突变氨基酸序列，所述抗体轻链具有包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，所述分泌信号肽指导前体多肽向内质网，分泌囊泡和/或细胞外空间运动。在一个实施方案中，所述分泌信号肽介导前体多肽从宿主细胞分泌。在一个实施方案中，所述分泌信号肽充当用于在分泌信号肽中的特定位点(例如：所需的切割位点)进行酶促切割的底物，以产生比前体多肽短的成熟多肽。在一个实施方案中，切割事件产生具有正确长度并携带新的N-末端的抗体轻链，并且包含与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列。所述突变的抗体轻链可与重链组装以产生结合其靶抗原CD38的免疫球蛋白。

本公开提供了与重链组装的突变轻链，以形成与CD38抗原特异性结合的抗原结合蛋白，以及编码所述抗原结合蛋白的核酸，包含所述核酸的载体，具有所述载体的宿主细胞和它的使用方法。

抗体重链和轻链的宿主细胞表达可用于制备包括变体抗体和亲本野生型抗体在内的抗体群。

所述宿主细胞可以表达具有野生型序列的亲本野生型重链。亲本野生型重链的制备可包含约85-99％或更高水平的理想的重链序列(例如：低水平的重链异质性)。所述宿主细胞可以表达具有野生型序列的亲本野生型序列轻链。所述亲本野生型轻链的制备可包含约40-55％或更高水平的不理想的轻链序列(例如：高水平的轻链异质性)。

所述宿主细胞可以表达具有野生型序列的亲本野生型重链。所述亲本野生型重链的制备可包含约85-99％或更高水平的理想的重链序列(例如：低水平的重链异质性)。所述宿主细胞可以表达具有突变序列的变体序列轻链。所述变体序列轻链的制备可包含约85-99％或更高水平的理想的轻链序列，其与亲本野生型轻链的制备相比降低了轻链异质性的水平。

本公开提供了与CD38多肽结合的IgG类的全人源抗体。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体包含与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性，或至少97％的序列同一性，或至少98％的序列同一性，或至少99％的序列同一性的重链可变区；且所述抗-CD38抗体包含与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列具有95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性，或至少97％的序列同一性，或至少98％的序列同一性，或至少99％的序列同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体包含IgG1，IgG2，IgG3或IgG4类抗体。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体包含IgG1或IgG4类抗体。

在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体或其片段包含以10^-6M或更低，10^-7M或更低，10^-8M或更低，10^-9M或更低或10^-10M或更低(参见表3)的结合亲和力(KD)结合CD38靶抗原的表位的抗原结合部分。在一个实施方案中，所述CD38抗原包含细胞表面CD38抗原或可溶性CD38抗原。在一个实施方案中，所述CD38抗原包含细胞表面CD38抗原的细胞外部分。在一个实施方案中，CD38抗原包含人源或非人源CD38抗原。在一个实施方案中，所述CD38抗原由人或非人细胞表达。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体结合由人B细胞表达或由人多发性骨髓瘤细胞表达的人CD38。在一个实施方案中，可以使用表面等离子体共振，流式细胞仪和/或ELISA来检测和测量抗-CD38抗体或其片段之间的结合。

本公开提供了抗-CD38抗体，所述抗-CD38抗体结合来自人的CD38的表位，或可以与来自非人类动物，例如小鼠，大鼠，山羊，兔子，仓鼠和/或猴子(例如：猕猴)的任何一种或任何组合的CD38的表位(例如：同源抗原)结合(例如交叉反应)。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体以10^-5M或更低，或10^-6M或更低，或10^-7M或更低，或10^-8M或更低，或10^-9M或更低或10^-10M或更低的结合亲和力KD结合小鼠CD38。在一个实施方案中，所述抗-CD38抗体以10^{- 5}M或更低，或10^-6M或更低，或10^-7M或更低，或10^-8M或更低或10^-9M或更低，或10^-10M或更低的结合亲和力KD结合猕猴CD38。

