TW202305001A - 結合ror1之抗原結合蛋白 - Google Patents

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露西 呂
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Abstract

本發明提供特異性結合ROR1之ROR1結合蛋白，特定言之抗ROR1抗體，或其抗原結合部分，及其用途。該等抗ROR1抗體之多種態樣係關於抗體片段、單鏈抗體、醫藥組合物、核酸、重組表現載體、宿主細胞、及製備及使用此類抗ROR1抗體之方法。使用該等抗ROR1抗體之方法包括用於結合ROR1、偵測ROR1及治療與ROR1表現相關之疾病的活體外及活體內方法。

Description

結合ROR1之抗原結合蛋白
本發明提供特異性結合於ROR1之抗原結合蛋白及編碼該等抗原結合蛋白之核酸、包含該等核酸之載體、含有該等載體之宿主細胞及使用其之方法。
受體酪胺酸激酶樣孤兒受體(ROR)屬於受體酪胺酸激酶之極保守家族，其由兩個家族成員ROR1及ROR2組成，該等家族成員係I型跨膜受體酪胺酸激酶。ROR家族之成員係含有三個相異的胞外域，Ig、三環(Kringle)及捲曲(Frizzled)域之I型跨膜蛋白，跟隨有跨膜區，及胞內部分。在該胞內部分內，ROR1具有酪胺酸激酶域、兩個富含絲胺酸/蘇胺酸的域及富含脯胺酸的域。
受體酪胺酸激酶(RTK)在致癌性轉型、生長及轉移瘤中起重要作用。RTK調節細胞分化、增殖、遷移、血管生成及存活。
此家族之細胞功能係調節細胞遷移、平面細胞極性(PCP)及頂-底細胞極性，及發育過程中之軸突生長，包括骨骼及神經元發育。Wnt5a，癌形成中關鍵的一種醣蛋白，已鑑別為藉由結合及活化ROR1及ROR2來調節此等功能(Nishita等人, 2010, Trends Cell Biol., 20(6), 346-54)。Wnt5a結合ROR2及其輔受體捲曲域(Frizzled domain)，能夠活化INK路徑及細絲蛋白A以調節細胞遷移及侵襲，引起Rac1及Rho A調節細胞極性，且誘使Src家族成員調控諸如MMP 1、2、13之基質金屬蛋白酶的表現，且抑制典型Wnt路徑。
ROR1在與Wnt5a共表現時藉由NF-kB促進細胞增殖(Fukuda等人, 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 105(8):3047-52)。功能資料表明ROR1可在非典型WNT傳訊中起作用以促進惡性細胞之存活。
受體酪胺酸激酶孤兒受體1及2 (ROR1及ROR2)已描述為特異性地與特定癌症相關(Rebagay等人, 2012, Front Oncol., 2(34))，而在健康組織上基本不存在表現，極少例外(Balakrishnan等人, 2017, Clin. Cancer Res., 23(12), 3061-3071)。歸因於ROR家族成員之此腫瘤選擇性表現，其代表靶向癌症療法之相關目標。
ROR1在B細胞慢性淋巴球性白血病(CLL)及套細胞淋巴瘤(MCL)中異常表現。受體酪胺酸激酶孤兒受體1(ROR1)展現與慢性淋巴球性白血病(CLL)幾乎100%相關聯(Cui等人, 2016, Blood, 128(25), 2931)，且其亦在某些實體腫瘤中表現，例如肺及乳房之腫瘤(Balakrishnan等人, 2017, Clin. Cancer Res., 23(12), 3061-3071)。另外，ROR1已確立為一些急性淋巴母細胞白血病(ALL)、套細胞淋巴瘤及一些其他血液惡性病的標記物。ROR1與多種實體腫瘤之進展密切相關，諸如在神經母細胞瘤、肉瘤、腎細胞癌、乳癌、肺癌、大腸癌、頭頸癌、黑素瘤及其他癌症中。ROR1已展示抑制細胞凋亡、強化EGFR傳訊、誘發上皮間質轉化(EMT)及促成胞膜窖形成。
重要地，ROR1在胚組織中大體可偵測且在成年組織中一般不存在，使得該蛋白成為癌症療法之理想藥物目標。因此，ROR1先前已辨識為一種目標用於ROR1特異性抗體之發展。然而，歸因於不同哺乳物種之間ROR1之高同源性，在人類與食蟹獼猴之間胺基酸水準100%保守、在人類與小鼠之間96.7%同源及在人類與兔之間96.3%同源，很難藉由例如動物免疫之標準技術培育針對此目標之高親和力抗體。
歸因於可獲得的ROR1特定單株抗體的低數量，在此項技術中需要具有較高親和力或已知抗體純系不具有的其他功能特性的較好的抗ROR1抗體。
因此，ROR1係抗體靶向之有吸引力的抗原。本發明提供特異性結合ROR1之ROR1結合蛋白，特定言之抗ROR1抗體或其抗原結合部分，及其用途。
在一個態樣中，本文提供一種抗ROR1抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含重鏈互補決定區1 (CDR1)重鏈CDR2及重鏈CDR3，且該輕鏈可變區包含輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；且 (a)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 12胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列； (b)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列； (c)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 35之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(d)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(e)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；在實施例中，重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性，且輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。
在一態樣中，本文提供一種抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性，且輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。
在一態樣中，本文提供一種抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中重鏈可變區及輕鏈可變區分別包含SEQ ID NO: 10及11之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-s10)、分別包含SEQ ID NO: 20及21之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-jlv1011)、分別包含SEQ ID NO: 30及31之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-O11)、分別包含SEQ ID NO: 40及41之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6A-a7gm)或分別包含SEQ ID NO: 40及51之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6A-a8gm)。
在實施例中，抗原結合片段包括Fab片段。在實施例中，抗原結合片段包括單鏈抗體，其中重鏈可變域及輕鏈可變域經由肽連接子連接在一起。在實施例中，所揭示之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段中之任一者包括IgG抗體，該IgG抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類別抗體。在實施例中，所揭示之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段中之任一者包括IgG1或IgG4抗體。在實施例中，所揭示之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段中之任一者包括IgG1抗體。在實施例中，所揭示之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段中之任一者以10 -7M或更小之K D結合人類ROR1蛋白。
在一態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包括所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者及醫藥學上可接受之賦形劑。
在一態樣中，本文提供一種套組，其包括所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者及醫藥學上可接受之賦形劑。
在一態樣中，本文提供一種核酸，其編碼所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者的重鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種核酸，其編碼所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者的輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種核酸，其編碼 (i)所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者的重鏈可變區，及 (ii)所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者的輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種載體，其包括所揭示之核酸中之任一者。
在一態樣中，本文提供一種含有所揭示之載體中之任一者的宿主細胞。在實施例中，所揭示之載體包括表現載體，且宿主細胞表現重鏈可變區。在實施例中，所揭示之載體包括表現載體，且宿主細胞表現輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供含有第一載體及第二載體之宿主細胞。在實施例中，第一載體包含第一表現載體，第二載體包含第二表現載體，且宿主細胞表現重鏈可變區及輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種用於製備抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區的方法，該方法包含：在適合於表現抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區的條件下培養宿主細胞群。在實施例中，該方法進一步包括自宿主細胞回收所表現之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段的重鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種用於製備抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區的方法，該方法包含：在適合於表現抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區的條件下培養宿主細胞群。在實施例中，該方法進一步包括自宿主細胞回收所表現之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種用於製備(i)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區及(ii)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區的方法，該方法包含：在適合於表現(i)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區及(ii)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區的條件下培養宿主細胞群。在實施例中，該方法進一步包括自宿主細胞回收(i)所表現之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區及(ii)所表現之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區。
在一態樣中，本文提供一種用於抑制表現ROR1之細胞之生長或增殖的方法，其包含：在適合於抑制表現ROR1之細胞之生長或增殖之條件下，在所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者之人類抗ROR1抗體存在下，使效應細胞群與表現ROR1之目標細胞群接觸。在實施例中，效應細胞群包含PBMC或NK細胞。在實施例中，目標細胞群包含表現ROR1之人類癌症細胞或表現ROR1之轉殖基因細胞。在實施例中，效應細胞對目標細胞之比值為1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。在實施例中，效應細胞對目標細胞之比值為5:1至10:1、10:1至20:1或20:1至30:1。
在一態樣中，本文提供一種用於殺死表現ROR1之細胞之方法，其包含：在適合於抑制表現ROR1之細胞之生長或增殖之條件下，在所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者之人類抗ROR1抗體存在下，使效應細胞群與表現ROR1之目標細胞群接觸。在實施例中，效應細胞群包含PBMC或NK細胞。在實施例中，目標細胞群包含表現ROR1之人類癌症細胞或表現ROR1之轉殖基因細胞。在實施例中，效應細胞對目標細胞之比值為1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。在實施例中，效應細胞對目標細胞之比值為5:1至10:1、10:1至20:1或20:1至30:1。
在一態樣中，本文提供一種用於治療患有與ROR1表現相關之疾病之個體的方法，該方法包含：向該個體投與有效量之治療性組合物，其包含所揭示之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段中之任一者的抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段。在實施例中，與ROR1表現相關之疾病係癌症。在實施例中，癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、乳癌、肺癌、胃癌、黑素瘤、大腸癌、腎細胞癌或淋巴瘤。在實施例中，癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、毛細胞白血病(HCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性淋巴瘤(AML)、骨髓瘤、T細胞白血病(TCL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、多發性骨髓瘤(MM)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、已經歷李希特轉化(Richter's transformation)之非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma；NHL)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肝細胞癌、胰臟癌、骨肉瘤、頭頸癌、卵巢癌、乳癌或三陰性乳癌(TNBC)。淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、邊緣細胞B細胞淋巴瘤、腎細胞癌、大腸癌、大腸直腸癌、上皮鱗狀細胞癌、黑素瘤、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、子宮頸癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌或甲狀腺癌。在實施例中，癌症為轉移癌、難治癒之癌症或復發性癌症。
根據35 U.S.C. §119，本申請案主張2021年4月9日提交之美國臨時申請案第63/173,150號之優先權，其全部內容以其全文引用之方式併入。
在通篇本申請案中，引用多個公開案、專利及/或專利申請案。該等公開案、專利及/或專利申請案之揭示內容以全文引用之方式併入本文中，以便更充分地描述本發明所涉及之技術現狀。
定義 ：除非另外定義，否則本文所使用之技術及科學術語具有一般技術者通常所瞭解之含義。一般而言，本文所述之關於細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、轉殖基因細胞產生、蛋白質化學及核酸化學、及雜交之技術的術語為此項技術中熟知且常用的。除非另外規定，否則本文提供之方法及技術一般根據此項技術中熟知之習知程序且如本文中所引用及論述之多個通用及較特定之參考文獻中所描述來進行。參見例如Sambrook等人Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992)。多個基本文本描述了標準抗體生產方法,包括Borrebaeck (編) Antibody Engineering, 第 2 版Freeman and Company, NY, 1995；McCafferty等人 Antibody Engineering, A Practical ApproachIRL at Oxford Press, Oxford, England, 1996；及Paul (1995) Antibody Engineering ProtocolsHumana Press, Towata, N.J., 1995；Paul (編), Fundamental Immunology, Raven Press, N.Y, 1993；Coligan (1991) Current Protocols in ImmunologyWiley/Greene, NY；Harlow及Lane (1989) Antibodies: A Laboratory ManualCold Spring Harbor Press, NY；Stites等人(編) Basic and Clinical Immunology(第4版) Lange Medical Publications, Los Altos, Calif.,及其中引用之參考文獻； Coding Monoclonal Antibodies: Principles and Practice(第2版) Academic Press, New York, N.Y., 1986,及Kohler及Milstein Nature256: 495-497, 1975。本文所列之所有參考文獻均以全文引用的方式併入本文中。酶促反應及增濃/純化技術亦為熟知的，且根據製造商說明書，如通常在此項技術中所實現或如本文所述來執行。結合本文所述之分析化學、合成有機化學及醫學與醫藥化學使用的術語以及其實驗室程序及技術已熟知且常用於此項技術中。標準技術可用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及傳遞以及患者治療。
本文提供之標題並非限制本發明之各種態樣，該等態樣可藉由參考整體說明書來理解。
除非本文上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。除非明確且肯定地限於一個提及物，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」及任何詞語的單數使用包括複數個提及物。
應瞭解，本文中使用替代物(例如「或」)意謂替代物中的一者或兩者或其任何組合。
本文所用之術語「及/或」意謂特定揭示指定特徵或組分中之每一者，有或無另一者。舉例而言，如本文之諸如「A及/或B」之片語中所用，術語「及/或」意欲包括「A及B」、「A或B」、「A」(單獨)及「B」(單獨)。同樣，諸如「A、B及/或C」之片語中所使用的術語「及/或」意欲涵蓋以下態樣中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
如本文所用，如本文所用之術語「包含」、「包括」、「具有」及「含有」及其文法變型意欲無限制，因此，清單中的一項或多項不排除可經取代或添加至所列項中的其他項。應瞭解每當本文中用語言「包含」描述態樣時，則亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」所描述之類似態樣。
如本文所用，術語「約」係指如一般技術者所確定，一個值或組成在特定值或組成之可接受誤差範圍內，該誤差範圍將部分地視如何量測或測定該值或組成而定，亦即，量測系統之侷限性。舉例而言，「約」或「基本上包含」可意謂根據此項技術中之實踐在一個或超過一個標準差內。替代地，「約」或「基本上包含」視量測系統之侷限性而定可意謂至多10%(即，±10%)或更多之範圍。舉例而言，約5 mg可包括4.5 mg與5.5 mg之間的任何數值。此外，尤其在生物系統或方法方面，該術語可意謂值之至多一個數量級或至多5倍。當特定值或組成提供於本發明中時，除非另外說明，否則「約」或「基本上由……構成」之含義應假設為在特定值或組成之可接受之誤差範圍內。
本文所用的術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」與其他相關術語可互換使用且係指胺基酸聚合物且不限於任何特定長度。多肽可包含天然及非天然胺基酸。多肽包括重組或化學上合成的形式。多肽亦包括前驅體分子及成熟分子。前驅體分子包括尚未經受裂解，例如藉由分泌信號肽裂解，或在某些胺基酸殘基處發生非酶促裂解的前驅體分子。多肽包括已經歷裂解的成熟分子。此等術語涵蓋天然及人造蛋白質、蛋白質序列之蛋白質片段及多肽類似物(諸如突變蛋白、變異體、嵌合蛋白及融合蛋白)以及轉譯後或共價或非共價修飾之蛋白質。使用重組程序製備，包含結合ROR1之結合蛋白(例如抗ROR1抗體或其抗原結合部分)之胺基酸序列的多肽在本文中描述。
