KR20220164548A - Lag3에 결합하는 조작된 항체 - Google Patents

Abstract

본 개시내용은 항원 결합, 세포 결합, T 세포 활성화 및 사이토카인 방출 능력을 개선하기 위해 이들의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 아미노산 서열을 갖도록 조작된 완전 인간 항-LAG3 IgG 부류 항체를 제공한다.

Description

LAG3에 결합하는 조작된 항체

관련 출원에 대한 상호-참조

본 출원은 2020년 4월 3일 출원된 미국 가특허 출원 제63/004,798호의 우선권의 이익을 주장하며, 이는 모든 목적을 위해 전문이 본원에 참고로 포함된다.

본 출원 전체에 걸쳐 다양한 간행물, 특허 및/또는 특허 출원이 참조된다. 간행물, 특허 및/또는 특허 출원의 개시내용은 본 개시내용이 속하는 최신 기술을 보다 완전하게 설명하기 위해 본 출원에 전문이 참고로 포함된다. 참고로 포함된 모든 자료가 본 출원의 명시적 내용과 충돌하는 경우, 명시적 내용이 우선한다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 담고 있으며 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 2021년 1월 14일에 생성된 상기 ASCII 사본의 이름은 2021-01-14_01223-0075-00PCT_Seq_List_ST25.txt이며 크기는 23,793바이트이다.

기술 분야

본 개시내용은 항원 결합, 세포 결합, T 세포 활성화 및 사이토카인 방출 능력을 개선하기 위해 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 아미노산 서열을 갖도록 조작된 완전 인간 항-LAG3 IgG 부류 항체를 제공한다.

림프구 활성화 유전자-3 또는 LAG3(CD223으로도 알려짐)은 면역글로불린 수퍼유전자 패밀리의 구성원이며 CD4와 구조적으로 및 유전적으로 관련되어 있다. LAG3는 휴지 말초 혈액 림프구에서는 발현되지 않지만 활성화된 T 세포 및 NK 세포에서 발현된다. LAG3는 CD4 유전자 근처의 염색체 12의 짧은 팔의 원위 부분에 위치한 유전자에 의해 암호화되는 막 단백질이며, 이는 LAG3 유전자가 유전자 중복을 통해 진화했을 수 있음을 시사한다(참조: Triebel et al. (1990)　J. Exp . Med.　171:1393-1405).

CD4와 유사하게, LAG3는 MHC 클래스 II 분자와 상호작용하는 것으로 입증되었지만, CD4와는 달리, LAG3는 인간 면역결핍 바이러스 gp120 단백질과 상호작용하지 않는다(참조: Baixeras et al. (1992)　J. Exp . Med .　176:327-337). 가용성 LAG3 면역글로불린 융합 단백질(sLAG3Ig)을 사용한 연구는 세포 표면 상의 MHC 클래스 II에 대한 LAG3의 직접적이고 특이적인 결합을 입증하였다(참조: Huard et al. (1996)　Eur. J. Immunol.　26:1180-1186).

항원-특이적 T 세포 반응에 대한 시험관내 연구에서, 항-LAG3 항체의 첨가는 T 세포 증식 증가, CD25와 같은 활성화 항원의 더 높은 발현, 및 인터페론-감마 및 인터루킨-4와 같은 사이토카인의 더 높은 농도를 야기하였으며, 이는 CD4⁺ T 림프구의 항원-의존성 자극을 하향조절하는데 있어서의 LAG3/MHC 클래스 II 상호작용에 대한 역할을 뒷받침하였다(참조: Huard et al. (1994)　Eur . J. Immunol .　24:3216-3221). LAG3의 세포질내 영역은 CD3/TCR 활성화 경로의 하향조절에 관여하는 신호 전달 분자로 생각되는 LAP라고 불리는 단백질과 상호작용하는 것으로 입증되었다(참조: Iouzalen et al. (2001)　Eur . J. Immunol .　31:2885-2891). 더욱이, CD4⁺CD25⁺ 조절 T 세포(T_reg)는 활성화시 LAG3를 발현하고 LAG3에 대한 항체는 시험관내 및 생체내 둘 다에서 유도된 T_reg 세포에 의한 억제를 억제하는 것으로 나타났으며, 이는 LAG3가 T_reg 세포의 억제 활성에 기여한다는 것을 시사한다(참조: Huang, C. et al. (2004)　Immunity　21:503-513). 여전히 추가로, LAG3는 T 세포-의존적 및 비의존적 메커니즘 둘 다에서 조절 T 세포에 의해 T 세포 항상성을 부정적으로 조절하는 것으로 나타났다(참조: Workman and Vignali (2005)　J. Immunol.　174:688-695).

특정 상황에서, LAG3는 또한 면역자극 효과를 갖는 것으로 나타났다. 예를 들면, 동계 마우스에 이식된 LAG3 형질감염된 종양 세포는 형질감염되지 않은 종양 세포와 비교하여 성장 감소 또는 완전한 퇴행을 나타냈으며, 이는 종양 세포 상의 LAG3 발현이 MHC 클래스 II 분자를 통해 항원 LAG3 제시 세포를 촉발시킴으로써 항종양 반응을 자극하였음을 시사한다(참조: Prigent et al. (1999)　Eur . J. Immunol.　29:3867-3876). 추가적으로, 가용성 LAG3 Ig 융합 단백질은 항원과 함께 마우스에 투여될 때 체액성 및 세포성 면역 반응 둘 다를 자극하는 것으로 나타났으며, 이는 가용성 LAG3Ig가 백신 보조제로서 기능할 수 있음을 나타낸다(참조: El Mir and Triebel (2000)　J. Immunol .　164:5583-5589). 더욱이, 가용성 인간 LAG3Ig는 I형 종양-특이적 면역의 시험관내 생성을 증폭시키는 것으로 나타났다(참조: Casati et al. (2006)　Cancer Res.　66:4450-4460). LAG3의 기능적 활성은 문헌[참조: Triebel (2003)　Trends Immunol .　24:619-622]에 추가로 검토되어 있다. 상기의 관점에서, LAG3의 활성을 조절하기 위한 추가 제제가 관심의 대상이다.

LAG3, 특히 항-LAG3 항체에 기반한 효과적인 치료에 대한 당업계의 필요성이 남아있다. 본 개시내용은 표적 항원에 대한 더 높은 친화도 결합 및 모 항체에 비해 개선된 세포 사멸 능력을 나타내도록 조작된 항체를 제공한다. 본 개시내용은 하기 양태를 포함한다. 양태 1은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하고; 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 완전 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 2는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 LAG3-결합 단백질이고, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다.

양태 3은 중쇄 가변 영역이 서열 번호 4에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 경쇄 가변 영역이 서열 번호 5에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 중쇄 가변 영역이 서열 번호 6에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 경쇄 가변 영역이 서열 번호 7에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 중쇄 가변 영역이 서열 번호 8에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 경쇄 가변 영역이 서열 번호 9에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 중쇄 가변 영역이 서열 번호 10에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 경쇄 가변 영역이 서열 번호 11에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는, 양태 2의 LAG3-결합 단백질이다.

양태 4는 항체 또는 항체 단편인 양태 2 또는 3의 LAG3-결합 단백질이다.

양태 5는 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열이 서열 번호 4 및 5(본원에는 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에는 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에는 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에는 8D9라고 함)을 포함하는, 양태 1의 완전 인간 항-LAG3 항체 또는 양태 2 내지 4 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질이다.

양태 6은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체이고, 여기서 중쇄로부터의 가변 도메인 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

양태 7은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함)을 포함하는, 양태 6의 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 8은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 포함하고, 여기서 중쇄로부터의 가변 도메인 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 9는 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 펩티드 링커로 함께 연결되는, 양태 2 내지 5 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 양태 8의 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 10은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함)를 포함하는, 양태 8의 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 11은 항체가 10^-8 M 이하의 K_D로 인간 LAG3에 결합하는, 상기 양태들 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 12는 항체가 10^-6 M 이하의 K_D로 시노몰거스 LAG3에 결합하는, 양태 1 내지 7 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 13은 IgG4 부류 항체를 포함하는 상기 양태들 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 14는 약제학적으로 허용되는 부형제 및 상기 양태들 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 약제학적 조성물이다.

양태 15는 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질, Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체, 또는 완전 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 키트이다.

양태 16는 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산이다.

양태 17은 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산이다.

양태 18은 (a)(i) 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 완전 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 완전 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역; 또는 (b) 양태 2 내지 5, 9, 또는 11 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질을 암호화하는 핵산이다.

양태 19는 양태 16의 핵산을 포함하는 벡터이다.

양태 20은 양태 17의 핵산을 포함하는 벡터이다.

양태 21은 양태 18의 핵산을 포함하는 벡터이다.

양태 22는 양태 19의 벡터를 보유하는 숙주 세포이다.

양태 23은 벡터가 발현 벡터를 포함하고, 숙주 세포가 중쇄 가변 영역을 발현하는, 양태 22의 숙주 세포이다.

양태 24는 양태 20의 벡터를 보유하는 숙주 세포이다.

양태 25는 벡터가 발현 벡터이고, 숙주 세포가 경쇄 가변 영역을 발현하는, 양태 24의 숙주 세포이다

양태 26은 양태 19의 벡터를 포함하는 제1 벡터 및 양태 20의 벡터를 포함하는 제2 벡터를 보유하는 숙주 세포이다.

양태 27은 제1 벡터가 제1 발현 벡터를 포함하고, 제2 벡터가 제2 발현 벡터를 포함하며, 숙주 세포가 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현하는, 양태 26의 숙주 세포이다.

양태 28은 양태 21의 벡터를 보유하는 숙주 세포이다.

양태 29는 벡터가 발현 벡터를 포함하고, 숙주 세포가 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현하는, 양태 28의 숙주 세포이다.

양태 30은 양태 23의 숙주 세포의 집단을 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, LAG3-결합 단백질, 또는 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 제조하는 방법이다.

양태 31은 발현된 LAG3-결합 단백질, 또는 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 양태 30의 방법이다.

양태 32는 양태 25의 숙주 세포의 집단을 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법이다.

양태 33은 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 양태 32의 방법이다.

양태 34는 양태 27의 숙주 세포의 집단을 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법이다.

양태 35는 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 양태 34의 방법이다.

양태 36은 양태 29의 숙주 세포의 집단을 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법이다.

양태 37은 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 양태 36의 방법.

양태 38은 대상체에게 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 치료학적 조성물의 유효량을 투여함을 포함하여, LAG3 과발현과 관련된 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법이다.

양태 39는 LAG3 과발현과 관련된 질환을 치료하는데 사용하기 위한, 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 40은 질환이 골암, 췌장암, 피부암, 두경부의 암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함한 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양 암, 편평세포암, T-세포 림프종, 환경적으로 유도된 암, 또는 석면에 의해 유도된 암인, 양태 38의 방법, 또는 양태 39의 사용을 위한 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체이다.

양태 41은 양태 38 중 어느 하나의 방법에 사용하기 위한, 양태 1 내지 13 중 어느 하나의 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체이다.

도 1은 인간(서열 번호 1), 시노몰거스 원숭이(서열 번호 2), 및 마우스(서열 번호 3)로부터의 LAG3 표적 항원의 아미노산 서열을 보여준다.
도 2는 완전 인간 항-LAG3 항체 1C5-3A6(서열 번호 4 및 5), 2D12-2E3-N102D(서열 6 및 7), 5C8(서열 8 및 9), 및 8D9(서열 10 및 11)의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 보여준다.
도 3은 가용성 인간 LAG3 항원에 대한 용량-의존적 결합에 대한 ELISA 분석의 결과를 보여준다. 실험은 실시예 1에 기술되어 있다.
도 4는 항-LAG3 항체의 결합 동역학 및 이들의 측정된 K_D 값의 일련의 SPR 센서그램을 보여준다. Biacore 실험은 실시예 2에 기술되어 있다.
도 5는 인간, 마우스 또는 시노몰거스 LAG3 단백질과의 다양한 항-LAG3 항체 교차반응성에 대한 ELISA 분석의 결과를 보여주는 막대 그래프이다. 실험은 실시예 3에 기술되어 있다.
도 6은 인간 LAG3/NFAT-Luc을 발현하는 리포터 Jurkat 세포주에 대한 다양한 항-LAG3 항체의 결합 능력을 비교한 그래프이다. 실험은 실시예 4에 기술되어 있다.
도 7a는 스타필로코커스 엔테로톡신(SEB)로 활성화된 시노몰거스 PBMC에 대한 다양한 항-LAG3 항체의 결합 능력을 비교한 그래프이다. Y축을 따른 값은 MFI이다. 실험은 실시예 5에 기술되어 있다.
도 7b는 도 7a에 기술된 실험으로부터 생성된 동일한 데이터를 사용하여, 스타필로코커스 엔테로톡신(SEB)로 활성화된 시노몰거스 PBMC에 대한 다양한 항-LAG3 항체의 결합 능력을 비교한 그래프이다. Y축을 따른 값은 LAG3+ 세포이다. 실험은 실시예 5에 기술되어 있다.
도 8a는 스타필로코커스 엔테로톡신(SEB)로 활성화된 인간 LAG3/NFAT-Luc 및 Raji 세포를 발현하는 리포터 Jurkat 세포주의 존재하에 다양한 항-LAG3 항체의 기능적 활성을 비교한 막대 그래프이다. 실험 #1은 실시예 6에 기술되어 있다.
도 8b는 스타필로코커스 엔테로톡신(SEB)로 활성화된 인간 LAG3/NFAT-Luc 및 Raji 세포를 발현하는 리포터 Jurkat 세포주의 존재하에 다양한 항-LAG3 항체의 기능적 활성을 비교한 막대 그래프이다. 실험 #2는 실시예 6에 기술되어 있다.
도 9는 본원에 기술된 항-LAG3 항체와 경쟁자의 항-LAG3 항체의 결합을 비교한 에피토프 맵핑 분석의 결과를 보여주는 막대 그래프이다. 실험은 실시예 7에 기술되어 있다.
도 10a는 공여자 #1로부터의 PBMC를 사용하여 다양한 항-LAG3 항체에 의해 유도된 인터페론-감마 방출을 비교한 막대 그래프이다. 실험은 실시예 8에 기술되어 있다.
도 10b는 공여자 #2로부터의 PBMC를 사용하여 다양한 항-LAG3 항체에 의해 유도된 인터페론-감마 방출을 비교한 막대 그래프이다. 실험은 실시예 8에 기술되어 있다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 기술적 및 과학적 용어들은 달리 정의되지 않는 한 당업계의 통상의 숙련가들에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 유전자이식 세포 생산, 단백질 화학 및 핵산 화학 및 혼성화의 기술에 관한 용어들은 당업계에 잘 알려져 있고 통상적으로 사용된다. 본원에 제공된 방법 및 기술은 일반적으로 달리 지시되지 않는 한 본원에 인용되고 논의되는 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌에 기술된 바와 같이 당업계에 잘 알려진 통상적인 절차에 따라 수행된다. 예를 들면, 문헌[참조: Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)]을 참조한다. 다수의 기본 텍스트는 다음 문헌을 포함하는 표준 항체 생산 프로세스를 기술한다[참조: Borrebaeck (ed)　Antibody Engineering,　2nd Edition　Freeman and Company, NY, 1995; McCafferty et al.　Antibody Engineering, A Practical Approach　IRL at Oxford Press, Oxford, England, 1996; and Paul (1995)　Antibody Engineering Protocols　Humana Press, Towata, N.J., 1995; Paul (ed.),　Fundamental Immunology, Raven Press, N.Y, 1993; Coligan (1991)　Current Protocols in Immunology　Wiley/Greene, NY; Harlow and Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual　Cold Spring Harbor Press, NY; Stites et al. (eds.)　Basic and Clinical Immunology　(4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, Calif., and references cited therein;　Coding Monoclonal Antibodies: Principles and Practice　(2nd ed.) Academic Press, New York, N.Y., 1986, and Kohler and Milstein　Nature　256: 495-497, 1975]을 참조한다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은 전문이 본원에 참고로 포함된다. 효소 반응 및 농축/정제 기술은 또한 잘 알려져 있으며, 당업계에서 통상적으로 달성되거나 본원에 기술된 바와 같이 제조자의 사양에 따라 수행된다. 본원에 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 제약 화학의 실험실 절차 및 기술과 관련하여 사용되는 용어는 당업계에 잘 알려져 있고 통상적으로 사용된다. 표준 기술은 화학 합성, 화학 분석, 약제 제조, 제형화, 및 전달, 및 환자의 치료에 사용될 수 있다.