本公开提供了结合CD38的全人源抗体，其中所述抗体同时包含重链和轻链，其中所述重链/轻链可变区氨基酸序列具有与氨基酸序列集SEQ ID NOS：1和3至少95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性，或至少97％的序列同一性，或至少98％的序列同一性，或至少99％的序列同一性。

本公开提供了Fab全人源抗体片段，所述Fab全人源抗体片段包含来自重链的重可变区和来自轻链的可变区。所述来自重链的可变区的序列与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少95％相同，或至少96％相同，或至少97％相同，或至少98％相同，或至少99％相同。所示来自轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列至少95％相同，或至少96％相同，或至少97％相同，或至少98％相同，或至少99％相同。

本公开提供了一种Fab全人源抗体片段，所述Fab全人源抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重/轻链可变区氨基酸序列与以下氨基酸序列集SEQ ID NOS：1和3的任何至少95％相同，或至少96％相同，或至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同。

本公开提供了一种单链全人源抗体，所述单链全人源抗体包含具有来自全人源重链的可变区和来自全人源轻链的可变区的多肽链，以及任选地连接可变重链和可变轻链区的接头，其中所述可变重区与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性，或至少97％的序列同一性，或至少98％的序列同一性，或至少99％的序列同一性。所述可变轻区与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性，或至少97％的序列同一性，或至少98％的序列同一性，或至少99％的序列同一性。

本公开提供了单链全人源抗体，所述单链全人源抗体包含具有重链可变区和轻链可变区的多肽链，其中所述重/轻链可变区氨基酸序列组具有与以下氨基酸序列组：SEQ IDNOS：1和3的任何至少95％相同，或至少96％相同，或至少97％相同，或至少98％相同，或至少99％相同。

本公开提供了治疗组合物，所述治疗组合物包含与药学上可接受的赋形剂混合的本公开所述的任何抗-CD38抗体或其抗原结合蛋白。赋形剂包括载体和稳定剂。在一个实施方案中，所示治疗组合物包含抗-CD38抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中重/轻链可变区氨基酸序列与以下氨基酸序列组：SEQ ID NOS：1和3的任何至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同，或至少99％相同。

本公开提供了用于治疗患有与CD38表达相关的疾病的受试者的方法，所述方法包括：向所述受试者施用有效量的包含抗-CD38抗体或其抗原结合片段的治疗组合物，所述治疗组合物选自以下组：由本公开所述的任何全人源抗-CD38抗体，本公开所述的任何Fab全人源抗-CD38抗体和本公开所述的任何单链人抗-CD38抗体组成。在一个实施方案中，与CD38表达有关的疾病是血液癌症，其包括白血病，淋巴瘤，骨髓瘤和B细胞淋巴瘤。血液系统癌症包括多发性骨髓瘤(MM)，非霍奇金淋巴瘤(NHL)包括伯基特淋巴瘤(BL)，B慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)，系统性红斑狼疮(SLE)，B和T急性淋巴细胞性白血病(ALL)，急性髓细胞性白血病(AML)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤，慢性髓性白血病(CML)，毛细胞白血病(HCL)，滤泡性淋巴瘤，Waldenstrom巨球蛋白血症，套细胞淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤(HL)，浆细胞骨髓瘤，前体B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤，浆细胞瘤，巨细胞骨髓瘤，浆细胞骨髓瘤，重链骨髓瘤，轻链或本斯-琼斯骨髓瘤，淋巴瘤样肉芽肿病，移植后淋巴组织增生性疾病，免疫调节性疾病，类风湿关节炎，重症肌无力，特发性血小板减少性紫癜，抗磷脂综合征，恰加斯病，Grave’s病，韦格纳肉芽肿病，结节性多动脉炎，干燥综合征，寻常型天疱疮，硬皮病，多发性硬化症，抗磷脂综合征，ANCA相关性血管炎，Goodpasture病，川崎病，自身免疫性溶血性贫血和急进性肾小球肾炎，重链疾病，原发性或与免疫细胞相关的淀粉样变性和意义尚未确定的单克隆丙种球蛋白病。