本文所用的術語「核酸」、「聚核苷酸」及「寡核苷酸」與其他相關術語可互換使用且係指核苷酸聚合物且不限於任何特定長度。核酸包括重組形式及化學合成形式。核酸包括DNA分子(cDNA或基因體DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如肽核酸及非天然存在的核苷酸類似物)所產生的DNA或RNA類似物，及其雜合體。核酸分子可為單股或雙股。在實施例中，本發明之核酸分子包含編碼抗體或片段或scFv、衍生物、突變蛋白或其變異體的鄰接開放閱讀框架。在實施例中，核酸包含一種類型的聚核苷酸或兩種或更多種不同類型之聚核苷酸之混合物。編碼抗ROR1抗體或其抗原結合部分之核酸在本文中描述。
術語「回收(recover/recovery/recovering)」及其他相關術語，係指自宿主細胞培養基或自宿主細胞溶解物或自宿主細胞膜獲得蛋白質(例如抗體或其抗原結合部分)。在實施例中，該蛋白質作為與介導表現之蛋白質之分泌的分泌信號肽序列融合之重組蛋白由宿主細胞表現。可自宿主細胞培養基中回收所分泌的蛋白質。在實施例中，該蛋白質係作為缺乏分泌信號肽序列的重組蛋白由宿主細胞表現，該重組蛋白可自宿主細胞溶解物中回收。在實施例中，該蛋白質係作為膜結合蛋白由宿主細胞表現，該膜結合蛋白可利用洗滌劑回收以使所表現之蛋白質自宿主細胞膜釋放。在實施例中，不論用於回收蛋白質的方法，可對蛋白質執行自所回收之蛋白質移除細胞碎片的程序。舉例而言，可對所回收之蛋白質進行層析、凝膠電泳及/或透析。在實施例中，層析包含兩種或更多種程序中之任一者或任何組合，該等程序包括親和層析、羥基磷灰石層析、離子交換層析、逆相層析及/或二氧化矽層析。在實施例中，親和層析包含蛋白質A或G (金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)的細胞壁組分)。
術語「分離」係指一種蛋白質(例如抗體或其抗原結合部分)或聚核苷酸基本上不含其他細胞材料。利用此項技術中熟知的蛋白質純化技術，藉由分離可使得一種蛋白質基本上不含天然關聯的組分(或與用於產生抗體之細胞表現系統或化學合成方法關聯的組分)。在一些實施例中，術語分離亦指蛋白質或聚核苷酸基本上不含相同物種的其他分子，例如分別具有不同胺基酸或核苷酸序列的其他蛋白質或聚核苷酸。所需分子的純度或均質性可利用此項技術中熟知的技術分析，包括諸如凝膠電泳之低解析度方法及諸如HPLC或質量分光光度法之高解析度方法。在實施例中，分離抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者。
本文所用的「抗原結合蛋白」及相關術語係指一種蛋白質，其包含結合至抗原的一部分及視情況存在的骨架或構架部分，該骨架或構架部分允許抗原結合部分採取促進抗原結合蛋白結合至抗原的構形。抗原結合蛋白質之實例包括抗體、抗體片段(例如抗體之抗原結合部分)、抗體衍生物及抗體類似物。抗原結合蛋白可包含例如具有接枝CDR或CDR衍生物之替代蛋白質骨架或人工骨架。此類骨架包括但不限於抗體衍生骨架，包含引入以例如穩定抗原結合蛋白之三維結構的突變；以及完全合成骨架，包含例如生物相容性聚合物。參見例如Korndorfer等人, 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 第53卷, 第1期:121-129；Roque等人, 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654。此外，可使用肽抗體模擬物(「PAM」)以及基於利用纖維結合蛋白組分之抗體模擬物之骨架作為骨架。本文中描述結合ROR1之抗原結合蛋白。
抗原結合蛋白可具有例如免疫球蛋白之結構。在實施例中，「免疫球蛋白」係指由兩對相同多肽鏈組成之四聚分子，各對具有一個「輕」鏈(約25 kDa)及一個「重」鏈(約50-70 kDa)。各鏈之胺基端部分包括主要負責抗原識別之具有約100至110個或更多個胺基酸之可變區。各鏈之羧基端部分界定主要負責效應功能之恆定區。將人類輕鏈分類為κ或λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，且抗體之同型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。在輕鏈及重鏈內，可變區及恆定區由具有約12個或更多個胺基酸之「J」區接合，其中重鏈亦包括具有約10個以上胺基酸之「D」區。大體上參見例如Fundamental Immunology第7章(Paul, W.編, 第2版, Raven Press, N.Y. (1989))(以全文引用之方式併入本文中用於所有目的)。各輕鏈/重鏈對之可變區形成抗體結合位點，使得一個完整免疫球蛋白具有兩個抗原結合位點。在實施例中，抗原結合蛋白可為合成分子，該合成分子具有不同於四聚免疫球蛋白分子的結構，但仍然結合目標抗原或結合兩個或更多個目標抗原。舉例而言，合成的抗原結合蛋白可包含抗體片段、1-6個或更多個多肽鏈、不對稱的多肽組合體，或其他合成分子。本文中描述具有免疫球蛋白樣特性之抗原結合蛋白，其特異性地結合至ROR1。
免疫球蛋白鏈之可變區展現由三個亦稱為互補決定區或CDR之高變區接合之相對保守構架區(FR)之相同通用結構。自N端至C端，輕鏈及重鏈皆包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。
一或多個CDR可共價或非共價併入分子中以使其成為抗原結合蛋白。抗原結合蛋白可合併CDR作為較大多肽鏈之一部分，可使CDR共價連接至另一多肽鏈，或可非共價地合併CDR。CDR容許抗原結合蛋白特異性結合至所關注之特定抗原。
各域之胺基酸分配係根據Kabat等人於Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH公開案第91-3242號, 1991中之定義。免疫球蛋白鏈中胺基酸之其他編號系統包括IMGT.RTM. (international ImMunoGeneTics information system; Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol.29:185-203; 2005)及Aho (Honegger及Pluckthun, J. Mol. Biol.309(3):657-670; 2001)；Chothia (Al-Lazikani等人, 1997 Journal of Molecular Biology 273:927-948)；及Contact (Maccallum等人, 1996 Journal of Molecular Biology 262:732-745)。
本文所用之「抗體(antibody/antibodies)」及相關術語係指特異性結合於抗原之完整免疫球蛋白或其抗原結合部分(或其抗原結合片段)。抗原結合部分(或抗原結合片段)可藉由重組DNA技術或藉由完整抗體之酶促或化學裂解產生。抗原結合部分(或抗原結合片段)尤其包括Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、域抗體(dAb)及互補決定區(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及多肽，其含有足以賦予多肽特異性抗原結合的免疫球蛋白之至少一部分。
抗體包括重組產生之抗體及抗原結合部分。抗體包括非人類、嵌合、人類化及完全人類抗體。抗體包括單特異性、多特異性(例如雙特異性、三特異性及更高階特異性)。抗體包括四聚體抗體、輕鏈單體、重鏈單體、輕鏈二聚體、重鏈二聚體。抗體包括F(ab') 2片段、Fab'片段及Fab片段。抗體包括單域抗體、單價抗體、單鏈抗體、單鏈可變片段(scFv)、駱駝化抗體、親和抗體、二硫鍵連接之Fv (sdFv)、抗個體基因型抗體(抗Id)、微型抗體。抗體包括單株及多株群體。本文中描述抗ROR1抗體。
本文所用的「抗原結合域」、「抗原結合區」或「抗原結合位點」及其他相關術語係指抗原結合蛋白的一部分，其含有與抗原相互作用且促成抗原結合蛋白對抗原的特異性及親和力之胺基酸殘基(或其他部分)。對於特異性結合至其抗原之抗體，此將包括至少一個其CDR域之至少一部分。本文中描述來自抗ROR1抗體的抗原結合域。
如本文所用，術語「特異性結合(specific binding/specifically binds/specifically binding)」及其他相關術語在抗體或抗原結合蛋白或抗體片段的上下文中係指相對於其他分子或部分，以非共價或共價方式優先結合於抗原(例如相對於其他可利用之抗原，抗體特異性結合於特定抗原)。在實施例中，若抗體以10 -5M或更小、或10 -6M或更小、或10 -7M或更小、或10 -8M或更小、或10 -9M或更小、或10 -10M或更小的解離常數K D結合於抗原，則該抗體特異性結合於目標抗原。本文中描述特異性結合ROR1之抗ROR1抗體。
在實施例中，可使用BIACORE表面電漿子共振(SPR)分析量測解離常數(K D)。表面電漿子共振係指一種光學現象，其允許藉由偵測生物感測基質內之蛋白質濃度的變化來分析即時相互作用，例如使用BIACORE系統(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)。
如本文所用，「抗原決定基」及相關術語係指抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合部分)所結合之抗原的一部分。抗原決定基可包含抗原結合蛋白所結合之兩種或更多種抗原的部分。抗原決定基可包含一種抗原或兩種或更多種抗原的非鄰接部分(例如抗原之一級序列中不鄰接的胺基酸殘基，但該等胺基酸殘基在抗原之三級及四級結構之背景下，彼此靠近足以被抗原結合蛋白結合)。一般而言，抗體的可變區，尤其CDR，與抗原決定基發生相互作用。本文中描述結合ROR1多肽之抗原決定基之抗ROR1抗體及其抗原結合蛋白。
就抗體而言，術語「拮抗劑」及「拮抗」係指阻斷型抗體，其結合其同源目標抗原且抑制或減少所結合抗原之生物活性。術語「促效劑」或「促效」係指一種抗體，其以模擬生理學配位體結合的方式結合其同源目標抗原，從而引起抗體介導之下游傳訊。
本文所用之「抗體片段」、「抗體部分」、「抗體之抗原結合片段」或「抗體之抗原結合部分」及其他相關術語係指除完整抗體之外的分子，其包含結合完整抗體所結合之抗原的完整抗體之一部分。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2；Fd；以及Fv片段，以及dAb；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；含有抗體之至少一部分的多肽，該部分足以賦予多肽特異性抗原結合。抗體之抗原結合部分可藉由重組型DNA技術或藉由完整抗體之酶促或化學裂解來製備。抗原結合部分尤其包括Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、域抗體(dAb)及互補決定區(CDR)片段、嵌合抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及多肽，其含有足以賦予抗體片段抗原結合特性之免疫球蛋白的至少一部分。本文中描述抗ROR1抗體之抗原結合片段。
術語「Fab」、「Fab片段」及其他相關術語係指包含可變輕鏈區(V L)、輕鏈恆定區(C L)、可變重鏈區(V H)及第一恆定區(C H1)之單價片段。Fab能夠結合抗原。F(ab') 2片段為二價片段，其包含兩個藉由二硫橋鍵在鉸鏈區連接之Fab片段。F(Ab') 2具有抗原結合能力。Fd片段包含V H及C H1區。Fv片段包含V L及V H區。Fv可結合抗原。dAb片段具有V H域、V L域、或V H或V L域之抗原結合片段(美國專利6,846,634及6,696,245；美國公開申請案第2002/02512號、第2004/0202995號、第2004/0038291號、第2004/0009507號、第2003/0039958號；及Ward等人, Nature 341:544-546, 1989)。本文中描述包含來自抗ROR1抗體之抗原結合部分的Fab片段。
單鏈抗體(scFv)為一種抗體，其中V L與V H區經由連接子(例如胺基酸殘基的合成序列)連接而形成連續的蛋白質鏈。較佳地連接子之長度足以允許蛋白質鏈摺疊回自身上且形成單價抗原結合位點(參見例如Bird等人, 1988, Science 242:423-26及Huston等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83)。本文中描述包含來自抗ROR1抗體之抗原結合部分的單鏈抗體。
雙功能抗體為包含兩個多肽鏈之二價抗體，其中各多肽鏈包含藉由連接子接合之V H及V L域，該連接子太短而不容許於相同鏈上之兩個域之間配對，因此允許各域與另一多肽鏈上之互補域配對(參見例如Holliger等人 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 及Poljak等人, (1994) Structure 2:1121-23)。若雙功能抗體之兩個多肽鏈一致，則由其配對產生之雙功能抗體將具有兩個一致抗原結合位點。具有不同序列之多肽鏈可用於製造具有兩個不同抗原結合位點之雙功能抗體。類似地，三功能抗體及四功能抗體為分別包含三條及四條多肽鏈且分別形成三個及四個可相同或不同之抗原結合位點之抗體。可使用來自本文所述之任一種抗ROR1抗體的抗原結合部分製備雙功能抗體、三功能抗體及四功能抗體構築體。
術語「人類抗體」係指具有一或多個來源於人類免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。在實施例中，所有可變域及恆定域來源於人類免疫球蛋白序列(例如完全人類抗體)。此等抗體可以多種方式製備，其實例在下文描述，包括經由重組方法或經由免疫接種所關注之小鼠抗原，該小鼠經基因修飾以表現來源於人類重鏈及/或輕鏈編碼基因的抗體。本文中描述完全人類抗ROR1抗體及其抗原結合蛋白。
「人類化」抗體係指一種抗體，其序列因一或多個胺基酸取代、缺失及/或添加而不同於來源於非人類物種之抗體的序列，使得當人類化抗體投與人類個體時，其不大可能誘導免疫反應及/或相較於非人類物種抗體，誘導不太嚴重的免疫反應。在實施例中，非人類物種抗體之重鏈及/或輕鏈之構架及恆定域中之某些胺基酸突變以產生人類化抗體。在另一實施例中，來自人類抗體之恆定域與非人類物種之可變域融合。在另一實施例中，非人類抗體之一或多個CDR序列中之一或多個胺基酸殘基經改變以在將非人類抗體投與人類個體時減小該抗體之可能免疫原性，其中改變之胺基酸殘基對於抗體與其抗原之免疫特異性結合並不關鍵，或胺基酸序列之變化為保守性變化，使得人類化抗體與抗原之結合不比非人類抗體與抗原之結合顯著更糟。如何製備人類化抗體之實例可見於美國專利第6,054,297號、第5,886,152號及第5,877,293號中。
本文所用的術語「嵌合抗體」及相關術語係指含有來自第一抗體之一或多個區及來自一或多種其他抗體之一或多個區的抗體。在實施例中，CDR中一或多者來源於人類抗體。在另一實施例中，所有CDR來源於人類抗體。在另一實施例中，將來自超過一種人類抗體的CDR混合且在嵌合抗體中匹配。舉例而言，嵌合抗體可包含來自第一人類抗體之輕鏈的CDR1、來自第二人類抗體之輕鏈的之CDR2及CDR3、及來自第三抗體之重鏈的CDR。在另一實例中，CDR來源於不同物種，諸如人類及小鼠，或人類及兔，或人類及山羊。熟習此項技術者應瞭解可能有其他組合。
此外，構架區可來源於相同抗體之一者、來源於一或多種不同抗體，諸如人類抗體，或來源於人類化抗體。在嵌合抗體之一個實例中，重鏈及/或輕鏈之一部分與來自特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體一致、與其同源或由其衍生，而鏈之其餘部分與來自另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體一致、與其同源或由其衍生。亦包括展現所需生物活性(亦即特異性結合目標抗原之能力)的此類抗體之片段。嵌合抗體可由本文所描述之任一種抗ROR1抗體的部分製備。
如本文所用，術語「變異體」多肽及多肽「變異體」係指一種包含胺基酸序列的多肽，相對於參考多肽序列，該胺基酸序列中存在一或多個胺基酸殘基的插入、缺失及/或取代。多肽變異體包括融合蛋白。以相同方式，變異體聚核苷酸包含一種核苷酸序列，相對於另一種聚核苷酸序列，該核苷酸序列中存在一或多個核苷酸的插入、缺失及/或取代。聚核苷酸變異體包括融合聚核苷酸。
如本文所用，術語多肽「衍生物」為已經過化學修飾的多肽(例如抗體)，該化學修飾為例如經由與諸如聚乙二醇、白蛋白(例如人類血清白蛋白)之另一種化學部分結合，磷酸化及糖基化。除非另外指示，否則術語「抗體」除包含兩條全長重鏈及兩條全長輕鏈之抗體以外，亦包括其衍生物、變異體、片段及突變蛋白，其實例描述於下文中。
術語「鉸鏈」係指一種胺基酸區段，其通常發現於蛋白質的兩個域之間且可允許整體構築體存在柔性且允許一個或兩個域彼此相對移動。在結構上，鉸鏈區包含約10至約100個胺基酸，例如約15至約75個胺基酸、約20至約50個胺基酸或約30至約60個胺基酸。在實施例中，鉸鏈區係10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100個胺基酸長。鉸鏈區可來源於天然存在之蛋白質的鉸鏈區，諸如CD8鉸鏈區或其片段、CD8α鉸鏈區或其片段、抗體(例如IgG、IgA、IgM、IgE或IgD抗體)鉸鏈區，或將抗體之恆定域CH1與CH2連接的鉸鏈區。鉸鏈區可來源於抗體且可包含或可不包含抗體的一或多個恆定區，或鉸鏈區包含抗體之鉸鏈區及抗體之CH3恆定區，或鉸鏈區包含抗體之鉸鏈區及抗體之CH2及CH3恆定區，或鉸鏈區為非天然存在之肽，或鉸鏈區安置於scFv之C端與跨膜域之N端之間。在實施例中，鉸鏈區包含兩個或更多個包含來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白分子之上部、核心或下部鉸鏈序列的區中之任一者或任意組合。在實施例中，鉸鏈區包含IgG1上部鉸鏈序列EPKSCDKTHT。在實施例中，鉸鏈區包含IgG1核心鉸鏈序列CP XCP，其中 X為P、R或S。在實施例中，鉸鏈區包含下部鉸鏈/CH2序列APELLGGP。在實施例中，鉸鏈連接至具有胺基酸序列SVFLFPPKPKDT的Fc區(CH2)。在實施例中，鉸鏈區包括上部、核心及下部鉸鏈的胺基酸序列且包含EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP。在實施例中，鉸鏈區包含可形成至少一個、兩個、三個或更多個鏈間二硫鍵的一個、兩個、三個或更多個半胱胺酸。
如本文所用，術語「Fc」或「Fc區」係指抗體重鏈恆定區的一部分，該部分始於鉸鏈區中或鉸鏈區之後且終止於重鏈C端。Fc區包含CH2及CH3區之至少一部分且可包括或可不包括鉸鏈區之一部分。各自攜帶半Fc區之兩個多肽鏈可二聚形成完整Fc域。Fc域可結合Fc細胞表面受體及免疫補體系統的一些蛋白質。Fc區可結合補體組分C1q。Fc域展現效應功能，包括兩種或更多種活性中之任一者或任意組合，包括補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性吞噬(ADP)、助噬作用及/或細胞結合。Fc域可結合Fc受體，包括FcγRI (例如CD64)、FcγRII (例如CD32)及/或FcγRIII (例如CD16a)。在實施例中，Fc區可包括增加或減少此等功能中之任一者或任意組合的突變。
如本文所用之術語「經標記抗體」或相關術語係指將未經標記或連接的抗體及其抗原結合部分連接至用於偵測的可偵測標記或部分，其中該可偵測標記或部分為放射性、比色性、抗原性、酶促、可偵測珠粒(諸如磁性或電子緻密(例如金)珠粒)、生物素、鏈黴抗生物素蛋白或蛋白A。可採用多種標記物，包括但不限於放射性核種、螢光劑、酶、酶受質、酶輔因子、酶抑制劑及配位體(例如生物素、半抗原)。本文所述之任一種抗ROR1抗體可未經標記或可連接至可偵測標記或部分。
本文所用的「一致性百分比」或「同源性百分比」及相關術語係指兩種多肽之間或兩種聚核苷酸序列之間的相似性之定量量測。兩種多肽序列之間的一致性百分比為兩種多肽序列之間在對準位置所共享之一致胺基酸之數目的函數，此函數考慮空位的數目及各空位的長度，為了使兩種多肽序列的對準最佳化，可能需要引入空位。以類似方式，兩種聚核苷酸序列之間的一致性百分比為兩種聚核苷酸序列之間在對準位置所共享之一致核苷酸之數目的函數，此函數考慮空位的數目及各空位的長度，為了使兩種聚核苷酸序列的對準最佳化，可能需要引入空位。可利用數學算法完成序列比較及兩種多肽序列之間或兩種聚核苷酸序列之間的一致性百分比測定。舉例而言，兩種多肽或兩種聚核苷酸序列的「一致性百分比」或「同源性百分比」可藉由使用GAP電腦程式(GCG Wisconsin套裝程式的一部分，10.3版(Accelrys, San Diego, Calif.))、使用其預設參數比較序列來測定。關於測試序列的表述，諸如「包含與Y具有至少X%一致性的序列」，意謂當如上文所描述與序列Y比對時，該測試序列包含與Y之殘基至少X%一致的殘基。
在實施例中，測試抗體之胺基酸序列可與組成本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者之多肽的胺基酸序列中的任一者類似但並非必定一致。測試抗體與多肽之間的相似性可為與組成本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者之多肽中的任一者至少95%、或96%一致或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致。在實施例中，類似多肽可含有重鏈及/或輕鏈內之胺基酸取代。在實施例中，胺基酸取代包含一或多個保守胺基酸取代。「保守胺基酸取代」為其中胺基酸殘基經另一具有類似化學特性(例如電荷或疏水性)之側鏈(R基團)的胺基酸殘基取代之胺基酸取代。一般而言，保守胺基酸取代將不會實質上改變蛋白質之功能特性。在其中兩個或更多個胺基酸序列彼此間差異為保守取代的情況下，可上調序列一致性或相似度百分比以根據保守取代性質加以校正。進行此調整之方式為熟習此項技術者所熟知。參見例如Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331，其以全文引用之方式併入本文中。含有具有類似化學特性之側鏈的胺基酸之群的實例包括(1)脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；(2)脂族羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；(3)含醯胺側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；(4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；(5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；(6)酸性側鏈：天冬胺酸及麩胺酸；及(7)含硫側鏈為半胱胺酸及甲硫胺酸。