본원에 제공된 표제는 본 개시내용의 다양한 측면들의 제한이 아니며, 이는 본 명세서 전체를 참조하여 이해될 수 있다.

본 명세서의 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고, 복수 용어는 단수를 포함한다. 단수 형태 "a", "an" 및 "the", 및 임의의 단어의 단수 사용은 하나의 지시대상에 명시적이고 명백하게 제한되지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.

본원에서 대안(예를 들어, "또는")의 사용은 대안들 중 하나 또는 둘 다 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해된다.

본원에 사용된 용어 "및/또는"은 다른 특징들 또는 성분들의 존재 또는 부재하에 각각의 특정된 특징들 또는 성분들의 특정 개시를 의미하는 것으로 간주된다. 예를 들면, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 다음의 양상들 각각을 포괄하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B (단독); 및 C (단독).

본원에 사용된 용어 "포함하는(comprising)", "포함하는(including)", "갖는(having)" 및 "함유하는(containing)" 및 이들의 문법적 변형은, 본원에 사용된 바와 같이, 목록의 한 항목 또는 다수의 항목이 열거된 항목에 치환되거나 추가될 수 있는 다른 항목을 배제하지 않도록 비제한적인 것으로 의도된다. 양상들이 "포함하는(comprising)"이라는 언어로 본원에 기술된 곳마다, 달리 "로 이루어진(consisting of)" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진(consisting essentially of)"의 측면에서 기술된 유사한 양상들이 또한 제공되는 것으로 이해된다.

본원에 사용된 용어 "약"은 당업계의 통상의 숙련가에 의해 결정되는 특정 값 또는 조성물에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성물을 지칭하며, 이는 값 또는 조성물이 측정되거나 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들면, "약" 또는 "대략적으로"는 당업계의 실시당 하나 또는 하나 이상의 표준 편차 내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약" 또는 "대략적으로"는 측정 시스템의 한계에 따라 10%까지의 범위(즉, ±10%)를 의미할 수 있다. 예를 들면, 약 5mg은 4.5mg 내지 5.5mg 사이의 임의의 수를 포함할 수 있다. 더욱이, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 상기 용어는 값의 최대 자릿수 또는 최대 5배를 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성물이 본 개시내용에 제공될 때, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "대략적으로"의 의미는 그 특정 값 또는 조성물에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다.

본원에 사용된 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질" 및 다른 관련 용어는 상호교환 가능하게 사용되며 아미노산의 중합체를 지칭하며, 임의의 특정 길이로 제한되지 않는다. 폴리펩티드는 천연 및 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 재조합 또는 화학적으로 합성된 형태를 포함한다. 폴리펩티드는 또한 아직 절단, 예를 들어 분비 신호 펩티드에 의한 절단 또는 특정 아미노산 잔기에서의 비효소적 절단에 의한 절단을 거치지 않은 전구체 분자를 포함한다. 폴리펩티드는 절단을 겪은 성숙한 분자를 포함한다. 이들 용어는 천연 및 인공 단백질, 단백질 단편 및 단백질 서열의 폴리펩티드 유사체(예를 들어 뮤테인, 변이체, 키메라 단백질 및 융합 단백질) 뿐만 아니라 번역 후, 또는 달리 공유적으로 또는 비공유적으로, 변형된 단백질을 포괄한다. 재조합 절차를 사용하여 제조된 LAG3에 결합하는 결합 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 부분)가 본원에 기술되어 있다.

본원에 사용된 용어 "핵산", "폴리뉴클레오티드" 및 "올리고뉴클레오티드" 및 다른 관련 용어는 상호교환 가능하게 사용되며 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, 임의의 특정 길이로 제한되지 않는다. 핵산은 재조합 및 화학적으로 합성된 형태를 포함한다. 핵산은 DNA 분자(cDNA 또는 게놈 DNA), RNA 분자(예를 들어, mRNA), 뉴클레오티드 유사체를 사용하여 생성된 DNA 또는 RNA의 유사체(예를 들어, 펩티드 핵산 및 비천연 발생 뉴클레오티드 유사체), 및 이들의 하이브리드를 포함한다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 한 양태에서, 본 개시내용의 핵산 분자는 항체, 또는 이의 단편 또는 scFv, 유도체, 뮤테인, 또는 변이체를 암호화하는 인접한 개방 판독 프레임을 포함한다. 한 양태에서, 핵산은 한 유형의 폴리뉴클레오티드 또는 둘 이상의 상이한 유형의 폴리뉴클레오티드의 혼합물을 포함한다. 항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산이 본원에 기술되어 있다. 한 양태에서, 핵산은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화한다. 한 양태에서, 핵산은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화한다.

용어 "회수하다" 또는 "회수" 또는 "회수하는" 및 다른 관련 용어는, 숙주 세포 배양 배지로부터 또는 숙주 세포 용해물로부터 또는 숙주 세포막으로부터 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분)을 수득하는 것을 지칭한다. 한 양태에서, 단백질은 발현된 단백질의 분비를 매개하는 분비 신호 펩티드 서열에 융합된 재조합 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현된다. 분비된 단백질은 숙주 세포 배지로부터 회수될 수 있다. 한 양태에서, 단백질은 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있는 분비 신호 펩티드 서열이 결여된 재조합 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현된다. 한 양태에서, 단백질은 숙주 세포막으로부터 발현된 단백질을 방출하기 위해 세제를 사용하여 회수될 수 있는 막-결합된 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현된다. 한 양태에서, 단백질을 회수하기 위해 사용된 방법과 무관하게, 단백질은 회수된 단백질로부터 세포 파편을 제거하는 절차를 거칠 수 있다. 예를 들면, 회수된 단백질은 크로마토그래피, 겔 전기영동 및/또는 투석을 거칠 수 있다. 한 양태에서, 크로마토그래피는 친화성 크로마토그래피, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 이온-교환 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 및/또는 실리카 상의 크로마토그래피를 포함하는 어느 하나 또는 임의의 조합 또는 둘 이상의 절차를 포함한다. 한 양태에서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 또는 G(스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)로부터의 세포벽 성분)를 포함한다.

용어 "단리된"은 다른 세포 물질이 실질적으로 없는 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분) 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 단백질은 당업계에 잘 알려진 단백질 정제 기술을 사용하여, 단리에 의해 자연적으로 연관된 성분(또는 항체를 생산하기 위해 사용되는 세포 발현 시스템 또는 화학적 합성 방법과 관련된 성분)을 실질적으로 갖지 않게 될 수 있다. 용어 단리된은 또한 일부 양태에서 동일한 종의 다른 분자, 예를 들어 각각 상이한 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 갖는 다른 단백질 또는 폴리뉴클레오티드를 실질적으로 함유하지 않는 단백질 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 원하는 분자의 균질성의 순도는 겔 전기영동과 같은 저분해능 방법 및 HPLC 또는 질량 분광광도측정과 같은 고분해능 방법을 포함하는 당업계에 잘 알려진 기술을 사용하여 검정될 수 있다. 한 양태에서, 본원에 기술된 항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 단백질 중 임의의 것이 단리될 수 있다.

본원에 사용된 "항원 결합 단백질" 및 관련 용어(예를 들어, LAG3 결합 단백질)는 항원(예를 들어, LAG3)에 결합하는 부분 및 임의로, 항원 결합 부분이 항원에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 촉진하는 입체 형태를 채택하도록 허용하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분을 포함하는 단백질을 지칭한다. 항원 결합 단백질의 예는 항체, 항체 단편(예를 들어, 항체의 항원 결합 부분), 항체 유도체, 및 항체 유사체를 포함한다. 항원 결합 단백질은, 예를 들면, 그래프트된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체 유래 스캐폴드 뿐만 아니라, 예를 들면, 생체적합성 중합체를 포함하는 전적으로 합성 스캐폴드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들면, 문헌[참조: Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654]을 참조한다. 또한, 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 이용하는 항체 모방체에 기반한 스캐폴드 뿐만 아니라 펩티드 항체 모방체("PAM")가 사용될 수 있다. LAG3에 결합하는 항원 결합 단백질이 본원에 기술되어 있다.

항원 결합 단백질은, 예를 들면, 면역글로불린의 구조를 가질 수 있다. 한 양태에서, "면역글로불린"은 각 쌍이 하나의 "경쇄"(약 25kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50-70kDa)를 갖는 폴리펩티드 쇄의 두 개의 동일한 쌍으로 구성된 사량체 분자를 지칭한다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각 쇄의 카복시 말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의한다. 인간 경쇄는 카파 또는 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 접합되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌[참조: Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다(모든 목적을 위해 전문이 참고로 포함됨). 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 무손상 면역글로불린이 두 개의 항원 결합 부위를 갖도록 항체 결합 부위를 형성한다. 한 양태에서, 항원 결합 단백질은 사량체 면역글로불린 분자와 상이하지만 여전히 표적 항원에 결합하거나 둘 이상의 표적 항원에 결합하는 구조를 갖는 합성 분자일 수 있다. 예를 들면, 합성 항원 결합 단백질은 항체 단편, 1-6개 이상의 폴리펩티드 쇄, 폴리펩티드의 비대칭 어셈블리, 또는 다른 합성 분자를 포함할 수 있다. LAG3에 특이적으로 결합하는 면역글로불린-유사 특성을 갖는 항원 결합 단백질이 본원에 기술되어 있다.

면역글로불린 쇄의 가변 영역은 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고도 불리는 세 개의 초가변 영역에 의해 결합된 비교적 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반적인 구조를 나타낸다. N 말단에서 C 말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘 다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다.

하나 이상의 CDR은 항원 결합 단백질로 만들기 위해 공유적으로 또는 비공유적으로 분자 내로 혼입될 수 있다. 항원 결합 단백질은 CDR(들)을 더 큰 폴리펩티드 쇄의 일부로서 혼입시킬 수 있거나, CDR(들)을 다른 폴리펩티드 쇄에 공유적으로 연결할 수 있거나, 또는 CDR(들)을 비공유적으로 혼입시킬 수 있다. CDR은 항원 결합 단백질이 관심있는 특정 항원에 특이적으로 결합하도록 허용한다.

각 도메인에 아미노산을 할당하는 것은 문헌[참조: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991]의 Kabat 등의 정의에 따른다. 면역글로불린 쇄 내의 아미노산에 대한 다른 넘버링 시스템은 IMGT.RTM.(international ImMunoGeneTics information system; Lefranc et al, Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005) 및 AHo(Honegger and Pluckthun, J. Mol . Biol. 309(3):657-670; 2001); Chothia(Al-Lazikani et al., 1997 Journal of Molecular Biology 273:927-948; Contact(Maccallum et al., 1996 Journal of Molecular Biology 262:732-745, 및 Aho(Honegger and Pluckthun 2001 Journal of Molecular Biology 309:657-670)을 포함한다.

본원에 사용된 "항체" 및 "항체들" 및 관련 용어는 항원에 특이적으로 결합하는 무손상 면역글로불린 또는 이의 항원 결합 부분을 지칭한다. 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해 또는 무손상 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은, 특히 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 도메인 항체(dAb), 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일-쇄 항체(scFv), 키메라 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 및 폴리펩티드에 특이적인 항원 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩티드를 포함한다.

항체는 재조합적으로 생성된 항체 및 항원 결합 부분을 포함한다. 항체는 비인간, 키메라, 인간화 및 완전 인간 항체를 포함한다. 항체는 단일특이성, 다중특이성(예를 들어, 이중특이성, 삼중특이성 및 고차 특이성)을 포함한다. 항체는 사량체 항체, 경쇄 단량체, 중쇄 단량체, 경쇄 이량체, 중쇄 이량체를 포함한다. 항체는 F(ab')₂ 단편, Fab' 단편 및 Fab 단편을 포함한다. 항체는 단일 도메인 항체, 일가 항체, 단일 쇄 항체, 단쇄 가변 단편(scFv), 낙타화 항체, 애피바디, 디설피이드-연결된 Fv(sdFv), 항-이디오타입 항체(항-Id), 미니바디를 포함한다. 항체는 단클론 및 다클론 집단을 포함한다. 경쇄 및/또는 중쇄를 포함하는 항-LAG3 항체가 본원에 기술되어 있다.

본원에 사용된 "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 또는 "항원 결합 부위" 및 다른 관련 용어는 항원과 상호작용하고 항원에 대한 항원 결합 단백질의 특이성 및 친화도에 기여하는 아미노산 잔기(또는 다른 모이어티)를 포함하는 항원 결합 단백질의 일부를 지칭한다. 이의 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 경우, 이것은 이의 CDR 도메인 중 적어도 하나의 적어도 일부를 포함할 것이다. 항-LAG3 항체로부터의 항원 결합 도메인이 본원에 기술되어 있다.

항체 또는 항원 결합 단백질 또는 항체 단편의 맥락에서 본원에 사용된 용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적으로 결합하는" 및 다른 관련 용어는, 다른 분자 또는 모이어티에 비해 항원에 대한 우선적인 비공유 또는 공유 결합(예를 들어, 항체는 다른 이용 가능한 항원에 비해 특정 항원에 특이적으로 결합함)을 지칭한다. 한 양태에서, 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 해리 상수 K_D로 항원에 결합하는 경우 표적 항원에 특이적으로 결합한다. LAG3에 특이적으로 결합하는 항-LAG3 항체가 본원에 기술되어 있다.

한 양태에서, 해리 상수(K_D)는 BIACORE 표면 플라스몬 공명(SPR) 검정을 사용하여 측정될 수 있다. 표면 플라스몬 공명은 예를 들면 BIACORE 시스템(GE Healthcare, Piscataway, NJ의 Biacore Life Sciences division)을 사용하여 바이오센서 매트릭스 내의 단백질 농도의 변화의 검출에 의해 실시간 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학 현상을 지칭한다.

본원에 사용된 "에피토프" 및 관련 용어는 항원 결합 단백질에 의해 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해) 결합되는 항원의 일부를 지칭한다. 에피토프는 항원 결합 단백질에 의해 결합되는 둘 이상의 항원의 일부를 포함할 수 있다. 에피토프는 항원 또는 둘 이상의 항원의 인접하지 않은 부분을 포함할 수 있다(예를 들어, 항원의 일차 서열에서 인접하지 않지만 항원의 삼차 및 사차 구조의 맥락에서, 항원 결합 단백질에 의해 결합되기에 충분히 서로 근접한 아미노산 잔기). 일반적으로, 항체의 가변 영역, 특히 CDR은 에피토프와 상호작용한다. LAG3 폴리펩티드(항원)의 에피토프에 결합하는 항-LAG3 항체, 및 이의 항원 결합 단백질이 본원에 기술되어 있다.

본원에 사용된 "항체 단편", "항체 부분", "항체의 항원 결합 단편" 또는 "항체의 항원 결합 부분" 및 다른 관련 용어는 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; Fd; 및 Fv 단편, 뿐만 아니라 dAb; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자(예를 들어, scFv); 폴리펩티드에 특이적인 항원 결합을 부여하기에 충분한 항체의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 항체의 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해 또는 무손상 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은, 특히 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 도메인 항체(dAb), 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 키메라 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 및 항체 단편에 항원 결합 특성을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩티드를 포함한다. 항-LAG3 항체의 항원 결합 단편이 본원에 기술되어 있다.

