KR20210022684A - Cd38에 결합하는 변이 항체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 본래의 야생형 서열을 갖는 모체 항체에 비해서 더 높은 수율로 제조되는 향상된 능력을 갖는 항-CD38 IgG 클래스 항체를 제공한다. 본 발명은 항체 경쇄의 동종군에 대한 개선된 생산을 위해 절단 이질성을 감소시키는 돌연변이된 항체 경쇄를 제공한다.

Description

CD38에 결합하는 변이 항체

[0001] 본 출원은 2018년 6월 20일에 출원된 발명의 명칭이 "CD38에 결합하는 개선된 변이 항체"인 미국 가출원 62/687,695호에 대하여 35 U.S.C. §119 하에 우선권의 이익을 주장하며, 상기 문헌의 전문은 본원에 참고로 포함된다.

[0002] 본 출원 전반에 걸쳐서 다양한 간행물, 특허 및/또는 특허 출원들이 인용된다. 상기 인용된 간행물, 특허 및/또는 특허 출원들의 개시내용은, 해당 개시내용들이 속하는 현재 기술 수준을 보다 상세히 기술하기 위하여 그 개시내용의 전문을 본원에 참조로 포함시킨다. 참조로 포함시킨 자료가 본 출원의 명시적인 내용과 상충되는 정도까지 온 경우에는, 본원의 명시적 내용이 우선한다.

[0003] 본 발명은 야생형 서열에 대해 변이된 경쇄를 갖는 항-CD38 IgG 클래스 항체를 제공한다. 개시된 항체는 야생형 항체에 비해서 더 높은 수율로 제조되는 개선된 능력 및/또는 감소된 절단 이질성 (cleavage heterogeneity)을 가질 수 있어서, 항체 경쇄의 동종성을 개선할 수 있다.

[0004] CD38은 긴 C-말단 세포외 도메인 및 짧은 N-말단 세포질 도메인을 갖는 45 kD의 II형 막관통 당단백질이다. CD38 단백질은 이작용성 외부 효소로서, NAD⁺가 사이클릭 ADP-리보스 (cADPR)로 전환되는 것을 촉진하고 cADPR을 ADP-리보스로 가수분해할 수도 있다. 개체 발생이 이루어지는 동안, CD38은 CD34⁺로 분화 예정인 (committed) 줄기 세포 및 림프구, 적혈구 및 골수 세포에 대한 분화 계통이 정해진 (lineage-committed) 전구세포에서 나타난다. CD38 발현은 T 세포 및 B 세포 발생의 서로 다른 단계들에서 다양한 발현 수준으로 대부분 림프구 계통에서 지속된다.

[0005] CD38은 여러 조혈성 악성 종양에서, 그리고 비호지킨 림프종 (NHL), 버키트 림프종 (BL), 다발성 골수종 (MM), B형 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL), B형 및 T형 급성 림프구성 백혈병 (ALL), T 세포 림프종 (TCL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 모발 세포 백혈병 (HCL), 호지킨 림프종 (HL) 및 만성 골수성 백혈병 (CML)을 비롯한 다양한 조혈 악성 종양으로부터 유래된 세포주에서 유전자 발현이 증가된다. 한편, 조혈 계통 중에서 가장 원시적인 만능성 줄기 세포는 CD38^-이다. 조혈성 악성 종양에서의 CD38 발현과 그의 질병 진행과 상관관계가 있기 때문에, CD38은 항-CD38 항체 요법의 매력적인 표적이다.

[0006] CD38은 림프구 및 골수 세포 또는 세포주에서 Ca²⁺ 동원(mobilization) (참조: 문헌 [Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592]; [Zilber et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 2840-2845])과 포스포리파제 C-γ, ZAP-70, syk 및 c-cbl을 비롯한 다수의 신호전달 분자들의 티로신 인산화를 통한 신호 전달에 관여하는 것으로 보고된 바 있다 (문헌 [Funaro et al., 1993, Eur. J. Immunol., 23: 2407-2411]; [Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592]; [Funaro et al., 1990, J Immunol, 145: 2390-2396]; [Zubiaur et al., 1997, J Immunol, 159: 193-205]; [Deaglio et al., 2003, Blood 102: 2146-2155]; [Todisco et al., 2000, Blood, 95: 535-542]; [Konopleva et al., 1998, J. Immunol., 161: 4702-4708]; [Zilber et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 2840-2845]; [Kitanaka et al., 1997, J. Immunol., 159: 184-192]; [Kitanaka et al., 1999, J. Immunol., 162: 1952-1958]; [Mallone et al., 2001, Int. Immunol., 13: 397-409]). CD38은 이들의 정상적인 발생 단계 동안 림프구 및 골수 세포의 성숙과 활동에 있어서 중요한 신호전달 분자인 것으로 제안되었던 바 있다.

[0007] CD38의 기능에 대한 증거는, 선천적 면역 결핍성 및 수지상 세포 이동에서의 결함으로 인해 감소된 T 세포 의존성 체액 반응을 갖는 CD38^-/- 녹아웃 마우스에서 찾아볼 수 있다 (참조: 문헌 [Partida-Sanchez et al., 2004, Immunity, 20: 279-291]; [Partida-Sanchez et al., 2001, Nat. Med., 7:1209-1216]). 그렇지만, 조혈이 이루어지는 동안에 CD38 발현 패턴이 하기 a) 및 b)와 같이 인간과 마우스 간에 차이가 크기 때문에 마우스에서의 CD38 기능이 인간의 경우와 동일한지는 분명치 않다: a) 인간에서의 미성숙 전구 줄기 세포와는 달리, 마우스에서 이와 유사한 전구 줄기 세포는 CD38을 높은 수준으로 발현하고 (문헌 [Randall et al., 1996, Blood, 87:4057-4067]; [Dagher et al., 1998, Biol. Blood Marrow Transplant, 4:69-74]), b) 인간 B 세포 발생 동안에는 CD38 발현이 배중심 B 세포 및 형질 세포에서 높은 수준으로 발현되는 반면 (문헌 [Uckun, 1990, Blood, 76:1908-1923]; [Kumagai et al., 1995, J. Exp. Med., 181:1101-1110]), 마우스에서는 그에 상응하는 세포에서의 CD38 발현 수준이 낮다 (문헌 [Oliver et al., 1997, J. Immunol., 158:108-1115]; [Ridderstad and Tarlinton 1998, J. Immunol., 160:4688-4695]).

[0008] 다양한 종양 세포 및 세포주에 대해 서로 다른 증식 특성을 보유하는 여러가지 항-인간 CD38 항체들이 문헌에 설명되어 있다. 예를 들면, 마우스 Fab 및 인간 IgG1 Fc를 함유하는 키메라 OKT10 항체는, MM 환자 또는 정상 개체 중 어느 하나로부터 유래한 말초 혈액 단핵 효과기 세포의 존재 하에 림프종 세포에 대하여 항체 의존성 세포 매개형 세포독성 (ADCC)을 매우 효율적으로 조율한다 (Stevenson et al., 1991, Blood, 77:1071-1079). 항-CD38 항체 AT13/5의 CDR 그래프트형의 인간화된 형태는 CD38-양성 세포주에 대해 강력한 ADCC 활성을 보유하는 것으로 나타났다. 인간의 단일클론 항-CD38 항체는, ADCC 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의한 시험관내 CD38-양성 세포주의 사멸을 조율하고, MM 세포주 RPMI-8226을 함유하는 SCID 마우스에서 종양 성장을 지연시키는 것으로 밝혀졌다 (WO2005/103083 A2호). 한편, 여러가지 항-CD38 항체들 IB4, SUN-4B7 및 OKT10 등 (IB6, AT1 또는 AT2는 아님)은 정상 개체로부터 유래한 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 증식을 유도하였다 (Ausiello et al. 2000, Tissue Antigens, 56:539-547).

[0009] 일부 선행 기술의 항체들은 기질 세포 의존성 또는 기질 유래의 사이토카인 의존성 방식으로 CD38⁺ B 세포에서 아폽토시스를 촉발할 수 있는 것으로 보고되었던 바 있다. 작용성 항-CD38 항체 (IB4)는 인간의 배중심 (GC) B 세포의 아폽토시스를 방지하고 (Zupo et al. 1994, Eur. J. Immunol., 24:1218-1222), KG-1 및 HL-60 AML 세포의 증식을 유도하는 것으로 보고된 바 있으나 (Konopleva et al. 1998, J. Immunol., 161:4702-4708), 주르캇 (Jurkat) T 림프아구성 세포에서는 아폽토시스를 유도한다 (Morra et al. 1998, FASEB J., 12:581-592). 또 다른 항-CD38 항체인 T16은 ALL 환자 유래의 미성숙 림프계 세포 및 백혈병 림프아구성 세포의 아폽토시스 (Kumagai et al. 1995, J. Exp. Med., 181:1101-1110) 및 AML 환자로부터의 백혈병 골수아구성 세포의 아폽토시스를 유도하지만 (Todisco et al. 2000, Blood, 95:535-542), T16은 기질 세포 의존성 또는 기질 유래의 사이토카인 (IL-7, IL-3, 줄기세포 인자)의 존재 하에서만 아폽토시스를 유도하였다.

[0010] 따라서, 항-CD38 항체를 표적으로 삼은 항체 약물 접합체 (ADC)는 강력한 항종양 활성을 전달함과 동시에 부작용을 감소시킬 수 있는 장점이 있어 그 장래성과 가능성이 있다. 이에 따라, 당업계에서는 CD38, 특히 항-CD38 항체를 기반으로 하는 효과적인 치료가 필요한 실정이다. 본 발명은 완전 인간 야생형 서열과는 다른 변이 항체 서열을 제공한다. 개시된 변이 항체는 훨씬 더 높은 수율로 제조될 수 있고/있거나 개선된 경쇄 동종성을 제공할 수 있다.

[0011] 본 발명은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하는, CD38에 결합하는 항원 결합 단백질로서, 상기 중쇄 가변 영역이 서열번호 1의 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역이 서열번호 3의 서열을 포함하는 것인, 항원 결합 단백질을 제공한다. 이러한 항원 결합 단백질은, 예를 들어 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체일 수 있다. 본 발명은 IgG 클래스의 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편으로서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, IgG 클래스의 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편을 제공한다. 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산을 제공하는데, 이는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산과 조합되거나 이를 추가로 포함할 수도 있다.

[0012] 또한, 본 발명은 IgG 클래스의 변이 항체군 및 상기 변이 항체군의 제조 방법도 제공한다. 상기 변이 항체군은 2종 이상의 변이 항체 (예컨대, 복수의 변이 항체)를 포함한다. 대상군에서의 각 변이 항체들은, 각각 2개의 항체 중쇄 및 2개의 항체 경쇄를 갖는 면역글로불린을 포함하는데, 여기서 경쇄가 돌연변이 서열을 가진다. 상기 경쇄 돌연변이 서열은 항체가 제조되는 동안에 절단 이질성을 감소시킨다. 예를 들어, 상기 변이 항체군은 재조합 항체 중쇄 및 경쇄의 숙주 세포 발현에 의해 제조될 수 있다. 상기 경쇄 변이 서열은, 항체가 제조되는 동안 폴리펩타이드 길이의 이질성 수준과 아미노산 서열의 이질성 수준을 약 40 내지 55% 감소시킴으로써, 변이 항체의 제조시 이질성을 감소시킬 수 있는 것이다.

[0013] 본 발명은, 높은 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 높은 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타내는 IgG 클래스의 모체 야생형 항체군에 비해, 감소된 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 감소된 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타내는 IgG 클래스의 변이 항체군을 제공한다. 상기 변이 항체군의 각 항체들은 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 상기 경쇄의 변이 아미노산 서열은 폴리펩타이드 길이의 이질성 수준과 변이 항체군에서의 아미노산 서열 이질성 수준을 약 40 내지 55% 감소시킬 수 있다.

[0014] 한 실시양태에서, 상기 변이 항체군은, 서열번호 1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 개별 변이 서열 항체, 및 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 갖는 개별 변이 항체를 각각 포함한다.

[0015] 한 실시양태에서, 상기 변이 항체군은 CD38 에피토프에 결합한다.

[0016] 한 실시양태에서, 상기 변이 항체군은 완전 인간 항체를 포함한다.

[0017] 한 실시양태에서, 모체 야생형 항체군의 각 모체 야생형 항체들은 약 40 내지 55%가 폴리펩타이드 길이 이질성과 아미노산 서열 이질성을 나타내는 야생형 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.

[0018] 한 실시양태에서, 상기 변이 항체군의 각 변이 항체들은 약 85 내지 99%, 85 내지 100%, 90 내지 99% 또는 90 내지 100%가 폴리펩타이드 길이 이질성과 아미노산 서열 이질성을 나타내는 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 동종성은 대상군 내에서 복수의 종 또는 대다수 종의 길이 및/또는 서열을 갖는 (예컨대, 항체 경쇄의) 대상군의 구성원들 (예컨대, 서열번호 3의 서열을 갖는 가변 영역을 포함하는 경쇄)의 비율로서 정량될 수 있다.

[0019] 한 실시양태에서, IgG 클래스의 변이 항체군은 CD38 에피토프에 결합하고, 높은 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 높은 수준의 서열 이질성을 나타내는 IgG 클래스의 모체 야생형 항체군에 비해, 감소된 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 감소된 수준의 서열 이질성을 나타내며, 여기서 변이체 서열 대상군의 각 항체들은 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하고, 각 변이 항체의 중쇄는 서열번호 1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 각 변이 항체의 경쇄는 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이 경우 상기 경쇄의 돌연변이 아미노산 서열은 폴리펩타이드 길이의 이질성 수준과 서열 이질성 수준을 약 40 내지 55% 감소시킨다.

[0020] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 완전 인간 IgG 클래스 항체군을 제공한다.

[0021] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 완전 인간 Fab 단편의 군을 제공한다.

[0022] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)의 군을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 단쇄 항체는 펩타이드 링커에 의해 함께 연결된 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함한다.