抗體可獲自諸如含有免疫球蛋白之血清或血漿等來源，該等免疫球蛋白具有不同的抗原特異性。若此類抗體經歷親和力純化，則其可因特定抗原特異性而富集。此類抗體富集製劑通常由少於約10%的對特定抗原具有特異性結合活性之抗體製成。使此等製劑經歷若干輪親和力純化可增加具有針對抗原之特異性結合活性之抗體的比例。以此方式製備之抗體通常稱為「單特異性」。單特異性抗體製劑可由約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或99.9%的對特定抗原具有特異性結合活性之抗體組成。可利用如下文所描述之重組核酸技術產生抗體。
本文所用之「載體」及相關術語係指可操作地連接至外來遺傳物質(例如核酸轉殖基因)之核酸分子(例如DNA或RNA)。載體可用作將外來遺傳物質引入細胞(例如宿主細胞)內的媒介。載體可包括至少一種限制性核酸內切酶識別序列以便將轉殖基因插入載體中。載體可包括至少一種基因序列，該基因序列賦予抗生素抗性或可選特徵以有助於選擇具有載體轉殖基因構築體的宿主細胞。載體可為單股或雙股核酸分子。載體可為線性或環形核酸分子。使用鋅指核酸酶、TALEN或CRISPR/Cas之基因編輯方法所用的供體核酸可為載體的一種類型。一種類型的載體為「質體」，其係指線性或環形雙股染色體外DNA分子，該DNA分子可連接至轉殖基因且能夠在宿主細胞中複製，及轉錄及/或轉譯轉殖基因。病毒載體典型地含有可連接至轉殖基因的病毒RNA或DNA主鏈序列。病毒主鏈序列可經修飾以使感染失能，但保持將病毒主鏈及共連接之轉殖基因插入宿主細胞基因體中。病毒載體之實例包括逆轉錄病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒、桿狀病毒、乳多泡病毒、牛痘病毒、單純性疱疹病毒及艾-巴二氏(Epstein Barr)病毒載體。某些載體能夠在其所引入之宿主細胞中自主複製(例如包含細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中時整合至宿主細胞之基因組中，且藉此與宿主基因組一起複製。
「表現載體」為載體的一種類型，其可含有一或多種調控序列，諸如誘導型及/或組成型啟動子及增強子。表現載體可包括核糖體結合位點及/或聚腺苷酸化位點。調控序列導引與轉導至宿主細胞中之表現載體連接之轉殖基因之轉錄或轉錄及轉譯。調控序列可控制轉殖基因表現的量、時序及/或位置。調控序列可例如直接或經由一或多種其他分子(例如結合至調控序列及/或核酸的多肽)的作用對轉殖基因發揮其作用。調控序列可為載體之一部分。調控序列之其他實例描述於例如Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif.及Baron等人, 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-3606中。表現載體可包含編碼本文所述之抗ROR1抗體中之任一者之至少一部分的核酸。
當轉殖基因與載體之間存在連接以容許載體中所含的轉殖基因序列發揮作用或表現時，該轉殖基因「可操作地連接」至載體。在實施例中，當調控序列影響轉殖基因的表現(例如表現的量、時序或位置)時，該轉殖基因「可操作地連接」至該調控序列。
本文所用之術語「轉染」或「轉型」或「轉導」或其他相關術語係指外源核酸(例如轉殖基因)藉以轉移或引入宿主細胞中的方法。「轉染」或「轉型」或「轉導」的宿主細胞為已經外源核酸(轉殖基因)轉染、轉型或轉導之宿主細胞。宿主細胞包括原代個體細胞及其後代。編碼本文所述之抗ROR1抗體中之任一者之至少一部分的外源核酸可引入宿主細胞中。包含本文所述之抗ROR1抗體中之任一者之至少一部分的表現載體可引入宿主細胞中，且該宿主細胞可表現包含抗ROR1抗體之至少一部分的多肽。
如本文所用之術語「宿主細胞」或「宿主細胞群」或相關術語係指外來(外源或轉殖基因)核酸已引入其中的細胞(或其群體)。外來核酸可包括可操作地連接至轉殖基因的表現載體，且宿主細胞可用於表現核酸及/或由外來核酸(轉殖基因)編碼的多肽。宿主細胞(或其群體)可為所培養的細胞或可自個體中提取。宿主細胞(或其群體)包括原代個體細胞及其後代，不論繼代次數。後代細胞可或可不含有與親本細胞一致的遺傳物質。宿主細胞涵蓋後代細胞。在實施例中，宿主細胞描述已以任何方式修飾、轉染、轉導、轉型及/或操控以表現如本文所揭示之抗體的任何細胞(包括其後代)。在一個實例中，可向宿主細胞(或其群體)中引入本文所述之可操作地連接至編碼所需抗體或其抗原結合部分之核酸的表現載體。宿主細胞及其群體可含有穩定整合至宿主基因體中的表現載體或可含有染色體外表現載體。在實施例中，宿主細胞及其群體可含有若干次細胞分裂之後存在的染色體外載體，或短暫存在且若干次細胞分裂之後消失的染色體外載體。
宿主細胞可為原核生物，例如大腸桿菌，或其可為真核生物，例如單細胞真核生物(例如酵母或其他真菌)、植物細胞(例如菸草或番茄植物細胞)、哺乳動物細胞(例如人類細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或融合瘤。在實施例中，可向宿主細胞中引入可操作地連接至編碼所需抗體之核酸的表現載體，藉此產生經轉染/經轉型宿主細胞，其在適合於經轉染/經轉型宿主細胞表現抗體之條件下培養，且視情況自經轉染/經轉型宿主細胞回收該抗體(例如自宿主細胞溶解物回收)或自培養基回收。在實施例中，宿主細胞包含非人類細胞，包括CHO、BHK、NS0、SP2/0及YB2/0。在實施例中，宿主細胞包含人類細胞，包括HEK293、HT-1080、Huh-7及PER.C6。宿主細胞之實例包括猴腎細胞之COS-7株系(ATCC CRL 1651)(參見Gluzman等人, 1981, Cell 23:175)、L細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或其衍生物，諸如在無血清培養基中生長的Veggie CHO及相關細胞株(參見Rasmussen等人, 1998, Cytotechnology 28:31)，或缺乏DHFR的CHO株DX-B 11 (參見Urlaub等人, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20)、海拉細胞(HeLa cells)、BHK (ATCC CRL 10)細胞株、來源於非洲綠猴腎細胞株CV1的CV1/EBNA細胞株(ATCC CCL 70)(參見McMahan等人, 1991, EMBO J. 10:2821)；人類胚胎腎細胞，諸如293、293 EBNA或MSR 293；人類表皮A431細胞、人類Colo 205細胞、轉型的其他靈長類動物細胞株、正常二倍體細胞、來源於初生組織活體外培養物的細胞株、初生外植體、HL-60、U937、HaK或傑卡特細胞(Jurkat cells)。在實施例中，宿主細胞包括淋巴細胞，諸如Y0、NS0或Sp20。在實施例中，宿主細胞為哺乳動物宿主細胞，而非人類宿主細胞。典型地，宿主細胞為可經可隨後在宿主細胞中表現之編碼多肽之核酸轉型或轉染的經培養之細胞。片語「轉殖基因宿主細胞」或「重組宿主細胞」可用於指代已經待表現之核酸轉型或轉染的宿主細胞。宿主細胞亦可為包含核酸、但不以所需量表現該核酸的細胞，除非將調控序列引入宿主細胞中，使得其變得與核酸可操作地連接。應理解，術語宿主細胞不僅指特定個體細胞，且亦指此類細胞之後代或潛在後代。因為某些修飾可能歸因於例如突變或環境影響而出現在後代中，因此此類後代可能實際上不與親本細胞一致，但仍包括在如本文所使用之術語的範疇內。
可使用此項技術中已知之任何方法產生本發明之多肽(例如抗體及抗原結合蛋白)。在一個實例中，藉由重組核酸方法如下產生多肽：將編碼多肽的核酸序列(例如DNA)插入重組表現載體中，將該重組表現載體引入宿主細胞中且在促進表現的條件下藉由宿主細胞表現。
通用的重組核酸操控技術描述於例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第1-3卷, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版, 1989或F. Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987)及定期更新中，該等文獻以全文引用之方式併入本文中。編碼多肽的核酸(例如DNA)可操作地連接至表現載體，該表現載體攜載來源於哺乳動物、病毒或昆蟲基因的一或多種適合轉錄或轉譯調控元件。此類調控元件包括轉錄啟動子、視情況存在之用於控制轉錄的操縱序列、編碼適合mRNA核糖體結合位點之序列及控制轉錄及轉譯終止之序列。表現載體可包括賦予宿主細胞複製能力的起點或複製。表現載體可包括賦予選擇性以促進轉殖基因宿主細胞(例如轉型體)被識別的基因。
重組DNA亦可編碼可用於純化蛋白質之任何類型的蛋白質標籤序列。蛋白質標籤之實例包括但不限於組胺酸標籤、FLAG標籤、myc標籤、HA標籤或GST標籤。適合與細菌、真菌、酵母及哺乳動物細胞宿主一起使用之選殖及表現載體可見於Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985)中。
可使用適於宿主細胞之方法將表現載體構築體引入宿主細胞中。此項技術中已知用於將核酸引入宿主細胞之多種方法，包括但不限於電穿孔；使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-聚葡萄糖或其他物質進行之轉染；病毒轉染；非病毒轉染；微彈轟擊；脂質體轉染；及感染(其中載體為傳染媒介物)。適合宿主細胞包括原核細胞、酵母、哺乳動物細胞或細菌細胞。
適合的細菌包括革蘭氏陰性(gram negative)或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌屬( Bacillusspp.)。酵母，較佳來自酵母( Saccharomyces)物種，諸如釀酒酵母( S. cerevisiae)，亦可用於產生多肽。多種哺乳動物或昆蟲細胞培養系統亦可用於表現重組蛋白。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質的桿狀病毒系統評述於Luckow及Summers, (Bio/Technology 6:47, 1988)中。適合之哺乳動物宿主細胞株的實例包括內皮細胞、COS-7猴腎細胞、CV-1、L細胞、C127、3T3、中國倉鼠卵巢(CHO)、人胚腎細胞、HeLa、293、293T及BHK細胞株。藉由培養合適的宿主/載體系統以表現重組蛋白來製備經純化之多肽。對於許多應用，本文中所揭示之多種多肽之小尺寸將使在大腸桿菌中表現成為較佳表現方法。接著，自培養基或細胞提取物純化蛋白質。可藉由轉殖基因宿主細胞表現任一種抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白。
本文所揭示之抗體及抗原結合蛋白亦可使用細胞轉譯系統產生。出於此類目的，編碼多肽之核酸必須加以修飾以允許活體外轉錄以產生mRNA，及允許使用不含特定細胞之系統中mRNA之無細胞轉譯(真核生物，諸如不含哺乳動物或酵母細胞之轉譯系統，或原核生物，諸如不含細菌細胞之轉譯系統)。
可以化學方式合成編碼本文中所揭示之多種多肽中之任一者的核酸。可選擇密碼子使用以改良細胞中之表現。此類密碼子使用將視所選細胞類型而定。已針對大腸桿菌及其他細菌，以及哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞及昆蟲細胞研發專用密碼子使用模式。參見例如：Mayfield等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003 100(2):438-42；Sinclair等人 Protein Expr. Purif. 2002 (1):96-105; Connell N D. Curr. Opin. Biotechnol. 2001 12(5):446-9；Makrides等人 Microbiol. Rev. 1996 60(3):512-38；及Sharp等人 Yeast. 1991 7(7):657-78。
本文所述之抗體及抗原結合蛋白亦可藉由化學合成產生(例如藉由Solid Phase Peptide Synthesis, 第2版, 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.中所述之方法)。對蛋白質之修飾亦可藉由化學合成產生。
本文所述之抗體及抗原結合蛋白可藉由蛋白質化學領域中通常已知之蛋白質分離/純化方法來純化。非限制性實例包括提取、再結晶、鹽析(例如用硫酸銨或硫酸鈉)、離心、透析、超濾、吸附層析、離子交換層析、疏水性層析、正相層析、逆相層析、凝膠過濾、凝膠滲透層析、親和層析、電泳、逆流分佈或此等方法之任何組合。在純化之後，多肽可交換至不同緩衝液中及/或藉由此項技術中已知的多種方法中之任一者濃縮，包括但不限於過濾及透析。
經純化之本文所述之抗體及抗原結合蛋白較佳為至少65%純的、至少75%純的、至少85%純的、更佳至少95%純的且最佳至少98%純的。與純度之精確數值無關，多肽足夠純以用作醫藥產品。本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者可由轉殖基因宿主細胞表現，且隨後使用任何技術已知方法純化至約65%-98%純度或高水準純度。
在某些實施例中，本文中的抗體及抗原結合蛋白可進一步包含轉譯後修飾。例示性轉譯後蛋白質修飾包括磷酸化、乙醯化、甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、糖基化、羰基化、蘇素化、生物素化或添加多肽側鏈或疏水性基團。因此，經修飾之多肽可含有非胺基酸元素，諸如脂質、多醣或單醣，及磷酸鹽。較佳糖基化形式為唾液酸化，其使一或多個唾液酸部分與多肽結合。唾液酸部分改善溶解性及血清半衰期，同時亦降低蛋白質之可能免疫原性。參見Raju等人 Biochemistry. 2001 31; 40(30):8868-76。
在實施例中，本文所述之抗體及抗原結合蛋白可加以修飾以變成可溶性多肽，包含使抗體及抗原結合蛋白連接至非蛋白質聚合物。在實施例中，非蛋白質聚合物以如美國專利第4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337號中所闡述之方式包含聚乙二醇(「PEG」)、聚丙二醇或聚氧化烯。
PEG為市售或可根據此項技術中熟知之方法藉由乙二醇之開環聚合製備的水溶性聚合物(Sandler及Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, 第3卷, 第138-161頁)。廣泛使用的術語「PEG」涵蓋任何聚乙二醇分子，不論PEG的尺寸或末端處的修飾，且可由下式表示：X-O(CH 2CH 2O) n-CH 2CH 2OH (1)，其中n為20至2300且X為H或末端修飾，例如C 1-4烷基。在實施例中，PEG在一端由羥基或甲氧基封端，亦即，X為H或CH 3(「甲氧基PEG」)。PEG可含有結合反應所需之其他化學基團；該等基團由分子之化學合成產生；或其為分子各部分之最佳距離之間隔基。此外，此類PEG可由連接在一起的一或多個PEG側鏈組成。具有超過一個PEG鏈之PEG稱為多臂或分支鏈PEG。分支鏈PEG可例如藉由向多種多元醇(包括丙三醇、季戊四醇及山梨糖醇)添加聚氧化乙烯來製備。舉例而言，可由季戊四醇及環氧乙烷製備四臂分支鏈PEG。分支鏈PEG描述於例如EP-A 0 473 084及美國專利第5,932,462號中。PEG之一種形式包括經由離胺酸之一級胺基連接的兩個PEG側鏈(PEG2)(Monfardini等人, Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69)。
相對於未修飾抗體及抗原結合蛋白結合多肽的清除率，可將經PEG修飾之多肽的血清清除率調節(例如增加或減少)約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或甚至90%。經PEG修飾之抗體及抗原結合蛋白的半衰期(t 1/2)相對於未修飾之多肽的半衰期可延長。相對於未修飾之多肽及抗原結合蛋白的半衰期，經PEG修飾之多肽的半衰期可延長至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、250%、300%、400%或500%或甚至1000%。在一些實施例中，活體外測定蛋白質半衰期，諸如在緩衝鹽水溶液或血清中。在其他實施例中，蛋白質半衰期為活體內半衰期，諸如蛋白質在動物血清或其他體液中的半衰期。
本發明提供治療性組合物，其包含本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者與醫藥學上可接受之賦形劑摻合。賦形劑涵蓋載劑、穩定劑及賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑的賦形劑包括例如惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖及山梨糖醇)、潤滑劑、助滑劑及抗黏著劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化矽、氫化植物油或滑石)。其他實例包括緩衝劑、穩定劑、防腐劑、非離子型洗滌劑、抗氧化劑及等張劑。
治療性組合物及其製備方法在此項技術中已熟知且見於例如「 Remington: The Science and Practice of Pharmacy」(第20版, A. R. Gennaro A R.編, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)。治療性組合物可針對非經腸投藥調配且可例如含有賦形劑、無菌水、鹽水、諸如聚乙二醇之聚伸烷基二醇、植物來源之油或氫化萘。生物相容性、生物可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物，或聚環氧乙烷-聚環氧丙烷共聚物可用於控制本文所述之抗體(或其抗原結合蛋白)的釋放。奈米粒子調配物(例如生物可降解的奈米粒子、固體脂質奈米粒子、脂質體)可用於控制抗體(或其抗原結合蛋白)的生物分佈。其他潛在適用之非經腸傳遞系統包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物粒子、滲透泵、可植入輸注系統及脂質體。調配物中之抗體(或其抗原結合蛋白)濃度視多種因素而變化，包括待投與之藥物劑量及投藥途徑。
抗ROR1抗體(或其抗原結合部分)中之任一者可作為醫藥學上可接受之鹽投與，諸如醫藥行業中常用之無毒的酸加成鹽或金屬錯合物。酸加成鹽之實例包括有機酸，諸如乙酸、乳酸、雙羥萘酸、順丁烯二酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、丁二酸、苯甲酸、棕櫚酸、辛二酸、柳酸、酒石酸、甲磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸或類似有機酸；聚合酸，諸如鞣酸、羧基甲基纖維素或類似聚合酸；及無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸或類似無機酸。金屬錯合物包括鋅、鐵及類似金屬錯合物。在一個實例中，在乙酸鈉存在下調配抗體(或其抗原結合部分)以增強熱穩定性。
抗ROR1抗體(或其抗原結合部分)中之任一者可經調配用於口服使用，包括含有活性成分與無毒的醫藥學上可接受之賦形劑混合的錠劑。口服使用之調配物亦可以咀嚼錠，或其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合之硬明膠膠囊，或其中活性成分與水或油介質混合之軟明膠膠囊形式提供。
如本文所用，術語「個體」係指人類及非人類動物，包括脊椎動物、哺乳動物及非哺乳動物。在實施例中，個體可為人類、非人類靈長類動物、猿猴、猿、鼠類(例如小鼠及大鼠)、牛類動物、豬類動物、馬類動物、犬科動物、貓科動物、山羊、狼、蛙科動物或魚類。
術語「投與(administering/administered)」及文法變化形式係指使用熟習此項技術者已知之多種方法及遞送系統中之任一者將藥劑以物理方式引入個體。本文所揭示之調配物之例示性投與途徑包括靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、脊柱或其他非經腸投與途徑，例如藉由注射或輸注。如本文所用，片語「非經腸投與」意謂除經腸及局部投與以外之投與模式，通常藉由注射進行，且包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、淋巴管內、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注，以及活體內電穿孔。在一些實施例中，調配物經由非不經腸途徑，例如經口投與。其他非不經腸途徑包括局部、表皮或經黏膜投與途徑，例如鼻內、經陰道、經直腸、舌下或局部。投與亦可例如進行一次、多次及/或經一或多個延伸之週期。本文所述之抗ROR1抗體(或其抗原結合蛋白)中之任一者可使用技術已知方法及遞送途徑向個體投與。
術語「有效量」、「治療有效量」或「有效劑量」或相關術語可互換使用，且係指抗體或抗原結合蛋白(例如本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者)在向個體投與時足以實現與腫瘤或癌症抗原表現相關之疾病或病症之可量測改進或預防的量。本文所提供之抗體當單獨或組合使用時的治療有效量將視抗體及組合的相對活性(例如在抑制細胞生長方面)而變且視以下因素而變：所治療的個體及疾病病狀、個體的體重及年齡及性別、個體疾病病狀的嚴重程度、投藥方式及其類似因素，此等因素可容易由一般技術者確定。
在實施例中，治療有效量將視待治療之個體及待治療之病症的某些方面而定且可由熟習此項技術者利用已知技術確定。通常，以每天約0.01 g/kg至約50 mg/kg，較佳每天0.01 mg/kg至約30 mg/kg，最佳每天0.1 mg/kg至約20 mg/kg投與多肽。多肽可每天投與(例如每天一次、兩次、三次或四次)或更佳地以更低頻率投與(例如每週、每兩週、每三週、每月或每季)。另外，如此項技術中已知，可能需要根據年齡以及體重、一般健康狀況、性別、飲食、投與時間、藥物相互作用及疾病嚴重程度進行調整。
本發明提供用於治療患有與ROR1之表現或過表現相關之疾病之個體的方法。疾病包含表現腫瘤相關抗原的癌細胞或腫瘤細胞。在實施例中，癌症或腫瘤包括慢性淋巴球性白血病(CLL)、乳癌、肺癌、胃癌、黑素瘤、大腸癌、腎細胞癌及淋巴瘤。