용어 "Fab", "Fab 단편" 및 다른 관련 용어는 가변 경쇄 영역(V_L), 불변 경쇄 영역(C_L), 가변 중쇄 영역(V_H), 및 제1 불변 영역(C_H1)을 포함하는 1가 단편을 지칭한다. Fab는 항원에 결합할 수 있다. F(ab')₂ 단편은 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편이다. F(Ab')₂는 항원 결합 능력을 갖는다. Fd 단편은 V_H 및 C_H1 영역을 포함한다. Fv 단편은 V_L 및 V_H 영역을 포함한다. Fv는 항원에 결합할 수 있다. dAb 단편은 V_H 도메인, V_L 도메인, 또는 V_H 또는 V_L 도메인의 항원 결합 단편을 갖는다(미국 특허 제6,846,634호 및 제6,696,245호; 미국 공개 출원 제2002/02512호, 제2004/0202995호, 제2004/0038291호, 제2004/0009507호, 제2003/0039958호; and Ward et al., Nature 341:544-546, 1989). 항-LAG3 항체로부터의 항원 결합 부분을 포함하는 Fab 단편이 본원에 기술되어 있다.

단일쇄 항체(scFv)는 V_L 및 V_H 영역이 링커(예를 들어, 아미노산 잔기의 합성 서열)를 통해 결합되어 연속 단백질 쇄를 형성하는 항체이다. 바람직하게는 링커는 단백질 쇄가 그 자체로 다시 접혀서 일가 항원 결합 부위를 형성할 수 있도록 충분히 길다(예를 들어, 참조; Bird et al., 1988, Science 242:423-26 and Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83). 항-LAG3 항체로부터의 항원 결합 부분을 포함하는 단일 쇄 항체가 본원에 기술되어 있다.

디아바디는 두 개의 폴리펩티드 쇄를 포함하는 이가 항체이며, 여기서 각 폴리펩티드 쇄는 동일한 쇄 상의 두 도메인 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧아서 각 도메인이 다른 폴리펩티드 쇄 상의 상보적 도메인과 쌍을 이룰 수 있게 하는 링커에 의해 결합된 V_H 및 V_L 도메인을 포함한다(예를 들어, 참조; Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, and Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23). 디아바디의 두 폴리펩티드 쇄가 동일하다면, 이들의 쌍형성으로부터 생성된 디아바디는 두 개의 동일한 항원 결합 부위를 가질 것이다. 상이한 서열을 갖는 폴리펩티드 쇄는 두 개의 상이한 항원 결합 부위를 갖는 디아바디를 만드는데 사용될 수 있다. 유사하게, 트리바디 및 테트라바디는 각각 세 개 및 네 개의 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 각각 동일하거나 상이할 수 있는 세 개 및 네 개의 항원 결합 부위를 형성하는 항체이다. 디아바디, 트리바디 및 테트라바디 작제물은 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체로부터의 항원 결합 부분을 사용하여 제조될 수 있다.

용어 "인간 항체"는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 한 양태에서, 모든 가변 및 불변 도메인은 인간 면역글로불린 서열(예를 들어, 완전 인간 항체)로부터 유래된다. 이들 항체는 다양한 방식으로 제조될 수 있으며, 그 예는 재조합 방법론을 통해 또는 인간 중쇄 및/또는 경쇄-암호화 유전자로부터 유래된 항체를 발현하도록 유전적으로 변형된 마우스의 관심 항원을 사용한 면역화를 통해서를 포함하여 하기에 기술된다. 완전 인간 항-LAG3 항체 및 이의 항원 결합 단백질이 본원에 기술되어 있다.

"인간화된" 항체는 인간화 항체가 인간 대상체에게 투여될 때 인간화 항체는 비인간 종 항체와 비교하여 면역 반응을 유도할 가능성이 적고/적거나 덜 심각한 면역 반응을 유도하도록, 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가에 의해 비인간 종으로부터 유래된 항체의 서열과는 상이한 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 한 양태에서, 비인간 종 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 및 불변 도메인 내의 특정 아미노산은 인간화 항체를 생산하기 위해 돌연변이된다. 또 다른 양태에서, 인간 항체로부터의 불변 도메인(들)은 비인간 종의 가변 도메인(들)에 융합된다. 또 다른 양태에서, 비인간 항체의 하나 이상의 CDR 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 이것이 인간 대상체에게 투여될 때 비인간 항체의 면역원성을 감소시키도록 변화되고, 여기서 변화된 아미노산 잔기는 이의 항원에 대한 항체의 면역특이적 결합에 중요하지 않거나, 이루어진 아미노산 서열에 대한 변경은 보존적 변화이어서 항원에 대한 인간화 항체의 결합이 항원에 대한 비인간 항체의 결합보다 유의하게 나쁘지 않게 된다. 인간화 항체를 만드는 방법의 예는 미국 특허 제6,054,297호, 제5,886,152호 및 제5,877,293호에서 찾을 수 있다.

본원에 사용된 용어 "키메라 항체" 및 관련 용어는 제1 항체로부터의 하나 이상의 영역 및 하나 이상의 다른 항체로부터의 하나 이상의 영역을 함유하는 항체를 지칭한다. 한 양태에서, 하나 이상의 CDR은 인간 항체로부터 유래된다. 또 다른 양태에서, 모든 CDR은 인간 항체로부터 유래된다. 또 다른 양태에서, 하나 이상의 인간 항체로부터의 CDR은 키메라 항체에서 혼합되고 매칭된다. 예를 들어, 키메라 항체는 제1 인간 항체의 경쇄로부터의 CDR1, 제2 인간 항체의 경쇄로부터의 CDR2 및 CDR3, 및 제3 항체로부터의 중쇄로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, CDR은 인간 및 마우스, 또는 인간 및 토끼, 또는 인간 및 염소와 같은 상이한 종으로부터 기원한다. 당업계의 숙련가는 다른 조합이 가능하다는 것을 인지할 것이다.

또한, 프레임워크 영역은 동일한 항체 중 하나로부터, 하나 이상의 상이한 항체, 예를 들어 인간 항체로부터, 또는 인간화 항체로부터 유래될 수 있다. 키메라 항체의 한 예에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터의 항체와 동일하거나, 상동성이거나, 이로부터 유래되거나, 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 반면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터의 항체(들)와 동일하거나, 상동성이거나, 이로부터 유래되거나, 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속한다. 또한 원하는 생물학적 활성(즉, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 능력)을 나타내는 이러한 항체의 단편이 포함된다. 키메라 항체는 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체의 일부로부터 제조될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "변이체" 폴리펩티드 및 폴리펩티드의 "변이체"는 참조 폴리펩티드 서열에 비해 아미노산 서열에 삽입, 결실 및/또는 치환된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드 변이체는 융합 단백질을 포함한다. 동일한 방식으로, 변이체 폴리뉴클레오티드는 다른 폴리뉴클레오티드 서열에 비해 뉴클레오티드 서열에 삽입, 결실 및/또는 치환된 하나 이상의 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 융합 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

본원에 사용된 용어 폴리펩티드의 "유도체"는 예를 들어, 다른 화학적 모이어티, 예컨대 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민)에 대한 접합, 인산화, 및 글리코실화를 통해 화학적으로 변형된 폴리펩티드(예를 들어, 항체)이다. 달리 지시되지 않는 한, 용어 "항체"는, 두 개의 전장 중쇄 및 두 개의 전장 경쇄를 포함하는 항체 이외에, 이의 유도체, 변이체, 단편 및 뮤테인을 포함하며, 이의 예는 아래에 기술되어 있다.

본원에 사용된 용어 "Fc" 또는 "Fc 영역"은 힌지 영역에서 시작하거나 그 이후에 시작하여 중쇄의 C 말단에서 끝나는 항체 중쇄 불변 영역의 부분을 지칭한다. Fc 영역은 CH 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하고, 힌지 영역의 일부를 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 각각 절반의 Fc 영역을 지닌 두 개의 폴리펩티드 쇄는 이량체화되어 완전 Fc 도메인을 형성할 수 있다. Fc 도메인은 Fc 세포 표면 수용체 및 면역 보체 시스템의 일부 단백질에 결합할 수 있다. Fc 도메인은 보체-의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 항체-의존성 식작용(ADP), 옵소닌화 및/또는 세포 결합을 포함하는 임의의 하나 또는 둘 이상의 활성의 임의의 조합을 포함하는 이펙터 기능을 나타낸다. Fc 도메인은 FcγRI(예를 들어, CD64), FcγRII(예를 들어, CD32) 및/또는 FcγRIII(예를 들어, CD16a)를 포함하는 Fc 수용체에 결합할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "표지된 항체" 또는 관련 용어는 검출을 위해 검출 가능한 표지 또는 모이어티에 접합되거나 표지되지 않은 항체 및 이들의 항원 결합 부분을 지칭하며, 여기서 검출가능한 표지 또는 모이어티는 방사성, 비색, 항원성, 효소적, 검출가능한 비드(예를 들어, 자기 또는 전기밀도(예를 들어, 금) 비드), 비오틴, 스트렙타비딘 또는 단백질 A이다. 방사성핵종, 형광체, 효소, 효소 기질, 효소 보조인자, 효소 억제제 및 리간드(예를 들어, 비오틴, 합텐)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 표지가 사용될 수 있다. 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체는 표지되지 않을 수 있거나, 검출가능한 표지 또는 모이어티에 접합될 수 있다.

본원에 사용된 "동일성 퍼센트" 또는 "상동성 퍼센트" 및 관련 용어는 두 폴리펩티드 사이의 유사성 또는 두 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 유사성의 정량적 측정을 지칭한다. 두 폴리펩티드 서열 사이의 동일성 퍼센트는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여 두 폴리펩티드 서열 사이에 공유되는 정렬된 위치에서의 동일한 아미노산의 수의 함수이며, 이는 두 폴리펩티드 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입될 필요가 있을 수 있다. 유사한 방식으로, 두 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 퍼센트는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여 두 폴리뉴클레오티드 서열 사이에 공유되는 정렬된 위치에서의 동일한 뉴클레오티드의 수의 함수이며, 이는 두 폴리뉴클레오티드 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입될 필요가 있을 수 있다. 두 폴리펩티드 서열 사이, 또는 두 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 서열의 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들면, 두 폴리펩티드 또는 두 폴리뉴클레오티드 서열의 "동일성 퍼센트" 또는 "상동성 퍼센트"는 이의 디폴트 파라미터를 사용하여 GAP 컴퓨터 프로그램(GCG 위스콘신 패키지, 버전 10.3(Accelrys, San Diego, California)의 일부)을 사용하여 서열을 비교함으로써 결정될 수 있다. 시험 서열에 대하여 "Y에 대해 적어도 X% 동일성을 갖는 서열을 포함한다"와 같은 표현은, 상기한 바와 같이 서열 Y에 정렬될 때, 시험 서열이 Y의 잔기의 적어도 X%와 동일한 잔기를 포함한다는 것을 의미한다.

한 양태에서, 시험 항체의 아미노산 서열은 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질을 구성하는 경쇄 및/또는 중쇄 폴리펩티드의 임의의 아미노산 서열과 유사하지만 동일하지는 않을 수 있다. 시험 항체와 폴리펩티드 사이의 유사성은 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질을 구성하는 임의의 경쇄 및/또는 중쇄 폴리펩티드에 대해 적어도 95%, 또는 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 한 양태에서, 유사한 폴리펩티드는 중쇄 및/또는 경쇄 내에 아미노산 치환을 함유할 수 있다. 한 양태에서, 아미노산 치환은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예를 들어, 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R 그룹)를 갖는 또 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 숙련된 기술자는 항체의 물리적 구조, 결합 능력 또는 세포 사멸 능력에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 최대 5% 보존적 및/또는 비보존적 아미노산 치환을 도입할 수 있다. 항체 결합 특성을 보유하거나 개선하도록 설계된, 가변 영역에서 보존적 아미노산 치환을 확인하고 제조하기 위한 잘 알려진 방법이 문헌[참조: Brummel, et al., 1993 Biochemistry 32:1180-1187; Kobayashi et al., 1999 Protein Engineering 12(10):879-884; and Burks et al., 1997 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417]에 기술되어 있다. 항원 결합을 보유 또는 개선하기 위해 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역에서 비보존적 아미노산 치환을 확인하고 제조하는 방법이 또한 공지되어 있다(참조: Near et al., 1993 Molecular Immunology 30(4):369-377). 따라서, 숙련된 기술자는 항체의 항원 결합 능력을 유의하게 감소시키지 않으면서 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에서 아미노산의 최대 5%를 예측하고 변경할 수 있다. 둘 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우에, 서열 동일성 퍼센트 또는 유사성의 정도는 치환의 보존적 성질을 보정하기 위한 쪽으로 조정될 수 있다. 이러한 조정을 만들기 위한 수단은 당업계의 숙련가들에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[참조: Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331]을 참조한다. 유사한 화학적 성질을 지닌 측쇄를 갖는 아미노산의 그룹의 예는 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황-함유 측쇄; 시스테인 및 메티오닌을 포함한다.

항체는 다양한 항원 특이성을 갖는 면역글로불린을 함유하는 혈청 또는 혈장과 같은 공급원으로부터 수득될 수 있다. 이러한 항체가 친화성 정제에 적용되는 경우, 이들은 특정 항원 특이성을 위해 농축될 수 있다. 항체의 이러한 농축된 제제는 통상적으로 특정 항원에 대한 특이 결합 활성을 갖는 약 10% 미만의 항체로 제조된다. 이들 제제를 여러 라운드의 친화성 정제에 적용하면 항원에 대한 특이 결합 활성을 갖는 항체의 비율을 증가시킬 수 있다. 이러한 방식으로 제조된 항체는 종종 "단일특이성"으로 지칭된다. 단일특이성 항체 제제는 특정 항원에 대한 특이 결합 활성을 갖는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99%, 또는 99.9% 항체로 구성될 수 있다. 항체는 아래에 기술된 바와 같은 재조합 핵산 기술을 사용하여 생산될 수 있다.

본원에 사용된 "벡터" 및 관련 용어는 외래 유전 물질(예를 들어, 핵산 이식유전자)에 작동 가능하게 연결될 수 있는 핵산 분자(예를 들어, DNA 또는 RNA)를 지칭한다. 벡터는 외래 유전 물질을 세포(예를 들어, 숙주 세포) 내로 도입하기 위한 비히클로서 사용될 수 있다. 벡터는 벡터 내로의 이식유전자의 삽입을 위한 적어도 하나의 제한 엔도뉴클레아제 인식 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 벡터-이식유전자 작제물을 보유하는 숙주 세포의 선택을 돕기 위해 항생제 내성 또는 선택 가능한 특성을 부여하는 적어도 하나의 유전자 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 단일-가닥 또는 이중-가닥 핵산 분자일 수 있다. 벡터는 선형 또는 원형 핵산 분자일 수 있다. 징크 핑거 뉴클레아제, TALEN 또는 CRISPR/Cas를 사용하는 유전자 편집 방법에 사용되는 공여자 핵산은 벡터의 한 유형일 수 있다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드"이며, 이는 이식유전자에 연결될 수 있고 숙주 세포에서 복제할 수 있으며 이식유전자를 전사 및/또는 번역할 수 있는 선형 또는 원형 이중 가닥 염색체외 DNA 분자를 지칭한다. 바이러스 벡터는 전형적으로 이식유전자에 연결될 수 있는 바이러스 RNA 또는 DNA 백본 서열을 함유한다. 바이러스 백본 서열은 감염을 못하게 하지만 바이러스 백본 및 공동-연결된 이식유전자의 숙주 세포 게놈 내로의 삽입을 보유하도록 변형될 수 있다. 바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관, 바큘로바이러스, 파포바이러스, 백시니아 바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 및 엡스타인 바 바이러스 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제가 가능하다(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 포함하는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합되고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다.