[0023] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 N-말단 부근에 2개의 점 돌연변이, 구체적으로 2번 위치의 알라닌이 세린으로 치환되고 3번 위치의 글리신이 알라닌으로 치환된 2개의 점 돌연변이를 갖는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간 IgG 클래스 항체)의 군을 제공한다. 한 실시양태에서, 돌연변이 경쇄의 N-말단은 아미노산 서열 QSALT (서열번호 6)를 포함한다.

[0024] 본 발명은, 높은 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 높은 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타내는 모체 야생형 항체 경쇄에 비해, 감소된 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 감소된 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타내는 변이 항체 경쇄의 군을 제공한다. 변이 항체 경쇄의 군에서의 각 항체 경쇄들은 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

[0025] 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 변이 서열 경쇄는 완전 인간 항체 경쇄를 포함한다.

[0026] 한 실시양태에서, 모체 야생형 항체군에서의 각 모체 야생형 서열 항체 경쇄는 약 40 내지 55%가 폴리펩타이드 길이 이질성과 아미노산 서열 이질성을 나타내는 모체 야생형 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

[0027] 한 실시양태에서, 상기 변이 항체군의 각 변이 항체들은 약 85 내지 99%, 85 내지 100%, 90 내지 99% 또는 90 내지 100%가 폴리펩타이드 길이 이질성과 아미노산 서열 이질성을 나타내는 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.

[0028] 한 실시양태에서, IgG 클래스의 변이 항체 경쇄는, 높은 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 높은 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타내는 모체 야생형 항체군에 비해, 감소된 수준의 폴리펩타이드 길이 이질성과 감소된 수준의 아미노산 서열 이질성을 나타낸다. 변이 항체 경쇄군에서의 각 항체 경쇄는, 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이 경우 상기 경쇄의 돌연변이 아미노산 서열은 폴리펩타이드 길이의 이질성 수준과 아미노산 서열의 이질성 수준을 약 40-55% 감소시킨다.

[0029] 한 실시양태에서, 완전 인간 Fab 단편은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.

[0030] 한 실시양태에서, 단쇄 완전 인간 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

[0031] 본 발명은 CD38 에피토프에 결합하는 IgG 클래스의 완전 인간 변이 항체로서, 서열번호 1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 함유하는 중쇄 및 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 함유하는 경쇄를 포함하는, CD38 에피토프에 결합하는 IgG 클래스의 완전 인간 변이 항체를 제공한다.

[0032] 본 발명은 CD38 에피토프에 결합하는 완전 인간 항체 Fab 단편으로서, 서열번호 1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 함유하는 중쇄 및 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 함유하는 경쇄를 포함하는, CD38 에피토프에 결합하는 완전 인간 항체 Fab 단편을 제공한다.

[0033] 본 발명은 CD38 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)로서, 서열번호 1의 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 함유하는 중쇄 및 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 함유하는 경쇄를 포함하는, CD38 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 단쇄 항체는 펩타이드 링커에 의해 함께 연결된 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함한다.

[0034] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄와 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 IgG 클래스의 완전 인간 항체 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

[0035] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄와 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 완전 인간 항체 Fab 단편 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

[0036] 본 발명은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 갖는 중쇄와 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체) 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

[0037] 본 발명은 본원에 개시된 경쇄를 코딩하는 핵산을 제공한다. 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 완전 인간 IgG 클래스 항체를 코딩한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)을 코딩한다.

[0038] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 Fab 단편을 코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 항체 중쇄도 포함하는 Fab 단편을 코딩한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 포함한다.

[0039] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 단쇄 항체를 코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 항체 중쇄도 포함하는 단쇄 항체를 코딩한다. 한 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 포함한다.

[0040] 본 발명은 본원에 개시된 핵산, 예컨대 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다. 한 실시양태에서, 상기 발현 벡터는 완전 인간 IgG 클래스 항체를 코딩하는 하나 이상의 핵산에 작동가능하게 연결된다.

[0041] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 항체 중쇄도 포함하는 Fab 단편을 코딩한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다.

[0042] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 항체 중쇄도 포함하는 단쇄 항체를 코딩한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다.

[0043] 본 발명은 항체 경쇄를 코딩하는 본원에 개시된 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포가 보유하고 있는 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 제2 발현 벡터를 보유한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 항체 경쇄 및 중쇄를 발현한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 경쇄 및 중쇄를 갖는 완전 인간 IgG 클래스 항체를 발현한다.

[0044] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포가 보유하고 있는 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 갖는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 제2 발현 벡터를 보유한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 경쇄 및 중쇄를 갖는 완전 인간 Fab 단편을 발현한다.

[0045] 본 발명은 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 함유하고 있는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포가 보유하고 있는 벡터는 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 단쇄 항체를 코딩하는 핵산에 추가로 작동가능하게 연결된다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역을 갖는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)을 발현한다.

[0046] 본 발명은 항체 경쇄를 발현하기에 적절한 조건 하에서 숙주 세포군을 배양하는 단계를 포함하는 완전 인간 항체 경쇄를 제조하는 방법으로서, 상기 대상군에서의 각 숙주 세포들이 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 숙주 세포들은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에도 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 숙주 세포들은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 제2 발현 벡터를 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포군은 항체 경쇄 및 중쇄를 발현한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포군은 경쇄 및 중쇄를 갖는 완전 인간 IgG 클래스 항체를 발현한다. 한 실시양태에서, 본 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다: 숙주 세포군으로부터 발현된 항체 경쇄를 회수하는 단계. 한 실시양태에서, 본 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다: 숙주 세포군으로부터 발현된 항체 경쇄 및 중쇄를 회수하는 단계. 한 실시양태에서, 상기 발현되어 회수한 항체 경쇄의 90 내지 100%는 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 서열번호 3의 경쇄 가변 도메인에 대하여 100% 서열 동일성을 가진다.

[0047] 본 발명은 완전 인간 항체 Fab 단편을 발현하기에 적절한 조건 하에서 숙주 세포군을 배양하는 단계를 포함하는 완전 인간 항체 Fab 단편을 제조하는 방법으로서, 상기 대상군에서의 각 숙주 세포들이 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 숙주 세포들은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에도 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 숙주 세포들은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 Fab 단편을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 제2 발현 벡터를 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포군은 항체 경쇄 및 중쇄를 발현한다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포군은 경쇄 및 중쇄를 갖는 완전 인간 Fab 단편을 발현한다. 한 실시양태에서, 본 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다: 숙주 세포군으로부터 발현된 경쇄를 회수하는 단계. 한 실시양태에서, 본 방법은 숙주 세포군으로부터 발현된 경쇄 및 중쇄를 회수하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 발현되어 회수한 경쇄의 90 내지 100%는 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 서열번호 3의 경쇄 가변 도메인에 대하여 100% 서열 동일성을 가진다.

[0048] 본 발명은 단쇄 항체를 발현하기에 적절한 조건 하에서 숙주 세포군을 배양하는 단계를 포함하는 항원 결합 단백질 (예컨대, 완전 인간형일 수 있는 단쇄 항체)을 제조하는 방법으로서, 상기 대상군에서의 각 숙주 세포들이 서열번호 3의 경쇄 가변 영역 돌연변이 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 대상군의 각 숙주 세포들은 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 야생형 아미노산 서열을 포함하는 단쇄 항체를 코딩하는 핵산에도 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 보유하고 있다. 한 실시양태에서, 상기 숙주 세포군은 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역을 갖는 완전 인간 단쇄 항체를 발현한다. 한 실시양태에서, 본 방법은 숙주 세포군으로부터 발현된 단쇄 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 발현되어 회수한 단쇄 항체의 90 내지 100%는 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 서열번호 3의 경쇄 가변 도메인에 대하여 100% 서열 동일성을 가진다.