較高比例之人類癌症表現ROR1。舉例而言，Zhang等人展示其檢查之54%卵巢癌、57%結腸癌、77%肺癌、90%淋巴瘤、89%皮膚癌、83%胰臟癌、73%睾丸癌、43%膀胱癌、96%子宮癌、90%前列腺癌及83%腎上腺癌經抗ROR1抗體4A5中等至強度染色(Zhang等人, 2012, Am. J. Pathol., 181(6), 1903-1910)。Daneshmanesh等人相似地發現ROR1在CLL及毛細胞白血病(HCL)中之幾乎普遍表現及在其他淋巴癌症，諸如套細胞淋巴瘤(MCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)/邊緣區淋巴瘤(MZL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓淋巴瘤(AML)及骨髓瘤中之不同程度之表現(Daneshmanesh等人, 2013, Leuk. Lymphoma54(4), 843-850)。另外，顯著比例之患有肝細胞癌(hepatocellular cancer；HCC)或非小細胞肺癌(NSCLC)之患者為ROR1-陽性。此外，已表明ROR1表現在攻擊性癌症中增加且與不良預後相關。
在實施例中，癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞白血病(TCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、多發性骨髓瘤(MM)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)或已經歷李希特轉化之非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。在實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)、肝細胞癌、胰臟癌、骨肉瘤、頭頸癌、卵巢癌、乳癌或三陰性乳癌(TNBC)。在實施例中，抗體用於治療血液惡性病。在實施例中，抗體用於治療實體腫瘤。待治療之癌症可選自，例如淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、邊緣細胞B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、已經歷李希特轉化之非霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病、T細胞白血病、骨肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、上皮鱗狀細胞癌、黑素瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、非小細胞肺癌、胰臟癌、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睪丸癌、甲狀腺癌及頭頸癌。在實施例中，待治療之癌症可為難以用其他治療劑治療之癌症(例如三陰性乳癌)。在實施例中，癌症可為轉移癌、難治癒之癌症或復發性癌症。
本發明提供特異性結合ROR1之ROR1結合蛋白，特定言之抗ROR1抗體，或其抗原結合部分，及其用途。在實施例中，ROR1結合蛋白結合ROR1之抗原決定基。酪胺酸蛋白激酶跨膜受體ROR1亦稱作神經營養酪胺酸激酶，受體關聯1 (NTRKR1)(例如UniProt Q01973-1)。
該等抗ROR1抗體之多種態樣係關於抗體片段、單鏈抗體、醫藥組合物、核酸、重組表現載體、宿主細胞及用於製備及使用此類抗ROR1抗體之方法。用於使用該等抗ROR1抗體之方法包括用於結合ROR1、偵測ROR1及治療與ROR1表現相關之疾病的活體外及活體內方法。
本發明提供特異性結合ROR1多肽(例如抗原目標)或ROR1多肽之片段之抗原結合蛋白。在實施例中，ROR1目標抗原包含具有野生型或多型性或突變型胺基酸序列之天然存在之多肽(例如UniProt寄存編號Q01973-1)。ROR1目標抗原可藉由重組方法製備或可化學合成。ROR1目標抗原可呈可溶形式或膜結合形式(例如由細胞或噬菌體表現)。
在實施例中，ROR1目標抗原由細胞表現，例如天然表現ROR1或經工程改造以表現ROR1之癌症或非癌症細胞株，諸如A549、U-2197、ASC TERT1、CACO-2或HHSteC。不認為不表現ROR1之細胞株結合抗ROR1抗體，該等細胞株諸如Jurkat、Daudi或K562細胞株。ROR1目標抗原可為融合蛋白或例如與諸如螢光團之可偵測部分結合。ROR1目標抗原可為融合蛋白或與諸如His標籤之親和標籤結合。在實施例中，人類ROR1目標抗原包含SEQ ID NO: 1 (例如UniProt寄存編號Q01973-1)或SEQ ID NO: 2 (例如來自Acro Biosystems目錄號RO1-H522Y之重組his標記之人類ROR1 ECD)之胺基酸序列。
本發明提供一種結合至ROR1多肽之IgG類的完全人類抗體。在實施例中，抗ROR1抗體包含與SEQ ID NO: 10、20、30或40或其組合之胺基酸序列具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性之重鏈可變區；且/或抗ROR1抗體包含與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51或其組合之胺基酸序列具有95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在實施例中，抗ROR1抗體包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類抗體。在實施例中，抗ROR1抗體包含IgG1或IgG4類抗體。在實施例中，抗ROR1抗體包含IgG1類抗體。
在實施例中，抗ROR1抗體或其片段包含以10 -6M或更小、10 -7M或更小、10 -8M或更小、10 -9M或更小、或10 -10M或更小(參見圖1A至圖1E)之結合親和力(K D)結合ROR1目標抗原之抗原決定基的抗原結合部分。在實施例中，ROR1抗原包含細胞表面ROR1抗原或可溶ROR1抗原。在實施例中，ROR1抗原包含細胞表面ROR1抗原之胞外部分。在實施例中，ROR1抗原包含人類或非人類ROR1抗原。在實施例中，ROR1抗原由人類或非人類細胞表現。在實施例中，抗ROR1抗體由胚胎發生期間之許多組織表現。在實施例中，抗ROR1抗體由一些B細胞惡性病及多種癌細胞株表現。在實施例中，抗ROR1抗體由一些白血病及淋巴瘤表現。在實施例中，抗ROR1抗體結合由腺癌人類肺泡基底上皮細胞(A549)表現之人類ROR1。在實施例中，抗ROR1抗體結合由人類慢性淋巴球性白血病(CLL)B細胞表現之人類ROR1。在實施例中，可利用表面電漿子共振、流式細胞術及/或ELISA偵測及量測抗ROR1抗體或其片段之間的結合。
如本文所用，術語「交叉反應」係指本文所述之抗體能夠結合至來自不同物種之ROR1。本發明提供一種抗ROR1抗體，其結合來自人類之ROR1之抗原決定基，或可結合(例如交叉反應性)來自諸如小鼠、大鼠、山羊、兔、倉鼠及/或猴(例如食蟹獼猴)之非人類動物中之任一者或任何組合的ROR1 (例如同源抗原)的抗原決定基。在實施例中，抗ROR1抗體或抗原結合片段以10 -5M或更小、或10 -6M或更小、或10 -7M或更小、或10 -8M或更小、或10 -9M或更小、或10 -10M或更小之結合親和力K D結合人類ROR1 (ECD)。在實施例中，抗ROR1抗體或抗原結合片段以10 -5M或更小、或10 -6M或更小、或10 -7M或更小、或10 -8M或更小、或10 -9M或更小、或10 -10M或更小之結合親和力K D結合人類ROR1 Ig樣域。在實施例中，抗ROR1抗體或抗原結合片段以10 -5M或更小、或10 -6M或更小、或10 -7M或更小、或10 -8M或更小、或10 -9M或更小、或10 -10M或更小之結合親和力K D結合小鼠ROR1。
在實施例中，人類ROR1 (ECD) his可購自Acro Biosystems (目錄號RO1-H522Y)。在實施例中，人類ROR1 Ig樣域C-his可購自Acro Biosystems (目錄號RO1-H5221)。在實施例中，小鼠ROR1 his可購自Acro Biosystems (目錄號RO1-M5221)。
本發明提供一種結合ROR1之完全人類抗體，其中該抗體包含重鏈及輕鏈二者，其中該重鏈/輕鏈可變區胺基酸序列與以下胺基酸序列集合中之任一者具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性：SEQ ID NO: 10及11 (本文中稱作RO6D8-s10)、SEQ ID NO: 20及21 (本文中稱作RO6D8-jlv1011)、SEQ ID NO: 30及31 (本文中稱作RO6D8-O11)、SEQ ID NO: 40及41 (本文中稱作RO6A-a7gm)或SEQ ID NO: 40及51 (本文中稱作RO6A-a8gm)。
本發明提供一種Fab完全人類抗體片段，其包含來自重鏈之重可變區及來自輕鏈之可變區，其中來自重鏈之可變區之序列與SEQ ID NO: 10、20、30或40或其組合之胺基酸序列至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致。來自輕鏈之可變區之序列與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51或其組合之胺基酸序列至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致。
本發明提供一種Fab完全人類抗體片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈/輕鏈可變區胺基酸序列與以下胺基酸序列集合中之任一者至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致：SEQ ID NO: 10及11 (本文中稱作RO6D8-s10)、SEQ ID NO: 20及21 (本文中稱作RO6D8-jlv1011)、SEQ ID NO: 30及31 (本文中稱作RO6D8-O11)、SEQ ID NO: 40及41 (本文中稱作RO6A-a7gm)或SEQ ID NO: 40及51 (本文中稱作RO6A-a8gm)。
本發明提供一種單鏈完全人類抗體，其包含多肽鏈，該多肽鏈具有來自完全人類重鏈之可變區及來自完全人類輕鏈之可變區，及視情況存在之接合重鏈可變區及輕鏈可變區之連接子，其中重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 10、20、30或40或其組合之胺基酸序列至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51或其組合之胺基酸序列至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。
本發明提供一種單鏈完全人類抗體，其包含具有重鏈可變區及輕鏈可變區之多肽鏈，其中重鏈/輕鏈可變區胺基酸序列集合與以下胺基酸序列集合中之任一者至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致：SEQ ID NO: 10及11 (本文中稱作RO6D8-s10)、SEQ ID NO: 20及21 (本文中稱作RO6D8-jlv1011)、SEQ ID NO: 30及31 (本文中稱作RO6D8-O11)、SEQ ID NO: 40及41 (本文中稱作RO6A-a7gm)或SEQ ID NO: 40及51 (本文中稱作RO6A-a8gm)。
本發明提供醫藥組合物，其包含本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合蛋白中之任一者與醫藥學上可接受之賦形劑摻合。賦形劑涵蓋載劑及穩定劑。在實施例中，醫藥組合物包含抗ROR1抗體或其抗原結合片段，該抗ROR1抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈/輕鏈可變區胺基酸序列與以下胺基酸序列集合中之任一者至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致：SEQ ID NO: 10及11 (本文中稱作RO6D8-s10)、SEQ ID NO: 20及21 (本文中稱作RO6D8-jlv1011)、SEQ ID NO: 30及31 (本文中稱作RO6D8-O11)、SEQ ID NO: 40及41 (本文中稱作RO6A-a7gm)或SEQ ID NO: 40及51 (本文中稱作RO6A-a8gm)。
本發明提供一種套組，其包含本文所述之抗ROR1抗體或其抗原結合片段中之兩種或更多種中之任一者或任何組合。在一個實施例中，套組包含抗ROR1抗體或其抗原結合片段中之兩種或更多種中之任一者或任何組合，該抗ROR1抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈/輕鏈可變區胺基酸序列與以下胺基酸序列集合中之任一者至少95%一致、或至少96%一致、或至少97%一致、或至少98%一致、或至少99%一致：SEQ ID NO: 10及11 (本文中稱作RO6D8-s10)、SEQ ID NO: 20及21 (本文中稱作RO6D8-jlv1011)、SEQ ID NO: 30及31 (本文中稱作RO6D8-O11)、SEQ ID NO: 40及41 (本文中稱作RO6A-a7gm)或SEQ ID NO: 40及51 (本文中稱作RO6A-a8gm)。
套組可用於偵測例如生物樣品中之ROR1抗原的存在或不存在。套組可用於進行活體外反應，諸如呈ELISA、流式細胞術或等離子體表面共振形式的抗原結合分析；活體外細胞活化分析；螢光素酶報導體分析；西方墨點法及偵測；以及其他此類活體外分析。套組可用於治療患有與ROR1相關之疾病或病狀之個體，該疾病或病狀諸如B細胞慢性淋巴球性白血病(CLL)。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-s10)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-jlv1011)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之重鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-O11)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之重鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a7gm)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之重鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a8gm)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之重鏈CDR3區。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。在一個實施例中，第一載體包含表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-s10)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈CDR3區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-jlv1011)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之重鏈CDR3區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-O11)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之重鏈CDR3區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a7gm)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之重鏈CDR3區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第一載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a8gm)重鏈可變區之第一多肽之第一核酸，該重鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之重鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之重鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之重鏈CDR3區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個啟動子。
本發明提供含有可操作地連接至第一核酸之第一載體的第一宿主細胞，該第一核酸編碼與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性之抗ROR1抗體重鏈可變區。在一個實施例中，第一載體包含第一表現載體。在一個實施例中，第一宿主細胞表現包含與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體重鏈可變區的第一多肽。
本發明提供一種用於製備具有抗體重鏈可變區之第一多肽之方法，該方法包含：在適合於表現具有與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體重鏈可變區之第一多肽的條件下，培養含有第一表現載體之第一宿主細胞群(例如複數個第一宿主細胞)。在一個實施例中，該方法進一步包含：自第一宿主細胞群回收所表現之與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的第一多肽。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-s10)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-jlv1011)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-O11)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a7gm)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。
本發明提供編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a8gm)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-s10)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-jlv1011)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6D8-O11)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a7gm)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供第二載體，其可操作地連接至編碼包含抗ROR1抗體(例如RO6A-a8gm)輕鏈可變區之第二多肽之第二核酸，該輕鏈可變區具有：具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之輕鏈互補決定區1 (CDR1)、具有SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之輕鏈CDR2區及具有SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之輕鏈CDR3區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個啟動子。
本發明提供含有可操作地連接至第二核酸之第二載體的第二宿主細胞，該第二核酸編碼與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性之抗ROR1抗體輕鏈可變區。在一個實施例中，第二載體包含第二表現載體。在一個實施例中，第二宿主細胞表現包含與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體輕鏈可變區的第二多肽。
本發明提供一種用於製備具有抗體輕鏈可變區之第二多肽之方法，該方法包含：在適合於表現具有與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體輕鏈可變區之第二多肽的條件下，培養含有第二表現載體之第二宿主細胞群(例如複數個第二宿主細胞)。在一個實施例中，該方法進一步包含：自第二宿主細胞群回收所表現之與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的第二多肽。
本發明提供第一及第二核酸，其中(a)第一核酸編碼包含抗ROR1抗體重鏈可變區之第一多肽，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性，且(b)第二多肽包含抗ROR1抗體輕鏈可變區，該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。
本發明提供一種可操作地連接至第一及第二核酸之載體，其中(a)第一核酸編碼包含抗ROR1抗體重鏈可變區之第一多肽，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性，且(b)第二多肽包含抗ROR1抗體輕鏈可變區，該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。在一個實施例中，載體包含表現載體。在一個實施例中，載體包含可操作地連接至第一核酸的至少一個第一啟動子。在一個實施例中，載體包含可操作地連接至第二核酸的至少一個第二啟動子。
本發明提供一種含有可操作地連接至第一及第二核酸之載體之宿主細胞，其中(a)第一核酸編碼包含抗ROR1抗體重鏈可變區之第一多肽，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性，且(b)第二核酸編碼包含抗ROR1抗體輕鏈可變區之第二多肽，該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51具有至少95%序列一致性、或至少96%序列一致性、或至少97%序列一致性、或至少98%序列一致性、或至少99%序列一致性。在一個實施例中，載體包含表現載體。在一個實施例中，宿主細胞表現(a)第一多肽，該第一多肽包含與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體重鏈可變區，及(b)第二多肽，該第二多肽包含與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體輕鏈可變區。