"발현 벡터"는 하나 이상의 조절 서열, 예를 들어 유도성 및/또는 구성적 프로모터 및 인핸서를 함유할 수 있는 벡터의 한 유형이다. 발현 벡터는 리보솜 결합 부위 및/또는 폴리아데닐화 부위를 포함할 수 있다. 조절 서열은 숙주 세포 내로 형질도입되는 발현 벡터에 연결된 이식유전자의 전사, 또는 전사 및 번역을 지시한다. 조절 서열(들)은 이식유전자의 발현의 수준, 타이밍 및/또는 위치를 제어할 수 있다. 조절 서열은, 예를 들면, 이식유전자에 직접 대해, 또는 하나 이상의 다른 분자(예를 들어, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩티드)의 작용을 통해 이의 효과를 발휘할 수 있다. 조절 서열은 벡터의 일부일 수 있다. 조절 서열의 추가의 예가, 예를 들면, 문헌[참조: Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-3606]에 기술되어 있다. 발현 벡터는 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체의 적어도 일부를 암호화하는 핵산을 포함할 수 있다.

항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 본원에 기술되어 있다. 한 양태에서, 벡터는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결한다. 한 양태에서, 핵산은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화한다.

이식유전자는 벡터에 함유된 이식유전자 서열의 기능 또는 발현을 허용하기 위해 이식유전자와 벡터 사이에 결합이 있을 때 벡터에 "작동 가능하게 연결"된다. 한 양태에서, 이식유전자는 조절 서열이 이식유전자의 발현(예를 들어, 발현의 수준, 타이밍, 또는 위치)에 영향을 미칠 때 조절 서열에 "작동 가능하게 연결"된다.

본원에 사용된 용어 "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된" 또는 다른 관련 용어는 외인성 핵산(예를 들어, 이식유전자)이 숙주 세포 내로 전달 또는 도입되는 과정을 지칭한다. "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된" 숙주 세포는 외인성 핵산(이식유전자)으로 형질감염, 형질전환 또는 형질도입된 것이다. 숙주 세포는 일차 대상체 세포 및 이의 자손을 포함한다. 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체의 적어도 일부를 암호화하는 외인성 핵산은 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체의 적어도 일부를 포함하는 발현 벡터는 숙주 세포 내로 도입될 수 있고, 숙주 세포는 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 발현할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "숙주 세포" 또는 "또는 숙주 세포의 집단" 또는 관련 용어는 외래(외인성 또는 이식유전자) 핵산이 도입된 세포(또는 이의 집단)를 지칭한다. 외래 핵산은 이식유전자에 작동 가능하게 연결된 발현 벡터를 포함할 수 있고, 숙주 세포는 외래 핵산(이식유전자)에 의해 암호화되는 핵산 및/또는 폴리펩티드를 발현하는데 사용될 수 있다. 숙주 세포(또는 이의 집단)는 배양된 세포일 수 있거나 대상체로부터 추출될 수 있다. 숙주 세포 (또는 이의 집단)는 계대 수를 전혀 고려하지 않고 일차 대상체 세포 및 이의 자손을 포함한다. 자손 세포는 부모 세포와 비교하여 동일한 유전 물질을 보유할 수 있거나 보유하지 않을 수 있다. 숙주 세포는 자손 세포를 포괄한다. 한 양태에서, 숙주 세포는 본원에 개시된 바와 같이, 항체를 발현하기 위해 임의의 방식으로 변형, 형질감염, 형질도입, 형질전환 및/또는 조작된 임의의 세포(이의 자손 포함)를 기술한다. 한 예에서, 숙주 세포 (또는 이의 집단)는 본원에 기술된 목적하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 발현 벡터와 함께 도입될 수 있다. 숙주 세포 및 이의 집단은 숙주의 게놈 내로 안정하게 통합되는 발현 벡터를 보유할 수 있거나 염색체외 발현 벡터를 보유할 수 있다. 한 양태에서, 숙주 세포 및 이의 집단은 수 회의 세포 분열 후에 존재하거나 일시적으로 존재하다가 수 회의 세포 분열 후에 소실되는 염색체외 벡터를 보유할 수 있다.

유전자이식 숙주 세포는 징크 핑거 뉴클레아제, TALENS 또는 CRISPR/Cas를 포함하는 잘 알려진 설계자 뉴클레아제를 포함하는 비-바이러스 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 이식유전자는 징크 핑거 뉴클레아제와 같은 게놈 편집 기술을 사용하여 숙주 세포의 게놈에 도입될 수 있다. 징크 핑거 뉴클레아제는 조작된 징크 핑거 모티프로부터의 DNA 결합 도메인에 융합된 제한 엔도뉴클레아제(예를 들어, FokI)의 비특이적 엔도뉴클레아제 도메인을 각각 함유하는 한 쌍의 키메라 단백질을 포함한다. DNA 결합 도메인은 숙주의 게놈에서 특정 서열에 결합하도록 조작될 수 있고, 엔도뉴클레아제 도메인은 이중-가닥 절단을 만든다. 공여자 DNA는 이식유전자, 예를 들어 본원에 기술된 CAR 또는 DAR 작제물을 암호화하는 임의의 핵산, 및 숙주 세포의 게놈 내의 의도된 삽입 부위의 양쪽에 있는 영역과 상동성인 플랭킹 서열을 지닌다. 숙주 세포의 DNA 복구 기계는 상동성 DNA 복구에 의한 이식유전자의 정확한 삽입을 가능하게 한다. 유전자이식 포유동물 숙주 세포는 징크 핑거 뉴클레아제를 사용하여 제조되었다(미국 특허 제9,597,357호, 제9,616,090호, 제9,816,074호 및 제8,945,868호). 유전자이식 숙주 세포는 정확한 이식유전자 삽입을 전달할 수 있는 DNA 결합 도메인에 융합된 비특이적 엔도뉴클레아제 도메인을 포함한다는 점에서 징크 핑거 뉴클레아제와 유사한 TALEN(전사 활성화제-유사 이펙터 뉴클레아제)을 사용하여 제조될 수 있다. 징크 핑거 뉴클레아제와 마찬가지로, TALEN은 숙주의 DNA에 이중-가닥 절단을 도입한다. 유전자이식 숙주 세포는 CRISPR(클러스터링된 규칙적으로 간격이 있는 짧은 회문 반복)을 사용하여 제조될 수 있다. CRISPR은 표적 특이적 공여자 DNA 통합을 위해 가이드 RNA에 결합된 Cas 엔도뉴클레아제를 사용한다. 가이드 RNA는 표적 DNA 내의 gRNA-결합 영역의 상류에 프로토스페이서 인접 모티프(PAM) 서열을 함유하는 보존된 다중-뉴클레오티드를 포함하고 숙주 세포 표적 부위에 혼성하며, 여기서 Cas 엔도뉴클레아제가 이중 가닥 표적 DNA를 절단한다. 가이드 RNA는 특정 표적 부위에 혼성화하도록 설계될 수 있다. 징크 핑거 뉴클레아제 및 TALEN과 유사하게, CRISPR/Cas 시스템은 삽입 부위와 상동성을 갖는 플랭킹 서열을 갖는 공여자 DNA의 부위 특이적 삽입을 도입하는데 사용될 수 있다. 게놈을 변형시키는데 사용되는 CRISPR/Cas 시스템의 예는 예를 들면 미국 특허 제8,697,359호, 제10,000,772호, 제9,790,490호, 및 미국 특허 출원 공개 제2018/0346927호에 기술되어 있다. 한 양태에서, 유전자이식 숙주 세포는 징크 핑거 뉴클레아제, TALEN 또는 CRISPR/Cas 시스템을 사용하여 제조될 수 있고, 숙주 표적 부위는 TRAC 유전자(T 세포 수용체 알파 상수)일 수 있다. 공여자 DNA는 예를 들면 본원에 기술된 CAR 또는 DAR 작제물을 암호화하는 임의의 핵산을 포함할 수 있다. 전기천공, 뉴클레오펙션 또는 리포펙션은 징크 핑거 뉴클레아제, TALEN 또는 CRISPR/Cas 시스템과 함께 공여자 DNA를 숙주 세포 내로 공동전달하는데 사용될 수 있다.

숙주 세포는 원핵생물, 예를 들면, 이. 콜리(E. Coli)일 수 있거나 진핵생물, 예를 들어, 단세포 진핵생물(예를 들어, 효모 또는 다른 진균), 식물 세포(예를 들어, 담배 또는 토마토 식물 세포), 포유동물 세포(예를 들어, 인간 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 래트 세포, 마우스 세포, 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마일 수 있다. 한 양태에서, 숙주 세포는 목적하는 항체를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 발현 벡터와 함께 도입될 수 있고, 이에 따라 형질감염/형질전환된 숙주 세포에 의한 항체의 발현에 적합한 조건하에서 배양되는 형질감염/형질전환된 숙주 세포를 생성하고, 임의로 형질감염/형질전환된 숙주 세포로부터 항체를 회수할 수 있다(예를 들어, 숙주 세포 용해물로부터의 회수 또는 배양 배지로부터의 회수). 한 양태에서, 숙주 세포는 CHO, BHK, NS0, SP2/0, 및 YB2/0을 포함하는 비인간 세포를 포함한다. 한 양태에서, 숙주 세포는 HEK293, HT-1080, Huh-7 및 PER을 포함하는 인간 세포를 포함한다. 숙주 세포의 예는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL 1651)(참조; Gluzman et al., 1981, Cell 23: 175), L 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 이들의 유도체, 예를 들어 Veggie CHO 및 무혈청 배지에서 성장하는 관련 세포주(참조; Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31) 또는 DHFR이 결핍된 CHO 균주 DX-B 11(참조; Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20), HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CV1로부터 유래된 CV1/EBNA 세포주(ATCC CCL 70)(참조; McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821), 인간 배아 신장 세포, 예를 들어 293, 293 EBNA 또는 MSR 293, 인간 상치 A431 세포, 인간 Colo 205 세포, 기타 형질전환된 영장류 세포주, 정상 이배체 세포, 1차 조직의 시험관내 배양무로부터 유래된 세포주, 1차 외식편, HL-60, U937, HaK 또는 Jurkat 세포를 포함한다. 한 양태에서, 숙주 세포는 Y0, NS0 또는 Sp20과 같은 림프양 세포를 포함한다. 한 양태에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포이지만, 인간 숙주 세포는 아니다. 전형적으로, 숙주 세포는 폴리펩티드-코딩 핵산으로 형질전환 또는 형질감염될 수 있는 배양된 세포이며, 이것은 그후 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 어구 "유전자이식 숙주 세포" 또는 "재조합 숙주 세포"는 발현될 핵산으로 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 숙주 세포는 또한 핵산을 포함하지만 핵산과 작동 가능하게 연결되도록 조절 서열이 숙주 세포 내로 도입되지 않는 한 원하는 수준으로 이를 발현하지 않는 세포일 수 있다. 용어 숙주 세포는 특정 대상체 세포 뿐만 아니라 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭하는 것으로 이해된다. 특정 변형이 예를 들어, 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실상 부모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에 사용된 바와 같은 용어의 범위 내에 여전히 포함된다.

항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 보유하는 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단이 본원에 기술되어 있다. 한 양태에서, 숙주 세포는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터를 보유한다. 한 양태에서, 핵산은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화한다.

본 개시내용의 폴리펩티드(예를 들어, 항체 및 항원 결합 단백질)는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 생산될 수 있다. 한 예에서, 폴리펩티드는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열(예를 들어, DNA)을 숙주 세포 내로 도입하고 발현을 촉진하는 조건하에서 숙주 세포에 의해 발현되는 재조합 발현 벡터 내로 삽입함으로써 재조합 핵산 방법에 의해 생산된다.

재조합 핵산 조작을 위한 일반적인 기술은 예를 들면 문헌[참조: Sambrook et al.,　in Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989, or F. Ausubel et al.,　in Current Protocols in Molecular Biology　(Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987) 및 정기 업데이트, 전문이 본원에 참고로 포함됨]에 기술되어 있다. 폴리펩티드를 암호화하는 핵산(예를 들어, DNA)은 포유동물, 바이러스, 또는 곤충 유전자로부터 유래된 하나 이상의 적합한 전사 또는 번역 조절 요소를 지닌 발현 벡터에 작동 가능하게 연결된다. 이러한 조절 요소는 전사 프로모터, 전사를 조절하는 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 암호화하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 조절하는 서열을 포함한다. 발현 벡터는 숙주 세포에서 복제 능력을 부여하는 복제 기원을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 유전자이식 숙주 세포(예를 들어, 형질전환체)의 인식을 용이하게 하기 위해 선택을 부여하는 유전자를 포함할 수 있다.

재조합 DNA는 또한 단백질을 정제하는데 유용할 수 있는 임의의 유형의 단백질 태그 서열을 암호화할 수 있다. 단백질 태그의 예는 히스티딘 태그, FLAG 태그, myc 태그, HA 태그, 또는 GST 태그를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 박테리아, 진균, 효모 및 포유동물 세포 숙주와 함께 사용하기 위한 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 문헌[참조: Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985)]에서 찾을 수 있다.

발현 벡터 작제물은 숙주 세포에 적합한 방법을 사용하여 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 전기천공; 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란 또는 다른 물질을 사용하는 형질감염; 바이러스 형질감염; 비-바이러스 형질감염; 미립자가속장치 충격(microprojectile bombardment); 리포펙션; 및 감염(예를 들어, 벡터가 감염원인 경우)을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 핵산을 숙주 세포 내로 도입하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 적합한 숙주 세포는 원핵생물, 효모, 포유동물 세포, 또는 박테리아 세포를 포함한다.

적합한 박테리아는 그램 음성 또는 그램 양성 유기체, 예를 들어, 이. 콜리 또는 바실러스 종(Bacillus　spp)을 포함한다. 효모, 바람직하게는 사카로마이세스(Saccharomyces) 종, 예를 들어 사카로마이세스 세레비시에(S. cerevisiae)로부터의 효모가 또한 폴리펩티드의 생산을 위해 사용될 수 있다. 다양한 포유동물 또는 곤충 세포 배양 시스템이 또한 재조합 단백질을 발현하기 위해 사용될 수 있다. 곤충 세포에서 이종 단백질의 생산을 위한 바큘로바이러스 시스템은 문헌[참조: Luckow and Summers, (Bio/Technology,　6:47, 1988)]에 검토된다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 예는 내피 세포, COS-7 원숭이 신장 세포, CV-1, L 세포, C127, 3T3, 중국 햄스터 난소(CHO), 인간 배아 신장 세포, HeLa, 293, 293T, 및 BHK 세포주를 포함한다. 정제된 폴리펩티드는 재조합 단백질을 발현하기 위해 적합한 숙주/벡터 시스템을 배양함으로써 제조된다. 많은 적용에 대해, 본원에 개시된 많은 폴리펩티드의 작은 크기는 발현을 위한 바람직한 방법으로서 이. 콜리에서 발현을 이루어지게 할 것이다. 그후, 단백질은 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제된다. 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질은 유전자이식 숙주 세포에 의해 발현될 수 있다.

본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단백질은 또한 세포-번역 시스템을 사용하여 생산될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 폴리펩티드를 암호화하는 핵산은 mRNA를 생산하기 위해 시험관내 전사를 허용하고 사용되는 특정 무세포 시스템(포유동물 또는 효모 무세포 번역 시스템과 같은 진핵 또는 박테리아 무세포 번역 시스템과 같은 원핵)에서 mRNA의 무세포 번역을 허용하도록 변형되어야 한다.

본원에 개시된 다양한 폴리펩티드 중 임의의 것을 암호화하는 핵산은 화학적으로 합성될 수 있다. 코돈 사용빈도는 세포에서의 발현을 개선하도록 선택될 수 있다. 이러한 코돈 사용빈도는 선택된 세포 유형에 따라 좌우될 것이다. 이. 콜리 및 기타 박테리아 뿐만 아니라 포유류 세포, 식물 세포, 효모 세포 및 곤충 세포에 대한 특수 코돈 사용 패턴이 개발되었다. 예를 들면, 문헌[참조: Mayfield et al.,　Proc. Natl. Acad. Sci. USA.　2003 100(2):438-42; Sinclair et al.　Protein Expr. Purif.　2002 (1):96-105; Connell N D.　Curr. Opin. Biotechnol.　2001 12(5):446-9; Makrides et al.　Microbiol. Rev.　1996 60(3):512-38; and Sharp et al.　Yeast.　1991 7(7):657-78]을 참조한다.