序列表：

表1

实施例

下列实施例是说明性的，可用于进一步理解本公开的实施方案，并且不应以任何方式解释为限制本指导的范围。

实施例1：CD38-A2抗体的突变轻链的合成。

获得合成的密码子优化的DNA片段，其编码CD38-A2 SV突变体抗体的轻链。所述片段在编码的N-末端附近包含两个点突变，特别是位置2的丙氨酸被丝氨酸取代，位置3的甘氨酸被缬氨酸取代。使用标准的限制酶消化和连接，将编码轻链的片段框内插入LonzapXC-17.4载体，将编码野生型CD38-A2重链的不同片段框内插入Lonza pXC-18.4载体(来自瑞士巴塞尔隆萨的龙沙GS系统)。使用标准酶消化和连接将pXC-17.4和pXC18.4载体融合为单个载体，并将所得融合载体引入大肠杆菌宿主细胞中。

实施例2：来自抗-CD38抗体的突变轻链的液相色谱质谱法分析。

进行了还原的LC-MS分析以比较CD38-A2野生型(WT)和CD38-A2 SV变体抗体。简而言之，将16微升抗体样品(20微克)与4微升5X快速肽N-糖苷酶缓冲液(目录：P0710S；NEB)混合，并在80℃孵育5分钟以还原二硫键并使蛋白质变性。然后加入0.5μL快速肽N-糖苷酶F(目录：P0710S；NEB)，在50℃下释放N-聚糖15分钟。将五微克样品注入Waters LC-ESI-MS系统。

使用配备2.1x 150毫米

1.7微米C4色谱柱的超高效液相

系统分离还原的抗体链，色谱柱温度为80℃。用12分钟的梯度(25-40％乙腈/0.1％甲酸，0.4毫升/分钟流速)从柱子上洗脱抗体。

Waters Xevo G2 TOF MS系统在阳离子高灵敏度模式下运行，检测范围为400×4000质子数/电荷数。源参数如下：毛细电压，3.10kV；采样锥孔电压，40.0V；提取锥孔电压，3.0V；源温度，125℃；去溶剂温度350℃；锥气流：10升/小时；脱溶剂气流，500升/小时。根据以下参数，通过MassLynx MaxEnt1函数对蛋白质峰进行反卷积：输出分辨率，1.0Da/通道；输出质量范围为20,000-70,000Da，针对还原的抗体；半高处均匀高斯宽度，0.75Da；最小强度比，左右都为33％；最大迭代次数，12。

通过LC-ESI-MS测量CD38A2 WT和SV变体的分子量，证实了蛋白质ID。WT和SV重链分子量均与理论质量很好地匹配。同时，在多达约50％的野生型轻链中发现了来自N-末端轻链的2个氨基酸的截短。所述SV突变体的LC未显示任何可检测到的截短。

使用安捷伦2100生物分析仪按照制造说明对测试样品进行还原CE-SDS。在CD38-A2野生型的还原的CE-SDS上检测到两个比率约为1：1的轻链群体。所述CD38-A2 SV突变体仅在还原的CE-SDS上显示一条轻链。结果与LC-MS分析的结果一致，即野生型经历了轻链截短。

质谱和还原的CE-SDS结果表明，CD38-A2野生型轻链群体中大约50％是截短的分子。

总之，根据LC-MS和CE-SDS分析，CD38-A2野生型中发生N-末端轻链截短，但CD38-A2 SV变体无法检测到。结果总结在表2以及图1A和图B以及图2A和图B中。结果还显示了CD38 A2-SA变体，其中轻链的第二和第三氨基酸分别为丝氨酸和丙氨酸。