本發明提供一種用於製備具有抗體重鏈可變區之第一多肽及具有抗體輕鏈可變區之第二多肽的方法，該方法包含：培養含有表現載體的宿主細胞群(例如複數個宿主細胞)，該表現載體可操作地連接至分別編碼第一及第二多肽的第一及第二核酸。在一個實施例中，培養係在以下條件下進行：該等條件適於表現(a)具有與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體重鏈可變區的第一多肽；及(b)具有與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體輕鏈可變區的第二多肽。在一個實施例中，該方法進一步包含：自宿主細胞群回收所表現之第一多肽及所表現之第二多肽，該第一多肽具有與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之抗體重鏈可變區，該第二多肽與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。
在一個實施例中，宿主細胞或宿主細胞群含有一或多種表現載體，該等表現載體可導引轉殖基因瞬時引入宿主細胞中或導引轉殖基因穩定插入宿主細胞基因體中，其中該轉殖基因包含編碼本文所述之第一及/或第二多肽中之任一者的核酸。表現載體可導引轉殖基因在宿主細胞中的轉錄及/或轉譯。表現載體可包括一或多種調控序列，諸如誘導型及/或組成型啟動子及增強子。表現載體可包括核糖體結合位點及/或聚腺苷酸化位點。在一個實施例中，可操作地連接至編碼第一及/或第二多肽之核酸的表現載體可導引第一及/或第二多肽的產生，該第一及/或第二多肽可呈現於轉殖基因宿主細胞的表面上，或該第一及/或第二多肽可分泌於細胞培養基中。
本發明提供用於抑制目標細胞生長或增殖之方法，或用於殺死目標細胞之方法，該方法包含：在適合於殺死目標細胞之條件下，在抗ROR1抗體(或其抗體片段)存在下，使效應細胞群與目標細胞群(例如表現ROR1之目標細胞)接觸。在實施例中，效應細胞群包含外周血液單核細胞(PBMC)或自然殺手(NK)細胞。PBMC可包括淋巴細胞，包括T細胞、B細胞及/或NK細胞。在實施例中，目標細胞群包含天然表現ROR1之細胞，包括套細胞淋巴瘤(MCL)、B細胞慢性淋巴球性白血病(CLL)細胞，或來自患有與ROR1表現相關之癌症之個體的任何類型的實體腫瘤細胞。在實施例中，目標細胞群係經工程改造以表現ROR1之任何類型的轉殖基因細胞。在實施例中，效應細胞:目標細胞之比可為約1:1、或約2:1、或約3:1、或約4:1、或約5:1、或約5:1至10:1、或約10:1至20:1、或約20:1至30:1。
本發明提供用於治療患有與ROR1表現相關之疾病之個體的方法，該方法包含：向個體投與有效量之治療性組合物，該治療性組合物包含抗ROR1抗體或其抗原結合片段，該抗ROR1抗體或其抗原結合片段係選自由以下組成之群：本文所述之完全人類抗ROR1抗體中之任一者、本文所述之Fab完全人類抗ROR1抗體中之任一者及本文所述之單鏈人類抗ROR1抗體中之任一者。在實施例中，與ROR1表現相關之疾病係癌症。在實施例中，與ROR1表現相關之疾病包含：慢性淋巴球性白血病(CLL)、乳癌、肺癌、胃癌、黑素瘤、大腸癌、腎細胞癌及淋巴瘤。
在實施例中，與ROR1表現相關之疾病係癌症，包括慢性淋巴球性白血病(CLL)、毛細胞白血病(HCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性淋巴瘤(AML)、骨髓瘤、T細胞白血病(TCL)、伯基特氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤(MM)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、已經歷李希特轉化之非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肝細胞癌、胰臟癌、骨肉瘤、頭頸癌、卵巢癌、乳癌或三陰性乳癌(TNBC)。淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、邊緣細胞B細胞淋巴瘤、腎細胞癌、大腸癌、大腸直腸癌、上皮鱗狀細胞癌、黑素瘤、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、子宮頸癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌或甲狀腺癌。
在實施例中，癌症為轉移癌、難治癒之癌症或復發性癌症。
可單獨使用抗ROR1抗體以抑制癌性腫瘤之生長。在實施例中，抗ROR1抗體可與另一藥劑結合使用，以治療與ROR1表現(或升高之ROR1表現)相關之疾病，另一藥劑例如其他免疫原性藥劑、標準癌症治療或其他抗體。
在實施例中，與ROR1表現相關之疾病係癌症。在實施例中，該方法用於治療患有表現ROR1之癌症之個體，該方法包含：向個體投與有效量之治療性組合物，該治療性組合物包含抗ROR1抗體或其抗原結合片段，該抗ROR1抗體或其抗原結合片段係選自由以下組成之群：本文所述之完全人類抗ROR1抗體中之任一者、本文所述之Fab完全人類抗ROR1抗體中之任一者及本文所述之單鏈人類抗ROR1抗體中之任一者。該方法進一步包含共同投與適合於治療癌症之細胞毒性劑、細胞抑制劑或抗血管生成劑。若癌症為B細胞惡性病，則該方法可進一步包括例如共同投與利妥昔單抗(rituximab)、阿侖單抗(阿侖單抗)、奧伐木單抗(ofatumumab)或CHOP化學治療療程。 序列表 ：
人類ROR1蛋白(UniProt Q01973-1) SEQ ID NO:1：
Figure 02_image001
重組截短人類his標籤ROR1細胞外域蛋白(SEQ ID NO: 1之胺基酸30-403具有羧基末端聚組胺酸標籤) SEQ ID NO: 2：
Figure 02_image003
重組截短人類his標籤ROR1 Ig樣域(SEQ ID NO: 1之胺基酸39-151具有羧基末端聚組胺酸標籤) SEQ ID NO: 3：
Figure 02_image005
表 1 ：
重鏈可變域： 輕鏈可變域：
RO6D8wt                                   SEQ ID NO:4 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDSSSWYSGWYFDLWGQGTTVTVSS RO6D8wt                                   SEQ ID NO:5 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVRAHLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQGTRLEIK
RO6D8-s10                              SEQ ID NO:10 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSSRSSYYLWVLDLWGQGTTVTVSS RO6D8-s10                               SEQ ID NO:11 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVSTEIAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQGTRLEIK
RO6D8-s10                              SEQ ID NO:12 HC   CDR1: NYYMH RO6D8-s10                               SEQ ID NO:15 LC   CDR1: RASQGVSTEIA
RO6D8-s10                              SEQ ID NO:13 HC   CDR2: IINPSGGSTSYAQKFQG RO6D8-s10                               SEQ ID NO:16 LC   CDR2: AASSLQS
RO6D8-s10                              SEQ ID NO:14 HC   CDR3: SSRSSYYLWVLDL RO6D8-s10                               SEQ ID NO:17 LC   CDR3: QQFNSYPIT
RO6D8-jlv1011                       SEQ ID NO:20 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSKYYHWVRQAPGQGLEWMGIINPTSGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDSSRYSGWYFDLWGQGTTVTVSS RO6D8-jlv1011                         SEQ ID NO:21 AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVS TEIAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ QYYGYPIAFGQGTRLEIK
RO6D8-jlv1011                       SEQ ID NO:22 HC   CDR1: SKYYH RO6D8-jlv1011                         SEQ ID NO:25 LC   CDR1: RASQGVSTEIA
RO6D8-jlv1011                       SEQ ID NO:23 HC   CDR2: IINPTSGSTSYAQKFQG RO6D8-jlv1011                         SEQ ID NO:26 LC   CDR2: AASSLQS
RO6D8-jlv1011                       SEQ ID NO:24 HC   CDR3: DSSRYSGWYFDL RO6D8-jlv1011                         SEQ ID NO:27 LC   CDR3: QQYYGYPIA
RO6D8-O11                            SEQ ID NO:30 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPTSGRTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDSSSWYSGWYFDLWGQGTTVTVSS RO6D8-O11                              SEQ ID NO:31 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRTDLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYGYPIAFGQGTRLEIK
RO6D8-O11                            SEQ ID NO:32 HC   CDR1: NYYMH RO6D8-O11                              SEQ ID NO:35 LC   CDR1: RASQGIRTDLA
RO6D8-O11                            SEQ ID NO:33 HC   CDR2: IINPTSGRTSYAQKFQG RO6D8-O11                              SEQ ID NO:36 LC   CDR2: AASSLQS
RO6D8-O11                            SEQ ID NO:34 HC   CDR3: DSSSWYSGWYFDL RO6D8-O11                              SEQ ID NO:37 LC   CDR3: QQYYGYPIA
RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:40 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWVSYISGSSAYSNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLLYGWLTDWGQGTLVTVSS RO6A-a7gm                              SEQ ID NO:41 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYINDAVFFGGGTKLTVL
RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:42 HC   CDR1: DYYMT RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:45 LC   CDR1: TGTSS
RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:43 HC   CDR2: YISGSSAYSNYADSVKG RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:46 LC   CDR2: EVSKRPS
RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:44 HC   CDR3: DPLLYGWLTD RO6A-a7gm                                  SEQ ID NO:47 LC   CDR3: SSYINDAVF
RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:40 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEWVSYISGSSAYSNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPLLYGWLTDWGQGTLVTVSS RO6A-a8gm                              SEQ ID NO:51 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDGGGYDSVSWYQQHPGKAPKLMIYDVNKRPSGVSGRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSFTSDVMVFGGGTKLTVL
RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:42 HC   CDR1: DYYMT RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:55 LC   CDR1: TGTSSDGGGYDSVS
RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:43 HC   CDR2: YISGSSAYSNYADSVKG RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:56 LC   CDR2: DVNKRPS
RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:44 HC   CDR3: DPLLYGWLTD RO6A-a8gm                                  SEQ ID NO:57 LC   CDR3: SSFTSDVMV
實例以下實例意欲說明且可用於進一步瞭解本發明之實施例且不應解釋為以任何方式限制本教示之範疇。
實例 1 ： 利用表面電漿子共振來量測結合親和力 .使用表面電漿子共振(SPR)量測抗ROR1抗體與his標記之ROR1蛋白的結合動力學。所測試之抗ROR1抗體包括專用的抗體RO6D8wt、RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011及RO6D8-O11。使用標準的N-羥基丁二醯亞胺/N-乙基-N'-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(NHS/EDC)偶合方法，使抗人類片段可結晶區(Fc區)抗體固著於CM5感測晶片上直至大約8,000 RU。以10 µL/分鐘之流動速率捕獲抗ROR1抗體(1-2 µg/mL)持續60秒。his標記之ROR1蛋白包括SEQ ID NO: 1之胺基酸30至胺基酸403 (即SEQ ID NO: 2)(Acro Biosystems；目錄號RO1-H522Y)。此多肽在0.01 M HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.05 v/v%界面活性劑P20 (HBS-EP+)之操作緩衝液中連續稀釋，且在6種不同稀釋液中操作。所有量測均在HBS-EP+緩衝液中以30微升/分鐘之流速進行。使用1:1 (朗格繆爾(Langmuir))結合模型擬合資料。所有BIACORE分析在室溫下使用Biacore T200表面電漿子共振(GE Healthcare)進行。
抗ROR1抗體RO6D8wt、RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011及RO6D8-O11之SPR感測器圖譜分別顯示於圖1A至圖1D中，且其相對應的結合動力學在圖1E中所示之表格中列出。抗人類ROR1抗體RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011及RO6D8-O11對其同源抗原展示出nM範圍內之親和力。
實例 2 ： ELISA 交叉反應性 .藉由ELISA分析來分析抗人類ROR1抗體與來自人類及小鼠之his標記之ROR1重組蛋白的交叉反應性。用PBS緩衝液稀釋抗體5 μg/mL (RO6D8wt、RO6D8-s10、RO6D8-glv1011、RO6D8-jlv1011、RO6D8-lv1011)且以50 μL/孔塗佈於盤上，或對照緩衝液以50 μL/孔塗佈於盤上。用150 μL/孔之PBS-T (PBS1X，補充有0.05% Tween 20)洗滌盤三次。隨後，在室溫下用100 μL/孔之阻斷緩衝液(阻斷劑酪蛋白於PBS中，來自Bioworld，目錄號40320020-2)阻斷該盤持續1小時。在阻斷後，用150 μL/孔之PBS-T洗滌盤3次。重組小鼠his標籤ROR1，2 μg/ml (Acro Biosystems目錄號RO1-M5221，批次：1201-48ESI-65)，人類his標籤ROR1細胞外域(SEQ ID NO: 2)，1 μg/ml (Acro Biosystems目錄號RO1-H522Y，批次：C81-76KF1-FR)，人類his標籤ROR1 Ig樣域C-his，2 μg/ml (Acro Biosystems目錄號RO1-H5221，批次：B311-59SSI-CA)，人類his標籤CD138，2 μg/ml (Sino目錄號11429-H08H，批次：LCL07NO0412) (陰性對照抗體)，及酪蛋白/PBS緩衝液(對照)。將30 μl之his標記之ROR1抗原、his標記之CD138或酪蛋白/PBS緩衝液添加至盤中各孔，且在室溫下培育1小時。用150 μL/孔之PBS-T洗滌盤三次，且抗6x-his (SEQ ID NO:58)標籤抗體HRP (Abcam；目錄號Ab1187)以1:5,000稀釋，30 μL/孔於室溫下培育1小時。隨後，用150 μL/孔之PBS-T洗滌盤三次，且藉由施加30 μL/孔之SureBlue TMTMB-1組分微孔過氧化酶基質(Thermo Scientific；目錄號34028)展現結合。藉由使用15 μL/孔之2 N硫酸(H 2SO 4)停止溶液在所需飽和點停止信號，且在450 nm處在盤讀取器上讀取。
圖2A展示抗人類ROR1抗體RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011及RO6D8wt結合人類ROR1 ECD (細胞外域)、人類ROR1 Ig樣域及小鼠ROR1蛋白。
在另一實驗中，使用ELISA分析來分析不同濃度下抗人類ROR1抗體之交叉反應性。第0天：96孔盤(Corning；目錄號3690，批次號34117018)塗佈有50 μL/孔之2 µg/mL之重組小鼠ROR1-小鼠IgG 2-Fc融合蛋白(R&D Systems；目錄號9910-RO-050，批次號DIWM0120121)，將盤密封且在4℃下培育隔夜。
第1天：用150 μL/孔之洗滌緩衝液(DPBS1X具有0.05% V/V Tween20)洗滌該盤。藉由使用阻斷緩衝液(80 μL/孔，DPBS1X具有2% BSA (Sigma Aldrich；目錄號AB412，批次號SLBT5979) + 0.05% Tween20 (Sigma Aldrich；目錄號P9416-50mL，批次號SLBW5532)阻斷非特異性結合，且使該盤在37℃下培育1小時。隨後，用洗滌緩衝液洗滌該盤兩次。人類抗ROR1抗體(RO6D8-jlv1011，RO6D8-s10)以1.0E+00至1.7E-06 µg/mL (3倍稀釋)範圍內之濃度在阻斷緩衝液中培育(80 μL/孔)。兩個孔不用任何抗ROR1抗體培育，且僅用於二級抗體對照(陰性對照)。該盤在室溫下於混和器上培育2小時。隨後，用洗滌緩衝液洗滌該盤三次。隨後，將二級山羊抗人類IgG-Fc、小鼠/牛/馬SP ads-HRP (SouthernBiotech；目錄號2081-05；批次號L5311-TE40)以1:2,000於阻斷緩衝液中稀釋且以80 μL/孔添加至孔中。在37℃下於暗處將盤培育1小時。在用洗滌緩衝液洗滌三次後，將80 μL/孔之SureBlue Reserve TMB 1-組分微孔過氧化酶基質溶液(Sera Care；目錄號5120-0082)添加至各孔中，且在室溫下於暗處將盤培育10-12分鐘(密切監測該盤，且視顯色而定，縮短或延長培育)。藉由添加50 μL/孔之TMB Blue停止溶液(Sera care；目錄號5150-0022)使顯色停止，且使用Tecan Spark讀取450 nm處之吸光度。