본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 또한 화학적 합성에 의해 (예를 들어, 문헌[참조: Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.]에 기술된 방법에 의해) 생산될 수 있다. 단백질에 대한 변형은 또한 화학적 합성에 의해 생성될 수 있다.

본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 단백질 화학 분야에서 일반적으로 공지된 단백질에 대한 단리/정제 방법에 의해 정제될 수 있다. 비제한적인 예는 추출, 재결정, 염석(예를 들어, 황산암모늄 또는 황산나트륨 사용), 원심분리, 투석, 한외여과, 흡착 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 정상상 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 겔 여과, 겔 투과 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 전기영동, 역류 분포 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 정제 후, 폴리펩티드는 상이한 완충제로 교환되고/되거나 여과 및 투석을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 다양한 방법 중 임의의 것에 의해 농축될 수 있다.

본원에 기술된 정제된 항체 및 항원 결합 단백질은 바람직하게는 적어도 65% 순도, 적어도 75% 순도, 적어도 85% 순도, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순도, 가장 바람직하게는 적어도 98% 순도이다. 순도의 정확한 수치 값에 관계없이, 폴리펩티드는 약제학적 제품으로서 사용하기에 충분한 순도이다. 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질은 유전자이식 숙주 세포에 의해 발현된 다음 임의의 당업계에 공지된 방법을 사용하여 약 65 내지 98% 순도 또는 높은 수준의 순도로 정제될 수 있다.

특정 양태에서, 본원에서 항체 및 항원 결합 단백질은 번역-후 변형을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 번역-후 단백질 변형은 인산화, 아세틸화, 메틸화, ADP-리보실화, 유비퀴틴화, 글리코실화, 카보닐화, 수모일화, 비오티닐화 또는 폴리펩티드 측쇄 또는 소수성 그룹의 첨가를 포함한다. 결과적으로, 변형된 폴리펩티드는 비-아미노산 요소, 예를 들어 지질, 다당류 또는 단당류, 및 포스페이트를 함유할 수 있다. 글리코실화의 바람직한 형태는 시알릴화이며, 이는 폴리펩티드에 하나 이상의 시알산 모이어티를 접합시킨다. 시알산 잔기는 단백질의 가능한 면역원성을 또한 감소시키면서 용해도 및 혈청 반감기를 개선시킨다. 문헌[참조: Raju et al.　Biochemistry.　2001 31; 40(30):8868-76]을 참조한다.

한 양태에서, 본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 항체 및 항원 결합 단백질을 비단백질성 중합체에 연결하는 것을 포함하여 가용성 폴리펩티드로 되도록 변형될 수 있다. 한 양태에서, 비단백질성 중합체는 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호 또는 제4,179,337호에 제시된 바와 같은 방식으로 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌을 포함한다.

PEG는 상업적으로 이용 가능하거나 당업계에 잘 알려진 방법(Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161)에 따라 에틸렌 글리콜의 개환 중합에 의해 제조될 수 있는 수용성 중합체이다. 용어 "PEG"는 PEG의 말단에서 크기 또는 변형에 관계없이 임의의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 포괄하기 위해 광범위하게 사용되며, 화학식: X―O(CH₂CH₂O)_n―CH₂CH₂OH (1)로 나타내어질 수 있으며, 여기서 n은 20 내지 2300이고 X는 H 또는 말단 변형, 예를 들어, C_1-4 알킬이다. 한 양태에서, PEG는 한쪽 말단에서 하이드록시 또는 메톡시로 종결되고, 즉, X는 H 또는 CH₃("메톡시 PEG")이다. PEG는 결합 반응에 필요한 추가의 화학 그룹을 함유할 수 있고; 이것은 분자의 화학적 합성으로부터 야기되거나; 또는 분자의 일부의 최적 간격을 위한 스페이서이다. 또한, 이러한 PEG는 함께 연결된 하나 이상의 PEG 측쇄로 구성될 수 있고, 하나 이상의 PEG 쇄를 갖는 PEG는 다중아암(multiarmed) 또는 분지형 PEG라고 불린다. 분지형 PEG는, 예를 들면, 글리세롤, 펜타에리트리올, 및 소르비톨을 포함하는 다양한 폴리올에 폴리에틸렌 옥시드를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 예를 들면, 네 개-아암의 분지형 PEG는 펜타에리트리올 및 에틸렌 옥사이드로부터 제조될 수 있다. 분지형 PEG는, 예를 들면, 제EP-A 0 473 084호 및 미국 특허 제5,932,462호에 기술되어 있다. PEGs의 한 형태는 리신의 1급 아미노 그룹을 통해 연결된 2개의 PEG 측쇄(PEG2)를 포함한다(참조: Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69).

PEG-변형된 폴리펩티드의 혈청 청소 비율은 변형되지 않은 항체 및 항원 결합 단백질 결합 폴리펩티드의 청소 비율에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 심지어 90%까지 조절(예를 들어, 증가 또는 감소)될 수 있다. PEG-변형된 항체 및 항원 결합 단백질은 비변형된 폴리펩티드의 반감기에 비해 향상된 반감기(t_1/2)를 가질 수 있다. PEG-변형된 폴리펩티드의 반감기는 비변형된 항체 및 항원 결합 단백질의 반감기에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400% 또는 500%, 또는 심지어 1000%까지 향상될 수 있다. 일부 양태에서, 단백질 반감기는 시험관내에서, 예를 들어 완충된 염수 용액에서 또는 혈청에서 결정된다. 다른 양태에서, 단백질 반감기는 생체내 반감기, 예를 들어 동물의 혈청 또는 다른 체액 중의 단백질의 반감기이다.

본 개시내용은 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 치료학적 조성물을 제공한다. 부형제는 담체, 안정화제 및 부형제를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 예는 예를 들어 불활성 희석제 또는 충전제(예를 들어, 수크로스 및 소르비톨), 윤활제, 활택제, 및 접착방지제(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 수소화된 식물성 오일, 또는 탈크)를 포함한다. 추가의 예는 완충제, 안정화제, 보존제, 비이온성 세제, 항산화제 및 등장화제를 포함한다.

치료학적 조성물 및 이들을 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[참조: "Remington : The Science and Practice of Pharmacy"(20th ed., ed. A. R. Gennaro A R., 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.]에서 발견된다. 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있는 치료학적 조성물은 예를 들어, 부형제, 멸균수, 식염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 식물 기원의 오일, 또는 수소화된 나프탈렌을 함유할 수 있다. 생체적합성, 생분해성 락티드 중합체, 락티드/글리콜리드 공중합체, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체는 본원에 기술된 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 방출을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 나노미립자 제형(예를 들어, 생분해성 나노입자, 고체 지질 나노입자, 리포솜)은 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 생체분포를 조절하기 위해 사용될 수 있다. 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프, 이식형 주입 시스템, 및 리포솜을 포함한다. 제형 중의 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 농도는 투여되는 약물의 투여량, 및 투여 경로를 포함하는 다수의 인자에 따라 변한다.

임의의 항-LAG3 항체 (또는 이의 항원 결합 부분)는 제약 산업에서 통상적으로 사용되는 비독성 산 부가염 또는 금속 착물과 같은 약제학적으로 허용되는 염으로서 투여될 수 있다. 산 부가염의 예는 유기산, 예를 들어 아세트산, 락트산, 파모산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 숙신산, 벤조산, 팔미트산, 수베르산, 살리실산, 타르타르산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산, 또는 트리플루오로아세트산 등; 중합체산, 예를 들어 탄닌산, 카복시메틸셀룰로스 등; 및 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산 인산 등을 포함한다. 금속 착물은 아연, 철 등을 포함한다. 한 예에서, 항체 (또는 이의 항원 결합 부분)는 열 안정성을 증가시키기 위해 나트륨 아세테이트의 존재하에서 제형화된다.

임의의 항-LAG3 항체 (또는 이의 항원 결합 부분)는 경구 사용을 위해 제형화될 수 있으며 비독성 약제학적으로 허용되는 부형제와의 혼합물 중에 활성 성분(들)을 함유하는 정제를 포함한다. 경구 사용을 위한 제형은 또한 츄어블 정제로서, 또는 활성 성분이 불활성 고체 희석제와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질과 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 척추동물, 포유동물 및 비-포유동물을 포함하는 인간 및 비인간 동물을 지칭한다. 한 양태에서, 대상체는 인간, 비-인간 영장류, 시미안, 유인원, 뮤린(예를 들어, 마우스 및 래트), 소, 돼지, 말, 개, 고양이, 염소, 늑대, 두꺼비 또는 물고기일 수 있다.

용어 "투여하는", "투여된" 및 문법적 변형은 당업계의 숙련가들에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용한 대상체에게의 제제의 물리적 도입을 지칭한다. 본원에 개시된 제형에 대한 예시적인 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 경로를 포함한다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경유, 피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 일부 양태에서, 제형은 비-비경구 경로를 통해, 예를 들어, 경구로 투여된다. 다른 비-비경구 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들면, 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소를 포함한다. 투여는 또한, 예를 들면, 1회, 다수회 및/또는 한 번 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)는 당업계에 공지된 방법 및 전달 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다.

용어 "유효량", "치료학적 유효량" 또는 "유효 용량" 또는 관련 용어는 상호교환 가능하게 사용될 수 있고, 대상체에게 투여될 때, 종양 또는 암 항원 발현과 관련된 질환 또는 장애의 측정 가능한 개선 또는 예방을 수행하기에 충분한 항체 또는 이의 항원 결합 단백질(예를 들어, 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체 또는 이의 항원 결합 단백질)의 양을 지칭한다. 본원에 제공된 항체의 치료학적 유효량은, 단독으로 또는 조합하여 사용될 때, 항체 및 조합물의 상대적 활성(예를 들어, 세포 성장을 억제하는데 있어서) 및 치료되는 대상체 및 질환 상태, 대상체의 체중 및 연령 및 성별, 대상체에서의 질환 상태의 중증도, 투여 방식 등에 따라 달라질 것이며, 이것은 당업계의 통상의 숙련가에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

한 양태에서, 치료학적 유효량은 치료될 대상체 및 치료될 장애의 특정 측면에 의존할 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업계의 숙련가에 의해 확인될 수 있다. 일반적으로, 폴리펩티드는 1일당 약 0.01g/kg 내지 약 50mg/kg, 바람직하게는 1일당 0.01mg/kg 내지 약 30mg/kg, 가장 바람직하게는 1일당 0.1mg/kg 내지 약 20mg/kg으로 투여된다. 폴리펩티드는 매일(예를 들어, 하루에 한 번, 두 번, 세 번, 또는 네 번) 또는 바람직하게는 덜 자주(예를 들어, 매주, 2주마다, 3주마다, 매월, 또는 분기별로) 투여될 수 있다. 또한, 당업계에 공지된 바와 같이, 연령 뿐만 아니라 체중, 일반 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호작용 및 질환의 중증도에 대한 조정이 필요할 수 있다.

본 개시내용은 LAG3의 발현과 관련된 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 질환은 종양-관련 항원을 발현하는 암 또는 종양 세포를 포함한다. 한 양태에서, 암 또는 종양은 전립선, 유방, 난소, 두경부, 방광, 피부, 결장직장, 항문, 직장, 췌장, 폐(비-소세포 폐암 및 소세포 폐암 포함), 평활근종, 뇌, 신경교종, 교모세포종, 식도, 간, 신장, 위, 결장, 자궁경부, 자궁내막, 외음부, 후두, 질, 뼈, 비강, 부비동, 비인두, 구강, 구인두, 후두, 하후두, 타액선, 요관, 요도, 음경 및 고환의 암을 포함한다.

한 양태에서, 암은 백혈병, 림프종, 척수종 및 B 세포 림프종을 포함하는 혈액학적 암을 포함한다. 혈액학적 암은 다발성 골수종(MM), 버킷 림프종(BL)을 포함한 비-호지킨 림프종(NHL), B 만성 림프구성 백혈병(B-CLL), 전신 홍반성 루푸스(SLE), B 및 T 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종, 만성 골수성 백혈병 (CML), 털 세포 백혈병(HCL), 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 맨틀 세포 림프종, 호지킨 림프종(HL), 혈장 세포 골수종, 전구체 B 세포 림프모구성 백혈병/림프종, 형질세포종, 거대 세포 골수종, 혈장 세포 골수종, 중쇄 골수종, 경쇄 또는 벤스-존스 골수종, 림프종성 육아종증, 이식후 림프증식 장애, 면역 조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판 감소증 자반병, 항-인지질 증후군, 샤가스 병, 그레이브 병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 경피증, 다발성 경화증, 항인지질 증후군, ANCA 관련 혈관염, 굿파스쳐 질환, 가와사키병, 자가면역 용혈성 빈혈, 및 급속 진행성 사구체신염, 중쇄 질환, 원발성 또는 면역세포 관련 아밀로이드증, 및 의미불명의 단세포군 감마글로불린병증을 포함한다.

본 개시내용은 LAG3에 특이적으로 결합하는 조작된 LAG3 결합 단백질, 특히 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분 및 이의 용도를 제공한다. 항-LAG3 항체는 개선된 특성을 나타내며, 여기서 개선된 특성은 LAG3 항원에 대한 개선된 결합, LAG3 발현 세포에 대한 개선된 결합 및/또는 더 높은 수준의 사이토카인 방출 활성을 포함한다. 항-LAG3 항체는 시노몰거스 및/또는 마우스 LAG3 항원과 교차반응(결합)할 수 있다.

본 개시내용은 완전 인간 항-LAG3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 이들은 면역 체크포인트 억제제로서 작용할 수 있고, 암과 같은 장애를 치료하기 위한 면역요법에 사용될 수 있다.

일부 양태에서, 본 개시내용은 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(예를 들어, 표적 항원) 또는 LAG3 폴리펩티드의 단편에 결합하는 IgG 부류의 완전 인간 항체와 같은 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 양태에서, LAG3 표적 항원은 야생형 또는 다형성 또는 돌연변이체 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 한 양태에서, LAG3 표적 항원은 인간 LAG3 폴리펩티드(UniProtKB P18627; 서열 번호 1), 시노몰거스 원숭이 LAG3 폴리펩티드(NCBI 기탁 번호 XP 005570011.1; 서열 번호 2) 또는 마우스 LAG3 폴리펩티드(UniProtKB Q61790; 서열 번호 3) 또는 도 1에 나타낸 이들 LAG3 폴리펩티드 중 임의의 것의 단편을 포함한다. LAG3 표적 항원은 재조합 방법에 의해 제조될 수 있거나 화학적으로 합성될 수 있다. LAG3 표적 항원은 가용성 형태 또는 막-결합된 형태 (예를 들어, 세포 또는 파지에 의해 발현됨)일 수 있다. 한 양태에서, LAG3 표적 항원은 세포 표면 LAG3 항원의 세포외 부분을 포함한다. 한 양태에서, LAG3 표적 항원은 세포, 예를 들면 LAG3를 자연적으로 발현하는 암 또는 비-암 세포주에 의해 발현되거나, LAG3를 발현하도록 조작되는 세포주, 예를 들어 CHO, HeLa, HEK293, Jurkat 또는 Panoply^TM(제조원; Creative Biogene, Shirley, New York)에 의해 발현된다. LAG3을 자연적으로 발현하지 않는 세포주는 항-LAG3 항체에 결합할 것으로 예상되지 않는다. LAG3 표적 항원은 융합 단백질일 수 있거나 예를 들면 형광단과 같은 검출 가능한 모이어티와 접합될 수 있다. LAG3 표적 항원은 히스티딘 태그와 같은 친화성 태그를 갖거나 갖지 않는 재조합 폴리펩티드일 수 있다. LAG3 표적 항원은 인간, 마우스 또는 시노몰거스로부터의 비오티닐화된 LAG3 단백질일 수 있다(예를 들어, 카탈로그 Nos. LA3-H82Fb, AcroBiosystems으로부터의 비오티닐화 인간 LAG3 단백질).

한 양태에서, 야생형 및/또는 돌연변이된 인간 LAG3 항원은 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체의 결합 능력을 비교하는 검정 및/또는 에피토프 맵핑 검정에서 사용될 수 있다.