[0049] 도 1a는 모체 야생형 CD38 A2 항체, 구체적으로는 서열번호 1의 야생형 서열을 포함하는 감소된 탈당화 항체 중쇄의 액체 크로마토그래프-질량 분광광도법 (LC-MS)의 결과를 도시한 것이다. 피크는 분자량 (amu)으로 표시하였다.
[0050] 도 1b는 CD38 A2 SV 변이 항체, 구체적으로는 서열번호 1의 야생형 서열을 포함하는 감소된 탈당화 항체 중쇄의 액체 크로마토그래프-질량 분광광도법 (LC-MS)의 결과를 도시한 것이다. 피크는 분자량 (amu)으로 표시하였다.
[0051] 도 2a는 모체 야생형 CD38 A2 항체, 구체적으로는 서열번호 2의 야생형 서열을 포함하는 항체 경쇄의 액체 크로마토그래프-질량 분광광도법 (LC-MS)의 결과를 도시한 것이다. 피크는 분자량 (amu)으로 표시하였다.
[0052] 도 2b는 CD38 A2 SV 변이 항체, 구체적으로는 서열번호 3의 변이 서열을 포함하는 항체 경쇄의 액체 크로마토그래프-질량 분광광도법 (LC-MS)의 결과를 도시한 것이다. 피크는 분자량 (amu)으로 표시하였다.
[0053] 도 3a는 모체 항체 CD38 A2의 결합 동역학의 SPR 센서그램을 도시한 것이다.
[0054] 도 3b는 변이 항체 CD38 A2의 결합 동역학의 SPR 센서그램을 도시한 것이다.
[0055] 달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용되는 과학 기술 용어들은 당업계의 숙련가가 통상적으로 이해하는 의미를 가진다. 일반적으로, 본원에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 유전자이식 세포 생산, 단백질 화학 및 핵산 화학과 혼성화 기술과 관련된 용어들은 익히 공지되어 있는 것으로 당업계에서 통상적으로 사용된다. 달리 명시하지 않는 한, 본원에 제시한 방법과 기법들은 일반적으로 당업계에 익히 알려진 통상적인 방법에 따라서, 그리고 본원에 언급하여 논의된 다양한 일반적인 참조문헌과 보다 구체적인 참조문헌들에 기술된 바와 같이 수행한다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)]; 및 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)]을 참조한다. 하기를 포함하는 다수의 기초 교본들에 표준 항체 제조 공정이 기술되어 있다: 문헌 [Borrebaeck (ed)　Antibody Engineering,　2nd Edition　Freeman and Company, NY, 1995]; [McCafferty et al.　Antibody Engineering, A Practical Approach　IRL at Oxford Press, Oxford, England, 1996]; 및 [Paul (1995)　Antibody Engineering Protocols　Humana Press, Towata, N.J., 1995]; [Paul (ed.),　Fundamental Immunology, Raven Press, N.Y, 1993]; [Coligan (1991)　Current Protocols in Immunology　Wiley/Greene, NY]; [Harlow and Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual　Cold Spring Harbor Press, NY]; [Stites et al. (eds.)　Basic and Clinical Immunology　(4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, Calif.]과 여기에 언급된 참조문헌들;　[Coding Monoclonal Antibodies: Principles and Practice　(2nd ed.) Academic Press, New York, N.Y., 1986] 및 [Kohler and Milstein　Nature　256: 495-497, 1975]. 본원에 언급한 모든 참조문헌들은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 효소 반응과 농축/정제 기법들도 익히 공지되어 있는 바, 제조업체의 사양에 따르거나, 당업계에서 통상적으로 행해지는 바와 같이, 또는 본원에 기술된 바와 같이 수행한다. 본원에 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약과 제약 화학과 관련하여 사용된 용어와 이들의 실험실 절차 및 기법들은 당업계에 익히 알려져 있어 통상적으로 사용되는 것들이다. 화학 합성, 화학 분석, 약제 제조, 제제화와 전달, 및 환자의 치료에 있어서 표준 기법들을 사용할 수 있다.
[0056] 본원에 제시된 제목들은 본 발명의 다양한 양태들에 대해서 한정하려는 것은 아니며, 이러한 양태들은 명세서를 전반적으로 참조하여 이해할 수 있다.
[0057] 본원의 문맥상에서 달리 요하지 않는 한, 단수의 용어들은 복수형도 포함하고, 복수의 용어들은 단수형도 포함한다. 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")와 임의의 단어에 대한 단수 사용은, 문맥상 명백하고 분명하게 하나의 지시 대상물만으로 한정되어 있지 않는 한, 복수의 지시 대상물도 포함한다.
[0058] 본원에서 대안 (예컨대, "또는")의 사용은 대안들 중의 하나 또는 양자 모두 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해한다.
[0059] 본원에 사용된 "및/또는"이라는 용어는 각각의 명시된 특징 또는 구성요소들을 서로 동반시키거나 동반시키지 않으면서 구체적으로 개시하는 것을 의미하는 것으로 간주한다. 예를 들어, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 문구에 사용된 "및/또는"이라는 용어는 "A와 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)를 포함시키고자 하는 것이다. 이와 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용되는 "및/또는"이라는 용어는 하기의 각 양태들을 포함시키고자 하는 것이다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
[0060] 본원에 사용된 "포함하는", "비롯한", "갖는" 및 "함유하는"이라는 용어들과 이들의 문법적 변형태는 비제한적인 것으로서, 어떤 목록 중에서 하나의 항목 또는 여러가지 항목들은 열거된 항목들에서 대체 또는 추가될 수 있는 다른 항목들을 제외시키지 않고자 한다. "포함하는"이라는 말로 양태들이 설명되는 곳에는, 이와는 다르게 "...로 이루어지는" 및/또는 "본질적으로 ...로 이루어지는"의 견지에서 설명된 유사한 양태들도 제공되는 것으로 이해한다.
[0061] 본원에 사용된 "약"이라는 용어는 당업계의 숙련자에 의해 결정된 특정 수치 또는 조성에 대하여 허용가능한 오차 범위 내에 있는 수치 또는 조성을 가리키는데, 이는 상기 수치 또는 조성의 측정 또는 결정 방법, 즉 해당 측정 시스템의 한계에 따라 부분적으로 달라질 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "대략"은 당업계의 관행에 따라 1 또는 그 이상의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 다르게는, "약" 또는 "대략"은 해당 측정 시스템의 한계에 따라 최대 10% (즉, ±10%) 이상의 범위를 의미할 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg과 5.5 mg 사이의 임의의 수를 포함할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 공정과 관련하여, 이러한 용어들은 어떤 수치의 최대 10배까지 또는 최대 5배까지도 의미할 수 있다. 특정 수치나 조성이 본 발명에 제시되는 경우, 달리 언급하지 않는 한, "약" 또는 "대략"의 의미는 특정한 수치나 조성에 대해 허용가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 가정하여야 한다.
[0062] "펩타이드", "폴리펩타이드"와 "단백질" 및 기타 관련 용어들은 서로 교환하여 사용하고, 아미노산의 중합체를 가리키며 임의의 특정 길이로 한정되지 않는다. 폴리펩타이드는 천연 및 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 재조합 형태 또는 화학적으로 합성된 형태를 포함한다. 또한, 폴리펩타이드는 아직 절단을 거치지 않은 전구체 분자들, 예를 들어 분비 신호 펩타이드에 의한 절단이나 또는 특정 아미노산 잔기에서의 비효소적 절단에 의한 절단을 거치지 않은 전구체 분자들을 포함한다. 폴리펩타이드에는 절단을 거친 성숙한 분자들도 포함된다. 상기 용어들에는 천연 및 인공 단백질, 단백질 서열의 단백질 단편과 폴리펩타이드 유사체 (예컨대, 뮤테인, 변이체, 키메라 단백질 및 융합 단백질) 뿐만 아니라, 해독후 변형된 단백질 또는 그 이외에 공유 또는 비공유적으로 변형된 단백질이 포함된다. 재조합 공정을 사용하여 제조된 CD38 (예컨대, 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 부분)에 결합하는 결합 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 본원에 기재되어 있다.
[0063] "핵산", "폴리뉴클레오타이드"와 "올리고뉴클레오타이드" 및 기타 관련 용어들은 서로 교환하여 사용하고, 뉴클레오타이드의 중합체를 가리키며 임의의 특정 길이로 한정되지 않는다. 핵산은 재조합 형태 또는 화학적으로 합성된 형태를 포함한다. 핵산에는 DNA 분자 (cDNA 또는 유전체 DNA), RNA 분자 (예컨대, mRNA), 뉴클레오타이드 유사체를 사용하여 생성된 DNA 또는 RNA의 유사체 (예컨대, 펩타이드 핵산 및 비자연 발생형 뉴클레오타이드 유사체) 및 이들의 하이브리드가 포함된다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 항체, 또는 이의 단편 또는 scFv, 이의 유도체, 뮤테인 또는 변이체를 코딩하는 연속 오픈 리딩 프레임을 포함한다.　 한 실시양태에서, 핵산은 한 종류의 폴리뉴클레오타이드 또는 2종 이상의 서로 다른 종류의 폴리뉴클레오타이드의 혼합물을 포함한다. 항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산이 본원에 기술되어 있다.
[0064] "회수하다" 또는 "회수" 또는 "회수하는"이라는 용어와 기타 관련 용어들은 숙주 세포 배양 배지 또는 숙주 세포 용해물 또는 숙주 세포막으로부터 단백질 (예컨대, 항체 또는 이의 항원 결합 부분)을 수득하는 것을 가리킨다. 한 실시양태에서, 상기 단백질은 발현되는 해당 단백질의 분비를 매개하는 분비 신호 펩타이드 서열에 융합된 재조합 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현된다. 상기 분비된 단백질은 숙주 세포 배지에서 회수할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 단백질은 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있는 분비 신호 펩타이드 서열이 결여된 재조합 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현된다. 한 실시양태에서, 상기 단백질은 막결합 단백질로서 숙주 세포에 의해 발현되는데, 이는 계면활성제를 사용해 숙주 세포막으로부터 발현된 해당 단백질을 방출시켜 회수될 수 있다. 한 실시양태에서, 단백질을 회수하는데 사용되는 방법에 관계없이, 회수된 단백질에서 세포 잔해물을 제거하는 절차를 거칠 수 있다. 예를 들어, 상기 회수된 단백질에 크로마토그래피, 겔 전기영동 및/또는 투석을 진행할 수 있다. 한 실시양태에서, 크로마토그래피는 친화성 크로마토그래피, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 및/또는 실리카상 크로마토그래피를 비롯한 것들 중 임의의 하나 또는 이들의 임의의 조합 또는 2종 이상의 절차를 포함한다. 한 실시양태에서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 또는 G (스타필로코커스 아우레우스의 세포벽 성분들)를 포함한다.
[0065] "분리된"이라는 용어는 다른 세포 물질을 실질적으로 함유하지 않는 단백질 (예컨대, 항체 또는 이의 항원 결합 부분) 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 단백질은, 당업계에 익히 공지된 단백질 정제 기법들을 사용하는 분리에 의해 연관된 자연적인 성분들 (또는 항체를 생산하기 위해 사용되는 세포 발현계 또는 화학적 합성 방법과 관련된 성분들)이 실질적으로 함유하지 않게될 수도 있다. 또한, 상기 "분리된"이라는 용어는, 일부 실시양태에서 동일한 종의 다른 분자들, 예를 들어 각각 서로 다른 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 다른 단백질 또는 폴리뉴클레오타이드를 실질적으로 함유하지 않는 단백질 또는 폴리뉴클레오타이드도 지칭한다. 목적한 분자의 동종성에 대한 순도는, 겔 전기영동과 같은 저해상도 방법 및 HPLC 또는 질량 분광법과 같은 고해상도 방법을 비롯한 당업계에 익히 공지된 기법들을 사용하여 분석할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 경쇄, 항체 중쇄, 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단백질 중 임의의 것을 분리할 수 있다.
[0066] 본원에 사용된 "항원 결합 단백질" 및 관련 용어들은, 항원에 결합하는 부분, 및 임의로는 상기 항원 결합 부분이 항원 결합 단백질의 항원에 대한 결합을 촉진하는 입체구조를 채택하도록 해주는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분을 포함하는 단백질을 지칭한다. 항원 결합 단백질의 예로는 항체, 항체 단편 (예컨대, 항체의 항원 결합 부분), 항체 유도체 및 항체 유사체를 포함한다. 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 그래프트된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드로는, 예를 들어, 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체 유래의 스캐폴드 뿐만 아니라, 예를 들어, 생체적합성 중합체를 포함하는 완전 합성 스캐폴드를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 이에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129]; [Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654]을 참조한다. 또한, 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 이용하는 항체 모방체 기반의 스캐폴드 뿐만 아니라 펩타이드 항체 모방체 ("PAM")도 사용할 수 있다. CD38에 결합하는 항원 결합 단백질이 본원에 기술되어 있다.
[0067] 항원 결합 단백질은, 예를 들어 면역글로불린의 구조를 가질 수 있다. 한 실시양태에서, "면역글로불린"은 2개의 동일한 폴리펩타이드 사슬의 쌍으로 이루어지며 각 쌍이 하나의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는 사량체 분자를 가리킨다. 각 사슬의 아미노 말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100개 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각 사슬의 카르복시 말단 부분은 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 영역을 규정한다. 인간 경쇄는 카파 또는 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되며, 항체의 동형(isotype)을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 또는 그 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 중쇄도 약 10개 또는 그 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)) (내용 전체가 모든 목적을 위하여 본원에 참고로 포함됨)을 참조한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역들은 항체 결합 부위를 형성하여 온전한 면역글로불린이 2개의 항원 결합 부위를 갖도록 한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 사량체 면역 글로불린 분자와는 다른데도 표적 항원에 결합하거나 2종 이상의 표적 항원에 결합하는 구조를 갖는 합성 분자일 수도 있다. 예를 들어, 합성 항원 결합 단백질은 항체 단편, 1 내지 6개 또는 그 이상의 폴리펩타이드 사슬, 폴리펩타이드들의 비대칭 조립체, 또는 기타 합성 분자들을 포함할 수 있다. CD38에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 유사 특성을 나타내는 항원 결합 단백질도 본원에 기술되어 있다.
[0068] 면역글로불린 사슬의 가변 영역은, 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 연결되는 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 보인다. N-말단으로부터 C-말단으로, 경쇄 및 중쇄 모두 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다.
[0069] 하나 이상의 CDR을 공유적 또는 비공유적으로 분자에 통합시켜 항원 결합 단백질로 제조할 수 있다. 항원 결합 단백질은 더 큰 폴리펩타이드 사슬의 일부로서 CDR(들)을 포함할 수 있거나, CDR(들)을 또 다른 폴리펩타이드 사슬에 공유적으로 연결시킬 수 있거나, CDR(들)을 비공유적으로 포함할 수 있다. CDR은 항원 결합 단백질이 특정 관심 항원에 특이적으로 결합하는 것을 가능케 한다.
[0070] 각 도메인에 대한 아미노산의 지정은 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991] 중의 카바트 (Kabat) 등의 정의에 따른다. 면역글로불린 사슬에서의 아미노산에 대한 다른 넘버링 시스템으로는 IMGT.RTM. [국제 이뮤노제네틱스 정보 시스템 (international ImMunoGeneTics information); Lefranc et al, Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005] 및 AHo (Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001); 초티아(Chothia) (Al-Lazikani et al., 1997 Journal of Molecular Biology 273:927-948; 콘택트(Contact) (Maccallum et al., 1996 Journal of Molecular Biology 262:732-745), 및 Aho (Honegger and Pluckthun 2001 Journal of Molecular Biology 309:657-670)를 포함한다.
[0071] 본원에 사용된 "항체(들)" 및 관련 용어들은, 온전한 면역글로불린을 지칭하거나, 또는 항원에 특이적으로 결합하는 이의 항원 결합 부분을 지칭한다. 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기법 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 분해에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은, 특히 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 도메인 항체(dAb) 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일쇄 항체(scFv), 키메라 항체, 이원항체, 삼원항체, 사원항체 및 폴리펩타이드에 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 적어도 일부의 면역글로불린을 함유하는 폴리펩타이드를 포함한다.
[0072] 항체는 재조합 방식으로 생성된 항체 및 항원 결합 부분을 포함한다. 항체는 비인간, 키메라, 인간화 및 완전 인간 항체를 포함한다. 항체에는 일특이적, 다중특이적 (예컨대, 이중특이적, 삼중특이적 및 고차원 특이성)이 포함된다. 항체는 사량체 항체, 경쇄 단량체, 중쇄 단량체, 경쇄 이량체, 중쇄 이량체를 포함한다. 항체는 F(ab')₂ 단편, Fab' 단편 및 Fab 단편을 포함한다. 항체는 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일쇄 항체, 단일쇄 가변 단편 (scFv), 낙타화 항체, 어피바디 (affibody), 이황화 결합 Fv (sdFv), 항-유전형 항체 (항-Id), 미니항체를 포함한다. 항체에는 단일클론 및 다중클론 군이 포함된다. 항체 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항-CD38 항체도 본원에 기술되어 있다.
[0073] 본원에 사용되는 "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 또는 "항원 결합 부위" 및 기타 관련 용어들은, 항원과 상호작용하여 상기 항원에 대한 항원 결합 단백질의 특이성과 친화성에 기여하는 아미노산 잔기 (또는 다른 모이어티)를 함유하는 항원 결합 단백질의 일부를 지칭한다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 경우, 적어도 하나의 그의 CDR 도메인 중 적어도 일부를 포함할 것이다. 항-CD38 항체의 항원 결합 도메인도 본원에 기술되어 있다.
[0074] 항체 또는 항원 결합 단백질 또는 항체 단편과 관련하여 본원에 사용되는 "특이적 결합", "특이적으로 결합하는"이라는 용어와 기타 관련 용어들은, 다른 분자들이나 모이어티들이 아닌 항원에 대하여 우선적으로로 비공유 또는 공유 결합하는 것을 지칭한다 (예컨대, 항체는 다른 가용 항원들보다는 특정 항원에 특이적으로 결합한다). 한 실시양태에서, 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 K_D의 해리 상수로 항원에 결합하는 경우에 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것이다. CD38에 특이적으로 결합하는 항-CD38 항체도 본원에 기술되어 있다.
[0075] 한 실시양태에서, 해리 상수 (K_D)는 BIACORE 표면 플라스몬 공명 (SPR) 분석법을 사용하여 측정할 수 있다. 표면 플라스몬 공명은, 예를 들어, BIACORE 시스템 [미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE 헬스케어(GE Healthcare)의 바이아코어 라이프 사이언시즈(Biacore Life Sciences) 분과 제조]을 사용하여 바이오센서 매트릭스 내 단백질 농도 변화의 검출에 의해 실시간 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학적 현상을 지칭한다.
[0076] 본원에 사용된 "에피토프"및 관련 용어들은 항원 결합 단백질에 의해 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해) 결합된 항원의 일부를 가리킨다. 에피토프는 항원 결합 단백질에 의해 결합된 2종 이상의 항원의 일부를 포함할 수 있다. 에피토프는 항원 또는 2종 이상의 항원의 비연속적인 부분 (예를 들어, 항원의 1차 서열에서는 연속적이지 않지만, 상기 항원의 3차 및 4차 구조에서는 항원 결합 단백질에 의해 결합되기에 서로 충분히 가까운 아미노산 잔기들)을 포함할 수 있다. 일반적으로, 항체의 가변 영역, 특히 CDR은 에피토프와 상호작용한다. CD38 폴리펩타이드 (항원)의 에피토프에 결합하는 항-CD38 항체 및 이의 항원 결합 단백질도 본원에 기술되어 있다.
[0077] 본원에 사용된 "항체 단편", "항체 부분", "항체의 항원 결합 단편" 또는 "항체의 항원 결합 부분" 및 기타 관련 용어들은, 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 상기 온전한 항체의 일부를 포함하는 상기 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예로는, 이에 제한되지는 않지만, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; Fd; 및 Fv 단편 뿐만 아니라 dAb; 이원항체; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자 (예컨대, scFv); 폴리펩타이드에 특이적 항원 결합을 제공하기에 충분한 항체의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩타이드를 포함한다. 항체의 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기법이나 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은, 특히 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 도메인 항체(dAb) 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일쇄 항체(scFv), 키메라 항체, 이원항체, 삼원항체, 사원항체 및 항체 단편에 특이적 항원 결합을 제공하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩타이드를 포함한다. 항-CD38 항체의 항원 결합 단편도 본원에 기술되어 있다.
[0078] "Fab", "Fab 단편"이라는 용어 및 기타 관련 용어들은 가변 경쇄 영역 (V_L), 불변 경쇄 영역 (C_L), 가변 중쇄 영역 (V_H) 및 제1 불변 영역 (C_H1)을 포함하는 1가 단편을 지칭한다. Fab는 항원에 결합할 수 있다. F(ab')₂ 단편은 경첩 영역에서 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편이다. F(ab')₂ 단편은 항원 결합 능력을 가진다. Fd 단편은 V_H 및 C_H1 영역을 포함한다. Fv 단편은 V_L 및 V_H 영역을 포함한다. Fv는 항원과 결합할 수 있다. dAb 단편은 V_H 도메인, V_L 도메인, 또는 V_H 또는 V_L 도메인의 항원 결합 단편을 가진다 (미국 특허 6,846,634호 및 6,696,245호; 미국 출원 공보 2002/02512호; 2004/0202995호; 2004/0038291호; 2004/0009507호; 2003/0039958호, 및 문헌 [Ward et al., Nature 341:544-546, 1989]). 항-CD38 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 Fab 단편도 본원에 기술되어 있다.
[0079] 단일쇄 항체 (scFv)는 V_L 및 V_H 영역이 링커 (예컨대, 아미노산 잔기의 합성 서열)를 통해 연결되어 연속적인 단백질 사슬을 형성하는 항체이다. 상기 링커는 단백질 사슬이 자체적으로 다시 폴딩되어 1가의 항원 결합 부위를 형성할 수 있을 정도로 충분히 긴 것이 바람직하다 (예컨대, 문헌 [Bird et al., 1988, Science 242:423-26] 및 [Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83] 참조). 항-CD38 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 단일쇄 항체도 본원에 기술되어 있다.
[0080] 이원항체는 2개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 2가 항체인데, 이원항체의 각 폴리펩타이드 사슬은, 동일한 사슬 상의 두 도메인 간에 쌍을 형성시키기에는 너무 짧아서 각 도메인이 다른 폴리펩타이드 사슬 상의 상보적 도메인과 쌍을 이루도록 해주는 링커에 의해 연결된 V_H 및 V_L 도메인을 포함한다 (예컨대, 문헌 [Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48] 및 [Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23] 참조). 이원항체의 두 폴리펩타이드 사슬이 동일한 경우, 이들의 쌍형성으로부터 생성되는 이원항체는 2개의 동일한 항원 결합 부위를 가지게 될 것이다. 서로 다른 서열을 갖는 폴리펩타이드 사슬들은 2개의 서로 다른 항원 결합 부위를 갖는 이원항체를 제조하는데 사용될 수 있다. 이와 유사하게, 삼원항체 및 사원항체는 각각 3개 및 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하여, 동일하거나 상이할 수 있는 3개 및 4개의 항원 결합 부위를 각각 형성하는 항체이다. 이원항체, 삼원항체 및 사원항체 작제물은 본원에 기술된 임의의 항-CD38 항체의 항원 결합 부분을 사용하여 제조될 수 있다.
[0081] "인간 항체"라는 용어는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 모든 가변 및 불변 도메인은 인간 면역글로불린 서열 (예컨대, 완전 인간 항체)로부터 유래한다. 이러한 항체들은 다양한 방식으로 제조될 수 있는데, 그러한 제조 방식의 예로서는 재조합 방법을 이용하는 방식, 또는 인간 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 유전자로부터 유래된 항체를 발현하도록 유전적으로 변형된 마우스의 관심 항원을 이용한 면역화를 통한 방식을 비롯하여 하기에 기술하였다. 완전 인간 항-CD38 항체 및 이의 항원 결합 단백질도 본원에 기술되어 있다.
[0082] "인간화" 항체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 첨가에 의해서 비인간 종으로부터 유래된 항체의 서열과는 다른 서열을 가져서, 상기 인간화 항체가 인간 대상체에 투여되는 경우에 비인간 종의 항체에 비해서 면역 반응을 유도할 확률이 적고/적거나 심각한 면역 반응을 덜 유도하게 되는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 비인간 종 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 및 불변 도메인 내의 특정 아미노산들이 돌연변이를 일으켜 인간화 항체를 생성한다. 또 다른 실시양태에서, 인간 항체의 불변 도메인(들)이 비인간 종의 가변 도메인(들)에 융합된다. 또 다른 실시양태에서, 비인간 항체의 하나 이상의 CDR 서열 중 하나 이상의 아미노산 잔기를 변화시켜 인간 대상체에 투여되는 경우에 비인간 항체의 가능성 있는 면역원성을 감소시킬 수 있는데, 이러한 경우 상기 변화된 아미노산 잔기는 항체의 항원에 대한 면역특이적 결합에 있어서 중요하지 않은 것이거나, 또는 상기 아미노산 서열에 수행된 변화가 보존성 변화로서 항원에 대한 인간화 항체의 결합은 비인간 항체의 항원에 대한 결합보다 현저히 악화되지는 않는다. 인간화 항체를 제조하는 방법의 예는 미국 특허 6,054,297호, 5,886,152호 및 5,877,293호에서 찾아볼 수 있다.
[0083] 본원에 사용된 "키메라 항체"라는 용어와 관련 용어들은, 제1 항체로부터 하나 이상의 영역과 하나 이상의 다른 항체로부터 하나 이상의 영역을 함유하는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 CDR은 인간 항체로부터 유래된다. 또 다른 실시양태에서, 모든 CDR은 인간 항체로부터 유래된다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 인간 항체로부터 유래한 CDR은 키메라 항체 내에서 혼합되어 매칭된다. 예를 들어, 키메라 항체는 제1 인간 항체 경쇄의 CDR1, 제2 인간 항체 경쇄의 CDR2와 CDR3 및 제3 항체 중쇄의 CDR을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, CDR은 인간과 마우스, 또는 인간과 토끼, 또는 인간과 염소와 같이 서로 다른 종들로부터 유래한다. 당업자라면 누구나 다른 조합들도 가능하다는 점을 이해할 수 있을 것이다.