圖2B展示抗人類ROR1抗體RO6D8-s10及RO6D8-jlv1011結合小鼠ROR1蛋白。
實例 3 ： 藉由流式細胞術之細胞結合分析 .流式細胞術用於使用多種抗ROR1抗體測試抗體結合腺癌人類肺泡基底上皮細胞株A549 (ROR1+)及人類T淋巴球細胞株Jurkat之永生化株(ROR1陰性)。細胞以1×10 6/ml於FACS緩衝液(PBS，2%FBS，及0.05%疊氮化合物)中之濃度製備。將細胞以30 μL/孔接種於V形底96孔盤中。抗ROR1抗體(在RO6D8wt用作對照之情況下)於FACS緩衝液(自50μg/ml開始5×連續稀釋)中稀釋，且在冰上將30 μl添加至具有A549或Jurkat細胞之各孔中持續60分鐘。在培育後，使細胞在2000 rpm下離心5分鐘，倒出上清液。在用200 μL/孔之FACS緩衝液洗滌1次後，在冰上用AF647山羊抗人類Fab2抗體(Jackson ImmunoResearch；目錄號109-606-088) (於FACS緩衝液中1:2000稀釋)以50 μL/孔培育細胞40分鐘。在培育後，使細胞在2000 rpm下離心5分鐘，倒出上清液。在用200 μL/孔之FACS緩衝液洗滌1次後，將細胞再懸浮於30 μl之FACS緩衝液中，且藉由流式細胞術使用IntelliCyt讀數獲取。
圖3A展示野生型抗人類ROR1抗體結合表現ROR1之A549細胞及ROR1陰性Jurkat細胞。圖3B及圖3C展示抗人類ROR1抗體RO6D8-s10及RO6D8-jlv1011分別結合表現ROR1之A549細胞及ROR1陰性Jurkat細胞。抗人類ROR1抗體RO6D8-s10及RO6D8-jlv1011展示劑量依賴性地結合A549細胞表面表現之其同源抗原，且不結合ROR1陰性Jurkat細胞。抗人類ROR1抗體RO6D8-s10及RO6D8-jlv1011，相比於野生型抗人類ROR1抗體展現更強的結合力、提高的親和力及特異性。
實例 4 ： 藉由流式細胞術之細胞結合分析 .流式細胞術用於測試抗體結合腺癌人類肺泡基底上皮細胞株A549 (ROR1+)、伯基特氏淋巴瘤細胞株RAJI (ROR1+)、乳癌細胞株(ROR1+)、ROR1陰性之A549 ROR1-KO細胞株(ROR1基因敲除)、及Duke氏B型腺癌細胞株LS174T (ROR1陰性)。
將30,000個細胞轉移至V形底96孔盤中。將細胞以1,900 rpm短暫離心3分鐘。
用低溫FACS緩衝液(PBS1X + 2% FCS + 2 mM EDTA)洗滌細胞兩次。將細胞以1,900 rpm短暫離心2分鐘，且藉由快速輕擊盤移除上清液。
另一96孔盤(圓底，超低附接，目錄號3474，Corning)用於抗體稀釋。所有抗體(RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011、RO6A-a7gm、RO6A-a8gm及同型對照IgG1)於FACS緩衝液(PBS +2% FCS+ 2 mM EDTA)中自最高濃度10 µg/mL (10-0.0006 µg/mL)進行4倍連續稀釋。
將細胞再懸浮於100 μL/孔之含有多種濃度之抗ROR1抗體及同型對照IgG1之FACS緩衝液中，且在4℃下培育30分鐘。
將細胞以1,900 rpm短暫離心2分鐘，且藉由快速輕擊盤移除上清液。
細胞用200 μL/孔之FACS緩衝液洗滌。將細胞以1,900 rpm短暫離心2分鐘，且藉由快速輕擊盤移除上清液。重複洗滌步驟兩次。
將細胞再懸浮於120 μL/孔之含有山羊抗人類IgG AF647 (1:2,000，Southern Biotech，目錄號2040-31，批次號D1817-T817C)之FACS緩衝液中，且在4℃下於暗處將盤培育20分鐘。
細胞用200 μL/孔之FACS緩衝液洗滌。將細胞以1,900 rpm短暫離心2分鐘，且藉由快速輕擊盤移除上清液。重複洗滌步驟兩次。
將細胞再懸浮於120 μL/孔之FACS緩衝液中，且藉由流式細胞術獲取80 µL於Attune NxT上，且藉由使用FlowJo分析資料。
圖4A至圖4E展示抗人類ROR1抗體RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011、RO6A-a7gm及RO6A-a8gm結合表現ROR1之細胞A549 (圖4A)、Raji (圖4B)及MCF7 (圖4C)細胞；及ROR1陰性A549 ROR1-KO (圖4D)及LS174T (圖4E)細胞。抗人類ROR1抗體RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011、RO6A-a7gm及RO6A-a8gm展示劑量依賴性地結合A549、Raji及MCF7細胞表面表現之其同源抗原；且不結合ROR1陰性A549 ROR1-KO及LS174T細胞。
圖 1A展示RO6D8wt抗體之結合動力學之SPR感測器圖譜。
圖 1B展示RO6D8-s10抗體之結合動力學之SPR感測器圖譜。
圖 1C展示RO6D8-jlv1011抗體之結合動力學之SPR感測器圖譜。
圖 1D展示RO6D8-o11抗體之結合動力學之SPR感測器圖譜。
圖 1E展示概述獲自圖1A至圖1D之SPR資料之抗體RO6D8wt、RO6D8-s10、RO6D8-jlv1011及RO6D8-o11與ROR1抗原的結合動力學的表。
圖 2A係展示多種抗ROR1抗體與人類及小鼠ROR1蛋白之交叉反應性之ELISA分析結果之條形圖。
圖 2B展示對於RO6D8-s10及RO6D8-jlv1011，小鼠交叉反應性隨抗體濃度變化的圖。
圖 3A展示抗ROR1抗體RO6D8wt結合表現ROR1之細胞A549及ROR1陰性細胞Jurkat之細胞結合分析的圖。
圖 3B展示抗ROR1抗體RO6D8-s10結合表現ROR1之細胞A549及ROR1陰性細胞Jurkat之細胞結合分析的圖。
圖 3C展示抗ROR1抗體RO6D8-jlv1011結合表現ROR1之細胞A549及ROR1陰性細胞Jurkat之細胞結合分析的圖。
圖 4A 至圖 4E展示抗ROR1抗體RO6D8-s10、RO6D8-Jlv1011、RO6A-a7gm及RO6A-a8gm結合表現ROR1之細胞A549 (圖4A)、RAJI (圖4B)及MCF7 (圖4C)及ROR1陰性細胞A549 ROR1-KO (圖4D)及LS174T (圖4E)的細胞結合分析的圖。 

          <![CDATA[<110>  美商索倫多醫療公司(SORRENTO THERAPEUTICS, INC.)]]>
          <![CDATA[<120>  結合ROR1之抗原結合蛋白]]>
          <![CDATA[<130>  01223-0097-00PCT]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/173,150]]>
          <![CDATA[<151>  2021-04-09]]>
          <![CDATA[<160>  58    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  937]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Leu Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Ala Ala Gln Glu Thr 
                      20                  25                  30          
          Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Ile 
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Glu Leu Asn Lys Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met 
              50                  55                  60                  
          Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala 
                          85                  90                  95      
          Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr 
                      100                 105                 110         
          Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr 
                  115                 120                 125             
          Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly 
              130                 135                 140                 
          Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr Ala Ser Pro Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg Gly Ile 
                          165                 170                 175     
          Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe Thr Met 
                  195                 200                 205             
          Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe Ala Ile 
              210                 215                 220                 
          Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr Ser Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu Ile Leu Glu 
                          245                 250                 255     
          Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn Pro Met 
                      260                 265                 270         
          Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro Gln Pro 
                  275                 280                 285             
          Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro Met Ala 
              290                 295                 300                 
          Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly Val Asp 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys Gln Pro 
                          325                 330                 335     
          Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe Thr Ala Leu Arg Phe 
                      340                 345                 350         
          Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly Asn Gln 
                  355                 360                 365             
          Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys Ser Asp 
              370                 375                 380                 
          Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu Lys Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser Val Ala Ile Pro Leu 
                          405                 410                 415     
          Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn Asn Gln 
                      420                 425                 430         
          Lys Ser Ser Ser Ala Pro Val Gln Arg Gln Pro Lys His Val Arg Gly 
                  435                 440                 445             
          Gln Asn Val Glu Met Ser Met Leu Asn Ala Tyr Lys Pro Lys Ser Lys 
              450                 455                 460                 
          Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser Ala Val Arg Phe Met Glu Glu Leu Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Glu Cys Ala Phe Gly Lys Ile Tyr Lys Gly His Leu Tyr Leu Pro Gly 
                          485                 490                 495     
          Met Asp His Ala Gln Leu Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Asp Tyr Asn 
                      500                 505                 510         
          Asn Pro Gln Gln Trp Thr Glu Phe Gln Gln Glu Ala Ser Leu Met Ala 
                  515                 520                 525             
          Glu Leu His His Pro Asn Ile Val Cys Leu Leu Gly Ala Val Thr Gln 
              530                 535                 540                 
          Glu Gln Pro Val Cys Met Leu Phe Glu Tyr Ile Asn Gln Gly Asp Leu 
          545                 550                 555                 560 
          His Glu Phe Leu Ile Met Arg Ser Pro His Ser Asp Val Gly Cys Ser 
                          565                 570                 575     
          Ser Asp Glu Asp Gly Thr Val Lys Ser Ser Leu Asp His Gly Asp Phe 
                      580                 585                 590         
          Leu His Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ala Gly Met Glu Tyr Leu Ser Ser 
                  595                 600                 605             
          His Phe Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Ile Gly 
              610                 615                 620                 
          Glu Gln Leu His Val Lys Ile Ser Asp Leu Gly Leu Ser Arg Glu Ile 
          625                 630                 635                 640 
          Tyr Ser Ala Asp Tyr Tyr Arg Val Gln Ser Lys Ser Leu Leu Pro Ile 
                          645                 650                 655     
          Arg Trp Met Pro Pro Glu Ala Ile Met Tyr Gly Lys Phe Ser Ser Asp 
                      660                 665                 670         
          Ser Asp Ile Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Phe Ser Phe 
                  675                 680                 685             
          Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly Phe Ser Asn Gln Glu Val Ile Glu Met 
              690                 695                 700                 
          Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu Pro Cys Ser Glu Asp Cys Pro Pro Arg 
          705                 710                 715                 720 
          Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu Cys Trp Asn Glu Ile Pro Ser Arg Arg 
                          725                 730                 735     
          Pro Arg Phe Lys Asp Ile His Val Arg Leu Arg Ser Trp Glu Gly Leu 
                      740                 745                 750         
          Ser Ser His Thr Ser Ser Thr Thr Pro Ser Gly Gly Asn Ala Thr Thr 
                  755                 760                 765             
          Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala Ser Pro Val Ser Asn Leu Ser Asn Pro 
              770                 775                 780                 
          Arg Tyr Pro Asn Tyr Met Phe Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro Gln Gly 
          785                 790                 795                 800 
          Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Pro Ile Pro Gln Asn Gln Arg Phe 
                          805                 810                 815     
          Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala Phe Pro 
                      820                 825                 830         
          Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln His Cys 
                  835                 840                 845             
          Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ser 
              850                 855                 860                 
          Thr Gly His Val Thr Ser Leu Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln Glu Ala 
          865                 870                 875                 880 
          Asn Ile Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro Asn His Pro Gly Gly 
                          885                 890                 895     
          Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr Lys Ile 
                      900                 905                 910         
          Asp Ser Lys Gln Ala Ser Leu Leu Gly Asp Ala Asn Ile His Gly His 
                  915                 920                 925             
          Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Leu 
              930                 935         
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  380]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重組截短人類his標籤ROR1細胞外域蛋白(SEQ ID NO: 1之]]>
                 胺基酸30-403具有羧基末端聚組胺酸標籤 
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Gln Glu Thr Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
          Trp Asn Ile Ser Ser Glu Leu Asn Lys Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp 
                      20                  25                  30          
          Glu Pro Met Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu 
                  35                  40                  45              
          His Cys Lys Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys 
              50                  55                  60                  
          Asn Asp Ala Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Ile Tyr Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp 
                          85                  90                  95      
          Thr Gly Tyr Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Pro Gly Tyr Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr 
              130                 135                 140                 
          Arg Gly Ile Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Leu His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala 
                          165                 170                 175     
          Phe Thr Met Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln 
                      180                 185                 190         
          Phe Ala Ile Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu 
                  195                 200                 205             
          Thr Ser Ser Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu 
              210                 215                 220                 
          Ile Leu Glu Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Pro Met Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu 
                          245                 250                 255     
          Pro Gln Pro Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile 
                      260                 265                 270         
          Pro Met Ala Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr 
                  275                 280                 285             
          Gly Val Asp Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln 
              290                 295                 300                 
          Cys Gln Pro Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe Thr Ala 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Arg Phe Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro 
                          325                 330                 335     
          Gly Asn Gln Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe 
                      340                 345                 350         
          Lys Ser Asp Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys 
                  355                 360                 365             
          Glu Lys Asn Lys Met Glu His His His His His His 
              370                 375                 380 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重組截短人類his標籤ROR1 Ig樣域(SEQ ID NO: 1之]]>
                 胺基酸39-151具有羧基末端聚組胺酸標籤) 
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Ile Ser Ser Glu Leu Asn Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met Asn Asn Ile Thr Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys Val Ser Gly Asn Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala Pro Val Val Gln Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr Gly Ser Arg Leu Arg Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr Phe Gln Cys Val Ala Thr 
                          85                  90                  95      
          Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys Phe 
                      100                 105                 110         
          Gly His His His His His His 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8wt重鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Ser Ser Ser Trp Tyr Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8wt輕鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Arg Ala His 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          000
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          000
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          000
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          000
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10重鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ser Ser Arg Ser Ser Tyr Tyr Leu Trp Val Leu Asp Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10輕鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Glu 
                      20                  25                  30          
          Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 HC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Asn Tyr Tyr Met His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 HC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 HC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Ser Ser Arg Ser Ser Tyr Tyr Leu Trp Val Leu Asp Leu 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 LC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Glu Ile Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 LC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-s10 LC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Ile Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          000
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          000
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>]]>  20
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Lys 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Pro Thr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Ser Ser Arg Tyr Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          <![CDATA[<223>  RO6D8-jlv1011輕鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Glu 
                      20                  25                  30          
          Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Ile 
                          85                  90                  95      
          Ala Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-jlv1011 HC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Ser Lys Tyr Tyr His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>]]>  人工序列
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-jlv1011 HC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Ile Ile Asn Pro Thr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  24]]>
          Asp Ser Ser Arg Tyr Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Leu 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210>  25]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-jlv1011 LC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Glu Ile Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  26]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  26]]>
          Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  27]]>
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          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Ile Ala 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          000
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          000
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11重鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Pro Thr Ser Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Ser Ser Ser Trp Tyr Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  31]]>
          Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Thr Asp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Ile 
                          85                  90                  95      
          Ala Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  32]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11 HC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Asn Tyr Tyr Met His 
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          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11 HC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Ile Ile Asn Pro Thr Ser Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11 HC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asp Ser Ser Ser Trp Tyr Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Leu 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  35]]>
          Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Thr Asp Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11 LC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6D8-O11 LC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Ile Ala 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          000
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          000
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ]]>RO6A-a7gm / RO6A-a8gm重鏈可變域
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Ser Ala Tyr Ser Asn Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Pro Leu Leu Tyr Gly Trp Leu Thr Asp Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  102]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm輕鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Val Ser Trp Tyr Gln 
                      20                  25                  30          
          Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys 
                  35                  40                  45              
          Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn 
              50                  55                  60                  
          Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ile Asn Asp Ala Val Phe Phe Gly Gly Gly 
                          85                  90                  95      
          Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100         
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm / RO6A-a8gm HC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Asp Tyr Tyr Met Thr 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm / RO6A-a8gm HC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Tyr Ile Ser Gly Ser Ser Ala Tyr Ser Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm / RO6A-a8gm HC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Asp Pro Leu Leu Tyr Gly Trp Leu Thr Asp 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm LC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Thr Gly Thr Ser Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm LC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a7gm LC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Ser Ser Tyr Ile Asn Asp Ala Val Phe 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          000
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          000
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          000
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a8gm輕鏈可變域]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 
                  35                  40                  45              
          Met Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Gly Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Thr Ser Asp 
                          85                  90                  95      
          Val Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          000
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          000
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          000
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a8gm LC CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Thr Gly Thr Ser Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Asp Ser Val Ser 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a8gm LC CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  RO6A-a8gm LC CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Ser Ser Phe Thr Ser Asp Val Met Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  6x His標籤]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          His His His His His His 
          1               5
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027

Claims (50)

  1. 一種抗ROR1抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區， 其中該重鏈可變區包含重鏈互補決定區1 (CDR1)重鏈CDR2及重鏈CDR3，且該輕鏈可變區包含輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；且 (a)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列； (b)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列； (c)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 35之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(d)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(e)該重鏈CDR1具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，該重鏈CDR2具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，該重鏈CDR3具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈CDR1具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列，且該輕鏈CDR2具有SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，且該輕鏈CDR3具有SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。
  2. 如請求項1之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性，且該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。
  3. 一種抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區與SEQ ID NO: 10、20、30或40之胺基酸序列具有至少95%序列一致性，且該輕鏈可變區與SEQ ID NO: 11、21、31、41或51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。
  4. 一種抗原結合蛋白或完全人類抗ROR1抗體，或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區分別包含SEQ ID NO: 10及11之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-s10)、分別包含SEQ ID NO: 20及21之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-jlv1011)、分別包含SEQ ID NO: 30及31之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6D8-O11)、分別包含SEQ ID NO: 40及41之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6A-a7gm)或分別包含SEQ ID NO: 40及51之胺基酸序列(例如本文中稱作RO6A-a8gm)。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗原結合片段，其包含Fab片段。
  6. 如請求項1至4中任一項之抗原結合片段，其包含單鏈抗體，其中該重鏈可變域及該輕鏈可變域經由肽連接子連接在一起。
  7. 如前述請求項中任一項之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段，其包含IgG抗體，該IgG抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類抗體。
  8. 如請求項7之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段，其包含該IgG1或IgG4類抗體。
  9. 如請求項7之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段，其包含該IgG1類抗體。
  10. 如前述請求項中任一項之抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合蛋白、抗體或其該抗原結合片段以10 -7M或更小之K D結合人類ROR1蛋白。
  11. 一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段及醫藥學上可接受之賦形劑。
  12. 一種套組，其包含如前述請求項中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段，及如請求項1至10中任一項之醫藥學上可接受之賦形劑。
  13. 一種核酸，其編碼如請求項1至10中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該重鏈可變區。
  14. 一種核酸，其編碼如請求項1至10中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該輕鏈可變區。
  15. 一種核酸，其編碼 (i)如請求項1至10中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該重鏈可變區及 (ii)該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該輕鏈可變區。
  16. 一種載體，其包含如請求項13之核酸。
  17. 一種載體，其包含如請求項14之核酸。
  18. 一種載體，其包含如請求項15之核酸。
  19. 一種宿主細胞，其含有如請求項16之載體。
  20. 如請求項19之宿主細胞，其中該載體包含表現載體，且其中該宿主細胞表現該重鏈可變區。
  21. 一種宿主細胞，其含有如請求項17之載體。
  22. 如請求項21之宿主細胞，其中該載體包含表現載體，且其中該宿主細胞表現該輕鏈可變區。
  23. 一種宿主細胞，其含有包含如請求項16之載體之第一載體及包含如請求項17之載體之第二載體。
  24. 如請求項23之宿主細胞，其中該第一載體包含第一表現載體，其中該第二載體包含第二表現載體，且其中該宿主細胞表現該重鏈可變區及該輕鏈可變區。
  25. 一種宿主細胞，其含有如請求項18之載體。
  26. 如請求項25之宿主細胞，其中該載體包含表現載體，且其中該宿主細胞表現該重鏈可變區及該輕鏈可變區。
  27. 一種製備抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區之方法，該方法包含：在適合於表現該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該重鏈可變區之條件下培養如請求項20之宿主細胞群。
  28. 如請求項27之方法，其進一步包含：自該等宿主細胞回收所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區。
  29. 一種製備抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區之方法，該方法包含：在適合於表現該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該輕鏈可變區之條件下培養如請求項22之宿主細胞群。
  30. 如請求項29之方法，其進一步包含：自該等宿主細胞回收所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區。
  31. 一種製備(i)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區及(ii)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區之方法，該方法包含：在適合於表現(i)該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該重鏈可變區及(ii)該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該輕鏈可變區之條件下培養如請求項24之宿主細胞群。
  32. 如請求項31之方法，其進一步包含：自該等宿主細胞回收(i)所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區，及(ii)所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區。
  33. 一種製備(i)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區及(ii)抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區之方法，該方法包含：在適合於表現(i)該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該重鏈可變區及(ii)該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之該輕鏈可變區之條件下培養如請求項26之宿主細胞群。
  34. 如請求項33之方法，其進一步包含：自該等宿主細胞回收(i)所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之重鏈可變區，及(ii)所表現之該抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之輕鏈可變區。
  35. 一種抑制表現ROR1之細胞之生長或增殖之方法，其包含：在適合於抑制該等表現ROR1之細胞之生長或增殖之條件下，使(i)效應細胞群與(ii)表現ROR1之目標細胞群，(iii)在如請求項1至10中任一項之人類抗ROR1抗體存在下接觸。
  36. 如請求項35之方法，其中該效應細胞群包含PBMC或NK細胞。
  37. 如請求項35或36之方法，其中該目標細胞群包含表現ROR1之人類癌症細胞或表現ROR1之轉殖基因細胞。
  38. 如請求項35至37中任一項之方法，其中該等效應細胞對目標細胞之比值為1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。
  39. 如請求項35至37中任一項之方法，其中該等效應細胞對目標細胞之比值為5:1至10:1、10:1至20:1或20:1至30:1。
  40. 一種殺死表現ROR1之細胞之方法，其包含：在適合於抑制該等表現ROR1之細胞之生長或增殖之條件下，使(i)效應細胞群與(ii)表現ROR1之目標細胞群，(iii)在如請求項1至10中任一項之人類抗ROR1抗體存在下接觸。
  41. 如請求項40之方法，其中該效應細胞群包含PBMC或NK細胞。
  42. 如請求項40或41之方法，其中該目標細胞群包含表現ROR1之人類癌症細胞或表現ROR1之轉殖基因細胞。
  43. 如請求項40至42中任一項之方法，其中該等效應細胞對目標細胞之比值為1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。
  44. 如請求項40至42中任一項之方法，其中該等效應細胞對目標細胞之比值為5:1至10:1、10:1至20:1或20:1至30:1。
  45. 一種治療患有與ROR1表現相關之疾病之個體的方法，該方法包含：向該個體投與有效量之包含如請求項1至10中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段之治療性組合物。
  46. 如請求項45之方法，其中該與ROR1表現相關之疾病係癌症。
  47. 如請求項46之方法，其中癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、乳癌、肺癌、胃癌、黑素瘤、大腸癌、腎細胞癌或淋巴瘤。
  48. 如請求項46之方法，其中癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、毛細胞白血病(HCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性淋巴瘤(AML)、骨髓瘤、T細胞白血病(TCL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、多發性骨髓瘤(MM)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、已經歷李希特轉化(Richter's transformation)之非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma；NHL)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肝細胞癌、胰臟癌、骨肉瘤、頭頸癌、卵巢癌、乳癌或三陰性乳癌(TNBC)、淋巴瘤、小淋巴球性淋巴瘤、邊緣細胞B細胞淋巴瘤、腎細胞癌、大腸癌、大腸直腸癌、上皮鱗狀細胞癌、黑素瘤、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、子宮頸癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌或甲狀腺癌。
  49. 如請求項46之方法，其中該癌症為轉移癌、難治癒之癌症或復發性癌症。
  50. 如請求項1至10中任一項之抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段，其用於如請求項27至49中任一項之方法中。
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