본 개시내용은 항원 결합 단백질, 예를 들어 IgG 부류의 완전 인간 항체를 제공하며, 여기서 항체는 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(표적 항원)에 결합하고, 여기서 항체는 서열 번호 4, 6 8 또는 10 또는 이의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 항-LAG3 항체는 서열 번호 5, 7, 9 또는 11 또는 이의 조합의 아미노산 서열에 대해 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 항체 1C5-3A6, 2D12-2E3-N102D, 5C8 및 8D9의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 도 2에 나타나 있다.

본 개시내용은 항원 결합 단백질, 예를 들어 IgG 부류의 완전 인간 항체를 제공하며, 여기서 항체는 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(표적 항원)에 결합하고, 여기서 항체는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.

본 개시내용은 항원 결합 단백질, 예를 들어 IgG 부류의 완전 인간 항체를 제공하며, 여기서 항체는 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(표적 항원)에 결합하며, 여기서 항체는 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 양태에서, 항-LAG3 항체는 단리된 항체이다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 재조합 항체이다.

한 양태에서, 항-LAG3 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 부류 항체를 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 IgG1 또는 IgG4 부류 항체를 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체의 힌지 영역은 잠재적인 디설파이드 결합 형성의 수를 변경하기 위해 돌연변이될 수 있다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 CPPC, CPSC, SPPC 또는 SPSC의 아미노산 서열을 갖는 힌지 영역을 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 아미노산 서열은 CPSC, SPPC 또는 SPSC가 서열 CPPC를 대체하는 힌지 영역을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체의 중쇄는 이성체화되는 것으로 알려져 있는 하나 이상의 NG 모티프를 제거하기 위해 (예를 들어, NGR 모티프의 일부로서) 돌연변이될 수 있다. 한 양태에서, 이성체화된 부위는 인테그린에 결합할 수 있다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 NGR 모티프를 대체하는 SGR 모티프를 포함하는 중쇄를 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 SGR 모티프가 NGR 모티프를 대체하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 돌연변이될 수 있고, 돌연변이된 항체는 LAG3 항원 및/또는 LAG3-발현 세포에 대해 동일하거나 유사한 결합 능력을 나타낸다.

한 양태에서, 항-LAG3 항체, 또는 이의 단편은 10^-6 M 이하, 10^-7 M 이하, 10^-8 M 이하, 10^-9 M 이하, 또는 10^-10 M 이하의 결합 친화도(K_D)로 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(표적 항원)에 결합하는 항원 결합 부분을 포함한다(도 4 참조). 한 양태에서, 항-LAG3 항체, 또는 이의 단편 사이의 결합은 표면 플라스몬 공명, 유세포 분석 및/또는 ELISA를 사용하여 검출되고 측정될 수 있다.

본 개시내용은 인간으로부터의 LAG3 폴리펩티드의 에피토프에 결합하고, 마우스, 래트, 염소, 토끼, 햄스터 및/또는 원숭이(예를 들어, 시노몰거스)와 같은 비인간 동물 중 적어도 하나로부터의 LAG3 폴리펩티드의 에피토프(예를 들어, 상동성 항원)와 결합(예를 들어, 교차반응)할 수 있는 항-LAG3 항체를 제공한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 결합 친화도 K_D로 마우스 LAG3에 결합한다. 한 양태에서, 항-LAG3 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 결합 친화도 K_D로 시노몰거스 LAG3에 결합한다.

본 개시내용은 LAG3 폴리펩티드에 결합하는 완전 인간 항체를 제공하며, 여기서 항체는 중쇄 및 경쇄 둘 다를 포함하고, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함). 항체 1C5-3A6, 2D12-2E3-N102D, 5C8 및 8D9의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 도 2에 나타나 있다.

본 개시내용은 항체 중쇄로부터의 가변 영역 및 항체 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 제공한다. 일부 양태에서, 중쇄로부터의 가변 영역의 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하고, 경쇄로부터의 가변 영역의 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다. 일부 양태에서, 중쇄로부터의 가변 영역의 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하고, 경쇄로부터의 가변 영역의 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다. 항체 1C5-3A6, 2D12-2E3-N102D, 5C8 및 8D9의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 도 2에 나타나 있다.

본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 제공하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 완전 인간 중쇄로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 제공한다. 일부 양태에서, 가변 중쇄 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하고, 가변 경쇄 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다. 일부 양태에서, 가변 중쇄 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하고, 가변 경쇄 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다.

본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 제공하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열 세트는 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함). 한 양태에서, 단일 쇄 완전 인간 항체는 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 결합하는 임의의 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 포함한다.

본 개시내용은 본원에 기술된 임의의 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 치료학적 조성물을 제공한다. 부형제는 담체 및 안정화제를 포함한다. 한 양태에서, 치료학적 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-LAG3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 본원에 기술된 개시된 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 이의 임의의 항원 결합 단편, 또는 임의의 Fab 단편 또는 단일 쇄 항체 중 어느 하나를 포함하는 키트를 제공한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산을 제공한다. 본 개시내용은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산을 제공한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산을 제공한다. 본 개시내용은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산을 제공한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산을 제공하고, 핵산은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 암호화한다.

본 개시내용은 중쇄 및 경쇄 둘 다를 포함하는 항체를 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 중쇄로부터의 가변 영역 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다. 본 개시내용은 중쇄로부터의 가변 영역 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다.

본 개시내용은 중쇄로부터의 가변 영역 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다. 본 개시내용은 중쇄로부터의 가변 영역 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제2 핵산을 제공하며, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다.

본 개시내용은 중쇄로부터의 가변 영역 및 경쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하고, 핵산은 경쇄로부터의 가변 영역을 암호화하며, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다.

본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 완전 인간 중쇄로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)을 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산을 제공한다. 일부 양태에서, 핵산은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 가변 중쇄 영역을 암호화하고, 핵산은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 가변 경쇄 영역을 암호화한다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)를 포함하고, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)을 포함한다.

본 개시내용은 완전 인간 중쇄으로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산을 제공한다. 일부 양태에서, 가변 중쇄 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하고, 가변 경쇄 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)을 포함하고, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)을 포함한다.

본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 항체인 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산을 제공하며, 여기서 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열 세트는 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함). 한 양태에서, 핵산은 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 임의의 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화한다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)을 포함하고, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)을 포함한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터), 및 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 제공한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 제공한다. 한 양태에서, 제1 벡터는 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된다.

본 개시내용은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 제공한다. 본 개시내용은 또한 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 제공한다.

본 개시내용은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 제공한다. 한 양태에서, 제1 벡터는 또한 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된다.

본 개시내용은 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함).

본 개시내용은 완전 인간 중쇄로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 제공하며, 여기서 가변 중쇄 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하고, 여기서 가변 경쇄 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)을 포함하고, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)를 포함한다.

본 개시내용은 완전 인간 중쇄로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 제공하며, 여기서 가변 중쇄 영역는 다음 아미노산 서열 세트 중 어느 것에 대해 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다: 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함). 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)을 포함하고, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)을 포함한다.

본 개시내용은 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단을 제공하며, 여기서 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 보유하고, 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 보유한다. 한 양태에서, 제1 발현 벡터는 숙주 세포 또는 숙주 세포 집단에서 중쇄 가변 영역의 발현을 지시하고, 제2 발현 벡터는 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 제1 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 제1 집단을 제공하며, 여기서 제1 숙주 세포 또는 숙주 세포의 제1 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 보유하고, 제2 숙주 세포 또는 숙주 세포의 제2 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 보유한다. 한 양태에서, 제1 발현 벡터는 제1 숙주 세포에서 중쇄 가변 영역의 발현을 지시하고, 제2 발현 벡터는 제2 숙주 세포에서 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 집단을 제공하며, 여기서 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터 개별 숙주 세포는 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 보유하고, 숙주 세포 내의 벡터는 또한 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된다. 한 양태에서, 발현 벡터는 숙주 세포에서 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 집단을 제공하며, 여기서 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터 개별 숙주 세포는 중쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 보유하고, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하다. 한 양태에서, 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 또한 경쇄로부터의 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 보유하며, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하다. 한 양태에서, 제1 발현 벡터는 중쇄 가변 영역의 발현을 지시하고, 제2 발현 벡터는 숙주 세포에서 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 제1 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 제1 집단을 제공하며, 여기서 제1 숙주 세포 또는 숙주 세포의 제1 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 중쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 보유하고, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하다. 본 개시내용은 또한 제2 숙주 세포 또는 숙주 세포의 제2 집단을 제공하며, 여기서 제2 숙주 세포 또는 숙주 세포의 제2 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 경쇄로부터 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결된 제2 벡터(예를 들어, 제2 발현 벡터)를 보유하고, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하다. 한 양태에서, 제1 발현 벡터는 제1 숙주 세포에서 중쇄 가변 영역의 발현을 지시하고, 제2 발현 벡터는 제2 숙주 세포에서 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 집단을 제공하며, 여기서 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 중쇄로부터의 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결된 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 보유하고, 여기서 중쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하고, 숙주 세포 내의 벡터는 또한 경쇄 가변 영역을 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결되며, 여기서 경쇄로부터의 가변 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일하다. 한 양태에서, 발현 벡터는 숙주 세포에서 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 집단을 제공하며, 여기서 숙주 세포 또는 숙주 세포의 집단으로부터의 개별 숙주 세포는 완전 인간 중쇄로부터의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄로부터의 가변 영역, 및 임의로 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역을 연결하는 링커(예를 들어, 펩티드 링커)를 갖는 폴리펩티드 쇄를 포함하는 단일 쇄 완전 인간 항체를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결된 제1 벡터(예를 들어, 제1 발현 벡터)를 보유하고, 여기서 가변 중쇄 영역은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함하고, 가변 경쇄 영역은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11, 또는 이들의 조합의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 포함한다. 한 양태에서, 제1 벡터는 아미노산 서열 (GGGGS)_N(서열 번호 12)를 포함하는 펩티드 링커를 암호화하는 핵산 서열을 포함하며, 여기서 N은 1 내지 6이다. 한 양태에서, 펩티드 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 13)을 포함한다. 한 양태에서, 발현 벡터는 숙주 세포에서 단일 쇄 항체의 발현을 지시한다.

본 개시내용은 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 제1 발현 벡터를 보유하는 제1 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제1 폴리펩티드를 제1 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 제2 발현 벡터를 보유하는 제2 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제2 폴리펩티드를 제2 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 제조하고, 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 발현하기에 적합하고, 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 제1 발현 벡터(제1 폴리펩티드를 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결됨) 및 제2 발현 벡터(제2 폴리펩티드를 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결됨)를 보유하는 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제1 폴리펩티드를 숙주 세포의 집단으로부터 회수하고, 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제2 폴리펩티드를 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 제1 발현 벡터를 보유하는 제1 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제1 폴리펩티드를 제1 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 제2 발현 벡터를 보유하는 제2 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제2 폴리펩티드를 제2 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 제조하고, 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 중쇄 가변 영역을 갖는 제1 폴리펩티드를 발현하기에 적합하고, 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 항체 경쇄 가변 영역을 갖는 제2 폴리펩티드를 발현하기에 적합한 조건하에서 발현 벡터(제1 폴리펩티드를 암호화하는 제1 핵산에 작동 가능하게 연결되고 제2 폴리펩티드를 암호화하는 제2 핵산에 작동 가능하게 연결됨)를 보유하는 숙주 세포의 집단(예를 들어, 복수개)을 배양하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 상기 방법은 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제1 폴리펩티드를 숙주 세포의 집단으로부터 회수하고, 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 발현된 제2 폴리펩티드를 숙주 세포의 집단으로부터 회수하는 단계를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 LAG3 과발현 또는 LAG3 이상-발현(mal-expression)과 관련된 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 완전 인간 항-LAG3 항체 중 어느 하나 또는 2 내지 3개의 임의의 조합을 포함하는 유효량의 치료학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 양태에서, 질환은 암, 종양, 자가면역 질환, 또는 바이러스 또는 병원성 바이러스 또는 병원성 박테리아 또는 병원성 진균 또는 병원성 기생충에 의해 유발되는 감염성 질환이다.

한 양태에서, 항-LAG3 항체는 종양 항원의 향상된 제시를 제공하는 사이토카인 치료(예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), 또는 이중특이 항체 요법과 같은 다른 형태의 면역요법과 병용될 수 있다(예를 들어, 참조; Holliger (1993)　Proc. Natl . Acad . Sci . USA　90:6444-6448; Poljak (1994)　Structure　2:1121-1123).

한 양태에서, 질환은 골암, 췌장암, 피부암, 두경부의 암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁 경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함한 만성 또는 급성 백혈병, 소아의 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광의 암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양 암, 편평세포암, T-세포 림프종, 환경적으로 유도된 암, 또는 석면에 의해 유도된 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 암이다 .

한 양태에서, 질환은 비-호지킨 림프종(NHL), 버킷 림프종(BL), 다발성 골수종(MM), B 만성 림프구성 백혈병(B-CLL), B 및 T 급성 림프구성 백혈병(ALL), T 세포 림프종(TCL), 급성 골수성 백혈병(AML), 털세포 백혈병(HCL), 호지킨 림프종(HL), 만성 골수성 백혈병(CML) 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종(MM), 유방암, 난소암, 두경부암, 방광암, 흑색종, 결장직장암, 췌장암, 폐암, 평활근종, 평활근육종, 신경교종, 교모세포종 및 고형 종양으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 암 또는 종양이고, 여기서 고형 종양은 유방 종양, 난소 종양, 폐 종양, 췌장 종양, 전립선 종양, 흑색종 종양, 결장직장 종양, 폐 종양, 두경부 종양, 방광 종양, 식도 종양, 간 종양 및 신장 종양으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

한 양태에서, 질환은 알츠하이머병, 알레르기, 천식, 셀리악병, 크론병, 그레이브병, 염증성 장 질환(IBD), 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 류마티스성 다발근통, 류마티스 관절염, I형 당뇨병, 또는 혈관염을 포함하는 자가면역 질환이다.

한 양태에서, 질환은 HIV, 간염(A, B, & C), 인플루엔자, 헤르페스, 편모충(Giardia), 말라리아, 리슈마니아(Leishmania), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 슈도모나스 에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기열 바이러스, 유두종 바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, JC 바이러스 및 아르보바이러스 뇌염 바이러스로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 감염성 질환이다.

한 양태에서, 질환은 HIV, 간염(A, B 또는 C), 헤르페스 바이러스(예를 들어, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, 및 CMV, 엡스타인 바 바이러스), 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기열 바이러스, 유두종 바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, JC 바이러스 및 아르보바이러스 뇌염 바이러스를 포함하는 병원성 바이러스에 의해 유발된다.

한 양태에서, 질환은 클라미디아, 리케츠 박테리아, 마이코박테리아, 포도상구균, 연쇄상 구균, 폐렴구균, 수막구균 및 임선구균, 클렙시엘라, 프로테우스, 세라티아, 슈도모나스, 레지오넬라, 디프테리아, 살모넬라, 바실러스, 콜레라, 파상풍, 보툴리누스, 탄저병, 전염병, 렙토스피라증, 또는 라임병 박테리아를 포함하는 병원성 박테리아에 의해 유발된다.

한 양태에서, 질환은 칸디다(Candida)(알비칸스(albicans), 크루세이(krusei), 글라브라타(glabrata), 트로피칼리스(tropicalis) 등), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 아스퍼길러스(Aspergillus)(푸미가투스(fumigatus), 니거(niger) 등), 무코랄레스 속(Genus　Mucorales)(뮤코르(mucor), 압시디아(absidia), 리조푸스(rhizopus)), 스포로트릭스 셴키(Sporothrix schenkii), 블라스토마이세스 데르마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 콕시디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis) 또는 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum)을 포함하는 병원성 진균에 의해 유발된다.