[0084] 추가로, 프레임워크 영역은 동일한 항체 중 하나, 하나 이상의 서로 다른 항체들, 예컨대 인간 항체, 또는 인간화 항체로부터 유래될 수 있다. 키메라 항체의 한 예에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종의 항체와 동일하거나, 그와 상동성이거나, 그로부터 유래되거나, 또는 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 한편, 상기 사슬(들)의 나머지는 또 다른 종의 항체(들)과 동일하거나, 그와 상동성이거나, 그로부터 유래되거나, 또는 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속한다. 목적하는 생물학적 활성 (즉, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 능력)을 나타내는 항체의 단편들도 포함된다. 키메라 항체는 본원에 기재된 항-CD38 항체의 일부로부터 제조될 수도 있다.
[0085] 본원에서, "변이체" 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 "변이체"라는 용어는, 하나 이상의 아미노산 잔기가 삽입되거나, 결실되거나, 기준 폴리펩타이드 서열과 관련한 아미노산 서열로 치환되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 폴리펩타이드 변이체에는 융합 단백질이 포함된다. 이와 동일한 방식으로, 변이체 폴리펩타이드는 하나 이상의 뉴클레오타이드가 삽입되거나, 결실되거나, 또 다른 폴리펩타이드 서열과 관련한 아미노산 서열로 치환되는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드 변이체에는 융합 폴리뉴클레오타이드가 포함된다.
[0086] 본원에서, 폴리펩타이드의 "유도체"라는 용어는, 예를 들어 또 다른 화학적 모이어티, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 알부민 (예컨대, 인간 혈청 알부민)에 대한 접합, 인산화 및 당화를 통해 화학적으로 변형된 폴리펩타이드 (예컨대, 항체)를 말한다. 달리 명시하지 않는 한, "항체"라는 용어는 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함하는 항체 이외에, 이들의 유도체, 변이체, 단편 및 뮤테인을 포함하며, 이들의 예를 하기에 기술한다.
[0087] 본원에 사용된 "Fc" 또는 "Fc 영역"이라는 용어는, 경첩 영역 내 또는 이후에 있으며 중쇄의 C-말단에서 끝나는 항체 중쇄 불변 영역의 일부분을 지칭한다. 상기 Fc 영역은 CH 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하며, 경첩 영역의 일부를 포함하거나 포함하지 않을 수도 있다. Fc 영역의 절반을 각각 보유하고 있는 두 폴리펩타이드 사슬은 이량체화하여 완전한 Fc 도메인을 형성할 수 있다. Fc 도메인은 Fc 세포 표면 수용체 및 면역 보체계의 일부 단백질들에 결합할 수 있다. Fc 도메인은 보체 의존성 세포독성 (CDC), 항체 의존성 세포 매개형 세포독성 (ADCC), 항체 의존성 식세포작용 (ADP), 옵소닌화 및/또는 세포 결합을 비롯한 것들 중 임의의 하나 또는 이들 중 임의의 2종 이상의 활성의 조합을 포함하는 효과기 기능을 나타낸다. Fc 도메인은 FcγRI (예컨대, CD64), FcγRII (예컨대, CD32) 및/또는 FcγRIII (예컨대, CD16a)를 비롯한 Fc 수용체에 결합할 수 있다.
[0088] 본원에 사용된 "표지된 항체" 또는 관련 용어들은, 표지되지 않거나 검출을 위해 검출가능한 표지 또는 모이어티에 결합된 항체 및 이들의 항원 결합 부분을 지칭하는데, 여기서 상기 검출가능한 표지 또는 모이어티는 방사성, 비색성, 항원성, 효소성, 검출가능한 비드 [예컨대, 자기 또는 전자치밀성 (예컨대, 금) 비드], 비오틴, 스트렙타비딘 또는 단백질 A이다. 다양한 표지들, 예컨대 이에 제한되지는 않지만, 방사성핵종, 형광물질, 효소, 효소 기질, 효소 보조인자, 효소 억제제 및 리간드 (예컨대, 비오틴, 합텐)가 사용될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 항-CD38 항체는 표지되지 않거나 또는 검출가능한 표지 또는 모이어티에 결합될 수도 있다.
[0089] 본원에 사용된 "동일성 비율" 또는 "상동성 비율" 및 관련 용어들은 두 폴리펩타이드 또는 두 폴리뉴클레오타이드 서열들 간의 유사성에 대한 정량적 측정을 가리킨다. 두 폴리펩타이드 서열 간의 동일성 비율은, 두 폴리펩타이드 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입이 필요할 수 있는 갭의 수와 각 갭의 길이를 고려한, 두 폴리펩타이드 서열 간에 공유되는 정렬된 위치에 있는 동일한 아미노산들의 수의 함수이다. 이와 유사한 방식으로, 두 폴리뉴클레오타이드 서열 간의 동일성 비율은, 두 폴리뉴클레오타이드 서열의 정렬을 최적화하기 위해 도입이 필요할 수 있는 갭의 수와 각 갭의 길이를 고려한, 두 폴리뉴클레오타이드 서열 간에 공유되는 정렬된 위치에 있는 동일한 폴리뉴클레오타이드들의 수의 함수이다. 두 폴리펩타이드 서열, 또는 두 폴리뉴클레오타이드 서열 간의 서열 비교와 동일성 비율의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 예를 들어, 두 폴리펩타이드 또는 두 폴리뉴클레오타이드 서열의 "동일성 비율" 또는 "상동성 비율"은 디폴트 매개변수로 GAP 컴퓨터 프로그램 [GCG 위스콘신 패키지 (Wisconsin Package)의 일부, 버전 10.3 (미국 캘리포니아주 샌디에고 소재의 엑설리스(Accelrys)]을 이용하여 해당 서열들을 비교함으로써 측정할 수 있다. 시험 서열과 관련해서 "Y에 대하여 적어도 X%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다"와 같은 표현은, 상술한 바와 같이 서열 Y에 정렬되는 경우, 상기 시험 서열이 Y 잔기와 적어도 X% 동일한 잔기들을 포함함을 의미한다.
[0090] 한 실시양태에서, 시험 항체의 아미노산 서열은, 본원에 기술된 임의의 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단백질을 구성하고 있는 경쇄 및/또는 중쇄 폴리펩타이드의 임의의 아미노산 서열과 유사하나 동일하지는 않을 수 있다. 시험 항체와 해당 폴리펩타이드 간의 유사성은, 본원에 기술된 임의의 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단백질을 구성하고 있는 임의의 경쇄 및/또는 중쇄 폴리펩타이드와 적어도 95% 동일하거나, 또는 적어도 96% 동일하거나, 또는 적어도 97% 동일하거나, 또는 적어도 98% 동일하거나, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 한 실시양태에서, 유사한 폴리펩타이드들은 중쇄 및/또는 경쇄 내에 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 아미노산 치환은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. "보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 그와 유사한 화학적 특성 (예컨대, 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄 (R기)를 갖는 또 다른 아미노산 잔기로 치환되는 것을 말한다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 성질을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 2개 이상의 아미노산 서열이 서로 보존적 치환이 다른 경우, 서열 동일성 비율 또는 유사성 정도는 해당 치환의 보존적 성질을 보정하기 위해 상향 조절될 수도 있다. 이러한 조절 방법은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331]을 참조하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 보유하는 아미노산 군의 예로는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다.
[0091] 항체는 다양한 항원 특이성을 갖는 면역글로불린을 함유하는 혈청 또는 혈장과 같은 공급원으로부터 수득될 수 있다. 이러한 항체가 친화성 정제를 거치는 경우, 이들은 특정한 항원 특이성에 대하여 강화될 수 있다. 이러한 항체의 강화된 제제물은 통상적으로 특정 항원에 대한 특이적 결합 활성을 갖는 약 10% 미만의 항체로 구성된다. 이러한 제제물들에 수회의 친화성 정제를 가하게 되면 항원에 대한 특이적 결합 활성을 갖는 항체의 비율을 증가시킬 수 있다. 이러한 방식으로 제조된 항체들을 흔히 "일특이적"으로 지칭한다. 일특이적 항체 제제물은 특정 항원에 대한 특이적 결합 활성을 갖는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 99.9%의 항체로 구성될 수 있다. 항체는 후술하는 바와 같이 재조합 핵산 기법을 사용하여 제조할 수 있다.
[0092] 본원에 사용된 "벡터" 및 관련 용어들은 외래성 유전 물질 (예컨대, 핵산 이식유전자)에 작동가능하게 연결될 수 있는 핵산 분자 (예컨대, DNA 또는 RNA)를 지칭한다. 벡터는 외래성 유전 물질을 세포 (예컨대, 숙주 세포)에 도입하는 비히클로서 사용될 수 있다. 벡터는 이식유전자를 해당 벡터에 삽입하기 위한 적어도 하나의 제한 엔도뉴클레아제 인식 서열을 포함할 수도 있다. 벡터는 항생제 내성을 부여하거나, 또는 벡터-이식유전자 작제물을 보유하는 숙주 세포의 선택을 보조하는 선별가능 특성을 부여하는 적어도 하나의 유전자 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산 분자일 수 있다. 벡터는 선형 또는 원형 핵산 분자일 수 있다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드"인데, 이 플라스미드란 이식유전자에 연결될 수 있고, 숙주 세포에서 복제할 수 있으며, 이식유전자를 전사 및/또는 해독할 수 있는 선형 또는 원형의 이중 가닥 염색체외 DNA 분자를 가리킨다. 바이러스 벡터는 일반적으로 이식유전자에 연결될 수 있는 바이러스 RNA 또는 DNA 백본 서열을 포함한다. 상기 바이러스 백본 서열은 감염이 되지 않지만, 바이러스 백본 및 함께 연결된 이식유전자가 숙주 세포 유전체에 삽입되는 것은 유지하도록 변형될 수 있다. 바이러스 벡터의 예로는 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노 연관 바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 우두바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터 및 엡스타인바 바이러스 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포 내에서 자체적으로 복제할 수 있다 (예컨대, 박테리아 복제 원점을 포함하는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터들(예를 들어, 비에피솜 포유동물 벡터)은 숙주 세포로 도입시 숙주 세포의 유전체로 통합되어, 상기 숙주 유전체와 함께 복제된다.
[0093] "발현 벡터"는 유도성 및/또는 항시성 프로모터 및 인핸서와 같은 하나 이상의 조절 서열을 포함할 수 있는 벡터의 한 유형이다. 발현 벡터는 리보솜 결합 부위 및/또는 폴리아데닐화 부위를 포함할 수 있다. 조절 서열은 숙주 세포 내로 형질도입되는 발현 벡터에 연결된 이식유전자의 전사 또는 전사와 해독을 지시한다. 상기 조절 서열(들)은 이식유전자 발현의 수준, 시기 및/또는 위치를 조절할 수 있다. 상기 조절 서열은, 예를 들어 해당 이식유전자에 대하여 직접적으로 영향을 미치거나, 또는 하나 이상의 다른 분자들 (예컨대, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩타이드)의 작용을 통해 영향을 미칠 수도 있다. 조절 서열은 벡터의 일부일 수 있다. 조절 서열의 추가의 예들은, 예를 들어, 문헌 [Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif.] 및 [Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-3606]에 기술되어 있다. 발현 벡터는 본원에 기재된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체의 적어도 일부를 코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.
[0094] 이식유전자는, 벡터 내에 포함되어 있는 이식유전자 서열들의 기능 또는 발현을 허용하는 이식유전자와 벡터 간에 결합되어 있는 경우, 해당 벡터에 "작동가능하게 연결"되어 있다고 한다. 한 실시양태에서, 이식유전자는 조절 서열이 이식유전자의 발현 (예컨대, 발현의 수준, 시기 또는 위치)에 영향을 미치는 경우에 상기 조절 서열에 "작동가능하게 연결"된다.
[0095] 본원에 사용된 "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된"이라는 용어 또는 기타 관련 용어들은 외인성 핵산 (예컨대, 이식유전자)이 숙주 세포 내로 전달되거나 도입되는 과정을 지칭한다. "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된" 숙주 세포는 외인성 핵산 (이식유전자)으로 형질감염, 형질전환 또는 형질도입된 숙주 세포이다. 상기 숙주 세포는 1차 대상체 세포와 그 후대 개체를 포함한다.　 본원에 기재된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체의 적어도 일부를 코딩하는 외인성 핵산은 숙주 세포로 도입될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체의 적어도 일부를 포함하는 발현 벡터는 숙주 세포에 도입될 수 있고, 상기 숙주 세포는 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩타이드를 발현할 수 있다.
[0096] 본원에 사용된 "숙주 세포" 또는 "숙주 세포군" 또는 관련 용어들은 외래성 (외인성 또는 이식유전자) 핵산이 도입된 세포 (또는 이의 군집)를 지칭한다. 상기 외래성 핵산은 이식유전자에 작동가능하게 연결된 발현 벡터를 포함할 수 있으며, 상기 숙주 세포는 상기 외래성 핵산 (이식유전자)에 의해 코딩된 핵산 및/또는 폴리펩타이드를 발현시키는데 사용될 수 있다. 숙주 세포 (또는 이의 군집)는 배양된 세포일 수 있거나, 또는 대상체로부터 추출될 수도 있다. 상기 숙주 세포 (또는 이의 군집)는 계대 횟수에 관계없이 1차 대상체 세포 및 그의 후대 개체를 포함한다. 후대 개체 세포는 모체 세포와 동일한 유전 물질을 보유할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 숙주 세포는 후대 개체 세포를 포함한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는, 본원에 개시된 바와 같이, 항체를 발현하기 위해 임의의 방식으로 변형, 형질감염, 형질도입, 형질전환 및/또는 조작된 임의의 세포 (이의 후대 개체 포함)를 말한다. 한 예로서, 상기 숙주 세포 (또는 이의 군집)는 본원에 기재된 목적한 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터와 함께 도입될 수 있다. 숙주 세포 및 이의 군집은 해당 숙주의 유전체에 안정적으로 통합된 발현 벡터를 보유할 수 있거나, 또는 염색체외 발현 벡터를 보유할 수도 있다. 한 실시양태에서, 숙주 세포 및 이의 군집은 여러 개의 세포 분열 후에 존재하거나, 또는 일시적으로 존재하여 여러 개의 세포 분열 후에 소실되는 염색체외 벡터를 보유할 수도 있다.
[0097] 숙주 세포는 원핵생물, 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli)일 수 있거나, 또는 진핵생물, 예를 들어 단세포 진핵생물 (예컨대, 효모 또는 다른 균류), 식물 세포 (예컨대, 담배 또는 토마토 식물 세포), 포유동물 세포 (예컨대, 인간 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 랫트 세포, 마우스 세포, 또는 곤충 세포) 또는 교배종 세포일 수 있다. 한 실시양태에서, 숙주 세포를, 목적한 항체를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 발현 벡터와 함께 도입함으로써 형질감염/형질전환된 숙주 세포를 만들어낼 수 있는데, 이를 해당 형질감염/형질전환된 숙주 세포에 의한 항체의 발현에 적절한 조건 하에 배양시키고, 임의로 상기 형질감염/형질전환된 숙주 세포로부터 상기 항체를 회수 (예컨대, 숙주 세포 용해물로부터 회수 또는 배양 배지로부터 회수)한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO, BHK, NS0, SP2/0 및 YB2/0을 비롯한 비인간 세포를 포함한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 HEK293, HT-1080, Huh-7 및 PER.C6을 비롯한 인간 세포를 포함한다. 숙주 세포의 예로는, 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주 (ATCC CRL 1651) (문헌 [Gluzman et al., 1981, Cell 23:175] 참조), L 세포, C127 세포, 3T3 세포 (ATCC CCL 163), 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 이들의 유도체, 예컨대, 베기 (Veggie) CHO 및 무혈청 배지에서 성장하는 관련 세포주 (문헌 [Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31] 참조) 또는 DHFR이 결핍된 CHO 세포주 DX-B11 (문헌 [Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20] 참조), HeLa 세포, BHK (ATCC CRL 10) 세포주, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CV1으로부터 유래된 CV1/EBNA 세포주 (ATCC CCL 70)(문헌 [McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821] 참조), 인간 배아 신장 세포, 예컨대 293, 293 EBNA 또는 MSR 293, 인간 표피 A431 세포, 인간 Colo 205 세포, 형질전환된 기타 영장류 세포주, 정상 이배체 세포, 1차 조직의 시험관내 배양물로부터 유래된 세포주, 1차 체외이식편, HL-60, U937, HaK 또는 주르캇 (Jurkat) 세포를 포함한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 림프 세포, 예컨대 Y0, NS0 또는 Sp20을 포함한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포이지만, 인간 숙주 세포는 아니다. 통상적으로, 숙주 세포는, 차후에 해당 숙주 세포에서 발현될 수 있는 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산으로 형질전환 또는 형질감염될 수 있는 배양된 세포이다. "유전자이식된 숙주 세포" 또는 "재조합 숙주 세포"라는 말은 발현될 핵산으로 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포를 의미하는데 사용될 수 있다. 또한, 숙주 세포는 핵산을 포함하기는 하지만, 조절 서열이 숙주 세포 내로 도입되어 상기 핵산과 작동가능하게 연결되지 않는다면, 상기 핵산을 원하는 수준으로 발현하지 않는 세포일 수도 있다. 숙주 세포라는 용어는 특정 대상체 세포 뿐만 아니라 이러한 세포의 후대 개체 또는 잠재적 후대 개체를 지칭하는 것으로 이해한다. 예를 들어, 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해서 다음 세대에서 특정한 변형이 발생할 수 있기 때문에, 이러한 후대 개체는 사실상 모체 세포와 동일하지 않을 수는 있으나, 여전히 본원에서 사용되는 용어의 범위 내에 포함된다.
[0098] 본 발명의 폴리펩타이드 (예컨대, 항체 및 항원 결합 단백질)는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 한 예로서, 상기 폴리펩타이드는 해당 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 서열 (예컨대, cDNA)을 재조합 발현 벡터에 삽입한 후, 이를 숙주 세포에 도입하여 발현을 촉진하는 조건 하에 숙주 세포에 의해 발현시키는 재조합 핵산 방법에 의해 제조된다.
[0099] 재조합 핵산 조작을 위한 일반적인 기법들에 대해서는, 예를 들어 참조로 본원에 그 전문이 포함되는 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989] 또는 [F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987)] 및 이들의 정기 추록본에 기술되어 있다. 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산은 포유동물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유래된 하나 이상의 적절한 전사 또는 해독 조절 요소들을 보유하는 발현 벡터에 작동가능하게 연결된다. 이러한 조절 요소들로는 전사 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적절한 mRNA 리보솜 결합 부위를 코딩하는 서열 및 전사와 해독의 종료를 조절하는 서열을 포함한다. 상기 발현 벡터는 숙주 세포에 복제 능력을 부여하는 복제 원점을 포함할 수 있다. 상기 발현 벡터는 유전자이식 숙주 세포 (예컨대 형질전환체)의 인식을 용이하게 하는 선택성을 부여하는 유전자를 포함할 수도 있다.
[00100] 또한, 상기 재조합 DNA는 단백질을 정제하는데 유용할 수 있는 임의 유형의 단백질 태그 서열을 코딩할 수도 있다. 단백질 태그의 예로는 히스티딘 태그, FLAG 태그, myc 태그, HA 태그 또는 GST 태그를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 박테리아, 진균류, 효모 및 포유동물 세포 숙주와 함께 사용하는데 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 문헌 [Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985)]에서 찾아볼 수 있다.
[00101] 발현 벡터 작제물은 해당 숙주 세포에 적절한 방법을 이용하여 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 숙주 세포에 핵산을 도입하기 위한 다양한 방법들이 당업계에 공지되어 있는데, 예컨대 이에 제한되지는 않지만, 전기천공법; 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란, 또는 기타 물질을 이용하는 형질감염법; 바이러스 형질감염법; 비바이러스 형질감염법; 미세사출법 (microprojectile bombardment); 리포펙션; 및 감염법 (예컨대, 벡터가 감염성 제제인 경우)를 포함한다. 적절한 숙주 세포로는 원핵생물, 효모, 포유동물 세포 또는 박테리아 세포를 포함한다.
[00102] 적절한 박테리아로는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예컨대 이. 콜라이 또는 바실러스 종을 포함한다. 효모, 바람직하게는 사카로마이세스 종, 예컨대 S. 세레비시아에 유래의 효모도 폴리펩타이드 생산에 사용될 수 있다. 다양한 포유동물 또는 곤충 세포 배양 시스템을 사용하여 재조합 단백질을 발현시킬 수도 있다. 곤충 세포에서 이종성 단백질 생산을 위한 바큘로바이러스 시스템이 루코와 서머스(Luckow and Summers)에 의해 검토된 바 있다 (Bio/Technology, 6:47, 1988). 적절한 포유동물 숙주 세포주의 예로는, 내피 세포, COS-7 원숭이 신장 세포, CV-1, L 세포, C127, 3T3, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 인간 배아 신장 세포, HeLa, 293, 293T, BHK 세포주를 포함한다. 정제된 폴리펩타이드는 재조합 단백질을 발현시키기 위해 적절한 숙주/벡터 시스템을 배양하여 제조한다. 다수의 용도에서는, 본원에 개시된 작은 크기의 여러 폴리펩타이드들은 발현을 위해 바람직한 방법으로서 이. 콜라이에서 발현시키게 될 것이다. 이후, 상기 단백질을 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제한다. 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단백질은 유전자이식 숙주 세포에 의해 발현될 수 있다.
[00103] 또한, 본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단백질은 세포 해독 시스템을 사용하여 제조될 수도 있다. 이러한 목적을 위해, 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산은 시험관내 전사에서 mRNA를 생성시키는 것을 가능케 하고, 이용되는 특정 무세포계 (진핵생물, 예컨대 포유동물 또는 효모 무세포 해독계 또는 원핵생물, 예컨대 박테리아 무세포 해독계)에서의 mRNA의 무세포 해독을 가능케 하도록, 변형되어야 한다.
[00104] 본원에 개시된 임의의 다양한 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산은 화학적으로 합성될 수도 있다. 코돈 사용은 세포에서의 발현을 개선시키기 위해 선택될 수 있다. 이러한 코돈 사용은 선택된 세포 유형에 따라 좌우될 것이다. 이. 콜라이 및 다른 박테리아 뿐만 아니라 포유동물 세포, 식물 세포, 효모 세포 및 곤충 세포를 위해 특화된 코돈 사용 패턴들이 개발되어 왔다. 이에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Mayfield et al.,　Proc. Natl. Acad. Sci. USA.　2003 100(2):438-42]; [Sinclair et al.　Protein Expr. Purif.　2002 (1):96-105]; [Connell N D.　Curr. Opin. Biotechnol.　2001 12(5):446-9]; [Makrides et al.　Microbiol. Rev.　1996 60(3):512-38]; 및 [Sharp et al.　Yeast.　1991 7(7):657-78]을 참조한다.
[00105] 또한, 본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 화학적 합성 (예컨대, 문헌 [Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, III.]에 기재된 방법에 의함)에 의해 제조될 수도 있다. 또한, 단백질에 대한 변형은 화학적 합성에 의해 이루어질 수도 있다.
[00106] 본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 단백질 화학 분야에 일반적으로 공지된 단백질에 대한 분리/정제 방법에 의해 정제될 수 있다. 그 비제한적인 예로는 추출, 재결정화, 염석(salting out)(예를 들어, 황산암모늄 또는 황산나트륨을 이용한 염석), 원심분리, 투석, 한외여과, 흡착 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 순상 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 겔 여과, 겔 투과 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 전기영동, 역류 분배 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 정제 후, 폴리펩타이드는 다양한 완충액으로 교환될 수 있고/있거나, 여과 및 투석을 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 임의의 다양한 방법에 의해 농축될 수 있다.
[00107] 상기 정제한 본원에 기술된 항체 및 항원 결합 단백질은 바람직하게는 적어도 65% 순수, 적어도 75% 순수, 적어도 85% 순수, 더욱 바람직하게는 적어도 95% 순수, 가장 바람직하게는 적어도 98% 순수하다. 순도의 정확한 수치와 관계없이, 폴리펩타이드는 의약품으로 사용하기에 충분히 순수하다. 본원에 기술된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질은 유전자이식 숙주 세포에 의해 발현시킨 후, 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 약 65 내지 98%의 순도 또는 높은 수준의 순도로 정제할 수 있다.
[00108] 특정 실시양태에서, 본원의 항체 및 항원 결합 단백질은 해독후 변형을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 해독후 단백질 변형으로는 인산화, 아세틸화, 메틸화, ADP-리보실화, 유비퀴틴화, 당화, 카보닐화, 수모화, 비오틴화, 또는 폴리펩타이드 측쇄 또는 소수성기의 첨가를 포함한다. 그 결과, 상기 변형된 폴리펩타이드는 비아미노산 성분들, 예컨대, 지질, 다당류 또는 단당류 및 포스페이트를 함유할 수 있다. 당화의 바람직한 형태는 하나 이상의 시알산 모이어티를 폴리펩타이드에 접합시키는 시알릴화이다. 시알산 모이어티는 용해도와 혈청 반감기를 개선시키는 한편, 있을 수 있는 단백질의 면역원성도 감소시킨다. 이에 대해서는, 문헌 [Raju et al.　Biochemistry.　2001 31; 40(30):8868-76]을 참조한다.
[00109] 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단백질은, 해당 항체 및 항원 결합 단백질을 비단백질성 중합체에 연결시키는 것을 포함하는 변형에 의해 가용성 폴리펩타이드로 만들 수도 있다. 한 실시양태에서, 상기 비단백질성 중합체는 미국 특허 4,640,835호; 4,496,689호; 4,301,144호; 4,670,417호; 4,791,192호 또는 4,179,337호에 기재된 방식 방법으로 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG"), 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌을 포함한다.
[00110] PEG는 상업적으로 이용가능하거나 당업계에 널리 공지된 방법에 따라 에틸렌 글리콜의 개환 중합반응에 의해 제조될 수 있는 수용성 중합체이다 (Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161). "PEG"라는 용어는, PEG의 말단에서의 크기 또는 변형과는 관계없이, 임의의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 망라하기 위해 광범위하게 사용되며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있다: X―O(CH₂CH₂O)_n―CH₂CH₂OH (1) [상기 화학식에서, n은 20 내지 2300이고, X는 H 또는 말단 변형, 예컨대 C_1-4 알킬임] 한 실시양태에서, 상기 PEG는 한 말단에서 하이드록시 또는 메톡시, 즉 X는 H 또는 CH₃ ("메톡시 PEG")로 종료된다. PEG는 결합 반응에 필요하거나; 분자의 화학적 합성으로부터 생성되거나; 또는 분자의 일부의 최적 거리를 위한 스페이서인 추가의 화학기를 함유할 수 있다. 또한, 이러한 PEG는 함께 연결되는 하나 이상의 PEG 측쇄로 이루어질 수 있다. 하나 이상의 PEG 사슬을 갖는 PEG는 다중아암형 (multiarmed) 또는 분지형 PEG로 불린다. 분지형 PEG는, 예를 들어, 글리세롤, 펜타에리트리톨 및 소르비톨을 비롯한 다양한 폴리올에 폴리에틸렌 옥사이드를 첨가하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 4-아암형의 분지된 PEG는 펜타에리트리톨 및 에틸렌 옥사이드로부터 제조될 수 있다. 분지된 PEG는, 예를 들어, EP-A 0 473 084호 및 미국 특허 5,932,462호에 기재되어 있다. PEG의 한 형태는 리신의 1차 아미노기를 통해 연결된 2개의 PEG 측쇄 (PEG2)를 포함한다 (Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69).