表2

实施例3：亲本抗体CD38 A2和变体抗体CD38 A2 SV的比较性结合研究。

使用表面等离振子共振(SPR)测量亲本抗体CD38 A2和变体抗体CD38 A2 SV的结合动力学。使用Biacore T200表面等离振子共振(GE Healthcare)在25℃下测量亲本抗体或变体抗体与带有组氨酸标签的CD38蛋白之间的动力相互作用。使用标准的N-羟基琥珀酰亚胺/N乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(NHS/EDC)偶联方法，将抗人片段可结晶区域(Fc区)抗体固定在CM5传感器芯片上约8000个共振单位(RU)上。以10微升/分钟的流速捕获CD38 A2亲本抗体或CD38 A2 SV变体抗体(2微克/毫升)60秒。将重组人组氨酸标记的CD38蛋白在0.01M HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05％v/v表面活性剂P20(HBS EP+)的运行缓冲液中连续稀释。所有测量均在HBS-EP+缓冲液中以30微升/分钟的流速进行。使用稳态亲和力模型来获得亲和力。CD38 A2亲本抗体和CD38 A2 SV变体抗体的传感图分别显示在图3A和图B中，其相应的结合动力学列在下表3中。

表3

序列表

<110> 索伦托药业有限公司

<120> 结合CD38的变体抗体

<130> 01223-0013-00PCT

<150> US 62/687,695

<151> 2018-06-20

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asp

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Val Ser Asn Gly Arg Pro Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Trp Gly Gly Glu Phe Thr Asp Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区

<400> 2

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Ser Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ile Asn

20 25 30

Phe Val Tyr Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Lys Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 3

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区

<400> 3

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Ser Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ile Asn

20 25 30

Phe Val Tyr Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Lys Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区亚群

<400> 4

Gln Ala Gly Leu Thr

1 5

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区子段

<400> 5

Gln Ser Val Leu Thr

1 5

<210> 6

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工抗体可变区子段

<400> 6

Gln Ser Ala Leu Thr

1 5

Claims (19)

1.一种结合CD38的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：1所示的序列，所述轻链包含SEQ ID NO：3所示的序列。

2.一种IgG类的全人源抗体或抗体Fab片段，所述全人源抗体或抗体Fab片段包含重链和轻链，所述重链包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链可变区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。

3.根据权利要求2所述的全人源抗体或抗体Fab片段，其是全人源抗体。

4.根据权利要求2所述的全人源抗体或抗体Fab片段，其是Fab片段。

5.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其为包含重链和轻链的全人源单链抗体，所述重链包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链可变区，所述轻链包含具有SEQ IDNO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。

6.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和如权利要求1-5中任一项所述的全人源抗体或Fab片段。

7.一种编码抗体轻链的核酸，所述抗体轻链包含具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的轻链可变区。

8.根据权利要求7所述的核酸，其进一步包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

9.一种核酸，所述核酸编码如权利要求1-5中任一项所述的抗体。

10.一种表达载体，所述表达载体包含与如权利要求7或权利要求9所述的核酸可操作地连接的启动子。

11.根据权利要求10所述的表达载体，其进一步包含编码抗体重链的核酸，所述抗体重链包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

12.一种宿主细胞，所述宿主细胞携带如权利要求10所述的表达载体。

13.一种宿主细胞，所述宿主细胞携带如权利要求11所述的表达载体。

14.一种制备全人源抗体轻链的方法，所述方法包括：在适于表达所述抗体轻链的条件下培养如权利要求10或11所述的宿主细胞的群。

15.根据权利要求14所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞中回收表达的抗体轻链。

16.根据权利要求15所述的方法，其中回收的具有正确的长度、正确的N-末端氨基酸并且与SEQ ID NO：3所示的轻链可变区具有100％序列一致性的表达的抗体轻链的百分比为90-100％，和/或其中回收的表达的抗体轻链的同质性为90-100％。

17.一种制备全人源抗体轻链的方法，所述方法包括：在适于表达所述抗体轻链的条件下培养如权利要求13所述的宿主细胞的群。

18.根据权利要求17所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞中回收表达的抗体轻链和抗体重链。

19.根据权利要求18所述的方法，其中回收的具有正确的长度、正确的N-末端氨基酸、并且与SEQ ID NO：3所示的轻链可变区具有100％序列一致性的表达的抗体轻链的百分比为90-100％。

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