한 양태에서, 질환은 엔타모에바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 발란티듐 콜리(Balantidium coli), 나글레리아파울리(Naegleriafowleri), 아칸타모에바(Acanthamoeba) sp., 자르디아 람비아(Giardia lambia), 크립토스포리듐(Cryptosporidium) sp., 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 플라스모듐 비막스(Plasmodium vivax), 바베시아 마이크로티(Babesia microti), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani), 톡소플라즈마 곤디이(Toxoplasma gondii), 또는 니포스트론길러스 브라실리엔시스(Nippostrongylus brasiliensis)를 포함하는 병원성 기생충에 의해 유발된다.

실시예

하기 실시예는 예시적인 것으로 의도되고, 본 개시내용의 양태를 더 이해하는데 사용될 수 있으며, 어떤 방식으로든 본 교시의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

실시예 1: ELISA를 통한 가용성 LAG3 단백질에 대한 용량-의존적 결합:

Novartis 525 항체를 클로닝하고 인-하우스에서 생산하였다. 항-LAG3 항체(1C5-3A6, 2D12-2E3-N102D, 5C8 및 8D9) 및 경쟁자 항체(Novartis 525)를 4℃에서 밤새 1X 포스페이트 완충 염수(PBS1X)에 5μg/mL(20μL/웰)에서 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA) 플레이트 상에 코팅하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T(0.05% Tween 20으로 보충된 PBS1X)로 3회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 PBS 중의 100μL/웰의 차단제 카제인(Thermo Fisher, 카탈로그 번호 37528)으로 실온(RT)에서 1시간 동안 차단하였다. 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척한 후, 정제된 인간 LAG3 His-tag 단백질(Sino Biological; 카탈로그 번호 16498-H08H)을 웰 내로 연속 희석시키고(최고 농도 10μg/mL; 희석 1:3) 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척하였으며, 결합은 50μL/웰의 SureBlue^TM TMB-1 성분 마이크로웰 퍼옥시다제 기질(SeraCare; 카탈로그 번호 5120-0075)을 적용함으로써 밝혀졌다. 신호는 25μL/웰의 0.16M 황산(H₂SO₄) 정지 용액을 사용하여 정지시켰으며 450nM에서 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 결과는 도 3에 나타나 있다.

실시예 2: 표면 플라스몬 공명( Biacore )을 사용한 결합 친화도 측정.

항-LAG3 항체(1C5-3A6, 2D12-2E3-N102D, 5C8 및 8D9) 및 경쟁자 항체(Novartis 525)의 결합 동역학을 표면 플라스몬 공명(SPR)을 사용하여 측정하였다. 항-인간 단편 결정화 가능 영역(Fc 영역) 항체를 표준 N-하이드록시숙신이미드/N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드(NHS/EDC) 커플링 방법을 사용하여 CM5 센서 칩 상에 대략 8,000 RU로 고정하였다. 항체(2μg/mL)를 10μL/분의 유량으로 60초 동안 포획하였다. 재조합 인간 LAG3-His(Sino Biological; 카탈로그 번호 16498-H08H)를 0.01M HEPES pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20(HBS EP⁺)의 실행 완충액에서 연속 희석하였다. 모든 측정은 30μL/분의 유량으로 HBS-EP⁺ 완충액에서 수행하였다. 1:1 (Langmuir) 결합 모델을 사용하여 데이터를 피팅하였다. 모든 BIACORE 분석은 실온에서 수행하였다. 결과는 도 4에 나타나 있다. 측정된 K_D는 하기 표 1에 열거되어 있다.

표 1: 측정된 K _D 값

실시예 3: 시노몰거스 및 마우스 LAG3 항원과의 교차-반응성

인간, 마우스 또는 시노몰거스 LAG3-His 태그 재조합 단백질을 4℃에서 밤새 2μg/mL로 Ni-NTA ELISA 플레이트(Qiagen, 카탈로그 번호 35061) 상에 50μL/웰의 1X 포스페이트 완충 식염수(PBS1X)에서 코팅하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T(0.05% Tween 20으로 보충된 PBS1X)로 3회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS 중의 100μL/웰의 차단제 카제인(Thermo Fisher, 카탈로그 번호 37528)으로 차단하였다. 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척한 후, 정제된 항체를 실온에서 1.5시간 동안 PBS-T(50μL/웰) 중 2μg/mL로 배양하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척하고, HRP-접합된 염소 항-인간 Fc 이차 항체(Sera Care; 카탈로그 번호 5220-0279)를 실온에서 1시간 동안 50μL/웰로 1:5,000 희석에서 배양하였다. 이어서, 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척하였으며, 결합은 50μL/웰의 SureBlue^TM TMB-1 성분 마이크로웰 퍼옥시다제 기질(SeraCare; 카탈로그 번호 5120-0075)을 적용함으로써 밝혀졌다. 신호는 25μL/웰의 0.16M 황산(H₂SO₄) 정지 용액을 사용하여 정지시켰으며 450nM에서 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 결과는 도 5에 나타나 있다.

실시예 4: LAG3 -발현 세포에 대한 결합

인간 LAG3/NFAT-Luc 리포터 Jurkat 세포주(BPS Biosciences; 카탈로그 번호 71278)를 1mg/mL G418 및 200μg/mL 하이그로마이신 B로 보충된 완전 RPMI(RPMI 1640+10% FCS + Pen/Strep)에서 배양하였다. 야생형(WT) Jurkat 세포를 완전 RPMI에서 배양하였다.

세포를 V-바닥 96-웰 플레이트에서 80,000개 세포/웰에 플레이팅하고, 170μL/웰의 FACS 완충액(PBS 1X + 2% FCS/FBS + 0.1% 나트륨 아지드)을 사용하여 2회 세척하였다. 항-LAG3 및 이소타입 대조군 항체를 다양한 농도(10 내지 0.003μg/mL 범위, 희석 1:5)로 FACS 완충액에 희석하고, 4℃에서 20분 동안 100μL/웰의 인간 LAG3 또는 WT Jurkat 세포와 함께 배양하였다. 170μL/웰의 FACS 완충액으로 2회 세척한 후, 세포를 100μl/웰의 AF647-접합된 염소 항-인간 IgG 이차 항체(Southern Biotech; 카탈로그 번호 2040-31, lot. K471X873C; FACS 완충액 중 희석 1:2,000)와 함께 4℃에서 20분 동안 배양하였다. 세포를 2회 세척하고, 140μL/웰의 FACS 완충액에 재현탁시키고, Attune NxT 상에서 유세포 분석기에 의해 획득하였다. 데이터를 FlowJo v10을 사용하여 분석하였다. △MFI는 [(LAG3-발현 Jurkat의 기하 평균) - (WT Jurkat의 기하 평균)]으로서 계산하였다. 결과는 도 6에 나타나 있다.

실시예 5: SEB -활성화된 시노몰거스 PBMC에 대한 특이 결합.

SEB 활성화: 신선한 시노몰거스 원숭이 말초 혈액 단핵 세포(cyno-PBMC)를 단리하고 Toxin Technology, Inc.(카탈로그 번호 122, 로트 1224171)로부터의 300ng/mL의 스타필로코커스 엔테로톡신 B(SEB)를 갖거나 갖지 않는 200U/mL의 재조합 인간 IL-2(Miltenyi Biotec; 카탈로그 번호 130-097-748)를 함유하는 200μL의 완전 RPMI(RPMI 1640+10% FCS + Pen/Strep))에서 U-바닥 플레이트에서 2.0E+05 세포/웰로 플레이팅하였다. cyno-PBMC를 37℃, 5% CO₂의 조직 배양 배양기에서 4일 동안 배양하였다.

결합 분석: 넷째 날에, 나이브 활성화된 cyno-PBMC를 170μL/웰의 FACS 완충액(PBS 1X + 2% FCS/FBS + 0.1% 나트륨 아지드)을 사용하여 2회 세척하고, 80,000개 세포에서 V-바닥 96-웰 플레이트로 옮겼다. 항-LAG3 및 이소타입 대조군 항체를 다양한 농도(10 내지 0.016μg/mL 정도, 희석 1:5)로 FACS 완충액에 희석하고, 4℃에서 20분 동안 100μL/웰의 나이브 활성화된 cyno-PBMC와 함께 배양하였다. 170μL/웰의 FACS 완충액으로 2회 세척한 후, 세포를 100μL/웰의 AF647-접합된 염소 항-인간 IgG 이차 항체(Southern Biotech; 카탈로그 번호 2040-31, lot. K471X873C; FACS 완충액 중 희석 1:2,000)와 함께 4℃에서 20분 동안 배양하였다. 세포를 2회 세척하고, 150μL/웰의 FACS 완충액에 재현탁시키고, Attune NxT상에서 유세포 분석기에 의해 획득하였다. 데이터를 FlowJo v10을 사용하여 분석하였다.

△MFI는 [(SEB 활성화된 cyno-PBMC의 기하 평균) - (나이브 cyno-PBMC의 기하 평균)]으로서 계산하였다. 도 7a를 참조한다.

△LAG3⁺ 세포는 [(SEB 활성화된 cyno-PBMC의 % LAG3⁺ 세포) - (나이브 cyno-PBMC의 % LAG3⁺ 세포)]으로서 계산하였다. 도 7b를 참조한다.

실시예 6: 리포터 분석에서 항- LAG3 항체의 기능적 활성 검출.

분석 원리; Raji 및 LAG3/NFAT 리포터 Jurkat 세포가 수퍼항원(예를 들어, 스타필로코커스 엔테로톡신 E)의 존재하에 공동-배양될 때, 수퍼항원은 이펙터 세포(리포터 Jurkat) 상의 TCR 복합체 및 표적 세포(Raji) 상의 MHC 클래스 II를 가교결합시켜, TCR 활성화 및 NFAT 루시퍼라제 신호를 초래한다.

LAG3 및 MHC 클래스 II 상호작용은 이러한 가교결합을 방지하고 TCR 활성화 및 NFAT 루시퍼라제 신호를 억제한다.

항-LAG-3 항체의 존재하에서: LAG3과 MHC-II 사이의 상호작용은 차단되고, 이펙터 세포 상의 수퍼항원 및 NFAT-루시퍼라제 신호에 의한 T 세포 활성화를 촉진한다.

인간 LAG3/NFAT-Luc 리포터 Jurkat 세포주(BPS Biosciences; 카탈로그 번호 71278)를 1mg/mL G418 및 200μg/mL 하이그로마이신 B로 보충된 완전 RPMI (RPMI 1640+10% FCS + Pen/Strep)에서 배양하였다. RAJI 세포(ATCC; 카탈로그 번호 CCL-86)을 완전 RPMI에서 배양하였다.

LAG3 -발현 세포의 제조: 인간 LAG3/NFAT-Luc 리포터 Jurkat 세포(40,000개 세포/웰)를 완전 RPMI에서 96-웰 백색 투명-바닥 분석 플레이트(Costar; 카탈로그 번호 3610)에 플레이팅하고, 10, 1 또는 0.1μg/mL(최종 농도)의 항-LAG3 또는 이소타입 대조군 항체(최종 용적 60μL/웰)와 함께 예비-배양하였다. 예비-배양 동안, 세포를 37℃, 5% CO₂의 조직 배양 배양기에서 30분 동안 유지시켰다.

항원-제시 세포 - RAJI 세포의 제조: RAJI 세포를 Toxin Technology, Inc.(카탈로그 번호 ET404)로부터의 0.1ng/mL의 스타필로코커스 엔테로톡신 E(SEE)를 함유하는 완전 RPMI에서 0.75E+06 세포/mL로 재현탁시켰다. 예비-배양 동안, 세포를 37℃, 5% CO₂의 조직 배양 배양기에서 30분 동안 유지시켰다.

분석 개시 및 판독: SEE-활성화된 RAJI 세포를 혼합하고, 40μL를 예비-배양된 인간 LAG3/NFAT-Luc 리포터 Jurkat 세포(총 용적 100μL/웰)를 함유하는 웰에 직접 옮겼다. 96-웰 백색 투명-바닥 분석 플레이트를 37℃, 5% CO₂의 조직 배양 배양기에서 5 내지 6시간 동안 배양하였다. 루시퍼라아제 신호는 100μL/웰의 ONE-step 루시퍼라제 분석 시스템(BPS Biosciences; 카탈로그 번호 60690-1)을 적용함으로써 밝혀졌다. 플레이트를 실온에서 15분 동안 천천히 교반하에 두었다. 신호는 Spark^® TECAN 판독기를 사용하여 측정하였다. 데이터는 다른 웰의 발광 판독치로부터 평균 배경 발광(무세포 대조군 웰)을 공제함으로써 분석하였다. NFAT 루시퍼라아제 리포터 발현의 배수 유도(fold induction)는 [(잘 처리된 항체의 배경-공제된 발광)/(비처리된 대조군 웰의 평균 배경-공제된 발광)]로서 계산하였다. 리포터 분석은 두 번 실시하였고, 결과는 도 8a 및 b에 나타나 있다.

실시예 7: 에피토프 맵핑

정제된 항-LAG3 단클론 항체를 4℃에서 밤새 5μg/mL로 ELISA Maxisorp^TM 평저 플레이트 상에 50μL/웰의 1X 포스페이트 완충 염수(PBS1X)에서 코팅하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T(0.05% Tween 20으로 보충된 PBS1X)로 3회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS 중의 100μL/웰의 차단제 카제인(Thermo Fisher, 카탈로그 번호 37528)으로 차단하였다. 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척한 후, 재조합 인간 LAG3-Fc 태그 단백질(Sino Biological; 카탈로그 번호 16498-H05H)을 실온에서 1.5시간 동안 PBS-T(50μL/웰) 중 2μg/mL에서 배양하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척하고, 비오티닐화 항-LAG3 Novartis 525 항체 클론(NVS525-비오틴을 인-하우스 클로닝, 생산 및 비오티닐화하였음)을 실온에서 1시간 동안 PBS-T 중의 5μg/mL(50μL/웰)에서 배양하였다. PBS-T에서 3회 세척 후, 스트렙타비딘-HRP 분자(Thermo Fisher; 카탈로그 번호 N100)를 PBS-T에 1:5,000으로 희석하고, 실온에서 30분 동안 50μL/웰에서 배양하고, 결합된 NVS525-비오틴을 검출하는데 사용하였다. 플레이트를 250μL/웰의 PBS-T로 3회 세척한 후, 결합은 50μL/웰의 SureBlue^TM TMB-1 성분 마이크로웰 퍼옥시다제 기질(SeraCare; 카탈로그 번호 5120-0075)을 적용함으로써 밝혀졌다. 신호는 25μL/웰의 0.16M 황산(H₂SO₄) 정지 용액을 사용하여 정지시켰으며 450nM에서 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 결과는 도 9에 나타나 있다.

실시예 8: 사이토카인 방출 분석

(두 가지 상이한 공여자로부터의) 신선한 PBMC를 단리하고, 재조합 hIL-2(1,000U/mL)로 보충된 완전 RPMI(RPMI 1640+10% FCS + Pen/Strep)에서 2.0E+06 세포/mL로 희석하였다. 세포를 U-바닥 플레이트(100μL/웰)에서 2.0E+05 세포/웰로 플레이팅하였다. 그후, 항-LAG-3 또는 이소타입 대조군 항체 클론을 100ng/mL 최종 농도(둘 다 2X 농도에서 50μL의 SEB와 혼합된 50μL의 항체 제제)에서 SEB(스타필로코커스 엔테로톡신 B, List Biological laboratories; 카탈로그 번호 122)를 함유하는 완전 RPMI에서 10, 1 및 0.1μg/mL(최종 농도)로 희석하였다. 플레이트를 4일 동안 37℃ 배양기에 넣었다. 넷째 날에, 세포 및 상청액을 V-바닥 플레이트로 옮기고 5분 동안 1,400rpm로 회전시켰다. 상청액을 V-바닥 96 웰 플레이트로 옮기고 사이토카인 함량(IFN 또는 다른 전염증성 사이토카인)을 분석할 때까지 -80℃에서 동결시켰다.