[00111] PEG-변형된 폴리펩타이드의 혈청 소거율은, 변형되지 않은 항체 및 항원 결합 단백질 결합 폴리펩타이드의 소거율에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 심지어 90%까지 조절 (예컨대, 증가 또는 감소)될 수 있다. 상기 PEG-변형된 항체 및 항원 결합 단백질은 변형되지 않은 폴리펩타이드의 반감기에 비해 향상된 반감기(t_1/2)를 가질 수 있다. 상기 PEG-결합 폴리펩타이드의 반감기는 변형되지 않은 항체 및 항원 결합 단백질의 반감기에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400% 또는 500%, 또는 심지어 1000%까지 향상될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단백질 반감기는 시험관 내에서, 예를 들어, 완충된 염수 용액 또는 혈청에서 측정된다. 다른 실시양태에서, 단백질 반감기는 생체내 반감기, 예를 들어, 동물의 혈청 또는 다른 체액 내의 단백질의 반감기이다.
[00112] 본 발명은 본원에 기재된 임의의 경쇄, 중쇄 또는 항-CD38 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질을 약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 혼합하여 포함하는 치료 조성물을 제공한다. 부형제는 담체, 안정화제 및 부형제를 망라한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제로는, 예를 들어 비활성 희석제 또는 충전제 (예컨대, 수크로스 및 소르비톨), 윤활제, 활택제, 및 부착 방지제 (예컨대, 스테아르산마그네슘, 스테아르산아연, 스테아르산, 실리카, 수소처리된 식물성 경화유 또는 탈크)를 포함한다. 추가의 예로는 완충제, 안정화제, 보존제, 비이온성 계면활성제, 항산화제 및 등장화제를 포함한다.
[00113] 치료 조성물 및 이들을 제조하는 방법에 대해서는 당업계에 익히 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 ["Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20th ed., ed. A. R. Gennaro A R., 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)]에서 찾아볼 수 있다. 치료 조성물은 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있으며, 예를 들어, 부형제, 멸균수, 염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 또는 수소처리된 나프탈렌을 함유할 수도 있다. 생체적합성, 생분해성 락티드 중합체, 락티드/글리콜리드 공중합체, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체를 사용하여 본원에 기술된 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 방출을 조절할 수도 있다. 나노입자 제제 (예컨대, 생분해성 나노입자, 고체 지질 나노입자, 리포솜)를 사용하여 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 체내분포를 조절할 수도 있다. 잠재적으로 유용한 다른 비경구 전달 시스템으로는 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투압 펌프, 이식형 주입 시스템 및 리포솜을 포함한다. 제제 내의 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)의 농도는 투여되는 약물의 용량 및 투여 경로를 비롯한 다수의 요인들에 따라 다르다.
[00114] 임의의 항-CD38 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)는 제약 산업에서 통상적으로 사용되는 약학적으로 허용가능한 염, 예컨대 비독성 산부가염 또는 금속 복합체로서 투여될 수 있다. 산부가염의 예로는 유기산, 예를 들어, 아세트산, 락트산, 파모산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 숙신산, 벤조산, 팔미트산, 수베르산, 살리실산, 타르타르산, 메탄설폰산, 톨루엔설폰산, 또는 트리플루오로아세트산 등; 중합체 산, 예를 들어, 탄닌산, 카르복시메틸 셀룰로스 등; 및 무기산, 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산 등을 포함한다. 금속 복합체로는 아연, 철 등을 포함한다. 한 예로서, 항체 (또는 이의 항원 결합 부분)은 열 안정성을 증가시키기 위해 아세트산나트륨의 존재하에 제제화된다.
[00115] 경구용으로 제형화 될 수 있는 임의의 항-CD38 항체 (또는 이의 항원 결합 부분)는 비독성인 약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 혼합된 활성 성분(들)을 함유하는 정제를 포함한다. 경구 사용을 위한 제제는 저작형 정제로서, 또는 활성 성분이 비활성 고체 희석제와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질과 혼합된 연성 젤라틴 캡슐로서 제공될 수도 있다.
[00116] 본원에 사용된 "대상체"라는 용어는 인간 및 비인간 포유동물, 예컨대 척추동물, 포유동물 및 비포유동물을 지칭한다. 한 실시양태에서, 상기 대상체는 인간, 인간이 아닌 영장류, 원숭이, 유인원, 쥐과류 (예컨대, 마우스 및 랫트), 소, 돼지, 말과, 개과, 고양이과, 염소, 이리, 두꺼비 또는 물고기일 수 있다.
[00117] "투여하는", "투여되는"이라는 용어와 이의 문법적 변형태들은, 당업자에게 공지된 임의의 다양한 방법 및 전달 시스템을 사용하여 해당 제제를 대상체에게 물리적으로 도입하는 것을 가리킨다. 본원에 개시된 제제의 예시적인 투여 경로로는, 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 기타 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입을 포함한다. 본원에 사용된 "비경구 투여"라는 말은, 일반적으로 장내 및 국소 투여를 제외한, 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 이에 제한되지는 않지만, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 림프내, 병변내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피부내, 복강내, 기관내, 피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제는 비경구 경로가 아닌 경로를 통해, 예컨대 경구로 투여된다. 비경구 경로가 아닌 경로의 다른 예로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소 투여가 포함된다. 또한, 투여는 예를 들어 1회, 복수회 및/또는 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 항-CD38 항체 (또는 이의 항원 결합 단백질)는 당업계에 공지된 방법 및 전달 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다.
[00118] "유효량", "치료적 유효량" 또는 "유효 용량"이라는 용어, 또는 관련 용어들은 서로 교환하여 사용할 수 있는 것으로서, 대상체에게 투여하는 경우에 종양 또는 암 항원 발현과 연관된 질병 또는 장애에 대하여 측정가능한 개선이나 방지 효과를 달성하기에 충분한, 항체 또는 항원 결합 단백질 (예컨대, 본원에 기재된 임의의 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단백질)의 양을 가리키는 말이다. 단독 또는 조합하여 사용되는 경우에 있어서 본원에 제공된 항체의 치료적 유효량은, 항체들과 그 조합의 (예컨대, 세포 증식을 억제하는데 있어서의) 상대적인 활성에 따라서, 그리고 치료할 대상체 및 질병의 상태, 대상체의 체중, 연령 및 성별, 대상체의 질병 상태의 중증도, 투여 방식 등 (당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있음)에 따라서 달라질 것이다.
[00119] 한 실시양태에서, 치료적 유효량은 치료할 대상체 및 치료할 질환의 구체적인 양상들에 따라 달라질 것이며, 이는 당업자가 공지된 기법들을 이용하여 확인할 수 있다. 일반적으로, 폴리펩타이드는 하루에 약 0.01 g/kg 내지 약 50 mg/kg, 바람직하게는 하루에 0.01 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 가장 바람직하게는 하루에 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg으로 투여된다. 폴리펩타이드는 매일 (예컨대, 하루에 1회, 2회, 3회 또는 4회) 또는 바람직하게는 이보다는 덜한 빈도로 (예컨대, 매주, 격주로, 3주마다, 매월 또는 매분기마다) 투여될 수 있다. 또한, 당업계에 공지되어 있는 바와 같이, 연령 뿐만 아니라, 체중, 전반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호작용 및 질병의 중증도에 따라 조정이 필요할 수도 있다.
[00120] 본 발명은 CD38의 발현과 연관된 질병이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 질병은 종양 관련 항원을 발현하는 암 또는 종양 세포를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 암 또는 종양으로는 전립선암, 유방암, 난소암, 두경부암, 방광암, 피부암, 결장직장암, 항문암, 직장암, 췌장암, 폐암 (비소세포 폐암 및 소세포 폐암 포함), 평활근종, 뇌암, 신경교종, 교모세포종, 식도암, 간암, 신장암, 위암, 결장암, 자궁경부암, 자궁암, 자궁내막암, 외음부암, 후두암, 질암, 뼈암, 비강암, 부비동암, 비인두암, 구강암, 구인두암, 후두함, 하인두암, 침샘암, 요관암, 요도암, 음경암 및 고환암을 포함한다.
[00121] 한 실시양태에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 골수종 및 B 세포 림프종을 포함하는 혈액암을 포함한다. 혈액암으로는 다발성 골수종 (MM), 버킷 림프종 (BL)을 비롯한 비호지킨 림프종 (NHL), B형 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), B형 및 T형 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 미만성 거대 B세포 림프종, 만성 골수성 백혈병 (CML), 모발 세포 백혈병 (HCL), 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 (Waldenstrom's Macroglobulinemia), 외투세포 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 형질 세포 골수종, 전구체 B세포 림프아구성 백혈병/림프종, 형질세포종, 거대 세포 골수종, 형질 세포 골수종, 중쇄 골수종, 경쇄 또는 벤스-존스 (Bence-Jones) 골수종, 림프종양 육아종증, 이식후 림프증식성 장애, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 항인지질 증후군, 샤가스병, 그레이브병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 경피증, 다발성 경화증, 항인지질 증후군, ANCA 관련 혈관염, 굿패스쳐병, 가와사키병,자가면역성 용혈성 빈혈, 신속 진행형 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포 관련 아밀로이드증 및 미결 유의성의 단일클론성 감마병증 (monoclonal gammopathy of undetermined significance)을 포함한다.
[00122] 항-CD38 항체는 2016년 4월 8일 출원된 미국 특허 출원 15/094,384호에 개시되어 있다 (이 개시내용의 전문이 본원에 참고로 포함됨). 본원에서 "모체" 및/또는 "야생형" 항체로 언급되는 상기 항체는, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 함유하는 모체 야생형 중쇄 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 함유하는 모체 야생형 경쇄를 포함한다.
[00123] 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 함유하는 모체 야생형 중쇄 및 서열번호 3의 돌연변이 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 함유하는 경쇄를 포함하는 변이 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 변이 서열 경쇄 또는 상기 변이 서열 경쇄를 포함하는 항원 결합 단백질을 제조하는 방법을 제공하는데, 여기서 상기 경쇄의 돌연변이 아미노산 서열은 바람직한 경쇄 및 바람직하지 않은 경쇄의 혼합물을 함유하는 이종성 경쇄군의 생성을 감소시키거나 제거한다. 이와는 대조적으로, 모체 야생형 경쇄의 제조는 높은 수준의 이질성을 보유하는 항체 경쇄군을 생성해 낸다.
[00124] 재조합 항체 중쇄 및 경쇄는 N-말단 단부에 분비 신호 펩타이드를 포함시켜 숙주 세포 세포질에서 전구체 항체 사슬의 발현과 숙주 세포막을 통한 전위가 가능하도록 설계되는 경우가 많다. 상기 전구체 항체 사슬의 전위는, 숙주 세포에 의해 발현된 신호 펩타이드 펩티다아제 효소에 의하여 분비 신호 펩타이드에서 부위 특이적 절단을 거쳐, 성숙한 항체 사슬을 생성시킨다. 분비 신호 펩타이드의 특정 부위에서 절단된 전구체 항체 사슬로부터 성숙한 항체 사슬의 동종군을 제조하여, 동일한 길이와 서열을 함유하며 동일한 N-말단과 C-말단을 갖는 성숙한 항체 사슬군을 만들어 내는 것이 바람직하다. 그러나, 재조합 항체 사슬의 생산은 사슬 길이와 서열이 서로 다르고 N-말단 및/또는 C-말단이 상이한 이종성 군을 만들어내는 경우가 많다. 이러한 이질성의 한 원인은, 사슬의 절단과 신장을 유발하는, 가변 부위에서 분비 신호 펩타이드 또는 항체 사슬의 N-말단 영역의 절단으로부터 비롯된다. 또한, 절단 이질성은 분비 신호 펩타이드 내부와 그 부근에서, 예를 들어 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 메티오닌 또는 아스파라긴과 같은 특정 아미노산에서 펩타이드 결합의 비효소적 분해로부터 연유하는 것으로 알려져 있기도 하다. 절단 이질성을 유발하는 메커니즘에 관계없이, 부정확한 절단은 항체 사슬군의 이질성을 초래하게 된다. 절단 이질성은 표적 항원에 대한 항체 결합을 감소시킬 수 있다. 경우에 따라서, 절단 이질성은 항체 사슬의 전하를 변화시켜 항체 pI (등전점) 값의 바람직하지 않은 변화를 초래함으로써, 발현된 항체 사슬군에서 전하 이질성을 유발하기도 한다. 종합적으로 살펴보면, 절단 이질성은 항체 효능을 감소시키고, 저장 수명을 감소시킬 수 있으며, 동종 생성물을 일관되게 제조하는 것을 어렵게하여, 항체 사슬의 생체 제조공정에 덜 바람직하거나 부적합하다.
[00125] 본 발명은 숙주 세포 발현 동안에 발생하는 절단 이질성을 감소시킴으로써 경쇄군의 이질성을 감소시키도록 설계된 돌연변이된 아미노산 서열을 갖는 변이 항체 경쇄를 제공한다. 상기 항체 경쇄는, 분비 신호 펩타이드에 인접한 N-말단 부근에서 돌연변이된 아미노산 서열을 포함하여, 절단 이질성을 감소시킨다. 어떤 이론에 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 본원에 기술된 항체 경쇄 내의 아미노산 돌연변이는 효소적 및/또는 비효소적 절단으로 인해 절단 이질성을 감소시키는 것으로 추정된다.
[00126] 항체 경쇄의 이종성 군은 바람직한 경쇄와 바람직하지 않은 경쇄의 혼합물을 포함하고 있다. 상기 바람직한 경쇄는 정확한 길이, 정확한 N- 및 C-말단 아미노산 잔기를 가지며, 서열번호 3과 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 바람직한 사슬은 사슬군에서 다수이거나 대다수의 종이다. 상기 바람직하지 않은 경쇄는 부정확한 길이 (예컨대, 더 길거나 더 짧은 길이), 부정확한 N- 및 C-말단 아미노산 잔기를 가지고/가지거나, 서열번호 3과 100% 동일하지 않은 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
[00127] 하기의 논의에서는, 증가 및 감소는 서열번호 2에 관하여 나타낸다. 일부 실시양태에서, 경쇄 서열 돌연변이는 바람직한 경쇄의 비율을 증가시키고 바람직하지 않은 경쇄의 비율을 감소시키거나 심지어 제거함으로써 경쇄의 이종성 군의 생성을 감소시킨다.
[00128] 일부 실시양태에서, 경쇄 서열 돌연변이는 해당 경쇄의 제제에 있어서 (예를 들어, 경쇄군에서) 바람직하지 않은 경쇄의 비율을 약 10 내지 30%, 또는 약 30 내지 50%, 또는 약 50 내지 70%, 또는 약 70 내지 90%, 또는 약 90 내지 95%, 또는 약 95 내지 99% 또는 그 이상의 수준까지 감소시킨다.
[00129] 일부 실시양태에서, 경쇄 서열 돌연변이는 해당 경쇄의 제제에 있어서 (예를 들어, 경쇄군에서) 바람직한 경쇄의 비율을 약 10 내지 30%, 또는 약 30 내지 50%, 또는 약 50 내지 70%, 또는 약 70 내지 90%, 또는 약 90 내지 95%, 또는 약 95 내지 99% 또는 그 이상의 수준까지 증가시킨다.
[00130] 한 실시양태에서, 경쇄 서열 돌연변이는 N-말단 단부 부근에 2개의 점 돌연변이, 구체적으로는 2번 위치의 알라닌이 세린으로 치환되고, 3번 위치의 글리신이 발린으로 치환된 점 돌연변이를 포함한다 (서열번호 3의 2번과 3번 위치 참조). 경쇄 서열 돌연변이는 바람직한 경쇄의 비율을 증가시켜, 해당 돌연변이 경쇄의 제제가 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 100% 서열 동일성을 갖는 약 98-100%의 바람직한 경쇄를 포함할 수 있도록 한다 (도 2a 및 2b).
[00131] 한 실시양태에서, 경쇄 서열 돌연변이는 N-말단 단부 부근에 2개의 점 돌연변이, 구체적으로는 2번 위치의 알라닌이 세린으로 치환되고, 3번 위치의 글리신이 발린으로 치환된 점 돌연변이를 갖는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 돌연변이 경쇄의 N-말단은 아미노산 서열 QSALT (서열번호 6)를 포함한다. 경쇄 서열 돌연변이는 바람직한 경쇄의 비율을 증가시켜, 해당 돌연변이 경쇄의 제제가 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 100% 서열 동일성을 갖는 약 98-100%의 바람직한 경쇄를 포함할 수 있도록 한다 (표 2).
[00132] 본원에 기재된 경쇄 돌연변이 서열은 절단 이질성을 감소시켜 항체 경쇄의 제조 및 수율을 개선할 수 있다. 항체 경쇄에 작동가능하게 연결된 분비 신호 펩타이드의 유형 및/또는 서열은 중요하지 않다.
[00133] 이와는 대조적으로, 모체 야생형 경쇄 (서열번호 2)는 바람직하지 않은 경쇄와 바람직한 경쇄의 이종성 혼합물을 생성한다. 모체 야생형 경쇄의 제제는 경쇄의 35 내지 65% 정도가 바람직하지 않게 절단된 경쇄인 높은 비율의 절단된 경쇄를 생성할 수 있다 (표 2 및 도 2a 및 2b 참조). 예를 들어, 모체 야생형 경쇄의 제제는 약 10 내지 30%, 또는 약 30 내지 50%, 또는 약 50 내지 70%, 또는 약 70 내지 90%, 또는 약 90 내지 95%, 또는 약 95 내지 99% 또는 그 이상 수준의 바람직하지 않게 절단된 경쇄 형태를 함유할 수 있다.
[00134] 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체 경쇄의 돌연변이 아미노산 서열에 작동가능하게 연결된 분비 신호 펩타이드의 아미노산 서열을 포함하는 전구체 폴리펩타이드를 발현하는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 분비 신호 펩타이드는 전구체 폴리펩타이드가 소포체, 분비 소포 및/또는 세포외 공간으로 이동하도록 유도한다. 한 실시양태에서, 상기 분비 신호 펩타이드는 전구체 폴리펩타이드가 숙주 세포로부터 분비되는 것을 조율한다. 한 실시양태에서, 상기 분비 신호 펩타이드는 해당 분비 신호 펩타이드의 특정 부위 (예컨대, 목적한 절단 부위)에서 효소적 절단을 위한 기질로서 작용하여, 상기 전구체 폴리펩타이드보다 짧은 성숙한 폴리펩타이드를 생성한다. 한 실시양태에서, 상기 절단은 정확한 길이를 가지고 새로운 N-말단 단부를 보유하며, 서열번호 3의 아미노산 서열과 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 생성한다. 상기 돌연변이된 항체 경쇄는 중쇄와 조립되어 표적 항원 CD38에 결합하는 면역글로불린을 생성할 수 있다.
[00135] 본 발명은 중쇄와 조립되어 CD38 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 형성하는 돌연변이된 경쇄; 및 상기 항원 결합 단백질을 코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 상기 벡터를 보유하는 숙주 세포; 및 이들의 사용 방법을 제공한다.
[00136] 항체 중쇄 및 경쇄의 숙주 세포 발현을 사용하여 변이 항체 및 모체 야생형 항체를 포함하는 항체군의 제제를 제조할 수 있다.
[00137] 상기 숙주 세포는 야생형 서열을 갖는 모체 야생형 중쇄를 발현할 수 있다. 모체 야생형 중쇄의 제제는 약 85 내지 99% 또는 그 이상의 바람직한 중쇄 서열 (예컨대, 낮은 수준의 중쇄 이질성)을 함유할 수 있다. 상기 숙주 세포는 야생형 서열을 갖는 모체 야생형 서열 경쇄를 발현할 수 있다. 모체 야생형 경쇄의 제제는 약 40 내지 55% 또는 그 이상의 바람직하지 않은 경쇄 서열 (예컨대, 높은 수준의 경쇄 이질성)을 함유할 수 있다.
[00138] 상기 숙주 세포는 야생형 서열을 갖는 모체 야생형 중쇄를 발현할 수 있다. 모체 야생형 중쇄의 제제는 약 85 내지 99% 또는 그 이상의 바람직한 중쇄 서열 (예컨대, 낮은 수준의 중쇄 이질성)을 함유할 수 있다. 상기 숙주 세포는 돌연변이 서열을 갖는 변이체 서열 경쇄를 발현할 수 있다. 변이체 서열 경쇄의 제제는 모체 야생형 경쇄의 제제에 비해 경쇄 이질성 수준이 감소된 약 85 내지 99% 또는 그 이상 수준의 바람직한 경쇄 서열을 함유할 수 있다.
[00139] 본 발명은 CD38 폴리펩타이드에 결합하는 IgG 클래스의 완전 인간 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열에 대하여 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며; 항-CD38 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열에 대하여 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 클래스 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 IgG1 또는 IgG4 클래스 항체를 포함한다.
[00140] 한 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 이의 단편은 CD38 표적 항원의 에피토프에 10^-6 M 이하, 10^-7 M 이하, 10^-8 M 이하, 10^-9 M 이하, 또는 10^-10 M 이하의 결합 친화도 (K_D)로 결합하는 항원 결합 부분을 포함한다 (표 3 참조). 한 실시양태에서, 상기 CD38 항원은 세포 표면 CD38 항원 또는 가용성 CD38 항원을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 CD38 항원은 세포 표면 CD38 항원의 세포외 부분을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 CD38 항원은 인간 또는 비인간 CD38 항원을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 CD38 항원은 인간 또는 비인간 세포에 의해 발현된다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 인간 B 세포에 의해 발현되거나 또는 인간 다발성 골수종 세포에 의해 발현되는 인간 CD38에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체 또는 이의 단편 간의 결합은 표면 플라스몬 공명, 유세포 분석 및/또는 ELISA를 사용하여 검출 및 측정할 수 있다.
[00141] 본 발명은 인간의 CD38의 에피토프에 결합하거나, 또는 인간이 아닌 동물, 예컨대 마우스, 랫트, 염소, 토끼, 햄스터 및/또는 원숭이 (예컨대, 시노몰구스) 중 임의의 한 종 또는 이들의 임의의 조합으로부터 유래한 CD38의 에피토프 (예컨대, 상동성 항원)와 결합 (예컨대, 교차 반응)할 수 있는 항-CD38 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 결합 친화도 K_D로 마우스 CD38에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 10^-5　M 이하, 또는 10^-6　M 이하, 또는 10^-7　M 이하, 또는 10^-8　M 이하, 또는 10^-9　M 이하, 또는 10^-10　M 이하의 결합 친화도 K_D로 시노몰구스 CD38에 결합한다.
[00142] 본 발명은 CD38에 결합하는 완전 인간 항체로서, 상기 항체가 중쇄 및 경쇄를 모두 포함하고, 상기 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열이 아미노산 서열 세트인 서열번호 1과 3에 대하여 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 항체를 제공한다.
[00143] 본 발명은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편을 제공한다. 중쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다. 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다.
[00144] 본 발명은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 Fab 완전 인간 항체 단편으로서, 상기 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열이 하기의 아미노산 서열 세트인 서열번호 1과 3 중 임의의 하나에 대하여 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한, 항체 단편을 제공한다.
[00145] 본 발명은 완전 인간 중쇄의 가변 영역 및 완전 인간 경쇄의 가변 영역, 및 임의로 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 연결하는 링커를 갖는 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 단일쇄 완전 인간 항체로서, 상기 중쇄 가변 영역이 서열번호 1의 아미노산 서열에 대하여 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 항체를 제공한다. 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 3의 아미노산 서열에 대하여 적어도 95% 서열 동일성, 또는 적어도 96% 서열 동일성, 또는 적어도 97% 서열 동일성, 또는 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다.
[00146] 본 발명은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 단일쇄 완전 인간 항체로서, 상기 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열 세트가 하기의 아미노산 서열 세트인 서열번호 1과 3 중 임의의 하나에 대하여 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일한, 항체 단편을 제공한다.
[00147] 본 발명은 본원에 기재된 임의의 항-CD38 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질을 약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 혼합하여 포함하는 치료 조성물을 제공한다. 부형제는 담체 및 안정화제를 망라한다. 한 실시양태에서, 치료 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD38 항체, 또는 이의 항원 결합 단백질을 포함하고, 상기 중쇄/경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 하기의 아미노산 서열 세트인 서열번호 1과 3 중 임의의 하나에 대하여 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 적어도 99% 동일하다.
[00148] 본 발명은 CD38 발현과 연관된 질환이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 본원에 기술된 임의의 완전 인간 항-CD38 항체, 본원에 기재된 임의의 Fab 완전 인간 항-CD38 항체 및 본원에 기재된 임의의 단일쇄 인간 항-CD38 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-CD38 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 치료 조성물의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, CD38 발현과 연관된 질병은 백혈병, 림프종, 골수종 또는 B 세포 림프종을 포함하는 혈액암이다. 한 실시양태에서, 혈액암으로는 다발성 골수종 (MM), 버킷 림프종 (BL)을 비롯한 비호지킨 림프종 (NHL), B형 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), B형 및 T형 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 미만성 거대 B세포 림프종, 만성 골수성 백혈병 (CML), 모발 세포 백혈병 (HCL), 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 외투세포 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 형질 세포 골수종, 전구체 B세포 림프아구성 백혈병/림프종, 형질세포종, 거대 세포 골수종, 형질 세포 골수종, 중쇄 골수종, 경쇄 또는 벤스-존스 골수종, 림프종양 육아종증, 이식후 림프증식성 장애, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 항인지질 증후군, 샤가스병, 그레이브병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 경피증, 다발성 경화증, 항인지질 증후군, ANCA 관련 혈관염, 굿패스쳐병, 가와사키병,자가면역성 용혈성 빈혈, 신속 진행형 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포 관련 아밀로이드증 및 미결 유의성의 단일클론성 감마병증을 포함한다.
서열목록:
[00149] [표 1]:

[00150] 실시예
[00151] 하기의 실시예는 예시를 위한 것으로서, 본 발명의 실시양태를 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있으며, 어떠한 방식으로든 본 교시의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
[00152] 실시예 1: CD38-A2 항체에 대한 돌연변이 경쇄의 합성.
[00153] CD38-A2 SV 돌연변이 항체에 대한 경쇄를 코딩하는 코돈 최적화된 합성 DNA 단편을 수득하였다. 상기 단편은 코딩된 N-말단 단부 부근에 2개의 점 돌연변이, 구체적으로 2번 위치의 알라닌이 세린으로 대체되고 3번 위치의 글리신이 발린으로 대체된 점 돌연변이를 포함하였다. 상기 경쇄를 코딩하는 단편을 Lonza pXC-17.4 벡터에 프레임내(in-frame) 삽입하고 야생형 CD38-A2 중쇄를 코딩하는 다른 단편은 표준 제한 효소 분해와 결찰을 이용하여 Lonza pXC-18.4 벡터 (Lonza의 Lonza GS 시스템, 스위스 바젤 소재)에 프레임내 삽입하였다. 표준 효소 분해와 결찰을 이용하여 상기 pXC-17.4 및 pXC-18.4 벡터를 단일 벡터로 융합시키고, 생성된 융합 벡터를 이. 콜라이 숙주 세포에 도입하였다.
[00154] 실시예 2: 항-CD38 항체의 돌연변이 경쇄에 대한 액체 크로마토그래피 질량 분광광도법 분석.
[00155] 축소된 LC-MS 분석을 수행하여 CD38-A2 야생형 (WT)과 CD38-A2 SV 변이 항체를 비교하였다. 간략히 설명하면, 16 μL의 항체 샘플 (20 μg)을 4 μL의 5 X Rapid PNGase 완충액 (카탈로그: P0710S; NEB)와 혼합한 후 80℃에서 5분간 항온배양하여 이황화 결합을 감소시키고 단백질을 변성시켰다. 이후, 0.5 μL의 Rapid PNGase F (카탈로그: P0710S; NEB)를 첨가하여 N-글리칸을 50℃에서 15분간 방출시켰다. 5 μg의 샘플을 Waters LC-ESI-MS 시스템 상에 주입하였다.
[00156] 2.1 x 150 mm BEH 300Å 1.7 μm C4 컬럼을 장착한 ACQUITY UPLC® 시스템을 감소된 항체 사슬 분리에 사용하였고, 컬럼 온도는 80℃로 하였다. 항체를 12분의 구배 (25-40% 아세토니트릴/0.1% 포름산, 0.4 mL/분의 유속)로 컬럼으로부터 용리시켰다.
[00157] Waters Xevo G2 TOF MS 시스템을 양이온 감도 모드로 실행하였으며, 400 내지 4000m/z 범위에서 검출하였다. 공급원 매개변수는 다음과 같았다: 모세관 전압, 3.10 kV; 샘플링 콘 전압, 40.0 V; 추출 콘 전압, 3.0 V; 공급원 온도, 125℃; 탈용매화 온도, 350℃; 콘 기체 유량: 10 L/hr; 탈용매화 기체 유량, 500 L/hr. 단백질 피크는 다음 매개변수에 따라 MassLynx MaxEnt1 함수로 디컨볼루션(deconvolution)하였다: 출력 해상도, 1.0 Da/채널; 출력 질량 범위, 감소된 항체의 경우 20,000-70,000 Da; 절반 높이에서 균일한 가우스 폭, 0.75 Da; 최소 강도 비율, 좌우 33%; 최대 반복 횟수, 12.
[00158] CD38A2 WT와 SV 변이체의 분자량은 LC-ESI-MS로 측정하여 단백질 ID를 확인하였다. WT와 SV 중쇄 분자량은 모두 이론적 질량과 잘 일치하였다. 한편, N-말단 경쇄에서 2개의 아미노산 절단이 전체 야생형 경쇄의 최대 ~50%까지 발견되었다. SV 돌연변이체의 LC는 검출가능한 절단이 나타나지 않았다.
[00159] 제조업체의 지침에 따라 Agilent Bioanalyzer 2100을 사용하여 시험 샘플에 축소형 CE-SDS를 수행하였다. CD38-A2 야생형에 있어서 축소형 CE-SDS에서 약 1:1 비율의 두 경쇄군이 검출되었다. 상기 CD38-A2 SV 돌연변이체에서는 축소된 CE-SDS에서 단 하나의 경쇄만이 나타났었다. 상기 결과는 야생형이 경쇄 절단을 거치게 된다는 LC-MS 분석 결과와 일치한다.
[00160] 질량 분광법과 축소된 CE-SDS 결과는 CD38-A2 야생형 경쇄군의 약 50%가 절단된 분자들임을 보여주는 것이다.
[00161] 결론적으로, LC-MS 및 CE-SDS 분석에 따르면, N-말단 경쇄 절단은 CD38-A2 야생형에서 발생했으며, CD38-A2 SV 변이체에서는 검출되지 않았다. 상기 결과들을 표 2, 도 1a와 1b 및 2a와 2b에 요약하였다. 경쇄의 2번 위치 및 3번 위치의 아미노산이 각각 세린과 알라닌인 CD38 A2-SA 변이체에 대한 결과도 나타내었다.
[00162] [표 2]:

[00163] 실시예 3: 모체 항체 CD38 A2와 변이 항체 CD38 A2 SV의 상대적인 결합 연구.
[00164] 모체 항체 CD38 A2와 변이 항체 CD38 A2 SV의 결합 역학을 표면 플라스몬 공명 (SPR)을 사용하여 측정하였다. Biacore T200 표면 플라즈몬 공명 (GE Healthcare)을 사용하여 모체 또는 변이 항체와 히스티딘이 태그된 CD38 단백질 간의 역학적 상호작용을 25℃에서 측정하였다. 항-인간 단편 결정화가능 영역 (Fc 영역) 항체는 표준 N-하이드록시숙신이미드/N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드 (NHS/EDC) 커플링법을 사용하여 CM5 센서칩 상에 약 8000개의 공명 단위 (RU)로 고정시켰다. 상기 CD38 A2 모체 항체 또는 CD38 A2 SV 변이 항체 (2 μg/mL)를 10 μL/분의 유속으로 60초간 포획하였다. 히스티딘이 태그된 재조합 인간 CD38 단백질을 0.01 M HEPES (pH 7.4), 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20 (HBS EP+)의 구동 완충액 중에서 연속 희석하였다. 모든 측정은 30 μL/분의 유속으로 HBS-EP+ 완충액에서 수행하였다. 정상 상태 친화도 모델을 사용하여 친화도를 얻었다. CD38 A2 모체 항체와 CD38 A2 SV 변이 항체의 센서그램을 도 3a 및 3b에 각각 나타냈으며, 이들에 해당되는 결합 역학을 하기 표 3에 열거하였다.
[00165] [표 3]:

<110> Sorrento Therapeutics, Inc. <120> VARIANT ANTIBODY THAT BINDS CD38 <130> 01223-0013-00PCT <150> US 62/687,695 <151> 2018-06-20 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asp 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Val Ser Asn Gly Arg Pro Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Asp Trp Gly Gly Glu Phe Thr Asp Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region <400> 2 Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Ser Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ile Asn 20 25 30 Phe Val Tyr Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Lys Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 3 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region <400> 3 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Ser Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ile Asn 20 25 30 Phe Val Tyr Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Lys Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region subsegment <400> 4 Gln Ala Gly Leu Thr 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region subsegment <400> 5 Gln Ser Val Leu Thr 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial antibody variable region subsegment <400> 6 Gln Ser Ala Leu Thr 1 5

Claims (19)

1. 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하는, CD38에 결합하는 항원 결합 단백질로서, 상기 중쇄 가변 영역이 서열번호 1의 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역이 서열번호 3의 서열을 포함하는 것인, 항원 결합 단백질.
2. IgG 클래스의 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편으로서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, IgG 클래스의 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편.
3. 제2항에 있어서, 완전 인간 항체인 것인, 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편.
4. 제2항에 있어서, Fab 단편인 것인, 완전 인간 항체 또는 항체 Fab 단편.
5. 제1항에 있어서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 완전 인간 단쇄 항체인 것인, 항원 결합 단백질.
6. 약제학적으로 허용가능한 부형제 및 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 완전 인간 항체 또는 Fab 단편을 포함하는 약제학적 조성물.
7. 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산.
8. 제7항에 있어서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 포함하는 것인, 핵산.
9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산.
10. 제7항 또는 제9항의 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 발현 벡터.
11. 제10항에 있어서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 포함하는 것인, 발현 벡터.
12. 제10항의 발현 벡터를 함유하고 있는 숙주 세포.
13. 제11항의 발현 벡터를 함유하고 있는 숙주 세포.
14. 항체 경쇄를 발현하기에 적절한 조건 하에 제10항 또는 제11항의 숙주 세포군을 배양하는 단계를 포함하는, 완전 인간 항체 경쇄의 제조 방법.
15. 제14항에 있어서, 상기 발현된 항체 경쇄를 해당 숙주 세포로부터 회수하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법.
16. 제15항에 있어서, 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 서열번호 3의 경쇄 가변 도메인과 100% 서열 동일성을 갖는, 상기 회수한 발현된 항체 경쇄의 비율이 90 내지 100%이고/이거나, 상기 회수한 발현된 항체 경쇄의 동종성이 90 내지 100%인 것인, 방법.
17. 항체 경쇄를 발현하기에 적절한 조건 하에 제13항의 숙주 세포군을 배양하는 단계를 포함하는, 완전 인간 항체 경쇄의 제조 방법.
18. 제17항에 있어서, 상기 발현된 항체 경쇄 및 중쇄를 해당 숙주 세포로부터 회수하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법.
19. 제18항에 있어서, 정확한 길이, 정확한 N-말단 아미노산을 가지며 서열번호 3의 경쇄 가변 도메인과 100% 서열 동일성을 갖는, 상기 회수한 발현된 항체 경쇄의 비율이 90 내지 100%인 것인, 방법.

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