사이토카인(들) 검출: Meso Scale Discovery(MSD)로부터의 전염증 패널 1(인간) 키트를 제조업체 권장 사항에 따라 사용하였다(카탈로그 번호. K15049D). 간략하게 말해서, 분석 샘플을 실온에서 해동시켰다. 그 동안, 사이토카인(들) 표준은 에펜도르프^TM 튜브에서 희석제 2(카탈로그 번호. R51BB-3; 로트 M0020102)를 사용하여 캘리브레이터 1의 연속 희석을 수행함으로써 제조하였다. 그후, 분석 샘플을 희석제 2를 사용하여 96-웰 초저 부착 플레이트(Corning; 카탈로그 번호 7007; 로트 18219008)에서 희석하였다(표준 곡선 범위 내의 다수의 샘플을 얻기 위해 통상적으로 1:200 내지 1:2,000 범위의 최종 희석이 필요하다).

그후, MSD 96-웰 플레이트를 개봉하고, 300μl/웰의 KPL 완충액(Sera Care, 카탈로그 번호 5150-0008; lot. 10430811)으로 3회 세척하였다. 각각의 희석된 샘플 및 캘리브레이터를 이전에 준비된 플레이트 레이아웃에 따라 50μL/웰(기포 방지)로 MSD 플레이트에 옮겼다. 플레이트를 접착 플레이트 씰(VWR; 카탈로그 번호 60941-120)을 사용하여 밀봉하고, 느린 교반하에서 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 플레이트를 300μl/웰의 KPL 완충액으로 3회 세척하고, 희석제 3(희석 1:50)에서 제조된 SULFO-Tag 검출 항체를 25μl/웰로 적용하였다. 플레이트를 밀봉하고, 암흑에서 느린 교반하에 2시간 동안 실온에서 배양하였다. 이어서, 플레이트를 300μl/웰의 KPL 완충액으로 3회 세척하였다. 신호는 150μl의 2X 판독 완충액을 첨가함으로써 밝혀졌으며 MSD 계기 상에서 검출되었다(Meso Sector S600; 모델 1201). 결과는 도 10a 및 b에 나타나 있다.

SEQUENCE LISTING <110> SORRENTO THERAPEUTICS, INC. <120> ENGINEERED ANTIBODIES THAT BIND LAG3 <130> 01223-0075-00PCT <150> US 63/004,798 <151> 2020-04-03 <160> 13 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 525 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp 1 5 10 15 Val Ala Pro Val Lys Pro Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val 20 25 30 Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile 35 40 45 Pro Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln 50 55 60 His Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu 65 70 75 80 Ala Pro Gly Pro His Pro Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro 85 90 95 Arg Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly 100 105 110 Arg Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln 115 120 125 Arg Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala 130 135 140 Gly Glu Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys 145 150 155 160 Arg Leu Arg Leu Arg Leu Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro 165 170 175 Gly Ser Leu Arg Ala Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser 180 185 190 Arg Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln 195 200 205 Gly Arg Val Pro Val Arg Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser 210 215 220 Phe Leu Phe Leu Pro Gln Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly 225 230 235 240 Cys Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn 245 250 255 Leu Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala 260 265 270 Gly Ala Gly Ser Arg Val Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val 275 280 285 Gly Thr Arg Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Pro Asp Leu Leu Val Thr Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu 305 310 315 320 Glu Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His 325 330 335 Leu Gln Glu Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr 340 345 350 Val Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu 355 360 365 Cys Glu Val Thr Pro Val Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser 370 375 380 Leu Asp Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala 385 390 395 400 Gln Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser 420 425 430 Pro Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Pro Ala Gly 435 440 445 His Leu Leu Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Ser Leu Leu Leu Leu 450 455 460 Val Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro 465 470 475 480 Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln 485 490 495 Ser Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro 500 505 510 Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Gln Leu 515 520 525 <210> 2 <211> 532 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <221> misc_feature <222> (73)..(73) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 2 Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp 1 5 10 15 Val Ala Pro Val Lys Pro Pro Gln Pro Gly Ala Glu Ile Ser Trp Trp 20 25 30 Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile Pro 35 40 45 Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln His 50 55 60 Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Xaa Ala Pro Gly His Pro Pro Val 65 70 75 80 Pro Gly His Arg Pro Ala Ala Pro Tyr Ser Trp Gly Pro Arg Pro Arg 85 90 95 Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly Arg 100 105 110 Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln Arg 115 120 125 Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala Gly 130 135 140 Glu Tyr Arg Ala Thr Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys Arg 145 150 155 160 Leu Arg Leu Arg Val Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro Gly 165 170 175 Ser Leu Arg Thr Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser Arg 180 185 190 Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Ser Arg Gly Gln Gly 195 200 205 Arg Val Pro Val Gln Gly Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser Phe 210 215 220 Leu Phe Leu Pro His Val Gly Pro Met Asp Ser Gly Leu Trp Gly Cys 225 230 235 240 Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn Leu 245 250 255 Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Ala Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala Gly 260 265 270 Ala Gly Ser Arg Val Glu Leu Pro Cys Arg Leu Pro Pro Ala Val Gly 275 280 285 Thr Gln Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Ala Pro Pro Gly Gly Gly Pro 290 295 300 Asp Leu Leu Val Ala Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu Glu 305 310 315 320 Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Ile Cys His Ile Arg Leu 325 330 335 Gln Gly Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr Val 340 345 350 Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu Cys 355 360 365 Glu Val Thr Pro Ala Ser Gly Gln Glu His Phe Val Trp Ser Pro Leu 370 375 380 Asn Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala Gln 385 390 395 400 Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu His Gln Gly 405 410 415 Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser Pro 420 425 430 Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Arg Ala Gly His 435 440 445 Leu Pro Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Phe Leu Leu Leu Leu Val 450 455 460 Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro Arg 465 470 475 480 Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln Ser 485 490 495 Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Leu Glu Pro Glu Pro Glu 500 505 510 Leu Glu Arg Glu Leu Gly Pro Glu Pro Glu Pro Gly Pro Glu Pro Glu 515 520 525 Pro Glu Gln Leu 530 <210> 3 <211> 521 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Met Arg Glu Asp Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Leu Gly Leu Leu Trp 1 5 10 15 Glu Ala Pro Val Val Ser Ser Gly Pro Gly Lys Glu Leu Pro Val Val 20 25 30 Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Val His Leu Pro Cys Ser Leu Lys Ser 35 40 45 Pro Asn Leu Asp Pro Asn Phe Leu Arg Arg Gly Gly Val Ile Trp Gln 50 55 60 His Gln Pro Asp Ser Gly Gln Pro Thr Pro Ile Pro Ala Leu Asp Leu 65 70 75 80 His Gln Gly Met Pro Ser Pro Arg Gln Pro Ala Pro Gly Arg Tyr Thr 85 90 95 Val Leu Ser Val Ala Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly Arg Gln Pro Leu 100 105 110 His Pro His Val Gln Leu Glu Glu Arg Gly Leu Gln Arg Gly Asp Phe 115 120 125 Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Leu Arg Thr Asp Ala Gly Glu Tyr His 130 135 140 Ala Thr Val Arg Leu Pro Asn Arg Ala Leu Ser Cys Ser Leu Arg Leu 145 150 155 160 Arg Val Gly Gln Ala Ser Met Ile Ala Ser Pro Ser Gly Val Leu Lys 165 170 175 Leu Ser Asp Trp Val Leu Leu Asn Cys Ser Phe Ser Arg Pro Asp Arg 180 185 190 Pro Val Ser Val His Trp Phe Gln Gly Gln Asn Arg Val Pro Val Tyr 195 200 205 Asn Ser Pro Arg His Phe Leu Ala Glu Thr Phe Leu Leu Leu Pro Gln 210 215 220 Val Ser Pro Leu Asp Ser Gly Thr Trp Gly Cys Val Leu Thr Tyr Arg 225 230 235 240 Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Thr Tyr Asn Leu Lys Val Leu Gly Leu 245 250 255 Glu Pro Val Ala Pro Leu Thr Val Tyr Ala Ala Glu Gly Ser Arg Val 260 265 270 Glu Leu Pro Cys His Leu Pro Pro Gly Val Gly Thr Pro Ser Leu Leu 275 280 285 Ile Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly Pro Glu Leu Pro Val Ala 290 295 300 Gly Lys Ser Gly Asn Phe Thr Leu His Leu Glu Ala Val Gly Leu Ala 305 310 315 320 Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys Ser Ile His Leu Gln Gly Gln Gln Leu 325 330 335 Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Val Ile Thr Val Thr Pro Lys Ser Phe 340 345 350 Gly Leu Pro Gly Ser Arg Gly Lys Leu Leu Cys Glu Val Thr Pro Ala 355 360 365 Ser Gly Lys Glu Arg Phe Val Trp Arg Pro Leu Asn Asn Leu Ser Arg 370 375 380 Ser Cys Pro Gly Pro Val Leu Glu Ile Gln Glu Ala Arg Leu Leu Ala 385 390 395 400 Glu Arg Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Glu Gly Gln Arg Leu Leu Gly Ala 405 410 415 Thr Val Tyr Ala Ala Glu Ser Ser Ser Gly Ala His Ser Ala Arg Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Asp Leu Lys Gly Gly His Leu Val Leu Val Leu Ile Leu 435 440 445 Gly Ala Leu Ser Leu Phe Leu Leu Val Ala Gly Ala Phe Gly Phe His 450 455 460 Trp Trp Arg Lys Gln Leu Leu Leu Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu His 465 470 475 480 Gly Ile Gln Pro Phe Pro Ala Gln Arg Lys Ile Glu Glu Leu Glu Arg 485 490 495 Glu Leu Glu Thr Glu Met Gly Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro 500 505 510 Gln Leu Glu Pro Glu Pro Arg Gln Leu 515 520 <210> 4 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 1C5-3A6: Heavy chain variable region <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Glu Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Trp Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Trp Ser Asn Asp Trp Tyr Val Gly Tyr Tyr Phe Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 1C5-3A6: Light chain variable region <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Glu Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Thr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Thr Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr Asp Asp Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 6 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 2D12-2E3-N102D: Heavy chain variable region <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Asp Gly Met Ser Asp Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Trp Asn Ser Gly Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Ile Leu Asp Tyr Ser Trp Met Ser Val Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 2D12-2E3-N102D: Light chain variable region <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Val Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Thr Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 5C8: Heavy chain variable region <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ser Gly Tyr Asp Phe Glu Asp Trp Phe Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 5C8: Light chain variable region <400> 9 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 10 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 8D9: Heavy chain variable region <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Leu Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ala Ile Ile Pro Glu Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Asp Ser Thr Thr Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Met Trp Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Ile Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-LAG3 antibody 8D9: Light chain variable region <400> 11 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asp Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr His Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Phe Ser Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Gly Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 12 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Peptide linker <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> Repeat sequence (GGGGS)N where N is 1-6. <400> 12 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 30 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Exemplary peptide linker <400> 13 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15

Claims (41)

1. 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하고; 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 완전 인간 항-LAG3 항체.
2. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 LAG3-결합 단백질로서, 상기 중쇄 가변 영역이 서열 번호 4, 6, 8 또는 10에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역이 서열 번호 5, 7, 9 또는 11에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는, LAG3-결합 단백질.
3. 제2항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역이 서열 번호 4에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 상기 경쇄 가변 영역이 서열 번호 5에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역이 서열 번호 6에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 상기 경쇄 가변 영역이 서열 번호 7에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역이 서열 번호 8에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 상기 경쇄 가변 영역이 서열 번호 9에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역이 서열 번호 10에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고 상기 경쇄 가변 영역이 서열 번호 11에 존재하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는, LAG3-결합 단백질.
4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 항체 또는 항체 단편인 LAG3-결합 단백질.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역 서열 및 상기 경쇄 가변 영역 서열이 서열 번호 4 및 5(본원에는 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에는 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에는 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에는 8D9라고 함)을 포함하는, 완전 인간 항-LAG3 항체 또는 LAG3-결합 단백질.
6. 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체로서, 상기 중쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 상기 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는, Fab 완전 인간 항-LAG3 항체.
7. 제6항에 있어서, 상기 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 상기 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함)을 포함하는, Fab 완전 인간 항-LAG3 항체.
8. 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 포함하는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체로서, 상기 중쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 상기 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 5, 7, 9 또는 11의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체.
9. 제2항 내지 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 상기 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 펩티드 링커로 함께 연결되는, LAG3-결합 단백질 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체.
10. 제8항에 있어서, 상기 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 상기 경쇄로부터의 가변 도메인 영역이 서열 번호 4 및 5(본원에서 1C5-3A6이라고 함), 서열 번호 6 및 7(본원에서 2D12-2E3-N102D라고 함), 서열 번호 8 및 9(본원에서 5C8이라고 함), 또는 서열 번호 10 및 11(본원에서 8D9라고 함)을 포함하는, 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 10^-8 M 이하의 K_D로 인간 LAG3에 결합하는, LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체.
12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 10^-6 M 이하의 K_D로 시노몰거스 LAG3에 결합하는, LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, IgG4 부류 항체를 포함하는, LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체.
14. 약제학적으로 허용되는 부형제 및 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 약제학적 조성물.
15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질, Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체, 또는 완전 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 키트.
16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산.
17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질 또는 완전 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산.
18. (a)(i) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 완전 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 완전 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역; 또는 (b) 제2항 내지 제5항, 제9항 또는 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질을 암호화하는 핵산.
19. 제16항의 핵산을 포함하는 벡터.
20. 제17항의 핵산을 포함하는 벡터.
21. 제18항의 핵산을 포함하는 벡터.
22. 제19항의 벡터를 보유하는 숙주 세포.
23. 제22항에 있어서, 상기 벡터가 발현 벡터를 포함하고, 상기 숙주 세포가 상기 중쇄 가변 영역을 발현하는, 숙주 세포.
24. 제20항의 벡터를 보유하는 숙주 세포.
25. 제24항에 있어서, 상기 벡터가 발현 벡터를 포함하고, 상기 숙주 세포가 상기 경쇄 가변 영역을 발현하는, 숙주 세포.
26. 제19항의 벡터를 포함하는 제1 벡터 및 제20항의 벡터를 포함하는 제2 벡터를 보유하는 숙주 세포.
27. 제26항에 있어서, 상기 제1 벡터가 제1 발현 벡터를 포함하고, 상기 제2 벡터가 제2 발현 벡터를 포함하며, 상기 숙주 세포가 상기 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현하는, 숙주 세포.
28. 제21항의 벡터를 보유하는 숙주 세포.
29. 제28항에 있어서, 상기 벡터가 발현 벡터를 포함하고, 상기 숙주 세포가 상기 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현하는, 숙주 세포.
30. 제23항의 숙주 세포의 집단을 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, LAG3-결합 단백질, 또는 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 제조하는 방법.
31. 제30항에 있어서, 상기 발현된 LAG3-결합 단백질, 또는 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역을 상기 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 방법.
32. 제25항의 숙주 세포의 집단을 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법.
33. 제32항에 있어서, 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 상기 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 방법.
34. 제27항의 숙주 세포의 집단을 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법.
35. 제34항에 있어서, (i) 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 상기 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 방법.
36. 제29항의 숙주 세포의 집단을 (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 발현하기에 적합한 조건하에서 배양함을 포함하여, (i) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 경쇄 가변 영역을 제조하는 방법.
37. 제36항에 있어서, (i) 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 상기 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 Fab 완전 인간 항-LAG3 항체, 또는 상기 단일 쇄 인간 항-LAG3 항체의 발현된 경쇄 가변 영역을 상기 숙주 세포로부터 회수함을 추가로 포함하는, 방법.
38. 대상체에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체를 포함하는 치료학적 조성물의 유효량을 투여함을 포함하여, LAG3 과발현과 관련된 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법.
39. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, LAG3 과발현과 관련된 질환을 치료하는데 사용하기 위한 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체.
40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 상기 질환이 골암, 췌장암, 피부암, 두경부의 암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함한 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양 암, 편평세포암, T-세포 림프종, 환경적으로 유도된 암, 또는 석면에 의해 유도된 암인, 방법 또는 치료를 위해 사용하기 위한 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체.
41. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 제38항의 방법에 사용하기 위한 LAG3-결합 단백질 또는 인간 항-LAG3 항체.

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